Early visual processing in the avian brain has been studied extensively, the retina and midbrain in particular. However, a clear understanding of the higher visual centers in the forebrain (the telencephalon and thalamus) remains poor. Two structures located within the avian visual telencephalon, the entopallium (E) and the lateral portion of the intermediate nidopallium (NIL), merit extensive investigation based on their critical role in visual processing. The goal of the current study was to further clarify the anatomical characteristics of E and NIL. Visual information that reaches these telencephalic structures is mostly from the contralateral retina. Thus, blocking visual input on one side affects the opposite hemisphere, but leaves the hemisphere on the same side largely unaffected. This unique property of the avian visual system was used in order to emphasize neurochemical expression in the higher visual structures. After blocking visual input to one hemisphere either by monocular occlusion or unilateral lesion of the nucleus rotundus we examined the expression of specific neuroanatomical markers; namely cytochrome oxidase (CO) and the calcium binding protein, parvalbumin (PV) in E and ZENK protein expression in NIL. . Our results showed there were significantly more PV-ir cell bodies in the inner region of E compared to the outer region. In terms of PV-ir neuropil, regional differences within E were significant. In particular, the ventrolateral E tended to have a higher density of PV-ir neuropil than other regions except the most ventromedial area which was also high in PV-ir. Differential CO staining patterns were observed as well. However, unlike PV-ir neuropil the ventro-intermedial area showed a low level of CO staining compared to the other areas. Finally, there was a significant reduction of ZENK-ir cell bodies on NIL in the experimental hemisphere compared to control side. Based on this differential expression of ZENK, it was possible for the first time to visualize the location of NIL. The findings presented here are discussed in terms of their relevance to the identification of the size and extent of NIL and the heterogeneous nature of E.

Syftet med denna studie var att utveckla en separations- och analysmetod för identifiering av icke-volatila substanser från strån och rötter av de gräsliknande växterna Cyperus rotundus och Panicum repens. För analysen användes högpresterande vätskekromatografi (HPLC) och ultrahögpresterande vätskekromatografi (UHPLC) med en opolär stationär fas (RP-HPLC) med ultraviolett ljus (UV) och elektrosprej masspektrometri detektion (ESI-MS). Proverna extraherandes med hjälp av ultraljuds assisterad extraktion (UAE) och koncentrerades med solid fasextraktion. Två olika metoder användes vid extraktionen antingen sänktes gräset i 10 ml acetonitril två gånger eller så direkt i 20 ml acetonitril. På grund av svårigheten att uppnå reproducerbarhet vid extraktion med samma metod kunde ingen slutsats om någon metods fördelar dras. Under utvecklingen av HPLC metoden testades två olika elueringsmedel metanol och acetonitril i kombination med MilliQ-vatten. Den slutgiltiga metoden börjar med en mobilfas innehållande 70% metanol och 30% vatten under 5 min för att sedan öka till 100% metanol under 10 minuter innan mobilfasen hålls vid 100% metanol under 25 minuter. Med UV-detektorn kräver identifikation av de okända komponenterna krävde kända referenser. Vidare undersökningar genomfördes därför med masspektrometri. Dock så var det begränsad tid kvar för undersökningar med MS så få körningar kunde genomföras, därav kunde inte analyterna analyseras tillräckligt för att kunna identifiera komponenterna från Cyperus rotundus. Vidare analyser med MS samt även kopplad MSMS där spektrum kan jämföras med en databas för identifikation skulle underlätta identifikationen. / The aim of this study is to develop an analysis method for the separation and identification of non-volatile substances from the Cyperus rotundus and- Panicum repens roots and shoots. For the analysis reversed phase high performance liquid chromatography (HPLC) and ultra-high performance liquid chromatography (UHPLC) methods where used. First an UV detector was used in combination with the HPLC setup and in the later stages access to an electrospray ionization ion trap mass spectrometer was enabled for coupling to UHPLC. The samples were extracted with ultrasound assisted extraction (UAE) and the concentrated with solid phase extraction (SPE). Two different extraction methods were attempted one where the graminoid plants where submerged in 10 ml acetonitrile twice and the other with 20 ml directly. Due to the difficulty of reproducing result between different extraction batches no conclusion on whether either method is superior could be made. For the development of the HPLC method methanol or acetonitrile was used in combination with ultrapure (MilliQ) water. The final eluationprogram was 70% methanol and 30% MilliQ water for five minutes, increasing linearly over 10 minutes to 100% methanol and then running for 25 minutes. With the UV detector no identification was possible, so further investigations were performed with UHPLC-MS for analysis of the mass of the analytes. Due to time limitations only a few MS analyses on the Cyperus rotundus were performed, and only a few masses could be estimated. Further runs of the samples need to be performed in combination with coupled MSMS to be able to identify the analytes in the samples.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE LEONARDO.pdf: 953129 bytes, checksum: 80378ef8a7e8845d83910caee588d89f (MD5) Previous issue date: 2009-10-06 / Rabies is viral lethal encephalitis that causes annual spoil of hundreds million dollars to the livestock and the public health. Starting from the 90 s bats became the main transmitters of this zoonose in Brazil. In spite of the unquestionable participation of these encourage in the transmission of the illness, studies that it relate them to the distribution of the animal rage are still scarce. In this context, the present paper aimed at to study epidemiologic aspects related to the aerial cycle of the rabies and it space-temporal development in the Porangatu s microregion of through bats capture in natural and artificial shelters from Niquelândia and Barro Alto; besides the analysis of the results for rabies laboratorial exams (IFD and ICC) in the nineteen municipal districts in the historical series 1999 -2008. From May of 2007 to April of 2008 four expeditions were accomplished to four Cerrado ranches in the two cities with 402 bats captured in eleven natural and artificial shelters. Desmodus rotundus was the single hematophagous species captured and just found at grottos in the Barro Alto municipal district. Their colonies were composed predominantly by females. The sexual reason between males and females was of 1:1,43 and the largest number of pregnant concentrated on the rainy period. Five species were found sharing shelter of D. rotundus. The chiropterofauna was shown quite several, with prevalence of frugivorous species. The rabies space-temporal analysis in the microregion demonstrated the disease was hight or smaller intensity diagnosed in all of the municipal districts. The number of samples sent for laboratory oscillated during the historical series with tendency of accumulation of positive results in the month of November. The results indicated although and that the surveillance of the rabies needs to be intensified in the whole microregion / A raiva é uma encefalite viral letal que causa prejuízo anual de centenas de milhões de dólares à pecuária e à saúde pública. A partir da década de 90 os morcegos tornaram-se os principais transmissores da zoonose no Brasil. Apesar da indiscutível participação destes animais na transmissão da enfermidade, estudos que os relacionam à distribuição da raiva animal ainda são escassos. Neste contexto, o presente trabalho objetivou estudar aspectos epidemiológicos relacionados ao ciclo aéreo da raiva e sua evolução espaço-temporal na microrregião de Porangatu através da captura de morcegos em abrigos naturais e artificiais em Niquelândia e Barro Alto; além da análise dos resultados de exames laboratoriais (IFD e ICC) para a raiva animal nos dezenove municípios integrantes na série histórica 1999-2008. No período de maio de 2007 a abril de 2008 foram realizadas quatro expedições a quatro sítios de cerrado nas duas cidades com 402 morcegos capturados em onze abrigos naturais e artificiais. Desmodus rotundus foi a única espécie hematófaga capturada e encontrada apenas em grutas no município de Barro Alto. Suas colônias foram compostas predominantemente por fêmeas. A razão sexual entre machos e fêmeas foi de 1:1,43 e o maior número de grávidas concentrou-se no período chuvoso. Cinco espécies foram encontradas compartilhando abrigo do D. rotundus. A quiropterofauna da região se mostrou bastante diversa, com predomínio de espécies frugívoras. A análise espaço-temporal da raiva na microrregião demonstrou que a doença foi dignosticada com maior ou menor intensidade em todos os municípios. O número de amostras enviadas para laboratório oscilou durante a série histórica e com tendência de acúmulo de resultados positivos no mês de novembro. Os resultados indicaram ainda que e que a vigilância da raiva precisa ser intensificada em toda a microrregião de Porangatu

Les chauves-souris (Chiroptera) sont reconnues comme réservoirs naturels de nombreux microorganismes, dont certains pathogènes, responsables de maladies sévères chez l’homme. À ce jour, plus de 1 300 espèces de chauves-souris, aux habitats et comportements sociaux multiples, ont été décrites. Cette grande diversité d’espèces reflète l’importante diversité des caractéristiques biologiques, de l’histoire évolutive et de la capacité d’adaptation de cet ordre. Les études immunobiologiques laissent à penser que ces animaux présentent des stratégies antimicrobiennes plus efficientes que les autres mammifères, influencées par leurs caractéristiques spécifiques et par les contraintes pathogéniques associées aux environnements. L’objectif de cette thèse était de mieux comprendre, en utilisant la diversité virale et la circulation du virus rabique comme proxy, comment les contraintes bioécologiques, liées à la phylogénie de l’hôte et à son environnement, pouvaient impacter la diversité virale des chauves-souris, et subséquemment, induire une adaptation locale des gènes de l’immunité. L’ensemble des résultats obtenus montre que les composantes environnementales sont des facteurs clés des diversités virales et immunitaires. Associées aux caractéristiques spécifiques, elles jouent un rôle dans le maintien de ces diversités et déterminent les capacités d'adaptation des chauves-souris. Les processus démographiques semblent également contribuer au maintien des virus dans un environnement donné. Ce travail apporte des éléments de compréhension des mécanismes de maintien et de mise en place des diversités virales et immunitaires qui influencent l'adaptation locale des chauves-souris. / Bats belong to the order Chiroptera and are the only mammals capable of true flight. They are recognized as excellent biodiversity indicators. Furthermore, these animals have been described as natural reservoirs and source of infection for several microorganisms, including pathogens responsible for severe human diseases. Currently, more than 1,300 different bat species are described with different habitats and sociality, reflecting a high diversity of bioecological features, life histories and adaptation capacity. Immunobiological studies suggest that bats present more effective anti-microbial strategies highly influenced by their biological traits as well as by the environmental-associated pathogen pressures. The aim of this thesis was to better understand, using viral diversity and circulation of the rabies virus as a proxy, how bioecological constraints related to the phylogeny and the environment where they evolve, could impact the diversity of hosted viral communities and subsequently induce a local adaptation of immune genes. Altogether, the results obtained during this thesis showed that environmental components were key factors of both viral and immune diversities. Associated with species characteristics, environment plays a key role in shaping both diversities and determines the adaptation ability of bats. Nevertheless, demographic processes should not be overshadowed as they seem to contribute to the maintenance of viruses in a given environment. This work sheds light on the mechanisms maintaining and shaping both viral and immune diversities and subsequently influencing the local adaptation of bats

Den presenterade studien hade som syfte att utveckla en extraktions-, provpreparerings- och analysmetod för jorden, i vilken gräset Cyperus rotundus växer, i ett försök att identifiera möjliga äggläggningsattraherande ämnen för myggan Anopheles gambiae. Högupplösande vätskekromatografi med hydrofob stationär fas (RP-HPLC, en.) med Masspektrometri med Elektrosprejjonisering (ESI-MS, en.) användes för separation och detektion av de extraherade proverna. Ett flertal extraktionssatser gjordes, där parametrar och tekniker ändrades under utvecklingen av arbetet. Ultraljudsassisterad extraktion (UAE) av jord i en 50:50 (v/v) blandning av metanol och vatten visades vara mest effektiv av de undersökta metoderna. Upprening av jordextraktioner med fastfasextraktion (SPE, en.) visades ha en positiv inverkan på signalintensiteten i kromatogrammen såväl som att reducera intensiteten av de systemtoppar som eluerar vid dödtiden. Detta indikerar att de poläraste ämnena har renats bort. En jämförelse gjordes mellan en extraktion av jord som legat i blöt i fem dagar och jord som extraherats utan att blötläggas. En skillnad kunde ses och visades genom att jämföra kromatogram och masspektra från de två proverna. Tandem-MS-experiment gjordes för ett flertal prekursorjoner med avsikt att identifiera ämnena genom jämförelse med databaserna Human Metabolome Database (HMDB), Metlin och Massbank, men inga överrensstämmande jämförelser kunde göras. Tandem-MS-resultaten användes även för att jämföra efter varandra följande kromatografiska toppar med liknande MS1-spektrum. En identifieringsmetod bör utvecklas innan metoden som presenterats i detta arbete valideras och vidareutvecklas. / The present study aimed to develop an extraction, sample preparation and analysis method for the rhizosphere soil of the grass Cyperus rotundus in an attempt to identify possible oviposition attractants of the Anopheles gambiae mosquito. Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography (RP-HPLC) coupled online with Electrospray Ionization Mass spectrometry (ESI-MS) was used for the separation and detection of the extracted samples. Multiple extraction batches were done, altering parameters and techniques along the way. Ultrasound-Assisted Extraction (UAE) of the soil with a 50:50 (v/v) mixture of methanol and water was determined to be the most effective of the attempted methods. Purifying soil extracts with Solid Phase Extraction (SPE) showed to have an impact on the signal intensities in the chromatogram as well as reducing the intensity of system peaks eluting at the dead-time. This indicates that more polar compounds were removed during the SPE purification. A comparison was done between an extraction of soil soaked in water for five days and soil extracted without prior wetting. A difference could be seen and was shown by comparing chromatograms and mass spectra from the two samples. Tandem MS experiments were done for multiple precursor ions in order to identify the compounds by comparison in databases Human Metabolome Database (HMDB), Metlin and Massbank, but no matches in the databases were found. The tandem MS results were also used for comparison of consecutive chromatographic peaks with similar MS1-spectra. An identification method should be developed before the method presented in this work is validated and optimized further.

No Brasil a raiva dissemina-se de maneira insidiosa nos herbívoros domésticos, produzindo perdas à indústria pecuária. No estado de São Paulo, a última epizootia registrada ocorreu entre os anos 1997-2002, acometendo bovinos e equinos. Este estudo examinou a possível relação de alguns casos detectados no sul de Minas Gerais no período 2000 a 2009 com o foco paulista citado, mediante análise filogenética de segmentos do gene da glicoproteína (540 nucleotídeos) e nucleoproteína (416 nt) viral, usando o algoritmo de Neighbor-joining, modelo evolutivo Kimura 2- parâmetros com 1000 replicações, considerando sequências de isolados procedentes de diferentes regiões do interior paulista e do Brasil, tomadas do GenBank. Foi proposta uma análise geográfica mediante o programa ArcGis, localizando as coordenadas geográficas dos municípios de origem dos casos sobre mapas de relevo, bacias hidrográficas e distribuição de biomas. A análise filogenética dos dois genes estudados sugeriu que os focos mineiros podem ter a mesma origem genética da última epizootia paulista de raiva em herbívoros ocorrida entre 1997 e 2002. A análise filogenética baseada na nucleoproteína mostrou um maior nível de detalhamento sugerindo a ocorrência de diferentes eventos e/ou centros de dispersão de raiva em herbívoros na área de estudo. A análise geográfica insinuou que os casos aconteceram nas porções menos elevadas da Serra da Mantiqueira, na área de Mata Atlântica e em proximidades das bacias dos rios Piracicaba/Jaguarí, Paranaíba do Sul, Grande, Pardo e Mogi-Guaçu. / Bovine rabies is still spreading insidiously in Brazil, producing economic losses to livestock industry. A remarkable epizootics took place in São Paulo state between 1997 and 2002, affecting bovine and equines. This research was intended to examine genetic relations among some rabies outbreaks in Minas Gerais (MG), during 2000 and 2009 with São Paulo epizootics by phylogenetic analysis based on glycoprotein (540 nucleotides) and nucleoprotein (416 nt) genes partial sequences using Neighbor- joining algorithm, Kimura 2-parameters model, with 1000 bootstrap replications, considering sequences from different regions of São Paulo State (SP) and Brazil from GenBank. A geographic analysis was proposed, plotting geographic coordinates of municipalities with rabies cases on topographic, hydrographic and biome maps using ArcGis software. Phylogenetic analysis for both genes suggested that cases from MG can have the same genetic origin of SP epizootics. Phylogenetic analysis based on nucleoprotein gene showed a richer level of detailing than glycoprotein gene, suggesting different events and/or dispersion centers of livestock rabies in the studied area. Geographic analysis proposed that MG cases occurred at less elevated portions of Serra da Mantiqueira mountains in the area of Atlantic forest, near Piracicaba/Jaguarí, Paranaíba do Sul, Grande, Pardo and Mogi-Guaçu rivers.

O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar os efeitos da intensidade de chuva e diferentes quantidades de palha de cana-de-açúcar sobre a eficácia de herbicidas aplicados em pré-emergência no controle da tiririca. Foram realizados dois experimentos, ambos conduzidos em casa-de-vegetação. O delineamento experimental adotado foi o de blocos casualizados, com 4 repetições, para os dois experimentos. No primeiro experimento os tratamentos foram distribuídos em um esquema fatorial 3 x 3 x 2 x 2, constituídos pela combinação entre quantidades de cobertura morta de palha de cana-de-açúcar que foram adicionadas à superfície do solo (0, 10, 20 t/ha), herbicidas aplicados em pré-emergência (sulfentrazone a 0,8 kg i.a./ha e imazapic a 147 g i.a./ha) e um tratamento sem aplicação de herbicida, intensidades de chuva (10 e 20 mm), e épocas em que foram simuladas chuvas após a aplicação dos herbicidas (24 e 168 horas). No segundo experimento os tratamentos foram distribuídos em um esquema fatorial 2 x 3 x 5, constituídos pela combinação entre quantidades de cobertura morta de palha de cana-de-açúcar (0, 15 t/ha), herbicidas aplicados em pré-emergência (sulfentrazone a 0,8 kg i.a./ha e imazapic a 147 g i.a./ha) e um tratamento sem aplicação de herbicida, e épocas em que foi simulada chuva após a aplicação dos herbicidas (0, 3, 6, 9 e 12 dias). Em ambos experimentos foram avaliados: o número de plantas por vaso, biomassas secas da parte aérea e das estruturas do sistema subterrâneo, e número de tubérculos e bulbos sadios. A partir da análise dos resultados, para o primeiro experimento conclui-se que, para o herbicida sulfentrazone, a presença de 20 t/ha de palha de cana-de-açúcar diminuiu a eficácia do herbicida. O herbicida imazapic teve um bom desempenho tanto na ausência quanto na presença de palha, e causou redução das variáveis estudadas independente da intensidade de chuva. A intensidade de chuva de 10 mm, não foi suficiente para transpor o herbicida sulfentrazone na quantidade de 20 t/ha de palha. Já a intensidade de 20 mm foi suficiente para lixiviar o herbicida até mesmo na maior quantidade de palha. O herbicida sulfentrazone suporta mais a permanência na palha, pois apresentou melhor eficácia em relação ao imazapic, quando a chuva foi simulada 168 horas após a aplicação dos herbicidas. Para o segundo experimento pode-se concluir que, as épocas em que foram simuladas as chuvas, não afetaram as variáveis estudadas, não havendo, portanto, diferença se a chuva ocorreu no dia em que foi aplicado o herbicida, ou se ocorreu um período sem chuva de 12 dias. Os herbicidas sulfentrazone e imazapic reduziram o número de plantas, o número de tubérculos, biomassa seca de bulbos, biomassa seca de rizoma e raiz, e biomassa seca da parte aérea, independente da presença de palha. / The present work was developed with the objective of assessing the effects of the intensity of rain and different quantities of sugar cane mulch residue on the efficacy of herbicides applied in pre-emergence for the purple nutsedge control. Two experiments were performed, both conducted in greenhouses. The experiments were performed by randomly choosing blocks with four repetitions. In the first experiment, the treatments were distributed in a factorial scheme 3 x 3 x 2 x 2, constituted by the combination between quantities of dead coverage of sugar cane mulch residue which were added to the soil surface (0, 10, 20 t/ha), herbicides applied in preemergence (sulfentrazone at 0,8 kg i.a./ha and imazapic at 147 g i.a./ha) and a treatment without the application of herbicides, rain intensities (10 and 20 mm), and seasons in which were simulated rains after the application of herbicides (24 and 168 hours). In the second experiment, the treatments were distributed in a factorial scheme 2 x 3 x 5, constituted by the combination between quantities of dead covering of sugar cane mulch residue (0, 15, t/ha), herbicides applied in pre-emergence (sulfentrazone at 0,8 kg i.a./ha and imazapic at 147 g i.a./ha), a treatment without the application of herbicides and seasons in which were simulated rains after the application of herbicides (0, 3, 6, and 12 days). It was evaluated in both experiments: the number of plants per vase, dry biomasses from the aerial parts, from the underground system structures and the number of healthy tubers and bulbs. From the analysis of the results of the first experiment, it may conclude that, to the herbicide sulfentrazone, the presence of 20 t/ha of sugar cane mulch residue diminished its efficacy. The herbicide imazapic had a good performance with the absence as well as with the presence of the mulch residue, and caused a reduction in the varieties studied independently of the intensity of rain. The intensity of rain of 10 mm, wasn’t sufficient to overpass the herbicide sulfentrazone in the quantity of 20 t/ha of mulch residue. But the intensity of 20 mm was enough to lixiviate the herbicide even in the biggest quantity of mulch residue. The herbicide sulfentrazone endures more the abiding on the mulch residue, because it presented a better efficacy in relation to the imazapic, when the rain was simulated 168 hours after the application of the herbicides. From the second experiment it may conclude that the season in which was simulated rains, it didn't affect the varieties studied, therefore there was no difference when the rain occurred on the day when the herbicide was applied, or if it occurred on a 12 day period without rain. The herbicides sulfentrazone and imazapic reduced the number of plants, the number of tubers, dry biomass of bulbs, dry biomass of rhizoma roots and dry biomass of the aerial parts, independently of the presence of mulch residue.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-26T12:29:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_VariabilidadeMorfometricaMolecular.pdf: 4841557 bytes, checksum: f98bac4b966e74cac366c8276fdf7ac3 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-26T12:29:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_VariabilidadeMorfometricaMolecular.pdf: 4841557 bytes, checksum: f98bac4b966e74cac366c8276fdf7ac3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-26T12:29:55Z (GMT). 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Quanto a descrição espacial e temporal da Raiva em humanos e bovinos no Pará, ao longo de uma década (1999-2008), tais registros foram obtidos junto a Secretaria Executiva de Saúde Pública do Pará (SESPA). Do total de espécimes de D. rotundus, apenas os indivíduos adultos (329 machos e 315 fêmeas) foram submetidos a 39 medidas fenotípicas (16 externas e 23 cranianas). Na abordagem genética, 236 indivíduos (53% fêmeas e 47% machos) foram caracterizados por meio de 10 marcadores do tipo microssatélites. Já para a descrição de áreas de risco foram utilizadas feições ecológicas, biológicas, socioeconômicas e de cobertura e uso do solo, georreferenciadas geograficamente. Como um dos principais resultados das inferências fenotípicas foi observado que apenas as fêmeas de D. rotundus no Pará, mostraram tendências a formação de grupos que reúnem espécimes da porção mais ao norte do estado (Baixo Amazonas, Marajó e Nordeste), como sendo menos similares as do sudeste e sudoeste. No geral, fenotipicamente D. rotundus não mostrou elevada estruturação entre os grupos no Pará. A maior ocorrência de variabilidade observada para D. rotundus não foi entre os grupos geográficos. Segundo os dados de análise molecular de variância (AMOVA) ocorreram variações em 96% dos acontecimentos dentro de cada grupo. No geral, muitos grupos estudados do Pará ainda encontram-se sobre equilíbrio de Hardy-Weinberg, levando a crer na existência de uma única população caracteristicamente panmítica, contudo, com tendências à formação de três grandes grupos (Baixo Amazonas, Marajó e Nordeste). Para tal população, os padrões reprodutivos e adaptativos da espécie, garantiriam a alta equidade da riqueza alélica e os bons índices de diversidade genética de D. rotundus na Amazônia oriental, mesmo sob os efeitos da fragmentação de áreas, que se processa principalmente no lado leste no estado do Pará. / At the present study the hypothesis of population morphological and molecular heterogeneity was tested in several groups of the common vampire bat Desmodus rotundus from oriental Amazonia as well the relationship among the environmental heterogeneity and the process and patterns of rabies outbreaks in human and bovine population was described. For this 776 individuals of common vampire bats from 72 different places of state of Pará were disposed by Instituto Evandro Chagas (IEC - Ministério da Saúde/Belém), Laboratório Nacional Agropecuário (Lanagro/Belém) and Fundação de Vigilância em Saúde do Amazonas (FVG/Manaus). Data from 1999 to 2008 of rabies upon humans and bovines in Pará were disposed by the Secretaria Executiva de Saúde Pública do Pará (SESPA). For morphometric analysis, 39 phenotypic measures (16 bodies and 23 cranials) all adult individuals (329 males and 315 females) were obtained. For genetic analysis, 258 bats (47% males and 53% females) were characterized by 10 microsatelite markers. To describe the areas of rabies risk we used the ecological, biological and socioeconomic shapes of environment as well the soil using, all these geographically georeferenced. One of our results of phenotypic inferences suggest that vampires from Pará showed the tendency to group formation with individuals of the north region of state (Amazonas basin, Marajóand Northeastern regions), only as well they were less similar to bats from southern and southwestern regions. In general, D. rotundus did not show high phenotypically structure among the groups in Pará. The highest variability occurrence in D. rotundus, was not observed among geographic groups. According to molecular analysis of variance (AMOVA), 96% of them were found within each studied group. Our data showed that several of the groups studied in Pará are still under Hardy-Weinberg equilibrium, suggesting the existence of one single panmitic population of the common vampire bat in this North state, but with tendencies to the formation of three great groups (Amazon basin, Marajóand Northeast). To this panmitic population, the reproduction and adaptation patterns garanteed the high equity of allelic richness and good rates of genetic diversity in D. rotundus from oriental Amazon, even under the fragmentation effects in many areas of Pará state, mainly in the east side.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-07-06T18:35:03Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2607465 bytes, checksum: 3b40f68f4d4225bf615db6cabfb8d333 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-06T18:35:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2607465 bytes, checksum: 3b40f68f4d4225bf615db6cabfb8d333 (MD5) Previous issue date: 2016-04-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Existem poucos estudos sobre a caracterização do sistema reprodutor masculino, especialmente o epidídimo, em morcegos neotropicais. Estudos prévios em morcegos, Molossus molossus e Eumops glaucinus, mostraram que o epitélio epididimário apresenta características similares a de outros mamíferos, quando analisados sob microscopia de luz. Porém, não foi encontrado nenhum trabalho caracterizando o epidídimo do morcego vampiro comum, Desmodus rotundus. O epidídimo exerce diversas funções como concentração, maturação, transporte e estocagem do espermatozoide. Esse órgão é composto por epitélio pseudoestratificado, podendo ser dividido em quatro regiões, segmento inicial, cabeça, corpo e cauda. Assim, o objetivo desse trabalho foi caracterizar o epidídimo do morcego vampiro comum com base nos aspectos morfológicos, histomorfométricos e ultraestruturais, através do uso de microscopia de luz, epifluorescência e eletrônica. Para a imunohistoquímica, foram usados marcadores de diferentes tipos celulares, como aquaporina 9, citoqueratina 5 e H + V-ATPase, e proteínas de tight junction, como claudina 1, claudina 3, claudina 4 e zônula de oclusão 1. No presente estudo foi possível identificar a região proximal do epidídimo, segmento inicial e cabeça, e a região distal, corpo e cauda. Todas as regiões apresentaram epitélio pseudoestratificado composto por células principais, basais e claras. A altura do epitélio epididimário diminuiu a partir da região proximal para a distal, enquanto o diâmetro do ducto e o de interducto aumentaram. O compartimento do ducto foi o principal componente do epidídimo do morcego vampiro comum. Células principais apresentaram formato colunar com estereocílio na membrana apical da célula em contato com o lúmen e foram as mais frequentes.Ao longo de todo o epidídimo, foi observado marcação PAS- positiva, formando o glicocálice, e expressão da proteína aquaporina 9 no estereocílio. Em todas as regiões observamos grânulos PAS-positivo no citpolasma, além de características ultraestruturais relacionadas às funções de absorção e secreção. O segundo tipo celular mais observado foi a célula basal. Essas foram identificadas pela posição do núcleo, localizado na porção basal do epitélio, adjacente à membrana basal. Em todas as regiões do epidídimo as células basais expressaram citoqueratina 5 e formaram uma rede de comunicação, através de prolongamentos citoplasmáticos laterais, na base do epitélio. Células claras foram as células menos observadas no epitélio epididimário do morcego vampiro comum. Essas apresentaram formato caliciforme, com núcleo na região apical da célula, baixa frequência na região da cauda e expressaram H + V-ATPase. Ultraestruturalmente, os tipos celulares mostraram características similares ao longo do epidídimo. No morcego vampiro comum, observamos a expressão de proteínas de tight junction, claudinas e zônula de oclusão 1, na porção apical das membranas laterais das células adjacentes que compõem o epitélio epididimário. Entretanto, enquanto zônula de oclusão 1 foi observada somente em tight junction, as claudinas foram observadas na região de tight junction, e na membrana basolateral das células adjacentes, incluindo células basais. Houve diferença na distribuição das claudinas quando comparado o epitélio das regiões proximais com as distais do epidídimo e entre as estações de chuva e seca. Conclui-se que o conhecimento das características do epitélio epididimário do morcego comum aumenta as informações sobre o aparelho reprodutor masculino de espécies de morcegos neotropicais, uma vez que o epidídimo de animais dessa espécie apresenta algumas peculiaridades, como o formato caliciforme das células claras em todas as regiões e baixa quantidade dessas na região da cauda, e a ausência de prolongamento citoplasmático em direção ao lúmen das células basais. Entretanto, mais estudos são necessários para o entendimento de como ocorre a maturação espermática nessa espécie, e se variações hormonais e sazonais podem interferir de alguma forma nesse órgão. / There are few studies about the characterization of the male reproductive system, especially the epididymis, in neotropical bats. Previous studies in bats, Molossus molossus and Eumops glaucinus, showed that the epididymal epithelium presents similar characteristics to the other mammals, when analyzed by light microscopy. However, there is not any study focused on the morphological features of the epididymis in common vampire bat Desmodus rotundus. The epididymis is responsible for several functions such as concentration, maturation, transport and storage of sperm. This organ is composed of pseudostratified epithelium and may be divided into four regions, initial segment, caput, corpus and cauda. Therefore, the aim of this study was to characterize the common vampire bat’s epididymis based in morphological, histomorphometric and ultrastructural aspects using light, epifluorescence and electron microscopy. For the immunohistochemistry, were used different cell types markers, such as aquaporin 9, cytokeratin 5 and H + V-ATPase, and tight junction proteins, as claudin 1, claudin 3, claudin 4 and zonula occludens 1. In this current study, we observed the proximal region of the epididymis, initial segment and caput, and the distal region, corpus and cauda. All the regions showed a pseudostratified epithelium composed of principal, basal and clear cells. The epithelium height decreased from the proximal to the distal region, while the duct and interduct diameter increased. The duct compartment was the main component of the common vampire bat epididymis. Principal cells showed a columnar shape with stereocilia in the cell apical membrane in contact with the lumen, and were the most frequent cell type. Along the epididymis, was observed PAS-positive staining, forming the glycocalix, and expression of aquaporin 9 in the stereocilia. In all regions, we observed PAS-positive granules in the cytoplasm, besides of ultrastructural characteristics related to absorption and secretion functions. The second most frequent cell type was basal cells. These cells were identified by the nuclei position, located in the basal portion of the epithelium, adjacent to the basement membrane. In all epididymal regions, the basal cells expressed cytokeratin 5, and formed a dense network, through cytoplasmatic lateral extensions, at the basal portion of the epithelium. Clear cells were the less frequent cell type observed in the epididymal epithelium of common vampire bat. These cells showed a goblet-shaped body, with nuclei in the apical region, low frequency in the cauda region, and expressed H + V-ATPase. Ultrastructurally, the cell types showed the same cellular characteristics along the epididymis. In the common vampire bat, we observed expression of tight junction proteins, claudins and zonula occludens 1, at the apical portion of lateral membranes of the adjacent epididymis epithelial cells. However, only zonula occludens 1 was observed in the tight junction, while the claudins were observed in the tight junction and in the basolateral membrane of adjacent epithelial cells, including basal cell. There was difference in the claudins distribution when compared the epithelium of the proximal with the distal regions, and between rainy and dry seasons. In conclusion, the knowledge of the epididymal epithelium of the common vampire bat increases the information about the male reproductive system in neotropical bat species, since the epididymis of this specie shows peculiarities, as the shape of clear cells in all regions and low frequency in the cauda, and absence of the luminal-reaching body into the lumen in basal cells. Moreover, more studies are necessary to understand the process of sperm maturation in this species, and if hormonal and seasonality variations could interfere in this organ.

No Brasil a raiva dissemina-se de maneira insidiosa nos herbívoros domésticos, produzindo perdas à indústria pecuária. No estado de São Paulo, a última epizootia registrada ocorreu entre os anos 1997-2002, acometendo bovinos e equinos. Este estudo examinou a possível relação de alguns casos detectados no sul de Minas Gerais no período 2000 a 2009 com o foco paulista citado, mediante análise filogenética de segmentos do gene da glicoproteína (540 nucleotídeos) e nucleoproteína (416 nt) viral, usando o algoritmo de Neighbor-joining, modelo evolutivo Kimura 2- parâmetros com 1000 replicações, considerando sequências de isolados procedentes de diferentes regiões do interior paulista e do Brasil, tomadas do GenBank. Foi proposta uma análise geográfica mediante o programa ArcGis, localizando as coordenadas geográficas dos municípios de origem dos casos sobre mapas de relevo, bacias hidrográficas e distribuição de biomas. A análise filogenética dos dois genes estudados sugeriu que os focos mineiros podem ter a mesma origem genética da última epizootia paulista de raiva em herbívoros ocorrida entre 1997 e 2002. A análise filogenética baseada na nucleoproteína mostrou um maior nível de detalhamento sugerindo a ocorrência de diferentes eventos e/ou centros de dispersão de raiva em herbívoros na área de estudo. A análise geográfica insinuou que os casos aconteceram nas porções menos elevadas da Serra da Mantiqueira, na área de Mata Atlântica e em proximidades das bacias dos rios Piracicaba/Jaguarí, Paranaíba do Sul, Grande, Pardo e Mogi-Guaçu. / Bovine rabies is still spreading insidiously in Brazil, producing economic losses to livestock industry. A remarkable epizootics took place in São Paulo state between 1997 and 2002, affecting bovine and equines. This research was intended to examine genetic relations among some rabies outbreaks in Minas Gerais (MG), during 2000 and 2009 with São Paulo epizootics by phylogenetic analysis based on glycoprotein (540 nucleotides) and nucleoprotein (416 nt) genes partial sequences using Neighbor- joining algorithm, Kimura 2-parameters model, with 1000 bootstrap replications, considering sequences from different regions of São Paulo State (SP) and Brazil from GenBank. A geographic analysis was proposed, plotting geographic coordinates of municipalities with rabies cases on topographic, hydrographic and biome maps using ArcGis software. Phylogenetic analysis for both genes suggested that cases from MG can have the same genetic origin of SP epizootics. Phylogenetic analysis based on nucleoprotein gene showed a richer level of detailing than glycoprotein gene, suggesting different events and/or dispersion centers of livestock rabies in the studied area. Geographic analysis proposed that MG cases occurred at less elevated portions of Serra da Mantiqueira mountains in the area of Atlantic forest, near Piracicaba/Jaguarí, Paranaíba do Sul, Grande, Pardo and Mogi-Guaçu rivers.