Orientadores: Antonia Teresinha Tresoldi, Gil Guerra Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-02T11:18:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_RicardoMendes_D.pdf: 16272554 bytes, checksum: 0dbc5ec60b958c5eb49e785f6a6f78a7 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A Paracoccidioidomicose é uma infecção causada pelo Paracoccidioides brasiliensis, que tem distribuição geográfica bem delimitada. Poucos são os casos na faixa etária pediátrica. O objetivo deste trabalho foi de analisar a apresentação clínica, evolução e seguimento de crianças com PCM e avaliar a função da supra-renal em um grupo de dessas crianças relacionando as concentrações hormonais com as manifestações clínicas e laboratoriais. A avaliação da função supra-renal foi realizada com a dosagem basal de cortisol, ACTH, renina, aldosterona e cortisol pós-estímulo com ACTH. Foram estudados 70 episódios de PCM. A proporção meninos: meninas foi de 1,3: 1. A idade variou de 2 a 15 anos (média de 8 +/- 3 anos, mediana de 8 anos). À admissão, a maioria dos pacientes apresentava algum grau de desnutrição protéico-calórica (70%). As principais queixas foram adenomegalia e febre com duração média de 84,3 dias (mediana 60 dias). A maioria (84,2%) dos diagnósticos foi realizada pela biópsia ganglionar. Os achados laboratoriais mais importantes foram: anemia, leucocitose com eosinofilia, hipoalbuminemia e hipergamaglobulinemia. A droga de escolha para o tratamento foi a associação sulfametoxazol-trimetoprina. Ocorreram seis óbitos. Demonstrou-se que a normalização dos exames laboratoriais (hemograma e eletroforese de proteínas) acontece até o sexto mês de tratamento. A avaliação da função supra-renal foi realizada em 23 crianças, sendo oito em fase aguda de doença. As médias (+/- desvio padrão) de cortisol, cortisol pós-estímulo, ACTH, renina e aldosterona foram, respectivamente, 12,88 (+/- 1,35) 'mu¿g/dl, 30,53 (+/- 2,12) 'um¿g/dl, 23,31 (+/- 1,72) pg/dl, 4,34 (+/- 5,75) ng/ml/h e 118,6 (+/- 98,0) pg/rnl, todos dentro dos limites da normalidade. Nenhum paciente apresentou hipotensão arterial aferida. Em todos os pacientes as dosagens de sódio e potássio séricos foram normais. Três pacientes apresentaram níveis elevados de aldosterona e/ou renina, sendo que esses resultados puderam ser explicados pela hipoalbuminemia e ascite apresentada por um paciente e pela importante hepatite fúngica apresentada pelo outro. Mesmo sendo rara em Pediatria a PCM deve ser lembrada nos casos de síndrome linfoproliferativa febril, em especial, nos casos que apresentam eosinofilia. A associação sulfametoxazol-trimetoprina se mostrou eficaz e o seguimento pode ser realizado com hemograma e eletroforese de proteínas. Os resultados mostram que na população estudada não ocorreu acometimento supra-renal / Abstract: Paracoccidioidomycosis is a deep mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis, endemic in various regions of Latin América. The infection is thought to initiate in the lungs and then eventualy disseminate, via the bloodstream and/or lymphatics to alI parts of body. Few cases are describe in pediatric age. The objective of this work was to evaluate the clinical aspects, evolution, and follow up of children with Paracoccidioidomycosis and evaluate their adrenal function, related with basal concentration of cortisol, ACTH, renin, aldosterone, and cortisol response to ACTH. In this study, 70 cases of PCM were evaluated. The proportion between male female was 1.3:1. The children ranged in age from 2 to 15 years, with a mean of 8 +/- 3 and a median of 8. The majority of patients presented some degree of malnutrition as they arrived at the hospital. The main complain was adenomegalia and fever, reported to be present for at a mean of 84.3 days (median of 60 days). The majority of diagnosis (84.2%) was confirmed by lymph nodes biopsy. Anemia, eosinophilia, hypoalbuminemia hypergammaglobulinemia were frequently found. The drug of choice for treatment was an association of trimethoprim-sulfamethoxazole. Six deaths were observed. It was demonstrated that the laboratorial exams normalization (hemogram and protein electrophoresis) ocurred within 6 months of treatment. The adrenal assessment was performed in 23 children, 8 of them at the acute stage of the disease. The mean (± SD) of cortisol, post-stimulus cortisol, ACTH, renin, and aldosterone were, respectively, 12.88 (±1.35) 'mu¿/dI. 23.31 (±1.72) pg/dl, 4.34 (±5.75) ng/ml/h and 118.6 (±98.0) pg/mI. All these parameters were within the normal limits. None of the patients presented arterial hypotension. In alI patients, the serum levels of sodium and potassium were also normal. Tree patients presented higl levels of aldosterone and/or rennin. These results can be explained by the hipoalbulminemia and ascite presented by one of the patients, and by the fungal hepatitis presented by the other. Even being arare disease in pediatrics, Paracoccidioidomycosis must be considered in cases where a febrile lymphoproliferative syndrome, specialIy when eosinophilia occurs. The association of trimethoprim-sulfamethoxazole was safe and effective. The follow-up can be performed with protein eletrophoresis and hemogram. The results also shown that, in this population, the supra-renal was not compromised. / Doutorado / Pediatria / Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada por Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis), que acomete preferencialmente o pulmão, sendo este um dos poucos órgãos que está em continua e intensa interação com o meio ambiente e o sistema imune. O grande desafio para o sistema imune pulmonar é discriminar o que é nocivo e reagir de acordo. As células dendríticas (DCs) são apresentadoras de antígenos \"profissionais\" capazes de fazer o processamento do antígeno e a apresentação de peptídeos a linfócitos T e são ideais para manter este equilíbrio delicado entre a tolerância e uma resposta imune efetora. Sabendo da importância dessas células no sistema imune e que a infecção por P. brasiliensis ataca preferencialmente o pulmão, células de lavado broncoalveolar (BAL), após infecção experimental com leveduras de P. Brasiliensis, foram analisadas. Nós observamos um significante aumento de DCs no BAL após 24hrs da infecção intratraqueal com 104 leveduras de P. brasiliensis. A caracterização das DCs mostraram que essas células expressaram CD11c, MHC-II e DEC205. A fim de verificar a capacidade de migração das DCs, as mesmas foram diferenciadas a partir de células de medula óssea e pulsadas com leveduras de P. brasiliensis, marcadas com CFSE e injetadas intratraquealmente em camundongos. Como controle negativo, utilizamos PBS e DCs não pulsadas com o fungo. Os resultados mostraram, que após 12 horas de infecção, as DCs (CFSE+CD11c+), migraram para os linfonodos torácicos. No entanto, a quantidade destas células diminui discretamente após 24 horas de infecção. Além disso, não observamos DCs nos linfonodos regionais, quando analisamos os grupos controle. Dessa forma, as células pulmonares também foram marcadas in vivo injetando-se intratraquealmente o corante CFSE juntamente com leveduras de P. brasiliensis. Verificamos que após 12 horas, as DCs pulmonares, dos animais infectados com o fungo, migraram para os linfonodos regionais. Esses resultados comprovam que o fungo P. brasiliensis foi capaz de ativar as DCs, induzindo sua migração para linfonodos regionais, e induziu nesse órgão uma resposta por células T evidenciada pela produção preferencial de IL-10. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis), which mainly affects the lungs. They are one of the few organs that are in constant and intense interaction with the environment and the immune system. The great challenge for the pulmonary immune system is to discriminate what is harmful and react accordingly. Dendritic cells (DCs) are \"professionals\" antigen-presenting cells and they can do the antigen processing. They can also do the presentation of peptides to T lymphocytes and are ideal for maintaining this delicate balance between tolerance and an effector immune response. Knowing the importance of these cells in the immune system and that the infection by P. brasiliensis preferentially attacks the lungs, cells from bronchoalveolar lavage (BAL), after experimental infection with yeasts of P. Brasiliensis, were analyzed. We observed a significant increase of DCs in BAL after 24 hours of intratracheal infection with 104 of yeast cells of P. brasiliensis. The characterization of these cells showed that DCs expressed CD11c, MHC-II and DEC205. In order to verify the ability of migration of DCs, they were differentiated from bone marrow cells and pulsed with yeasts of P. brasiliensis, they were also labeled with CFSE and injected intratracheally into mice. As a negative control, we used PBS and DCs that were not pulsed with the fungus. The results showed that after 12 hours of infection, the DCs (CFSE + CD11c +), migrated to the thoracic lymph nodes. However, the quantity of these cells decreases slightly after 24 hours of infection. Furthermore, we observed no DCs in regional lymph nodes when we analyzed the control groups. Thus, the lung cells were also labeled in vivo by injecting the CFSE dye intratracheally with yeasts of P. brasiliensis. We found that after 12 hours, pulmonary DCs of the animals infected with the fungus migrated to regional lymph nodes. These results indicate that the fungus P. brasiliensis was able to activate DCs, inducing their migration to regional lymph nodes, and inducing a response in that organ by T cells as evidenced by preferential production of IL-10.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica de natureza profunda e granulomatosa, que afeta preferencialmente o tecido pulmonar causada pelo Paracoccidioides brasiliensis, um fungo que exibe dimorfismo térmico. O P. brasiliensis interage com células apresentadoras de antígenos (APCs), alterando suas principais funções biológicas. Entre as APCs, os macrófagos são células que desempenham um papel importante na indução e regulação da resposta imune e/ou inflamatória. São células do sistema fagocítico mononuclear que podem discriminar entre o que é próprio do organismo e os patógenos, através da expressão de receptores de reconhecimento padrão (PRR) que reconhecem padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs), sendo células importantes no processo de fagocitose controlando o crescimento destes patógenos. Recentemente tem sido demonstrada a importância dos receptores Notch na regulação da atividade de macrófagos e do sistema imune. Os ligantes de Notch estão envolvidos nas locais inflamatórios de infecção devido ao aumento da expressão dos mesmos na superfície de células envolvidas neste processo. Considerando que a sinalização Notch pode estar envolvida na modulação da função de macrófagos, nós avaliamos se P. brasiliensis tem a capacidade de modular a ativação desta via e interferir na produção de citocinas pró-inflamatórias. Para isso, macrófagos J774, pré-estimulados com LPS ou não, foram interagidos com leveduras do fungo, seguido por análise de PCR em tempo real e citometria de fluxo, dosagem de citocinas e índice de fagocitose. Nossos dados revelaram que na presença do fungo existe aumento dos níveis de transcrição do receptor Notch 1 e diminuição da transcrição do ligante Delta 4 em macrófagos pré-estimulados com LPS. Entretanto, verificamos que o fungo sozinho não é capaz de induzir a transcrição de NF-κB, nem na presença do LPS, mas quando os macrófagos são estimulados com LPS e sofrem inibição da via de Notch existe aumento dos níveis de transcritos após interação com o fungo, sugerindo que esse fator é ativado na ausência de Notch. Nesse contexto de inibição de Notch, evidenciamos que a fagocitose de leveduras do fungo por macrófagos tornou-se mais eficiente, visto que houve aumento do índice de fagocitose na ausência de Notch. Foi possível verificar que o fungo tem a capacidade de promover a produção de IL-6 via TLR-Notch, fazendo-nos supor que essa citocina seja importante para o estabelecimento da doença ao ser benéfica para o fungo e prejudicar o hospedeiro. E concomitantemente ao aumento de IL-6 existe diminuição da produção de TNF-α. Com base nesses resultados, podemos sugerir que o P. brasiliensis utiliza a via de sinalização Notch como um mecanismo de escape. A interação entre as leveduras do fungo e os macrófagos promove a ativação dessa via, através do receptor Notch 1, induzindo maior produção de IL-6, citocina importante para o crescimento do fungo no hospedeiro, conjuntamente com a diminuição de TNF-α prejudicando a atividade fungicida dos macrófagos. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis and deep granulomatous in nature, which affects mainly the lung tissue caused by Paracoccidioides brasiliensis, a fungus that exhibits thermal dimorphism. The P. brasiliensis interacts with antigen presenting cells (APCs), changing its main biological functions. Among the APCs, macrophages are cells that play an important role in the induction and regulation of the immune response and/or inflammatory response. They are cells of the mononuclear phagocytic system that can discriminate between what is characteristic of the organisms and pathogens, by expression of pattern recognition receptors (PRR) that recognizes the pathogen-associated molecular pattern (PAMPs), and are considered cells important in phagocytosis for controlling the growth of these pathogens. It has been recently demonstrated the importance of the Notch receptor in regulating the activity of macrophages and of the immune system. The ligands of Notch are involved in inflammatory sites of infection because there are increased expression of these ligands on cell surface involved in this process. Whereas the Notch signaling may be involved in modulating macrophage function, we evaluated whether P. brasiliensis has the ability to modulate the activation of this pathway and interfere with the production of pro-inflammatory cytokines. For this, J774 macrophages, pre-stimulated with LPS or not, are interacted with yeast fungus, followed by Real Time PCR analysis and flow cytometry, cytokine and phagocytosis index. Our data showed that the presence of the fungus exists increased levels of transcription of the Notch 1 receptor, and a decrease in ligand Delta 4 transcription on macrophages pre-stimulated with LPS. However, we found that the fungus itself is not able to induce transcription NF-κB, even in the presence of LPS, but when macrophages are stimulated with LPS and suffer inhibition of the Notch signaling, exists increased levels of transcripts after interaction with the fungus, suggesting that this factor is activated in the absence of Notch. Within the context of inhibition of Notch, we found that phagocytosis of yeasts by macrophages become more efficient, since the increased rate of phagocytosis in the absence of Notch. It was verified that the fungus has the ability to promote the production of IL-6 via TLR-Notch, making us suppose that this cytokine is important for the establishment of the disease to be beneficial for the fungus and damage the host. And concurrently with increased IL-6 there is decreased production of TNF-α. Based on these results, we suggest that P. brasiliensis uses the Notch signaling pathway as an escape mechanism. The interaction between the yeasts with macrophages promotes the activation of this pathway, by means of a Notch 1 receptor, inducing increased production of IL-6 cytokine important for the growth of fungus on host, together with a reduction of TNF-α, contributing with a damaging fungicidal activity of macrophages.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-26T11:14:58Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Paulo Henrique Rosa Martins - 2014.pdf: 1886835 bytes, checksum: cf3cb1538605c45883b5362030c74911 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-01-26T11:15:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Paulo Henrique Rosa Martins - 2014.pdf: 1886835 bytes, checksum: cf3cb1538605c45883b5362030c74911 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-26T11:15:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Paulo Henrique Rosa Martins - 2014.pdf: 1886835 bytes, checksum: cf3cb1538605c45883b5362030c74911 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-03-20 / Paracoccidioides spp. are pathogens of Paracoccidioidomycosis a systemic mycosis that affects about 10 million people in endemic regions. The incidence of the disease is restricted to Latin America and most cases are found in Brazil. The disease is characterized by chronic granulomatous inflammation, and patients may present with a wide spectrum of clinical manifestations. After inhalation of conidia, the installation of fungus in the lungs, which subsequently through hematogenous route may cause an infection spreads. Hematogenous fungal infections represent a serious health problem, involving hospitalized patients with predisposing conditions that lead to a high mortality rate. Fungemia corresponds to isolation of fungi in the bloodstream and occurs mainly in immunocompromised patients. Yeasts have been increasingly present as etiological agents fungemia including Candida albicans and other species such as Candida non- albicans. In this study, Paracoccidioides spp. was isolated from a case of fungemia. So far this is the first molecular study of a case of fungemia caused by this fungus. In order to identify the molecular factors associated with this specific phenotype, a comparative proteomic analysis was performed. The samples were analyzed by nanoscale liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (nanoUPLC - EPM), where the soluble proteins of fungemia were compared with strain Pb01 -like proteins. 206 proteins regulated positively and negatively regulated 183 were identified. Among the positively regulated protein, 22 % were related to cellular metabolism, 15 % related to protein synthesis and 12% energy. Of phenotypic characterization tests, which showed a better adaptation of isolated Pb9840 blood were also conducted. With this work we propose that the isolated Pb9840 developed mechanisms to better installing the bloodstream and causing the fungemia. The study of the proteomic profile of this isolate may elucidate the virulence mechanisms used by this fungus during fungemia and / or hematogenous spread. / Paracoccidioides spp. são agentes etiológicos da Paracoccidioidomicose uma micose sistêmica que afeta cerca de 10 milhões de pessoas nas regiões endêmicas. A incidência da doença é restrita à América Latina e a maioria dos casos são encontrados no Brasil. A doença é caracterizada por uma inflamação granulomatosa crônica, e os pacientes podem apresentar um amplo espectro de manifestações clínicas. Após a inalação de conídios, ocorre a instalação do fungo nos pulmões, que posteriormente através de rota hematogenica pode causar uma infecção disseminada. Infecções fúngicas hematogênicas representam um grave problema de saúde, envolvendo pacientes hospitalizados com condições predisponentes que levam a uma alta taxa de mortalidade. Fungemia corresponde ao isolamento de fungos na corrente sanguínea e ocorre principalmente em pacientes imunossuprimidos. As leveduras têm sido cada vez mais presente como agentes etiológicos de fungemia, incluindo Candida albicans e outras espécies, como Candida não-albicans. No presente estudo, Paracoccidioides spp. foi isolado de um caso de fungemia. Até o momento esse é o primeiro estudo molecular de um caso de fungemia causado por este fungo. A fim de identificar os fatores moleculares associados a este fenótipo específico, uma análise proteômica comparativa foi realizada. As amostras foram analisadas por cromatografia líquida de nanoescala acoplada a espectrometria de massa em tandem (nanoUPLC - EPM), onde as proteínas solúveis da estirpe fungemia foram comparadas com proteínas do Pb01. Foram identificadas 206 proteinas reguladas positivamente e 183 reguladas negativamente. Dentre as proteínas reguladas positivamente 22% estavam relacionadas com o metabolismo celular, 15% relacionadas com síntese proteica e 12% produção de energia. Foram realizados também testes de caracterização fenotípica, que demonstraram uma melhor adaptação do isolado Pb9840 ao sangue. Com o presente trabalho podemos propor que o isolado Pb9840 desenvolveu mecanismos para melhor de instalar na corrente sanguínea e assim causar o quadro de fungemia. O estudo do perfil proteômico deste isolado poderá elucidar os mecanismos de virulência utilizados por este fungo durante fungemia e / ou disseminação hematogênica.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-13Bitstream added on 2014-06-13T20:12:17Z : No. of bitstreams: 1 balderramas_ha_me_botfm.pdf: 358097 bytes, checksum: c417b922a0a5cb167dc7ed65911f38d6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Leucotrienos são mediadores clássicos da resposta inflamatória, descritos como agentes quimiotáticos e reguladores da atividade microbicida de células do sistema imune inato, tendo papel protetor contra diferentes agentes infecciosos. Neste estudo, nós investigamos o envolvimento de leucotrienos no curso da paracoccidioidomicose murina a partir dos seguintes parâmetros imunológicos: influxo celular, atividade da mieloperoxidase, produção de NO, produção de citocinas e recuperação fúngica em pulmões de camundongos selecionados de acordo com a intensidade da sua resposta inflamatória aguda máxima (AIRmax) e mínima (AIRmin). Observamos que a infecção por P. brasiliensis induz considerável produção de citocinas IL-6, IL-10, IFN- e TNF-, promove o recrutamento celular e produção de NO nos pulmões em diferentes períodos de estudo. Nos animais tratados com um inibidor as síntese de leucotrienos (MK886) observamos uma menor produção das citocinas IFN-, IL-6 e TNF- concomitante com a queda do influxo de neutrófilos, e também diminuição na produção de NO, esses resultados podem explicar uma maior carga fungica nos pulmões de animais que tiveram a síntese de leucotrienos inibida, sugerindo aos leucotrienos um possível papel protetor na paracoccidioidomicose experimental. Animais da linhagem AIRmax apresentaram menor carga fungica quando comparado com animais AIRmin, este resultado pode ser relacionado ao fenótipo da AIR quanto à migração de neutrófilos, além de uma menor produção de NO e citocinas pró-inflamatórias, conferindo aos camundongos com background AIRmax maior resistência a infecção por P.brasiliensis. / Leukotrienes are classic inflammatory response mediators considered chemotactic agents and microbicide activity regulators in cells of the innate immune system, playing a protective role against different infectious agents. In this study, we investigated the involvement of leukotrienes in the course of murine paracoccidioidomycosis based on the following immunologic parameters: cell influx, mieloperoxydase activity, NO production, cytokine production, and fungal recovery in lungs of mice selected according to the intensity of their low (AIRmin) and high (AIRmax) acute inflammatory response. Infection by P. brasiliensis induced considerable production of the cytokines IL-6, IL-10, IFN-, and TNF-, and led to cell recruitment, as well as NO production, in lungs at different study periods. In animals treated with MK886, a leukotriene biosynthesis inhibitor, IFN-, IL-6 and TNF- production was lower, while neutrophil influx and NO production decreased. These results may explain the higher fungal load in lungs of animals in which leukotriene synthesis was inhibited, suggesting that leukotrienes have a possible protective role in experimental paracoccidioidomycosis. AIRmax animals had lower fungal load relative to AIRmin ones, which can be related to the AIR phenotype regarding neutrophil migration, besides lower production of NO and pro-inflammatory cytokines; thus, mice presenting AIRmax background are more resistant to infection by P.brasiliensis.

Submitted by Rui Rafael Durlacher (rui.durlacher@saolucas.edu.br) on 2018-04-13T20:38:11Z No. of bitstreams: 1 Tese-RUI RAFAEL DURLACHER - DINTER.pdf: 926965 bytes, checksum: 79fa32ffa8165d98f1c245255bbd4716 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Rimoli de Oliveira null (anapaula@foa.unesp.br) on 2018-04-16T11:58:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 durlacker_rr_dr_araca_int.pdf: 926965 bytes, checksum: 79fa32ffa8165d98f1c245255bbd4716 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-16T11:58:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 durlacker_rr_dr_araca_int.pdf: 926965 bytes, checksum: 79fa32ffa8165d98f1c245255bbd4716 (MD5) Previous issue date: 2017-10-17 / Introdução: a paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica endêmica cuja incidência vem aumentando de forma significativa na região norte do Brasil. Duas espécies, Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides lutzii podem causar a doença. A última aparenta ter maior importância em Rondônia, estado com as maiores taxas de incidência e mortalidade por PCM do Brasil. Objetivo: descrever as características clínicas, epidemiológicas e laboratoriais de pacientes portadores de PCM e estabelecer correlação com lesões orais. Material e Métodos: estudo retrospectivo de pacientes atendidos no Centro de Referência em Medicina Tropical de Rondônia durante o período de janeiro de 2013 a dezembro de 2016. Resultados: foram diagnosticados 107 pacientes com média de idade de 53,8 anos, sendo 100 homens e 07 mulheres. Observou-se que 77% mantinham contato ou relataram experiência anterior com lavoura. A maioria (98,1%) apresentou a forma crônica da doença. O diagnóstico foi confirmado em 74,7%, e baseado em achados clínicos e/ou epidemiológicos no restante. O diagnóstico sorológico não esteve disponível no período. O tempo médio entre o início dos sintomas e a realização do diagnóstico foi de 7,3 meses. Os principais locais acometidos foram os pulmões (95,3%), seguidos da cavidade oral (55,1%) e dos gânglios (28%). Na cavidade oral, a faringe/laringe predominou (33%), seguida da mucosa jugal (17,8%) e palato mole (13,1%). Houve 58,3% de associação com tabagismo. O medicamento mais utilizado para o tratamento foi o Itraconazol, fornecido pelo governo. Conclusão: não houve diferença entre os grupos com ou sem comprometimento da cavidade oral. A presença de lesões orais em mais da metade dos casos, com diagnóstico mais acessível, sugere que se pode diminuir o tempo entre o início dos sintomas e o início do tratamento, e contribuir para uma menor proporção de sequelas. Sugere-se ainda que o P. lutzii pode manifestar doença com características clínicas, epidemiológicas e laboratoriais semelhantes ao P. brasiliensis, exceto pela menor proporção de formas agudas de PCM. Mas novos estudos são necessários. / Background: Paracoccidioidomycosis (PCM) is an endemic systemic mycosis whose incidence has been increasing significantly in the northern region of Brazil. Two species, Paracoccidioides brasiliensis and Paracoccidioides lutzii can cause the disease. The latter appears to be more important in Rondônia, the state with the highest incidence and mortality rates by PCM in Brazil. O bjective : T o describe the clinical, epidemiological and laboratory characteristics of PCM patients and to establish correlation with oral lesions . Material and Methods: a retrospective study of patients attended at the Reference Center in Tropical Medicine of Rondônia during the period from January 2013 to December 2016. Results: A total of 107 patients were diagnosed, with mean age of 53.8 years, 100 men and 7 women. It was observed that 77% maintained contact or reported previous experience with rural areas . The majority (98.1%) presented the chronic form of the disease. The diagnosis was confirmed by the finding of the fungus in clinical specimen s in 74.7%, and based on clinical and/or epidemiological findings in the rest. The serological diagnosis was not available in the period. The mean time between onset of symptoms and the diagnosis was 7.3 months. The main sites were the lungs (95.3%), follo wed by the oral cavity (55.1%) and the ganglia (28%). In the oral cavity, the pharynx/larynx predominated (33%), followed by jugal mucosa (17.8%) and soft palate (13.1%). There was an 58,3 % association with smoking . The most commonly used drug was Itr acona zole in 93.5% of patients. Conclu sion: There was no difference between groups with or without oral cavity involvement. The presence of oral lesions in more than half of the cases, with a more accessible diagnosis, suggests that the time between onset of sy mptoms and the beginning of treatment can be shortened and contribute to a lower proportion of sequelae. It is also suggested that P. lutzii can manifest disease with clinical, epidemiological and laboratory characteristics similar to P. brasiliensis , exce pt for the smaller proportion of acute forms of PCM. But new studies are needed.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica de natureza profunda e granulomatosa, que afeta preferencialmente o tecido pulmonar causada pelo Paracoccidioides brasiliensis, um fungo que exibe dimorfismo térmico. O P. brasiliensis interage com células apresentadoras de antígenos (APCs), alterando suas principais funções biológicas. Entre as APCs, os macrófagos são células que desempenham um papel importante na indução e regulação da resposta imune e/ou inflamatória. São células do sistema fagocítico mononuclear que podem discriminar entre o que é próprio do organismo e os patógenos, através da expressão de receptores de reconhecimento padrão (PRR) que reconhecem padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs), sendo células importantes no processo de fagocitose controlando o crescimento destes patógenos. Recentemente tem sido demonstrada a importância dos receptores Notch na regulação da atividade de macrófagos e do sistema imune. Os ligantes de Notch estão envolvidos nas locais inflamatórios de infecção devido ao aumento da expressão dos mesmos na superfície de células envolvidas neste processo. Considerando que a sinalização Notch pode estar envolvida na modulação da função de macrófagos, nós avaliamos se P. brasiliensis tem a capacidade de modular a ativação desta via e interferir na produção de citocinas pró-inflamatórias. Para isso, macrófagos J774, pré-estimulados com LPS ou não, foram interagidos com leveduras do fungo, seguido por análise de PCR em tempo real e citometria de fluxo, dosagem de citocinas e índice de fagocitose. Nossos dados revelaram que na presença do fungo existe aumento dos níveis de transcrição do receptor Notch 1 e diminuição da transcrição do ligante Delta 4 em macrófagos pré-estimulados com LPS. Entretanto, verificamos que o fungo sozinho não é capaz de induzir a transcrição de NF-κB, nem na presença do LPS, mas quando os macrófagos são estimulados com LPS e sofrem inibição da via de Notch existe aumento dos níveis de transcritos após interação com o fungo, sugerindo que esse fator é ativado na ausência de Notch. Nesse contexto de inibição de Notch, evidenciamos que a fagocitose de leveduras do fungo por macrófagos tornou-se mais eficiente, visto que houve aumento do índice de fagocitose na ausência de Notch. Foi possível verificar que o fungo tem a capacidade de promover a produção de IL-6 via TLR-Notch, fazendo-nos supor que essa citocina seja importante para o estabelecimento da doença ao ser benéfica para o fungo e prejudicar o hospedeiro. E concomitantemente ao aumento de IL-6 existe diminuição da produção de TNF-α. Com base nesses resultados, podemos sugerir que o P. brasiliensis utiliza a via de sinalização Notch como um mecanismo de escape. A interação entre as leveduras do fungo e os macrófagos promove a ativação dessa via, através do receptor Notch 1, induzindo maior produção de IL-6, citocina importante para o crescimento do fungo no hospedeiro, conjuntamente com a diminuição de TNF-α prejudicando a atividade fungicida dos macrófagos. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis and deep granulomatous in nature, which affects mainly the lung tissue caused by Paracoccidioides brasiliensis, a fungus that exhibits thermal dimorphism. The P. brasiliensis interacts with antigen presenting cells (APCs), changing its main biological functions. Among the APCs, macrophages are cells that play an important role in the induction and regulation of the immune response and/or inflammatory response. They are cells of the mononuclear phagocytic system that can discriminate between what is characteristic of the organisms and pathogens, by expression of pattern recognition receptors (PRR) that recognizes the pathogen-associated molecular pattern (PAMPs), and are considered cells important in phagocytosis for controlling the growth of these pathogens. It has been recently demonstrated the importance of the Notch receptor in regulating the activity of macrophages and of the immune system. The ligands of Notch are involved in inflammatory sites of infection because there are increased expression of these ligands on cell surface involved in this process. Whereas the Notch signaling may be involved in modulating macrophage function, we evaluated whether P. brasiliensis has the ability to modulate the activation of this pathway and interfere with the production of pro-inflammatory cytokines. For this, J774 macrophages, pre-stimulated with LPS or not, are interacted with yeast fungus, followed by Real Time PCR analysis and flow cytometry, cytokine and phagocytosis index. Our data showed that the presence of the fungus exists increased levels of transcription of the Notch 1 receptor, and a decrease in ligand Delta 4 transcription on macrophages pre-stimulated with LPS. However, we found that the fungus itself is not able to induce transcription NF-κB, even in the presence of LPS, but when macrophages are stimulated with LPS and suffer inhibition of the Notch signaling, exists increased levels of transcripts after interaction with the fungus, suggesting that this factor is activated in the absence of Notch. Within the context of inhibition of Notch, we found that phagocytosis of yeasts by macrophages become more efficient, since the increased rate of phagocytosis in the absence of Notch. It was verified that the fungus has the ability to promote the production of IL-6 via TLR-Notch, making us suppose that this cytokine is important for the establishment of the disease to be beneficial for the fungus and damage the host. And concurrently with increased IL-6 there is decreased production of TNF-α. Based on these results, we suggest that P. brasiliensis uses the Notch signaling pathway as an escape mechanism. The interaction between the yeasts with macrophages promotes the activation of this pathway, by means of a Notch 1 receptor, inducing increased production of IL-6 cytokine important for the growth of fungus on host, together with a reduction of TNF-α, contributing with a damaging fungicidal activity of macrophages.

Orientador: Maria Heloísa de Souza Lima Blotta / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T20:40:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_RosianeMariada_M.pdf: 6290627 bytes, checksum: d2988b9310700896c1ab013ae1e3a509 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A paracoccidioidomicose (PCM), micose sistêmica causada pelo fungo Paracoccidioides brasiliensis, apresenta um largo espectro de manifestações clínicas e imunológicas, variando de formas benignas e localizadas a quadros graves e disseminados. A forma crônica ou adulta (FA) se caracteriza por lesões localizadas com acometimento da pele, mucosa oral (MO) e pulmões; enquanto a forma aguda ou juvenil (FJ) é mais grave e disseminada com acometimento do fígado, baço e linfonodos (LNs). Nós examinamos a resposta inflamatória/imunológica em lesões de pacientes com formas clínicas distintas da PCM. Foram analisados a expressão de citocinas e o fenótipo das células presentes nos infiltrados de biópsias de mucosa oral de 15 pacientes com a forma adulta e de linfonodos de 15 pacientes com a forma juvenil da PCM por imuno-histoquímica (IHQ) e qPCR. Anticorpos monoclonais ou policlonais foram utilizados para caracterizar o infiltrado celular (CD68, CD15, CD3, CD8, CD56 e FOXP3), citocinas...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic disease caused by the fungus P. brasiliensis, presents with a wide spectrum of clinical and immunological manifestations, varying from benign and localized forms to severe and disseminated forms. The chronic or adult form (AF) is characterized by localized lesions with involvement of the skin, oral mucosa (OM) and lungs. While the acute or juvenile form (JF) is more severe and presents disseminated widespread with the involvement of the liver, spleen and lymph nodes (LNs). In order to examine the inflammatory/immune response in lesions of patients with different clinical forms of PCM, we analyzed the expression of cytokines as well as the phenotype of the cells in the inflammatory infiltrate. Paraffin-embedded OM biopsies from 15 patients with the localized AF of PCM and LN from 15 patients with the JF of PCM were analyzed by immunohistochemistry (IHC) and qPCR. Monoclonal or polyclonal antibodies were used to characterize the cellular infiltrate (CD68, CD15, CD3, CD8, CD56, and FOXP3), cytokines...Note: The complete abstract is available with the full electronic document / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica causada por Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis), que acomete preferencialmente o pulmão, sendo este um dos poucos órgãos que está em continua e intensa interação com o meio ambiente e o sistema imune. O grande desafio para o sistema imune pulmonar é discriminar o que é nocivo e reagir de acordo. As células dendríticas (DCs) são apresentadoras de antígenos \"profissionais\" capazes de fazer o processamento do antígeno e a apresentação de peptídeos a linfócitos T e são ideais para manter este equilíbrio delicado entre a tolerância e uma resposta imune efetora. Sabendo da importância dessas células no sistema imune e que a infecção por P. brasiliensis ataca preferencialmente o pulmão, células de lavado broncoalveolar (BAL), após infecção experimental com leveduras de P. Brasiliensis, foram analisadas. Nós observamos um significante aumento de DCs no BAL após 24hrs da infecção intratraqueal com 104 leveduras de P. brasiliensis. A caracterização das DCs mostraram que essas células expressaram CD11c, MHC-II e DEC205. A fim de verificar a capacidade de migração das DCs, as mesmas foram diferenciadas a partir de células de medula óssea e pulsadas com leveduras de P. brasiliensis, marcadas com CFSE e injetadas intratraquealmente em camundongos. Como controle negativo, utilizamos PBS e DCs não pulsadas com o fungo. Os resultados mostraram, que após 12 horas de infecção, as DCs (CFSE+CD11c+), migraram para os linfonodos torácicos. No entanto, a quantidade destas células diminui discretamente após 24 horas de infecção. Além disso, não observamos DCs nos linfonodos regionais, quando analisamos os grupos controle. Dessa forma, as células pulmonares também foram marcadas in vivo injetando-se intratraquealmente o corante CFSE juntamente com leveduras de P. brasiliensis. Verificamos que após 12 horas, as DCs pulmonares, dos animais infectados com o fungo, migraram para os linfonodos regionais. Esses resultados comprovam que o fungo P. brasiliensis foi capaz de ativar as DCs, induzindo sua migração para linfonodos regionais, e induziu nesse órgão uma resposta por células T evidenciada pela produção preferencial de IL-10. / Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis), which mainly affects the lungs. They are one of the few organs that are in constant and intense interaction with the environment and the immune system. The great challenge for the pulmonary immune system is to discriminate what is harmful and react accordingly. Dendritic cells (DCs) are \"professionals\" antigen-presenting cells and they can do the antigen processing. They can also do the presentation of peptides to T lymphocytes and are ideal for maintaining this delicate balance between tolerance and an effector immune response. Knowing the importance of these cells in the immune system and that the infection by P. brasiliensis preferentially attacks the lungs, cells from bronchoalveolar lavage (BAL), after experimental infection with yeasts of P. Brasiliensis, were analyzed. We observed a significant increase of DCs in BAL after 24 hours of intratracheal infection with 104 of yeast cells of P. brasiliensis. The characterization of these cells showed that DCs expressed CD11c, MHC-II and DEC205. In order to verify the ability of migration of DCs, they were differentiated from bone marrow cells and pulsed with yeasts of P. brasiliensis, they were also labeled with CFSE and injected intratracheally into mice. As a negative control, we used PBS and DCs that were not pulsed with the fungus. The results showed that after 12 hours of infection, the DCs (CFSE + CD11c +), migrated to the thoracic lymph nodes. However, the quantity of these cells decreases slightly after 24 hours of infection. Furthermore, we observed no DCs in regional lymph nodes when we analyzed the control groups. Thus, the lung cells were also labeled in vivo by injecting the CFSE dye intratracheally with yeasts of P. brasiliensis. We found that after 12 hours, pulmonary DCs of the animals infected with the fungus migrated to regional lymph nodes. These results indicate that the fungus P. brasiliensis was able to activate DCs, inducing their migration to regional lymph nodes, and inducing a response in that organ by T cells as evidenced by preferential production of IL-10.

Orientador: Ângela Maria Victoriano de Campos Soares / Coorientador: Silvio Luis de Oliveira / Banca: José Maurício Sforcin / Banca: Sueli Aparecida Calvi / Banca: Carlos Artério Sorgi / Banca: Wafa Hanna Koury Cabrera / Resumo: O Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose a micose sistêmica de maior prevalência na América Latina. Dentre os vários mecanismos da resposta inata contra esse fungo, os envolvendo as células fagocitárias desempenham papel central na contenção do processo infeccioso, com destaque para a participação na atividade fungicida e modulação da resposta inflamatória. As funções das células fagocitárias contra os diversos microrganismos, incluindo os fungos, são iniciadas a partir de mecanismos de ativação dessas células, gerados após o reconhecimento dos mesmos por receptores de reconhecimento de estruturas moleculares padrões (PRRs) que reconhecem estruturas moleculares compartilhadas por determinados grupos de microrganismos, os chamados padrões moleculares associados à patógenos (PAMPS). Nosso estudo objetivou estudar a participação dos receptores TLR2, TLR4, receptor de manose (MR) e dectina-1, na produção de citocinas pró e anti-inflamatórias e dos eicosanóides PGE2 e LTB4, por monócitos e neutrófilos humanos em resposta a cepas de P. brasiliensis de alta (Pb18) e baixa virulência (Pb265). Verificamos que as duas cepas do fungo, mas principalmente a Pb265 são capazes de induzir a produção de TNF- por monócitos. TLR2 e TLR4 foram os receptores que se mostraram mais envolvidos nesse processo. Adicionalmente, mostramos a capacidade de essas células liberarem IL-12 em resposta ao fungo, sendo os maiores níveis detectados para a cepa Pb265 e ocorrendo um importante papel do TLR4 e MR. Altos níveis de IL-10 também foram detectados, principalmente em resposta à cepa Pb18 para a qual houve um envolvimento do TLR2 e do MR. Para a cepa 265, o receptor de maior envolvimento foi o TLR2. As duas cepas, de forma semelhante, foram capazes de induzir uma maior produção de PGE2 e LTB4 pelos monócitos. No entanto, nenhum dos PRRs mostrou-se envolvido na produção dos ... / Abstract: Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of paracoccidiodomycosis, the most prevalent deep mycosis in Latin America. During the innate immune response of the host against this fungus, phagocytic cells play an essential role, highlighting their participation in fungicidal activity and modulation of the inflammatory response. The functions of phagocytic cells against various microorganisms, including fungi, are initiated by the recognition of patterns molecular structures, shared by a group of microorganisms, called pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), by pattern recognizing receptors (PRRs) expressed by these cells. In this study, we assessed the involvement of the PRRs : TLR2, TLR4, mannose receptor (MR) and dectin-1, in the production of pró and anti-inflammatory cytokines and the eicosanoid PGE2 and LTB4, by human monocytes and neutrophils in response to high- (Pb18) and a low- (Pb265) virulence strain of P. brasiliensis. We showed that monocytes produce TNF-alpha and IL-12 in response to both strains, but with higher levels to Pb 265. TLR2 and TLR4 were the main receptors involved in TNF-alpha production, while for IL-12, the participation of TLR4 and MR was detected. High levels of IL-10 were also observed, mainly in response to Pb18, with involvement of TLR2 and MR. For Pb265, the receptor responsible was TLR2. Boths strains were able to induce PGE2 and LTB4 by monocytes. However, none of the studied receptors was shown to be involved in this production. Neutrophils did not produce TNF-alpha in response to both strains. On the other hand, these cells produce IL-12, mainly in response to Pb265, with participation of TLR2, dectin-1 and TLR4. These cells also produce L-10, whose levels were higher for Pb18 with involvement of TLR2 and MR and only TLR2 for Pb265. The production of PGE2 and LTB4 was also detected for these cells, similarly for the two strains. For PGE2, it ... / Doutor