Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-20Bitstream added on 2014-06-13T20:09:23Z : No. of bitstreams: 1 000736403.pdf: 2027693 bytes, checksum: d4421ff9f2de84b0955662de4c9a9da9 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A interação fungo-hospedeiro resulta em um processo complexo cujo conhecimento permite melhor entendimento da patogênese das micoses sistêmicas. Espécies de Paracoccidioides são agentes causadores da paracoccidioidomicose (PCM), doença progressiva, crônica e sistêmica, geograficamente confinada na América Latina. O fungo é termodimórfico e a infecção ocorre após a inalação de conídios ou fragmentos de hifas, que ao entrarem em contato com o hospedeiro podem ser transformadas em formas leveduriformes. Esse evento é importante para o estabelecimento da PCM, associado a fatores ligados ao fungo bem como ao hospedeiro. A virulência fúngica é descrita como um evento altamente complexo onde em diferentes estágios da infecção ocorre a expressão de múltiplos genes, podendo estar fortemente associados ao estabelecimento da doença. A adesão e a sobrevivência no interior do hospedeiro são extremamente importantes para o estabelecimento da patogênese. Alguns genes de Paracoccidioides spp se apresentam diferencialmente expressos durante a transição dimórfica do fungo, apresentando baixos níveis de expressão na forma miceliar quando comparadas com a forma leveduriforme, sugerindo que estes possivelmente seriam fatores na composição de estratégias moleculares que P. brasiliensis utiliza para morfo-adaptação e sobrevivência no hospedeiro. O objetivo deste trabalho foi estudar a expressão de genes relacionados a alguns dos fatores de virulência de P. brasiliensis e P. lutzii na fase miceliar e leveduriforme, visando verificar o nível de expressão no fungo bem como na interação com células fagocíticas e epiteliais. Para tanto foram realizados ensaios de infecção com P.brasiliensis (Pb18) e P. lutzii (P01), nas fases miceliar e leveduriforme em células epiteliais pulmonares (MRC-5) e macrófagos alveolares (AMJ2-C11) utilizando a técnica de PCR em tempo real (qRT-PCR). Os genes eleitos para este estudo foram os... / The fungus - host interaction results in a complex process whose knowledge allows a better understanding of the pathogenesis of systemic mycoses. Paracoccidioides species are causative agents of paracoccidioidomycosis (PCM), a progressive, chronic and systemic disease , geographically confined to Latin America. The fungus is thermally and infection occurs after inhalation of conidia or hyphal fragments, which on contact with the host can be transformed into yeast forms. This event is important for the establishment of PCM besides other factors related to the host-fungus interaction. The fungal virulence is described as a highly complex event that enables the expression of multiple genes of the fungus in different stages of infection and can be strongly associated with the development of the disease. Adherence and survival within the host are extremely important for the establishment of pathogenesis. Paracoccidioides spp differentially expressed some genes during the dimorphic fungus transition, having low expression levels in the mycelial form compared with yeast-form, suggesting that these factors were likely to be in the composition of molecular strategies of P. brasiliensis that uses to morpho- adaptation and survival in the host. The aim of this study was to compare the gene expression of the some virulence factors of Paracoccidioides species by real-time PCR. For the assays, the infection was performed with the yeast and mycelial phase of P. brasiliensis (Pb18) and P. lutzii (P01) in pulmonary epithelial cells (MRC-5) and alveolar macrophages (AMJ2 -C11) using RT- PCR. The genes chosen for this study were those which express the 43 kDa glycoprotein (gp43), enolase, glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase (GAPDH), 14-3-3 (30kDa), phospholipase, protease and hemolysin (Duf gene). The results showed a significant increase in the levels expression of enolase, gp43 and GAPDH in the yeast phase of P. brasiliensis. Enolase was more ...

Submitted by DEBORA DE OLIVEIRA LOSNAK null (deboralosnak@hotmail.com) on 2017-03-08T18:48:25Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Débora Losnak.pdf: 3093790 bytes, checksum: f1b838682d27c1345ac29cab3b2bfc9a (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-03-13T18:04:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 losnak_do_me_bot.pdf: 3093790 bytes, checksum: f1b838682d27c1345ac29cab3b2bfc9a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-13T18:04:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 losnak_do_me_bot.pdf: 3093790 bytes, checksum: f1b838682d27c1345ac29cab3b2bfc9a (MD5) Previous issue date: 2017-02-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A emergência e reemergência de doenças infecciosas é impulsionada por vários fatores e a busca de patógenos em amostras animais podem oferecer oportunidades para estudos eco-epidemiológicos e também dados sobre a evolução dos patógenos. O objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência de fungos patogênicos importantes em saúde pública, em exemplares de animais silvestres mortos por atropelamento no estado de Santa Catarina e identificar e mapear áreas de risco para a infecção humana. Grande parte destes fungos apresenta em comum dimorfismo, distribuição geográfica restrita e produção de conídios infectantes que são aspirados pelo hospedeiro por meio das vias respiratórias. Cães e tatus são apontados como transmissores de Paracoccidioides brasiliensis, os morcegos ao Histoplasma spp., assim como as fezes de pombos ao Cryptococcus spp.. No presente trabalho foram analisadas 1063 amostras de pulmão, fígado, baço, pele e coração de 297 animais silvestres, para detecção de Paracoccidioides brasiliensis, Histoplasma capsulatum e Cryptococcus spp. pela técnica de Reação em Cadeia de Polimerase (PCR). Utilizou-se primers universais para detecção de fungos em geral e obteve-se positividade em 102 amostras de 59 animais. Para a análise de P. brasiliensis, utilizou-se os primers específicos, obtendo oito amostras positivas em cinco animais (quatro Oxymycterus spp. e um Euryoryzomys russatus). Não houve a detecção molecular para Histoplasma spp.. Foi possível a identificação de três amostras para Cryptococcus spp.. O sequenciamento foi realizado, porém em 89 amostras de 49 animais foi possível somente a identificação em Fungal sp. (GenBank KT923226.1), duas amostras para Cryptococcus neoformans (GenBank KY107218.1) obtidas de Oxymycterus spp. e Akodon spp. e três amostras de Aspergillus penicillioides (GenBank KP131612.1 e KP997215.1) obtidas de Gracilinanus spp., Oxymycterus spp. e Philander spp. Importante salientar que houve coinfecção de P. brasiliensis e Cryptococcus neoformans em amostra de um Oxymycterus spp. Esta pesquisa mostra a importância dos animais silvestres na transmissão de doenças e auxilia no mapeamento dos locais de ocorrência de determinados patógenos e doenças em uma região ainda não avaliada. / The emergence and reemergence of infectious diseases is propelled by many diverse factors and the search for pathogens in animal samples may offer opportunity for eco-epidemiologic studies as well as data on the evolution of pathogens. The objective of this study was to evaluate in samples of road-killed wild animals the occurrence of pathogenic fungi of importance for public health. A great part of these fungi presented, in common, dimorphism, restricted geographic distribution and production of conidia infecting, which are aspirated by the host by means of their respiratory tract. Dogs and armadillos are normally related to the transmission of Paracoccidioides brasiliensis, bats to Histoplasma spp., as well as pigeons feces to Cryptococcus spp.. In this study we analyzed 1063 samples of organs of 297 wild animals for the detection of Paracoccidioides brasiliensis, Histoplasma capsulatum and Cryptococcus spp. by the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR). Universal primers were employed for the detection of fungi in general and positivity was obtained in 102 samples from 59 animals. For the P. brasiliensis analysis was used specific primers, resulting in eight positive samples from five animals (four Oxymycterus spp. and one Euryoryzomys russatus). There was no molecular detection to Histoplasma spp.. Was possible the identification of three samples to Cryptococcus spp.. The sequencing was performed, however in 89 samples from 49 animals was possible to identify Fungal sp. (GenBank KT923226.1), two samples for Cryptococcus neoformans (GenBank KY107218.1) obtained from Oxymycterus spp. and Akodon spp. and three samples from Gracilinanus spp., Oxymycterus spp. and Philander spp. were positive for Aspergillus penicillioides (GenBank KP131612.1 e KP997215.1). Is important emphasize the coinfection with P. brasiliensis and Cryptococcus neoformans in a sample from Oxymycterus spp.. This research shows the importance of the wild animals in transmissions of diseases and assists in the mapping of pathogen and disease sites in a region that has not yet been evaluated. / FAPESP: 2015/17519-4

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-30T12:45:52Z No. of bitstreams: 2 Philippsen, Hellen Kempfer-2011-dissertação.pdf: 1457910 bytes, checksum: 4ee585b7a28a164d44414a0a2ef76ae5 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-09-30T15:28:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Philippsen, Hellen Kempfer-2011-dissertação.pdf: 1457910 bytes, checksum: 4ee585b7a28a164d44414a0a2ef76ae5 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-30T15:28:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Philippsen, Hellen Kempfer-2011-dissertação.pdf: 1457910 bytes, checksum: 4ee585b7a28a164d44414a0a2ef76ae5 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2011-08-30 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Paracoccidioides brasiliensis is a dimorphic fungus, the causative agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic mycosis that affects mainly people from Latin America. In order to establish infection, many factors are required for P. brasiliensis, such as cell wall remodeling and the ability to capture nutrients from the host. As iron is an important cofactor of many reactions, the host reduces the availability of free iron ions to the pathogen. Therefore, this study aims to elucidate the proteomic profile of the cell wall in response to iron depletion. The extraction of surface proteins of the cell wall in iron restriction and iron replete conditions was performed and the proteomic profile was obtained by two-dimensional electrophoresis with subsequent analysis of images. Statistical analysis demonstrated proteins with differential level of expression in each condition, which were subjected to tryptic digestion and identification by mass spectrometry. It was identified 26 proteins by peptide mass fingerprint (PMF) and/or ions fragmentation (MS/MS). The majority of these proteins have post - translational modifications and only some have in their sequences signal peptide, suggesting that they are addressed to the surface by non-classical pathways. / Paracoccidioides brasiliensis é um fungo patogênico termodimórfico, agente causador da Paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica que afeta principalmente indivíduos da América Latina. Muitos fatores são necessários para que P. brasiliensis estabeleça infecção, como o remodelamento da parede celular e a capacidade de captar nutrientes do hospedeiro para seu metabolismo. Como o íon ferro é um cofator de diversas reações, o hospedeiro diminui a disponibilidade de íons ferro na forma livre para o patógeno. Portanto, o presente trabalho visa investigar o perfil de proteínas da parede celular de P. brasiliensis quando em condição de depleção do íon ferro. Para esse fim, realizou-se a extração das proteínas da parede das células de P. brasiliensis em meio com restrição do íon ferro. O perfil proteômico das condições experimental e controle foram obtidos por eletroforese bidimensional com posterior análise de imagens. Análises estatísticas demonstraram as proteínas reguladas nas condições de depleção de ferro, que foram submetidas à digestão tríptica e identificação por espectrometria de massas. Foram identificadas 26 proteínas por perfil de digestão tríptica (PMF) e/ou perfil de fragmentação dos íons (MS/MS). A maioria dessas proteínas apresenta preditas modificações pós - traducionais e apenas algumas apresentam peptídeo sinal em suas sequências, o que sugere que elas são endereçadas à superfície por vias não clássicas.

Resumo: Paracoccidioides brasiliensis é um importante patógeno humano que causa a paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica com ampla distribuição na América Latina. A adesão e invasão de células são eventos cruciais envolvidos na infecção e disseminação do patógeno. Além disso, patógenos utilizam suas moléculas de superfície para se ligar aos componentes da matriz extracelular para estabelecer a infecção. Uma proteína antigênica de P. brasiliensis foi isolada de géis de eletroforese bidimensional do cell-free do fungo e caracterizada. Peptídeos foram obtidos da proteína de 54 kDa e pI 5,6 e mostraram homologia com enolase de Paracoccidioides brasiliensis e outros fungos. A proteína foi purificada através de eletroeluição e utilizada para a produção de anticorpo policlonal em coelho. Por microscopia de fluorescência não foi possível observar a localização exata desta proteína, apenas que se encontra aparentemente distribuídapor todo o fungo, foi possível verificar alterações no citoesqueleto de pneumócitos durante a infecção por P. brasiliensis. A localização foi confirmada por microscopia imunoeletrônica a presença de enolase foi detectada principalmente na parede celular de leveduras de P. brasiliensis e também no citoplasma, ela se demonstrou mais expressa quando este fungo foi cultivado em meio onde houve acréscimo de sangue de carneiro e durante a situação de infecção a pneumócitos. A enolase purificada foi capaz de se ligar a fibronectina, fibrinogênio, laminina, plasminogênio, colágenos tipo I e IV. Foi confirmado que a ligação desta proteína à pneumócitos é influenciada pela sequência de aminoácidos Arg-Gly-Asp contida provavelmente nos receptores da matriz extracelular presentes na célula do hospedeiro. Essas informações indicam que a enolase possivelmente contribui para a adesão do microrganismo aos tecidos do ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Paracoccidioides brasiliensis is an important human pathogen that causes paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic mycosis with a wide distribution in Latin America. The ability of P. brasiliensis to cause not only human diseases but also mycoses with a variety of clinical manifestations from localized forms to the disseminated disease progressing to lethality, probably depends on the relationship between the virulence of the fungus, its ability to interact with and to invade the surface structures of the host and the immune response of the host. The adhesion of the pathogen leads to the recognition of carbohydrate and protein ligands on the surface of the host cell or proteins of the extracellular matrix (ECM). The large number of tissue types that fungi can colonize and infect suggests that they use a variety of surface molecules for adhesion.Understanding the interactions between P. brasiliensis and the host tissue depends on the study of the different steps of the process of colonization, especially adhesion, in which the pathogen recognizes ligands on the surface of host cells. This study aimed to verify the role of enolase in the host cell-fungus interaction and the ability of enolase to bind to extracellular matrix components, to determine its subcellular localization. The data revealed that fibronectin is the major ligand of enolase. Evaluation of the location of enolase at an ultrastructural level revealed that it is distributed in various cellular compartments, but at a high level in the cell wall. This suggests that enolase performs additional functions related to the glycolytic pathway and also plays a role of adhesion in P. brasiliensis. Therefore, this study increases the knowledge about the characteristics of enolase and its influence on the binding process of P. brasiliensis / Orientador: Ana Marisa Fusco Almeida / Coorientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Márcia Aparecida Silva Graminha / Banca: Eduardo Bagagli / Mestre

Made available in DSpace on 2014-07-22T13:55:42Z (GMT). No. of bitstreams: 4 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 157.86.8.8/reports/doutorado_bibcb/marcelly_brito_ipec_dout_2011.pdf: 1069166 bytes, checksum: 4b503c1616c5d0d2b6ce68455c9495c4 (MD5) 157.86.8.8/reports/doutorado_bibcb/marcelly_brito_ipec_dout_2011.pdf.txt: 151409 bytes, checksum: bd009b4ad05d974c6b0e66e903e60674 (MD5) 157.86.8.8/reports/doutorado_bibcb/marcelly_brito_ipec_dout_2011.pdf.jpg: 1379 bytes, checksum: f38c6fd8a8b41d973bb48e95937c921d (MD5) Previous issue date: 2014-05-06 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro,RJ, Brasil / Estudos sobre os aspectos morfológicos, genéticos e de virulência, inerentes ao Paracoccidioides brasiliensis antes e depois da interação com hospedeiro experimental são de grande importância para. Oito isolados avaliados não apresentaram diferenças macro e micromorfológicas póspassagem em animal quando comparadas a morfologia pré-passagem. Entretanto eles diferiram entre si em relação à micromorfologia, in vitro, com diferenças na gemulação e presença de filamentos à temperatura de 36oC. Em relação à virulência, segundo os critérios adotados, índice esplênico, reisolamento de células fúngicas, lesões em diferentes órgãos e taxa de sobrevivência, o isolado Pb235CRS foi considerado o mais virulento; os isolados Pb261, Pb31MAS, Pb285, Pb246, Pb281 apresentaram virulência intermediária e os isolados Pb29EE e Pb639 foram os menos virulentos A genotipagem por RAPD dos isolados demonstrou modificações no perfil de bandas do DNA após interação com o hospedeiro animal, aos 100 dias da inoculação, porém não foi possível correlacionar esses dados com os demais obtidos. Os resultados obtidos em nosso estudo apontam que diferenças entre isolados existem e podem interferir na evolução da doença / Studies of aspects inherent to Paracoccidioides brasiliensis, especially before and after thee interaction with the experimental host are of importance to extend the knowledge about its pathogenesis. Morphology, genetic profile and virulence of eight strains of P. brasiliensis isolated from patients with chronic form of disease from Mato Grosso state were evaluated before and after passage in experimental murine model. Eight isolates evaluated did not show macro and micromorphological differences after animal passage when compared to pré-animal passage. However, differences among them were observed in relation to presence of yeast and filament forms, in vitro, at 36ºC. Evaluation of virulence, in accordance with the criteria used, splenic index, fungal cells recovered, lesions in different organs and survival rate, showed that Pb235CRS was the most virulent isolate; Pb261, P31MAS, Pb285, Pb246, Pb281 had intermediate virulence and Pb639, Pb29EE were the less virulent isolates. Genotyping by RAPD of these isolates showed changes in the profile of DNA after 100 days of interaction with the animal host. It was not possible to correlate the data from morphology, genotyping and virulence. The results obtained in our study pointed out differences among isolates that may interfere with the disease evolution.

Made available in DSpace on 2016-01-13T13:27:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2016-01-13T13:33:22Z : No. of bitstreams: 1 000855701.pdf: 1569730 bytes, checksum: 3d2a8da3b6cbd65de62a52de0c54630d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O solo é o provável habitat do fungo patogênico Paracoccidioides spp., devido à detecção molecular deste patógeno neste tipo de amostra, associada à frequente infecção de trabalhadores rurais e isolamento em animais silvestres (Dasypus novemcinctus e Cabassous centralis). O presente estudo visou detectar e diferenciar as espécies Paracoccidioides brasiliensis (complexo) e Paracoccidioides lutzii no ambiente, pelas técnicas de Nested PCR, FISH, respectivamente, em amostras ambientais aerossóis e solo de tocas de tatus provenientes de áreas endêmicas para a Paracoccidioidomicose nas regiões Sudeste, Centro-Oeste e Norte brasileiras. Além da detecção ambiental de Paracoccidioides sp. por métodos moleculares, foi estudada a ocorrência de tatus infectados com P. lutzii no centro-oeste brasileiro, região de maior prevalência desta espécie, onde nenhum animal havia sido avaliado até o presente momento. Obtivemos a detecção positiva para ambas as espécies de Paracoccidioides por ambas as técnicas de detecção (Nested PCR e hibridização in situ), além da diferenciação por ITS (Internal Transcribed Spacer) pudemos visualizar os espécimes fúngicos em algumas amostras aerossóis. Acreditamos que os dados refletem a real ocorrência dos fungos em seu nicho, no entanto, o isolamento animal em tatus demonstrou-se negativo para 7 animais avaliados no trabalho, o que pode indicar que a relação da espécie P. lutzii com os tatus pode não ser a mesma com os casos de tatus infectados com P. brasiliensis em outras regiões brasileiras / Soil is probably the habitat of pathogenic fungi Paracoccidioides spp., due to the molecular detection of this pathogen in these samples, associated with the frequent of infection in rural workers and the isolation in wild animals (Dasypus novemcinctus and Cabassous centralis). This project aimed to detect and differentiate the species P. brasiliensis (complex) and P. lutzii in the environment, by the techniques of Nested PCR and FISH, respectively, in environmental aerosol samples and soil from armadillo's burrows, from endemic and non-endemic areas to Paracoccidioidomycosis in the Southeast, Midwest and North regions of Brazil. Besides the environmental detection of Paracoccidioides spp. by molecular methods, the occurrence of armadillos infected with P. lutzii the Brazilian center-west region with the highest prevalence of this kind, where no animals were evaluated at the present time will be studied. We achieved positive detection of both species of Paracoccidioides by both detection techniques (PCR and in situ hybridization), and further the differentiation by the ITS (Internal Transcribed Spacer) we could visualize fungal species in some aerosol samples also differentiating the two species. We believe of the data reflect the actual occurrence of fungi in their niche, however the animal isolation in armadillo's showed up negative for 7 animals evaluated at work, which indicated that the ratio of the species P. lutzii with armadillo may not be the same with cases of armadillo's infected with P. brasiliensis in other regions of Brazil / FAPESP: 2012/03233-3

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-06Bitstream added on 2014-06-13T18:42:09Z : No. of bitstreams: 1 cavalheiro_js_dr_botfm.pdf: 355047 bytes, checksum: d0af4a219752a076dbe64c1332627767 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A Paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica humana causada por um fungo imperfeito e dimórfico denominado Paracoccidioides brasilienis (P.brasiliensis), sendo os conídeos sua forma infectante. Camundongos geneticamente selecionados para Resposta Inflamatória Aguda Máxima (AIRmax) e Mínima (AIRmin), foram usados como modelo experimental da paracoccidioidomicose. Os animais foram inoculados pela via intraperitoneal com P. brasiliensis (cepa 18) e sacrificados após 6, 12 e 24 horas e 3, 7 e 14 dias de infecção. Nestes períodos foram removidos fragmentos de baço, fígado e pulmão para avaliação do grau de infecção de células fúngicas nestes órgãos, avaliação da atividade macrofágica por macrófagos peritoneais e esplênicos pela determinação das concentrações de óxido nítrico e produção de citocinas pró e anti-inflamatórias de sobrenadantes de homogenatos de pulmão e baço. No presente trabalho observamos que as linhagens AIRmax apresentaram maior contenção do processo infeccioso que as linhagens AIRmin nos compartimentos analisados. Quanto a produção de NO observamos que animais AIRmax produziram mais deste metabólito em períodos tardios, o que pode ter ajudado esta linhagem na maior contenção do processo infeccioso nos órgãos analisados. Quanto a produção de citocinas observamos que a produção de INF- , TNF- , IL-1, IL- 6, IL-8, IL-12, estão aumentadas nas linhagens AIRmax na maioria dos órgãos e períodos analisados, contribuindo para a maior resistência destas linhagens frente à infecção pelo fungo em relação aos AIRmin, com exceção da IL-4 e IL-10 que apresentaram sua produção diminuída na linhagem AIRmax e aumentada na linhagem AIRmin reproduzindo seu efeito biológico supressor. Frente aos resultados observamos que a linhagem AIRmax apresentou maior contenção do processo infeccioso, com importante envolvimento... / Paracoccidioidomycosis is a systemic human mycosis caused by Paracoccidioides brasiliensis (P. brasiliensis), an imperfect dimorphic fungus whose conidia are its infectant form.Mice genetically selected for Maximum (AIRmax) and Minimum (AIRmin) Acute Inflammatory Response were used as an experimental paracoccidioidomycosis model. The animals were intraperitoneally inoculated with P. brasiliensis (strain 18) and sacrificed after 6, 12 and 24 hours and after 3, 7 and 14 days of infection. In these periods, fragments from their spleen, liver and lung were removed for evaluation of the level of infection by fungal cells in those organs, evaluation of macrophagic activity by peritoneal and splenic macrophages through the determination of the concentrations of nitric oxide (NO) and production of pro- and anti-inflammatory cytokines of lung and spleen homogenate supernatants. In the present study, it was observed that the AIRmax lineages presented greater control of the infectious process than did the AIRmin lineages in the analyzed compartments. As regards NO production, it was found that AIRmax animals produced more of such metabolite in late periods, which may have helped that lineage with the greater control of the infectious process in the analyzed organs. Concerning cytokine production, it was observed that the production of INF- , TNF- , IL-1, IL-6, IL-8 and IL-12 were increased for the AIRmax lineages in most analyzed organs and periods, thus contributing to the greater resistance exhibited by such lineages against infection with the fungus in relation to AIRmin, except for IL-4 and IL-10, which showed decreased production for the AIRmax lineage, reproducing its suppressive biological effect. From these results, it was observed that the AIRmax lineage showed greater control over the infectious process with an important involvement of the analyzed cytokines. These findings... (Complet abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-10. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:48Z : No. of bitstreams: 1 000831222_20160531.pdf: 1099173 bytes, checksum: 4a45a0351ffd871fce7287d849abb3bf (MD5) Bitstreams deleted on 2016-06-02T14:22:29Z: 000831222_20160531.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-02T14:23:09Z : No. of bitstreams: 1 000831222.pdf: 2560916 bytes, checksum: c639d16c837c4a7b0bc077a069a9fa68 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / Paracocciodioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, causada por fungo dimórfico do gênero Paracoccidioides (Paracoccidioides brasiliensis e Paracoccidioides lutzii), sendo endêmica na América Latina. Nos últimos anos, estudos têm enfocado o papel dos neutrófilos (PMNs) na imunidade, uma vez que a literatura enfatiza o dinâmico envolvimento dessas células durante a defesa do hospedeiro contra diversos micro-organismos. Recentemente, foi demonstrado que neutrófilos podem utilizar uma nova estratégia para destruir patógenos chamada NETose, um tipo de morte celular diferente dos bem elucidados mecanismos de apoptose e necrose. Essa via envolve a liberação de redes extracelulares constituídas de conteúdo nuclear e granular por PMNs ativados. É proposto que as NETs destruam micro-organismos que não sejam fagocitados pelos neutrófilos, por possuírem tamanho ou morfologia maiores que as células, o que pode ocorrer com o Pb, uma vez que esse fungo assume essas características. Nesse contexto, os objetivos desse estudo foram identificar a presença das NETs tanto in vivo como in vitro, analisando lesões tegumentares de pacientes com PCM e culturas de PMNs do sangue periférico de pacientes e indivíduos saudáveis desafiados com diferentes cepas de P. brasiliensis. Fragmentos de biópsias foram marcados com anticorpos anti-histona (Texas-Red), anti-elastase (FITC), e corados com DAPI para avaliação por microscopia confocal, e com H&E para análise histopatológica. PMNs do sangue periférico de pacientes e indivíduos saudáveis foram isolados e desafiados com P. brasiliensis (Pb18 e Pb265) para avaliação de NETs por microscopia de varredura, microscopia confocal e quantificação dessas estruturas por Picogreen dsDNA kit. As imagens de microscopia confocal das biópsias revelaram a presença de constituintes das NETs, localização de DNA extracelular corado com DAPI, com ... / Paracoccidiodomycosis (PCM), an endemic systemic mycosis in Latin America, is caused by the thermodimorphic fungus of Paracoccidioides genus (Paracoccidioides brasiliensis (Pb) and Paracoccidoides lutzii). Recently, works in PCM have focused the role of neutrophils (PMNs), since literature has demonstrated the dynamic involvement of these cells in host defense against microorganisms. Studies have shown that PMNs could use a novel strategy to destroy microorganisms (NETosis), a type of neutrophil death distinct from apoptosis and necrosis. This mechanism involves the release of extracellular traps by activated neutrophils, known as neutrophil extracellular traps (NETs). It has been proposed that NETs may destroy microorganisms that were not phagocytosed by neutrophils, and this could be proposed for Pb, since the fungus yeast can present different sizes. In this context, the objectives of this study were identify the presence of NETs in vivo and in vitro, analyzing samples of patients with PCM by different methodologies. Tissue sections from formalin-fixed biopsies were stained with DAPI, anti-elastase (FITC) and anti-histone (Texas-Red) for confocal immunofluorescence microscopy analysis, and with Hematoxylin-Eosin (H&E) for histopathology. Neutrophil cultures were challenged with two isolates of Pb (Pb18 and Pb265), analyzed by scanning electron microscopy and NETs were quantified by the Picogreen dsDNA kit. The images revealed the presence of NETs constituents, nuclear and extracellular localization of DNA, co-localization of elastase and histone, confirmed by the overlay of the three stains. Histopathology showed the presence of Pb and inflammatory infiltrate with high number of neutrophils on the site of the lesion and extracellular DNA (hematoxylin positive) indicating NETs. Both isolates were able to induce NET release in vitro in similar levels. Thus, P. brasiliensis (Pb18 and Pb265) is able to induce NETs formation by ... / CNPq: 480486/2011-5 / FAPESP: 2011/18855-7 / FUNDUNESP: 006637/11-DFP

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-25Bitstream added on 2014-08-13T17:59:55Z : No. of bitstreams: 1 000769595.pdf: 1096092 bytes, checksum: fdc847b959c92f80b96129d394e8dfa1 (MD5) / Estudos sobre as alterações da bioquímica sanguínea na paracoccidioidomicose (PCM), antes e durante o tratamento, são escassos e em geral apresentam casuísticas pequenas e curto tempo de seguimento. Assim, foi realizado um estudo prospectivo com 200 pacientes com PCM submetidos à avaliação das alterações hepatobiliares, metabólicas e reações de fase aguda à admissão e durante o seguimento do tratamento com cotrimoxazol (CMX) ou itraconazol (ITC). Dos 200 pacientes, 149 apresentaram a forma crônica (FC) e 51 a forma aguda/subaguda (FA); 31 foram tratados com ITC e 169 com CMX. Avaliações clínicas e da bioquímica sanguínea foram realizadas antes de se iniciar o tratamento, definido como momento 0 (M0) e, a seguir, periodicamente, até que os pacientes apresentassem cura clínica, definida pelo desaparecimento da sintomatologia apresentada à admissão e redução da velocidade de hemossedimentação (VHS) a valores normais (M3), que ocorreu após 18 a 23 semanas de tratamento. Entre estes dois momentos, os pacientes foram avaliados a intervalos definidos em semanas, em relação ao início do tratamento: M1: 4 a 6 e M2: 7 a 10. Os níveis séricos de bilirrubina conjugada (BC), bilirrubina total (BT), aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), fosfatase alcalina (ϜᾹ), gama-glutamiltransferase (ɣ-GT), triglicerídes, glicose, colesterol total, lípides totais, cálcio, ácido úrico, fósforo, proteínas totais e frações, mucoproteínas, α1-glicoproteína ácida e eletroforese de proteínas séricas foram dosados no Laboratório Central do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu - UNESP. Os dados foram apresentados como razões entre o valor absoluto e o limite superior de normalidade para as variáveis que avaliaram a função hepatobiliar, e com os limites superiores e, ou, inferiores para as variáveis metabólicas e reações de fase aguda. A avaliação da função ... / Studies on the alterations in blood biochemistry in paracoccidioidomycosis (PCM), before and during treatment are scarce and generally have small patients number and short follow-up time. Thus, a prospective study was conducted with 200 patients with PCM submitted to the evaluation of hepatobiliary function, metabolic and acute phase reactions alterations at admission and during follow-up of treatment with cotrimoxazole (CMX) or itraconazole (ITC). Of the 200 patients, 149 presented a chronic form (CF), and 51 the acute subacute form (AF), 31 were treated with ITC, and 169 were treated with CMX. Clinical and blood biochemistry were performed before starting the treatment, defined as time 0 (M0), and then periodically until the patients had clinical cure, defined as the disappearance of the symptomatology presented at admission and regression of the erythrocyte sedimentation rate to normal (M3), which occurred after 18 to 23 weeks of treatment. Between these two moments, the patients were evaluated at intervals defined in weeks, compared to the beginning of treatment: M1: 4-6 and M2:7-10. The serum levels of conjugated bilirubin (CB), total bilirubin (TB), aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase (ϜᾹ), gamma- glutamyltransferase (ɣ-GT), triglycerides, glucose, total cholesterol, total lipids, calcium, uric acid, phosphorus, total proteins and fractions, mucoproteins, α1-acid glycoprotein and serum protein electrophoresis were measured at the Central Laboratory of the Hospital of the Faculty of Medicine of Botucatu - UNESP. Data were presented as ratios between the absolute value and the upper limit of normality for the variables that assessed hepatobiliary function, and with upper and/or lower limit of the metabolic variables and acute phase reactions. The evaluation of hepatobiliary function revealed that the patient's admission as a result of the PCM that serum levels of ϜᾹ and ...

Orientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Janaina de Cassia Orlandi Sardi / Banca: Gil Benard / Resumo: A interação fungo-hospedeiro resulta em um processo complexo cujo conhecimento permite melhor entendimento da patogênese das micoses sistêmicas. Espécies de Paracoccidioides são agentes causadores da paracoccidioidomicose (PCM), doença progressiva, crônica e sistêmica, geograficamente confinada na América Latina. O fungo é termodimórfico e a infecção ocorre após a inalação de conídios ou fragmentos de hifas, que ao entrarem em contato com o hospedeiro podem ser transformadas em formas leveduriformes. Esse evento é importante para o estabelecimento da PCM, associado a fatores ligados ao fungo bem como ao hospedeiro. A virulência fúngica é descrita como um evento altamente complexo onde em diferentes estágios da infecção ocorre a expressão de múltiplos genes, podendo estar fortemente associados ao estabelecimento da doença. A adesão e a sobrevivência no interior do hospedeiro são extremamente importantes para o estabelecimento da patogênese. Alguns genes de Paracoccidioides spp se apresentam diferencialmente expressos durante a transição dimórfica do fungo, apresentando baixos níveis de expressão na forma miceliar quando comparadas com a forma leveduriforme, sugerindo que estes possivelmente seriam fatores na composição de estratégias moleculares que P. brasiliensis utiliza para morfo-adaptação e sobrevivência no hospedeiro. O objetivo deste trabalho foi estudar a expressão de genes relacionados a alguns dos fatores de virulência de P. brasiliensis e P. lutzii na fase miceliar e leveduriforme, visando verificar o nível de expressão no fungo bem como na interação com células fagocíticas e epiteliais. Para tanto foram realizados ensaios de infecção com P.brasiliensis (Pb18) e P. lutzii (P01), nas fases miceliar e leveduriforme em células epiteliais pulmonares (MRC-5) e macrófagos alveolares (AMJ2-C11) utilizando a técnica de PCR em tempo real (qRT-PCR). Os genes eleitos para este estudo foram os ... / Abstract: The fungus - host interaction results in a complex process whose knowledge allows a better understanding of the pathogenesis of systemic mycoses. Paracoccidioides species are causative agents of paracoccidioidomycosis (PCM), a progressive, chronic and systemic disease , geographically confined to Latin America. The fungus is thermally and infection occurs after inhalation of conidia or hyphal fragments, which on contact with the host can be transformed into yeast forms. This event is important for the establishment of PCM besides other factors related to the host-fungus interaction. The fungal virulence is described as a highly complex event that enables the expression of multiple genes of the fungus in different stages of infection and can be strongly associated with the development of the disease. Adherence and survival within the host are extremely important for the establishment of pathogenesis. Paracoccidioides spp differentially expressed some genes during the dimorphic fungus transition, having low expression levels in the mycelial form compared with yeast-form, suggesting that these factors were likely to be in the composition of molecular strategies of P. brasiliensis that uses to morpho- adaptation and survival in the host. The aim of this study was to compare the gene expression of the some virulence factors of Paracoccidioides species by real-time PCR. For the assays, the infection was performed with the yeast and mycelial phase of P. brasiliensis (Pb18) and P. lutzii (P01) in pulmonary epithelial cells (MRC-5) and alveolar macrophages (AMJ2 -C11) using RT- PCR. The genes chosen for this study were those which express the 43 kDa glycoprotein (gp43), enolase, glyceraldehyde-3- phosphate dehydrogenase (GAPDH), 14-3-3 (30kDa), phospholipase, protease and hemolysin (Duf gene). The results showed a significant increase in the levels expression of enolase, gp43 and GAPDH in the yeast phase of P. brasiliensis. Enolase was more ... / Mestre