Chemoattractant agents play a crucial role in the initiation of immune responses, by regulating the traffic and function of leucocyte populations. Their receptors are therefore considered as potential targets for the development of new therapies in the fields of cancer and inflammatory diseases. ChemR23, a previously orphan receptor discovered in the laboratory, is structurally related to receptors for chemoattractant agents. It is expressed on immature myeloid and plasmacytoid dendritic cells (mDCs and pDCs respectively), as well as on adipocytes, macrophages, NK and endothelial cells. Chemerin, the endogenous ligand of ChemR23, is abundant in various human samples originating from inflammatory diseases, including pleural effusions. Chemerin is secreted as an inactive precursor, prochemerin, and is activated by the removal of six or seven amino-acids from its carboxy-terminus by serine proteases, such as as cathepsin G and elastase. Chemerin acts as a chemoattractant agent of low nanomolar potency for macrophages, immature mDCs and pDCs. It is however more active on pDCs, in line with the higher expression of ChemR23 on these cells. pDCs possess important immunoregulatory properties in lung diseases, and their ability to secrete large amounts of type I interferon (IFN) upon viral infection makes them crucial players in anti-viral immunity.<p>According to these elements, and to the role of neutrophils in the physiopathology of many inflammatory lung diseases and in the generation of active chemerin, we began in 2007 to study the role of chemerin and its receptor ChemR23 in inflammatory lung diseases. We first characterized the mouse chemerin/ChemR23 system, and described that this system was very similar to the human one, in terms of distribution, pharmacology and functional properties. We then used wild type mice (WT) and mice invalidated for the receptor (ChemR23-/-) in various models of inflammatory lung diseases, including asthma, lung fibrosis, viral pneumonia, and acute lung injury. <p>Whereas the asthma and lung fibrosis models did not allow to demonstrate a significant role of the chemerin/ChemR23 system (possibly as a result of the lack of production of active chemerin in these models), infection by either the Pneumonia Virus of Mice (PVM), the mouse counterpart of human RSV, or by a murinized H1N1 influenza strain resulted in a significantly higher mortality rate in ChemR23-/- mice as compared to their WT counterparts. Using the PVM-induced pneumonia model, we observed that the excessive mortality of knock-out mice is caused by an inadequate and excessive innate immune response characterized by a massive recruitment of neutrophils to the lungs, associated with a delayed viral clearance and lower type I IFN synthesis. This latter observation suggested an impairment of pDC recruitment, according to the important contribution of pDCs to the production of type I IFNs in viral diseases, and the role of chemerin in the recruitment of these cells. We indeed confirmed a lower recruitment of pDCs in the lung of infected ChemR23-/- mice, as compared to WT mice. However, experiments of adoptive transfert and depletion of pDCs failed to proof a link between impaired pDC recruitment and the excessive morbidity and mortality observed in ChemR23-invalidated mice. <p>In parallel, we studied the role of the chemerin/ChemR23 system in the control of innate immune responses, by using a model of acute lung injury caused by the intra-tracheal instillation of bacterial lipopolysaccharide (LPS). In this model, administration of recombinant chemerin together with LPS in WT mice resulted in a significant (about 50%) reduction of neutrophil recruitment to both lung parenchyma and airways. Assessment of pro-inflammatory cytokines and chemokines in broncho-alveolar lavage fluids confirmed this anti-inflammatory effect of chemerin, which was ChemR23-dependent, as the inflammatory response of ChemR23-/- mice was unaffected by chemerin. In our hands, chemerin does not modulate macrophage functions, in contrast to data recently published by other groups, attributing anti-inflammatory effects of chemerin or chemerin-derived peptide to the modulation of macrophage activation and phagocytosis. Other hypotheses that could take our observations into account are presently investigated, including an immunomodulatory role of chemerin on lung epithelial or endothelial cells, and/or the ChemR23-dependent recruitment of subtypes of macrophages or other myeloid cells endowed with immunosuppressive properties. <p>In conclusion, our studies characterized the mouse chemerin/ChemR23 system and highlighted the role of this system in the physiopathology of some inflammatory lung diseases. Our results suggest that the chemerin/ChemR23 system might be considered as a potential therapeutic target for the development of future anti-infectious and anti-inflammatory therapies, particularly for viral pneumonia, which represent a major public health problem, as well as for acute respiratory distress syndrome (ARDS) following severe acute lung injuries.<p> <p><p>Les agents chimioattractants jouent un rôle fondamental dans l’initiation des réponses immunes en régulant le trafic et la fonction des populations leucocytaires. Leurs récepteurs constituent dès lors des cibles d’intérêt pour le développement de traitements contre les maladies inflammatoires et le cancer. Le laboratoire d’accueil a identifié le récepteur ChemR23, exprimé à la surface des cellules dendritiques myéloïdes (mDCs) et plasmacytoïdes (pDCs) immatures, des macrophages, des cellules NK, des adipocytes, et des cellules endothéliales. Le ligand endogène du récepteur ChemR23, la chémérine, est présent en abondance dans divers échantillons pathologiques d’origine inflammatoire. La chémérine est produite sous la forme d'un précurseur inactif, la prochémérine, qui nécessite pour devenir active le clivage protéolytique de six ou sept acides aminés à son extrémité carboxy-terminale. La chémérine induit le chimiotactisme des macrophages et des DCs immatures, et en particulier des pDCs immatures en accord avec l’expression plus importante de ChemR23 par les pDCs. Les pDCs jouent un rôle immunorégulateur important en pathologie pulmonaire, en particulier dans la physiopathologie des pneumonies virales, par leur capacité à produire d’importantes quantités d’interféron (IFN) de type I.<p>Compte tenu de ces éléments et du rôle des polynucléaires neutrophiles dans de nombreuses pathologies pulmonaires, ainsi que dans la génération de chémérine active à partir de son précurseur, nous avons débuté en octobre 2007, l’étude du rôle de la chémérine et de son récepteur ChemR23 dans le contrôle des pathologies pulmonaires inflammatoires. Nous avons tout d’abord caractérisé le système chémérine/ChemR23 chez la souris et avons montré que ce système présentait des caractéristiques similaires à celles décrites chez l’homme, en termes de distribution, de pharmacologie et de propriétés fonctionnelles. <p>Ensuite, nous avons comparé des souris sauvages et invalidées pour le récepteur ChemR23 (ChemR23-/-) dans divers modèles de pathologies pulmonaires. Les modèles d’asthme et de fibrose pulmonaire induite par instillation de bléomycine ou de silice n’ont pas permis de mettre en évidence un rôle important du couple chémérine/ChemR23, peut-être en raison de l’absence de génération de forme active de chémérine dans ces modèles. En revanche, l’administration de deux agents viraux différents, le PVM (Pneumonia Virus of Mice), l’équivalent murin du RSV humain, et un virus de l’influenza H1N1 murinisé, a résulté en un taux de mortalité 40% plus élevé pour les souris ChemR23-/- par rapport à leurs homologues sauvages. En utilisant le modèle de pneumonie induite par le PVM, nous avons montré que cette différence de mortalité est causée par une réponse immune inappropriée et excessive, associée à une réduction de l’élimination du virus, ainsi qu’à un déficit de synthèse d’IFN de type I. Les pDCs, dans un contexte d’infection virale, sont capables de synthétiser d’importantes quantités d’IFN de type I, et nous avons mis en évidence un déficit relatif de recrutement en pDCs chez les souris ChemR23-/- infectées. Néanmoins, les expériences de transfert adoptif et de déplétion de pDCs n’ont pas permis de lier ce défaut de recrutement à l’excès de morbidité et de mortalité observé chez les souris ChemR23-/- infectées. <p>En parallèle, le rôle de ce couple ligand-récepteur dans le contrôle des réponses immunitaires innées a été étudié dans un modèle de pneumopathie aiguë induite par instillation intra-trachéale de lipopolysaccharide (LPS). Dans ce modèle, l’administration simultanée de chémérine recombinante avec le LPS entraîne chez les souris sauvages une diminution significative (environ 50%) du nombre de polynucléaires neutrophiles recrutés dans les voies aériennes et dans le parenchyme pulmonaire, ainsi qu’une importante diminution de synthèse de cytokines pro-inflammatoires. Cet effet anti-inflammatoire de la chémérine est dépendant de ChemR23, et ne semble pas être secondaire à un effet de la chémérine sur l’activation des macrophages, contrairement à certaines données publiées récemment par d’autres groupes. D’autres hypothèses permettraient cependant de prendre en compte ces observations, notamment un effet de la chémérine sur les cellules épithéliales et/ou endothéliales pulmonaires, ainsi que sur le recrutement de sous-populations de macrophages ou d’autres cellules myéloïdes possédant des propriétés immunosuppressives. Des expériences complémentaires ont été initiées afin de tester ces hypothèses. <p>En conclusion, après avoir caractérisé le système chémérine/ChemR23 chez la souris, nos études ont permis de mettre en évidence le rôle de ce couple ligand/récepteur dans la physiopathologie de certaines pneumopathies inflammatoires, ouvrant ainsi de nouvelles perspectives thérapeutiques, en particulier pour le traitement des pneumopathies virales, qui constituent un problème de santé publique majeur, ainsi que des syndromes de détresse respiratoire aiguë (ARDS). / Doctorat en Sciences médicales / info:eu-repo/semantics/nonPublished

La détection de la protéine prion anormale dans les tissus lymphoïdes de patients britanniques suggère qu’après exposition à l’agent de la variante de la maladie de Creutzfeldt-Jakob (vMCJ) plus de 99% des contaminations pourraient demeurer cliniquement silencieuses. Ces données soulignent un risque de transmission secondaire par transfusion sanguine ce qui nous a conduit à une étude expérimentale. En parallèle des formes classiques de vMCJ, nos modèles murins et simiens de retransmission ont mis en evidence des phenotypes atypiques. Ces phénotypes échappent actuellement aux critères de diagnostic puisqu’aucune protéine prion anormale (PrPres) n’est détectée.Nos travaux ont eu pour but principal d’évaluer expérimentalement le risque sanguin au travers d’études de retransmission et de caractérisation de la replication des souches classiques et atypiques aux niveaux périphérique et central.Nous observons une très forte hétérogénéité dans la réplication de la PrP anormale dans les différents tissus lymphoïdes des macaques transfusés développant une vMCJ. Le niveau de contamination des tissus lymphoïdes apparait proportionnel à l’infectiosité sanguine de ces animaux et au risque de transmission de la maladie in vivo. Concernant les formes atypiques, la majorité des macaques transfusés n’ont pas de réplication dans les tissus lymphoïdes bien que ces phénotypes soient transmissibles expérimentalement à des modèles murins. Des transmissions à des souris immunodéficientes révèlent que les souches atypiques sont transmissibles par voie périphérique en l’absence d’un système immunitaire fonctionnel.Une alternative à l’expérimentation animale a été réalisée grâce aux « mini-brains » mimant la complexité du cerveau humain. Ces organoïdes cultivés en trois dimensions sont sensibles à au moins un isolat de prion associé aux formes sporadiques humaines. Les mini-brains pourraient ainsi constituer un nouvel outil d’étude des maladies à prions et permettre à termes la caractérisation des souches atypiques. / The detection of abnormal prion protein in the lymphoid tissues of UK patients suggests that after exposure to the agent of variant Creutzfeldt-Jakob disease (vCJD), more than 99% of contaminations may remain clinically silent. These data highlight a risk of secondary transmission through blood transfusion. In parallel to the classical vCJD forms, our experimental models in mice and macaques revealed another group which avoids the current diagnostic criteria, including the absence of abnormal prion protein (PrPres).The main goal of our work was to experimentally assess the risk of blood through retransmission studies and characterization of the abnormal replication of classical and atypical strains examined at peripheral and central levels.We observed a high heterogeneity of the distribution of the abnormal PrP in the lymphoid tissues of vCJD transfused macaques. The global level of contamination in lymphoid tissues seems proportional to the blood infectivity in these animals and to the risk of in vivo transmission of the disease. Regarding atypical forms, despite an absence of replication in lymphoid tissues, these phenotypes are experimentally transmissible. Transmissions to immunodeficient mice reveal that atypical strains are transmissible through peripheral routes in the absence of functional immune system.An alternative to animal testing has been achieved using to "mini-brains" mimicking the complexity of the human nervous system. These organoids cultured in three dimensions are sensitive to at least one prion isolate associated with human sporadic forms. Thus, mini-brains could constitute a new tool for studying prion diseases and improve the characterization of atypical strains.

La ciguatéra, ichtyosarcotoxisme majoritairement rencontré dans la zone intertropicale, trouve son origine dans la consommation de poissons tropicaux contaminés par des neurotoxines marines, les ciguatoxines (CTXs). Ces polyéthers polycycliques synthétisés par les micro-algues du genre Gambierdiscus, se fixent de façon privilégiée aux canaux sodiques dépendant du potentiel. Cependant, ce seul mode d'action n'explique pas tous les symptômes observés dans la ciguatéra notamment les manifestations particulières de type inflammatoire. L'effet de deux toxines ciguatérigènes, la P-CTX-1B et la P-CTX-3C, ainsi que l'activité d'un analogue, la brévétoxine PbTx-3, sur la modulation des médiateurs de l'inflammation que sont les cytokines, a été caractérisé sur un modèle d'étude in vitro de cellules de macrophages murins RAW 264.7. Le suivi de l'expression génique au moyen de techniques de PCR quantitative a révélé que la P-CTX-1B est capable d'induire les cytokines pro-inflammatoires interleukine (IL)-1β, IL-6 et le Tumor Necrosis Factor (TNF)-α, et l'anti-inflammatoire IL-10. Par ailleurs, alors que les traitements proposés par la médecine occidentale sont essentiellement symptomatiques, la médecine traditionnelle propose l'utilisation de nombreuses plantes dont certaines sont capables de réduire les effets des CTXs in vitro et in vivo. La nécessité d'enrichir l'arsenal thérapeutique de la ciguatéra ainsi que l'implication probable des mécanismes inflammatoires dans cette pathologie nous ont conduits à caractériser le potentiel anti-inflammatoire de quatre plantes parmi celles traditionnellement employées dans le Pacifique. Les effets d'extraits aqueux de Cerbera manghas, Euphorbia hirta, Heliotropium foertherianum et Vitex trifolia sur la cinétique de synthèse des ARNm ainsi que sur la production des protéines cytokiniques, ont été étudiés sur le modèle d'induction de macrophages murins stimulés par un lipopolysaccharide bactérien (LPS). Les résultats montrent que E. hirta et V. trifolia possèdent les activités anti-inflammatoires les plus intéressantes et cette dernière a été sélectionnée pour de plus amples tests. L'extrait aqueux de V. trifolia montre la capacité à inhiber les cytokines pro-inflammatoires IL-1β, IL-6 et TNF-α et à induire l'anti-inflammatoire IL-10 dépendant du LPS. La finalité du projet doit permettre l'étude de principes actifs isolés des plantes sélectionnées et les composés d'intérêt pourront être testés sur modèle animal avant d'être validés sur l'homme. Ainsi de nouveaux traitements thérapeutiques de la ciguatéra pourront-ils être proposés. Mots clés : ciguatéra, ciguatoxine, cytokine, PCR quantitative, ELISA, physiopathologie, remèdes traditionnels, Vitex trifolia, Euphorbia hirta, Cerbera manghas, Heliotropium foertherianum.

Les accidents vasculaires cérébraux (AVC) représentent la première cause de handicap acquis de l'adulte. En dehors de la prise en charge dans une structure de soins spécialisée, l'Unité Neuro-Vasculaire (UNV), le seul traitement efficace est la thrombolyse qui doit être administrée dans les premières heures suivant un AVC ischémique (ou infarctus cérébral). Favoriser la plasticité post-lésionnelle du cerveau représente une alternative thérapeutique majeure. C'est dans ce contexte que la thérapie cellulaire basée sur l'administration de cellules souches a émergé. Son action, fondée sur la " réparation " du tissu cérébral lésé, a montré un bénéfice sur la récupération dans des modèles d'ischémie cérébrale expérimentale. Cependant, de nombreuses questions restent en suspens concernant les mécanismes d'action de ce type de traitement. Par ailleurs, la transposition à l'homme reste à ce jour limitée à des études pilotes encourageantes mais avec de faibles effectifs. L'objectif de nos travaux au Grenoble Institut des Neurosciences (GIN U 836) a été d'évaluer les effets fonctionnels de l'administration de cellules souches mésenchymateuses (CSM) après ischémie cérébrale chez le rat, de préciser les modes d'action possibles. En parallèle de ces travaux expérimentaux, un essai clinique pilote de tolérance chez l'homme (ISIS - HERMES) a été mis en place.

Introduction : L’hypothermie accidentelle est associée à un taux important de morbidité et de mortalité, notamment en cas d’hypothermie accidentelle sévère où le risque d’arrêt cardiaque est très élevé. L’Extracorporeal Life Support (ECLS) est le traitement de référence dans le cas d’hypothermie avec arrêt cardiaque ou instabilité hémodynamique réfractaire. Il n’existe pas de recommandations concernant les modalités optimales de réchauffement.L’objectif de ce travail était de développer un modèle expérimental porcin d’arrêt cardiaque en hypothermie profonde afin d’étudier la réponse physiopathologique cardiaque et pulmonaire pendant le refroidissement et le réchauffement par ECLS. Nous avons également évalué l’impact de différentes stratégies de réchauffement (en terme de débit d’ECLS et de delta de température entre l’ECLS et la température centrale) sur les lésions cardiaques et pulmonaires.Méthode : Deux protocoles expérimentaux ont été réalisés. Les animaux ont été canulés pour ECLS, refroidis jusqu’à l’obtention d’un arrêt cardiaque (AC) en hypothermie profonde et soumis à 30 minutes d’ischémie complète. Protocole A (n = 24) : durant la phase de réchauffement, les animaux étaient randomisés en 4 groupes selon un plan factoriel 2x2 comparant un débit normal d’ECLS de 3l/min (groupe NF) à un débit réduit de 1,5 l/min (groupe LF) ainsi qu’un delta de température entre la température centrale et le circuit d’ECLS limité à 5°C, ou une température d’ECLS à 38°C. Protocole B (n = 20) : les animaux ont été randomisés en 2 groupes pendant le réchauffement : un groupe NF et un groupe LF avec un delta de température de 5°C. L’impact de l’ECLS sur le débit cardiaque en fin de réchauffement a été évalué par une technique de thermodilution (site d’injection du catheter positionné dans le ventricule droit) et contrôlé par une technique écho-doppler. Le débit cardiaque, l’hémodynamique et des paramètres de fonction pulmonaire étaient évalués. Des marqueurs biologiques de lésions d’ischémie/reperfusion étaient mesurés.Résultats : Protocole A : Le débit cardiaque final était réduit dans les groupes LF comparé aux groupes NF (1.96±1.4 vs. 3.34±1.7 L/min, p=0.05). L’augmentation de RAGE était plus élevée dans les groupes avec une température d’ECLS à 38°C comparée aux groupes avec delta contrôlé. Protocole B : Durant la phase de refroidissement, le débit cardiaque, la fréquence cardiaque et la pression artérielle ont diminué de façon continue. La pression artérielle pulmonaire avait tendance à augmenter à 32°c comparée à la valeur initiale (20.2±1.7 vs. 29.1±5.6 mmHg, p=0.09). Pendant le réchauffement, la pression artérielle moyenne était plus élevée dans le groupe NF vs. groupe LF à 20°C et 25°C (p=0.003 and 0.05, respectivement). Après réchauffement à 35°C, le débit cardiaque était de 3.9±0.5L/min dans le groupe NF vs. 2.7±0.5 L/min dans le groupe LF (p=0.06). Sous ECLS, le débit cardiaque gauche était inversement proportionnel au débit d’ECLS. En fin de réchauffement, le débit ECLS n’avait pas d’impact significatif sur les résistances pulmonaires.Conclusion : Nos résultats suggèrent que le réchauffement par ECLS des arrêts cardiaques en hypothermie profonde, en utilisant un débit d’ECLS normal avec un delta de température n’excédant pas 5°C par rapport à la température centrale, pourrait être la stratégie la moins délétère au niveau cardiaque et pulmonaire. L’ECLS à débit normal diminuait la dysfonction myocardique en fin de réchauffement et ne majorait pas les résistances vasculaires pulmonaires par rapport au groupe avec un débit d’ECLS réduit. Un delta important entre la température centrale et celle de l’ECLS augmentait le taux du biomarqueur associés aux lésions pulmonaires. Ce modèle expérimental apporte des éléments physiopathologiques dans le choix des modalités de réchauffement des patients victimes d’hypothermie accidentelle profonde et pourrait permettre d’évaluer d’autres stratégies thérapeutiques dans ce contexte. / Introduction: Accidental hypothermia is associated with significant mortality and morbidity, especially when core temperature is under 28°C with an increased risk of cardiac arrest. Extracorporeal life support (ECLS) is the preferred treatment in case of cardiac arrest or hemodynamic instability not responding to medical treatment. There are no current guidelines concerning the optimal rewarming strategy. The aim of this work was to develop a porcine experimental model of deep hypothermic cardiac arrest (DHCA) in order to assess the cardiac and pulmonary pathophysiological response during cooling and rewarming with ECLS. We also aimed to assess the impact of different ECLS blood flow rates on cardiopulmonary lesions.Method: Two experimental protocols were performed. Pigs were cannulated for ECLS, cooled until DHCA occurred and subjected to 30 min of cardiac arrest. Protocol A (n = 24): during the rewarming phase, pigs were randomized into 4 groups with 2X2 factorial design. We compared a low blood flow rate of 1.5 L/min (group LF) vs. a normal flow rate of 3.0 L/min (group NF) and a temperature during ECLS adjusted to 5°C above the central core temperature vs. 38°C maintained throughout the rewarming phase. Protocol B (n = 20): Animals were also randomized in 2 groups during rewarming, a group NF and a group LF with a controlled temperature delta of 5°C. In order to assess the physiological impact of ECLS on cardiac output at the end of rewarming we measured flow in the pulmonary artery using a modified thermodilution technique using the Swan-Ganz catheter (injection site inserted in the right ventricle) controlled also by an echocardiographic measurement. Cardiac output, hemodynamics and pulmonary function parameters were evaluated. Biological markers of ischemia/reperfusion injuries were analyzed.Results: Protocol A : The final cardiac output was reduced in the low flow rate versus the high flow rate groups (1.96±1.4 versus 3.34±1.7 L/min, p=0.05). The increase in the serum RAGE concentration was higher in the 38°C rewarming temperature groups compared to 5°C above adjusted temperature.Protocol B: During the cooling phase, cardiac output, heart rhythm, and blood pressure decreased continuously. Pulmonary artery pressure tended to increase at 32°C compared to initial value (20.2 ± 1.7 vs. 29.1 ± 5.6 mmHg, p=0.09). During rewarming, arterial blood pressure was higher at 20° and 25°C in group NF vs. Group LF (p=0.003 and 0.05, respectively). After rewarming at 35°C, cardiac output was 3.9 ± 0.5 in the group NF vs. 2.7 ± 0.5 L/min in group LF (p=0.06). Under ECLS cardiac output was inversely proportional to ECLS flow rate. ECLS flow rate did not significantly change pulmonary vascular resistance.Conclusion: Our results suggest that ECLS rewarming for DHCA patients, using a normal inflow rate of ECLS and a controlled temperature with less than 5°C between ECLS and core temperature could be the less deleterious rewarming strategy to limit cardiac and pulmonary dysfunction. A normal inflow rate of ECLS decreased cardiac dysfunction after rewarming and did not increased pulmonary vascular resistance compared to a low flow rate. A non controlled temperature delta between core temperature and ECLS increased biomarkers level of lung injury. This experimental model on pigs bring some pathophysiological finding for the rewarming strategy of patients who suffer deep accidental hypothermia and could allow to assess different therapeutic strategy in this context.

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Le syndrome de Sjögren (SS) est une maladie auto-immunitaire caractérisée par une infiltration lymphocytaire des glandes exocrines menant le plus souvent, à une xérophtalmie et à une xérostomie. La physiopathologie de la maladie est complexe et malgré les progrès realisés, il existe beaucoup de questions à repondre. Classiquement, le syndrome sec qui caractérise la maladie résulterait d’un double processus où dans un premier temps, la glande serait envahie par des cellules lymphoplasmocytaires puis secondairement détruite. Des avancées récentes dans la physiopathologie de la maladie ont démontré le rôle de nouvelles molécules, Aquaporine 5 (AQP5) et anticorps muscariniques, qui peuvent contribuer au syndrome sec. Dans ce travail, nous avons étudié des marqueurs diagnostiques de la maladie. Nous avons montré que 2 alarmines, HMGB1 et S100A8/A9 sont augmentés mais ne présentent pas de corrélation avec le score d’activité de la maladie. Utilisant différents modèles animaux de SS, nous avons montré une modification de la distribution de l’AQP5. De plus, nous avons montré que la modification de la distribution de l’AQP5 dans les glandes salivaires était liée à la présence des infiltrats inflammatoires. Utilisant un modèle non-immun de souris qui présente un syndrome sec, l’expression de l’AQP5 n’était pas modifiée en l’absence d’infiltrats inflammatoires. Ces résultats montrent que la modification de l’AQP5 dans le SS est liée à la présence des infiltrats inflammatoires. / Doctorat en Sciences médicales / info:eu-repo/semantics/nonPublished

Doctorat en Sciences médicales / info:eu-repo/semantics/nonPublished

L'identification de biomarqueurs et de nouvelles cibles thérapeutiques constitue un enjeu majeur de la recherche biomédicale visant au développement de la médecine personnalisée. L'objectif de cette thèse est d'étudier, à l'aide de puces à ADN, les modulations transcriptionnelles associées à la pathogénèse et à la réponse thérapeutique dans le cas de deux pathologies: l'infection par le Virus de l'Hépatite C (VHC) et la Polyarthrite Rhumatoïde (PR).Des biomarqueurs prédictifs de la réponse au traitement standard interféron ont été identifiés grâce à un modèle cellulaire ex vivo. Par ailleurs, l'analyse de données d'expression de deux modèles d'infection par le VHC (réplicon et infectieux) a permis de mettre en évidence les modulations transcriptionnelles résultant de l'activité antivirale de la chloroquine, une alternative potentielle anti-VHC. Dans le cas de la PR, nous avons identifié des biomarqueurs dont l'expression est corrélée au succès thérapeutique de l'anti-TNF Enbrel. / The identification of biomarkers and new therapeutic targets is a major challenge of biomedical research for the development of personalized medicine. The objective of this thesis is to study, using DNA microarrays, transcriptional modulations associated with the pathogenesis and therapeutic response in the case of two diseases: infection with Hepatitis C Virus (HCV) and Rheumatoid Arthritis (RA).Predictive biomarkers of response to standard interferon treatment were identified using an ex vivo cell model. Furthermore, analysis of expression data of two models of infection with HCV (replicon and infectious) has highlighted the transcriptional modulations resulting from the antiviral activity of chloroquine, a potential anti-HCV alternative. In the case of RA, we have identified biomarkers whose expression correlates with the therapeutic success of Enbrel anti-TNF drug.

L’AMPc est un second messager exerçant un rôle vasculoprotecteur majeur, par ses effets relaxants et inhibiteurs de la prolifération et de la migration cellulaires. Les concentrations intracellulaires d’AMPc sont finement régulées par leur synthèse via les adénylates cyclases et leur dégradation par les phosphodiestérases (PDEs). Nous avons évalué l’impact de l’environnement cellulaire sur la voie de signalisation couplée au récepteur β-adrénergique (β-AR/AMPc/PDE) dans les cellules musculaires lisses vasculaires (CMLVs), ainsi que les altérations potentielles de celle-ci en situation pathologique d’insuffisance cardiaque (IC).Notre première étude montre que dans les CMLs d’aorte de rat en culture, adoptant un phénotype synthétique, la voie de signalisation β-AR/AMPc/PDE est hautement modulée par la densité cellulaire Ainsi, une faible densité cellulaire est associée à une régulation négative de l’expression fonctionnelle du récepteur β1-AR, à une activité hydrolytique des PDEs-AMPc plus faible et à des concentrations d’AMPc intracellulaire plus élevées que celles observées dans des cellules confluentes.Notre deuxième étude montre que dans l’aorte de rat, l’IC est associée à une dysfonction endothéliale (DE), une hyperréactivité aux agents contractants et une altération de la fonction et de l’expression des PDEs-AMPc. Nos résultats suggèrent que l’altération de la voie du NO/GMPc suite à la DE conduit à une hyper-activation de la PDE3, qui masque la fonction de la PDE4 et altère la relaxation β-AR.L’ensemble de ce travail met en évidence le rôle critique de l'environnement cellulaire dans le contrôle de la voie β-AR/AMPc/PDE des CMLVsMots clés : Muscle lisse vasculaire, récepteur β-adrénergique, AMPc, phosphodiestérases, densité cellulaire, insuffisance cardiaque / CAMP is second messenger which plays a prominent vasculoprotective role by its relaxing effects and inhibition of cell proliferation and migration. Intracellular cAMP level is regulated by its synthesis by adenylate cyclase and its degradation by phosphodiesterases (PDEs). We evaluated the influence of cellular environment on signaling pathway coupled to β-adrenoceptors (β-AR/cAMP/PDE) on vascular smooth muscle cells (VSMCs), as well as potential alterations in heart failure (HF).The first study showed that in cultured rat aortic SMCs exhibiting synthetic phenotype, the β-AR/cAMP/PDE signaling pathway is highly modulated by the cellular density.Thus, the low density state being associated to a downregulation of the β1-AR, a lower cAMP-PDE activity and a higher basal [cAMP]i compared to confluent cells.Our second study showed that in rat aorta, HF is associated with endothelial dysfunction, hyper-reactivity to contractile agents and an alteration of function and expression of cAMP-PDEs. Our results suggest that NO/cGMP pathway alteration following the ED in HF leads to hyper-activation of PDE3 which masks PDE4 function and alters β-adrenoceptor relaxationThus, our works highlights the critical role of the cellular environment in controlling the vascular β-AR signaling.Keywords: Vascular smooth muscle, β-adrenoceptor, cAMP, phosphodiesterases, cellular density, heart failure.