O objetivo deste estudo foi avaliar a efetividade de uma formulação farmacêutica experimental (solução com 1,54% de pilocarpina em spray) sobre o fluxo salivar (FS), experiência de boca seca e qualidade de vida (QV), comparado com placebo, em pacientes tratados com radioterapia (RTx) para câncer de cabeça e pescoço (CCP). Este ensaio clínico randomizado, controlado, duplo-cego e crossover foi realizado em pacientes com xerostomia (n=28). O FS foi medido pela sialometria estimulada (técnica do hálito fresco), a experiência de boca seca pelo Xerostomia Inventory (XI) e a QV pelo Oral Health Impact Profile (OHIP-14). As avaliações foram feitas antes do início da terapêutica - baseline (T0), um (T1), dois (T2) e três (T3) meses após iniciar o uso do spray, além da mensuração do FS uma hora após o baseline (T0+), seguido de período washout de 01 mês e após crossover, os mesmos períodos foram avaliados. O FS apresentou maior após uma hora (p=0,003 - teste de Wilcoxon) e dois meses (p=0,002 - teste de Friedman) de uso do spray com pilocarpina; melhoria na experiência de xerostomia, verificado pela diminuição significante (p<0,05 - teste de Friedman) dos escores em cinco itens do XI; melhoria na QV, verificado pela diminuição significante (p<0,05 - teste de Friedman) dos escores em três itens do OHIP-14, com o passar de alguns dos períodos de avaliação. A aplicação tópica da formulação de pilocarpina em spray melhoraram significantemente o FS, experiência de xerostomia e QV para os pacientes tratados com RTx para CCP. / The aim of this study was to evaluate the effectiveness of an experimental pharmaceutical formulation (1.54% pilocarpine spray solution) on salivary flow (SF), dry mouth experience and quality of life (QoL), compared to placebo, in patients treated with radiotherapy (RTx) for head and neck cancer (HNC). This randomized, controlled, double-blind, crossover clinical trial was performed in patients with xerostomia (n = 28). SF was measured by stimulated sialometry (fresh breath technique), dry mouth experience by Xerostomia Inventory (XI) and QoL by the Oral Health Impact Profile (OHIP-14). The evaluations were done before - baseline (T0), one (T1), two (T2) and three (T3) months after starting the spray, besides the measurement of FS one hour after the baseline (T0+), followed by a washout period of 1 month and after crossover, the same periods were evaluated. The SF presented higher after one hour (p=0.003 - Wilcoxon test) and two months (p=0.002 - Friedman test) of the use of the pilocarpine spray; improvement in the xerostomia experience, verified by the significant decrease (p<0.05 - Friedman test) of the scores in five items of XI; improvement in the QoL, verified by the significant decrease (p<0.05 - Friedman\'s test) of the scores on three items of the OHIP-14, with the passing of the evaluation of some periods. Topical application of the pilocarpine spray formulation significantly improved SF, xerostomia experience and QoL for patients treated with RTx for HNC.

Ratos que não expressam a proteína prion celular (PrPc) são mais sensíveis a crises epilépticas induzidas por diferentes protocolos. O hipocampo desses animais apresenta um brotamento supragranular de fibras musgosas semelhante ao observado em pacientes com epilepsia de lobo temporal relacionada a esclerose hipocampal (ELT-EH). Esses achados sugerem que a PrPc pode estar envolvida na epileptogênese da ELT-EH. Nós estudamos nessa tese a localização imunoistoquímica da PrPc no hipocampo de animais submetidos ao modelo de epilepsia de lobo temporal por pilocarpina (MELTP)em diferentes tempos de status epilepticus em ratos. Nesse trabalho induzimos estado de mal epileptico (EE) com o uso de pilocarpina em três diferentes grupos de ratos Wistar adultos. Os animais foram sacrificados 18 horas, 5 dias e 2 meses após a indução do EE. Os resultados foram comparados com cérebros controles de ratos que receberam injeções de solução salina. As lâminas foram processadas para coloração por hematoxilinaeosina, imunohistoquímica e neo-Timm. Observamos um aumento da expressão de PrPc nas regiões CA1 e CA3 do hipocampo 18 horas depois da injeção de pilocarpina. Essa expressão aumentada persistiu na região CA1 no quinto dia após a injeção. Não observamos diferenças significativas na expressão de PrPc durante a fase aguda do MELTP nas regiões CA2 e granular do hipocampo. No grupo crônico (2 meses) a PrPc foi observada na mesma localização em que se observou brotamento de fibras musgosas. Concluímos com esse trabalho que a expressão da PrPc é diferente nas diversas fases do modelo de epilepsia induzido por pilocarpina. A expressão transitória da proteína prion durante a fase aguda do modelo pode refletir mudanças de expressão visando tornar as células mais resistentes ao dano induzido pelas crises convulsivas. Alternativamente, essa expressão aumentada pode estar relacionadas à apotose ou então às fases iniciais da neuroplasticidade. A expressão de PrPc na mesma região dos brotamentos de fibras musgosas na fase crônica pode estar relacionada à neuroplasticidade, epileptogênese, neurotransmissão ou, ainda, estar implicada na proteção celular contra crises convulsivas recorrentes. Devido aos diversos achados relacionados a PrPc, sugerimos que o modelo de epilepsia do lobo temporal induzido pela pilocarpina possa ser um interessante modelo para o estudo do papel fisiológico da PrPc. / Mice lacking cellular prion protein (PrPc) are more sensitive to seizures induced by four different pharmacological protocols. The hippocampal formation of these animals exhibits supragranular mossy fiber sprouting which resembles that observed in patients with mesial temporal lobe epilepsy related to hippocampal sclerosis (MTLEHS). These findings suggest that the PrPc may be involved in epileptogenesis in MTLE-HS. Here we investigated the immunohistochemical localization of the PrPc in the hippocampus of animals submitted to the pilocarpine model of temporal lobe epilepsy (PMTLE). Status epilepticus (SE) was induced with pilocarpine in three different groups of adult Wistar rats. The animals were sacrificed 18 hours, 5 days, and 2 months after SE induction and the results were compared to the respective saline-injected control animals. Slices were processed for hematoxylin-eosin, PrPc immunohistochemistry and neo-Timm .PrPc was increased in the CA1 and in CA3 regions of the hippocampus 18 hours after pilocarpine injection. PrPc continued to be increased in the CA1 region of the hippocampus five days after pilocarpine injection. In the CA2 and granular regions of the hippocampus we did not observe significant differences in PrPc expression during the acute phase of PMTLE. In the chronic group, PrPc was expressed co-localized with mossy fiber sprouting. Cellular prion protein is differentially expressed at different phases of the pilocarpine model of epilepsy. Transient expression of PrPc during the acute phase of the pilocarpine model may reflect changes which may render cells more resistant to seizure-induced damage and may be related to apoptosis or may to the initial phases of neuroplasticity. During the chronic period, PrPc is co-expressed in the same regions of mossy fiber sprouting. In chronic animals, PrPc might be related to neuroplasticity, epileptogenic processes, neurotransmission, or alternatively may be implicated in cellular protection against recurrent seizures.

O presente estudo teve como objetivo caracterizar e comparar os diferentes padrões de disparo dos neurônios de CA1 de ratos (controles e com epilepsia induzida pela pilocarpina) e de hipocampo humano cirurgicamente removido para o tratamento da epilepsia do lobo temporal refratária. Em nosso estudo, identificamos os padrões RS (do inglês “regular-spiking”), IB (do inglês “intrinsic bursting”), ROB (do inglês “repetitive oscillatory bursting”) e FS (do inglês “fastspiking”). O padrão FS foi observado somente no tecido humano. De acordo com a freqüência instantânea, observamos diferentes graus de acomodação nos padrões RS, IB e ROB: 1- neurônios que apresentaram acomodação rápida, FRS, FROB (F-do inglês fast), 2- acomodação lenta, SRS, SROB (S-do inglês slow), 3- com acomodação, aIB (a- do inglês accommodation); 4- neurônios sem acomodação WROB e WIB (W-do inglês without) e 5- com latência para o primeiro disparo, LRS (L- do inglês late). O padrão WROB foi observado em ratos controles e tecido humano. O padrão WIB foi observado em ratos epilépticos e tecido humano. O padrão LRS foi encontrado exclusivamente no tecido humano. O estudo comparativo das propriedades elétricas passivas revelou alterações nas propriedades do padrão SRS, entre controles e tecido epiléptico. Além disso, foi observado que a população de neurônios IB estava elevada em ratos tratados com pilocarpina com relação aos controles. Já no tecido humano, esta população estava reduzida. Nossos resultados sugerem que no modelo de epilepsia da pilocarpina e na epilepsia temporal humana ocorram processos de seletividade neuronal distintos. Além disso, este trabalho é pioneiro na caracterização criteriosa dos padrões de disparo neuronal não só em CA1 de roedores, mas principalmente no tecido RESUMO 172 humano. Identificar e caracterizar os disparos neuronais de CA1 humano pode ser a chave para a compreensão da interação entre os neurônios na formação dos circuitos neuronais e maior conhecimento da epileptogênese temporal. / The aim of the present study was to characterize and compare the firing patterns of neurons from the CA1 region of rats (control and pilocarpine-treated) and patients submitted to the surgical removal of part of the hippocampus to treat refractory temporal lobe epilepsy. We identified the following patterns: RS (regular-spiking), IB (intrinsic bursting), ROB (repetitive oscillatory bursting) and FS (fast-spiking). FS was observed only in human tissue. Based on the instantaneous frequency, we found different degrees of accommodation in patterns RS, IB and ROB. 1- neurons with fast accommodation: FRS, FROB (Ffast), 2- slow accommodation: SRS, SROB (S-slow,) 3-with accommodation: aIB (a-accommodation); 4- without accommodation: WROB and WIB (W- without) and 5-latency for the first spike: LRS (L- late). WROB cells were observed in control animals and human tissue. WIB neurons were detected in pilocarpinetreated animals and human tissue. LRS neurons were only found in human tissue. Comparison of passive electrical properties revealed alterations in the properties of SRS neurons between control and pilocarpine-treated animals. In addition, we observed that the population of neurons presenting activity bursts was increased in pilocarpine-treated rats when compared to controls. In human tissue, this population was reduced. Our results suggest that different processes of neuronal selection occur in the pilocarpine epilepsy model and in human temporal epilepsy. Furthermore, this study is the first to characterize in detail the firing patterns not only in rodent CA1 but, particularly, in human tissue. Identifying and characterizing firing patterns in human CA1 might be the key to understand the way neurons interact to form neuronal circuits, something that surely will enlarge our knowledge about the pathophysiology of epilepsy.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2007 / Bibliografia: f. 29-32 / Este estudo avaliou o efeito dos antidepressivos, Fluoxetina e Venlafaxina, sobre o tamanho (T), massa (M), volume celular (VC), das glândulas salivares parótidas de ratos e a velocidade do fluxo salivar (VFS). Além disso, avaliou a ação secretagôga da pi / Abstract: This study assessed the effect of the antidepressants, Fluoxetine and Venlafaxine, on the size (GS), mass (M), cellular volume (CV), of rat parotid salivary glands and salivary flow rate (SFR), as well as the secretagogue action of pilocarpine o

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-09-29 / A epilepsia acomete cerca de 1 a 2% da população mundial e carece de propostas terapêuticas mais eficazes. Aproximadamente 30% das epilepsias são sintomáticas e a epilepsia do lobo temporal (ELT) se destaca pela alta incidência e gravidade. Cerca de 30% de pacientes com ELT possuem crises refratárias ao tratamento medicamentoso, sendo necessário, muitas vezes, intervenção cirúrgica para o controle das mesmas. A investigação dos mecanismos fisiopatológicos empregando tecido humano extraído cirurgicamente, embora muito importante, tem a limitação de refletir apenas o processo crônico em que as alterações moleculares, bioquímicas e de neuroplasticidade resultantes do quadro epiléptico já se encontram estabelecidos. Nesse sentido, os modelos experimentais são fundamentais por permitir uma melhor abordagem dos mecanismos envolvidos com a epileptogênese, ou seja, aqueles ativados durante a indução até o estabelecimento do quadro epiléptico. O modelo lesional de epilepsia induzida por pilocarpina em pequenos roedores tem sido amplamente utilizado por reproduzir as principais características da ELT. Nesse modelo as crises epilépticas são acompanhadas por uma ação combinada entre o sistema imune, nervoso e endócrino, envolvendo a ativação de mediadores como citocinas, quimiocinas, neurotransmissores e seus receptores celulares. Estes processos têm sido associados com a etiologia da condição epiléptica. No presente projeto, camundongos imunodeficientes BALB/c nude foram submetidos ao modelo de epilepsia induzida por pilocarpina, para caracterização das alterações comportamentais, eletrográficas, neuroquímicas e histológicas comparadas ao seu controle BALB/c. Os resultados indicaram que a integridade do sistema imunológico é necessário para proteger o sistema nervoso central do insulto causado pelo status epilepticus (SE) induzido pela pilocarpina. Após a aplicação da pilocarpina, os animais BALB/c nude apresentaram um maior número de crises tônicoclônicas até atingirem o SE, apresentando um alto índice de mortalidade quando comparados ao BALB/c. Os camundongos BALB/c nude também apresentaram uma maior ativação de c-Fos em áreas relacionadas com a circuitaria das crises e uma menor expressão de parvalbumina, uma proteína ligadora de cálcio intracelular em relação ao BALB/c estudado na mesma condição experimental. Diferenças nas concentrações de neurotransmissores excitatórios e inibitórios também foram observados no córtex e hipocampo do BALB/c nude em relação ao BALB/c. Os camundongos BALB/c nude tiveram aumento na concentração de aminoácidos excitatórios sem a alteração compensatória dos aminoácidos inibitórios durante as crises, conforme ocorreu nos camundongos BALB/c. A morte neuronal avaliada pelas técnicas histológicas de Fluoro Jade-B e Nissl, também se mostrou aumentada em algumas áreas do sistema nervoso central dos camundongos BALB/c nude que apresentaram SE em relação ao BALB/c Os dados sugerem uma correlação positiva entre ativação de c-Fos, concentração de aminoácidos excitatórios e morte neuronal nos camundongos BALB/c nude, sugerindo que a deficiência imunológica possa ter contribuído para a hiperexcitabilidade e vulnerabilidade do sistema nervoso central aos danos causados pelas crises. / Epilepsy affects about 1-2% of world population and lack of effective therapeutic interventions more effective. Approximately 30% are symptomatic of epilepsy and temporal lobe epilepsy (TLE) is distinguished by the high incidence and severity. About 30% of patients with TLE seizures are refractory to treatment, if necessary, often, surgical intervention for control of them. The investigation of pathophysiology mechanism using human tissue extracted surgically, although very important, is limited by reflects only the chronic process in which the molecular, biochemical, and neuronal plasticity alterations resulting from epileptic effects already established. Thus, experimental models are essential for better approach of the mechanisms involved in epileptogenesis. The epilepsy induced by pilocarpine in small rodents has been widely used for reproducing the main features of TLE. In this model, the seizures are accompanied by a combined action between immune system, nervous and endocrine systems, involving the mediators activation such as cytokines, chemokines, neurotransmitters and their cell receptors. These processes have been associated with the etiology of the epileptic condition. In this project, immunodeficient BALB/c nude mice submitted to epilepsy model induced by pilocarpine to characterize behavior, electrographic, histological and neurochemical changes compared to their control BALB/c. The results indicated that integrity of the immune system is necessary to protect the central nervous system insult caused by status epilepticus. After administration of pilocarpine, the BALB/c nude mice showed a larger number of tonic-clonic seizures, with a high mortality rate when compared to BALB/c. The BALB/c nude also showed a greater activation of c-Fos in areas related to the circuitry of the crisis and a lower expression of parvalbumin, an intracellular calcium-binding protein compared to BALB/c studied in the same experimental condition. Differences concentrations of excitatory and inhibitory neurotransmitters were also observed in cortex and hippocampus of the BALB/c nude compared to BALB/c. The BALB/c nude showed increased of the excitatory amino acids concentrations without compensatory alteration in the inhibitory amino acids during seizure, as occurred in BALB/c. Neuronal death measured by Fluoro Jade- B and Nissl histological techniques, was also increased in some areas of the central nervous system of BALB/c nude SE presented relative to BALB/c. The data suggest a positive correlation between c-Fos activation, excitatory amino acids concentration and neuronal death in BALB/c nude mice, suggesting that immune deficiency may have contributed to the hyperexcitability and vulnerability of the central nervous system injury caused by seizure. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-04-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Trinomys yonenagae (TY) é um roedor fossorial das dunas da Caatinga, pertencente à família Echimydae e conhecido localmente como rabo de facho. A observação de que alguns indivíduos dessa espécie animal apresentam crises convulsivas espontâneas estimulou-nos ao estudo de algumas características de seu sistema nervoso que pudessem estar subjacentes a este quadro. Através de técnicas de eletrofisiologia in vitro, com a utilização de protocolos de indução de hiperexcitabilidade e de estudo da potenciação a longo prazo, procuramos identificar o padrão eletrofisiológico da circuitaria hipocampal do TY e compará-lo ao de ratos Wistar. Adicionalmente, procuramos também verificar como animais da espécie TY se comportam em relação a dois modelos clássicos de indução de epilepsia: método do abrasamento amigdaliano e aplicação sistêmica de pilocarpina. No protocolo de potássio alto, observamos em TY uma maior sensibilidade ao aumento gradual de potássio no líquido cefalorraquiano artificial (LCRa). No protocolo de adição de antagonista do receptor GABAA (bicuculina) no LCRa, não observamos quaisquer diferenças significativas nos registros extracelulares entre TY e Wistar. No protocolo da ausência de magnésio no LCRa, ambas as espécies apresentaram atividade epileptiforme espontânea, e quando submetidas a estimulação elétrica, as respostas em ambas as espécies não diferiram estatisticamente. No estudo da potenciação a longo prazo, observamos que, embora as médias dos declives normalizados em TY terem se apresentado sempre inferiores às de Wistar após o estímulo de alta frequência, estes valores entre as duas espécies não diferiram estatisticamente. Os dados eletrencefalográficos e comportamentais foram similares entre TY e Wistar nos dois modelos de indução de epilepsia, com exceção da dose de pilocarpina utilizada para elicitar o status epilepticus em TY, que foi menor. A caracterização eletrofisiológica e os resultados obtidos mediante os modelos de epilepsia são contribuições interessantes para o conhecimento do sistema nervoso do TY e revelam a importância para futuros trabalhos nesta espécie para aquisição de novos conhecimentos que podem estar envolvidos na gênese das crises convulsivas. / Trinomys yonenagae (TY) is a fossorial rodent dweller of sand dunes of the Caatinga, pertaining to Echimydae family and known locally as rabo de facho. The observation of some animals of this species show spontaneous seizures stimulated us the study of some characteristics of its nervous system that could to be subjacents to this condition. Through techniques of eletrophysiology in vitro, with the utilization of protocols of induction of hiperexcitability and study of the long-term potentiation (LTP), we aimed at to identifying the eletrophysiologic pattern of hippocampal circuitry of the TY and comparing it to Wistar rats. Additionaly, we also aimed at verifying how animals of the TY species behave regarding two classic models of epilepsy induction: amygdala kindling and systemic aplication of pilocarpine. In the high potassium protocol, we observed in TY a higher sensibility to gradual increase of potassium in the artificial cerebrospinal fluid (ACSF). In the protocol of addition of antagonist of GABAA receptor (bicuculine) in the ACSF, we did not observe any significative differences in the extracellular records between TY and Wistar. In the absence magnesium protocol in the ACSF, both species showed spontaneous epileptiform activity, and when both species were submited to electric stimulation, their responses did not differ statisticaly. In the study of LTP, we observed that, although the normalized slopes averages in TY have showed always smaller than of Wistar after high frequence stimulus, these values between the two species did not differ statistically. The electroencephalographic and behavioral data were similar between TY and Wistar in the two epilepsy induction models, with exception of the pilocarpine dosage used to elicite status epilepticus in TY, that was lower. The electrophysiological characterization and the obtained results against the epilepsy models are interesting contributions to the knowledge of the nervous system of the TY and reveal the importance to futures works in this species for the acquisition of new knowledges that can to be involved in the genesis of the seizures. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Compostos antioxidantes e anti-inflamatórios vêm sendo apontados como uma alternativa para auxiliar no tratamento da epilepsia. Ácido rosmarínico (AR) e seu metabolito ácido caféico (AC) têm ação antioxidante e anti-inflamatória relatada em vários estudos. Além disso, AR tem ação inibitória sobre GABA transaminase (GABA-T), enzima que metaboliza um dos principais neurotransmissores envolvidos na epilepsia: o GABA. Nesta tese, investigamos o efeito do AR e AC em modelos de convulsão e sua ação neuroprotetora sobre o estresse oxidativo, neuroinflamação e genotoxicidade relacionados à epilepsia. Para isso, utilizou-se primeiramente o modelo de kindling induzido por pentilenotetrazol (PTZ) para avaliar o efeito dos compostos na epileptogênese. Os compostos não produziram efeito antiepileptogênico in vivo neste modelo, no entanto, algumas doses de AR e AC mostraram um efeito neuroprotetor contra o estresse oxidativo e contra o dano ao DNA induzidos pelo kindling no córtex dos camundongos, demostrando um efeito benéfico contra alterações fisiológicas associadas à epileptogênese. Baseados no fato do AR ser um inibidor da GABA-T, avaliamos o efeito dos compostos na potencialização da ação do agonista GABAérgico diazepam (DZP) sobre as convulsões agudas induzidas por PTZ e pilocarpina (PIL) e no teste do sono induzido por DZP. O efeito de AR e AC na prevenção do dano genotóxico produzido pelos modelos também foi investigado. AR e AC mostraram potencializar a ativação GABAérgica, o que foi evidenciado pelo aumento da latência para a convulsão aguda induzida por PTZ, promovido por AR (4 mg/kg), e pela redução para o início do sono induzido por DZP, promovido por AR (4 mg/kg) e AC (8 mg/kg). Além disso, AR e AC (4 mg/kg) reduziram o dano genotóxico causado por PIL. Complementarmente, verificamos (in vitro) que o pré-tratamento com AR foi capaz modular a ativação microglial, produzindo um padrão de ativação anti-inflamatório, reduzindo a formação de espécies reativas e a expressão de citocinas pró-inflamatórias, e o dano genotóxico induzido pela inflamação. Estas respostas foram relacionadas à possível inibição da via apoptótica por AR. Em suma, os trabalhos aqui apresentados evidenciaram um efeito neuroprotetor de AR e AC por reduzir o estresse oxidativo, a ativação de vias inflamatórias e o dano genotóxico, envolvidos na progressão do processo epiléptico. / Antioxidants and anti-inflammatory compounds have been identified as an alternative to improve the treatment of epilepsy. The rosmarinic acid (RA) and its metabolite caffeic acid (CA) have their antioxidant and anti-inflammatory effects reported in several studies. Moreover, AR has inhibitory action on GABA transaminase (GABA-T), the enzyme that metabolizes an important neurotransmitter involved in epilepsy: GABA. In this thesis, we investigated the effect of RA and CA in seizure models and its neuroprotective action on oxidative stress, neuroinflammation and genotoxicity related to epilepsy. For this, first we used the kindling model induced by pentylenetetrazole (PTZ-induced kindling) for evaluating the effect of compounds on epileptogenesis. The compounds had no effect antiepileptogenic in vivo in this model, however, some doses of RA and CA showed a neuroprotective effect against oxidative stress and DNA damage induced by kindling in the cortex of the mice, demonstrating a beneficial effect against physiological changes related to epileptogenesis. Based on the fact of RA being an inhibitor of GABA-T, we evaluated the effect of compounds over potentiation of action of GABAergic agonist diazepam (DZP) on acute seizures induced by PTZ and pilocarpine (PIL) and in DZP-induced sleep test. The preventive effect of genotoxic damage induced by acute seizure models also was investigated. RA and CA showed potentiate GABAergic activation, which was evidenced by increase in latency to acute seizures PTZ-induced promoted by RA (4 mg/kg), and the reduction in latency to sleep in DZP-induced sleep test promoted by RA (4 mg/kg) and AC (8 mg/kg). In addition, RA and CA (4 mg/kg) reduced the genotoxic damage caused by PIL. Moreover, we found (in vitro) that the pre-treatment with RA was able to modulate microglial activation, producing a pattern of anti-inflammatory activation, reducing the formation of reactive species and the expression of proinflammatory cytokines, consequently reducing genotoxic damage induced by inflammation. These responses were related to the possible inhibition of apoptotic pathway by RA. In short, the works presented here showed a neuroprotective effect of RA and CA because of redution of oxidative stress, inflammatory pathways and genotoxic damage, involved in the progression of the epileptic process.

A epilepsia do lobo temporal (ELT) é a um dos casos mais frequente epilepsia em humanos e de maior refratariedade nos pacientes. A maioria dos fármacos antiepilépticos são moduladores da atividade neuronal e atuam sobre canais iônicos do receptor GABAA. Estudos vêm demonstrando o papel das células gliais e da neuroinflamação na epileptogênese e a modulação desta resposta pode ser um alvo potencial para drogas adjuvantes aos fármacos anti-epilépticos. Astrócitos são células gliais participantes da sinapse tripartite, moduladores da atividade neuronal. Os astrócitos são capazes de promover a homeostase de íons e de neurotransmissores, são responsáveis pelo metabolismo energético e da produção de fatores neurotróficos, glutationa, glutamina, S100B e citocinas. Neste trabalho, induzimos status epilepticus (SE) em ratos jovens (PN28) através do modelo lítio-pilocarpina que mimetiza alterações neuronais, bioquímicas e morfológicas similares à ELT em humanos. Os animais foram divididos nos tempos 1, 14 e 56 dias após a indução de status epilepticus (SE). Estes períodos são caracterizados respectivamente como a fase aguda, latente e crônica da epilepsia. Inicialmente, analisamos as mudanças neuroquímicas e astrocitárias ao longo do tempo. Foi observada neuroinflamação inicial e transitória que promove morte neuronal e mudanças ao longo do tempo de astrogliose e disfunção astrocitária. Também foi observado que a proteína S100B, proteína ligante de cálcio, predominantemente astrocitária, pode ser considerado um marcador da disfunção neuronal e astrocitária promovida neste modelo de epilepsia. Em seguida, demonstramos que a modulação da secreção de S100B pelo anti-inflamatório dexametasona um dia após indução de SE reverte a neuroinflamação, astrogliose e disfunção astrocitária à curto e à longo prazo. Por conseguinte, observamos que a modulação do receptor GABAA através de agonistas e antagonistas GABAérgicos altera a secreção de S100B em fatias hipocampais agudas e em cultura de astrócitos. Portanto, pode-se sugerir que as alterações astrogliais e a neuroinflamação dependentes do tempo podem estar ligadas à excitabilidade neuronal e/ou à morte neuronal em ratos jovens em modelo de epilepsia; que a proteína S100B pode ser considerada um marcador deste modelo de epilepsia e que a modulação da sua secreção pode ser um possível alvo farmacológico no tratamento da epilepsia. / Temporal lobe epilepsy (TLE) is the most frequent type of epilepsy in humans and is more associated to refractory to anti-epileptic drugs (AED) in patients. The most AEDs are modulators of neuronal activity and act on ion channels, such as GABAA receptor. Studies have been demonstrating the role of glial cells and neuroinflammation in epileptogenesis. The modulation of this response may be a potential target for adjunctive drugs to anti-epileptic drugs. Astrocytes are glial cells that participated in the tripartite synapse and modulated neuronal activity. Astrocytes are able to promote homeostasis of ions and neurotransmitters, are responsible for energy metabolism and the production of neurotrophic factors, glutathione, glutamine, S100B and cytokines. In this work, we induced status epilepticus (SE) in young rats (PN28) through the lithiumpilocarpine model that mimics neuronal, biochemical and morphological alterations similar to ELT in humans. The animals were divided at times 1, 14 and 56 days after the induction of SE. These periods are characterized respectively as the acute, latent and chronic phase of epilepsy. Initially, we analyzed neurochemical and astrocytic changes over time. Initial and transient neuroinflammation was observed and promoted over time neuronal death, astrogliosis and astrocytic dysfunction. It has also been observed that the protein S100B, a calcium-binding protein, predominantly astrocytic, can be considered a marker of neuronal and astrocytic dysfunction promoted by this model of epilepsy. Next, we demonstrate that the modulation of S100B secretion by the antiinflammatory dexamethasone one day after SE induction reverses neuroinflammation, astrogliosis and astrocytic dysfunction in the acute and chronic time. Therefore, we analyzed that modulation of the GABAA receptor through GABAergics agonists and antagonists alters the secretion of S100B in acute hippocampal slices and in astrocyte culture. Therefore, it may be suggested that astroglial changes and time dependent neuroinflammation may be related to neuronal excitability and/or neuronal death in young rats in this epilepsy model; that S100B protein can be considered a marker of this epilepsy model and that the modulation of its secretion may be a possible pharmacological target in the treatment of epilepsy.

O presente estudo teve como objetivo caracterizar e comparar os diferentes padrões de disparo dos neurônios de CA1 de ratos (controles e com epilepsia induzida pela pilocarpina) e de hipocampo humano cirurgicamente removido para o tratamento da epilepsia do lobo temporal refratária. Em nosso estudo, identificamos os padrões RS (do inglês “regular-spiking”), IB (do inglês “intrinsic bursting”), ROB (do inglês “repetitive oscillatory bursting”) e FS (do inglês “fastspiking”). O padrão FS foi observado somente no tecido humano. De acordo com a freqüência instantânea, observamos diferentes graus de acomodação nos padrões RS, IB e ROB: 1- neurônios que apresentaram acomodação rápida, FRS, FROB (F-do inglês fast), 2- acomodação lenta, SRS, SROB (S-do inglês slow), 3- com acomodação, aIB (a- do inglês accommodation); 4- neurônios sem acomodação WROB e WIB (W-do inglês without) e 5- com latência para o primeiro disparo, LRS (L- do inglês late). O padrão WROB foi observado em ratos controles e tecido humano. O padrão WIB foi observado em ratos epilépticos e tecido humano. O padrão LRS foi encontrado exclusivamente no tecido humano. O estudo comparativo das propriedades elétricas passivas revelou alterações nas propriedades do padrão SRS, entre controles e tecido epiléptico. Além disso, foi observado que a população de neurônios IB estava elevada em ratos tratados com pilocarpina com relação aos controles. Já no tecido humano, esta população estava reduzida. Nossos resultados sugerem que no modelo de epilepsia da pilocarpina e na epilepsia temporal humana ocorram processos de seletividade neuronal distintos. Além disso, este trabalho é pioneiro na caracterização criteriosa dos padrões de disparo neuronal não só em CA1 de roedores, mas principalmente no tecido RESUMO 172 humano. Identificar e caracterizar os disparos neuronais de CA1 humano pode ser a chave para a compreensão da interação entre os neurônios na formação dos circuitos neuronais e maior conhecimento da epileptogênese temporal. / The aim of the present study was to characterize and compare the firing patterns of neurons from the CA1 region of rats (control and pilocarpine-treated) and patients submitted to the surgical removal of part of the hippocampus to treat refractory temporal lobe epilepsy. We identified the following patterns: RS (regular-spiking), IB (intrinsic bursting), ROB (repetitive oscillatory bursting) and FS (fast-spiking). FS was observed only in human tissue. Based on the instantaneous frequency, we found different degrees of accommodation in patterns RS, IB and ROB. 1- neurons with fast accommodation: FRS, FROB (Ffast), 2- slow accommodation: SRS, SROB (S-slow,) 3-with accommodation: aIB (a-accommodation); 4- without accommodation: WROB and WIB (W- without) and 5-latency for the first spike: LRS (L- late). WROB cells were observed in control animals and human tissue. WIB neurons were detected in pilocarpinetreated animals and human tissue. LRS neurons were only found in human tissue. Comparison of passive electrical properties revealed alterations in the properties of SRS neurons between control and pilocarpine-treated animals. In addition, we observed that the population of neurons presenting activity bursts was increased in pilocarpine-treated rats when compared to controls. In human tissue, this population was reduced. Our results suggest that different processes of neuronal selection occur in the pilocarpine epilepsy model and in human temporal epilepsy. Furthermore, this study is the first to characterize in detail the firing patterns not only in rodent CA1 but, particularly, in human tissue. Identifying and characterizing firing patterns in human CA1 might be the key to understand the way neurons interact to form neuronal circuits, something that surely will enlarge our knowledge about the pathophysiology of epilepsy.

Ratos que não expressam a proteína prion celular (PrPc) são mais sensíveis a crises epilépticas induzidas por diferentes protocolos. O hipocampo desses animais apresenta um brotamento supragranular de fibras musgosas semelhante ao observado em pacientes com epilepsia de lobo temporal relacionada a esclerose hipocampal (ELT-EH). Esses achados sugerem que a PrPc pode estar envolvida na epileptogênese da ELT-EH. Nós estudamos nessa tese a localização imunoistoquímica da PrPc no hipocampo de animais submetidos ao modelo de epilepsia de lobo temporal por pilocarpina (MELTP)em diferentes tempos de status epilepticus em ratos. Nesse trabalho induzimos estado de mal epileptico (EE) com o uso de pilocarpina em três diferentes grupos de ratos Wistar adultos. Os animais foram sacrificados 18 horas, 5 dias e 2 meses após a indução do EE. Os resultados foram comparados com cérebros controles de ratos que receberam injeções de solução salina. As lâminas foram processadas para coloração por hematoxilinaeosina, imunohistoquímica e neo-Timm. Observamos um aumento da expressão de PrPc nas regiões CA1 e CA3 do hipocampo 18 horas depois da injeção de pilocarpina. Essa expressão aumentada persistiu na região CA1 no quinto dia após a injeção. Não observamos diferenças significativas na expressão de PrPc durante a fase aguda do MELTP nas regiões CA2 e granular do hipocampo. No grupo crônico (2 meses) a PrPc foi observada na mesma localização em que se observou brotamento de fibras musgosas. Concluímos com esse trabalho que a expressão da PrPc é diferente nas diversas fases do modelo de epilepsia induzido por pilocarpina. A expressão transitória da proteína prion durante a fase aguda do modelo pode refletir mudanças de expressão visando tornar as células mais resistentes ao dano induzido pelas crises convulsivas. Alternativamente, essa expressão aumentada pode estar relacionadas à apotose ou então às fases iniciais da neuroplasticidade. A expressão de PrPc na mesma região dos brotamentos de fibras musgosas na fase crônica pode estar relacionada à neuroplasticidade, epileptogênese, neurotransmissão ou, ainda, estar implicada na proteção celular contra crises convulsivas recorrentes. Devido aos diversos achados relacionados a PrPc, sugerimos que o modelo de epilepsia do lobo temporal induzido pela pilocarpina possa ser um interessante modelo para o estudo do papel fisiológico da PrPc. / Mice lacking cellular prion protein (PrPc) are more sensitive to seizures induced by four different pharmacological protocols. The hippocampal formation of these animals exhibits supragranular mossy fiber sprouting which resembles that observed in patients with mesial temporal lobe epilepsy related to hippocampal sclerosis (MTLEHS). These findings suggest that the PrPc may be involved in epileptogenesis in MTLE-HS. Here we investigated the immunohistochemical localization of the PrPc in the hippocampus of animals submitted to the pilocarpine model of temporal lobe epilepsy (PMTLE). Status epilepticus (SE) was induced with pilocarpine in three different groups of adult Wistar rats. The animals were sacrificed 18 hours, 5 days, and 2 months after SE induction and the results were compared to the respective saline-injected control animals. Slices were processed for hematoxylin-eosin, PrPc immunohistochemistry and neo-Timm .PrPc was increased in the CA1 and in CA3 regions of the hippocampus 18 hours after pilocarpine injection. PrPc continued to be increased in the CA1 region of the hippocampus five days after pilocarpine injection. In the CA2 and granular regions of the hippocampus we did not observe significant differences in PrPc expression during the acute phase of PMTLE. In the chronic group, PrPc was expressed co-localized with mossy fiber sprouting. Cellular prion protein is differentially expressed at different phases of the pilocarpine model of epilepsy. Transient expression of PrPc during the acute phase of the pilocarpine model may reflect changes which may render cells more resistant to seizure-induced damage and may be related to apoptosis or may to the initial phases of neuroplasticity. During the chronic period, PrPc is co-expressed in the same regions of mossy fiber sprouting. In chronic animals, PrPc might be related to neuroplasticity, epileptogenic processes, neurotransmission, or alternatively may be implicated in cellular protection against recurrent seizures.