Introdução e objetivo: Existem poucos estudos a respeito da imunidade inata em dermatofitoses (tinhas), este trabalho estudou a expressão dos receptores toll-like 2 e 4 em dermatofitoses por T. rubrum. Casuística e método: Estudaram-se sete pacientes com dermatofitose extensa, definida como pelo menos três segmentos corporais acometidos, e oito com a forma localizada. Inexistia qualquer imunodepressão primária ou secundária nos pacientes. Realizou-se em cada doente biópsia de área da pele lesada e sã, esta última distando pelo menos 4 cm da lesão. Outros 20 fragmentos de pele foram obtidos a partir de cirurgias estéticas. Utilizou-se a imuno-histoquímica com anticorpos anti-TLR2 e TLR4. As imagens foram analisadas pelo programa Image Pro Plus. A epiderme foi dividida em superficial e profunda, para análise da imunomarcação, considerando-se o ponto de divisão como 50% da sua espessura. Resultados: A análise da expressão do TLR4 em pacientes com tinha na epiderme superficial apresentou menores índices de densidade óptica (IDO), média 108,8±7,73 e 110,86±15,57 em pacientes com tinha localizada e extensa, respectivamente, em relação aos controles (145,26 ±21,88) com significância estatística. Também houve redução da expressão do TLR4 na epiderme profunda com IDO de 111,19±13,45 em dermatofitoses extensas e 144,65±17,20 nos controles (p=0,001). A análise da expressão do TLR2 na epiderme profunda em indivíduos com dermatofitose localizada evidenciou menor expressão na área lesada do que na sã do mesmo indivíduo, média 109,28±30,9 e 118,75±36,84, respectivamente (p 0.018). Embora não tenha havido redução da expressão do TLR2 na epiderme superficial comparativamente aos controles, na epiderme profunda encontrou-se, na área lesada das dermatofitoses extensas, menor expressão em relação aos controles, sendo 6,29±9,73 e 27,8±18,6, respectivamente. Conclusões: Encontrou-se menor expressão de TLR4 na epiderme superficial e profunda em indivíduos com dermatofitose comparativamente aos controles sadios. Em dermatofitoses extensas também a expressão de TLR2 está diminuída na epiderme profunda. Não existe diminuição da expressão do TLR2 na epiderme superficial provavelmente para manter a função de barreira da epiderme, onde este receptor é importante para coesão dos queratinócitos. Observou-se ainda menor expressão de TLR2 na pele lesada comparada à sã de indivíduos com dermatofitose localizada o que justificaria o fato destas lesões permanecerem limitadas a uma única área. / Introduction & Objectives: There are few studies to concern the role of innate immune response in dermatophytosis, so we conducted an investigation to define the involvement of TLRs in the course of tinea due T. rubrum infection. Patients & Methods: We allocated 8 patients with localised dermatophytosis and 7 with widespread one, defined as at least on three body segments. The skin was biopsied in two points: from lesion (active lesion) and healthy skin distant at least 4 cm. Twenty controls were obtained from cosmetic surgery. We use immunohistochemical staining with antibodies for antigens TLR 2 and 4. Images were analyzed. Results: (i) analysis of the expression of TLR4 of patients with tinea, found on the upper epidermis, average optical density index of 108,8±7,73 and 110,86±15,57 in localised and widespread tinea, respectively, and 145,26 ±21,88 in control skin; similar reduction maintain at lower one with average optical density index 111,19±13,45 in widespread tinea and 144,65±17,20 in controls p=0,001; (ii) analysis of TLR2 expression in the lower epidermis of patients with tinea met reduced optical density index in skin with localised tinea than in healthy skin, average 109,28±30,9 and 118,75±36,84, respectively, p 0.018. There were no reduction in TLR2 expression in upper epidermis compared to controls, although it was significant reduced in lower epidermis in widespread tinea, average 27,8±18,6 and 6,29±9,73. Conclusions: We found reduced expression of TLR4 in the lower and upper epidermis skin with tinea compared to controls in widespread and localised dermatophytosis. There was no reduction of TLR2 at upper epidermis probably in order to mantain the epidermal barrier function. We found yet a reduced expression of TLR2 in the infected skin compared to healthy one of the same patient with localised dermatophytosis which could explain that in these cases the tinea was not spread in extension.

A membrana amniótica (MA) é considerada um biomaterial com propriedades biológicas benéficas ao processo de reparação tecidual, servindo ao tratamento de feridas e queimaduras. Recentemente, tem sido usada como substrato para a construção de substitutos cutâneos, possibilitando o cultivo de queratinócitos humanos. Contudo, por se tratar de um material biológico, com risco de transmissão de doenças infectocontagiosas, necessita ser conservado e esterilizado antes de seu uso clínico. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da radiação ionizante sobre membranas amnióticas gliceroladas, com ênfase em sua compatibilidade ao cultivo de queratinócitos humanos. Quatro MA foram conservadas em altas concentrações de glicerol (>85%), sendo metade delas enviadas para radioesterilização a 25 kGy. Constituíram-se dois grupos de estudo: MA não irradiadas (MA-ni) e MA irradiadas (MA-i). Ambos os grupos foram submetidos a protocolo padronizado de desepitelização e avaliados por microscopia óptica (Hematoxilina-eosina e Picrossirius), imunofluorescência para colágeno IV e laminina e microscopia eletrônica. Posteriormente, foram cultivados queratinócitos humanos sobre as superfícies desepitelizadas das bases de MA-ni e MA-i em situação imersa e em interface ar-líquido. Foram comparados os resultados nos instantes 14 e 21 dias de cultivo, por microscopia óptica e eletrônica. As análises microscópicas, após a denudação epitelial, demonstraram que no grupo não irradiado a continuidade da membrana basal encontrava-se preservada, enquanto no grupo irradiado não existia nenhum indício de resquício da presença da membrana basal na superfície do material. O resultado das culturas de queratinócitos mostrou que no grupo não irradiado houve crescimento de um epitélio multiestratificado e diferenciado, inclusive com a formação de estrato córneo na situação de interface ar-líquido. No grupo irradiado, o epitélio formado era composto por duas a três camadas de estratificação e discreta diferenciação celular, com semelhanças entre o cultivo imerso ou em exposição ao ar. A MA glicerolada foi compatível ao crescimento de epitélios cultivados, demonstrando potencial ao uso como um possível substituto dermoepidérmico. A irradiação a 25 kGy provocou danos estruturais às MA, levando a alterações na membrana basal e facilitando a sua perda quando exposta ao protocolo de desepitelização. Esta perda pode explicar a diferença nos resultados do cultivo de queratinócitos em MA-i em relação ao MA-ni / The amniotic membrane (AM) is a biomaterial with biological properties that are beneficial to tissue repair. It has been used as a temporary coverage to threat burns and chronic wounds. Recently, it has been served as a substrate for keratinocytes culture to construct a living skin equivalent. However, MA is a biological material, and its transplantation could cause infectious disease for receptors. So, it must be preserved and sterilized before clinical use. The aim of this study was to evaluate the radiation effects on glycerol-preserved MA, considering its compatibility to support human keratinocytes culture. Four MA were stored in high concentrations of glycerol (> 85%) and half of them were radio sterilized with a dose of 25 kGy. Then, we established two groups: non-irradiated MA (MA-ni) and irradiated MA (MA-i). Both groups was de-epithelialized by a standardized protocol and was investigated morphologically, immunohistochemical and ultraestructural. Subsequently human keratinocytes were cultivated immersed and in air-liquid interface on denuded surface of MA-i and MA-ni. The results were compared at 14 and 21 days of culture by light and electron microscopy. After epithelial denudation, analyses demonstrated the continuity of the basement membrane in MA-ni group, whereas in the irradiated group, there was no indication of the basement membranes presence on the surface of MA. The cell cultures showed that in the non-irradiated group, there was growth of a multi-layered and differentiated epithelium, with a stratum corneums formation in air-liquid interface. In the irradiated group, the epithelium had only two or three layer, little cell differentiation, with the same results immersed or air-liquid interface system. Glycerol-preserved MA was biocompatible with the growth of a cultivated epithelium, showing its potential as a skin substitute. Irradiation at 25 kGy cause structural damage to the tissue, making changes in basement membrane, that facilitates its loss when exposed to the de-epithelialized protocol. The basement membranes loss may explain the difference between the keratinocytes cultivation on MA-I and MA-ni

Introdução e objetivo: Existem poucos estudos a respeito da imunidade inata em dermatofitoses (tinhas), este trabalho estudou a expressão dos receptores toll-like 2 e 4 em dermatofitoses por T. rubrum. Casuística e método: Estudaram-se sete pacientes com dermatofitose extensa, definida como pelo menos três segmentos corporais acometidos, e oito com a forma localizada. Inexistia qualquer imunodepressão primária ou secundária nos pacientes. Realizou-se em cada doente biópsia de área da pele lesada e sã, esta última distando pelo menos 4 cm da lesão. Outros 20 fragmentos de pele foram obtidos a partir de cirurgias estéticas. Utilizou-se a imuno-histoquímica com anticorpos anti-TLR2 e TLR4. As imagens foram analisadas pelo programa Image Pro Plus. A epiderme foi dividida em superficial e profunda, para análise da imunomarcação, considerando-se o ponto de divisão como 50% da sua espessura. Resultados: A análise da expressão do TLR4 em pacientes com tinha na epiderme superficial apresentou menores índices de densidade óptica (IDO), média 108,8±7,73 e 110,86±15,57 em pacientes com tinha localizada e extensa, respectivamente, em relação aos controles (145,26 ±21,88) com significância estatística. Também houve redução da expressão do TLR4 na epiderme profunda com IDO de 111,19±13,45 em dermatofitoses extensas e 144,65±17,20 nos controles (p=0,001). A análise da expressão do TLR2 na epiderme profunda em indivíduos com dermatofitose localizada evidenciou menor expressão na área lesada do que na sã do mesmo indivíduo, média 109,28±30,9 e 118,75±36,84, respectivamente (p 0.018). Embora não tenha havido redução da expressão do TLR2 na epiderme superficial comparativamente aos controles, na epiderme profunda encontrou-se, na área lesada das dermatofitoses extensas, menor expressão em relação aos controles, sendo 6,29±9,73 e 27,8±18,6, respectivamente. Conclusões: Encontrou-se menor expressão de TLR4 na epiderme superficial e profunda em indivíduos com dermatofitose comparativamente aos controles sadios. Em dermatofitoses extensas também a expressão de TLR2 está diminuída na epiderme profunda. Não existe diminuição da expressão do TLR2 na epiderme superficial provavelmente para manter a função de barreira da epiderme, onde este receptor é importante para coesão dos queratinócitos. Observou-se ainda menor expressão de TLR2 na pele lesada comparada à sã de indivíduos com dermatofitose localizada o que justificaria o fato destas lesões permanecerem limitadas a uma única área. / Introduction & Objectives: There are few studies to concern the role of innate immune response in dermatophytosis, so we conducted an investigation to define the involvement of TLRs in the course of tinea due T. rubrum infection. Patients & Methods: We allocated 8 patients with localised dermatophytosis and 7 with widespread one, defined as at least on three body segments. The skin was biopsied in two points: from lesion (active lesion) and healthy skin distant at least 4 cm. Twenty controls were obtained from cosmetic surgery. We use immunohistochemical staining with antibodies for antigens TLR 2 and 4. Images were analyzed. Results: (i) analysis of the expression of TLR4 of patients with tinea, found on the upper epidermis, average optical density index of 108,8±7,73 and 110,86±15,57 in localised and widespread tinea, respectively, and 145,26 ±21,88 in control skin; similar reduction maintain at lower one with average optical density index 111,19±13,45 in widespread tinea and 144,65±17,20 in controls p=0,001; (ii) analysis of TLR2 expression in the lower epidermis of patients with tinea met reduced optical density index in skin with localised tinea than in healthy skin, average 109,28±30,9 and 118,75±36,84, respectively, p 0.018. There were no reduction in TLR2 expression in upper epidermis compared to controls, although it was significant reduced in lower epidermis in widespread tinea, average 27,8±18,6 and 6,29±9,73. Conclusions: We found reduced expression of TLR4 in the lower and upper epidermis skin with tinea compared to controls in widespread and localised dermatophytosis. There was no reduction of TLR2 at upper epidermis probably in order to mantain the epidermal barrier function. We found yet a reduced expression of TLR2 in the infected skin compared to healthy one of the same patient with localised dermatophytosis which could explain that in these cases the tinea was not spread in extension.

A membrana amniótica (MA) é considerada um biomaterial com propriedades biológicas benéficas ao processo de reparação tecidual, servindo ao tratamento de feridas e queimaduras. Recentemente, tem sido usada como substrato para a construção de substitutos cutâneos, possibilitando o cultivo de queratinócitos humanos. Contudo, por se tratar de um material biológico, com risco de transmissão de doenças infectocontagiosas, necessita ser conservado e esterilizado antes de seu uso clínico. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da radiação ionizante sobre membranas amnióticas gliceroladas, com ênfase em sua compatibilidade ao cultivo de queratinócitos humanos. Quatro MA foram conservadas em altas concentrações de glicerol (>85%), sendo metade delas enviadas para radioesterilização a 25 kGy. Constituíram-se dois grupos de estudo: MA não irradiadas (MA-ni) e MA irradiadas (MA-i). Ambos os grupos foram submetidos a protocolo padronizado de desepitelização e avaliados por microscopia óptica (Hematoxilina-eosina e Picrossirius), imunofluorescência para colágeno IV e laminina e microscopia eletrônica. Posteriormente, foram cultivados queratinócitos humanos sobre as superfícies desepitelizadas das bases de MA-ni e MA-i em situação imersa e em interface ar-líquido. Foram comparados os resultados nos instantes 14 e 21 dias de cultivo, por microscopia óptica e eletrônica. As análises microscópicas, após a denudação epitelial, demonstraram que no grupo não irradiado a continuidade da membrana basal encontrava-se preservada, enquanto no grupo irradiado não existia nenhum indício de resquício da presença da membrana basal na superfície do material. O resultado das culturas de queratinócitos mostrou que no grupo não irradiado houve crescimento de um epitélio multiestratificado e diferenciado, inclusive com a formação de estrato córneo na situação de interface ar-líquido. No grupo irradiado, o epitélio formado era composto por duas a três camadas de estratificação e discreta diferenciação celular, com semelhanças entre o cultivo imerso ou em exposição ao ar. A MA glicerolada foi compatível ao crescimento de epitélios cultivados, demonstrando potencial ao uso como um possível substituto dermoepidérmico. A irradiação a 25 kGy provocou danos estruturais às MA, levando a alterações na membrana basal e facilitando a sua perda quando exposta ao protocolo de desepitelização. Esta perda pode explicar a diferença nos resultados do cultivo de queratinócitos em MA-i em relação ao MA-ni / The amniotic membrane (AM) is a biomaterial with biological properties that are beneficial to tissue repair. It has been used as a temporary coverage to threat burns and chronic wounds. Recently, it has been served as a substrate for keratinocytes culture to construct a living skin equivalent. However, MA is a biological material, and its transplantation could cause infectious disease for receptors. So, it must be preserved and sterilized before clinical use. The aim of this study was to evaluate the radiation effects on glycerol-preserved MA, considering its compatibility to support human keratinocytes culture. Four MA were stored in high concentrations of glycerol (> 85%) and half of them were radio sterilized with a dose of 25 kGy. Then, we established two groups: non-irradiated MA (MA-ni) and irradiated MA (MA-i). Both groups was de-epithelialized by a standardized protocol and was investigated morphologically, immunohistochemical and ultraestructural. Subsequently human keratinocytes were cultivated immersed and in air-liquid interface on denuded surface of MA-i and MA-ni. The results were compared at 14 and 21 days of culture by light and electron microscopy. After epithelial denudation, analyses demonstrated the continuity of the basement membrane in MA-ni group, whereas in the irradiated group, there was no indication of the basement membranes presence on the surface of MA. The cell cultures showed that in the non-irradiated group, there was growth of a multi-layered and differentiated epithelium, with a stratum corneums formation in air-liquid interface. In the irradiated group, the epithelium had only two or three layer, little cell differentiation, with the same results immersed or air-liquid interface system. Glycerol-preserved MA was biocompatible with the growth of a cultivated epithelium, showing its potential as a skin substitute. Irradiation at 25 kGy cause structural damage to the tissue, making changes in basement membrane, that facilitates its loss when exposed to the de-epithelialized protocol. The basement membranes loss may explain the difference between the keratinocytes cultivation on MA-I and MA-ni

A infecção por papilomavírus humano (HPV) é o principal fator de risco para o desenvolvimento de neoplasias intra-epiteliais cervicais, as lesões precursoras do carcinoma da cérvice uterina. O fator de necrose tumoral-α (TNF-α) é um dos principais mediadores da inflamação da pele e das mucosas. Esta citocina é capaz de inibir a proliferação de queratinócitos normais e imortalizados por HPV-16. Por outro lado, queratinócitos imortalizados por HPV-18 ou transformados por HPV 16 ou 18 são resistentes aos efeitos do TNF-α. Entretanto, a base molecular desta diferença ainda é pouco conhecida. No presente estudo observamos o aumento dos níveis do inibidor de quinases p21, diminuição dos níveis de ciclina A e a ativação do fator NF-κB após tratamento com TNF-α, apenas em células sensíveis à citocina. Por outro lado não foi observada alteração dos níveis de p16, p27, p65, ciclinas D1, E e CDKs -4 e -6 em nenhuma das linhagens estudadas. Culturas organotípicas (rafts) de queratinócitos normais apresentaram uma acentuada inibição da proliferação após o tratamento com TNF-α. Isso não foi observado em rafts de queratinócitos infectados com o genoma completo de HPV-18. Entretanto, as culturas organotípicas transduzidas com vetores retrovirais contendo o gene viral E7 apresentaram um fenótipo intermediário, indicando que a proteína E7 desempenha um papel na resistência a esta citocina. / Infection by Human papillomavirus (HPV) is the major etiologic factor in the development of cervical intra-epithelial neoplasia, the precursor of carcinoma of the uterine cervix. Tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) is one of the main mediators of skin and mucosa inflamation and has a potent anti-proliferative effect on normal and HPV16 immortalized keratinocytes. On the other hand, HPV-18 immortalized and HPV-16 or -18 transformed keratinocytes are resistant to TNF-α. However the molecular basis of this difference is not well understood. In the present study we observed and increase in the CDK inhibitor p21, reduced levels of cyclin A and activation of NF-κB factor only in cells sensitive to this cytokine. Conversely, no alterations in the p16, p27, p65, cyclins D1, E and CDKs -4 and -6 levels was observed in any of the cell lines analyzed. Proliferation of normal primary human keratinocytes (PHK) raft cultures was markedly inhibited after treatment with TNF-α. This was not observed in cultures transfected with HPV-18 whole genome. Cultures transduced retroviral vectors carrying the E7 viral gene showed an intermediate phenotype suggesting that this protein contribute to TNF-α resistance.

Orientador: Daniel Galera Bernabé / Resumo: O estresse crônico aumenta os níveis sistêmicos dos hormônios do estresse norepinefrina e cortisol. Assim como o carcinógeno específico do tabaco NNK (4-(metilnitrosamina)-1-(3-piridil)-1-butanona), estes hormônios podem induzir danos expressivos no DNA, o que contribui para o desenvolvimento do câncer. No entanto, é desconhecido se os hormônios do estresse possuem efeitos genotóxicos em queratinócitos de boca. Este estudo investigou os efeitos dos hormônios do estresse sobre o dano no DNA de uma linhagem celular de queratinócitos humanos de boca (NOK-SI). Células NOK-SI estimuladas com norepinefrina ou cortisol apresentaram maior dano no DNA que as células não tratadas. O dano induzido pela norepinefrina foi revertido pelo pré-tratamento das células com um beta-bloqueador. Células tratadas com NNK combinado à norepinefrina apresentaram níveis reduzidos das caspases 3 e 7. O cortisol também reduziu a atividade das enzimas pro-apoptóticas em relação às células não estimuladas. O dano no DNA promovido pelo NNK e cortisol e pela combinação de ambos levou ao acúmulo de γH2AX intracelular. Os efeitos causados pelo NNK e cortisol foram bloqueados com propranolol e com o antagonista do receptor de glicorcorticoide RU486, respectivamente. As quebras no DNA induzidas pela norepinefrina, na presença ou ausência de NNK, resultaram em maiores níveis celulares de 8OHdG. Este efeito também foi induzido via receptores beta-adrenérgicos. Os hormônios do estresse induzem danos no DNA de quera... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Chronic stress increases the systemic levels of stress hormones norepinephrine and cortisol. As well tobacco-specific carcinogen NNK (4-(methylnitrosamine)-1-(3-pyridyl)-1-butanone), they can induce expressive DNA damage contributing to the cancer development. However, it is unknown whether stress hormones have genotoxic effects in oral keratinocytes. This study investigated the effects of stress hormones on DNA damage in a human oral keratinocyte cell line (NOK-SI). NOK-SI cells stimulated with norepinephrine or cortisol showed higher DNA damage than untreated cells. Norepinephrine-induced DNA damage was reversed by pre-treatment with beta-adrenergic blocker propranolol. Cells treated with NNK combined to norepinephrine displayed reduced levels of caspases 3 and 7. Cortisol also reduced the activity of pro-apoptotic enzymes. DNA damage promoted by NNK or cortisol and carcinogen combined to the hormone led to intracellular γH2AX accumulation. The effects caused by NNK and cortisol were abolished by propranolol and glucocorticoid receptor antagonist RU486, respectively. DNA breaks induced by norepinephrine in the presence or absence of NNK resulted in higher 8OHdG cellular levels. This effect was also induced through beta-adrenergic receptors. Stress hormones induce DNA damage of oral keratinocytes and could contribute to oral carcinogenesis. / Doutor

O tingimento de tecidos começou há milhares de anos e a disponibilidade comercial de corantes é enorme e crescente. A indústria têxtil brasileira desempenha um papel de inquestionável importância, destacando-se entre as principais atividades econômicas do país. O processo de tingimento é um dos fatores fundamentais no sucesso comercial dos produtos têxteis, uma vez que o consumidor exige cores resistentes à exposição ao calor, à luz, à transpiração e às lavagens. Segundo a literatura, condições de transpiração intensa contribuem para uma alta taxa de migração e subseqüente penetração de corantes têxteis para a pele humana. Além disso, 2 a 50% desses compostos permanecem no banho de tingimento e são descartados nos efluentes industriais, contaminando o ambiente e colocando em risco a saúde humana, uma vez que os métodos convencionais de tratamento de efluentes são ineficientes na remoção da coloração e da mutagenicidade de alguns corantes. Dentro deste contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos toxicogenéticos do corante Direct Black (DB38) original e após extração por lixiviação com suor sintético, utilizando o teste do cometa com fibroblastos e queratinócitos de pele humana, o teste Anexina V com fibroblastos e o ensaio de mutagenicidade com Salmonella typhimurium. Adicionalmente, foi investigada a ecotoxicidade dos corantes têxteis Direct Black 38 e Reactive Blue 15 (RB15) originais por meio de ensaios com sementes, dapnhias, minhocas e zebrafish realizados na UTOX, em Barcelona. O corante DB38 original e lixiviado não induziram genotoxicidade em fibroblastos e queratinócitos de pele humana. O corante DB38 original foi mutagênico para as linhagens TA98 e TA100 de S. typhimurium na presença de S9. Entretanto, o corante lixiviado não induziu mutagenicidade para essas linhagens testadas, considerando que a maior taxa de migração do corante para a solução de suor foi de ~1% nas seguintes condições: tingimento sem ensaboamento, pH 8,0 e 8 horas de incubação à 42°C. O corante original é citotóxico para fibroblastos após 48 horas de exposição. No entanto, essa citotoxicidade não foi mais observada após a lixiviação no suor. Os corantes DB38 e RB15 originais não foram tóxicos para as sementes de pepino, alface e tomate, e nem para as minhocas Eisenia foetida. Ambos os corantes foram fracamente tóxicos para Daphnia magna, porém o RB15 apresenta maior potencial tóxico em relação ao DB38. Os corantes DB38 e RB15 induziram malformações em larvas de zebrafish Danio rerio, caracterizadas por falha na inflação da bexiga natatória e alteração na cauda. Portanto, nossos resultados mostram a importância de se fazer não só a análise individual de corantes têxteis, mas também dos tecidos que os contêm. Além da necessidade de se desenvolver técnicas de tingimento mais seguras em relação à solidez da cor sob condições úmidas e as perdas de corante para o ambiente durante a etapa de fixação, indicando maior atenção ao estudo de efeitos sub-letais na avaliação do impacto desses compostos no ecossistema aquático. / The fabrics dyeing began thousands of years ago and the commercial availability of dyes is increasingly. The Brazilian textile industry plays a role of high importance, highlighting among the main economic activities in the country. The dyeing process is one of the key factors in the commercial success of textile products, since consumers are demanding colors more resistant to heat, light exposure, perspiration and washing. According to the literature, conditions of intense perspiration contribute to the migration and subsequent penetration of textile dyes to human skin. Furthermore, 2 to 50% of the initial dye load is present in the dye bath effluent and these compounds are discharged in industrial effluents, contaminating the environment and endangering human health, since the wastewater treatment systems are ineffective in removing the color and mutagenicity of some dyes. In this context, this study aimed to evaluate the toxicogenetic effects of the Direct Black 38 (DB38) dye original and extracted by leaching with artificial sweat using Comet assay with fibroblasts and keratinocytes from human skin, Anexin V assay with fibroblasts and Salmonella mutagenicity test. Additionally, we investigated the ecotoxicity of textile dye Direct Black 38 and Reactive Blue 15 (RB15) using assays with seeds, dapnhias, worms and zebrafish performed in UTOX in Barcelona. The original and leached DB38 dye did not induce genotoxicity in fibroblasts and keratinocytes from human skin. The original DB38 was mutagenic for TA98 and TA100 of S. typhimurium with S9. However, the solution with the leached dye did not induce mutagenicity for these tested strains, since the highest migration rate of the dye to the solution of artificial sweat was ~ 1% in the following conditions: type of dyeing without rinsing, pH 8.0 and 8-hour incubation at 42°C. The original dye was cytotoxic for fibroblasts after 48 hours of exposure. However, this cytotoxicity was no longer observed after leaching in sweat. The original DB38 and RB15 dyes showed no toxicity for cucumber, lettuce and tomato seeds and for earthworms Eisenia foetida. Both dyes were weakly toxic for Daphnia magna, but the RB15 has a higher toxic potential compared to DB38. The dyes DB38 and RB15 induced malformations in larvae of zebrafish Danio rerio by failure of the swim bladder inflation and changes in the tail. Therefore, our results show the importance of making the individual analysis of textile dyes, but also of fabrics containing them. Furthermore, it is necessary to develop safer techniques of dyeing in relation to the color fastness under humid conditions and the loss of dyes into the environment during the fixation step, indicating more attention to the study of sub-lethal effects in the evaluation of the impact of these compounds in the aquatic ecosystem.

O tingimento de tecidos começou há milhares de anos e a disponibilidade comercial de corantes é enorme e crescente. A indústria têxtil brasileira desempenha um papel de inquestionável importância, destacando-se entre as principais atividades econômicas do país. O processo de tingimento é um dos fatores fundamentais no sucesso comercial dos produtos têxteis, uma vez que o consumidor exige cores resistentes à exposição ao calor, à luz, à transpiração e às lavagens. Segundo a literatura, condições de transpiração intensa contribuem para uma alta taxa de migração e subseqüente penetração de corantes têxteis para a pele humana. Além disso, 2 a 50% desses compostos permanecem no banho de tingimento e são descartados nos efluentes industriais, contaminando o ambiente e colocando em risco a saúde humana, uma vez que os métodos convencionais de tratamento de efluentes são ineficientes na remoção da coloração e da mutagenicidade de alguns corantes. Dentro deste contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos toxicogenéticos do corante Direct Black (DB38) original e após extração por lixiviação com suor sintético, utilizando o teste do cometa com fibroblastos e queratinócitos de pele humana, o teste Anexina V com fibroblastos e o ensaio de mutagenicidade com Salmonella typhimurium. Adicionalmente, foi investigada a ecotoxicidade dos corantes têxteis Direct Black 38 e Reactive Blue 15 (RB15) originais por meio de ensaios com sementes, dapnhias, minhocas e zebrafish realizados na UTOX, em Barcelona. O corante DB38 original e lixiviado não induziram genotoxicidade em fibroblastos e queratinócitos de pele humana. O corante DB38 original foi mutagênico para as linhagens TA98 e TA100 de S. typhimurium na presença de S9. Entretanto, o corante lixiviado não induziu mutagenicidade para essas linhagens testadas, considerando que a maior taxa de migração do corante para a solução de suor foi de ~1% nas seguintes condições: tingimento sem ensaboamento, pH 8,0 e 8 horas de incubação à 42°C. O corante original é citotóxico para fibroblastos após 48 horas de exposição. No entanto, essa citotoxicidade não foi mais observada após a lixiviação no suor. Os corantes DB38 e RB15 originais não foram tóxicos para as sementes de pepino, alface e tomate, e nem para as minhocas Eisenia foetida. Ambos os corantes foram fracamente tóxicos para Daphnia magna, porém o RB15 apresenta maior potencial tóxico em relação ao DB38. Os corantes DB38 e RB15 induziram malformações em larvas de zebrafish Danio rerio, caracterizadas por falha na inflação da bexiga natatória e alteração na cauda. Portanto, nossos resultados mostram a importância de se fazer não só a análise individual de corantes têxteis, mas também dos tecidos que os contêm. Além da necessidade de se desenvolver técnicas de tingimento mais seguras em relação à solidez da cor sob condições úmidas e as perdas de corante para o ambiente durante a etapa de fixação, indicando maior atenção ao estudo de efeitos sub-letais na avaliação do impacto desses compostos no ecossistema aquático. / The fabrics dyeing began thousands of years ago and the commercial availability of dyes is increasingly. The Brazilian textile industry plays a role of high importance, highlighting among the main economic activities in the country. The dyeing process is one of the key factors in the commercial success of textile products, since consumers are demanding colors more resistant to heat, light exposure, perspiration and washing. According to the literature, conditions of intense perspiration contribute to the migration and subsequent penetration of textile dyes to human skin. Furthermore, 2 to 50% of the initial dye load is present in the dye bath effluent and these compounds are discharged in industrial effluents, contaminating the environment and endangering human health, since the wastewater treatment systems are ineffective in removing the color and mutagenicity of some dyes. In this context, this study aimed to evaluate the toxicogenetic effects of the Direct Black 38 (DB38) dye original and extracted by leaching with artificial sweat using Comet assay with fibroblasts and keratinocytes from human skin, Anexin V assay with fibroblasts and Salmonella mutagenicity test. Additionally, we investigated the ecotoxicity of textile dye Direct Black 38 and Reactive Blue 15 (RB15) using assays with seeds, dapnhias, worms and zebrafish performed in UTOX in Barcelona. The original and leached DB38 dye did not induce genotoxicity in fibroblasts and keratinocytes from human skin. The original DB38 was mutagenic for TA98 and TA100 of S. typhimurium with S9. However, the solution with the leached dye did not induce mutagenicity for these tested strains, since the highest migration rate of the dye to the solution of artificial sweat was ~ 1% in the following conditions: type of dyeing without rinsing, pH 8.0 and 8-hour incubation at 42°C. The original dye was cytotoxic for fibroblasts after 48 hours of exposure. However, this cytotoxicity was no longer observed after leaching in sweat. The original DB38 and RB15 dyes showed no toxicity for cucumber, lettuce and tomato seeds and for earthworms Eisenia foetida. Both dyes were weakly toxic for Daphnia magna, but the RB15 has a higher toxic potential compared to DB38. The dyes DB38 and RB15 induced malformations in larvae of zebrafish Danio rerio by failure of the swim bladder inflation and changes in the tail. Therefore, our results show the importance of making the individual analysis of textile dyes, but also of fabrics containing them. Furthermore, it is necessary to develop safer techniques of dyeing in relation to the color fastness under humid conditions and the loss of dyes into the environment during the fixation step, indicating more attention to the study of sub-lethal effects in the evaluation of the impact of these compounds in the aquatic ecosystem.

O desenvolvimento do câncer cervical depende da exposição ao HPV, fator necessário, mas não suficiente. Outras bactérias, tais como ureaplasmas, têm sido associadas como cofatores. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de ureaplasmas em mulheres com lesão cervical, e observar alterações em PHK causadas pela infecção por ureaplasmas. 140 swabs vaginais foram coletados. O material foi submetido a PCR para a detecção de HPV, Mollicutes, U. urealyticum, U. parvum e seus sorotipos, e outras bactérias de importância ginecológica; e qPCR para U. urealyticum e U. parvum. Também foi realizada a infecção de ureaplasmas em PHK transformados com HPV. As células foram contadas e realizou-se a dosagem das citocinas IL1-β, IL-6 e TNF-α. HPV, Mollicutes, U. parvum, sorotipos 1 e 6 de U. parvum, T. vaginalis e G. vaginalis, além de alguns fatores socioeconômicos, foram associados com lesão cervical. Verificou-se maior carga de U. parvum entre mulheres com lesão. Houve diminuição do número de células e maior liberação de IL-6 e TNF-α nos grupos infectados. Com os resultados obtidos neste estudo, foi possível verificar uma associação entre os ureaplasmas e HPV no início das lesões cervicais, contudo mais estudos precisam ser realizados para aprimorar essa hipótese. / The development of cervical cancer depends on the exposure to HPV, necessary factor, but not enough. Other bacteria, such as ureaplasmas, have been associated as cofactors. The aim of this study was to evaluate the presence of ureaplasmas in women with cervical injury, and observe changes in PHK infected by ureaplasmas. 140 vaginal swabs were collected. The material was subjected to PCR for detection of HPV, Mollicutes, Ureaplasma urealyticum, U. parvum (and serotypes) and other bacteria gynecological importance; qPCR for U. urealyticum and U. parvum was made. PHK transformed by HPV was infected by ureaplasma. Cells were counted and it was done titration of IL1-β, IL-6 and TNF-α. HPV, Mollicutes, U. parvum, serotypes 1 and 6 U. parvum, T. vaginalis and G. vaginalis, and some socioeconomic factors were associated with cervical injury. Besides this, it was detected higher load U. parvum among women with injury. There was decrease in cell number and increased release of IL-6 and TNF-α in infected groups. With the results of this study, we found an association among HPV and ureaplasmas at the beginning of cervical lesions, but more studies are needed to enhance this hypothesis.

O desenvolvimento do câncer cervical depende da exposição ao HPV, fator necessário, mas não suficiente. Outras bactérias, tais como ureaplasmas, têm sido associadas como cofatores. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de ureaplasmas em mulheres com lesão cervical, e observar alterações em PHK causadas pela infecção por ureaplasmas. 140 swabs vaginais foram coletados. O material foi submetido a PCR para a detecção de HPV, Mollicutes, U. urealyticum, U. parvum e seus sorotipos, e outras bactérias de importância ginecológica; e qPCR para U. urealyticum e U. parvum. Também foi realizada a infecção de ureaplasmas em PHK transformados com HPV. As células foram contadas e realizou-se a dosagem das citocinas IL1-β, IL-6 e TNF-α. HPV, Mollicutes, U. parvum, sorotipos 1 e 6 de U. parvum, T. vaginalis e G. vaginalis, além de alguns fatores socioeconômicos, foram associados com lesão cervical. Verificou-se maior carga de U. parvum entre mulheres com lesão. Houve diminuição do número de células e maior liberação de IL-6 e TNF-α nos grupos infectados. Com os resultados obtidos neste estudo, foi possível verificar uma associação entre os ureaplasmas e HPV no início das lesões cervicais, contudo mais estudos precisam ser realizados para aprimorar essa hipótese. / The development of cervical cancer depends on the exposure to HPV, necessary factor, but not enough. Other bacteria, such as ureaplasmas, have been associated as cofactors. The aim of this study was to evaluate the presence of ureaplasmas in women with cervical injury, and observe changes in PHK infected by ureaplasmas. 140 vaginal swabs were collected. The material was subjected to PCR for detection of HPV, Mollicutes, Ureaplasma urealyticum, U. parvum (and serotypes) and other bacteria gynecological importance; qPCR for U. urealyticum and U. parvum was made. PHK transformed by HPV was infected by ureaplasma. Cells were counted and it was done titration of IL1-β, IL-6 and TNF-α. HPV, Mollicutes, U. parvum, serotypes 1 and 6 U. parvum, T. vaginalis and G. vaginalis, and some socioeconomic factors were associated with cervical injury. Besides this, it was detected higher load U. parvum among women with injury. There was decrease in cell number and increased release of IL-6 and TNF-α in infected groups. With the results of this study, we found an association among HPV and ureaplasmas at the beginning of cervical lesions, but more studies are needed to enhance this hypothesis.