In the early 1920s, Otto Warburg demonstrated that tumor cells have a capacity to convert glucose and other substrates into lactic acid instead of CO2 and water, even under aerobic conditions. Consequently, Warburg assumed that the intracellular pH (pHi) of tumor was acidic. However, later studies have shown that maintenance of pHi within a pH range of 7.0-7.2 is necessary for normal cellular proliferation and that the extracellular pH (pHe) is partially acidic in solid tumors. A low pHe may be an important factor inducing invasive behavior in tumor cells. Research into causes and consequences of this acid pH of tumors are highly dependent on accurate, precise and reproducible measurements. Techniques for measuring tissue pHi and pHe have undergone great changes since 1950s. From microelectrode and dye distribution studies, measurement of pH underwent a revolution with the advent of pH-sensitive dyes that could be loaded into the cytosol. Further significant advances have come from the measurement of cell and tissue pH in whole organisms by magnetic resonance spectroscopy (MRS), magnetic resonance imaging (MRI) and pH-sensitive Positron Emission Tomography (PET) radiotracers.

Plyšinių jungčių kanalai yra sudaryti iš koneksinų baltymų, kurie yra randami įvairiuose audiniuose ir dėka jų ląstelės gali keistis metabolitais bei elektriniais signalais. Plyšinių jungčių kanalai pasižymi dideliu jautrumu viduląsteliniam pH. Šiame darbe tyrėme įvairių inhibitorių poveikį homotipinių plyšinių jungčių, sudarytų iš Cx26, Cx30.2, Cx36, Cx40, Cx43, Cx45, Cx46, Cx47 ir Cx50 laidumui bei šio poveikio priklausomybę nuo viduląstelinio pH.. Plyšinių jungčių blokatoriais buvo pasirinktos kelias skirtingas farmakologines grupes atstovaujančios medžiagos: ilgagrandžiai alkoholiai (heksanolis, oktanolis, nonanolis), izofluranas, meflokvinas, flufenaminė rūgštis, karbenoksolonas ir arachidono rūgštis. Pademonstravome, kad pHi pakėlimas panaudojant NH4Cl iki ~8 didino plyšinių jungčių laidumą tarp ląstelių, turinčių Cx30.2 ar Cx45, tačiau neturėjo jokios įtakos ląstelėms su Cx26, Cx40, Cx46, Cx47 ir Cx50 ir mažino laidumą tarp ląstelių su Cx36 ar Cx43. pHi padidinimas žymiai susilpnino ilgagrandžių alkoholių, izoflurano ir meflokvino poveikį Cx45 plyšinių jungčių laidumui ir neturėjo įtakos flufenaminės rūgšties, karbenoksolono ir arachidono rūgšties poveikiui. Taip pat parodėme, kad nuo pHi priklauso oktanolio poveikio Cx45 plyšinių jungčių laidumui galingumas, t.y., pusinė blokavimo koncentracija IC50 buvo 0.1, 0.25 ir 2.68 mM atitinkamai prie pHi 6.9, 7.2 ir 8.1. Manoma, kad pH poveikis plyšinių jungčiu laidumui pasireiškia protonams jungiantis su koneksino baltymo... [toliau žr. visą tekstą] / Gap junction channels formed from connexin proteins provide a direct pathway for electrical and metabolic cell-cell communication exhibiting high sensitivity to intracellular pH. We examined pHi-dependent modulation of junctional conductance of GJs formed of Cx26, Cx30.2, Cx36, Cx40, Cx43, Cx45, Cx46, Cx47 and Cx50 by reagents representing several distinct groups of uncouplers, such as long carbon chain alkanols, arachidonic acid, carbenoxolone, isoflurane, flufenamic acid and mefloquine. We demonstrate that alkalization by NH4Cl to pH≈8 increased coupling in cells expressing Cx30.2 and Cx45, yet did not affect coupling of Cx26, Cx40, Cx46, Cx47 and Cx50 and decreased it in Cx43 and Cx36 gap junctions. Unexpectedly, cells expressing Cx45, but not other connexins, exhibited full coupling recovery after alkalization with NH4Cl under the continuous presence of alkanols, isoflurane and mefloquine. There was no coupling recovery by alkalization in the presence of arachidonic acid, carbenoxolone and flufenamic acid. In cells expressing Cx45, IC50 for octanol was 0.1, 0.25 and 2.68 mM at pHis of 6.9, 7.2 and 8.1, respectively. Histidine modification of Cx45 protein by N-bromosuccinimide proportionally reduced the coupling-promoting effect of NH4Cl as well as uncoupling effect of octanol. This suggests that long chain alkanols and some other uncouplers may act through the formation of hydrogen bonds with the as-of-yet unidentified histidine/s of the Cx45 gap junction channel protein... [to full text]

Mediante a técnica de espalhamento de raio-X a baixos ângulos por macromoléculas em solução, estudou-se as variações de forma e tamanho da crotamina, proteína básica e neurotóxica do veneno das cascavéis (crotalus durissus terrificus), em diferentes condições de pH e uma concentração de 10% visando a determinação dos valores do raio de giro. Este raio, RG, é definido como RG = (&#8747vr2 &#961 rσ dvσ) 1 &#8260 2 onde v é o volume da macromolécula, r o módulo do vetor posição r&#963 com origem no centro de massa, &#961 (r&#963) a densidade eletrônica e n o número de elétrons da macromolécula. Este parâmetro não conduz obviamente ao conhecimento completo da estrutura da macromolécula, mas a sua determinação possibilita estudo de variações conformacionais de forma relativamente simples em sistemas com condições semelhantes às biológicas. Os valores do raio de giro foram determinados mediante gráficos de Guinier (Log JN(s) vs s2, onde s é o módulo do vetor posição do espaço recíproco e JN(s) a intensidade normalizada e livre de espalhamento parasita). Preliminarmente, foi feito um estudo com oxi-hemoglobina, Insulina e hemoglobina de caramujo, por apresentarem características semelhantes às da crotamina, isto é, serem do tipo globular e de forma aproximadamente esférica com o objetivo de familiarizar-se com a técnica experimental e testar a aparelhagem. Os valores de raio de giro deduzidos para a oxi-hemoglobina RGOX= 23.9 &#177 0.7 (A &#176), Insulina RGI= 18.4 &#177 0.5 (A &#176), e hemoglobina de caramujo RGhc= 92 &#177 2 (A&#176), concordam satisfatoriamente com resultados previamente encontrados na literatura. Os valores de raio de giro medido para as diferentes soluções de crotamina encontram-se em bom acordo com a teoria e com o valor do raio de giro esperado de crotamina REC= 9.7 A&#176 / The small angle x-ray scattering technique was used in order to determine the radius of gyration of crotamine, a basic and neurotoxic protein from rattle snake venom, in 10% solutions at different PHs. The radius of gryration, RG is defined as: RG = (&#8747vr2 &#961 rσ e dvσ) 1 &#8260 2 Where: v is the volume of the macromolecule, r is the modulus of the position vector r with origin at the center of mass, &#961 (r&#963) is the electronic density and n the number of electrons of the macromolecule. This parameter does not give a complete information about the structure of the macromolecule but it is possible to get information about conformation to close to the biological ones. The values of the radius of gyration were fdetermined by means of the Guinier graphics (Log JN(s) vs s2, where s is the magnitude of the scattering vetor and JN(s) is the normalized intensity. In order to get familiar wi th the experimental technique and to test the equipment the study of oxihaemoglobin, Insulin and sea-mail hemoglobin was done. This proteins are very similar to crotamine in the sense that they are globular type and almost of the same spherical shape. The values of the radius of gyration obtained agree very well with the reported ones: Oxihaemoglobin RGOX= 23.9 &#177 0.7 (A &#176), Insulin RGI= 18.4 &#177 0.5 (A &#176), and sea-mail hemoglobin RGhc= 92 &#177 2 (A&#176). The values od the radius of gyration measured for the different solution of crotamine are in good agreement with the calculated and with the expected value REC= 9.7 A&#176

A relação entre halitose, pH da saliva e da saburra lingual frente ao uso de enxaguantes orais ainda não é totalmente conhecido. O objetivo deste estudo foi avaliar o pH da saliva e da saburra lingual em pacientes com saúde oral íntegra e halitose fisiológica através de um pHmetro analógico e um digital e de fitas indicadoras de pH, antes e imediatamente após utilização de diferentes enxaguantes orais e 30 minutos após o bochecho; avaliar o pH dos diferentes anti-sépticos; avaliar se há diferença nas medições do pH entre os pHmetros analógico e digital; avaliar as opiniões dos pacientes em relação ao enxaguante utilizado e relacionar as possíveis alterações do pH a parâmetros de halitose. Foram avaliados 50 pacientes divididos em 5 grupos, com bochechos de 5 diferentes soluções clorito de cetilpiridínio associado ao cloreto de sódio (Saúde Bucal®), Triclosan (Colgate Total Plax®), solução enzimática (Biotène Mouthwash®), óleo essencial (Listerine®) e água destilada (placebo). Os pacientes foram submetidos a duas consultas, sendo que a segunda ocorreu no período da manhã, em jejum. Na primeira, foi realizado exame clínico; na segunda a coleta da saliva, análise do pH e aplicação do questionário. Os resultados foram analisados utilizando-se o teste de análise de variância a dois critérios, teste t pareado e teste de Tukey (p<0,05), onde se observou que os enxaguantes Colgate Total Plax® e Listerine® aumentaram o pH da saliva imediatamente após o bochecho e o Biotène Mouthwash® diminuiu o pH da saliva e da saburra lingual. Pôde-se observar também que as quatro marcas comerciais de soluções para bochecho testadas apresentaram pH ácido e que o pHmetro analógico forneceu uma média de valores maiores que o pHmetro digital. Os enxaguantes de maior aceitação pela população estudada foram o Saúde Bucal® e o Biotène Mouthwash®. / The relationship between halitosis, saliva and tongue coat pH front by use of mouthwashes is not yet totally known. The aim of this work was to evaluate saliva and tongue coat pH in oral healthy patients with morning breath through an analog and a digital pHmeter and color pH indicators, before and immediately after use of different mouthwashes and 30 minutes after rinsing; verify different mouthwashes pH; evaluate if there is difference in pH measurements between analog and digital pHmeters; evaluate the patients opinions about the mouthwashes and relate the possible pH alterations to parameters of halitosis. 50 patients were allocated in 5 groups, with 5 different solutions rinses - Cetilpiridine chloride associated with sodium chloride (Saúde Bucal®), Triclosan (Colgate Total Plax®), enzymatic solution (Biotène Mouthwash®), essential oil (Listerine®) and distilled water (control). The patients had been submitted to two exams; the second one occurred in the morning period, without food and drink. In the first exam, the patients were submitted to clinical examination; in the second one, saliva collection, pH analysis and questionnaire application were performed. The data was analyzed by means of the ANOVA two criteria test, paired t-test and Tukey test (p<0,05), which showed that Colgate Total Plax® and Listerine® had increased saliva pH immediately after rinsing and Biotène Mouthwash® reduced saliva and tongue coat pH. We also observed that the four commercial marks of mouthwashes tested had presented acid pH and that analog pHmeter has offered bigger average values that digital pHmeter. The mouthwashes with best acceptance for the studied population had been Saúde Bucal® and Biotène Mouthwash®.

O flúor tem um papel importante na estrutura dentária diminuindo a desmineralização e potencializando a remineralização. É fundamental conhecer o comportamento dos materiais restauradores no que diz respeito a liberação de flúor, não só em água deionizada, mas também em condições de desafio ácido. O objetivo desse trabalho foi avaliar a liberação de flúor de 6 materiais restauradores, em dois meios de imersão, água deionizada e sistema de ciclagem de pH entre, por 15 dias. Os materiais utilizados foram o Vitremer(VIT), o Dyract (DYR), o Ariston (A), o Tetric Ceram (TET), o Definite (DEF) e o Z 100. Para cada material foram confeccionados 16 corpos-de-prova na forma de discos (11 mm de diâmetro e 1,5 mm de espessura), os quais foram armazenados individualmente em 4 ml de cada solução, sendo 8 para cada meio de imersão. Na ciclagem de pH, o material era mantido 6 horas na solução desmineralizante e 18 horas na solução remineralizante. As soluções foram trocadas diariamente e os espécimes armazenados durante 15 dias. A liberação de flúor foi medida em 0,5 ml de solução adicionada a igual volume de TISAB II. Para os materiais Z 100, DEF e TET em água deionizada, a liberação de flúor foi obtida pela técnica da difusão facilitada por HMDS, nos períodos de 1, 7 e 15 dias. A análise da concentração de flúor foi medida por eletrodo específico para flúor, acoplado ao aparelho analisador de pH/F¯. Todos os materiais liberaram mais flúor no sistema de ciclagem de pH, exceto o Ariston. O pico de liberação foi maior no 1º dia, declinando do 2º dia em diante, e alcançando níveis baixos e constantes a partir do 7 º ao 15º dia. Os resultados foram submetidos a análise de variância a 3 critérios e ao teste de Tukey (p<0,05), para as comparações múltiplas. A liberação total no período do experimento em ordem decrescente, em água deionizada, em µgF¯/mm2 , foi A (3,6603), VIT (1,7529), DYR (0,2481), TET (0,0140), DEF (0,0086) e Z 100 (0,0020) e em ciclagem de pH, VIT (3,4366), A (2,1422), DYR (1,0691), TET (0,0297), Z 100 (0,0067) e DEF (0,0063). Assim concluímos que os materiais apresentaram padrão semelhante de liberação de flúor, exceto o Ariston, que mostrou comportamento estável e liberação constante durante os 15 dias, nos dois meios de imersão. Na ciclagem de pH, houve uma tendência de liberação de flúor de todos os materiais. / The fluoride has an important function in the dental structure reducing the desmineralization and increase the remineralization. It is fundamental to know the behavior of the restoratives materials relative the fluoride release, not only in deionized water, but also in conditions of acid challenge. The aim of the present study was to determine the fluoride release from 6 restoratives materials, in two storage solutions: deionized water and pH-cycling system solution over 15 days. 16 discs (11 mm diameter and 1,5 mm thickness) of materials, Vitremer (VIT), Dyract (DYR), Ariston pHc (A), Tetric Ceram (TET), Definite (DEF) and Z 100 were prepared and suspended individually in 4 mL of each solution, in number of 8 for each medium which was changed every 24 hours. In the pH-cycling system the specimens were immersed 6 hours in the demineralizing solution (pH 4,3) and 18 hours in remineralizing solution (pH 7,0). The solutions were changed daily during a period of 15 days. The fluoride release was determined after buffering the solutions with an equal volume of TISAB II. For the materials Z 100, DEF, TET in deionized water, the fluoride concentration was obtained by the microdiffusion method (Taves) in the periods of 1, 7 and 15 days. The analysis of the fluoride ion concentration in the solutions was measured using a fluoride ion sensitive electrode and a potent iometer ion-analyzer pH/F¯. The results of fluoride concentration in solutions eretransformed into released fluoride amount per material area (µgF¯/mm 2 ). All the materials released more fluoride in the pH-cycling system, exception Ariston. The release peak was larger in the 1st day, dropped at the 2nd and then remained constant from 7º to 15th day. The Ariston showed stable behavior, with small variations along the experiment. The results were submited to statistical analysis by ANOVA and the diferences between the treatments by the Tukey test (p<0,05). In deionized water, fluoride release in mgF¯/mm 2 was A(3,6603), VIT(1,7529), DYR (0,2481), TET (0,0140), DEF (0,0086) and Z 100 (0,0020) and, in pH-cycling system VIT (3,4366), A (2,1422), DYR (1,0691), TET (0,0297), Z 100 (0,0067) and DEF (0,0063), during the whole experimental period.

Este estudo in vitro avaliou a variação do pH de géis clareadores à base de peróxido de hidrogênio de diferentes concentrações e seu efeito sobre o esmalte bovino submetido à escovação simulada. Fragmentos de esmalte de dentes bovinos com 1,5cm x 0,5cm x 0,4cm, receberam o tratamento clareador e a escovação em uma metade, ficando a outra como controle; foram divididos aleatoriamente em nove grupos (n=10): G1 = controle; G2 = Whiteness HP 35% - 3 sessões (3x15); G3 = Whiteness HP 35% - 3 sessões (1x45); G4 = Lase Peroxide 35% - 1 sessão (4x730) + ativação com luz híbrida LED/Laser; G5 = Lase Peroxide 25% - 1 sessão (4x730) + ativação com luz híbrida LED/Laser; G6 = Lase Peroxide 15% - 1 sessão (4x730) + ativação com luz híbrida LED/Laser; G7 = Whitegold Office 35% - 3 sessões (1x45); G8 = Whiteness HP Blue Calcium 35% - 3 sessões (1x40); G9 = Whiteness HP Blue Calcium 20% - 3 sessões (1x50). A rugosidade aritmética (Ra) inicial, após clareamento e após escovação foi determinada pela média (µm) de 3 leituras com o rugosímetro Hommel Tester T 1000. Os valores de pH foram determinados pelo peagômetro digital Sentron Model 1001 nos tempos inicial e final independente do número de aplicações ou de sessões. Os espécimes foram armazenados em saliva artificial por 7 dias, submetidos à 100.000 ciclos de escovação simulada. Após 24 horas o desgaste superficial foi determinado (µm) novamente com o rugosímetro Hommel Tester T1000. Os dados da análise de pH foram submetidos a ANOVA um critério e teste de Tukey (p<0,05) com diferenças estatísticas. O teste de Kruskal Wallis e Dunn (p<0,05) aplicado sobre a variação da rugosidade e desgaste apontou diferenças estatísticas entre os grupos. Os géis clareadores apresentaram uma tendência de diminuição dos valores de pH do tempo inicial para o tempo final. Os géis clareadores apresentaram um tendência de diminuição dos valores de pH do tempo inicial para o tempo final, assim como os géis com valores de pH mais próximos dos valores ácidos tendem a levar a superfície do esmalte à uma maior susceptibilidade ao aumento da rugosidade e desgaste superficial, quando submetido à escovação simulada. / This in vitro study evaluated the variation of the pH of bleaching gels, roughness and the wear on bovine enamel, after various in office bleaching protocols and brushing. Ninety fragments of enamel, measuring 15mm x 5mm, were randomly divided into nine groups (n=10) according to bleaching procedure: G1: control; G2: 35% hydrogen peroxide (HP) (Whiteness HP, FGM) 3x15, 3 sessions with one week between each; G3: 35% HP (Whiteness HP, FGM) 1x45, in 3 sessions; G4: 35% HP (Lase Peroxide, DMC) + hybrid light (HL) (LED/Diode laser, Whitening Lase II, DMC Equipments), 4x730 (6 of HL activation), in 1 session; G5: 25% HP (Lase Peroxide II, DMC) + HL, 4x730 (6 of HL activation), in 1 session; G6: 15% HP (Lase Peroxide Light, DMC) 4x730 (6 of HL activation), in 1 session; G7: 35% HP (Whitegold Office, Dentsply) 3x15, in 3 sessions; G8: 35% HP (Whiteness HP Blue Calcium, FGM) 1x40, in 3 sessions; G9: 20% HP (Whiteness HP Blue Calcium, FGM) 1x50, in 3 sessions. The pH values were determined using a pH meter (Sentron Model 1001, Sentron) during the initial and final gel application times. The surface roughness (Ra) was evaluated with a rugosimeter (Hommel Tester T 1000) before and after bleaching, and after brushing (100,000 strokes). The rugosimeter was used to evaluate wear surface after 24 hours brushing. The data were submitted to one-way ANOVA and Tukey tests for pH values, Kruskall Wallis and Dunns test in relation to wear and surface roughness (p<0.05). It could be concluded that the pH values tended to decrease from the initial to final bleaching. After tooth brushing, bleaching procedures with highly acidic products provided a significant increase in enamel wear and surface roughness.

O presente trabalho avaliou a possibilidade de duas diferentes quantidades de melão, com alto teor de açúcares, em causar acidose ruminal em ovinos não adaptados. Foram utilizados 12 ovinos mestiços Santa Inês, machos, providos de cânula ruminal, com 25 kg de P.V. e 8 m de idade, que nunca receberam rações concentradas, frutas ou raízes, anteriormente. Os animais foram mantidos em baias coletivas com dieta basal composta de volumoso (feno de capim Cynodon dactylon - Coast cross) na base de 2,3% de seus pesos vivos, providos de água e sal mineralizado à vontade. Após 30 dias de adaptação, os ovinos foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos iguais, assim constituídos: G1: 25% da M.S. de melão e G2: 75% de melão. O melão inteiro, sem as sementes, com 12º Bx de grau Brix (120 g sacarose/kg polpa e 7,8 % M.S.) foi triturado administrando-se pela cânula ruminal 130 g e 389,4 g de sacarose no G1 e G2, respectivamente, após os animais permanecerem em jejum por 12 horas. Foram realizados exames físicos, coletadas amostras de fluido ruminal e sangue nos seguintes tempos após a administração do substrato: zero, 3, 6, 12, 18 e 24 h. Os animais do G1 apresentaram durante a 3ª a 6ª h quadro de acidose ruminal por AGVs (subaguda) caracterizado por pH ruminal ligeiramente inferior a 5,6; discreto aumento no teor de ácido láctico-L, no potencial de oxirredução (POR) e no tempo de redução do azul de metileno (RAM) ruminais, sem que os animais manifestassem quaisquer sintomatologia clínica. Os animais do G2 desenvolveram quadro de acidose láctica ruminal, evidenciado pelo baixo pH (< 5,0), altos teores de lactato-L, valores de POR e da RAM, aumento temporário de osmolaridade ruminal, porém os animais não se tornaram desidratados, e apresentaram uma intensa diurese enquanto perdurou marcada hiperglicemia. Os animais evoluíram para uma moderada acidose metabólica sistêmica. A taquicardia e a taquipnéia foram provocadas pelo aumento da circunferência abdominal, devido ao grande volume de conteúdo administrado pela cânula, não sendo no caso da taquicardia gerada pelo aumento do volume globular, oriunda da desidratação e encontrada classicamente nesse tipo de acidose. A diminuição dos movimentos do rúmen foi correspondente a queda no pH ruminal e elevação dos teores de lactato-L no rúmen. O baixo pH e os altos valores de POR interferiram no aumento do tempo da RAM. Não se recomenda o oferecimento de altas quantidades de melão (75% da M.S.), porém acredita-se que os ovinos não terão problema de ingerir a quantia de 25% da M.S., desde que se tomem cuidados para a adaptação gradual dos animais ao substrato. / The present study evaluated the possibility of ruminal acidosis being caused by two distinct amounts of melon with high sugar content on non-adapted sheep. Twelve crossbreed Santa- Inês sheep with rumen cannula were used. Animals were male, 8 months old, 25 kg B. W., and had never eaten concentrated feed, fruits or roots of any kind before. They were kept in collective pens and their basal diet was composed on 2.3% of their B. W. of Coast cross (Cynodon dactylon) hay, water, and mineral salt Ad libitum. After 30 days of adaption, animals were divided in two groups: G1: 25% of D. M. of melon; and G2: 75% of D. M. of melon. The animals fasted for 12 hours. Then the whole melon, without seeds, 12º Bx (120 g sucrose/kg pulp and 7.8% D. M.) was crushed and administered through the rumen cannula, it represented 130 g and 389.4 g of sucrose on G1 and G2, respectively. Physical examinations along with the collection of ruminal fluid and blood were done after the administration of the substrate at: 0, 3, 6, 12, 18, and 24 h. G1 sheep presented VFAs ruminal acidosis (sub-acute) between the 3ª and 6ª h, characterized by rumen pH slightly inferior to 5.6, discrete lactic-L acid content increase, increased redox potential (RP) and methylene blue redox (MBR) time of the ruminal fluid, and lack of clinical signs. G2 presented lactic ruminal acidosis, ruminal fluid pH < 5.0, high lactate-L content, increased RP and MBR time, increased ruminal fluid osmolarity, no dehydration, and increased diuresis during hypoglycemic period. Animals had moderate systemic acidosis. Tachycardia and tachypnea were caused by an increase on abdominal circumference, resultant of the large amount of melon administrated through the cannula. Therefore these conditions were not caused by the increased globular volume and dehydration typically found on this type of acidosis. Reduced ruminal movements frequency corresponded to decreased ruminal pH and increased Lactate-L ruminal content. Reduced rumen pH and increased RP caused the increase on MBR time. Therefore, it is not recommended offering of large amounts of melon (75% da D.M.) on the diet, though it is believed that sheep will have no problems ingesting 25% of D.M. of melon, whenever the proper gradual adaptation is performed previously.

Os ionóforos possuem papel importante como manipuladores da fermentação ruminal, principalmente por melhorar a eficiência energética e proteica nos animais ruminantes. A narasina é um ionóforo capaz de fazer controle microbiológio no ambiente ruminal. Entretanto, a literatura possui poucas informações sobre a utilização de narasina na nutrição de ovinos. O presente trabalho teve como objetivos avaliar a utilização de doses de narasina em dietas de ovinos alimentados contendo elevado teor de concentrado ou volumoso. A hipotese é que a narasina tenha a capacidade de alterar os produtos finais da fermentação ruminal, melhorando a utilização dos nutrientes e o metabolismo de nitrogênio de ovinos. No Exp I os tratamentos experimentais foram definidos de acordo com a inclusão ou não de aditivos na dieta contendo elevado teor de concentrado, sendo utilizado uma dieta Controle (C), em que não houve a inclusão de ionóforo; a adição de 25 ppm de monensina sódica (M); 5 ppm (N5); 10 ppm (N10); e 15 ppm de narasina (N15). A inclusão de 5, 10 e 15 mg de narasina/kg de MS aumentou o ganho de peso e a eficiência alimentar de cordeiros alimentados durante 56 dias com dieta contendo 90% de concentrado. No Exp II foram avaliadas as mesmas dietas do exp I. A inclusão de 5, 10 e 15 mg de narasina/kg de MS reduziu o CMS e aumentou o coeficiente de digestibilidade aparente dos nutrientes da MS, MO, PB, gordura e CNF. Além disso, após o período de adaptação houve efeito quadrático para a proporção molar de acetato e a relação acetato:propionato com o aumento das doses de narasina, entretanto, não alterou o pH ruminal. As doses de narasina reduziram linearmente a concentração de amônia no fluido ruminal. A inclusão de narasina nas dietas de borregos tendeu a diminuir o consumo de nitrogênio e reduziu a eliminação de nitrogênio pelas fezes e pela urina. No Exp III os tratamentos foram definidos pela inclusão de doses de narasina em dietas contendo elevado teor de volumoso, sendo o tratamento controle (N0: sem a adição de ionóforo) e a inclusão de 8, 16, 24 e 32 mg de narasina/kg de MS. A inclusão de 0, 8, 16, 24 ou 32 mg de narasina/kg de MS em dietas de borregos alimentados com elevado teor de volumoso não afetou o consumo de matéria seca e tendeu a aumentar linearmente o coeficiente de digestibilidade da FDN. As doses de narasina não alteraram a proporção molar de AGCC, entretanto aumentou a concentração total de AGCC e diminuiu linearmente a concentração de amonia no fluido ruminal. Com base nesses dados foi possivel concluir que a narasina pode ser utilizada em dietas de ovinos aumentando o desempenho dos animais. / Ionophores play an important role as ruminant fermentation manipulators mainly for improving energy and protein efficiency in ruminant. Narasin is an ionophore capable of making microbiological control in the ruminal environment. However, the literature has little information on the use of narasin in sheep nutrition. The objectives of this study were to evaluate the use of doses of narasin in diets of sheep fed diets containing high concentrate or forage contents. The hypothesis is that narasin has the ability to alter the final products of ruminal fermentation, improving nutrient utilization and nitrogen metabolism of sheep. In the Exp I the experimental diets were defined according of the inclusion or not of additives in the diet containing high concentrate, using a control diet (C: no ionophore); the addition of 25 mg of monensin/kg of DM (M); 5 (N5), 10 (N10) or 15 mg of narasin/kg of DM. The inclusion of 5, 10 and 15 mg of narasin / kg of DM increased the average daily gain and feed efficiency of lambs fed for 56 days on a diet containing 90% concentrate. In the Exp II were evaluated the same diets used in the Exp I. The inclusion of 5, 10 and 15 mg narasin / kg DM reduced CMS and increased the apparent digestibility coefficient of DM, OM, CP, fat and NFC. In addition, after the adaptation period there was a quadratic effect for the molar proportion of acetate and the acetate: propionate ratio with increasing doses of narasin, however, did not alter the ruminal pH. The doses of narasin linearly reduced the concentration of ammonia in the ruminal fluid. The inclusion of narasin in diets of wethers tended to reduce nitrogen consumption, and reduced the elimination of nitrogen through feces and urine. In the Exp III the experimental diets were defined by the inclusion of doses of narasin in diets containing high forage contend, being the control diets (N0: no ionophore), and inclusion of 8, 16, 24 or 32 mg of narasin/kg od DM. the inclusion of 0, 8, 16, 24 or 32 mg of narasin / kg of DM in diets of lambs fed with high volume did not affect dry matter intake and tended to linearly increase the NDF digestibility coefficient. Doses of narasin did not alter the molar ratio of AGCC, however increased the total concentration of AGCC in and decreased linearly the concentration of ammonia in the ruminal fluid. Based on these data it was possible to conclude that narasin can be use in sheep diets to improve animal performance

Dermatofitoses são comumente causadas por fungos que parasitam pele e unha de humanos, cuja propagação depende do contato entre os hospedeiros infectados e não infectados. Muitos fatores contribuem para a patogenicidade dos dermatófitos, dentre eles, a capacidade de se instalar no ambiente ácido da pele se reveste de importância. Sendo assim, para ser bem sucedido, o dermatófito precisa ter capacidade aderente, germinação e penetração rápida das hifas e, portanto, dispor de uma maquinaria metabólica que atue de forma eficiente em pH ácido. A fim de identificar genes supostamente expressos nos passos iniciais da infecção, submetemos a linhagem H6 do dermatófito T. rubrum ao pH ácido por 30 minutos e 1 hora e isolamos dessas condições experimentais os transcritos com elevada expressão, empregando a metodologia de Biblioteca Subtrativa Supressiva (SSH). Obtivemos um total de 234 unigenes cujos transcritos revelaram ampla diversidade funcional. Esses transcritos estão envolvidos em 13 processos celulares diferentes, tais como, metabolismo, defesa e virulência, síntese de proteínas e transporte celular. Desses, confirmamos por Northern blotting, os genes que expressam as proteínas carboxipeptidase S1, acetoamidase, aconitase, dessaturase, a proteína TINA, transportador de aminoácidos, fator de alongamento alfa 1, proteína ribossomal L10, e uma proteína hipotética. Nesses experimentos também foi utilizada a linhagem de T. rubrum pacC-1, que tem o seu gene pacC rompido, com o objetivo de verificar se estes genes isolados seriam regulados pela proteína PacC. O gene pacC codifica uma proteína homóloga ao regulador transcricional PacC/Rim101p da conservada via de sinalização do pH. Verificamos que o gene pacC se expressa preferencialmente em pH 8.0 e que embora o padrão de processamento da proteína PacC seja dependente do pH a forma íntegra da proteína PacC foi identificada tanto em pH ácido como alcalino. Por outro lado, o mutante pacC-1 apresentou diminuida capacidade infectiva em fragmentos de unha humana quando comparado com a linhagem selvagem. Além disto, a atividade queratínolitica do mutante também se mostrou diminuída quando comparada ao controle, confirmando o papel da proteína PacC na capacidade infectiva do T. rubrum. / Dermatophytosis is commonly caused by fungi that parasite human skin and nail, whose propagation depends on the contact between infected and noninfected hosts. Many factors contribute to the pathogenicity of the dermatophytes. Among them, the capacity to install in the skin´s acid ambient bears great importance. Thus, in order to be successful, the dermatophyte needs to have adhering capacity, fast germination and penetration of hyphae and, therefore, needs to afford a metabolic machinery which acts efficiently in acid pH. In order to identify genes supposedly expressed in the initial steps of infection, we submitted the strain H6 of the dermatophyte T. rubrum to the acid pH for 30 minutes and 1 hour and isolated, from this experimental conditions, the transcripts with high expression, employing the suppression subtractive hybridization (SSH). We obtained a total of 234 unigenes whose transcripts revealed a wide functional diversity. These transcripts are involved in 13 different cell processes, such as metabolism, defense and virulence, protein synthesis and cell transport. Among these, we confirmed through Northern blotting the genes which express the proteins carboxipeptidase S1, acetamidase, aconitase, fatty acid desaturase, NIMA interactive protein (TINA), amino acid permease, elongation factor 1-alpha, 60S ribosomal protein L10 and a hypothetical protein. In these experiments, we also used the T. rubrum pacC- 1 strain, which has its pacC gene disrupted, aiming at verifying whether these isolated genes would be regulated by the PacC protein. The pacC gene encodes a protein homologous to the PacC/Rim101p transcriptional regulator of the conserved route of pH signaling. We verified that the pacC gene is expressed preferentially in both pH, and that although the processing pattern of the PacC protein is dependent on the pH, the full form of the PacC was identified as alkaline. On the other hand, the pacC-1 mutant presented diminished infecting capacity in human nail fragments when compared to the wild strain. Moreover, the keratinolytic activity of the mutant also seemed diminished when compared to the control, confirming the role of the PacC protein in the infecting capacity of T. rubrum.

A regulação da expressão gênica é essencial para os fungos se adaptarem às adversidades ambientais, como alterações no pH extracelular, escassez de nutrientes, força iônica e oscilações de temperatura. A resposta adaptativa ao pH ambiente é bem caracterizada em fungos modelo como Aspergillus nidulans, e envolve a via de transdução de sinal constituída pelos produtos dos genes pal e pacC. No dermatófito Trichophyton rubrum, o gene pacC foi inativado, e a linhagem mutante apresentou uma diminuição na atividade das queratinases, indicando que, de alguma forma, este gene está envolvido na regulação da atividade queratinolítica deste dermatófito, e consequentemente na sua virulência e patogenicidade. Além disto, a glicosilação protéica é uma importante forma de regulação pós traducional, estruturando e estabilizando glicoproteínas que podem ser da via secretória, da parede ou da membrana celular. O processo de glicosilação protéica sofre influência do pH extracelular e da fonte nutricional. Foi ainda relatado que este tipo de regulação pós traducional também sofre influência dos genes palB e pacC, indicando que estes genes tenham um papel na glicosilação de enzimas secretadas. O objetivo deste trabalho foi analisar a influência do pH e da fonte nutricional na expressão de genes que codificam enzimas de N- e O-manosilação, e sua possível modulação pela proteína PacC no dermatófito T. rubrum. Para tanto, foi analisado, por PCR em tempo real, o perfil transcricional destes genes nas linhagens H6 (controle) e pacC-1, utilizando-se como fonte de carbono glicose, glicose e glicina ou queratina em vários tempos de cultivo, em pH 5,0 ou 8,0. A análise da expressão gênica revelou que quando a linhagem controle é cultivada em queratina em pH 5,0 ocorre um aumento da expressão da O-manosiltransferase, comparado com o cultivo em glicina com glicose e glicose. Porém, nestas mesmas condições o gene da N-manosiltransferase da linhagem mutante apresenta maiores níveis de expressão que os da linhagem controle. Em pH 8,0 pode-se notar grande semelhança entre os perfis de expressão apresentados por estes dois genes. Os resultados obtidos indicam que o gene pacC tem um papel importante no sensoriamento de nutrientes em meio ácido, modulando a expressão destas transferases, nas condições avaliadas. Estas enzimas podem ativar proteínas que atuam na hidrólise da queratina, ou mesmo formar glicoproteínas de parede celular que são essenciais na adesão do fungo à célula do hospedeiro, sugerindo um papel das manosiltransferases no processo infeccioso. / Gene expression regulation is essential for fungi to adapt to environmental adversities, such as changes in the extracellular pH, nutrient starvation, ionic strength, and temperature. The adaptive response to ambient pH is well characterized in model fungi such as Aspergillus nidulans, and involves the signal transduction pathway consisting of the products of the pal and pacC genes. In the dermatophyte Trichophyton rubrum, the pacC gene was inactivated and the mutant strain showed a decreased activity of keratinases, indicating that, somehow, this gene is involved in the regulation of the keratonolytic activity of this dermatophyte, and consequently in its virulence and pathogenicity. Moreover, protein glycosylation is an important form of post-translational regulation, playing a role in protein folding and stability of glycoproteins of the secretory pathway, cell wall or membrane. The process of protein glycosylation is influenced by extracellular pH and nutritional source. It has also been reported that this type of post-translational regulation is also influenced by the palB and pacC genes, indicating that these genes have a role in glycosylation of secreted enzymes. The objective of this study was to analyze the influence of the pH and nutritional source in the expression of the genes coding for the N-and O-manosylation enzymes, and their possible modulation by PacC in the dermatophyte T. rubrum. To this end, the transcriptional profile of these genes was analyzed, by Real Time PCR, in the H6 (control) and pacC-1 strains, using glucose, glucose with glycine, or keratin as the carbon source, in several culture times, at pH 5.0 or 8.0. Gene expression analysis showed that when the control strain is grown in keratin at pH 5.0 there is an increased expression of the O-manosyltransferase encoding gene, compared to the cultivation in glucose and glucose with glycine. However, at the same conditions the gene coding for the N-manosyltransferase presented higher levels of expression in the mutant strain in relation to the control strain. At pH 8.0 there is a great similarity between the expression profile of these two genes. The obtained results indicate that pacC gene plays an important role in nutrient sensing at acidic pH by modulating the expression of these transferases in the conditions evaluated. These enzymes can activate proteins that play roles in the hydrolysis of keratin, or even forming cell wall glycoproteins that are essential for the adhesion of the fungus to the host cell, suggesting a role of the manosyltransferases in the infectious process.