Dissertação (mestrado —Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-05-22T13:20:12Z No. of bitstreams: 1 2012_FabianoJoseQueirozCosta.pdf: 1711681 bytes, checksum: 0d9c0dec152fb69bb8583c87ffdf65ac (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-24T12:01:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_FabianoJoseQueirozCosta.pdf: 1711681 bytes, checksum: 0d9c0dec152fb69bb8583c87ffdf65ac (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-24T12:01:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_FabianoJoseQueirozCosta.pdf: 1711681 bytes, checksum: 0d9c0dec152fb69bb8583c87ffdf65ac (MD5) / Desde os primórdios da terapêutica antimicrobiana têm-se relatos de microrganismos resistentes às drogas antimicrobianas clássicas. Com o seu uso indiscriminado, cada vez mais vêm surgindo microrganismos resistentes aos antimicrobianos disponíveis. Por mais dinâmicas que sejam as indústrias farmacêuticas na busca por novas drogas, elas não conseguem acompanhar o espantoso fenômeno da multirresistência apresentada por muitos microrganismos. Esta constante mudança nos perfis de sensibilidade dos microrganismos conduz a uma incessante busca por novas drogas antimicrobianas, onde os peptídeos antimicrobianos se destacam como agentes promissores. As secreções cutâneas dos anfíbios são uma riquíssima fonte de peptídeos antimicrobianos. O presente estudo avaliou a atividade biológica de dois análogos sintéticos da Hylina a1, um peptídeo antimicrobiano isolado da espécie de anuro Hypsiboas albopunctatus. Os dois análogos, denominados Ha1_1996 e Ha1_1883, foram produzidos por síntese química manual pela técnica Fmoc, purificados por meio de cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (HPLC-RP) e sua homogeneidade, bem com, a correção dos produtos produzidos avaliadas por espectrometria de massas tipo MALDI-TOF. Após confirmação da pureza, os análogos foram utilizados em ensaios in vitro com o objetivo de se avaliar suas atividades antibacterianas, fungicidas, micobactericidas e hemolíticas. Os dois análogos apresentaram atividade antimicrobiana contra cepas de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, inclusive frente à cepas de Staphylococcus aureus meticilina-resistente (MRSA) e Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC). Também apresentaram atividade fungicida contra três espécies de Candida, além de atividade micobactericida contra duas cepas de Mycobacterium tuberculosis. Apesar da pronunciada atividade hemolítica frente a eritrócitos humanos (tipo O+) e ao efeito citolítico observado sobre leucócitos humanos, deve ser levado em conta que refinamentos na estrutura desses peptídeos podem levar ao surgimento de análogos com propridedades antimicrobianas melhoradas ou mantidas e perda ou redução da atividade hemolítica. Espera-se com isto que os peptídeos antimicrobianos se constituam em novas armas de um arsenal medicamentoso capaz de combater microrganismos multirresistentes. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Since the beginning of antimicrobial therapy reports of microorganisms resistant to conventional antimicrobial drugs have been described. Due to its indiscriminate use, more resistant microorganisms to the available antimicrobials are emerging. For more dynamic than the pharmaceutical companies are in search for new drugs, they can not keep up the amazing phenomenon of multidrug resistance shown by many microorganisms. This constant change in the sensitivity profiles of microorganisms leads to an endless search for new antimicrobial drugs, where antimicrobial peptides stand out as promising agents. The amphibians’ skin secretions are a rich source of antimicrobial peptides. The present study characterized biologically two synthetic analogues of Hylin a1, an antimicrobial peptide isolated from the anuran species Hypsiboas albopunctatus. Both analogs, named Ha1_1996 and Ha1_1883, were produced by manual chemical synthesis by Fmoc technique, purified by reversed-phase high-performance liquid chromatography (HPLC-RP) and purity assessment, as well as, the quality of the synthetic peptides produced were evaluated by MALDI-TOF mass spectrometry. After confirmation of their purity, these two analogs were tested on in vitro assays to evaluate their antibacterial, fungicidal, hemolytic and mycobactericidal activities. Both analogues showed antimicrobial activity against Gram-positive and Gram-negative bacterial strains, including methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC). They also showed antifungal activity against three species of Candida, and mycobactericidal activity against two strains of Mycobacterium tuberculosis. Despite pronounced hemolytic activity against human erythrocytes (type O+ ) and cytolytic effects on human leukocytes, additional refinements in their structures can lead to the development of analogues with antimicrobial properties improved or maintained and loss or reduction of hemolytic activity. It is thus expected that antimicrobial peptides become a new weapons arsenal able to combat the multiresistant microorganisms.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, Programa de Pós-Graduação em Fitopatologia, 2014. / Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva (annabds@hotmail.com) on 2014-10-23T16:08:50Z No. of bitstreams: 1 2014_EdivânioRodriguesdeAraújo (2).pdf: 3003726 bytes, checksum: 23430b119aff14a628af0d6d8cbfc70c (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-11-12T12:15:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_EdivânioRodriguesdeAraújo (2).pdf: 3003726 bytes, checksum: 23430b119aff14a628af0d6d8cbfc70c (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-12T12:15:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_EdivânioRodriguesdeAraújo (2).pdf: 3003726 bytes, checksum: 23430b119aff14a628af0d6d8cbfc70c (MD5) / A mancha-bacteriana está entre os fatores que prejudicam a produção de tomate no Brasil. A doença é causada por um complexo de espécies do gênero Xanthomonas: X. euvesicatoria, X. vesicatoria, X. perforans e X. gardneri. Os objetivos dessa tese são: i) realizar um levantamento da frequência de ocorrência de espécies e raças causadoras da doença em lavouras brasileiras de tomate, tanto destinadas ao consumo in natura quanto ao processamento industrial; ii) estabelecer protocolos de detecção e identificação simultânea das espécies causadoras da doença; iii) compreender o efeito da temperatura e molhamento foliar no monociclo da doença; iv) identificar possíveis agentes causadores da mancha-bacteriana e a comunidade bacteriana presente em mudas assintomáticas cultivadas em viveiro comercial e sementes comerciais de tomateiro. Para alcance desses objetivos, testes de patogenicidade, técnicas moleculares baseadas na PCR (BOX-PCR, iniciadores específicos), além de sequenciamento do gene de avirulência avrXv3 foram utilizados. O efeito da temperatura (15; 20; 25; 30 e 35°C) e molhamento foliar (0; 6; 12; 24 e 48 horas) na severidade da doença foi avaliado para as duas espécies de maior ocorrência: X. perforans e X. gardneri. Da mesma forma, foi verificado o efeito in vitro da temperatura na taxa de multiplicação em meio de cultura dessas espécies. Por fim, por meio de coletas de água superficial no filoplano de mudas assintomáticas e maceração de sementes, buscou-se identificar possíveis agentes patogênicos, tentando identificá-los por isolamento direto, uso de iniciadores específicos e sequenciamento do rRNA de 16S. Com base nos resultados obtidos, verificou-se que X. perforans é a espécie predominante (≈ 92% dos isolados) nos campos brasileiros de produção de tomate, em ambos os segmentos produtivos: consumo in natura e processamento industrial. Entre os isolados de X. perforans, a raça T3 predomina, representando 97,3% desses isolados. Cinco isolado foram identificados como raça T4. Esses isolados apresentaram uma inserção de 858 pb no gene avrXv3, relacionada à família de proteínas YscJ/HrcJ. Por meio dos protocolos estabelecidos foi possível identificar as quatro espécies causadoras da doença com iniciadores específicos tanto utilizando PCR convencional como PCR multiplex. As espécies X. perforans e X. gardneri apresentaram comportamento distinto com relação ao ótimo de temperatura para seu desenvolvimento. Enquanto X. perforans incitou maior porcentagem de área foliar lesionada quando exposta a temperaturas acima de v 25°C, com agressividade crescente até o limite superior testado (35°C), observou-se para X. gardneri uma redução da agressividade nos limites inferior (15°C) e superior de temperatura. Essas espécies só incitaram doença quando o período de molhamento foliar foi igual ou maior que 12 horas. Do mesmo modo, a temperatura teve efeito direto na taxa de crescimento in vitro de X. perforans. Por fim, foi possível identificar um isolado de X. euvesicatoria associado a mudas assintomáticas de tomateiro, além dos gêneros Agrobacterium, Enterobacter, Microbacterium, Sphingobium e Sphingomonas. Com isso, estratégias de manejo da doença devem focalizar X. perforans, já que é a espécie predominante. No mesmo sentido, estratégias de controle denominadas evasivas devem ser adotadas, uma vez que a doença apresenta faixas limítrofes para as variáveis temperatura e molhamento foliar. Este é o primeiro registro da ocorrência da raça T4 no país. Os isolados bacterianos dos demais gêneros encontrados em sementes e mudas devem ser avaliados quanto ao seu potencial como agentes de controle biológico. Levantamentos sistemáticos das espécies/raças causadoras da doença devem ser continuados para o auxílio nas tomadas de decisão. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bacterial spot is among the limiting factors in tomato production in Brazil. The disease is caused by a species complex of the genus Xanthomonas: X. euvesicatoria, X. vesicatoria, X. perforans and X. gardneri. The aims of this thesis were: i) to perform a survey the frequency of occurrence of species and races causing bacterial spot on Brazilian tomato crops; ii) to establish protocols for simultaneous detection and identification of the species causing disease; iii) to understand the effect of temperature and leaf wetness on the monocycle of tomato bacterial spot; iv) to identify possible causal agents of tomato bacterial spot and bacterial community present in asymptomatic seedlings and seeds. For achieving these objectives, pathogenicity tests, molecular techniques based on PCR (BOX-PCR, specific primers) and sequencing of avirulence gene avrXv3 were used. The effect of temperature (15, 20, 25, 30, and 35°C) and leaf wetness (0, 6, 12, 24, and 48 hours) on disease severity was assessed. Likewise, the in vitro effect of temperature on the population growth rate of X. perforans and X. gardneri was checked. Finally, by collecting surface water on the phylloplane of asymptomatic seedlings and soaking commercial seeds, the presence of potential pathogens were surveyed. Direct isolation, using PCR with specific primers and sequencing of 16S rRNA were the tempted methods applied. Based on the results, we found that X. perforans is the predominant species (≈ 92% of isolates) in Brazilian tomato fields, in both production segments: fresh market and processing. Among strains of X. perforans, the T3 race was predominant, representing 97.3% of these isolates. Five isolates were identified as T4 race. These isolates had an insertion of 858 bp in avrXv3 gene related to a protein YscJ/HrcJ family. The protocols enabled the identification of the four species causing the disease with specific primers using both conventional PCR and multiplex PCR. The species X. perforans and X. gardneri showed different behaviors with respect to the optimum temperature for development. Xanthomonas perforans caused more disease at temperatures above 25°C, with increasing aggressiveness up to the upper limit tested (35°C). On the other hand, X. gardneri decreased the disease severity from the optimal temperature for both lower and upper limit of temperature. Both species only incited disease vii when leaf wetness periods were longer than six hours. In the same way, the temperature had a direct effect on the in vitro growth rate of X. perforans. Finally, it was possible to identify an isolate of X. euvesicatoria associated with asymptomatic tomato seedlings in a commercial nursery production, besides the genus Agrobacterium, Enterobacter, Microbacterium, Sphingomonas and Sphingobium. Thus, disease management strategies should focus on the species X. perforans, since it is the predominant species. Similarly, control strategies based on evasion should be applied, since the disease has a borderline range for the temperature and leaf wetness. This is the first report of occurrence of race T4 in Brazil. Bacterial isolates from other genus found in seeds and seedlings should be evaluated to assess their biological control potential. Systematic surveys of species/races causing the disease should be continued to aid in the control decision taking.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2006. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2009-11-03T16:26:00Z No. of bitstreams: 1 Lorena_Carneiro_Albernaz-dissertacao.pdf: 1323419 bytes, checksum: f41305e7314f4b9bb4b3cfed53ce9f95 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-07-13T16:39:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Lorena_Carneiro_Albernaz-dissertacao.pdf: 1323419 bytes, checksum: f41305e7314f4b9bb4b3cfed53ce9f95 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-07-13T16:39:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lorena_Carneiro_Albernaz-dissertacao.pdf: 1323419 bytes, checksum: f41305e7314f4b9bb4b3cfed53ce9f95 (MD5) Previous issue date: 2006 / As infecções bacterianas matam milhões de pessoas por ano. Estudos têm demonstrado o aumento da resistência aos antibióticos disponíveis e o perigo do surgimento de novas doenças infecciosas, que possivelmente não poderão ser combatidas pelos fármacos atuais. O controle é dificultado pela falta de sincronia entre o desenvolvimento de novos antimicrobianos e a velocidade em que a resistência é espalhada pelo mundo. O interesse em investigar moléculas eficazes inclui o potencial biológico de compostos extraídos de espécies vegetais. Diante disso, foi realizada uma triagem do Banco de Extratos de Plantas do Bioma Cerrado do Laboratório de Farmacognosia da Universidade de Brasília sobre bactérias patogênicas a seres humanos, responsáveis por infecções hospitalares e comunitárias. Duzentos e quarenta e dois extratos brutos hexânicos e etanólicos obtidos a partir de 37 espécies pertencentes a 15 famílias de plantas foram testados in vitro sobre três espécies de bactérias Gram negativas: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella choleraesuis e duas espécies Gram positivas: Enterococcus faecalis e Staphylococcus aureus e sobre um fungo: Candida albicans. Para avaliação da atividade dos extratos foi realizado os testes de difusão em ágar, a uma concentração de 1000 μg/mL, sendo os resultados expressos pelo diâmetro da zona de inibição do crescimento microbiano (halo de inibição). O extrato hexânico da madeira do caule de Tabebuia caraiba foi selecionado para estudo, devido a importante atividade sobre E. faecalis (halo de inibição de 20 mm; concentração inibitória mínina/CIM: 31,25 μg/mL) e S. aureus (halo de inibição de 22 mm; CIM: 500 μg/mL). A partição bifásica desse extrato permitiu selecionar a fração metanólica, que foi submetida ao fracionamento químico biomonitorado em coluna cromatográfica aberta de sílica, resultando na obtenção de 24 grupos (G). O monitoramento da atividade dos grupos foi realizado por meio da técnica de autobiografia. Os mais ativos foram G2 e G11. O G2 permitiu a obtenção do sub-grupo SG2-3-4, com amplo espectro de ação sobre outras bactérias Gramnegativas: Salmonella typhimurium, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes, Serratia marcescens, Proteus mirabilis, Citrobacter koseri e Gram positivas: Staphylococcus epidermidis. O sub-grupo SG2-3-4 apresenta unidades arílicas, cujos espectros permitem cogitar a possibilidade estrutural da unidade capaz de ligá-las, sugerindo ser uma arilcumarina ou uma benzofuranona. SG2-3-4 encontra-se em processo de purificação para decisão da estrutura molecular. _________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Bacterial infections cause the death of millions of people each year. Studies have shown increased resistance to available antibiotics and the danger of new infectious diseases, which probably cannot be combated with the available drugs. Control is aggravated by the lack of synchronicity between the development of new drugs and the spreading of resistance throughout the world. The search for effective molecules includes the biological potential of vegetable compounds. In this regard, a screening was conducted of the Cerrado Biome Plant Extract Bank of the University of Brasília Farmacognosy Laboratory for human pathogenic bacteria causing nosocomial and community- acquired infections. Two hundred and forty-two crude hexanic and ethanolic extracts, obtained from thirty-seven species belonging to fifteen plant families, were tested in vitro against three Gram negative (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Salmonella choleraesuis) and two Gram positive microorganisms, (Enterococcus faecalis and Staphylococcus aureus) and against a fungus (Candida albicans). The agar-diffusion method was used to evaluate the activity of the extracts, at a concentration of 1000 μg/mL. The results were expressed according to the diameter of the bacterial growth inhibition zone. The hexanic stem bark extract of Tabebuia caraiba was selected for this study due to its significant activity against E. faecalis (inhibition zone: 20 mm; minimum inhibitory concentration/MIC: 31.25 μg/mL), and S. aureus (inhibition zone: 22 mm; MIC: 500 μg/mL). The bioassay-guided fractioning of this extract allowed the selection of the methanolic fraction, which was submitted to a biphasic partition on a silica gel column leading to the creation of 24 groups. An autobiography assay was used to monitor group activity. Of all groups, G2 and G11 were the most active, with promising results for G2. This group allowed the creation of the sub-group SG2-3-4, with a high spectrum of action on other Gram-negative (Salmonella typhimurium, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes, Serratia marcescens, Proteus mirabilis, Citrobacter koseri) and Gram positive bacteria (Staphylococcus epidermidis). The sub-group, SG2-3-4, presented arilic units, whose spectra allowed us to consider the structural binding capacity of the unit, which appears to be either a aril-cumarine or a benzofuranone. The SG2-3-4 is currently undergoing a purification process to establish the molecular structure.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-08-29T11:08:09Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1325365 bytes, checksum: df6e0b3ddeca1ccafeceb77f9dc9a0f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-29T11:08:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1325365 bytes, checksum: df6e0b3ddeca1ccafeceb77f9dc9a0f9 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A formação de biofilmes nas indústrias de alimentos é caracterizada, inicialmente, pelo acúmulo de materiais orgânicos em superfícies, sobre as quais comunidades bacterianas podem se formar. Estas estruturas tornam as células mais resistentes e de difícil remoção durante o processo de higienização e representam fonte potencial de contaminação dos alimentos. Objetivou-se neste estudo, avaliar a formação de biofilmes multiespécie em cupons de aço inoxidável pela microbiota contaminante do leite cru e analisar sua diversidade. Foram utilizadas duas amostras de leite, um recém-ordenhado e outro granelizado, com contaminação média de 10 4 UFC/mL e 10 6 UFC/mL de aeróbios mesófilos, respectivamente. Cupons de aço inoxidável foram mantidos imersos no leite a 7 + 2 oC e, a cada dois dias, o leite cru foi trocado por outro de mesma procedência. A formação do biofilme foi acompanhada por contagem padrão em placas das células sésseis e por microscopia de epifluorescência ao longo de 10 dias. No décimo dia, os biofilmes foram observados também por microscopia confocal a laser para determinar a estrutura em seu estado hidratado e visualizar a viabilidade celular. Para analisar a diversidade do biofilme multiespécie, foi utilizada a Eletroforese em Gel de Gradiente Desnaturante (DGGE). As bandas de DNA foram obtidas após amplificação do material genético extraído das células do biofilme utilizando oligonucleotídeos universais para o domínio Bacteria. O número de células sésseis no biofilme formado a partir do leite recém-ordenhado alcançou contagem de 10 5 UFC/cm 2 de psicrotróficos no décimo dia, enquanto o biofilme formado na presença do leite granelizado atingiu 10 6 UFC/cm 2 . A partir do 4o dia de incubação foi observado, pela microscopia de epifluorescência, nos cupons imersos no leite granelizado, aglomerados celulares que possivelmente se tratavam de biofilme, enquanto nos cupons imersos no leite recém- ordenhado essas estruturas foram observadas a partir do 8o dia. Nos cupons que ficaram imersos no leite recém-ordenhado não se visualizou biofilme pela microscopia confocal a laser, enquanto que cupons imersos no leite granelizado foram observados biofilmes com espessuras em torno de 18 μm, com células viáveis desde a base até o ápice. Houve similaridade de 85 % entre a comunidade do biofilme formado na presença das amostras de leite utilizadas. Entretanto, no biofilme formado pela microbiota contaminante do leite recém-ordenhado, a diminuição na diversidade foi observada ao longo dos dias 6, 8 e 10 de incubação, enquanto no biofilme formado pela microbiota contaminante do leite granelizado a diversidade aumentou ao longo do tempo de incubação. Pode-se concluir que a microbiota contaminante do leite cru refrigerado pode se aderir nas superfícies de aço inoxidável e formar biofilmes multiespécies e o grau de contaminação influencia no tempo de formação dessas estruturas. / The formation of biofilms in the food industry is characterized initially by the accumulation of organic materials on surfaces on which bacterial communities can form. These structures make the cells more resistant and difficult to remove during the hygiene process and represent a potential source of food contamination. The objective of this study was to evaluate the formation of multispecies biofilms in stainless steel coupons by the contaminating microbiota of raw milk and to analyze its diversity. It used two milk samples, one freshly milked and the other bulk tanks, with a mean contamination of 10 4 CFU/mL and 10 6 CFU/mL of mesophilic aerobes, respectively. Stainless steel coupons were kept immersed in the milk at 7 ± 2 oC and, every two days, raw milk was exchanged for another of the same origin. Biofilm formation was monitored by standard counting on sessile cells and by epifluorescence microscopy over 10 days. On the tenth day, biofilms were also observed by laser confocal microscopy to determine the structure in its hydrated state and visualize cell viability. In order to analyze the diversity of the multispecies biofilm, Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE) was used. The DNA bands were obtained after amplification of the genetic material, extracted from the biofilm cells and using universal oligonucleotides for the Bacteria domain. The number of sessile cells in the biofilm formed from the freshly milked milk reached a count of 10 5 CFU/cm 2 of psychrotrophs on the tenth day, while the biofilm formed in the presence of the bulk tanks milk reached 10 6 CFU/cm 2 . From the 4 th day of incubation was observed by epifluorescence microscopy, in the coupons immersed in the bulk tanks milk, cell agglomerates that were possibly biofilms, while in the coupons immersed in the freshly milked milk these structures were observed from the 8 th day. In the coupons that were immersed in the freshly milked milk, no biofilm was visualized by laser confocal microscopy, while coupons immersed in the bulk tanks milk were observed biofilms with thicknesses around 18 μm, with viable cells from the base to the apex. There was a similarity de 85% between the community of the biofilm formed in the presence of the milk samples used. However, in the biofilm formed by the contaminating microbiota of freshly milked milk, a decrease in diversity was observed throughout days 6, 8 and 10 of incubation, while in the biofilm formed by the contaminating microbiota of bulk tanks milk the diversity increased over the time of incubation. It can be concluded that the contaminating microbiota of the refrigerated raw milk can adhere to the stainless steel surfaces and form multispecies biofilms and the degree of contamination influences the formation time of these structures. / Currículo Lattes não encontrado.

Orientador: Maria Sumiko Arita Matsuura / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T13:08:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amorim_ClaudioRobertoNobrega_M.pdf: 3407710 bytes, checksum: 3bcfb4652357a5fa35b5a91e15d4f0d2 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Colibacilose ocorre em leitões recém-nascidos e pós-desmame. A doença é caracterizada por diarréia aguda, desidratação progressiva e morte, o que leva a uma considerável perda econômica. Para a Escherichia coli causar doença, ela necessita de pelo menos dois fatores de virulência: a) produção de enterotoxinas e, b) produção de adesinas. A proposta deste estudo foi a detecção, isolamento, purificação e caracterização de uma nova adesina, conhecida como 2134P, em amostras de E. coli enterotoxigênica (ETEC) isoladas de leitões com diarréia no Brasil. Esta adesina foi detectada numa freqüência alta (30,0%) em amostras de ETEC, que não expressavam as adesinas K88, K99, 987P, F41 e F42. Isto sugere um papel importante da adesina 2134P na enteropatogenia da colibacilose suma. A adesina 2134P isolada foi purificada por cromatografia em Sepharose CL 4B e analisada por SDS-P AGE corado com Coomassie Blue, apresentando uma única banda de 17 KDa., reconhecida pelo antissoro 2134P por "Westem blot". A técnica de "gold immunolabeling" revelou que a adesina 2134P é uma estrutura do tipo fimbria localizada na superfície da bactéria. A seqüência dos quinze primeiros aminoácidos da porção N-terminal da adesina 2134P foi obtida, a qual apresentou uma homologia de 10 aminoácidos (66%) com a porção N-terminal da fimbria FI07 (FI8ab) / Abstract: Enterotoxigenic colibacillosis occurs in newbom piglets and weaned pigs. It is characterizated by acute diarrhea, progressive dehydratation and death in a few days which lead to considerable economic loss. Disease is caused by two mainly virulence factors of Escherichia cali: a) production of enterotoxins and, b) production of adhesins. The purpose of this study was the detection, isolation purification and characterization of a novel adhesin, referred as 2134P, in Escherichia calí enterotoxigenic (ETEC) strains isolated from piglets with diarrhea in Brazil. This adhesin was detected in a high frequency (30.0%) in these ETEC strains, which didn't present the adhesins K88, K99, 987P, F41 and F42. Its suggests the important role of adehsin 2134P in porcine enter pathogenesis. The adhesin 2134P was purified on Sepharose CL 4B column chromatography, and was analyzed by SDS-PAGE stained with Coomassie Blue, and presented only one band of approximately 17 KDa identified in Westem blot using specific anti-2134P serum. Gold immunolabeling technique revealed that adhesin 2134P is a fimbrial structure on bacterial surface. It was obtained the first fifteen amino acids sequencing-signal of the N-termini portion of the adhesin 2134P, with a homology of 10 amino acids (66%) with the FI07 (FI8ab) fimbriae / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Bruno Coraucci Filho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Civil / Made available in DSpace on 2018-08-02T20:26:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Campos_AndreiaFerrazde_M.pdf: 3482115 bytes, checksum: 2596298effa1ca7f4006d5ec8efe4ef3 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A utilização do Iodo de esgoto na agricultura, como fertilizante, é uma prática conhecida mundialmente devido ao seu potencial de nutrientes, bem como às melhorias proporcionadas na estrutura dos solos transformando este resíduo em um recurso reutilizável. Porém, existem algumas restrições quanto ao seu uso agrícola, entre as quais, a presença de patógenos que além de ser um fator limitante, pode definir a melhor taxa de aplicação do Iodo. Este trabalho teve como objetivo avaliar as concentrações de coliformes totais e, principalmente, coliformes fecais (indicadores de patogenicidade) no Iodo, solo e líquido percolado nas profundidades 25, 50, 75 e 100 cm, por um período de dois anos, em um sistema controlado de disposição de Iodo líquido no solo acondicionado em reatores de fibra de vidro com capacidade para 1200 litros. O Iodo de esgoto foi aplicado em intervalos de, aproximadamente, 40 dias, nas taxas O; 2,5; 5,0 e 7,5 tss/ha (toneladas de sólidos secos por hectare) em solo natural, O e 5,0 tss/ha em solo que sofreu correção de pH por adição de cal. Ao longo do período foi verificado que, mesmo na maior taxa aplicada, os coliformes fecais não estavam presentes no líquido percolado no solo, em até 1 metro de profundidade. Pelos resultados obtidos concluiu-se que a melhor taxa de aplicação foi 5,0 tss/ha em solo natural, devido às concentrações de coliformes fecais na camada superficial do solo (15 cm) ficarem próximas a 106 NMP/g (Número Mais Provável por grama de sólidos secos), concentração limite para biossólidos Classe B. Observou-se ainda que o tempo de sobrevivência dos coliformes fecais no solo superficial nas taxas utilizadas foi maior que 40 dias após as aplicações de Iodo. Portanto, sugere-se que o manejo do solo e as reaplicações de Iodo na taxa 5,0 tss/ha sejam realizados a cada 60 dias, totalizando 30 t/ha.ano / Abstract: The utilization of wastewater sludge in agriculture, as a fertilizer, is a well known worldwide practice, due to its nutrient potential and to the improvements achieved in the soil structure, transforming this waste into a renewable resource. Still, there are some restrictions to its use in agriculture, among which is the presence of pathogens, which, besides being a limiting factor, can define sludge application rates. This study had as its objective the evaluation of the concentration of total coliforms, and especially fecal coliforms (indicators of pathogenity) in the sludge, soil and liquid percolate in 25, 50, 75 and 100 cm depth, during a period of two years, in a controlled 5ystem of soil application of wastewater sludge (fiberglass containers filled with soil). The wastewater sludge was applied at intervals of approximately 40 days, at rates of 0,2.5,5.0 and 7.5 tons per hectare dry basis in natural soil; O and 0.5 tons per hectare in So" with 1íme correction of pH. During the test period was found that even at the highest application rates, fecal coliforms were not present in the liquid percolate in the soil, down to 1 meter depth. Given the obtained results, it was found that the best application rate was 5 tons per hectare in natural soil, since at these rates the concentration of fecal coliforms in the topmost layer of soil (15 cm) remained below 106 MPN/g (Most Probable Number per gram of dry solids), the concentrations limit under Class B biosolids. Furthermore it was observed that the survival time of the fecal coliforms in the top layer of soil were greater than 40 days after soil application, at the different application rates. Therefore it is suggested that soil handling and sludge reapplication in the 5 tons per hectare rate be done every 60 days, totaling 30 tons per year / Mestrado / Saneamento e Ambiente / Mestre em Engenharia Civil

Os biofilmes, especialmente de bactérias patogênicas como Listeria monocytogenes, têm chamado a atenção nos laticínios pelos riscos que implicam ao consumidor, devido aos repetidos surtos causados por ingestão de lácteos contaminados. A legislação brasileira apenas especifica L. monocytogenes em queijos. Além disso, os biofilmes geram problemas econômicos para a indústria e diminuem a eficiência dos agentes sanificantes empregados. O objetivo do trabalho foi avaliar a formação de biofilmes de L. monocytogenes em diferentes tempos, temperaturas, superfícies e resíduos lácteos, bem como a presença de Lactobacillus plantarum como competidor, assim como analisar a eficiência do processo CIP (Clean In Place) de um pasteurizador de leite com quaternário de amônia. As populações bacterianas dos biofilmes foram avaliadas através da técnica do suabe e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). O modelo experimental foi baseado na formação de biofilmes de L. monocytogenes em cupons de aço inoxidável 304, silicone e borracha. Os cupons permaneceram imersos por 10 horas, a 5ºC e 35ºC, em leite UHT integral, desnatado e creme de leite UHT, seguido da incubação em diferentes tempos (0, 18 e 114 horas) e temperaturas (5ºC e 35ºC) para a formação do biofilme. A competição foi realizada em aço inoxidável a 35ºC, nos tempos 0 e 18 horas. O processo CIP teve sua eficiência avaliada na remoção de biofilmes de L. monocytogenes na presença de leite integral e desnatado, simulando a limpeza e sanificação de um pasteurizador de leite. A formação de biofilmes pro L. monocytogenes foi influenciada pela baixa temperatura (5ºC), podendo ocorrer em áreas de refrigeração dos laticínios. O microrganismo é capaz de sobreviver e formar biofilmes por longos períodos nas superfícies de aço inoxidável, silicone e borracha na presença de resíduos de leite integral, desnatado e creme de leite. O crescimento em competição por Lactobacillus plantarum não inibiu a formação de biofilmes por L. monocytogenes e crescimento de células planctônicas. O processo CIP foi eficiente em todas as condições estudadas, eliminando as células de L. monocytogenes. / The biofilm, especially of pathogenic bacteria Listeria monocytogenes, have been getting the attention in the dairy products for the risks that implicate the consumer, due to the repeated outbreaks caused by ingestion of milky polluted. The Brazilian legislation just specifies L. monocytogenes in cheeses. Besides, the biofilm generate economical problems for the industry and they reduce the agents used sanitizers efficiency. The objective of the work was to evaluate the formation of biofilms of L. monocytogenes in different times, temperatures, surfaces and milky residues, as well as the presence of Lactobacillus plantarum as competitor, as well as analyzing the efficiency of the process CIP (Clean In Place) of a milk pasteurize whit quaternary of ammonium. The bacterial populations of the biofilms were appraised through the technique of the swab and Scanning Electron Microscopy (SEM).The experimental model was based on the formation of biofilms of L. monocytogenes in coupons of stainless steel 304, silicon and rubber. The coupons stayed immersed by 10 hours, to 5ºC and 35ºC, in skim milk UHT, skimmed and cream of milk UHT, following by the incubation in different times (0, 18 and 114 hours) and temperatures (5ºC and 35ºC) for the formation of the biofilm. The competition was accomplished in stainless steel to 35ºC, in the times 0 and 18 hours. The process CIP had his efficiency appraised in the removal of biofilms of L. monocytogenes in presence of skim milk and skimmed, simulating the cleaning and sanitation of a milk pasteurizer. The biofilmes formation for L. monocytogenes was influenced by the low temperature (5ºC), could happen in areas of cooling of the dairy products. The microorganism is capable of to survive and to form biofilmes for long periods in the surfaces of stainless steel, silicon and eraser in the presence of residues of integral milk, skimmed and cream of milk. The growth in competition for Lactobacillus plantarum didn\'t inhibit the biofilms formation for L. monocytogenes and growth of cells. The process CIP it was efficient in all of the studied conditions, eliminating the cells of L. monocytogenes.

Phrynops geoffroanus é uma espécie de quelônio com ampla distribuição na América do Sul, ocupando diversos tipos de habitat, inclusive rios urbanos poluídos. Com o objetivo de se conhecer aspectos ecológicos da espécie em ambientes antropizados, durante os anos de 2006 e 2007 foi realizado um estudo na bacia do rio Piracicaba, tendo como sítios amostrais o rio Piracicaba e seu afluente o ribeirão Piracicamirim. Um dos temas deste estudo foi à avaliação de aspectos sanitários da espécie. Foi investigado o perfil hematológico dos cágados no rio Piracicaba e ribeirão Piracicamirim, e avaliado um índice de estresse (razão heterófilo/linfócito), que além dos dois corpos d\'água foi adicionado um grupo de animais provenientes de cativeiro, da Fundação Parque Zoológico de São Paulo. A diferença entre um rio de maior volume, Piracicaba, e seu afluente Piracicamirim, ambos poluídos e com diferentes históricos de ocupação do solo, pouco influenciaram nas variações dos dados hematológicos dos cágados e os animais não apresentaram nenhum sinal de enfermidade através dos resultados obtidos no hemograma. Estas análises foram o tema do primeiro capítulo desta dissertação. Outro aspecto sanitário avaliado foi a microbiota bacteriana oral dos cágados em ambos os corpos d\'água, abordado no segundo capítulo. As amostras foram incubadas a 25 e 37ºC. Avaliou-se a patogenicidade das bactérias tanto para os cágados quanto para seres humanos. Houve crescimento de bactérias patogênicas para o homem e para os animais e a bactéria mais prevalente a 37ºC foi a Escherichia coli. Apesar disso, os cágados não apresentaram sinal aparente de infecção. Estudos de longo prazo são recomendados para animais residentes em ambientes antropizados, monitorando-se o estado sanitário e aspectos ecológicos e demográficos. / Phrynops geoffroanus is a freshwater turtle species, with a wide distribution in South America, living in many types of habitats, including polluted urban rivers. During 2006 and 2007, aiming to study ecological aspects of the species in anthropogenic environments, it was conducted an investigation at Piracicaba River Basin, in two sample sites, the Piracicaba river and its tributary, Piracicamirim stream. One of the topics studied was a health assessment of the turtles. It was examined the blood profile in Piracicaba and Piracicamirim turtles and evaluated a measure of stress (heterophil/lymphocyte ratio), that had another study group besides the animals from the rivers, turtles in captivity from Sao Paulo Zoo Park Foundation. The difference between a large river, Piracicaba and its tributary Piracicamirim, both polluted and with different soil use and occupation had a little influence on turtles\' hematological variation, and the animals did not show any sign of disease through the blood profile examination. These evaluations were the subject of the thesis\' first chapter. Another part of the health assessment study, subject of the second chapter, was the oral microbiota investigation, performed in Piracicaba and Piracicamirim turtles. The samples were incubated at 25 and 37º Celsius, aiming to check the bacterium\'s pathogenicity for the animals and for humans. The results showed growth of pathogenic bacterium for both and the most prevalent bacteria at 37ºC was Escherichia coli. Although, the turtles did not show any sign of infection. Long-term studies are suggested for turtles living in anthropogenic environments to monitor their health status, demography and ecological issues.

O Bacillus cereus é um patógeno amplamente distribuído na natureza, relacionado a intoxicações alimentares e causador da coagulação doce do leite. A intoxicação pode ocorrer após a ingestão de alimentos nos quais a bactéria produziu a toxina. Em laticínios, o B. cereus é problemático por sua habilidade de formar esporos resistentes ao calor e sobreviver aos tratamentos térmicos, como a pasteurização e UHT. As espécies de Bacillus são freqüentemente isoladas de leite pasteurizado e UHT e evidências indicam que os biofilmes formados nas superfícies dos equipamentos de processamento são uma das principais fontes de contaminação. No biofilme, as células ou esporos aderidos, têm aumentada sua resistência e podem resistir ao processo de sanificação, se tornando focos de disseminação de bactérias no processo. A matriz polimérica do biofilme reage e neutraliza os agentes sanificantes, expondo as bactérias em seu interior a doses subletais, podendo levar a aquisição de resistência. Neste estudo, biofilmes de células vegetativas B. cereus foram desenvolvidos na superfície de aço inoxidável, tipo 304, com filme de condicionamento de leite. A adesão média das células foi de 1,4 x 105UFC/cm2. Também foram desenvolvidos biofilmes de esporos, com adesão média em aço inoxidável de 1,4 x 104UFC/cm2. Foi avaliada a resistência das células vegetativas e esporos de B. cereus em biofilmes, ao processo simulado de higienização por clean in place (CIP) realizado em laticínios. Após a limpeza a adesão das células vegetativas em aço inoxidável foi reduzida a aproximadamente 1CFU/cm2. Após a sanificação, os resultados permaneceram inalterados. A contaminação remanescente foi relacionada com a maior resistência das células nos biofilmes formados. Após a limpeza e sanificação a adesão média dos esporos foi de 8,9 x 101 UFC/cm2 e 3,3 x 101 UFC/cm2, respectivamente. Tendo em vista este resultado, foi observado que esporos de B. cereus são mais difíceis de remover de superfícies de aço inoxidável do que células vegetativas, com procedimentos CIP. Finalmente, foi realizada a exposição de células vegetativas de B. cereus a três concentrações subletais (3,9; 1,8 e 0,9µg/mL) de cloreto de alquil amidopropil dimetil benzil amônio para avaliação da adaptação pelo método da concentração inibitória mínima (CIM). A aquisição de resistência foi avaliada pela comparação do valor inicial de CIM (7,4µg/mL), com os valores finais, após 28 dias de exposição. Após o período de adaptação, o valor de CIM encontrado foi o dobro do original (14,9µg/mL) indicando aquisição de resistência ao sanificante pela cepa. Foi constatado ainda que o cultivo da cepa na menor concentração subletal apresentou resultados mais coerentes, sugerindo que exposição a doses subletais mais brandas resulta em uma maior resposta adaptativa. / Bacillus cereus is a pathogen widely distributed in the environment and a serious problem in the dairy industry because of its ability to form heat-resistant spores that can survive pasteurization and UHT treatments. This bacteria is responsible for foodborne diseases in man due to production of toxins that may cause gastroenteritis, diarrhoea and vomiting. In addition, B. cereus is responsible for spoilage of pasteurized milk and cream referred to as \"sweet curdling\". Bacillus strains are frequently isolated from pasteurized and UHT treated milk and evidence indicates that biofilm formed on processing equipment surfaces are major sources of milk contamination. In biofilms, adherent cells and spores acquire increased resistance and persist to the sanitization process, becoming sources of bacteria dissemination in food processing. The extracellular polymeric matrix neutralizes the sanitizing agents and exposing the bacteria in biofilms to sublethal concentrations can lead to an increased resistance. In this study, biofilms of B. cereus vegetative cells were developed in a 304 stainless steel (SS) surface with a milk conditioning film. The mean adhesion of cells on SS surface was 1.4 x 105CFU/cm2. Biofilms of B. cereus spores were also developed, and the mean adhesion found was 1.4 x 104CFU/cm2. The resistance of B. cereus vegetative cells and spores in biofilms to a simulated clean-in-place (CIP) procedure used in dairy industry was evaluated. After cleaning procedure, the population of vegetative cells in the SS surface was reduced to approximated 1 CFU/cm2. After sanitizing procedure, the cell count remained unaltered. The remaining contamination was related with the increased resistance of cells in the developed biofilms. After cleaning and sanitizing procedures, the mean of spore adhesion found was 8.9 x 101 CFU/cm2 and 3.3 x 101 CFU/cm2, respectively. These results show that B. cereus spores are more difficult to remove from SS surfaces than vegetative cells using CIP procedures. Finally, B. cereus vegetative cells were exposed to three different sublethal concentrations (3.9; 1.8 and 0.9µg/mL) of alkyl amidopropyl dimethyl benzyl ammoniun cloride, for evaluation of adaptation, using the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) test. The acquired resistance was evaluated by comparing the initial MIC value (7.4µg/mL) with final MICs, after 28 days of exposure. After the adaptation period, with exception of an experiment where the MIC was threefold the original value (29.8µg/mL), in the other experiments the MICs found was double (14.9µg/mL) of the original MIC, indicating acquisition of resistance by the B. cereus strain. It was observed that the growth of cells in the mildest sublethal concentration (0.9µg/mL) resulted in more consistent effects, suggesting that the exposure to mildest sublethal concentrations results in higher adaptive responses.

A leptospirose é uma zoonose causada por bactérias patogênicas do gênero Leptospira. Apesar de sua importância, a patogênese e virulência permanecem não elucidadas. As leptospiras não apresentam proteases conhecidas de degradação de matriz extracelular, atividade crucial para a penetração e disseminação nos hospedeiros. Assim, foi proposta a investigação da interação de leptospiras com plasminogênio/plasmina e as implicações para a infecção. As leptospiras capturam plasminogênio na superfície, e este é convertido à plasmina por ativadores do hospedeiro. A plasmina associada propicia degradação de componentes de matriz extracelular, habilidade de penetração e evasão imune. Adicionalmente, as leptospiras estimulam a expressão de ativadores de plasminogênio e metaloproteases de matriz. Os resultados contribuem para o conhecimento do processo infeccioso das leptospiras, descrevendo um novo mecanismo de patogenicidade. / Leptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic bacteria from genus Leptospira. Despite its importance, the pathogenicity and virulence remain to be elucidated. The leptospires do not present known proteases able to degrade extracellular matrix, an activity essential for the penetration and dissemination within the hosts. Therefore, we proposed the investigation of the leptospiral interaction with plasminogen/plasmin and its implications for infection. Leptospires capture plasminogen on the surface, which is converted to plasmin by hosts activators. Surface-bound plasmin confers extracellular matrix components degradation, penetration ability and immune evasion. Additionally, leptospires stimulate plasminogen activators and matrix metaloproteases expressions. The results constitute one possible mechanism that contributes to the invasion process and the rapid dissemination of Leptospira.