Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2011-01-19T17:58:18Z No. of bitstreams: 1 2010_DaianaLimaBrito.pdf: 842633 bytes, checksum: b816a01c87baaf074ec7d24b4a63bbd1 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2011-01-24T15:29:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_DaianaLimaBrito.pdf: 842633 bytes, checksum: b816a01c87baaf074ec7d24b4a63bbd1 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-01-24T15:29:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_DaianaLimaBrito.pdf: 842633 bytes, checksum: b816a01c87baaf074ec7d24b4a63bbd1 (MD5) Previous issue date: 2010-09 / Devido à grande importância da infecção gastrointestinal na criação de ruminantes, especialmente em ovinos, a utilização de medicamentos anti-helmínticos é amplamente empregada pelos criadores. Esta prática, entretanto, apresenta elevados custos e tem resultado no surgimento de vermes resistentes aos princípios ativos disponíveis no mercado. Em atenção a este problema, pesquisadores de todo o mundo têm estudado formas de reduzir o grau de infecção parasitária sem a utilização exclusiva de medicação. Para tanto, têm-se dado enfoque para técnicas de manejo do pasto que ajudem na redução da população parasitária ambiental, e, consequentemente, na redução da carga parasitária dos animais. Diversos aspectos ambientais podem influenciar e favorecer a infestação parasitária das pastagens. Alguns deles, como o tipo e altura da forrageira utilizada, taxa de lotação e rotação de piquetes, podem ser manejados de forma racional com objetivo de reduzir a exposição dos animais aos vermes. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Due to the great importance of gastrointestinal infection in the creation of ruminants, especially sheep, the use of anthelmintic drugs are widely used by farmers. This practice, however, has high costs and has resulted in the emergence of worms resistant to active ingredients available. In response to this problem, researchers around the world have been studying ways to reduce the degree of parasitic infection without the exclusive use of medication. For this, have given focus to pasture management techniques that help in decrease the environmental parasite population and consequently reducing the parasite load of animals. Several environmental aspects can influence and favor the parasitic infestation of pastures. Some, like the height and type of forage used, stocking rate and rotation of paddocks, can be managed in a rational way in order to reduce the exposure of animals to the worms.

Atualmente não se dispõe de vacinas contra a toxoplasmose humana, mas têm-se desenvolvido modelos animais em ratas e camundongos para o ensaio imunológico contra a toxoplasmose. No entanto, estes modelos têm mostrado certas limitações. É aconselhável contar com ensaios efetuados em diversas espécies animais antes de comprometer-se com custosos ensaios finais de vacinação, já que as diversas espécies animais, respondem diferentemente frente aos mesmos imunógenos. O objetivo geral do presente trabalho foi então, indagar a aplicabilidade de um modelo hamster para o estudo da imunidade contra a toxoplasmose congênita. Os objetivod específicos foram: verificar a transmissão congênita de Toxoplasma durante o estágio crônico da infecção; verificar a transmissão congênita de Toxoplasma durante o estágio agudo da infecção; verificar a ocorrência da transmissão lactogênica no desenho experimental proposto, e questionar a proteção contra a toxoplasmose congênita, conferida pela imunidade estéril e mediante a premunição. O cumprimento dos objetivos possibilitará o uso de imunizações (com Toxoplasma gondii viável) em futuros estudos, assim como conhecer a eficácia dos desafios efetuados em hamster, e também permitirá conhecer se o imunógeno mais simples disponível é suficiente para conferir proteção contra a toxoplasmose congênita. Quanto ao ensaio da imunidade na fase crônica da toxoplasmose foi possível comprovar nas condições deste experimento que ela não ocorre, pois as 10 fêmeas hamster inoculadas com 40 oocistos da cepa ME-49 antes de serem acasaladas, tiveram filhotes negativos para anticorpos anti-T.gondii. No modelo de infecção aguda, 100% das fêmeas inoculadas com 102 oocistos da cepa Prugniaud durante a gestação foram positivas, e houve 60% de transmissão transplacentária para seus filhotes e 40% de transmissão transmamária para filhotes adotados. Também, 100% das fêmeas inoculadas com 103 oocistos da mesma cepa durante a gestação foram positivas e nos seus filhotes ocorreram 100% de transmissão transplacentária, e em 40% dos filhotes adotados houve transmissão transmamária. Num terceiro experimento, em fêmeas inoculadas com a cepa RH e medicadas houve sobrevivência de 86,6% e a extinção da cepa RH em 46,15% dos cérebros. No modelo para testar a proteção com cepa RH contra oocistos de T. gondii de cepa heteróloga, não houve transmissão de toxoplasmose congênita em 100% das mães imunizadas com RH e desafiadas com Prugniaud e em 50% das mães imunizadas com RH e desafiadas com M3. O desafio heterólogo após imunização com a cepa RH, nesse experimento conferiu total proteção (100%) em hamsters duas vezes imunizadas com a cepa RH contra desafio com bradizoítos e oocistos com as cepas Prugniaud e M-7741, mas a proteção com oocistos de M3 foi parcial (67%). As conclusões foram o hamster é um modelo promissor para o estudo da toxoplasmose congênita, uma vez que a infecção crônica antes da prenhez, com oocistos da cepa ME49, protegeram as ninhadas e a infecção aguda durante a prenhez, com a cepa Prugniaud, resultou em transmissão transplacentária. Houve transmissão lactogênica mas não foi confirmada sua importância epidemiológica com a metodologia empregada. O hamster também se mostrou promissor para o estudo da proteção contra T. gondii tendo em vista que a infecção com cepa RH conferiu proteção total (contra Prugniaud e M7741) ou parcial (contra M3) das ninhadas contra cepas heterólogas. / Nowadays there are no vaccines against human toxoplasmosis, but it has been developed animal models in rats and mice for immunologic assay against toxoplasmosis. However, these models have showed certain limitations. It is advisable to count on assays done in several animal species before pledging with expensive final vaccination assays, since several animal species differently answered to the same immunogens. The general objective of this work was to investigate the applicability of a hamster model for the study of immunity against congenital toxoplasmosis. The specific objectives were: to verify the congenital transmission of Toxoplasma during the chronic phase of the infection; to verify the congenital transmission of Toxoplasma during the acute phase of infection; to verify the occurrence of lactogenic transmission in the experimental trial which was proposed, and to question the protection against congenital toxoplasmosis given by the sterile immunity and by the means of premonition. The fulfillment of the objectives will enable the use of immunizations (with viable gondii Toxoplasma) in future studies, as well as, the knowledge of the efficacy about the challenges done in hamsters. It will also allow us to know whether the simplest immunogen available is enough to give protection against congenital toxoplasmosis. Regarding the immunity assay in the chronic phase of toxoplasmosis we were able to prove that it does not occur because 10 female hamsters inoculated with oocysts of ME- 49 strain before being coupled had negative offspring for anti-T. gondii antibodies. In the model of acute infection, 100% of females inoculated with 102 oocysts of Prugniaud strain during their gestation were positive and there were 60% of transplacental transmission for their offspring and 40% of transmammary transmission for foster offspring. Also, 100% of females inoculated with 103 oocysts of the same strain during the gestation time were positive and in their offspring there was 100% of transplacental transmission, and in 40% of their foster offspring there was transmammary transmission. In a third experiment, in females which were medicated and inoculated with RH strain there was a survival of 86.6% and the extinction of RH strain in 46.15% of the brains. In the model to test the protection with RH strain against oocysts of Toxoplasma gondii of heterologic strain, there was no transmission of congenital toxoplasmosis in 100% of mothers immunized with RH and challenged with Prugniaud and in 50% of mothers immunized with RH and challenged with M3. In this experiment, the heterologous challenge after the immunization with RH strain gave total protection (100%) in hamsters which were twice immunized with RH strain against challenge with bradyzoites and oocysts with Prugniaud and M-7741 strains, however, the protection with M3 oocysts was partial (67%). The conclusions were that the hamster is a promising model for the study of congenital toxoplasmosis, since chronic infection before pregnancy, with oocysts of ME49 strain protected their offspring and the acute infection during pregnancy, with Prugniaud strain, resulted in transplacental transmission. There was lactogenic transmission but it was not confirmed its epidemiologic importance with the methodology applied. Hamsters have also showed to be promising for the study of protection against T. gondii having in mind the infection with RH strain gave total protection (against Prugniaud and M7741) or partial (against M3) of offspring against heterologous strains.

Protozoários do gênero Acanthamoeba estão entre os organismos de vida-livre mais abundantes sendo encontrados em uma ampla gama de ambientes naturais como água, solo, poeira, vegetais, hospitais, sistemas de ventilação e esgotos. Algumas espécies de Acanthamoeba são consideradas patógenos oportunistas e têm sido associadas a infecções cutâneas, queratite, encefalite granulomatosa amebiana (EGA) e a outras afecções em menor frequência. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a presença de Acanthamoeba em áreas comunitárias de unidades acadêmicas e hospitalares, assim como determinar o risco potencial dos isolados. Amostras foram coletadas em dois hospitais e duas universidades do Rio Grande do Sul, Brasil. As amebas foram isoladas e caracterizadas utilizando métodos morfológicos, fisiológicos e genéticos. Além disso, a variação e a especificidade de proteases extracelulares foram determinadas por análise de zimogramas. A detecção e isolamento de amebas em amostras clínicas e ambientais envolve a amostragem e cultura em meio ágar não nutriente. Apesar de eficiente, este sistema requer diversas passagens visando eliminar contaminantes e não é apropriado para o isolamento de amebas individuais de amostras biodiversas. Para solucionar este problema foi desenvolvido um método alternativo que envolve amostragem, enriquecimento, indução de encistamento e micromanipulação de cistos e cultura direta em placas de ágar não nutriente. Utilizando os métodos convencional e alternativo, 429 amostras de áreas comunitárias de hospitais e universidades foram avaliadas mostrando alta prevalência de Acanthamoeba tanto em ambientes secos (13,77%) como úmidos (19,29%). A maior parte dos isolados (77,4%) foram classificados dentro do grupo II, o qual inclui a maioria das espécies patogênicas. Os isolados apresentaram tolerância à temperatura e pH, assim como resistência a desinfetantes, características que devem contribuir para a sobrevivência e proliferação de Acanthamoeba em ambientes fechados, aumentado o risco de contaminação das pessoas. Como as proteases extracelulares são consideradas um dos mais importantes fatores de patogenicidade das amebas de vida-livre, dez isolados foram avaliados quanto à atividade, padrão e especificidade de proteases. Análise com azocaseina mostrou variação significativa na atividade proteolítica volumétrica e específica dos distintos isolados, independente do “status” patogênico e não patogênico das espécies. Zimogramas em géis copolimerizados com gelatina mostraram três padrões de bandas em isolados de A. castellanii, e perfis particulares para as outras espécies. Todas as proteases secretadas por A. castellanii, A. pearcei e A. healyi foram caracterizadas como serino proteases, enquanto apenas cisteino e metaloproteases foram identificadas em A. astronyxis. Algumas proteases extracelulares apresentaram importante atividade sobre gelatina, fibrinogênio e γ-globulina, e podem estar implicadas na patogenicidade de Acanthamoeba e na resposta do hospedeiro. / Protozoa of the genera Acanthamoeba are one of the most abundant free-living organisms. This microrganisms are found in a wide variety of natural habitats including water, soil, dust, vegetables, hospital units, ventilation areas and sewage. Some species of Acanthamoeba are considered opportunistic pathogens, and have been associated with cutaneous infections, keratitis, granulomatous amoebic encephalitis (GAE), among other less frequent diseases. The aim of this study was to evaluate the presence of Acanthamoeba in community areas of academic and hospital units, and to determine their potential risk. Samples were collected from two hospitals and two universities of Rio Grande do Sul, Brazil. Amoebas were isolated and characterized using morphological, physiological and genetic methods. Additionally, extracellular proteases variation and specificity was determined by zymogram analysis. The conventional detection and isolation of amoeba from clinical and environmental samples involves sampling and culture on non-nutrient Agar medium. Although efficient, this system requires several transfers in order to eliminate contaminants, and is not appropriate for the isolation of individual amoeba from samples with a biodiverse community. To solve this problem we developed an alternative method that involves sampling, enrichment, encystment induction, and direct cysts micromanipulation and culture on Agar plates. Using the conventional and alternative method, 429 samples from community areas of hospitals and universities were evaluated showing high prevalence of Acanthamoeba in both dry (13.77%) and humid (19.29%) environments. Most of this isolates (77.4%) were classified within group II, which includes the great majority of pathogenic species. Isolates exhibited temperature and pH tolerance, as well as resistance to disinfectants. These characteristics may contribute for the maintenance and proliferation of Acanthamoeba in the indoor environments, increasing the risk of people contamination. As extracellular proteases are considered one of the most important pathogenic factors of free-living amoeba, ten isolates were evaluated to determined proteases activity, patterns and specificity. Azocasein assays showed significant variation on the overall and specific protease activity in Acanthamoeba-conditioned media, independently of the pathogenic or nonpathogenic status of the species. The zymographic assays on gelatin co-polymerized gels showed three banding patterns for A. castellanii isolates, and specific profiles for other species. All the proteases secreted by A. castellanii, A. pearcei, and A. healyi were characterized as serine proteases, but only cisteine and metalloproteases were identified in A. astronyxis. Some extracellular proteases exhibited important activity on gelatin, fibrinogen and γ-globulin, and may be implicated in Acanthamoeba pathogenicity and host response.

O gênero Brachyteles, endêmico do Brasil, é constituído por duas espécies, B. arachnoides e B. hypoxantus, e estudos recentes demonstraram que suas populações selvagens podem estar seriamente reduzidas. Na tentativa de reverter a situação atual, esforços têm sito realizados visando a conservação dos muriquis, no entanto, dados relativos à condição sanitária de Brachyteles são extremamente escassos. Sabe-se, que o estabelecimento de protocolos adequados de manejo é condição necessária para a manutenção das espécies em cativeiro, sobretudo as ameaçadas e/ou criticamente ameaçadas, como é o caso dos atelídeos em questão. Desse modo, o presente trabalho de pesquisa almejou investigar as principais alterações anátomo-patológicas e correspondentes causas de morte de 18 (10M:8F) espécimens de B. arachnoides, B .hypoxantus e híbridos mantidos em cativeiro junto ao Centro de Primatologia do Rio de Janeiro (CPRJ). Os animais foram necropsiados entre os anos de 1988 e 2010 sendo utilizados fragmentos de órgãos e tecidos colhidos e fixados em solução de formalina a 10%, sendo 9 exemplares de B. arachnoides, 3 B hypoxantus e 4 híbridos, totalizando 16 indivíduos pertencentes ao acervo do CPRJ/FEEMA, e 2 B. arachnoides pertencentes ao Parque Municipal Quinzinho de Barros (FZQB). Destes, 2 (11,1 %) eram neonatos, 2 (11,1%) jovens, 13 (72,2%) adultos e 1 (5,6%) idosos. O peso dos B. arachnoides, B. hypoxantus e B. híbridos adultos, jovens e neonatos variou de 0,5 Kg até 14 Kg. O peso médio dos adultos foi 5,6 Kg. O peso médio dos adultos foi de 2,8 Kg para os caquéticos, 5,9 Kg para os magros, 8,25 Kg para os bem nutridos. Dados de histórico clínico, reprodutivo, comportamentais e análises clínicas foram avaliados visando auxílio na obtenção da causa de morte (CM). A diarréia foi a alteração clínica mais consistente observada no grupo pesquisado sendo que cinco mortes (27,8%) foram causadas por quadros de sepses, quatro por infecção viral (22,2%), três (17%) por pneumonias, dois (11%) por parasitismo. Distúrbio metabólico, peritonite e eutanásia decorrente de retrovirose foram responsáveis por 1 óbito cada (5,5%). Não foi possível determinar a CM de um (5,5%) neonato em avançado estado de putrefação. Destes 18 casos de óbito, três (17%) foram decorrentes das conseqüências da infecção por um agente viral da família Retroviridae. A análise histomorfométrica mostrou que a taxa de hemossiderose hepática (THH) variou entre 0.2% e 41.7%, não havendo diferenças significantes entre as THHs quando comparados os parâmetros sexo, idade, tempo de cativeiro, espécies e peso. A análise estatística revelou correlação entre as áreas de hemossideorse e reticulina pelo teste de Sperman com (P=0,0326, r= -0,5048) No entanto, não observou-se correlação ao avaliar a morfometria da reticulina e as graduações histopatológicas de necrose (P=0,1009, Sperman, r= 0,3991). O mesmo padrão foi observado ao avaliar a correlação entre as áreas de reticulina e os casos sépticos e não sépticos com (P= 0,6126, Mann-Whitney test). Os agentes etiológicos diagnosticados através de imuno-histoquímica, análise ultra-estrutural e/ou molecular foram: Herpes simplex, Vírus respiratório sincicial (RSV), vírus compatíveis com a família Retroviridae, Toxoplasma gondii, Entamoeba spp., Strongyloides spp., Candida spp. e Helicobacter pylori. O potencial zoonótico dos agentes infecciosos identificados reflete a importância da implantação de medidas preventivas rigorosas com o objetivo de preservar a saúde da comunidade humana e dos muriquis. Uma monitoração sanitária através de exame clínico e colheita de material biológico também foram realizadas em 10 espécimes cativos de muriquis. Pretende-se, de forma pioneira representar a sistematização de processos patológicos envolvendo espécimes do gênero Brachyteles cativos, contribuindo para a manutenção destes espécimens em cativeiro, assim como indiretamente na conservação destes em vida livre, sugerindo protocolos sanitários preventivos e favorecendo a reprodução e manutenção das populações. / The Brachyteles genus is endemic in Brazil, comprises two species, B. arachnoides and B. hypoxantus, and recent studies have shown that their wild populations can be seriously reduced. In an attempt to reverse the current scenario, efforts have been made to promote the conservation of muriquis, however, data on the sanitary condition of Brachyteles are extremely scarce. It is known that the establishment of appropriate management protocols is a prerequisite for the maintenance of the captive species, especially threatened and / or critically endangered, as is the case in question, atelids. Thus, the present research aimed to investigate the main anatomic-pathological and related causes of death in 18 (10M:8F) specimens of B. arachnoides, B. hypoxantus and hybrids in captivity at the Centro de Primatologia do Rio de Janeiro (CPRJ). The animals were autopsied between 1988 and 2010, being used fragments of organs and tissues removed and stained in formalin solution 10%, and 9 individuals of B. arachnoides, 3 B. hypoxantus and 4 hybrids, a total of 16 individuals belonging to the collection of CPRJ / FEEMA, and 2 B. arachnoides belonging to the Parque Municipal Quinzinho de Barros (FZQB). Of these, 2 (11.1%) were neonates, 2 (11.1%) youth, 13 (72.2%) adults and 1 (5.6%) elderly. The weight of adults, newborns and young B. arachnoides, B. hypoxantus and B. hybrid ranged from 0.5 kg to 14 kg average weight of adults was 5.6 kg average weight of adults was 2.8 kg for cachectic 5.9 kg for lean, 8.25 kg for well-nourished. Data from clinical history, reproductive, behavioral and medical tests were assessed for assistance in obtaining the cause of death (CD). Diarrhoea was the most consistent disease observed in this group and five deaths (27.8%) were caused by sepsis boards, four viral infection (22.2%), three (17%) for pneumonia, two ( 11%) of parasitism. Metabolic disorder, euthanasia and peritonitis resulting from a retrovirus were responsible for one each death (5.5%). We were unable to determine the CD of one (5.5%) neonate in an advanced state of putrefaction. Of these 18 deaths, three (17%) resulted from the consequences of infection by a viral agent of the family Retroviridae. Histomorphometric analysis showed that the hepatic hemosiderosis rate (HHR) ranged between 0.2% and 41.7%, with no significant differences between the HHR compared the parameters sex, age, time in captivity, species and weight. Statistical analysis revealed a correlation between areas of reticulin hemossideorse and with the Spearman test (P = 0.0326, r = -0.5048). However, no correlation was seen when evaluating the morphometry of reticulin and histopathological grades of necrosis (P = 0.1009, Spearman r = 0.3991). The same pattern was observed to evaluate the correlation between areas of reticulin and cases with septic and non septic (P = 0.6126, Mann-Whitney test). The etiologic agents diagnosed by immunohistochemistry, ultrastructural analysis and molecular were: Herpes simplex, Respiratory Syncytial Virus (RSV), consistent with the virus family Retroviridae, Toxoplasma gondii, Entamoeba spp., Strongyloides spp., Candida spp. and Helicobacter pylori. The zoonotic potential of the infectious agents identified reflects the importance of strict implementation of preventive measures in order to preserve the health of human communities in contact with the muriquis. A health monitoring by clinical examination and collection of biological material were also performed in 10 specimens of captive muriquis. We aim, in a pioneering way, represent the systemization of processes involving pathological specimens of the genus Brachyteles captives, contributing to the maintenance of these specimens in captivity, as well as indirectly on the conservation of these in the wild, suggesting preventive health protocols and encouraging the breeding and maintenance of populations

Casos de malária importada, contraídos em região endêmica, mas diagnosticados em um país não-endêmico, são um evento raro mas com desfecho potencialmente fatal. Nosso objetivo foi investigar se a análise de genomas mitocondriais permite inferir a origem geográfica de casos importados de malária vivax diagnosticados nos EUA, comparando os resultados com aqueles obtidos por análise de DNA microssatélite. Foi sequenciado o genoma mitocondrial completo de 63 amostras de P. vivax provenientes de infecções importadas dos EUA, além de 7 amostras do Brasil e 6 do Panamá. A rede de haplótipos com DNA mitocondrial foi construída com 412 sequências e foi possível classificar com precisão a origem geográfica presumida dos isolados da América do Sul, Coréia, Sudeste Asiático e Melanésia, porém os isolados do Sul da Ásia, América Central e África não puderam ser classificados geograficamente. A análise bayesiana realizada com a tipagem de marcadores de microssatélites não apresentou sucesso quanto à classificação geográfica dos isolados de P. vivax. / Cases of imported malaria, infection acquired in an endemic region, but diagnosed in a non-endemic country, are rare but can lead to a fatal outcome. Our objectives were investigate whether the analysis of mitochondrial genomes allows inferring the geographic origin of isolates of P. vivax derived from cases of imported malaria diagnosed in the USA, and compare the performance of mitochondrial genome and DNA microsatellite analysis. We sequenced full mitochondrial genomes from 63 P. vivax isolates collected at the USA from imported infections, and 7 samples from Brazil and 6 Panama. A network of mitochondrial DNA haplotypes was built with 412 genomic sequences and were able to classify accurately isolates from South America, Korea, Southeast Asia and Melanesia according to their presumed geographic origin, but failed to do so with samples from South Asia, Central America and Africa. The Bayesian analysis performed by typing microsatellite markers showed no success on the classification of geographical isolates of P. vivax.

A proteína de ligação em Duffy (PvDBP) dos merozoítos de P. vivax se liga a glicoproteínas de membrana, chamadas de grupo sanguíneo Duffy, conhecidas como DARC. Indivíduos DARC negativos são normalmente resistentes a infecção estágio sanguínea por P. vivax; portanto, PvDBP é um forte antígeno canditato a vacina. Aqui, investigamos respostas de anticorpos contra três proteínas derivadas de PvDBP e MSP119, em 343 indivíduos de uma região Amazônica brasileira. Anticorpos contra Sal III-His, OII-His, Sal III-IV-GST e MSP119-GST foram encontrados em 43,7%, 39,0%, 14,3% e 38,8% dos indivíduos. Os indivíduos FY*BESFY*BES foram os que menos apresentaram anticorpos contra PvDBP, porém encontramos proporções similares de respondedores entre indivíduos com outros genótipos. A análise de sequências revelou muitas variantes da região II de PvDBP em 41 isolados. A mais comum (encontrada em 28,8% dos isolados), difere de Sal I e PNG- O em seis codóns de aminoácidos. Nenhuma variante tipo Sal I, cujo protótipo de vacina está em teste clínico, foi encontrada nos parasitas locais. / The Duffy binding protein (PvDBP) of the P. vivax merozoites, which binds to a erythrocyte membrane glycoprotein known as Duffy blood group antigen for chemokines (DARC). DARC-negative individuals are usually resistant to blood-stage infection with P. vivax; therefore, PvDBP is a major vaccine candidate antigen. Here, we investigated antibody responses to three proteins derived from PvDBP and MSP119, in 343 subjects in the Amazon of Brazil. Antibodies to Sal III-His, OII-His, Sal III-IV-GST and MSP119-GST were found in 43,7 %, 39,0%, 14,3% and 38,8% of the subjects. FY*BESFY*BES individuals were less likely to have antibodies to PvDBP, but we found similar proportions of seropositive subjects with other genotypes. Sequence analysis revealed several region II PvDBP variants in 41 local P. vivax isolates. The most common of them (found in 28,8% isolates) differs from Sal I and PNG-O alleles in six amino acid codons. No Sal I-type variant, from which a PvDBP-based vaccine prototype currently under clinical testing has been derived, was found in local parasites.

Este trabalho teve como objetivo caracterizar e padronizar métodos para a tipagem molecular de marcadores genéticos, para futuro uso em estudos de genética populacional de Plasmodium vivax na Amazônia brasileira. As amostras sanguíneas utilizadas neste estudo foram colhidas no Brasil, Camboja, Sri Lanka e Estados Unidos. Foram selecionados polimorfismos de única base (SNPs) distribuídos ao longo de cromossomos distintos de P. vivax; para estes polimorfismos, sete ensaios de tipagem de SNPs foram padronizados com sucesso. Com a tipagem molecular, foi possível definir haplótipos que caracterizam cada amostra, assim como identificar infecções geneticamente mistas (co-ocorrência de clones distintos na mesma amostra). No entanto, com este conjunto de marcadores não foi possível agrupar amostras de acordo com sua localização geográfica, por estes marcadores não serem suficientemente informativos do ponto de vista genético. Os sete SNPs avaliados, quando comparados a 13 marcadores de DNA microssatélite, revelaram menor proporção de infecções geneticamente mistas e menor diversidade genética. / This study aimed to characterize and standardize methods for molecular typing of genetic markers to be used in the future in studies of population genetics of Plasmodium vivax population in the Brazilian Amazon. Blood samples used in this study were collected in Brazil, Cambodia, Sri Lanka and United States. Single nucleotide polymorphisms (SNPs), distributed over different P. vivax chromosomes were chosen and seven typing assays were sucessfully standardized. Molecular typing of polymorphisms allowed to define haplotypes that characterize each sample, as well as to identify genetically mixed infections (co-occurrence of different clones in the same sample). However, with this markers set, it was not possible to group samples according to their geographical location, because probably they are not sufficiently genetically informative. Compared to 13 microsatellite markers, these seven SNPs revealed a lower proportion of mixed-clone infections and lower genetic diversity.

No presente estudo, avaliamos a resposta de anticorpos, por ELISA, contra um recombinante bacteriano baseado no domínio 11 da Proteína Ligação ao Duffy (DBP-RII) em indivíduos naturalmente expostos Plasmodium vivax. Amostras de soro de 160 pacientes com malária vivax, procedentes de duas áreas endêmicas do Estado do Pará (Belém e São Jorge), foram utilizadas neste estudo. Estes soros foram também testados contra outras duas proteínas recombinantes derivadas de merozoítas de P. vívax, para efeito de comparação da resposta de anticorpos: AMA-1 (Antígeno 1 Membrana Apical) e MSP119 (região C-terminal de 19 kDa da Proteína 1 Superfície do Merozoíta). A freqüência de indivíduos que apresentaram anticorpos IgG específicos contra as proteínas recombinantes DBP-RII, AMA-1 e MSP119 foi de 15,6% 50% e 93,1%, respectivamente. Observamos que a proporção de indivíduos que apresentaram anticorpos contra DBP-RII e AMA-1 aumentou de acordo com o maior número de exposições prévias ao P. vivax, enquanto que resposta de anticorpos contra a MSP119 desenvolveu-se rapidamente após uma única exposição ao parasita. A persistência da resposta de anticorpos contra DBP-RII, AMA-1 MSP119 foi avaliada em amostras de soro coletadas durante a infecção patente e dois ou nove meses após o tratamento. Observamos que, durante este período, não houve uma diminuição significativa das freqüências respondedores contra DBP-RII e AMA-1. Por outro lado, a freqüência respondedores contra a MSP119, diminuiu significativamente nove meses após o tratamento. Não observamos diferença significativa entre os títulos anticorpos obtidos contra DBP-RII e AMA-1, durante a infecção e dois ou nove meses após o tratamento, indicando que a resposta de anticorpos se manteve. Por outro lado, os títulos de anticorpos para MSP119 foram significativamente maiores durante a infecção patente do que nove meses após o tratamento. / In the present study, we evaluated by ELISA the antibody immune response to a recombinant protein based on the domain II of the Duffy Binding Protein (DBP-RII) in individuals naturally exposed to Plasmodium vivax. Serum samples from 160 patients with vivax malaria were collected in two endemic areas of State of Pará (Belém and São Jorge). For purposes of comparison, ELISA were also performed using two other recombinant proteins representing antigens derived from P. vivax merozoites: AMA-1 (Apical Membrane Antigen-1) and MSP119 (19kDa C-terminal region of Merozoite Surface Protein-1). The frequency of individuals who presented IgG antibodies specific to the recombinant proteins DBP-RII, AMA-1 or MSP119 were 15.6%, 50% or 93.1 respectively. We observed that the proportions of individuals who presented antibodies against DBP-RII or AMA-1 increased according to the number malaria episodes, while the antibodies response to MSP1 19 developed quickly after a single contact with the parasite. The persistence of antibodies response to DBP-RII, AMA-1 or MSP119 was compared in serum samples during patent infection or two and nine months following treatment. We observed that during this period the frequency responders to DBP-RII and AMA-1 remained similar. In contrast, the frequency of responders to MSP119 dropped significantly nine months after treatment. No difference was observed when we compared the antibody titers obtained DBP-RII or AMA-1 during the infection or after treatment. These results established that the antibodies response to DBP-RII or AMA-1 remained similar two or nine months after treatment. In contrast, the antibody titers to MSP119 were significantly lower nine months after treatment when compared to patent infection.

A demodicidose é uma das principais dermatopatias parasitárias dos cães, contudo muitos aspectos da doença ainda são pouco compreendidos. A doença no cão adulto é menos frequente do que a forma juvenil e parece ocorrer devido à presença de condição imunodepressora/imunossupressora que leve à perda da capacidade de controle, pelo sistema imune, da população de ácaros Demodex spp. na pele do animal. O objetivo deste trabalho foi avaliar se hiperadrenocorticismo (HAC) espontâneo, neoplasia e quimioterapia, classicamente aceitos como “gatilhos” para esta doença parasitária, seriam fatores de risco para o aumento na presença de ácaros Demodex spp. na pele de cães adultos. Foram selecionados cães sem histórico de demodicidose juvenil e estes, distribuídos em cinco grupos. O grupo um (G1) foi formado por 33 cães clinicamente saudáveis; o grupo dois (G2), por 27 cães com afecções crônicas; o grupo três (G3), por 14 cães diagnosticados com HAC espontâneo; o grupo quatro (G4), por 30 cães com neoplasia e o grupo cinco (G5), por 27 cães submetidos a protocolos quimioterápicos antineoplásicos. O exame parasitológico de pele (EPP) foi realizado, pontualmente, por meio de tricograma, impressão por fita adesiva e raspado cutâneo profundo em cinco pontos anatômicos pré-determinados. Regiões com lesões cutâneas também foram coletadas e hemogramas, realizados no intervalo de um mês prévio ou posterior à inclusão no estudo, foram avaliados. Em 16 cães foi possível demonstrar a presença de ácaros Demodex spp. Seis cães apresentaram lesões de pele e em apenas dois foi observada a presença do parasita, sendo que não houve diferença significativa na presença do ácaro entre cães com e sem alterações no hemograma. Os grupos de risco G3, G4 e G5 apresentaram maior frequência de EPP positivo, porém diferença estatisticamente significativa foi mostrada apenas entre os cães com HAC espontâneo e os com afecções crônicas, com odds ratio de 10,4. Concluiu-se que HAC espontâneo, neoplasia e quimioterapia parecem influenciar no aumento da população dos ácaros Demodex spp. na pele de cães adultos. Além disso, não há relação entre a presença de leucopenia, neutropenia e/ou linfopenia e o aumento na presença dos ácaros na pele desses animais. Por fim, as lesões cutâneas em cães com HAC espontâneo, neoplasia ou em quimioterapia são pouco frequentes e apresentam causas distintas, não sendo a proliferação excessiva de ácaros Demodex spp. a principal etiologia identificada. / Demodicosis is one of the most common parasitic skin diseases of dogs, but many aspects of canine demodicosis are still poorly understood. Adult onset demodicosis is less frequent and seems to occur due to the presence of an immunosuppressive condition leading to immune system loss of ability to control the Demodex mite population in the skin. The aim of this study was to evaluate if spontaneous hyperadrenocorticism (HAC), cancer and chemotherapy, classically accepted as "triggers" for this parasitic disease, would be risk factors for the increased presence of Demodex mites in the skin of adult dogs. Dogs without a history of juvenile demodicosis were selected and then divided into five groups. Group 1 (G1) was formed by 33 clinically healthy dogs; group two (G2), by 27 dogs with chronic conditions; group three (G3), by 14 dogs diagnosed with spontaneous HAC; group four (G4), by 30 dogs with cancer and group five (G5), by 27 dogs submitted to antineoplastic chemotherapy protocols. Trichogram, acetate tape impression and deep skin scrapes were performed, just once, in five predetermined anatomical points. Skin lesions are also evaluated by these techniques and complete blood count, performed within one month prior or after the inclusion in the study, were evaluated. In 16 dogs it was possible to demonstrate the presence of Demodex mites. Six dogs had skin lesions and only in two of them it was possible to observe the presence of the parasite; there was no significant difference in the presence of the parasite between dogs with and without changes in complete blood count. Risk groups G3, G4 and G5 had a higher frequency of positive samples, but significant difference was shown only between dogs with spontaneous HAC and those with chronic diseases (odds ratio 10.4). It was concluded that spontaneous HAC, cancer and chemotherapy seem to influence the increase of the parasite population in the skin. Furthermore, there is no relationship between the presence of leukopenia, neutropenia and/or lymphopenia and the increased presence of mites in the skin of adult dogs. Finally, skin lesions in dogs with spontaneous HAC, cancer or chemotherapy are uncommon and present different causes, not being excessive proliferation of Demodex mites the main identified etiology.

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