O objetivo deste estudo foi avaliar a influência do laser Er:YAG na remoção de dentina desmineralizada e sua permeabilidade no tecido remanescente. 30 fragmentos de dentina coronária a partir de 30 molares foram isolados com esmalte cosmético e cera, deixando uma área exposta de dentina de 9mm2. Para a obtenção das lesões de cárie os espécimes foram imersos durante 20 dias em solução desmineralizante (pH 4,6 a 37°C). Depois, os corpos de prova foram aleatoriamente divididos em 3 grupos (n=10) para a remoção da lesão: G1 - laser Er:YAG, (200 mJ/6Hz); G2 - broca; G3 - cureta. Em seguida, os espécimes foram imersos em uma solução aquosa de sulfato de Cu a 10% e em uma solução alcoólica de ácido rubiânico a 1% por 30 minutos, e mantidos em recipientes fechados com bolinha de algodão embebida com amônia por 7 dias. Posteriormente, foram seccionados, polidos, desidratados, clareados e colocados em laminas de vidro para sua analise por meio de microscópio ótico. As medidas de penetração do íon de cobre na dentina remanescente foram medidas em μm. Os dados foram analisados pelo teste Kruskal-Wallis e correlação de Pearson. Pode-se observar que o laser promoveu um tecido mais permeável em comparação aos demais grupos (G1-17,6μm; G2-6,6μm; G3-5,5μm), contudo não houve diferença estatística entre eles na capacidade de remoção do tecido desmineralizado (G1-10,6μm; G2-8,4μm; G3-11μm). A correlação entre a dentina remanescente desmineralizada e permeabilidade dentinária, foi moderada para os metodos convencionais e alta para o laser Er:YAG. Conclui-se que o laser Er:YAG promoveu maior permeabilidade da dentina, estando correlacionada com a remoção do tecido desmineralizado. / The aim of this study was to evaluate the efficiency of Er:YAG laser in the removing of demineralized dentin and permeability of the remaining dentin. 30 dentin fragments obtained from 30 molars were isolated with enamel cosmetic and wax, leaving a dentin exposed area of 9mm², which was submitted to demineralization. For obtaining the lesions, the specimens were immersed during 20 days in a demineralized solution (pH4.6 at 37°C). The samples were randomly divided into 3 groups (n=10) for the removal of the demineralized lesion: G1- Er:YAG laser, (200mJ/6Hz); G2- bur; G3- curette. Later, the specimens were immersed in 10% aqueous solution of copper sulfate and 1% alcoholic solution of rubeanic acid for 30 minutes and it kept in closed jars with ammonium-embedded cotton pellets for 7 days. Then, they were sectioned, polished, dehydrated, cleared and mounted on glass slides for examination under optical microscopy. The percentages of copper ion infiltration in dentin were quantified in μm. Data were analyzed by Kruskal-Wallis test and Pearson\'s correlation. The analyze revealed that the laser promoted more permeable tissue than other groups (G1-17.6μm; G2-6.6μm; G3-5.5μm), but there was no statistical difference between them in terms of their capacity of removing the demineralized tissue (G1-10.6μm; G2-8.4μm; G3-11μm). The correlation between remaining demineralized dentin and dentin permeability was moderated for the conventional methods and high for the Er:YAG laser. It can be concluded by the present study that he Er:YAG laser promoted higher dentin permeability, being correlated with the removal of the demineralized dentin.

Orientador: Regina Maria Puppin-Rontani / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T23:23:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pascon_FernandaMiori_M.pdf: 4566507 bytes, checksum: 3f6c891c0673562868d8c5f467dd9f71 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Um dos principais objetivos do tratamento endodôntico é o debridamento do sistema de canais radiculares através da remoção dos restos pulpares, da smear layer e smear plugs, para eliminar a contaminação bacteriana e subprodutos da mesma, os quais podem se tornar reservatórios de irritantes no canal tratado. Além disso, as substâncias irrigadoras e os métodos de irrigação utilizados durante o preparo químico-mecânico, podem também contribuir para a remoção da smear layer e consequentemente alterar a permeabilidade dentinária. Dessa forma, os objetivos desta Dissertação foram: (1) discutir através da revisão da literatura, a eficácia de substâncias irrigadoras, bem como a influência de dois métodos de irrigação (irrigação manual ou ativação ultrasônica) utilizados durante o preparo químico-mecânico de dentes decíduos e permanentes, considerando a permeabilidade da dentina radicular; (2) correlacionar o índice de permeabilidade da dentina radicular de dentes decíduos sob a influência de substâncias irrigadoras associadas ou não a auxiliares de instrumentação (líquido de Dakin, líquido de Dakin associado ao peróxido de hidrogênio, solução salina associada à clorexidina gel e solução salina) e diferentes métodos de irrigação (irrigação manual ou ativação ultrasônica) aos seus aspectos morfológicos (presença ou ausência de smear layer). Baseando-se na revisão de literatura pôde-se concluir que as substâncias irrigadoras e associações utilizadas durante o tratamento endodôntico promoveram aumento da permeabilidade dentinária radicular de dentes permanentes e que não houve diferenças quanto à permeabilidade dentinária, quando comparada a irrigação realizada manualmente ou através de vibração ultrasônica. Não há estudos relacionados à permeabilidade radicular de dentes decíduos, quando estes são submetidos a substâncias irrigadoras e diferentes métodos de irrigação. A técnica de irrigação manual foi considerada mais efetiva do que a técnica de irrigação através de sistema de vibração ultrasônica, quanto à permeabilidade dentinária radicular de dentes decíduos. A presença da smear layer nas paredes radiculares foi um fator limitante à penetração do corante (índice de permeabilidade) para o terço médio quando dentes decíduos foram irrigados manualmente. O líquido de Dakin apresentou os maiores valores de índice de permeabilidade, nos três terços radiculares, sugerindo que essa solução irrigadora seja indicada para o tratamento endodôntico de dentes decíduos. / Abstract: One of the main goals of root canal treatment is the cleaning of the entire root canal system, through removal of pulpal debris, smear layer and smear plugs in order to avoid harbor bacteria or bacterial by-products, providing a reservoir of potential irritants in treated root canal. In addition, the cleansers and irrigation methods used in the endodontic treatment, can also contribute with the smear layer removal and with permeability alterations. Thus, the aims of this Thesis was: (1) to discuss the efficacy of some cleansers, as well as the influence of two irrigation systems used during endodontic preparation of primary and permanent teeth (manual or ultrasonic vibration) with regard to root dentin permeability, based on a literature reviewing; (2) to correlate the dye permeability to morphological aspect (presence or absence of smear layer) of the primary root dentin wall, using scanning electron microscopy (SEM), regarding the endodontic preparation and irrigation methods. Based on literature review (1) it can be concluded that among the solutions used for permanent teeth, all solutions and associations studied increased the dentin permeability. There was no difference in the dentin permeability when comparing manual and ultrasonic irrigation. There are not enough papers focusing primary teeth on this subject to definitely establish the patterns of increased dentin permeability in tooth root canal treatment regarding the irrigating solutions and irrigation systems. The results of the second study showed that manual irrigation technique was better than ultrasonic one and that Dakin's liquid, Dakin's liquid associated with hydrogen peroxide, and saline solution showed the highest permeability index averages values. Regarding the correlation study, it could be concluded that the smear layer presence on the root dentin walls was a limiting factor to dye penetration (Permeability Index), in middle third for manual irrigation. / Mestrado / Odontopediatria / Mestre em Odontologia

Orientador: Cassio Eduardo Lima de Paiva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Civil, Arquitetura e Urbanismo / Made available in DSpace on 2018-08-06T01:39:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_CarlosEduardoDelBenda_M.pdf: 2624680 bytes, checksum: 91c83d7e53e4678b23d6c80b5cb76bb5 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A malha rodoviária brasileira tem grande importância para o desenvolvimento do País. Observando-se que esta malha é predominantemente de pavimento flexível, o estudo das propriedades de misturas betuminosas se toma indispensável. Com o desenvolvimento tecnológico de asfaltos, novas aplicações estão se mostrando viáveis e tecnicamente interessantes. Em algumas dessas aplicações, espera-se que estas misturas tenham uma permeabilidade adequada para o escoamento das águas precipitadas. Para caracterizar estas propriedades, desenvolveu-se, no Laboratório de Estradas de Engenharia Civil da Universidade de Campinas UNICAMP, um estudo da permeabilidade de 4 tipos de misturas betuminosas que pudessem caracterizar o amplo leque de misturas de graduação aberta. A partir dos resultados de permeabilidade obtidos, propõe-se a adoção do ensaio em novos projetos de misturas asfálticas durante a fase de elaboração e viabilização do mesmo, verificando se o tipo de mistura adotada é apropriado ou não com relação à precipitação característica do local e promovendo, acima de tudo, a segurança aos usuários. Propõe-se, ainda, a continuação do estudo para novos tipos de misturas asfálticas porosas, salientando-se que a utilização destas misturas ganha espaço no cenário nacional / Abstract: Brazilian highway network plays a huge importance for country development. Since most of this roads is formed by flexible pavement, a proper characterization of this bituminous mixture is indispensable. Following the development of new asphalt binders the altemative applications are becoming economic feasible. One of these applications is permeable wearing course that helps to drain off rainfall. In order of understand such bituminous mixtures a research was undergone in University of Campinas' Road Laboratory of Civil Engineering - UNICAMP where four different open coarse gradations were characterized, presenting a wide range of cases. As a result of this research new test methods for mixture design are proposed. It will be useful for selecting the right mixture for that place (amount of rain) in order to ensure user safety mainly. The continuation of this research includes other open graded mction coarse design since the adoption of this solution is growing nationwide / Mestrado / Transportes / Mestre em Engenharia Civil

Orientador: Stephen Hyslo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T19:41:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bifaroni_RenataManoScatamburlo_M.pdf: 12304500 bytes, checksum: a5c3c67724b7ea654b79231b9f69925a (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A heme oxigenase (HO) é uma enzima envolvida na degradação de grupos heme, levando à formação de biliverdina IX, ferro e monóxido de carbono. Em baixas concentrações, esses produtos exercem diversos efeitos protetores, inclusive antiapoptóticos, antiinflamatórios, antiproliferativos e antitrombóticos, enquanto, em concentrações elevadas, podem resultar em hipóxia, comprometimento neurológico, disfunções mitocondriais e hiperbilirrubinemia. Neste estudo, investigamos o envolvimento da HO no aumento da permeabilidade vascular, na hemorragia e na mionecrose causadas pela peçonha de Bothrops jararacussu. A peçonha de B. jararacussu (0,3-3 µg/sítio) aumentou a permeabilidade vascular no dorso de pele de camundongos. Este aumento foi inibido pelo zinco deuteroporfirina 2,4-bis-glicol (ZnDPBG), um inibidor não seletivo da HO, quando administrado i.p. (45 e 90 µmol/kg), mas não quando i.d. (25-200 nmol/sítio). O co-tratamento com o inibidor do óxido nítrico sintase, N?-nitro-L-arginina metil éster (L-NAME, 100 nmol/sítio), não potencializou a inibição por ZnDPBG. ZnDPBG (45 ou 90 µmol/kg, i.p.) não reduziu a hemorragia na pele (3 e 10 µg de peçonha/sítio), mas aumentou esta resposta na dose maior. A peçonha (25 µg e 75 µg) aumentou a atividade da HO em músculo gastrocnêmio de camundongos em dois momentos - um precoce (nas primeiras horas após o envenenamento - fase de lesão aguda) e um tardio (alguns dias após a injeção de peçonha, fase de regeneração muscular). Na dose de 75 µg da peçonha, ocorreu aumento da expressão gênica da HO-1, entre 3 e 12 horas após o envenenamento, com pouca alteração na expressão da HO-2. As alterações histológicas causadas pela peçonha (25 µg e 75 µg) consistiram de três fases: fase 1 (até 6 h ou 12 h pós-peçonha - p.p.), caracterizada por hemorragia e mionecrose, fase 2 (de 12 h a 72 h p.p.), caracterizada por um extenso infiltrado inflamatório e fase 3 (7-28 dias p.p.), caracterizada por células regenerativas e maior deposição de colágeno ao redor destas células. O tratamento com ZnDPBG (90 µmol/kg, i.p.), 15 minutos após a injeção da peçonha (75 µg), inibiu parcialmente a mionecrose, diminuindo também os níveis de CK nas primeiras horas (1-3 h) pós-peçonha. Estes resultados indicam um envolvimento da HO no edema e na mionecrose causadas pela peçonha de B. jararacussu, e mostram que a inibição desta atividade com ZnDPBG pode proporcionar alguma proteção contra esses efeitos locais / Abstract: Heme-oxygenase (HO) is an enzyme involved in the degradation of heme groups that results in the formation of biliverdin IX, iron and carbon monoxide. At low concentrations, these reaction products have anti-apoptotic, anti-inflammatory, anti-proliferative, and anti-thrombotic activities, whereas at high concentrations they can cause hypoxia, neurological damage, mitochondrial dysfunction and hiperbilirrubinemia. In this study, we investigated the involvement of HO in the increase in vascular permeability, hemorrhage and myonecrosis caused by Bothrops jararacussu snake venom. Bothrops jararacussu venom (0.3-3 µg/site) increased the vascular permeability in mouse dorsal skin. This increase was inhibited by zinc deuteroporphyrin 2,4-bis-glycol (ZnDPBG), a non-selective HO inhibitor, when administered i.p. (45 and 90 µmol/kg). In contrast, ZnDPBG given i.d. (25-200 µmol/site) did not affect the increase in vascular permeability. Co-treatment with the nitric oxide synthase inhibitor N?-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME, 100 nmol/site) did not potentiate the inhibition by ZnDPBG. ZnDPBG (45 or 90 µmol/kg, i.p.) did not reduce the dorsal skin hemorrhage (3 and 10 µg of venom/site), but rather, increased this response at the highest dose. Venom (25 and 75µg) increased the HO activity of mouse gastrocnemius muscle. The increase in activity was biphasic and included early (first few hours after envenoming, corresponding to acute damage) and late (7-18 days after envenoming - muscle regeneration) phases. Enhanced gene expression of HO-1 was seen 3-12 h after envenomation (75 µg), with little change in HO-2 expression. Histological analysis showed that the muscle damage consisted of three phases: phase 1 (up to 6-12 h post-venom), characterized mostly by hemorrhage and myonecrosis, phase 2 (12-72 h post-venom), characterized by an extensive inflammatory infiltrate, and phase 3 (7-28 days post-venom), characterized mainly by regenerative cells and an increase in collagen deposition around these cells. Treatment with ZnDPBG (90 µmol/kg, i.p.) 15 min after venom (75 µg) injection partially attenuated the myonecrosis and also decreased the creatine kinase (CK) levels after 1 and 3 h. Together, these results indicate that HO activity is involved in the edema and myonecrosis caused by B. jararacussu venom, and that the inhibition of this activity with ZnDPBG provides some protection against these local effects / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Esta tese de Doutorado apresenta três estudos in vitro independentes. Na parte 1, avaliou-se a permeabilidade dentinária após tratamentos dessensibilizantes de consultório e a resistência destes à ciclagem erosiva-abrasiva de 5 dias; na parte 2, avaliou-se a permeabilidade dentinária após aplicação de cremes dentais dessensibilizantes e/ou anti-erosivos durante uma ciclagem erosiva-abrasiva de 5 dias; e na parte 3, avaliou-se a perda de superfície dentinária resultante da utilização dos cremes dentais dessensibilizantes e/ou anti-erosivos em um modelo de ciclagem erosiva-abrasiva inicial. Nas partes 1 e 2 os túbulos dentinários dos espécimes de dentina foram abertos com solução de EDTA e a permeabilidade máxima inicial foi analisada (considerada 100%). Na parte 1, os tratamentos dessensibilizantes de consultório foram realizados e a permeabilidade dentinária reavaliada (%Lp-após tratamento). Em ambos estudos, os espécimes passaram por uma ciclagem erosivaabrasiva de 5 dias. Cada dia consistiu em 4 imersões em ácido cítrico (2 min, 1%, pH ~2,6), com exposição à saliva humana clarificada por 60 min entre os desafios erosivos. Trinta minutos após o primeiro e último desafios erosivos, os espécimes foram escovados em máquina de escovação (2 N, 45 ciclos) totalizando 2 minutos de exposição às suspensões formadas por creme dental e saliva humana. Na parte 1, foi utilizado um creme dental fluoretado convencional para todos os grupos e na parte 2, cremes dentais de acordo com cada grupo. Ao final dos 5 dias de ciclagem, a permeabilidade dentinária final (%Lp-após ciclagem) foi avaliada. Os mesmos cremes dentais testados na parte 2 também foram testados quanto à perda de superfície (PS) na parte 3. Para isso, os espécimes tiveram duas partes das superfícies protegidas com uma fita adesiva de forma a deixar uma área central exposta e, então, foram submetidos a 5 ciclos de erosão-abrasão iniciais. Em cada ciclo os espécimes foram imersos em saliva artificial (60 minutos; pH 7), e em ácido cítrico (3 minutos; 1%; pH 3,6). Então, os espécimes foram escovados em máquina de escovação (2 N; 25 ciclos) com as suspensões formadas pela mistura dos cremes dentais com saliva artificial, totalizando 2 minutos de exposição às suspensões. Para cada estudo, os dados de %Lp e PS foram estatisticamente analisados. Parte 1: Os grupos NUPRO e Gluma Desensitizer foram os únicos que apresentaram menor %Lp quando comparados com controle negativo (p=0,026 e p=0,022; respectivamente), em ambos os tempos analisados. Parte 2: Os cremes dentais Regenerate e Sensodyne Pronamel apresentaram menor %Lp em comparação com o grupo controle negativo (p<0,05). Parte 3: Os grupos apresentaram diferentes graus de PS independente da indicação comercial, sendo o Elmex Erosion Protection, o único grupo com baixa PS que se diferenciou do controle positivo (p=0,031). Pode-se concluir que os tratamentos de consultório NUPRO e Gluma Desensitizer e os cremes dentais Regenerate e Sensodyne Pronamel foram os melhores em diminuir a %Lp, no modelo estudado. Em relação à PS, em um modelo de ciclagem erosiva-abrasiva inicial, os cremes dentais apresentaram diferentes graus de PS, independente da indicação comercial, tendo o Elmex Erosion Protection mostrado o resultado mais promissor. / This PhD thesis presents three independent in vitro studies. At part 1, dentine permeability was evaluated after in-office desensitizing treatments and their resistance to an erosive-abrasive cycling of 5 days; at part 2, dentine permeability was evaluated after application of desensitizing and/or anti-erosive toothpastes during an erosive-abrasive cycling of 5-day; and at part 3, dentine surface loss resulting from the use of desensitizing and/or anti-erosive toothpastes in an initial erosive-abrasive cycling model was evaluated. At parts 1 and 2 the dentinal tubules were opened with EDTA solution and the initial maximum permeability was analyzed (considered 100%). At part 1, the in-office desensitizing treatments were performed and the dentine permeability was reevaluated (%Lp-after treatment). In both studies, the specimens underwent a 5-day erosive-abrasive cycling. Each day consisted of 4 immersions in citric acid (2 minutes, 1%, pH ~ 2.6), and exposure to clarified human saliva for 60 minutes between the erosive challenges. Thirty minutes after the first and the last erosive challenge, the specimens were brushed in a brushing machine (2 N, 45 cycles) totalizing 2 minutes of exposure to the slurries formed by the mixture of toothpaste and human saliva. At part 1, a regular fluoride toothpaste was used for all groups and at part 2, the toothpastes were used according to each group. After the 5 days of cycling, the final dentine permeability (%Lp-after cycling) was evaluated. The same toothpastes tested at part 2 were also analyzed for surface loss (SL) at part 3. For this, the specimens had two parts of the surfaces protected with an adhesive tape leaving a central area exposed, and then were submitted to 5 cycles of initial erosion-abrasion. In each cycle, the specimens were immersed in artificial saliva (60 minutes, pH 7) and in citric acid (3 minutes, 1%, pH 3.6). Then, the specimens were brushed in a brushing machine (2 N, 25 cycles) with the slurries formed by the mixture of the toothpastes with artificial saliva, also totalizing 2 minutes of exposure to the slurries. For each study, the data of %Lp and SL were statistically analyzed. Part 1: The groups NUPRO and Gluma Desensitizer were the only ones that presented lower %Lp when compared to the negative control (p=0.026 and p=0.022, respectively), at both periods analyzed. Part 2: Regenerate and Sensodyne Pronamel toothpastes presented lower %Lp compared to the negative control group (p<0.05). Part 3: The groups showed different degrees of SL regardless of the claim of the toothpaste. Elmex Erosion Protection was the only group with low SL that differed from the positive control (p=0.031). It can be concluded that the in-office treatments NUPRO and Gluma Desensitizer, and the toothpastes Regenerate and Sensodyne Pronamel were able to significantly reduce the %Lp, in the model studied. Considering the SL, analyzed with an initial erosive-abrasive cycling model, toothpastes presented different degrees of SL, regardless of their claim, and Elmex Erosion Protection showed the most promising results.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-03-27T14:27:58Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laís Cristina da Silva - 2014.pdf: 4002977 bytes, checksum: c54a0aa96c3be46a95b8df8e9a407c1d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-27T15:49:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laís Cristina da Silva - 2014.pdf: 4002977 bytes, checksum: c54a0aa96c3be46a95b8df8e9a407c1d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-27T15:49:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Laís Cristina da Silva - 2014.pdf: 4002977 bytes, checksum: c54a0aa96c3be46a95b8df8e9a407c1d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-09-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The main predictive models of absorption of potential new drugs in preclinical stage are focused on the gastrointestinal mucosa, given the predominance of this pathway in drug administration. Often, the fraction absorbed (Fa) can be predicted in ex vivo models (p.e. Ussing chambers), in vitro (p.e. Caco-2 cells monolayers), intestinal perfusion studies in situ and in vivo absorption. In the present study, from an adaptation of Snapwell ™ inserts, a new ex vivo model to evaluate the permeability of substances passively absorbed is proposed. High permeable drugs (metoprolol, caffeine and theophylline) and low permeable drugs (atenolol, ranitidine and cimetidine) were maintained in an incubator at 37 ° C under constant stirring (60 rpm) and carbogenic atmosphere (5% CO2). The viability of the jejunal membrane (52 Ω.cm2 ± 8.0) was observed remaining above 20 Ω.cm2 for 120 min incubation, under all conditions evaluated, including the addition of co-solvents (1% DMSO and 1% EtOH). Values of apparent permeability coefficients obtained (Papp) were characteristic of ex vivo permeation studies (3.8 to 12.6 x10-6 cm / s). Strong correlation was observed between the data obtained here versus data intestinal perfusion in vivo (r = 0.89), as well as the fraction absorbed in humans (r = 0.85), reported in the literature. Additionally, the model features high sensitivity and accuracy compared to other commonly used models in classification permeability of substances. In line, we can infer that the MTSSNAPWELL model demonstrates, yet, potential application in studies of screening for selection of low molecular weight, such as potential phytochemicals, as well as their synthetic analogues evaluated with low amount of sample (ca 10 mg). / Os principais modelos preditivos da absorção de potenciais novos fármacos na etapa pré-clinica são focados na mucosa gastrointestinal, haja vista a predominância desta via na administração medicamentosa. Frequentemente, a fração absorvida (Fa) pode ser predita em modelos ex vivo em câmaras de Ussing, in vitro em monocamadas de células Caco-2, perfusão intestinal in situ e estudos de absorção in vivo. No presente estudo, a partir de uma adaptação do aparato Snapwell™, um novo modelo ex vivo de avaliação da permeabilidade para substâncias absorvidas por difusão passiva é proposto. Substâncias de alta (metoprolol, cafeína e teofilina) e baixa (atenolol, ranitidina e cimetidina) permeabilidade, foram mantidos em incubadora à 37OC, sob agitação constante (60 rpm) e atmosfera carbogênica (5% CO2). A viabilidade da membrana jejunal (52 ± 8,0 Ω.cm2) foi observada mantendose acima de 20 Ω.cm2 por até 120 min de incubação, sob todas condições avaliadas incluindo a adição de co-solventes (DMSO 1% e EtOH 1%). Os valores de coeficientes de permeabilidade aparente obtidos (Papp) mostraram-se característicos de estudos ex vivo de permeação (3,8 – 12,6 x10-6 cm/s). Forte correlação foi observada entre os dados aqui obtidos versus dados de perfusão intestinal in vivo (r = 0,89), assim como da fração absorvida em humanos (r = 0,85), relatados na literatura. Adicionalmente, o modelo apresenta elevada sensibilidade e precisão frente aos demais modelos comumente utilizados na classificação da permeabilidade de substâncias. Em consonância, pode-se inferir que o modelo MTSSNAPWELL demonstra, até o momento, potencial aplicação em estudos de screening para seleção de moléculas de baixo peso molecular, tais como potenciais fitofármacos, assim como seus análogos sintéticos avaliados com baixa quantidade de amostra (c.a. 10 mg).

O sulindaco é um antiinflamatório não esteroidal (AINE) classificado quimicamente como ácido carboxílico, da classe dos acetatos, que inibe de forma não seletiva a cicloxigenase 1 e 2. Terapeuticamente, é utilizado como agente analgésico e antiinflamatório para o tratamento de sintomas da artrite reumatóide aguda e crônica, osteoartrite e espondilite anquilosante, no entanto, seu uso não está restringido somente a estas patologias, pois apresenta atividade quimiopreventiva, sendo atualmente também utilizado para este fim, apesar de inúmeros relatos de toxicidade gastrointestinal e hepática terem sido relatados na literatura. Ele é ingerido como um pró-fármaco, e por reações de biotransformação hepática origina um metabólito reduzido (sulindaco sulfeto, ativo farmacologicamente) e outro oxidado (sulindaco sulfona, inativo). Para avaliar os efeitos do sulindaco e seus metabólitos, foram realizados estudos in vitro em mitocôndrias isoladas de fígado de rato, para explorar aspectos mecanísticos de toxicidade mitocondrial, e ensaios com linhagem celular de hepatoma humano HepG2, para avaliar seus efeitos após metabolização, uma vez que estas células mantém enzimas responsáveis pelas reações de biotransformação de fase I e II. Nossos resultados demonstram que o sulindaco sulfeto estimula a respiração de estado 4 e promove a liberação de cálcio pré-acumulado pela organela de maneira concentração-dependente, sendo evidente o efeito desacoplador sobre a fosforilação oxidativa, refletidos na diminuição da viabilidade celular em associação com a diminuição do conteúdo de ATP, provocado pela dissipação do potencial de membrana mitocondrial, sugerindo um mecanismo protonoforético de desacoplamento, responsável pela toxicidade deste antiinflamatório. Além disso, foi observado o inchamento das mitocôndrias em meio energizado, condição que ocorre independente de cálcio presente no meio reacional. Este evento foi parcialmente sensível a ciclosporina A e Mg2+, teve prevenção total com a adição de BHT e insensibilidade a outros moduladores, como ADP, ATP, DTT e NEM. Os resultados não condizem com a transição de permeabilidade mitocondrial clássica, uma vez que é dependente de cálcio, e o mecanismo de prevenção deste efeito obtida com a adição de BHT é desconhecido, pois não foi observada a indução de formação de radicais livres nos dois modelos experimentais utilizados. No entanto, a indução de intumescimento mitocondrial pode contribuir para seus efeitos tóxicos. O sulindaco e o sulindaco sulfona não apresentaram quaisquer efeitos descritos para o sulindaco sulfeto, indicando que somente o metabólito farmacologicamente ativo é responsável pelos efeitos tóxicos observados. A biotransformação por reações de Fase I e II podem contribuir para a toxicidade in vivo, por originarem o metabólito reduzido, e como o sulindaco é utilizado em terapias que envolvem uso por tempo prolongado, é prudente realizar um monitoramento da função hepática antes e durante o período de tratamento, no sentido de prevenir complicações do uso na terapia convencional / Sulindac is a nonsteroidal anti-inflammatory drug (NSAID) known to inhibit non-selectively ciclooxygenases (COX) 1 and 2. Sulindac is therapeutically used as anti-inflammatory and analgesic in the symptomatic treatment of acute and chronic rheumatoid arthritis, osteoarthritis, and ankylosing spondylits. In addition to this property, a role in the prevention/regression of colonic carcinogenesis, has been described for both sulindac and metabolites. Nevertheless, its therapeutic use has been limited because of its toxicity to the gastrointestinal tract and liver, reported in the literature. Sulindac is a prodrug that is ?in vivo? metabolized to its pharmacological active metabolite, sulindac sulfide and its pharmacological inactive one, sulindac sulfone. In order to assess the effects of sulindac and its metabolites, we used ?in vitro? studies with isolated rat liver mitochondria, to evaluate the aspects of its toxicity in mitochondria; and studies with human hepatoma cell line (HepG2), to evaluate its affects after biotransformation. The present study shows that sulindac sulfide, but not sulindac sulfone or sulindac itself, cause mitochondrial uncoupling, releasing pre-accumulated Ca2+ from the organelle, and decrease Hep-G2 cell viability in an apparent association with cellular ATP depletion resulted from mitochondrial uncoupling-associated membrane potential dissipation. We therefore propose mitochondrial uncoupling by sulindac sulfide as a potential mechanism for the well established toxicity of sulindac, at least to the liver in humans. It was also observed a mitochondrial swelling in energized media that can occur without dependence on the calcium present in the media. This event was partial inhibited by CsA and Mg2+, and completely inhibited with the addition of BHT. It did not show any inhibition with the addition of ADP, ATP, DTT or NEM. These results can not be associated to the classical mitochondrial permeability transition that is dependent to calcium, and the mechanism of inhibition observed with BHT is not known, since it was not observed any production of free radicals in our models, but the swelling observed can also contribute to the toxic effects observed. The sulindac itself and the sulfone metabolite did not show any toxic effect observed for the sulfide form, indicating that just the pharmacological active metabolite is responsible for the toxic effects. The biotransformation (phase I and II reactions) can contribute to sulindac toxicity, because they generate the reduced form. Sulindac is also used in long term treatment, so it is necessary the monitoring of the hepatic function is necessary before and during the treatment, in order to prevent any further complication.

Ácidos graxos livres (FFA) são importantes mediadores do transporte de prótons através de membranas. Porém, pouco se sabe sobre a influência estrutural tanto dos FFA como do ambiente lipídico na translocação de prótons através de membranas. Tanto os efeitos do comprimento da cadeia e número de insaturações dos FFA como a composição da membrana foram analisados por medidas elétricas em bicamadas lipídicas planas. Condutância a prótons (GH+) e condutância de vazamento (Gleak) foram calculadas a partir de medidas de voltagem em circuito aberto e de corrente de curto-circuito obtidas através de um eletrômetro ou um amplificador de patch-clamp (modo de voltage-clamp). Nossos resultados mostram que FFA com cis-insaturações causam um efeito mais pronunciado no transporte de próton quando comparados com FFA saturados ou trans-insaturação. Colesterol e cardiolipina diminuem Gleak de membranas. Cardiolipina também diminui GH+. Esses efeitos indicam uma dupla modulação do transporte de prótons: pelo mecanismo de flip-flop dos FFA e por uma via difusional simples adicional. / Free fatty acids (FFA) are important mediatiors of proton transport across membranes. However, little is known about the structural influence of both FFA and the membrane environment have in proton translocation across phospholipid membranes and by which means this influence is brought about. Both the effects of FFA chain length and insaturation and membrane composition on proton transport have been addressed in this study by electrical measurements in planar lipid bilayers. Proton conductance (GH+) and leak conductance (Gleak) were calculated from open-circuit voltage and short-circuit current measurements obtained using either an electrometer or a patch-clamp amplifier (voltage-clamp mode). We found that cis-unsaturated FFA caused a more pronounced effect on proton transport as compared to saturated or trans-unsaturated FFA. Cholesterol and cardiolipin decreased Gleak. Cardiolipin also decreased GH+. These effects indicate a dual modulation of protein-independent proton transport by FFA through flip-flop and by an additional simple diffusional pathway.

Orientadores: Anibal Eugênio Vercesi, Helena Coutinho Franco de Oliveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Aplicadas / Made available in DSpace on 2018-08-24T17:38:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moraes_Audreyde_M.pdf: 2287376 bytes, checksum: 667ac52246453deec2cd72f05541e70c (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital quando liberada / Abstract: Note: The complete abstract is available with the full electronic document / Mestrado / Fisiopatologia Médica / Mestra em Ciências

Orientadores: Anibal Eugenio Vercesi, Nadja Cristhina de Souza Pinto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T03:45:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ravagnani_FelipeGustavo_D.pdf: 7335132 bytes, checksum: 7043cdada57a4c0242520d7fcb95daeb (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O número de indivíduos que sofrem com patologias associadas ao consumo abusivo de etanol tem aumentado significativamente no último século. Como consequência desse fato, os custos associados ao tratamento do alcoolismo, bem como das doenças associadas a ele também têm aumentado, onerando o sistema de saúde e se tornando um problema de saúde pública de grande relevância atualmente. Os mecanismos moleculares que desencadeiam muitas dessas doenças não estão completamente esclarecidos. O tecido hepático é o mais afetado pelo etanol e as mitocôndrias têm sido apontadas como alvos cruciais na toxicidade hepática induzida pelo álcool. Logo, o objetivo desse trabalho foi investigar como o consumo de etanol afeta o estado redox e o metabolismo mitocondriais no fígado. Ratos Wistar machos adultos jovens e de meia-idade receberam ad libitum solução alcoólica 25% (v/v) como única fonte de líquido. Os grupos controle receberam somente água. Ambos os grupos receberam ração ad libitum. Mitocôndrias hepáticas foram isoladas usando técnicas padrão. O consumo de ração e de líquidos foi significativamente menor em animais que ingeriram álcool, resultando em menor ganho de massa corpórea nos protocolos utilizados. As mitocôndrias dos animais que consumiram etanol apresentaram menores níveis de respiração em condição basal e quando energizadas com substratos respiratórios. A atividade e os níveis protéicos de citocromo c oxidase foi menor nos grupos tratados com etanol. Independente da duração do período de tratamento, mitocôndrias hepáticas de animais que ingeriram álcool foram menos susceptíveis à transição de permeabilidade mitocondrial induzida por cálcio, quando comparadas às mitocôndrias dos animais do grupo controle. Esse efeito foi revertido pela adição de oxidantes de nucleotídeos de piridina (acetoacetato, diamida ou tert butil-hidroperóxido) ou em mitocôndrias desacopladas. Também houve aumento em nucleotídeos de piridina na forma reduzida e aumento na razão NAD(P)H/NAD(P)+ em mitôndrias hepáticas de ratos consumidores de etanol. Em concordância a esses dados, houve aumento na capacidade de retenção de cálcio, processo que é dependente do estado redox intramitocondrial. Por outro lado, não houve diferença na produção de espécies reativas de oxigênio entre os grupos controle e tratados com álcool. A atividade de glutationa peroxidase e as quantidades de GSH e de GSSG também não sofreram alterações. Entretanto, houve redução nos níveis de DNA mitocondrial nos tratamentos agudos, porém com tendência para retornar aos níveis normais nos tratamentos crônicos, indicando uma resposta adaptativa à injúria induzida pelo etanol. Em conjunto, nossos resultados indicam que o consumo de etanol modula o estado redox mitocondrial e de sistemas antioxidantes, prevenindo a abertura do poro de transição de permeabilidade mitocondrial. A presença desse xenobiótico no fígado também altera significativamente os níveis de NADP reduzido, agente redutor final para o sistema glutationa redutase/peroxidase que detoxifica H2O2 na matriz mitocondrial. Além disso, a resposta adaptativa ao álcool observada no DNA mitocondrial pode contribuir para compreender melhor os mecanismos envolvidos no reparo de lesões a biomoléculas e os estágios iniciais de adaptação a esse xenobiótico, etapas que precedem a morte celular, hepatite alcoólica ou carcinogênese em tecido hepático exposto cronicamente ao etanol / Abstract: The number of people suffering from alcoholism has increased significantly over the last century. As a result, costs associated with treating the addiction itself as well as the associated pathologies have also increased, such that this is considered as public health issue. Furthermore, the molecular events leading to several of these diseases are not yet clearly understood. Hepatic tissue is the most affected by alcohol, and mitochondria have been suggested to be a crucial target in alcohol-induced liver toxicity. Thus, the aim of our study was to investigate how ethanol consumption affects the redox state and mitochondrial metabolism in the liver. Young adult and middle-aged male Wistar rats were given a 25 % (v/v) ethanol solution as the only source of drinking water. Control groups received water only. Liver mitochondria were isolated using standard techniques. Food and water intake was significantly lower in alcohol-drinking rats, resulting in lower weight gain during the treatment regimes. Mitochondria from the alcohol-drinking group had lower respiration under levels in basal condition, when energized by substrates feeding electrons into complexes I and IV. Cytochrome c oxidase activity and protein levels were lower in the alcohol group as well. Additionally, regardless of the length of the treatment, liver mitochondria from the alcohol-treated animals were more resistant to Ca2+-induced mitochondrial permeability transition (MPT), when compared to mitochondria from control animals. This effect was abrogated by oxidizing agents of pyridine nucleotides (acetoacetate, diamide or tert butylhydroperoxide) or in uncoupled mitochondria. We also found that liver mitochondria from the alcohol-drinking rats had a more reduced pyridine nucleotide pool and higher NAD(P)H/NAD(P)+ ratios. In addition, Nampt (an enzyme of the NAD+ synthetic pathway) protein levels did not differ after alcohol consumption. Accordingly, the calcium retention capacity of the isolated mitochondria, which is dependent upon intramitochondrial redox state, was higher in the alcohol group. On the other hand, levels of reactive oxygen species showed no differences between the control and alcohol groups, both in mitochondria and in splenic lymphocytes. Glutathione peroxidase activity and the amounts of GSH and GSSG were also not changed. However, mitochondrial DNA levels were decreased in the short term treatments, but tended to go back up to normal levels in the chronic treatments, indicating an adaptative response to ethanol-induced injury. Together, our results indicate that ethanol consumption modulates the mitochondrial redox state and the antioxidant systems, protecting against Ca2+-induced mitochondrial pore transition permeability opening. The presence of this xenobiotic can significantly change the levels of reduced NADP, the ultimate reducing agent in the gluthatione reductase/peroxidase system that detoxifies H2O2 in the mitochondrial matrix. In addition, the adaptative response to ethanol, seen in mitochondrial DNA, may contribute to further understand the mechanisms related to lesions in biomolecules and the initial steps that preceed cell death, alcoholic hepatitis or carcinogenic process in hepatic tissue exposed chronically to ethanol / Doutorado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Doutor em Fisiopatologia Medica