O fitoterápico CATUAMA, utilizado no Brasil há mais de 20 anos, e seu extrato isolado T catigua apresentam efeito de reversão e prevenção da fibrilação ventricular (FV). FV, em pacientes com disfunção cardíaca, representa uma importante causa de morte súbita no mundo ocidental. Neste contexto, os efeitos de CATUAMA sobre a função cardíaca e os parâmetros hemodinâmicos foram investigados em ratos normais. Várias concentrações (10 a 800 ?g/mL) de CATUAMA (uma mistura dos extratos das plantas Trichilia Catigua, Paullinia Cupana, Ptychopetalum Olacoide e Zingiber Officinale) e de cada um de seus constituintes foram infundidas em preparações de músculos papilares isolados. A tensão desenvolvida (TD), tensão de relaxamento (TR) e as velocidades de aumento e redução da tensão (dT/dtmax e dT/dtmin) foram analisadas. Uma única dose de 200 ?g/mL foi injetada na veia jugular direita in situ. Os índices (dP/dtmax e dP/dtmin) de função ventricular esquerda (VE), as pressões sistólica (PSVE) e diastólica final (PDFVE), de perfusão coronariana (PPC), arteriais sistólica (PAS), diastólica (PAD) e média (PAM) e a frequência cardíaca (FC) foram monitoradas por 10min via cateterização VE. CATUAMA afetou a contratilidade miocárdica na maior dose (dose tóxica), reduzindo 9% a TD e 16% a TR, aumentando 90% a dT/dtmin. CATUAMA também melhorou em até 16% as PAS, PAD, PAM e PPC. Seus extratos isolados apresentaram efeitos diferenciados. T catigua não interferiu nas variáveis. P cupana reduziu a contratilidade e a PDFVE e aumentou os parâmetros hemodinâmicos assim como CATUAMA. P olacoide reduziu a TD, a TR e a PDFVE. Z officinale também reduziu a TD e a TR. CATUAMA e T catigua não trazem prejuízo à função cardíaca. / The Brazilian herbal medicine CATUAMA and its extract T catigua have shown reversion and prevention action on ventricular fibrillation (VF). VF, in patients with cardiac dysfunction, is an important cause of sudden death in Western world. In this regard, CATUAMA effects on cardiac function and hemodynamic parameters in normal rats were investigated. Various concentrations (10 to 800?g/mL) of CATUAMA (a mixture of Trichilia Catigua, Paullinia Cupana, Ptychopetalum Olacoide and Zingiber Officinale) and each herbal extract were infused into isolated papillary muscle bath. Developed tension (DT), tension at rest (RT) and velocities of increase and decrease tension (dT/dtmax and dT/dtmin) were analyzed. A single 200?g/mL dose was injected into jugular vein in situ. Left ventricular (LV) function index (dP/dtmax and dP/dtmin), LV systolic and end-diastolic pressures (LVSP and LVEDP), coronary driving pressure (CDP), systolic, diastolic and mean blood pressures (SBP, DBP and MBP) and heart rate (HR) were monitored during 10min by LV catheterization. CATUAMA affected myocardium contractility in the higher and toxic dose, decreasing 9% DT and 16% TR and increasing 90% dT/dtmin. CATUAMA also improved 16% SBP, DBP, MBP and CDP. Its isolated extracts showed different actions. T catigua demonstrated no interference in the variables. P cupana decreased contractility and LVEDP. It improved hemodynamic parameters as CATUAMA. P olacoide decreased DT, TR and LVEDP. Z officinale also decreased DT and TR. CATUAMA and T catigua did not affect cardiac function. These are important results for development of a new drug to prevent and to reverse VF without heart function impairment.

O fitoterápico CATUAMA, utilizado no Brasil há mais de 20 anos, e seu extrato isolado T catigua apresentam efeito de reversão e prevenção da fibrilação ventricular (FV). FV, em pacientes com disfunção cardíaca, representa uma importante causa de morte súbita no mundo ocidental. Neste contexto, os efeitos de CATUAMA sobre a função cardíaca e os parâmetros hemodinâmicos foram investigados em ratos normais. Várias concentrações (10 a 800 ?g/mL) de CATUAMA (uma mistura dos extratos das plantas Trichilia Catigua, Paullinia Cupana, Ptychopetalum Olacoide e Zingiber Officinale) e de cada um de seus constituintes foram infundidas em preparações de músculos papilares isolados. A tensão desenvolvida (TD), tensão de relaxamento (TR) e as velocidades de aumento e redução da tensão (dT/dtmax e dT/dtmin) foram analisadas. Uma única dose de 200 ?g/mL foi injetada na veia jugular direita in situ. Os índices (dP/dtmax e dP/dtmin) de função ventricular esquerda (VE), as pressões sistólica (PSVE) e diastólica final (PDFVE), de perfusão coronariana (PPC), arteriais sistólica (PAS), diastólica (PAD) e média (PAM) e a frequência cardíaca (FC) foram monitoradas por 10min via cateterização VE. CATUAMA afetou a contratilidade miocárdica na maior dose (dose tóxica), reduzindo 9% a TD e 16% a TR, aumentando 90% a dT/dtmin. CATUAMA também melhorou em até 16% as PAS, PAD, PAM e PPC. Seus extratos isolados apresentaram efeitos diferenciados. T catigua não interferiu nas variáveis. P cupana reduziu a contratilidade e a PDFVE e aumentou os parâmetros hemodinâmicos assim como CATUAMA. P olacoide reduziu a TD, a TR e a PDFVE. Z officinale também reduziu a TD e a TR. CATUAMA e T catigua não trazem prejuízo à função cardíaca. / The Brazilian herbal medicine CATUAMA and its extract T catigua have shown reversion and prevention action on ventricular fibrillation (VF). VF, in patients with cardiac dysfunction, is an important cause of sudden death in Western world. In this regard, CATUAMA effects on cardiac function and hemodynamic parameters in normal rats were investigated. Various concentrations (10 to 800?g/mL) of CATUAMA (a mixture of Trichilia Catigua, Paullinia Cupana, Ptychopetalum Olacoide and Zingiber Officinale) and each herbal extract were infused into isolated papillary muscle bath. Developed tension (DT), tension at rest (RT) and velocities of increase and decrease tension (dT/dtmax and dT/dtmin) were analyzed. A single 200?g/mL dose was injected into jugular vein in situ. Left ventricular (LV) function index (dP/dtmax and dP/dtmin), LV systolic and end-diastolic pressures (LVSP and LVEDP), coronary driving pressure (CDP), systolic, diastolic and mean blood pressures (SBP, DBP and MBP) and heart rate (HR) were monitored during 10min by LV catheterization. CATUAMA affected myocardium contractility in the higher and toxic dose, decreasing 9% DT and 16% TR and increasing 90% dT/dtmin. CATUAMA also improved 16% SBP, DBP, MBP and CDP. Its isolated extracts showed different actions. T catigua demonstrated no interference in the variables. P cupana decreased contractility and LVEDP. It improved hemodynamic parameters as CATUAMA. P olacoide decreased DT, TR and LVEDP. Z officinale also decreased DT and TR. CATUAMA and T catigua did not affect cardiac function. These are important results for development of a new drug to prevent and to reverse VF without heart function impairment.

Resumo: Foram realizados 5 experimentos para averiguar a influência da Passiflora alata como modulador de estresse e seus efeitos no tempo de imobilidade tônica (TIT), intensidade de ferimentos (IF) e comportamento nas fases de recria e postura de codornas submetidas a diferentes programas de debicagem, densidades de criação, enriquecimento ambiental, fertilidade e proporção de machos e fêmeas. No experimento I distribuiu-se as aves em esquema fatorial 4 (não debicadas, uma debicagem aos 18 e 30 dias e duas debicagens aos 18 e 30 dias) X 2 (sem e com 500 mg de P. alata/kg de ração), com 6 repetições e 8 aves por parcela. No experimento II distribuiu-se as aves em esquema fatorial 5 (12, 11, 10, 9 e 8 aves/gaiola) X 2 (sem e com 500 mg de P. alata), com 6 repetições. No experimento III distribuiu-se as aves em esquema fatorial 2 (com e sem enriquecimento ambiental) X 2 (sem e com 500 mg de P. alata), com 6 repetições e 8 aves por gaiola. No experimento IV distribuiu-se 120 fêmeas e 40 machos, em delineamento inteiramente ao acaso, acasalados na proporção de um macho para cada três fêmeas e, submetidas a dois tratamentos (sem e com 500 mg de P. alata) com 20 repetições. No V experimento distribuiu-se 140 fêmeas e 40 machos, em esquema fatorial 4 (proporção entre fêmeas e machos de 2, 3, 4 e 5 para 1) X 2 (sem e com 500 mg de P. alata), com 5 repetições. Conclui-se que a passiflora ameniza o estresse nas fases de recria e postura, melhora a produção de ovos, a conversão alimentar, a fertilidade e eclosão de ovos. A debicagem influencia negativamente a produção de ovos e a viabilidade das aves e aumenta o estresse. A alta densidade de criação piora o desempenho e eleva o estresse das aves. O enriquecimento das gaiolas diminui o TIT e a IF, sem influenciar no desempenho. A proporção de 2 e 3 fêmeas:macho resulta em maior fertilidade e eclosão de ovos, além de diminuir o estresse / Abstract: Five studies were conducted with the objective of investigating the influence of Passiflora alata as a modulator of stress and their effects on tonic immobility time (TIT), intensity of injuries (II) and the behavior in the rearing and laying periods of quails submitted to different programs for beak-trimming, different densities, environmental enrichment, fertility and proportion of male and female. In the first trial was distributed quails in a factorial 4 (no beak-trimming, one beak-trimming at 18 and 30 days and two beak-trimming at 18 and 30 days) X 2 (without and with 500 mg of P. alata/kg diet), with 6 replicates of 8 quails per cages. In study II was distributed quails in a factorial 5 (12, 11, 10, 9 and 8 quails/cage) X 2 (without and with 500 mg of P. alata/kg diet), with 6 replications. In study III was distributed quails in a factorial 2 (with and without environmental enrichment) X 2 (without and with 500 mg of P. alata/kg diet), with 6 replicates of 8 quails per cage. In study IV used 120 females and 40 males in a completely random mating at a ratio of one male for every three females and subjected to 2 treatments (without and with 500 mg of P. alata/kg diet) with 20 repetitions. In study V used 140 females and 40 males were distributed in a factorial 4 (ratio of female and male 2, 3, 4 and 5 to 1) X 2 (without and with 500 mg P. alata/kg diet), with 5 repetitions. It concludes that the passionflower decreased the stress in the rearing and laying periods, improved egg production, feed conversion, fertility and hatching of eggs. The beak-trimming negatively influenced egg production and viability of quails, increasing the stress in these birds. The high density of housing worsened performance and increased stress compromising bird welfare. The enrichment cages decreased the TIT and intensity of injury, without influencing the performance of quails. The proportion of 2 and 3 ... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Vera Maria Barbosa de Moraes / Coorientador: Sandra Aidar de Queiroz / Banca: Luciana Thie Seki Dias / Banca: Alice Eiko Murakami / Banca: Jane Maria Bertocco Ezequiel / Banca: Maria Cristina Thomaz / Doutor

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The adulteration of phytotherapic formulations has been a common practice in many countries, since there is not an specific legislation for the control of the manufacturing and commercialization of the so called natural medicaments . In this context, the existence of analytical methodologies, which alllow the identification and quantification of possible pharmaceuticals as adulterants in these formulations is very important in the toxicological analysis. Since the possibilitiy of adulteration is very broad in terms of compound classes, the analytical methods have to be very selective and sensitve for the identification os compound classes and/or individual compounds. In this work, a voltammetric method was developed and validated for the selective determination of pharmaceuticals from the class of 1,4-benzodiazepines (ansiolytics) and diethylpropion (anorexics). In order to investigate the possible interference of other electroactive drugs (possible adulterants in phytotherapic formulations) at the mercury electrode, synthetic mixtures containing different concentrations of 1,4-benzodiazepines, diethylpropion and interferents fluoxetine, sibutramine and metformin were analyzed. The parameters of the voltammetric analysis, such as pH, potential and time of deposition, were optimized aiming a voltammetric measurement with high selectivity and sensitivity. The validated method was applied for the determination of the adulterants in phytotherapic formulations used in the treatment of obesity, which have been commercialized as natural medicaments by Brazilian pharmacies. Four different phytotherapic formulations were found to be contaminated by 1,4-benzodiazepines in concentration ranging from 0,056 to 0,270 mg/g. Recovery experiments for 1,4-benzodiazepines and diethylpropion were carried out in the formulations, which gave recovery values higher than 90% for all the analyzed adulterants. The developed and validated method presented high sensitivity, selectivity, analytical precision and short analysis time. Therefore, the method is very usefull as an analytical tool for the control and fiscalization of the adulteration of phytotherapic formulations. / A adulteração de formulações fitoterápicas tem sido uma prática recorrente em todo o mundo, tendo em vista o fato de que ainda não existe uma legislação específica de controle da manipulação e comercialização dos chamados medicamentos naturais . Neste sentido, a existência de metodologias analíticas que possibilitem a identificação e a quantificação de possíveis fármacos como adulterantes nestas formulações é de extrema importância na análise toxicológica. Como a possibilidade de adulteração é relativamente ampla em termos de classes de compostos, os métodos analíticos requerem principalmente boa seletividade e sensibilidade na identificação de classes e/ou compostos individuais. Neste trabalho, um método voltamétrico foi desenvolvido e validado para a determinação seletiva de fármacos da classe dos 1,4-benzodiazepínicos (ansiolíticos) e da dietilpropiona (anorexígeno). Para avaliar uma possível interferência na determinação destes fármacos causada por outros fármacos eletroativos (possíveis adulterantes em formulações fitoterápicas) no eletrodo de mercúrio, misturas sintéticas com diferentes concentrações dos 1,4-benzodiazepínicos, dietilpropiona e os interferentes fluoxetina, femproporex, sibutramina e metformina foram analisadas. Os parâmetros da análise voltamétrica pH, potencial e tempo de deposição foram otimizados, visando uma medida voltamétrica com alto grau de seletividade e sensibilidade. O método validado para a determinação de 1,4-benzodiazepínicos e dietilpropiona foi empregado na análise de formulações fitoterápicas utilizadas no tratamento da obesidade, as quais são comercializadas como medicamentos naturais por farmácias de manipulação brasileiras. Quatro diferentes formulações fitoterápicas analisadas acusaram a presença de 1,4-benzodiazepínicos como adulterantes em concentrações entre 0,056 e 0,270 mg/g. Ensaios de recuperação para os 1,4-benzodiazepínicos e dietilpropiona foram realizados nas formulações, obtendo-se recuperações acima de 90% para todas as espécies de adulterantes analisadas. O método desenvolvido e validado apresentou alta sensibilidade, seletividade, precisão analítica, baixo custo e análises rápidas, comprovando a aplicabilidade do mesmo como uma alternativa para o controle e fiscalização da adulteração em formulações fitoterápicas.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The essential oils (EO) obtained from plants are a major source of new molecules and have been studied as alternatives to conventional drugs in the treatment of diseases, as immune response modulators and as new growth promoters in fish. The aim of this study was to evaluate the potential use of different EOs from the plants Ocimum americanum (OA), Ocimum gratissimum (OG), Hesperozygis ringens (HR), Cymbopogon flexuosus (CF) and Melaleuca alternifolia (MA) in the control of diseases, as immunomodulators and as growth promoters in the fish species Rhamdia quelen and Sciaenops ocellatus. The EOs from OA, OG and HR showed weak to moderate activity in vitro against the bacterium A. hydrophila, however, they significantly inhibited the hemolytic activity caused by this bacterium in fish erythrocytes. The EO of OA also presented antiparasitic activity in vitro and in vivo against the monogenean parasite Gyrodactylus sp. The EOs from OA, CF and MA were capable of triggering (in vitro) superoxide anion (O2 -) production in S. ocellatus leukocytes (head-kidney macrophages and/or blood leukocytes). The use of the OA and HR EOs in vivo promoted survival of R. quelen infected with A. hydrophila, as well as showed potential as modulator of the innate immune response in both studied fish species: after exposure through baths (R. quelen) or added to the diet (OA in S. ocellatus). Herbal products such as EOs appear as safe alternatives in fish production because they are natural and biodegradable products, contributing to the reduced use of conventional drugs and pesticides. / Os óleos essenciais (OE) obtidos de plantas são uma grande fonte de novas moléculas e vêm sendo estudados como alternativas aos fármacos convencionais no controle de enfermidades, como moduladores da resposta imune e como novos agentes promotores de crescimento em peixes. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial de aplicação de diferentes OEs, provenientes das plantas Ocimum americanum (OA), Ocimum gratissimum (OG), Hesperozygis ringens (HR), Cymbopogon flexuosus (CF) e Melaleuca alternifolia (MA) no controle de doenças e como imunomoduladores e promotores de crescimento em peixes das espécies Rhamdia quelen e Sciaenops ocellatus. Os OEs de OA, OG e HR apresentaram atividade fraca a moderada in vitro contra a bactéria A. hydrophila, no entanto, inibiram significativamente a atividade hemolítica provocada pela bactéria em eritrócitos de peixes. O OE de OA também apresentou atividade antiparasitária in vitro e in vivo contra o parasito monogenético Gyrodactylus sp. In vitro, os OEs de OA, CF e MA estimularam a produção de ânion superóxido (O2 -) em leucócitos de S. ocellatus (macrófagos renais e/ou leucócitos do sangue). O uso in vivo dos OEs de OA e HR promoveu a sobrevivência de R. quelen infectados por A. hydrophila, bem como, apresentou potencial modulador da resposta imune inata em ambas as espécies de peixes estudadas: após exposição por meio de banhos (R. quelen) ou adicionado à dieta (OA em S. ocellatus). Fitoterápicos tais como os OEs se mostram como alternativas seguras na produção de peixes por serem produtos naturais e biodegradáveis contribuindo na redução da utilização de fármacos convencionais e pesticidas.

This research was aimed at evaluating in vitro and in vivo effects of lemongrass (Cymbopogon flexuosus Stapf.) oil, citronella (Cymbopogon winterianus Jowitt) oil and eucalyptus (Corymbia citriodora) oil on cattle ticks (Rhipicephalus (Boophilus) microplus), each of which corresponds to an essential oil experiment. Negative control group end eight concentrations of lemongrass oil, citronella oil and eucalyptus oil (0.5; 1; 2; 5; 10; 20; 50; 100%), were used on in vitro trials with engorged female ticks. The efficacy control ticks was 0; 20; 39; 99.5; 100; 100; 100; 100 and 100%, for lemongrass oil, of 0; 34.5; 43; 48; 82; 99; 99; 100 and 100%, for citronella oil and 0; 30.5; 75.5; 91; 100; 100; 100; 100 and 100%, of oil, respectively. On in vivo trial eighteen Holstein cows were allocated to three groups for each treatment (negative control, essential oil - level estimated by regression analysis, accounting for 95% efficacy of control ticks on in vitro trial and amitraz at 0.025%). Engorged female ticks were counted before (mean of days -3, -2, -1) and after treatment (1, 2, 3, 5, 7, 10, 14, 21 days). Twenty one days after application of the products, the efficacy on control ticks was 0; 54 (lemongrass oil at 2%) and 74.5%; of 0; 91.3 (citronella oil at 8.6%) and 60%; and 0; 96.4 (eucalyptus oil at 3.5%) and 69%, respectively for in vivo treatments. On the 1st and 2nd milked after treatments, physiologic variables were evaluate and milk samples were collected to evaluate organoleptic properties in milk and yoghurt (negative control x phytotherapic treatment). Similar results were found with sensorial acceptance test of milk and physiologic variables, in the three in vivo experiments. / Esta pesquisa foi conduzida com o objetivo de avaliar o efeito in vitro e in vivo do óleo de capim limão (Cymbopogon flexuosus Stapf.), citronela (Cymbopogon winterianus Jowitt) e eucalipto (Corymbia citriodora) sobre o carrapato bovino (Rhipicephalus (Boophilus) microplus), sendo que cada óleo essencial corresponde a um experimento. Nas experimentações in vitro foi utilizado o grupo controle negativo e oito concentrações de óleo de capim limão, de citronela e de eucalipto (0,5; 1,0; 2,0; 5,0; 10,0; 20,0; 50,0; 100,0%), em fêmeas ingurgitadas de carrapatos. A eficácia de controle foi de 0; 20; 39; 99,5; 100; 100; 100; 100 e 100% para o óleo de capim limão; de 0; 34,5; 43; 48; 82; 99; 99; 100 e 100% para o óleo de citronela e de 0; 30,5; 75,5; 91; 100; 100; 100; 100 e 100% para o óleo de eucalipto, respectivamente. Para a experimentação in vivo foram constituídos três grupos para cada experimento (controle negativo, óleo essencial - nível estimado mediante análise de regressão, correspondendo a 95% de eficácia de controle do carrapato da pesquisa in vitro e amitraz a 0,025%), com dezoito vacas da raça Holandesa. Antes (média dos dias -3, - 2, -1) e após a aplicação do produto (1, 2, 3, 5, 7, 10, 14, 21 dias), foram contadas fêmeas ingurgitadas de carrapato. A eficácia de controle 21 dias após a aplicação dos produtos foi de 0; 54 (capim limão a 2%) e 74,5%; de 0; 91,3 (citronela a 8,6%) e 60% e de 0; 96,4 (eucalipto a 3,5%), e 69%, para os respectivos tratamentos in vivo. Na 1ª e na 2ª ordenha após a aplicação dos tratamentos, foram avaliadas variáveis fisiológicas e coletadas amostras de leite para avaliar as propriedades organolépticas no leite e do iogurte (controle negativo x tratamento fitoterápico). O teste de aceitação sensorial do leite e as variáveis fisiológicas avaliadas foram similares entre os tratamentos nos três experimentos in vivo.

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:11:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao patricya c de oliveira.pdf: 350832 bytes, checksum: c35e2d06d9a2bd1b51c00c43002bf133 (MD5) Previous issue date: 2010-08-31 / The Pterodon emarginatus Vogel, known as sucupira branca (Fabaceae) has been shown to possess larvicidal activity against (Aedes aegypti), antiparasitic effect (Leishmania amazonensis), fungicide, bactericide, antioxidant, antiinflammatory, antinociceptive, and antiproliferative activity among several different human cancer cell lines that may be related to presence of diterpenes, in particular, vouacapanes derivatives. This work aimed to define and characterize the powder, the crude and standardized dry extract of the fruit of sucupira . After crushing the fruits, showed 1.2% volatile. The chromatographic (TLC) indicated the presence of chemical markers vouacapanes (6α,7β-dihydroxyvouacapan-17β-oic acid - Rf = 0.16; 6α,7β-dihydroxyvouacapan-17β-oate methyl ester - Rf = 0.44; 6α-hydroxyvouacapan-7β-17β-lactone - Rf = 0.71) and lupeol (Rf = 0.78). In vibration bands in the infrared region coinciding with the five main bands of vouacapanes (-OH, C-H , C=O, C=C, C-O). The concentration of total terpenes of 9.3%. Then to obtain the crude extract was held percolation in 95% ethanol PA. The crude extract showed pH 5.1, relative density of 0.87, viscosity of 25.43 mPas, solid 15.2%, total terpenes of 17.1% and the same chromatographic profile and in the infrared spectrum obtained for the powder plant. Another method used for investigation of terpenes was the gas chromatography / mass spectrometry in the hexane extract. We identified the presence of vouacapanes and the lupeol. The drying process of the crude extract was used nebulization (spray drying) using different adjuvants drying, flow of 0.19 L / h, air flow 35 L / min, inlet temperature 110°C, outlet temperature 97°C, double fluid nozzle spray type 1.2 mm. The best results were obtained with the colloidal silicon dioxide (Aerosil®) to 20%, giving an appearance of fine powder. Thermal analysis performed for the marker 6α,7β-dihydroxyvouacapan-17β-oate methyl ester showed that the drying parameters were safe by preventing the thermal degradation of diterpenes. The efficiency of the drying process was 16.2%, degradation of 10.9% and the concentration of terpenes total in dry extract was 13.9%. The chromatographic profile was maintained and the volatile content was 3.5%. The photomicrographs showed irregular and spherical particles, rough surface. The analytical method by spectrophotometry in the visible region for the quantification of total terpenes in the dust, crude extract and dry extract was validated presenting selective, linear, precise, accurate and robust. In the test of antinociceptive activity (capsaicin), the pre-treatment with dry extract of sucupira (SDE 1000 mg / kg + 20% DMSO) reduced the time reactivity in 50.9% compared to the vehicle. The results may suggest that the technological processes employed to transform the fruits of sucupira in standardized dry extract was adequate to maintain quality chemistry and antinociceptive activity described for the fruits. This work represents the first description of the taking of standardized dry extract and identification of lupeol in fruits of sucupira . / A Pterodon emarginatus Vogel, conhecida popularmente como Sucupira Branca, pertence à família Fabaceae. Estudos científicos comprovaram atividades larvicida (Aedes aegypti), antiparasitária (Leishmania amazonensis), fungicida, bactericida, antioxidante, antiinflamatória, antinociceptiva e anti-tumoral nos frutos dessa espécie, que podem estar relacionadas com a presença de diterpenos, de modo particular, os derivados vouacapânicos. Esse trabalho teve como objetivo obter e caracterizar o pó, o extrato bruto e extrato seco padronizado dos frutos da sucupira. O material botânico foi moído, obtendo-se um pó grosso, apresentando 1,2% de voláteis. O perfil cromatográfico (CCD) indicou a presença dos marcadores vouacapânicos (ácido 6α, 7β, di-hidroxivouacapan-17-β-óico - Rf = 0,16; 6α, 7β, di-hidroxivouacapan-17-β-oato de metila Rf = 0,44; 6α, hidroxivouacapan-7β, 17β-lactona Rf = 0,71) e lupeol (Rf = 0,78). Foram observadas bandas de vibração na região do infravermelho coincidentes com as cinco bandas principais dos vouacapanos (-OH, C-H , C=O, C=C, C-O). O teor de terpenos totais foi de 9,3%. Procedeu-se a obtenção do extrato bruto por percolação em etanol a 95% P.A. Este apresentou pH 5,1, densidade relativa de 0,87, viscosidade de 25,43 mPas, teor de sólidos de 15,2%, teor de terpenos totais de 17,1%, o mesmo perfil cromatográfico e espectro na região do infravermelho obtido para o pó do fruto. Outro método utilizado para investigação de terpenos foi a cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas realizada no extrato hexânico. Identificou-se a presença de voaucapanos e do lupeol. Em seguida, realizou-se o processo de secagem do extrato bruto por nebulização (spray drying), utilizando diferentes adjuvantes de secagem, fluxo de 0,19 L/h, vazão do ar 35 L/min, temperatura de entrada 110°C, temperatura de saída 97°C, bico aspersor tipo duplo fluido 1,2 mm. Os melhores resultados foram obtidos com o dióxido de silício coloidal (Aerosil®) a 20%, proporcionando um aspecto de pó fino. A análise térmica realizada para o marcador 6, 7-dihidroxivouacapan-17-oato de metila demonstrou que os parâmetros de secagem foram seguros prevenindo a degradação térmica dos diterpenos. O rendimento do processo de secagem foi de 16,2%, a porcentagem de degradação de 10,9% e o teor de terpenos totais no extrato seco foi de 13,9%. O perfil cromatográfico foi mantido e o teor de voláteis foi de 3,5%. As fotomicrografias obtidas para o extrato seco mostraram partículas de formato irregular e esférico e superfície rugosa. O método analítico desenvolvido por espectrofotometria na região do visível para a quantificação dos terpenos totais no pó, extrato bruto e extrato seco foi validado apresentando-se seletivo, linear, preciso, exato e robusto. No teste de atividade antinociceptiva (capsaicina), o pré-tratamento com extrato seco de sucupira (ESS 1000 mg/kg + DMSO 20%) reduziu o tempo de reatividade em 50,9% em relação ao veículo. Os resultados obtidos permitem sugerir que o processamento tecnológico empregado para a transformação dos frutos da sucupira em extrato seco padronizado foi adequado, mantendo a qualidade química e a atividade antinociceptiva descritas. Esse trabalho representa a primeira descrição da obtenção do extrato seco padronizado e da identificação do lupeol nos frutos da sucupira.

The adulteration of phytotherapic formulations has been increasing considerably in the recent years in several countries, by the fact that there is not an established efficient monitoring for the control of the manipulation and commercialization of the so called natural medicines . As the possibility of adulteration is relatively wide in terms of compound classes, the need of analytical methods with good sensitivity and selectivity, which are able to identify and quantify simultaneously more than one pharmaceutical in the same phytotherapic formulation, is very important. Considering the well known effects of these adulterants and its use and abuse in the formulations for weigh loss, two separations methods were developed in this study to enable the study of benzodiazepines alprazolam, clonazepam, chlordiazepoxide, diazepam, flurazepam, lorazepam, medazepam and midazolam as possible adulterants in phytotherapic formulations. For the electrophoretic method the optimized conditions were: buffer phosphate 100 mM, 15% acetonitrile (pH 2,0) as an electrolyte; fused silica capillary coated with a 60 cm layer of polymida (9,5 cm to the detector window) with 75 Um of internal diameter, operating at 25 °C; 15 kV of applied voltage, UV detection at 200 nm and anodic hydrodynamic injection for 2 seconds with a pressure of 30 mbar. The chromatographic method was optimized as the following conditions: eluent acetonitrile: water 40:60 (v / v) (pH 4,0) at flow 0,5 mL/min, UV detection at 230 nm and injection of 20 μL. The adulteration in these phytotherapic formulations occurs usually with the use of only one pharmaceutical class: a benzodiazepine, a anorexic and a antidepressant. It is not expected to find in the same sample more than one benzodiazepine. Therefore, the eletroforetic and chromatography proposed methods do not have the objective to detect all of benzodiazepines together in a same sample, but rather to promote the individual identification of all in a sample. The RP-HPLC method was validated for the determination of these benzodiazepines and applied for the determination of the adulterants in phytotherapic formulations used in the treatment of obesity, which have been commercialized as natural medicines by Brazilian pharmacies. The recovery experiments promoted recoveries values higher than 84,25 % for all the analyzed adulterants. The developed methods introduced high sensitivity, analytical precision, low cost and rapid analysis, confirming the applicability of the methods as an alternative for the control and monitoring of abuse use of these pharmaceuticals in phytotherapic formulations passible of adulteration. / A adulteração de formulações fitoterápicas tem aumentado consideravelmente nos últimos anos em alguns países, pelo fato de que ainda não há uma fiscalização eficiente estabelecida para o controle da manipulação e comercialização dos chamados medicamentos naturais . Como a possibilidade de adulteração é relativamente ampla em termos de classes de compostos, surge assim, a necessidade de métodos analíticos de boa seletividade e sensibilidade, capazes de identificar e quantificar simultaneamente mais de um fármaco na mesma formulação fitoterápica. Sabendo-se dos efeitos indesejados que esses adulterantes podem causar, além da necessidade de alertar a sociedade sobre os perigos do uso e abuso desses adulterantes nas formulações para emagrecimento, desenvolveu-se neste trabalho dois métodos de separação, para possibilitar o estudo da presença dos benzodiazepínicos alprazolam, clonazepam, clordiazepóxido, diazepam, flurazepam, lorazepam, medazepam e midazolam como possíveis adulterantes em produtos fitoterápicos: eletroforese capilar de zona (CZE) e cromatografia líquida de alta eficiência por fase reversa (RP-HPLC). Para o método eletroforético as condições otimizadas foram: eletrólito de trabalho tampão fosfato 100 mM, 15% acetonitrila (pH 2,0); capilar de sílica fundida revestido de poliimida de 60 cm de comprimento (com 9,5 cm da janela do detector) com diâmetro interno de 75 Um, operando a 25°C; voltagem aplicada de 15 kV; detecção UV em 200 nm e injeção hidrodinâmica anódica durante 2 segundos com pressão de 30 mBar. O método cromatográfico foi otimizado na seguinte condição: eluente acetonitrila:água 40:60 (v/v) (pH 4,0) em fluxo 0,5 mL/min; detecção UV em 230 nm e injeção de 20 μL. As adulterações nestas formulações fitoterápicas ocorrem, geralmente, com o uso de somente uma classe de fármacos: um benzodiazepínico, um anorexígeno e um antidepressivo. Não se espera encontrar em uma mesma amostra mais de um benzodiazepínico, portanto, os métodos eletroforéticos e cromatográficos propostos não têm como objetivo detectar todos os benzodiazepínicos juntos em uma mesma amostra e sim, promover a identificação individual de todos em uma amostra. O método de RP-HPLC foi validado para a determinação desses benzodiazepínicos e empregado na análise de formulações fitoterápicas utilizadas no tratamento da obesidade, as quais são comercializadas como medicamentos naturais por farmácias de manipulação brasileiras. Os ensaios de recuperação realizados promoveram recuperações acima de 84,25 % para todas as espécies de adulterantes analisadas. Os métodos desenvolvidos apresentaram alta sensibilidade, precisão analítica, baixo custo e análises rápidas, comprovando a aplicabilidade dos mesmos como uma alternativa para o controle e fiscalização do uso abusivo destes fármacos presentes em formulações fitoterápicas passíveis de adulteração.

[pt] Métodos baseados na cromatografia líquida micelar (MLC) com detecção fluorimétrica foram desenvolvidos para dois estudos de caso. No primeiro deles, seis B-carbolinas (harmol, harmalol, harmane, norharmane, harmine e harmaline) foram plenamente separadas de modo a se aplicar o método para a determinação dos alcaloides em formulações de Passiflora incarnata L., extrato seco de Passiflora alata Dryander e em urina. A separação foi realizada em coluna cromatográfica C18, utilizando fase móvel tamponada (pH 8,0) contendo 220 mmol L-1 de dodecilsulfato de sódio (SDS)/acetonitrila (97/3 por cento v/v). A detecção fluorimétrica permitiu que se atingissem limites de detecção (LOD) abaixo de 3,6 ng g-1 com repetibilidade e precisão intermediária entre 0,1 e 5 por cento. As incertezas combinadas associadas à concentração das B-carbolinas ficaram entre 1 e 9 por cento. O método proposto foi comparado ao método baseado na cromatografia eletrocinética micelar (MEKC) com detecção absorciométrica e os resultados com MLC se mostraram superiores do ponto de vista da capacidade de detecção (por serem os alcaloides naturalmente muito fluorescentes) e de recuperação. Para as amostras de fitoterápicos, o harmol foi quantificado tanto nas amostras de medicamento de Passiflora incarnata quanto em urina de voluntário após a administração de fitoterápico. O harmine foi detectado apenas na amostra de medicamento. Os alcaloides norharmane, harmine e harmaline foram identificados no chá misto de Maracujá, no qual continha em sua composição extrato seco de Passiflora alata Dryander. Na segunda abordagem, um método por MLC foi desenvolvido para a determinação de galantamina e de seus principais metabólitos (N-desmetil galantamina, O-desmetil galantamina, epigalantamina e N-óxido galantamina). A separação da galantamina e dos metabólitos foi feita utilizando coluna cromatográfica C18 com porosidade de 300 angstroms e fase móvel constituída de tampão (pH 5,0) contendo 25 mmol L-1 de SDS/acetonitrila (97/3 por cento v/v). A detecção fluorimétrica permitiu limites de detecção abaixo de 343 ng g-1, repetibilidade e precisão intermediária entre 2,2 e 4 por cento. As incertezas combinadas associadas à concentração de galantamina e dos metabólitos ficaram entre 0,3 e 11 por cento. Ensaios de recuperação foram realizados em amostra de urina fortificada com padrões da galantamina e metabólitos e os resultados obtidos ficaram entre de 91,4 e 114,8 por cento. A comparação entre o método por MLC e o método por cromatografia líquida de alta eficiência com fase reversa foram feitas com amostras de medicamento cujo princípio ativo era o hidrobrometo de galantamina. Os resultados dos teores de galantamina e as variâncias das medidas obtidas por ambos os métodos foram estatisticamente iguais. A sensibilidade da curva analítica obtida por MLC foi duas vezes maior do que a encontrada por cromatografia por fase reversa. Análises de urina de ratos coletadas após a administração do medicamento foram realizadas com o método proposto, sendo que a galantamina mais os metabólitos N-óxido galantamina e N-desmetil galantamina foram identificados nas amostras. Para melhor avaliar o efeito de amplificação de fluorescência da galantamina pelo ambiente organizado, experimentos foram feitos com a separação cromatográfica de fase reversa e com a adição de solução rica em micelas de SDS após a passagem do analito pela coluna cromatográfica. As condições de separação incluíram o uso de coluna cromatográfica C18, fase móvel constituída por tampão (pH 5,0) contendo 2 por cento de propano-2-ol (v/v)/ acetonitrila (80/20 por cento v/v). A solução micelar de SDS (100 mmol L-1), misturada à fase móvel após a coluna cromatográfica, foi preparada com a mesma composição da fase móvel. A sensibilidade da curva analítica de galantamina foi três vezes maior quando o meio micelar foi usado. O resultado prova que o ambiente micelar favorece a medição fluorimétrica de galantam / [en] Methods based on micellar liquid chromatography (MLC) with fluorimetric detection have been developed for two case studies. In the first, six B-carbolines (harmol, harmalol, harmane, norharmane, harmine and harmaline) were fully separated allowing the application of the method for the determination of these alkaloids in Passiflora incarnata L. formulations, in Passiflora alata Dryander dry extract and in urine. The chromatographic separation was performed on a C18 column using a buffered mobile phase consisting of disodium hydrogen phosphate (pH 8.0) containing 220 mmol L-1 of sodium dodecyl sulfate (SDS)/acetonitrile (97/3 percent v/v). The fluorimetric detection allowed limits of detection (LOD) below than 3.6 ng g-1 to be achieved with intermediary precision and repeatability between 0.1 and 5 percent. The calculated combined uncertainties of the concentration of B-carbolines were between 1 and 9 percent. The proposed method was compared with the method based on micellar electrokinetic chromatography (MEKC) with absortionmetric detection. The MLC results were superior from the viewpoint of the detection power (since they are very fluorescent alkaloids) and also in terms of recovery. The harmol was quantified in Passiflora incarnata phitotherapic samples and in urine collected from a voluntary after of the administration of herbal medicine. The harmine was detected only in the phitotherapic sample. The norharmane, harmine and harmaline alkaloids were identified in Passion Fruit tea, which contained dry extract of Passiflora alata Dryander. In the second approach, a method for MLC was developed for the determination of galantamine and its main metabolites (N-demethyl galantamine, O-demethyl galantamine, epigalantamine and N-oxide galantamine). The separation was performed using a C18 chromatography column with porosity of 300 angstroms and with mobile phase consisting of buffer (pH 5.0) containing SDS (25 mmol L-1)/acetonitrile (97/3 percent v/v). The fluorimetric detection enabled LOD below 343 ng g-1 with intermediate precision and repeatability between 2.2 and 4 percent. Combined uncertainties for concentration of galantamine and metabolites were between 0.3 and 11 percent. Recovery experiments were performed on urine samples fortified with galantamine standards and metabolites with results between 91.4 and 114.8 percent. A comparison between the proposed MLC method and reverse phase high performance liquid chromatography was made using medicine samples containing galantamine hydrobromide as the active principle. Galantamine levels and variances achieved with these methods were statistically equal. The analytical curve sensitivity by MLC was two times higher than that found with reverse phase high performance liquid chromatography. Analysis of rat urine, collected after the administration of the medicine, were performed with the proposed method enabling the identification of galantamine, N-oxide galantamine and N-demethyl galantamine. To better evaluate the fluorescence amplification effect of galantamine in the organized environment, experiments were made with conventional chromatographic separation and post-column addition of the aqueous solution rich in micelles. The separation conditions included the use of C18 chromatographic column, mobile phase consisting of buffer (pH 5.0) containing 2 percent of propan-2-ol (v/v)/acetonitrile (80/20 percent v/v). The micellar solution of SDS (100 mmol L-1), added after the chromatographic column, was prepared with the same composition of the mobile phase. The column temperature was 25 degrees C and the sample volume was 20 uL. The sensitivity of the analytical curve of galantamine was three times higher when the micellar solution was mixed, proving that the organized environment favors the galantamine fluorescence even at flow regime. Recoveries with or without post-column mixing with the micelle rich solution were between 97.5 and 102.2 percent.