Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Economia, Administração e Contabilidade, Departamento de Economia, Programa de Pós-Graduação em Ciências Econômicas, 2018. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-05-07T16:43:28Z No. of bitstreams: 1 2017_CauêMellodaSilva.pdf: 2767439 bytes, checksum: 16c53fb22303fba6fe0dcaa97a3d1f78 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-05-17T18:28:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_CauêMellodaSilva.pdf: 2767439 bytes, checksum: 16c53fb22303fba6fe0dcaa97a3d1f78 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-17T18:28:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_CauêMellodaSilva.pdf: 2767439 bytes, checksum: 16c53fb22303fba6fe0dcaa97a3d1f78 (MD5) Previous issue date: 2018-05-16 / Este trabalho apresenta um framework computacional em linguagem Python, desenvolvido para estudar os efeitos de diferentes políticas regulatórias no mercado bancário através de simulações baseadas em agentes. Tem por objetivo principal disponibilizar um software de desenvolvimento colaborativo com boa manutenibilidade1, que possa ser facilmente alterado para comportar novos modelos econômicos. O modelo inicial baseia-se em uma versão iterada do modelo Diamond-Dybvig, com diferentes tipos de agentes, tais como bancos, firmas, depositantes e o Banco Central, capazes de fazer escolhas e interagirem entre si. O modelo inicial também utiliza a estrutura de aprendizado EWA, permitindo que os agentes definam suas estratégias de acordo com experiências anteriores. Ao final, disponibiliza-se exemplos de utilização do framework através de simulações, permitindo a análise dos dados e o estudo das políticas regulatórias simuladas e das estruturas das redes formadas pelos bancos no mercado interbancário. / This work presents a computational framework in Python language, developed to study the effects of different regulatory policies in the banking market through agent-based simulations. Its main goal is to provide a collaborative software with good maintainability that can be easily modified to include new economic models. The initial model is based on an iterated version of Diamond-Dybvig model, with different agent types, such as banks, firms, depositors and the Central Bank, capable of making choices and interacting with each other. The initial model also uses the EWA learning structure, allowing agents to define their own strategies according to previous experiences. At the end, there are examples of using the framework through simulations, allowing the analysis of the data and the study of simulated regulatory policies and network structures formed by banks in the interbank market.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo672_1.pdf: 1476153 bytes, checksum: b99f329760541571ee9fb6fb1969fcab (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O estabelecimento de agências reguladoras autônomas na década de 1990 representou uma reorganização do sistema regulatório brasileiro e também uma nova forma de relacionamento entre os atores políticos e os órgãos regulatórios. Contudo, o jogo da regulação não termina com o estabelecimento das regras formais. Independência formal se traduz em independência na prática? Há interferência do Executivo nas agências regulatórias após o seu estabelecimento formal como órgãos independentes? Em quais condições o Executivo escolherá interferir nas agências? Tendo em mente tais questionamentos, o presente trabalho busca identificar o grau de interferência nas agências regulatórias federais recém criadas no Brasil e prover uma tentativa de explicação para a variação no grau de interferência. As hipóteses básicas que são exploradas na análise é que o custo de credibilidade, que varia ao longo das áreas temáticas, o grau de independência formal apresentado pelas agências bem como as preferências dos presidentes são fatores cruciais que afetam o grau que os presidentes interferem no processo regulatório. Um modelo de efeitos aleatórios é estimado com dados de painel para o período de 1997 a 2008, cobrindo 10 agências federais. O grau de interferência é operacionalizado por um índice construído usando análise fatorial, que captura dimensões distintas ta interferência, incluindo contingenciamento orçamentário e vacância das diretorias. Os dados sugerem que há interferência política nas agências regulatórias no Brasil, que varia entre as agências e ao longo do tempo. Por sua vez, a independência formal é operacionalizada por um índice referente à, entre outros, regras de indicação e demissão, autonomia financeira e funcional. A análise mostra que as preferências do presidente e o custo de credibilidade importam para a escolha que os presidentes fazem de interferir no processo regulatório

NEGREIROS, Josiany Melo. Gestão financeira das agências reguladoras estaduais multissetoriais: análise, perspectiva e desafios. 2014. 106 f. Dissertação (Mestrado) – Universidade Federal do Ceará, Faculdade de Economia, Administração, Atuária e Contabilidade, Programa de Pós-Graduação em Administração e Controladoria, Fortaleza-CE, 2014. / Submitted by Dioneide Barros (dioneidebarros@gmail.com) on 2016-03-21T17:21:03Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_jmnegreiros.pdf: 693896 bytes, checksum: bcecafb3a3f7e32dc43272fbd807960a (MD5) / Approved for entry into archive by Dioneide Barros(dioneidebarros@gmail.com) on 2016-03-23T13:34:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_jmnegreiros.pdf: 693896 bytes, checksum: bcecafb3a3f7e32dc43272fbd807960a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-23T13:34:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_jmnegreiros.pdf: 693896 bytes, checksum: bcecafb3a3f7e32dc43272fbd807960a (MD5) Previous issue date: 2014 / In a context of administrative reforms to public administration, Brazil underwent changes in the 1990s with the objective of reducing red tape and of approximating the public management to the standards of the private sector. For more efficient management, it was necessary the downsizing of public administration, transferring to the private sector activities that could be controlled by the market. Thus, several utilities concessionaires were privatized, and regulatory agencies were created to ensure the quality of their services. To fulfill this mission, the agencies should be provided with administrative and financial autonomy, exempting therefore political interference in their activities. Thus, noting the need for financial autonomy and the consequent self-sufficiency of resources that should be granted to independent regulatory agencies, this study aimed to analyze the multisectoral state regulatory agencies under the financial perspective in the light of the proposed model in the literature and the expected evolution of the reality of regulation in Brazil. For this analysis, we used bibliographical research and field survey with the application in 19 state agencies. After grouped, summarized and compared with the applied literature, the survey results identified the lack of financial autonomy for state agencies in most cases, be it related to the need of resources or freedom to manage their allocation. In this sense, 88% of the agencies that took the survey found that the bureaucracy itself and the barriers created by their state governments are the major obstacles to the implementation of its resources. Moreover, it was observed that some state agencies have evolved institutionally and that there are still many challenges to overcome. / Num contexto de reformas administrativas à gestão pública, o Brasil passou por alterações na década de 1990 com vistas à redução dos entraves burocráticos e à aproximação da administração pública aos padrões da iniciativa privada. Para uma gestão mais eficiente, fazia-se necessário o enxugamento da máquina pública, transferindo para o setor privado atividades que poderiam ser controladas pelo mercado. Assim, diversas empresas prestadoras de serviços públicos foram privatizadas, tendo sido criadas agências reguladoras para assegurar a qualidade da prestação desses serviços. Para o cumprimento dessa missão, as agências deveriam ser dotadas de autonomia administrativa e financeira, eximindo-se, portanto, de ingerência política em suas atividades. Assim, observando a necessidade de autonomia financeira e a consequente autossuficiência de recursos que deveriam ser próprias das agências reguladoras independentes, o presente estudo objetivou analisar as agências reguladoras estaduais multissetoriais sob a perspectiva financeira, à luz do modelo proposto na literatura e da evolução esperada para a realidade da regulação no Brasil. Para esta análise, foi utilizada pesquisa bibliográfica, documental e de campo, com a aplicação de survey em 19 agências estaduais. Após agrupados, resumidos e comparados com a literatura aplicada, os resultados da pesquisa identificaram a ausência de autonomia financeira para as agências estaduais na maioria dos casos, seja ela relacionada à necessidade de recursos ou de liberdade para gerir sua alocação. Neste sentido, 88% das agências respondentes da pesquisa consideraram que a burocracia própria da gestão pública e os entraves criados por seus Governos Estaduais são os maiores empecilhos à execução de seus recursos. Ademais, observou-se que as agências estaduais pouco evoluíram institucionalmente e que há ainda muitos desafios a superar.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-27Bitstream added on 2014-06-13T19:33:59Z : No. of bitstreams: 1 zeppone_sc_me_arafcf.pdf: 626692 bytes, checksum: 4b05bfe9c52d2fcd412757520fc77ea9 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A alergia à proteína do leite de vaca (APLV) é comum no primeiro ano de vida e o seu reconhecimento e diagnóstico são difíceis. A proposta deste estudo é verificar a expressão de fenótipos linfocitários, as citocinas padrão Th1 e Th2, e a IgE total e específica em crianças com APLV, crianças atópicas (AC) e não atópicas (NAC) e suas respectivas mães.Foram colhidas amostras de sangue periférico para tipagem de linfócitos por citometria de fluxo, e dosadas as citocinas séricas, por CBA (Cytometric Bead Array) e dosado a IgE total e específica para as proteínas caseína, α lactoalbumina e β lactoglobulina , das crianças e suas mães nos grupos APLV, AC e NAC.Nas crianças do grupo APLV o início dos sintomas foi por volta dos 5,1 meses de idade, com idade média de 17,25 meses (sd=14,8 meses). As crianças e suas mães dos grupos alérgicos (APLV e AC) mostraram maior número de linfócitos CD4+CD25+ (p<0,05) em relação àquelas do grupo não alérgico (NAC), mas sem diferença significativa (p>0,05) entre os grupos APLV e AC. O grupo APLV mostrou maior tendência à presença do fenótipo CD25. As concentrações séricas das citocinas IL4, IL5, IL10, IL2, TNF-α e IFN-γ, entre os grupos estudados, não apresentaram diferenças estatísticas significantes (p>0,05), porém houve uma maior tendência à expressão da IL10 nas crianças do grupo APLV. A IgE total ficou mais evidente no grupo APLV do que nos demais grupos, e os principais alérgenos foram a α-lactoalbumina e β lactoglobulina. As crianças com alergia ao leite de vaca apresentam uma maior positividade de linfócitos CD4+CD25+, presença de IgE total e expressão de IL10 in vivo o que também pode sugerir um meio de controle da alergia para desenvolver tolerância à proteína do leite de vaca... / The allergy to cow‟s milk protein (CMA) is common in the first year of life and it is difficult to acknowledge and diagnose it. This study aims to verify the expression of lymphocyte phenotypes, detect the TH2 and TH1 pattern cytokines and the total and specific IgE in CMA children, in atopic (AC) and non-atopic (NAC) children and their respective mothers. Samples of peripheral blood were collected in order to type the lymphocytes by flow cytometry, dosed the serial cytokines by Cytometric Bead Array (CBA) and dosed the total IgE and specific IgE for the casein, α lactoalbumin and β lactoglobulin proteins of the children and their mothers in the CMA, AC and NAC groups. In the CMA children the symptoms first occurred around 5,1months old, with the average age of 17.25 months (sd=14.8 months). The children and their mothers from the allergic group (CMA and AC) showed significantly presence of CD4+CD25+ lymphocytes (p<0.05) higher than the non-allergic group (NAC), but without any significant difference (p>0.05) between the CMA and AC groups, although there was a tendency to an increase presence of these cells in the CMA group. The serial concentration of the IL4, IL5, IL10, IL2, TNF-α and IFN-γ cytokines, among the studied groups, did not present significant statistical difference (p>0.05), however, there was a tendency to an increase expression of IL10 in the CMA group of children. The total IgE was more evident in the CMA group than in the other ones and the main proteins which caused allergic reactions were α-lactoalbumin e β lactoglobulin. The children with cow‟s milk allergy presented a higher positivity of CD4+CD25+ lymphocytes, higher total IgE and an increase expression of in vivo IL10, which may also suggest a means of control of the allergy to develop tolerance to the cow‟s milk proteins... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:01:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo7177_1.pdf: 1928980 bytes, checksum: 7200aed58639d2418b3492895d4e9061 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Nos últimos anos, um grande volume de dados de várias espécies vem sendo obtido através de novas técnicas criadas e aperfeiçoadas pela biologia. Entre elas, tecnologias para medir as diferenças das expressões dos genes, através de concentrações de mRNA (microarray), estão se tornando extremamente populares e seus custos estão diminuindo. A inferência de redes regulatórias de genes a partir de dados de expressão gênica para estudar o metabolismo dos organismos é um processo importante e faz surgir o desafio de conectar os genes e seus produtos em vias metabólicas, circuitos e redes funcionais. O conhecimento sobre redes regulatórias de genes pode fornecer informações valiosas para tratamento de doenças, identificação de quais genes controlam e regulam eventos celulares e descoberta de vias metabólicas mais complexas. Uma rede regulatória de genes é um modelo que representa as regulações entre genes usando um grafo direcionado, no qual os nós indicam os genes e uma aresta (Gene 1, Gene 2) indica que o Gene 1 regula o Gene 2 (através de ativação ou repressão). Vários métodos foram propostos no decorrer dos anos para inferir uma rede regulatória de genes a partir de dados de microarray de DNA usando modelos matemáticos, tais como equações diferenciais, redes Booleanas e redes Bayesianas. Este trabalho apresenta o estudo do modelo de Rede Bayesiana e a implementação de dois programas, um usando o modelo de Rede Bayesiana e o outro usando o modelo Rede Bayesiana dinâmica, ambos com regressão não-paramétrica para inferir redes regulatórias de genes a partir de dados de expressão gênica de microarray de DNA. O critério usado para escolher as melhores redes foi o Bayesian Information Criterion (BIC), que é mais simples do que outros critérios existentes, mas ainda assim, é uma abordagem eficiente. Os resultados do trabalho foram comparados com os de trabalhos anteriores usando dois conjuntos de dados: dados artificiais para inferir uma rede regulatória artificial de genes; e dados reais de microarray do ciclo celular da levedura Saccharomyces cerevisiae para inferir o ciclo do ácido tricarboxílico (TCA). Os experimentos com os dados artificiais apresentaram bons resultados quando comparados com modelos anteriores, principalmente quando informações a priori foram adicionadas. Os experimentos com dados biológicos foram mais surpreendentes, pois a quantidade de amostras existentes era pequena e, mesmo assim, os resultados obtidos foram tão bons quanto os resultados dos modelos anteriormente propostos. A inferência de redes de genes a partir de dados de microarray usando modelos matemáticos é um problema recente e difícil. Este trabalho apresenta um modelo relativamente simples com resultados promissores, podendo ser estendido em trabalhos futuros

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2015-12-09T16:05:03Z No. of bitstreams: 1 liviabittencourtdosreis.pdf: 1213157 bytes, checksum: a26b9976306bd51e1af0a50577f782cc (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2015-12-10T13:58:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 liviabittencourtdosreis.pdf: 1213157 bytes, checksum: a26b9976306bd51e1af0a50577f782cc (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-10T13:58:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 liviabittencourtdosreis.pdf: 1213157 bytes, checksum: a26b9976306bd51e1af0a50577f782cc (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A Brucella abortus é uma bactéria Gram-negativa que apresenta forma de vida intracelular facultativa e é responsável por causar a brucelose, doença que afeta humanos e animais. A resposta imune contra este patógeno envolve vários mecanismos da imunidade inata e adquirida, entre os quais a citocina IFN- típica do perfil TH1, bem como as células T CD8+, executam papeis importantes. Além das respostas imunitárias clássicas que são induzidas durante infecções por patógenos, as vias imunorregulatórias do hospedeiro podem também tornar-se ativadas no intuito de delimitar a amplitude e duração das respostas imunes, prevenindo a imunopatologia excessiva. Vários dados na literatura mostram o papel de algumas células e citocinas importantes no estabelecimento desta imunorregulação, tais como células T e B regulatórias e as citocinas IL-10 e TGF- Sobreviver a uma infecção requer, portanto, a geração de uma resposta imune controlada. Apesar da importância da imunorregulação, diversos patógenos tem exibido a capacidade de estimular os mecanismos de regulação como uma forma de se evadir do sistema imune e assim estabelecer sua infecção. Devido a isso a investigação do processo imunorregulador que surge em resposta a infecção ou que é induzida pelo próprio agente patogênico torna-se importante, podendo fornecer informações sobre novas abordagens terapêuticas para o controle da infecção. Nesse contexto, o objetivo do presente estudo foi avaliar os mecanismos imunológicos envolvidos na imunomodulação induzida pela bactéria B. abortus em modelo murino. Como metologia, animais C57BL/6 foram infectados com B. abortus e sacrificados uma, três e seis semanas pós-infecção. Um grupo de animais não infectados foi utilizado como controle. Primeiramente, avaliamos a carga bacteriana presente no baço e o índice de proliferação celular de animais infectados ou não, pelo método de MTT e por citometria de fluxo. Analisamos também os níveis de citocinas (IFN-e IL-10) pelo método de ELISA e a produção de células T e B regulatórias por citometria de fluxo, em esplenócitos derivados desses animais. Por fim, avaliamos a influência da infecção com B. abortus no curso da Encefalomielite auto-imune experimental (EAE). Como resultados, verificamos uma diminuição na proliferação celular em animais infectados, sendo esta mais proeminente em linfócitos TCD8+ e células NK+ (natural killer). Concomitantemente, foi percebido um aumento na produção da citocina IL-10. Além disso, animais infectados apresentaram maior número de células TCD4+ e TCD8+ com perfil regulatório bem como células CD19+ produtoras de IL-10, principalmente na terceira semana pós-infecção. Em relação à EAE, de forma inesperada, foi percebido um aumento do escore clínico em animais infectados, comparados aos controles. Dessa forma, foi possível concluir que a infecção por Brucella abortus é capaz de induzir a presença de elementos imunorreguladores porém, estes elementos não foram suficientes para causar uma melhora no curso da EAE. / Brucella abortus is a Gram-negative and facultative intracellular bacterium, responsible for brucellosis in humans and animals. The immune response against this pathogen involves different mechanisms from innate and acquired immunity, including IFN-, a typical cytokine from TH1 profile, as well as CD8+ T-cells. Aside from the classic immune responses induced during an infection caused by a pathogen, the immunoregulatory pathways of the host can also be activated, limiting the range and the response time of immune responses, preventing an excessive immunopathology. Data from the literature shows the role of a range of cells and cytokines in establishing this immunoregulation such as T- and B-cell regulators and IL-10 and TGF- cytokines. Survival to an infection process therefore requires the generation of a controlled immune response. Despite the importance of immunoregulation, a diversity of pathogens have shown the capacity to stimulate some regulation mechanisms to evade the immune system and then establish the infection. In this way, the investigation of the immunoregulation processes that occur in response to the infection or are induced by the pathogenic agent become important, as these can provide information about new therapeutic approaches for the control of infections. In this context, this study aimed to evaluate the immunological mechanisms involved in the immunomodulation induced by B. abortus, in a mouse model. C57BL/6 animals were infected with B. abortus and sacrificed after one, three and six weeks of infection. Non-infected animals were used as a control group. Bacterial load was evaluated in the spleen and the cellular proliferation index was evaluated for infected and non-infected animals using the MTT method and flow cytometry. Cytokine levels (IFN-e IL-10) were evaluated through ELISA and regulatory profiles of T-cells and B-cells were assessed by flow cytometry in the splenocytes of these animals. The influence of B. abortus infection was also evaluated using a experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model. As results, a decrease in cellular proliferation was observed in infected animals, with a more prominent effect in TCD8+ lymphocytes and NK (natural killer) cells. An increase in IL-10 levels was concomitantly observed. Infected animals presented a higher number of T- cells (CD4+CD25+FoxP3+ and CD8+CD25+FoxP3+) and B-cells (CD19+IL-10+) with a regulatory profile, especially after the third week of infection. Regarding EAE, an unexpected increase in clinical score was observed in infected animals when compared to control group. Thus, we concluded that Brucella abortus infection is able to induce immunoregulatory elements, although it is insufficient to cause an improvement in EAE.

As células T regulatórias (Tregs) são essenciais para a manutenção da tolerância periférica, prevenção de doenças autoimunes e limitantes nas doenças inflamatórias crônicas. Além disso, essas células exercem um papel fundamental no controle da rejeição de transplantes. Diferentes protocolos mostraram que é possível obter Tregs a partir de células T naive CD4+ in vitro. Para tal, é consenso que o TGF-? e a interleucina-2 (IL-2) são capazes de direcionar as células T naive CD4+ a se tornarem regulatórias após um estímulo antigênico (anti-CD3/CD28). Nosso grupo recentemente notou que, durante a imunomodulação de linfócitos T pelas células estromais mesenquimais (CTMs), estas eram capazes de produzir adenosina que, por sua vez, participa do processo de imunorregulação. Outros trabalhos indicam que as CTMs suprimem a proliferação dos linfócitos T pela geração de Tregs e que as CTMs induzem a geração de Tregs através da regulação negativa da via TCR e da via AKTmTOR. Evidências apontam que a adenosina pode atuar regulando negativamente a via mTOR. Portanto, acredita-se que a adenosina possa participar do processo de geração de Tregs através da modulação da via mTOR. Além disso, estudos recentes indicam que a ativação de receptores de adenosina, mais especificamente A2a, com agentes agonistas, leva ao aumento da produção de células Tregs, enquanto que a utilização de agentes antagonistas destes receptores leva à diminuição da diferenciação de Tregs. Porém, estes estudos mostram a geração de Tregs a partir de células T naive de camundongos. Visto a grande importância das Tregs no contexto imunológico, a produção eficiente de Tregs in vitro tem importância fundamental para o desenvolvimento de novos protocolos terapêuticos para o tratamento de doenças autoimunes e no combate à rejeição de transplantes. Assim, o objetivo central deste trabalho foi avaliar a participação de agonistas e antagonistas de receptores de adenosina na indução de células T regulatórias geradas in vitro (iTreg) pela ativação de células T CD4+ naive isoladas de sangue de cordão umbilical (SCU) humano. Para isso, células mononucleares foram isoladas de bolsas de SCU e as células T naive foram isoladas imunomagnéticamente. Essas células foram ativadas com beads ligadas a anticorpos anti-CD2/CD3/CD28 e cultivadas por cinco dias na presença de IL-2 e diferentes concentrações de drogas agonistas e antagonistas de receptores de adenosina. Em seguida, foram avaliados os principais marcadores de células T regulatorias por meio de citometria de fluxo e o meio de cultura foi coletado ao final da geração para quantificação de citocinas. Além disso, o RNA total foi extraído de todas as condições de cultivo para a análise da expressão de genes envolvidos na geração e desenvolvimento das Tregs, por PCR quantitativo. O potencial de supressão de células T efetoras também foi avaliado. / Regulatory T cells (Tregs) are essential for the maintenance of peripheral tolerance, prevention of autoimmune and limiting diseases in chronic inflammatory diseases. In addition, these cells play a key role in the control of transplant rejection. Different protocols have shown that it is possible to obtain Tregs from naive CD4+ T cells in vitro. To this end, there is consensus that TGF-? and interleukin-2 (IL-2) are capable of directing the naive CD4 + T cells to become regulatory following an antigenic stimulus (anti-CD3/CD28).. Our group recently noted that during the immunomodulation of T lymphocytes by mesenchymal stromal cells (MSCs), they were able to produce adenosine which in turn participates in the immunoregulation process. Other studies indicate that MSCs suppress the proliferation of T lymphocytes by generation of Tregs and that MSCs induce generation of Tregs by downregulation of the TCR pathway and the AKT-mTOR pathway. Evidence indicates that adenosine may act by downregulating the mTOR pathway. Therefore, it is believed that adenosine may participate in the generation of Tregs by modulating the mTOR pathway. In addition, recent studies indicate that activation of adenosine receptors, more specifically A2a, with agonist agents, leads to increased production of Treg cells, whereas the use of antagonistic agents of these receptors leads to a decrease in Treg differentiation.. However, these studies show the generation of Tregs from naive T cells of mice. In view of the great importance of Tregs in the immunological context, the efficient production of Tregs in vitro is of fundamental importance for the development of new therapeutic protocols for the treatment of autoimmune diseases and in the fight against transplant rejection. Thus, the central objective of this study was to evaluate the participation of adenosine receptor agonists and antagonists in induction of regulatory T cells generated in vitro (iTreg) by the activation of naive CD4+ T cells isolated from human umbilical cord blood (SCU). For this, mononuclear cells were isolated from SCU and naive T cells were immunomagnetic isolated. These cells were activated with beads bound to anti-CD2/CD3/CD28 antibodies and cultured for five days in the presence of IL-2 and different concentrations of agonist drugs and antagonists of adenosine receptors. Next, the major regulatory T-cell markers were assessed by flow cytometry and the culture medium was collected at the end of the generation for quantification of cytokines. In addition, total RNA was extracted from all culture conditions for the analysis of the expression of genes involved in the generation and development of Tregs by quantitative PCR. The potential for suppression of effector T cells was also evaluated.

In nature, biofilm is a complex structure resulted of multicellular bacterial communities that provide important nutritional functions and the acquisition of protective traits such as antibiotics resistance and horizontal gene transfer. The development from the planktonic, lonely bacteria, to the mature multilayered biofilm structure consists of three main phases: motility, attachment and biofilm maturation. At cellular level, the process is controlled by several genes such as flhD, fliA, rpoS, csgD, adrA, cpxR all acting as master regulators. Additionally, the global regulators CRP, IHF, Fis, and others in less frequency, have been related to biofilm formation, although blurry information has been provided. In this thesis we used synthetic, molecular and cellular biology approaches to understand the effect of CRP, IHF and Fis in the transcriptional regulatory network in the bacterium Escherichia coli. In the first chapter, we employed network analysis to reconstruct and analyze part of the entire regulatory network described to modulate the flagella-biofilm program. With this analysis we identified some critical interactions responsible for the planktonic-biofilm transition. Next, we selected the top ten effectors nodes of the network and cloned the promoter region of those genes in a reporter system. As extensively explained in chapter II, this system allowed us to validate as well as suggest new interactions in the network. Additionally, the measurement of the promoter activity during bacterial development show that CRP, IHF and Fis differentially modulate most of the surveyed genes suggesting that those Global Regulators participate to modulate gene expression in different phases of the planktonic-biofilm development. At chapter three, to get a better overview of the entire process, we performed motility, adherence/early biofilm and mature biofilm assays. We describe the intrinsic ability of E. coli to perform motility, adherence and mature biofilm at 37?C. In contrast, the absence of ihf, fis as well as Carbon Catabolite Repression (CCR), lead to altered phenotypes at both motility and biofilm development. At the end, we discussed how the changes of promoter activity of target genes, together with our network analysis, could explain part of the altered phenotypes observed. For instance, we observed changes at the main stress responders rpoS and rpoE that, in combination with alterations at specific genes such as fliA, can explain the enhanced motility in the E. coli ?ihf strain. Altogether, in this thesis, we provided evidence that CRP, IHF and Fis control the activity of the promoter regions of genes involved in the planktonic-biofilm development. / Na natureza, o biofilme é uma estrutura complexa resultante de comunidades bacterianas multicelulares que fornece importantes funções nutricionais e a aquisição de traços de proteção como resistência a antibióticos e transferência horizontal de genes. O desenvolvimento das bactérias planctônicas solitárias para uma estrutura de biofilme maduro consiste em três fases principais: motilidade, fixação e maturação do biofilme. Ao nível celular, o processo é controlado por vários genes tais como flhD, fliA, rpoS, csgD, adrA, cpxR, todos agindo como reguladores mestre. Além disso, os reguladores globais CRP, IHF, Fis e outros em menor freqüência, têm sido relacionados à formação de biofilme, embora tenham sido fornecidas informações nao conclusivas sobre esse processo. Nesta tese foram utilizadas abordagens de bioinformática, assim como de biologia molecular e celular para entender o efeito de CRP, IHF e Fis na rede reguladora da transição de motilidade para biofilme na bactéria Escherichia coli. No primeiro capítulo, utilizamos a análise de rede para reconstruir e analisar parte da rede regulatória descrita para modular o programa flagelo-biofilme. Com esta análise identificamos algumas interações críticas responsáveis pela transição planctônica-biofilme. Em seguida, selecionamos os dez principais nós efetores da rede e clonamos a região promotora desses genes em um sistema repórter. Conforme explicado amplamente no capítulo II, este sistema nos permitiu validar e sugerir novas interações na rede. Adicionalmente, a medição da atividade do promotor durante o desenvolvimento bacteriano mostra que a CRP, a IHF e a Fis modulam diferencialmente a maioria dos genes analisados sugerindo que estes Reguladores Globais participam para modular a expressão génica em diferentes fases do desenvolvimento de estado planctónico para biofilme. No capítulo três, para obter uma melhor visão geral de todo o processo, realizamos ensaios de motilidade, aderência / biofilme precoce e biofilmes maduros. Descrevemos a capacidade intrínseca de E. coli para realizar motilidade, adesão e biofilme maduro a 37 °C. Em contraste, a ausência de ihf, fis, bem como o fenômeno de Repressão de Catabolite de Carbono (CCR), levam a fenótipos alterados, tanto na motilidade como no desenvolvimento do biofilme. No final, discutimos como as mudanças da atividade do promotor de genes alvo, juntamente com a nossa análise de rede, poderia !xi explicar parte dos fenótipos alterados observados. Por exemplo, observamos mudanças nos principais respondedores de estresse rpoS e rpoE que, em combinação com alterações em genes específicos como fliA, podem explicar a motilidade aumentada na estirpe de E. coli ?ihf. Em conjunto, nesta tese, apresentamos evidências de que CRP, IHF e Fis controlam a atividade das regiões promotoras de genes envolvidos no desenvolvimento planctônico-biofilme.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Priscilla Brito Oliveira (priscilla.b.oliveira@gmail.com) on 2009-10-19T18:58:32Z No. of bitstreams: 1 Dissert_Thais Lamounier.pdf: 8272407 bytes, checksum: 271d78cfe345a9ca63cc61fca349aa98 (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2009-10-20T14:03:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissert_Thais Lamounier.pdf: 8272407 bytes, checksum: 271d78cfe345a9ca63cc61fca349aa98 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-20T14:03:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissert_Thais Lamounier.pdf: 8272407 bytes, checksum: 271d78cfe345a9ca63cc61fca349aa98 (MD5) Previous issue date: 2007 / As células T regulatórias (Treg) possuem um importante papel na supressão da resposta imune efetora de linfócitos T, mas as condições especiais de expressão ao antígeno que levam à geração dessas células, ainda não são bem conhecidas. Neste estudo, foram analisadas as populações celulares presentes em lesões granulomatosas obtidas de biópsias de pacientes com paracoccidioidomicose, tuberculose e sarcoidose. A análise imuno-histoquímica dos marcadores moleculares CD4, CD8, CD25, CTLA-4, CD20, CD75, CD3 e CD45RO, demonstrou que em todos os casos houve uma importante migração de células com fenótipo CD3+, CD45RO+, CD20+ e CD75+. Analisando estes marcadores observaram-se uma correlação positiva entre os marcadores CD3 e CD45RO e entre CD8, CD25 e CTLA-4. A expressão de CTLA-4 foi maior em lesões de linfonodo do que nas lesões pulmonares. A presença de possíveis células Treg nestas lesões pode ser CD8+, com capacidade de modular negativamente a resposta de células T. Porém, apesar do fenótipo CD4+CD25+ ser o mais descrito para as células Treg, outras populações celulares podem participar desta regulação, sendo necessário uma análise adicional de outros marcadores de superfície para caracterizar estas células T como regulatórias. _________________________________________________________________ ABSTRACT / Regulatory T cells have an important role in the suppression of the limphocytes T immune response , although the special conditions of expression to the antigen, that conduct to the generation of those cells, are not yet well-known. In this work, it was analysed the cellular population present in granulomatous lesions, obtained from the byopsies of patients with Paracoccidioidomycosis, Tuberculosis and Sarcoidosis cases. The Immunohistochemical analyisis of the molecule markers CD4, CD8, CD25, CTLA-4, CD20, CD75, CD3 AND CD45RO, have demonstrated, in all cases, an important migration of cells with the phenotypes CD3+, CD45RO+, CD20+ and CD75+. Analysing these markers, it was observed a positive correlation between the CD3 and the CD45RO and among the TCD8, CD25 and the CTLA-4. The expression of CTLA-4 was bigger in linphonode lesions cases than the ones with pulmonary lesions. The possible presence of Regulatory T cells in these lesions may be CD8+, with the capacity to negativity modulate the answer of T cells. However, despite the phenotype CD4+CD25+ be the most described in the regulatory T cells, other cellular populations may take part in this regulation, being necessary an additional analysis of different surface markers to characterize these T cells as regulatory.

In nature, biofilm is a complex structure resulted of multicellular bacterial communities that provide important nutritional functions and the acquisition of protective traits such as antibiotics resistance and horizontal gene transfer. The development from the planktonic, lonely bacteria, to the mature multilayered biofilm structure consists of three main phases: motility, attachment and biofilm maturation. At cellular level, the process is controlled by several genes such as flhD, fliA, rpoS, csgD, adrA, cpxR all acting as master regulators. Additionally, the global regulators CRP, IHF, Fis, and others in less frequency, have been related to biofilm formation, although blurry information has been provided. In this thesis we used synthetic, molecular and cellular biology approaches to understand the effect of CRP, IHF and Fis in the transcriptional regulatory network in the bacterium Escherichia coli. In the first chapter, we employed network analysis to reconstruct and analyze part of the entire regulatory network described to modulate the flagella-biofilm program. With this analysis we identified some critical interactions responsible for the planktonic-biofilm transition. Next, we selected the top ten effectors nodes of the network and cloned the promoter region of those genes in a reporter system. As extensively explained in chapter II, this system allowed us to validate as well as suggest new interactions in the network. Additionally, the measurement of the promoter activity during bacterial development show that CRP, IHF and Fis differentially modulate most of the surveyed genes suggesting that those Global Regulators participate to modulate gene expression in different phases of the planktonic-biofilm development. At chapter three, to get a better overview of the entire process, we performed motility, adherence/early biofilm and mature biofilm assays. We describe the intrinsic ability of E. coli to perform motility, adherence and mature biofilm at 37?C. In contrast, the absence of ihf, fis as well as Carbon Catabolite Repression (CCR), lead to altered phenotypes at both motility and biofilm development. At the end, we discussed how the changes of promoter activity of target genes, together with our network analysis, could explain part of the altered phenotypes observed. For instance, we observed changes at the main stress responders rpoS and rpoE that, in combination with alterations at specific genes such as fliA, can explain the enhanced motility in the E. coli ?ihf strain. Altogether, in this thesis, we provided evidence that CRP, IHF and Fis control the activity of the promoter regions of genes involved in the planktonic-biofilm development. / Na natureza, o biofilme é uma estrutura complexa resultante de comunidades bacterianas multicelulares que fornece importantes funções nutricionais e a aquisição de traços de proteção como resistência a antibióticos e transferência horizontal de genes. O desenvolvimento das bactérias planctônicas solitárias para uma estrutura de biofilme maduro consiste em três fases principais: motilidade, fixação e maturação do biofilme. Ao nível celular, o processo é controlado por vários genes tais como flhD, fliA, rpoS, csgD, adrA, cpxR, todos agindo como reguladores mestre. Além disso, os reguladores globais CRP, IHF, Fis e outros em menor freqüência, têm sido relacionados à formação de biofilme, embora tenham sido fornecidas informações nao conclusivas sobre esse processo. Nesta tese foram utilizadas abordagens de bioinformática, assim como de biologia molecular e celular para entender o efeito de CRP, IHF e Fis na rede reguladora da transição de motilidade para biofilme na bactéria Escherichia coli. No primeiro capítulo, utilizamos a análise de rede para reconstruir e analisar parte da rede regulatória descrita para modular o programa flagelo-biofilme. Com esta análise identificamos algumas interações críticas responsáveis pela transição planctônica-biofilme. Em seguida, selecionamos os dez principais nós efetores da rede e clonamos a região promotora desses genes em um sistema repórter. Conforme explicado amplamente no capítulo II, este sistema nos permitiu validar e sugerir novas interações na rede. Adicionalmente, a medição da atividade do promotor durante o desenvolvimento bacteriano mostra que a CRP, a IHF e a Fis modulam diferencialmente a maioria dos genes analisados sugerindo que estes Reguladores Globais participam para modular a expressão génica em diferentes fases do desenvolvimento de estado planctónico para biofilme. No capítulo três, para obter uma melhor visão geral de todo o processo, realizamos ensaios de motilidade, aderência / biofilme precoce e biofilmes maduros. Descrevemos a capacidade intrínseca de E. coli para realizar motilidade, adesão e biofilme maduro a 37 °C. Em contraste, a ausência de ihf, fis, bem como o fenômeno de Repressão de Catabolite de Carbono (CCR), levam a fenótipos alterados, tanto na motilidade como no desenvolvimento do biofilme. No final, discutimos como as mudanças da atividade do promotor de genes alvo, juntamente com a nossa análise de rede, poderia !xi explicar parte dos fenótipos alterados observados. Por exemplo, observamos mudanças nos principais respondedores de estresse rpoS e rpoE que, em combinação com alterações em genes específicos como fliA, podem explicar a motilidade aumentada na estirpe de E. coli ?ihf. Em conjunto, nesta tese, apresentamos evidências de que CRP, IHF e Fis controlam a atividade das regiões promotoras de genes envolvidos no desenvolvimento planctônico-biofilme.