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Identificação de lipocalinas com domínio de ligação a histamina e serotonina e validação de genes de referência em transcriptomas de glândula salivar, intestino e ovário do carrapato Amblyomma sculptum / Identification of serotonine histamine biding protein lipocalins and validation of reference genes in salivary gland, gut and ovarian Amblyomma sculptum tick transcriptomesSoares, Adriano Carlos 26 June 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-06-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As lipocalinas constituem uma família de pequenas proteínas extracelulares com cerca de 200 resíduos de aminoácidos e massa molecular de 20 Kda possuem forte divergência em suas sequências de aminoácidos mas mantêm a sua estrutura tridimensional estritamente conservada. Sua diversidade funcional e reconhecimento molecular, contribuem para a utilização dessas proteínas como base para o desenvolvimento de alguns biofármacos. Os genes constitutivos participam de diversas funções do metabolismo celular e são utilizados como controle endógeno sendo fundamentais para validação dos resultados no estudo da expressão utilizando real time RTq-PCR. Em relação a esses genes, ainda não foram publicados trabalhos que identifiquem e validem genes constitutivos como genes de referência para a espécie Amblyomma sculptum (Complexo Amblyomma cajennense). Atualmente, transcriptomas de órgãos e tecidos de carrapatos do gênero Amblyomma têm sido publicados identificando uma variedade de transcritos de lipocalinas com domínio de ligação a histamina e serotonina (SHBP). Neste trabalho, realizamos por predição in silico a identificação de nove lipocalinas com domínio de ligação a serotonina e histamina estabelecendo possíveis relações filogenéticas funcionais de transcritos de lipocalinas identificadas no transcriptoma de glândula salivar do A. sculptum. Realizamos o desenho e a validação de 3 primers de genes de lipocalinas identificadas, lip4, lip7 e lip24. Foram analisados e validados 3 primers de genes constitutivos (g6pdh, 3ohcoadh e gapdh) candidatos potenciais a genes de referência em glândulas salivares, intestinos e ovários do carrapato A. sculptum em situação de não infecção/infecção com R. amblyommii. Foram validados 3 modelos estruturais correspondentes às proteínas lipocalina 4, lipocalina 7 e lipocalina 24. E ainda, realizou-se a análise da expressão diferencial de lipocalinas e potenciais genes de referência em glândula salivar, intestino e ovário de A. sculptum. Os dados obtidos na análise de expressão gênica por real time RT-qPCR suportam a hipótese de que os três genes de lipocalinas interferem na interação microrganismo-vetor sendo necessários trabalhos adicionais para verificação da validade desta hipótese, uma vez que dentre as 121 lipocalinas preditas no transcriptoma de glândulas salivares, somente nove apresentam domínios SHBP sugerindo um papel especial na função destas nos tecidos estudados. / The lipocalin’s family compound a small extracellular protein of about 200 amino acid residues and a molecular mass of 20 kDa present strong divergence in their amino acid sequences but retain its strictly conserved three dimensional structure. Its functional diversity and molecular recognition, contributing to the use of these proteins as a basis for the development of some biopharmaceuticals. The reference genes involved in various cellular metabolism functions and are used, as endogenous control is necessary to validate the results in the study of the expression for real RTQ-PCR analisys. For these genes have not yet been published works to identify and validate constitutive genes as the reference genes for Amblyomma sculptum (Amblyomma cajennense complex) species. Currently, transcriptomes of organs and tissues of the genus Amblyomma ticks have been published identifying a variety of lipocalins transcripts with binding domain histamine and serotonine (SHBP). We carried out by prediction in silico identification of nine lipocalins with serotonine and histamine binding domain setting possible functional phylogenetic relationships of lipocalins transcripts identified in salivary gland transcriptome of A. sculptum. We carry out the design and validation of three primers identified lipocalin genes, lip4, lip7 and lip24. They were analyzed and validated three primers of constitutive genes (g6pdh, 3ohcoadh and gapdh) potential candidate reference genes in the salivary glands, ovaries and intestines A. sculptum tick for a situation of no infection / infection with R. amblyommii. Were validated three corresponding structural models to lipocalins 4, 7 and 24. Yet, there was the analysis of differential expression of lipocalins and potential reference genes in the salivary gland, gut and ovarian A. sculptum tick. The results of analysis in experiment of gene expression by real time RT-qPCR support the hypothesis that the three lipocalins genes interfere with the microorganism-vector interactions. Finaly it is necessary a further work to verify the validity of this hypothesis, since among the 121 lipocalins predicted in transcriptome salivary glands, only nine have SHBP domains suggesting a special role in the function of these tissues studied.
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Inibição terapêutica da interação MDM2-p53 : uma alternativa para o tratamento do carcinoma adenoide císticoNör, Felipe January 2016 (has links)
Introdução: O carcinoma adenoide cístico (CAC) é uma das neoplasias de glândula salivar mais comuns para o qual não se encontra quimioterapia eficaz. Um conceito emergente na terapia do câncer é atingir proteínas especificas do tumor. MDM2 (murine double minute 2) é um importante inibidor do supressor tumoral p53, e sua expressão é aumentada em CAC. O objetivo do Artigo 1 foi avaliar o efeito de um novo inibidor da interação MDM2-p53 (MI-773) no CAC in vitro e in vivo. O Artigo 2 teve como objetivo entender o papel da combinação de MI-773 com cisplatina, além de avaliar a recorrência de CAC frente a regime neoadjuvante de MI-773. Materiais e Métodos: 3 modelos de xenoenxerto derivado de paciente (XEDP, UM-PDXHACC- 5; ACCx6; ACCx9) e 5 culturas primarias de CAC (UM-HACC-1, -2A, -2B, -5, -6) foram usados para experimentos in vitro e in vivo. Ensaio de Sulforrodamina B (SRB) foi realizado para avaliar o efeito dos agentes experimentais na viabilidade celular, além de determinar valores de IC50. Western blots revelaram a expressão de p53, fosfo-p53, MDM2, p21, PUMA, BAX, Bcl-2 e Bcl-xL. Lâminas histológicas (UMPDX- HACC-5) foram avaliadas por imunohistoquímica e imunofluorescência para determinar a localização de p53. Técnica de TUNEL in situ revelou o número de células de UM-PDX-HACC-5 no processo de apoptose. Citometria de fluxo foi realizada para determinar o efeito da terapia na proporção de células-tronco tumorais (ALDHhighCD44high) e para avaliar o ciclo celular. Para os estudos in vivo, animais transplantados com tumores (UM-PDX-HACC5, ACCx6, ou ACCx9) receberam protocolo terapêutico (MI-773 – gavagem; cisplatina – injeção intraperitoneal; ou veículo controle) conforme indicado. ANOVA, seguido de testes post-hoc (Tukey), Mann-Whitney U-test ou Student’s t-test foram usados para determinar as diferenças no crescimento tumoral, peso, volume, apoptose, viabilidade celular, expressão de TUNEL e p53. Significância estatística: p<0.05. Resultados: MI-773 causa regressão do tumor em todos os modelos préclínicos de CAC. Doses diárias de 100mg/kg de MI-773 reduziram significativamente o volume tumoral quando comparado com doses intermediárias (10 ou 50 mg/kg MI-773) ou veículo controle, em todos os modelos de CAC. Alternativamente, camundongos transplantados com tumores UM-PDX-HACC-5 receberam doses semanais de MI-773 (200 mg/kg) e/ou cisplatina (5 mg/kg) por 30 dias, a fim de se avaliar o efeito da combinação das drogas. MI-773, como agente único, causou regressão tumoral, sendo mais efetivo do que a cisplatina. Cisplatina, por outro lado, mostrou limitado efeito terapêutico, estabilizando o crescimento tumoral. Notavelmente, a combinação MI-773 + cisplatina foi mais efetiva do que os agentes isoladamente, e não foi verificada retomada do tumor no período pósoperatório. Importantemente, os protocolos experimentais não comprometeram a saúde geral dos animais. Coletivamente, estes resultados in vivo demonstram que MI-773 atua como mediador na regressão tumoral de CAC e sensibiliza os tumores à cisplatina. A inibição terapêutica da interação MDM2-p53 ativa p53 e induz apoptose. MI-773 potentemente induz expressão de p53, seu alvo p21 e proteínas relacionadas à apoptose, como PUMA, BAX, Bcl-2 e Bcl-xL in vitro e in vivo. Análise do ciclo celular mostrou que a inibição terapêutica da interação MDM2-p53 por MI- 773 causa parada no ciclo celular no primeiro ponto de checagem (G1). Marcação por TUNEL revelou número significativamente maior de células em apoptose quando tumores de UM-PDX-HACC-5 foram tratados com MI-773 em comparação com controle (p<0.05) Utilizando o mesmo modelo de xenoenxerto, a técnica de imunohistoquímica mostrou que MI-773 não somente aumentou a porcentagem de células p53-positivas (p<0.001), como causou uma translocação parcial de p53 ao citoplasma. MI-773 reduz a fração de células-tronco tumorais (CTT) e previne recorrência do CAC. Tratamento com MI-773 como agente único ou combinado com cisplatina reduziu a fração de CTT (p<0.05). Notavelmente, nenhum animal tratado com regime neoadjuvante de MI-773 apresentou recorrência tumoral mesmo após 300 dias de acompanhamento. Em contraste, em 62,5% dos animais do grupo controle houve recorrência (p=0.0097). Conclusões: Em resumo, os estudos demonstram que a inibição terapêutica da interação MDM2-p53 com MI-773 é uma estratégia antitumoral eficaz, é capaz de sensibilizar tumores à cisplatina e previne recorrência neste modelo pré-clínico de CAC. Coletivamente, os dados sugerem que pacientes com carcinoma adenoide cístico podem ser beneficiados através de terapias-alvo contra MDM2. / Introduction: Adenoid cystic carcinoma (ACC) is one of the most common salivary gland malignancies for which no effective chemotherapy is available. An emerging concept in cancer therapy is to target specific tumor-related proteins. Murine double minute 2 (MDM2) is an important inhibitor of the tumor suppressor p53 and has been found overexpressed in ACC. Paper #1 aimed to evaluate the effect of a novel small molecule inhibitor of the MDM2-p53 interaction (MI-773) on ACC in vitro and in vivo. Paper #2 aimed to understand the role of combining MI-773 with cisplatin, and to evaluated ACC recurrence using a neoadjuvant regimen of MI-773. Material and Methods: 3 patient-derived xenograft (PDX) models (UM-PDX-HACC-5; ACCx6; ACCx9) and 5 low passage primary human ACC cells pools (UM-HACC-1, -2A, -2B, - 5, -6) were used for in vivo and in vitro experiments. Sulforhodamine B (SRB) assay was performed to evaluate the effect of experimental agents on ACC cell viability and to determine IC50 values. Western blots revealed the expression of p53, phosphop53, MDM2, p21, PUMA, BAX, Bcl-2 and Bcl-xL. Histological sections from UM-PDXHACC- 5 tumors were stained using immunohistochemistry and immunofluorescence techniques to determine p53 status. In situ TUNEL staining revealed the number of UM-PDX-HACC-5 cells undergoing apoptosis. Flow cytometry was carried out to determine the effect of therapy on the proportion of cancer stem cells (ALDHhighCD44high) and for cell cycle analysis. For in vivo studies, mice harboring UM-PDX-HACC5, ACCx6, or ACCx9 tumors were treated following specific therapeutic protocol (MI-773 – gavage; cisplatin – intraperitoneal injection; or vehicle control), as opportunely indicated. One-way ANOVA, followed by post-hoc tests (Tukey), Mann-Whitney U-test or Student’s t-test were used to determine significant differences in tumor growth, weight, volume, apoptosis levels, cell viability, TUNEL and p53 expression. Significance was determined at p<0.05. Results: MI-773 caused tumor regression in all ACC PDX models. Daily doses of 100 mg/kg MI- 773 significantly reduced tumor volume when compared to intermediate doses (10 or 50 mg/kg MI-773) or vehicle-treated controls in all ACC xenograft models. Alternatively, mice harboring UM-PDX-HACC-5 tumors received either weekly doses of MI-773 (200 mg/kg) and/or cisplatin (5 mg/kg) for 30 days, in order to evaluate the effect of this drug combination. MI-773 as single agent caused tumor regression, being more effective than single agent cisplatin. Cisplatin showed limited therapeutic response stabilizing tumor growth. Notably, combination of MI-773 with cisplatin was more effective than single agent therapies and no tumor rebound was observed during the follow up period. Importantly, experimental protocols did not compromise the overall health status of mice. Collectively, these in vivo results demonstrate that MI-773 mediates ACC tumor regression, and sensitizes ACC xenograft tumors to cisplatin. Therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction activates p53 and induces apoptosis. MI-773 potently induced the expression of p53, its downstream target p21 and apoptosis-related proteins PUMA, BAX, Bcl-2 and Bcl-xL in vitro and in vivo. Cell cycle analysis showed that therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction by MI-773 causes cell cycle arrest at the first checkpoint (G1). In situ TUNEL revealed a significant higher number of cells undergoing apoptosis in UMPDX- HACC-5 tumors treated with MI-773 compared to vehicle control (p<0.05). Using the same xenograft model, immunohistochemistry assay showed that MI-773 not only increased the percentage of p53-positive cells (p<0.001), but also caused a partial translocation of p53 to the cytoplasm. MI-773 reduces the fraction of cancer stem cells (CSC) and prevents recurrence in ACC. Treatment with MI-773 as single agent or combined with cisplatin significantly reduced the fraction of CSC (p<0.05). Notably, not a single animal treated with neoadjuvant MI-773 presented recurrence even after 300 days of follow-up. In contrast, 62,5% of mice that received vehicle control experienced tumor reappearance within this time period (p=0.0097). Conclusions: In summary, these studies demonstrate that therapeutic inhibition of the MDM2-p53 interaction with MI-773 is an effective anti-tumor strategy that mediates tumor regression, sensitizes tumors to cisplatin and prevents recurrence in this pre-clinical model of ACC. Collectively, these data suggest that patients with adenoid cystic carcinoma might benefit from MDM2-targeted therapies.
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Imunofenotipagem de lesões obtidas em carcinogênese quimicamente induzida por DMBA em glândulas salivares submandibulares e ratos (Rattus norvegicus)Mainenti, Pietro [UNESP] 10 June 2009 (has links) (PDF)
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mainenti_p_dr_sjc.pdf: 825103 bytes, checksum: cb4ac2ce4ddd387d52a086efa8ec1795 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A carcinogênese química em glândulas salivares animais não se apresenta como um modelo novo de pesquisa. O uso de DMBA em glândulas submandibulares de ratos produz carcinomas e sarcomas, associados ou não. Apesar de bem estudada a histopatologia deste tipo de carcinogênese, pouco se sabe em relação a imunoistoquímica das neoplasias. Este estudo se propõe a revisar pesquisa pregressa realizada por Mainenti (2006), na tentativa de melhor entender a formação de tumores induzidos por DMBA. O estudo original diagnosticou lesões não neoplásicas, principalmente sialadenites, e tumores como carcinomas, carcinossarcomas e um caso de sarcoma. O presente trabalho fez uso de lâminas e material de estoque em formol. Foram comparadas as lâminas originais com novas lâminas coradas em hematoxilina e eosina. Para a pesquisa de fibras colágenas utilizou-se a coloração pelo método do tricrômico de Gomori. A imunoistoquímica foi realizada utilizando os seguintes anticorpos: AE1/AE3, vimentina, α-SMA, calponina, desmina, miogenina, S-100, CerbB-2 e EMA. Certas lesões, previamente diagnosticadas como sialadenites, foram reclassificadas como carcinomas. A imunoistoquímica foi positiva para os seguintes anticorpos: AE1/AE3 para neoplasia epitelial, vimentina para tecido conjuntivo e tumores mesenquimais, α-SMA e calponina para poucas células fusiformes pleomórficas no estroma dos carcinomas e nas neoplasias mesenquimais. Concluiu-se que a imunoistoquímica revelou diferenciação muito sugestiva de miofibroblastos no estroma dos carcinomas e miofibroblastos compondo o fibrossarcoma e os carcinosarcomas. Estas células produziram colágeno revelado pelo tricrômico de Gomori. O componente epitelial neoplásico foi sugerido como derivado de células luminais. / The chemical carcinogenesis, addressed to animal salivary gland, is not a novel research. The use of DMBA in rat’s submandibular salivary gland is known to produce neoplasms like sarcomas and carcinomas either intermingled or not. Despite of the good amount of information regarding DMBA carcinogenesis histopathology in rat’s submandibular parenchyma, little is known about the immunohistochemistry in such tumors. We proposed a revision of a previous research conduced by Mainenti (2006), in attempt to better understand the neoplasm formation after DMBA. The original experiment disclosed non neoplastic lesions, mainly sialadenitis, and tumors like carcinomas, carcinosarcomas and one case of sarcoma. The present work used all the material from the first research like surgical specimens in formol and slides. We compared the previous hematoxylin and eosin slides with new ones. We also used Gomori’s trichrome in order to disclose collagen fibers. The immunohistochemistry was performed using the following antibodies: AE1/AE3, vimentin, α-SMA, calponin, desmin, myogenin, S-100, CerbB-2 and EMA. Some previous lesions, presented as benign ones, were diagnosed as carcinomas. The immunohistochemistry was positive as shown: AE1/AE3 for epithelial neoplasm, vimentin for connective tissue in mesenchymal tumors, α-SMA and calponin for scarce pleomorphic fusiform cells in the stroma of the carcinomas and in the mesenchymal neoplasms. We concluded that the immunohistochemistry strongly suggested myofibroblast differentiation in the stroma of the carcinomas and myofibroblast cells related to the fibrosarcoma and carcinosarcomas. These cells produced collagen shown after Gomori’s trichrome. The epithelial neoplasm component was suggested as derived from luminal cells.
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Efeitos in vitro e in vivo do extrato de glândulas salivares de fêmeas de carrapatos Rhipicephalus sanguineus com 2 dias de alimentação sobre modelos tumoraisRocha, Fabiana Alonso [UNESP] 17 December 2014 (has links) (PDF)
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000832891.pdf: 490565 bytes, checksum: 77601b8f608fafdf82886451724e56fc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / No presente trabalho foram realizados testes para demonstrar o potencial antitumoral de extratos de glândulas salivares de fêmeas de carrapatos Rhipicephalus sanguineus com 2 (EGS2) dias de alimentação sobre células das linhagens DH82 e HL-60 (in vitro) , bem como os efeitos de duas concentrações diferentes (0,2 e 0,04μg/μL) de extratos (com uma ou duas injeções) obtidos a partir das mesmas glândulas da espécie de carrapato com o mesmo tempo de alimentação sobre a morfofisiologia da musculatura de pernas posteriores de ratas Wistar inoculadas com células do tumor de Walker 256 (in vivo). In vitro as células tumorais foram expostas às concentrações do extrato pelo período de 24 horas e então encaminhadas para as avaliações quantitativa (análise dos parâmetros viabilidade e o número total de células) e morfológica (análises sob microscopia de luz convencional: coloração pela hematoxilina e eosina, e sob microscopia confocal: marcação do citoesqueleto/núcleo, verificação da viabilidade celular, bem como detecção da atividade das caspases 3 e 7). Os resultados quantitativos mostraram que o extrato EGS2 afetou negativamente tanto a viabilidade quanto a proliferação das células tumorais, sendo que a concentração de 0,2 reduziu a viabilidade das DH82 e a de 0,5 reduziu a proliferação destas. Para as células HL-60 as concentrações de 0,2 e de 0,5 reduziram a viabilidade, sendo ainda que a concentração de 0,5 foi mais eficaz nesse processo. Os dados morfológicos revelaram que tanto as DH82 (exposição a 0,2 μg/mL do EGS2) quanto as HL-60 (exposição a 0,2 e 0,5 μg/mL do EGS2) tiveram a viabilidade comprometida. Além disso, detectou-se alterações citoplasmáticas e nucleares como: a) desorganização do citoesqueleto (actina e tubulina), b) condensação e concentração da cromatina em blocos distribuídos ou por todo o núcleo ou somente na sua periferia (marginalização cromatínica), picnose... / In this study, tests were conducted to demonstrate the antitumor potential of salivary gland extract of female ticks Rhipicephalus sanguineus 2 (EGS2) days of feeding on the DH82 cell lines HL-60 and (in vitro), as well as the effects of two different concentrations (0,2 and 0,04μg/uL) extracts (one or two injections) obtained from the same glands of the same species at the same time of tick feeding on morphophysiology muscle of hind legs of female Wistar rats inoculated with Walker 256 tumor cells (in vivo). In vitro, tumor cells were exposed to concentrations of the extract for 24 hours and then forwarded to the quantitative assessments (analysis parameters and viability percentage of total cells) and morphology (analysis under conventional light microscopy: hematoxylin and eosin and under confocal microscopy: marking cytoskeletal / core check cell viability, as well as the detection of the activity of caspases 3 and 7). The quantitative results show that the extract EGS2 adversely affects both the viability as the proliferation of tumor cells, and the concentration of 0,2 reduced the viability of DH82 and 0,5 reduced the proliferation of these. For HL-60 concentrations of 0,2 and 0,5 reduced the viability still being the concentration of 0,5 was most effective in this process. Morphological data showed that both DH82 (exposure to 0,2 mg / mL of EGS2) and HL-60 (exposure to 0,2 to 0,5 mg / mL of EGS2) had impaired viability, or in such concentrations there was death of EGS2 cell, which occurred earlier in DH82 (presence of large blocks containing cell debris). Moreover, it was detected cytoplasmic and nuclear changes resulting from exposure to the extracts, which were: a) disruption of the cytoskeleton (actin and tubulin), b) condensation of chromatin and concentration in blocks or distributed throughout the core or only on its periphery (chromatin marginalization), pyknosis, training blebbs and nuclear fragmentation, c) activity of...
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Ação do extrato de glândulas salivares de fêmeas do carrapato Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) sobre a inibição da proliferação de células de linhagem tumoralAnholeto, Luís Adriano [UNESP] 27 February 2015 (has links) (PDF)
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000833148.pdf: 772007 bytes, checksum: e2f86651040f87915c5e2b2074a07a94 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Os carrapatos, ectoparasitas hematófagos, produzem uma saliva em cuja composição encontram-se moléculas capazes de modular o sistema imuneinflamatório e hemostático do hospedeiro. No presente estudo, foi realizada a caracterização do extrato de glândulas salivares de fêmeas do carrapato Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) alimentadas por quatro dias em coelhos hospedeiros, por meio de espectrometria de massas (LCMS-IT-TOF) pela estratégia de Shotgun, que identificou 14 proteínas, com as mais diversas funções como componentes estruturais de junções celulares, do citoesqueleto, do nucleossomo, além de proteínas com ações anticoagulante e anti-inflamatória corroborando os dados presentes na literatura. Neste trabalho buscou-se, ainda, analisar o potencial antitumoral desse extrato em células das linhagens tumorais SK-HEP-1 e HEP-G2, por meio de ensaios de MTT; análise, por técnicas de Microscopia de Confocal de Varredura a Laser, do núcleo e citoesqueleto; e análise do padrão de transcrição de mRNAs envolvidos nos eventos ou mecanismos de morte celular por apoptose, incluindo os produtos dos genes Bax, Bcl-2, Caspases 3 e 9, Fas e Interleucina 1 α. Os resultados obtidos mostraram que o extrato na concentração de 50 μg/mL inibiu significativamente a proliferação celular das duas linhagens testadas. Pela análise dos núcleos e filamentos de actina das células expostas, não foram verificadas características morfológicas que indicassem processos de morte celular por apoptose. Já a análise do padrão de transcrição de mRNAs envolvidos nos mecanismos de morte celular por apoptose, evidenciou a expressão significativa de alguns genes anti e pró-apotóticos nas células tratadas quando comparadas às do grupo controle, sugerindo que a ação do extrato pode causar o desbalanço na homeostase celular, que pode desencadear processos de morte celular por apoptose, corroborando os dados apresentados na... / Ticks, hematophagous ectoparasites produces saliva that presents molecules capable of modulating the immune-inflammatory and hemostatic system of the host. The present study was performed to characterize the salivary gland extract of female Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) fed for four days in rabbits by mass spectrometry (LCMS-IT-TOF) by shotgun strategy, which identified 14 proteins with diverse functions: as structural components of cell junctions, cytoskeleton, the nucleosome, and protein with anticoagulant and antiinflammatory actions corroborating data in the literature. In this study, we attempted to also examine the antitumor potential of this extract on tumor cell lines SK HEP-1 and HEP-G2, by MTT assay; analysis by Laser Scanning Confocal Microscopy techniques, and pattern analysis of mRNA transcription involved in cell death by apoptosis, including the products of genes Bax, Bcl-2, Caspases 3 and 9 Fas and Interleukin-1 α. The results showed that the extract obtained in concentration of 50 μg/ml significantly inhibited the proliferation of both cell lines tested. In the analysis of cores and actin filaments, of the treated cells were not observed morphological characteristics that indicate cell death processes by apoptosis. The analysis of the pattern of transcription of mRNAs involved in mechanisms of cell death by apoptosis, showed a significant expression of some apoptotic genes, in treated cells compared to the control group, suggesting that the action of the extract can cause an unbalance homeostasis in the cell, which can trigger processes of cell death by apoptosis, confirming the data presented in the literature / FAPESP: 2013/00654-0
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Expressão de antígenos salivares e avaliação da atividade apirásica salivar do triatomíneo Rhodnius neglectus, vetor da doença de ChagasMartins, Déborah Bianca Santos 27 February 2018 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2018. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-05-08T17:24:45Z
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Previous issue date: 2018-05-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Fundação de Apoio a Pesquisa do Distrito Federal (FAPDF). / Rhodnius neglectus (Hemiptera: Reduviidae) é um vetor potencial do Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas. Ele apresenta em suas glândulas salivares moléculas importantes que neutralizam os mecanismos hemostáticos do hospedeiro, auxiliam na alimentação sanguínea e, de forma indireta, na transmissão do T. cruzi. Assim, a saliva desse inseto hematófago se torna um relevante alvo de pesquisas devido à presença de moléculas com elevado potencial farmacológico. Este estudo teve por objetivos, a expressão heteróloga de membros das famílias de proteínas salivares triabina e antígeno 5 e a avaliação da atividade apirásica salivar de R. neglectus. As sequências nucleotídicas das proteínas foram obtidas a partir do transcriptoma de R. neglectus, clonadas no vetor pET100/D-TOPO e expressas em bactérias Escherichia coli da linhagem BL21(DE3). Ambas as proteínas recombinantes, triabina e antígeno 5, foram observadas na fração insolúvel após a lise das bactérias. Essas foram purificadas por cromatografia de afinidade e usadas para a produção de anticorpos policlonais em camundongos, os quais reagiram cruzadamente com antígenos das salivas das espécies R. prolixus e T. infestans. Após a otimização do protocolo de expressão, somente a triabina foi expressa na fração solúvel do lisado bacteriano. A atividade apirásica também foi avaliada na saliva de R. neglectus em solução e por zimografia em gel. As proteínas salivares com atividade apirásica foram identificadas por espectrometria de massas das bandas excisadas do zimograma contendo ADP como substrato. Os anticorpos antiapirase de R. prolixus reagiram cruzadamente com antígenos da saliva de R. neglectus. Os resultados mostram que há espécies nas tribos Rhodniini e Triatomini que compartilham epítopos semelhantes de triabina, antígeno 5 e apirase. Como perspectiva, a triabina recombinante solúvel poderá ser avaliada como potencial marcador de exposição aos triatomíneos, bem como ter determinadas as suas potenciais atividades farmacológicas e contribuir na compreensão das interações dinâmicas hospedeiro-vetor. / Rhodnius neglectus (Hemiptera: Reduviidae) is a potential vector for Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas disease. It presents in its salivary glands important molecules that neutralize the hemostatic mechanisms of the host, assist in the blood supply and in T. cruzi transmission. The saliva of this hematophagous insect is, therefore, a research target due to the presence of molecules with pharmacological potential. In this study, the heterologous expression of members from triabin and antigen 5 families and the evaluation of R. neglectus salivary apyrase activity are reported. Protein nucleotide sequences were selected from R. neglectus transcriptome, cloned into pET100/D-TOPO vector and expressed in Escherichia coli strain BL21(DE3). Both recombinant proteins, triabin and antigen 5, were observed in the insoluble fraction after bacterial lysis. They were purified by affinity chromatography and used to raise polyclonal antibodies in mice, which cross-reacted with antigens from saliva of R. prolixus and Triatoma infestans. After optimization of the expression protocol, only triabin was expressed in the bacterial soluble fraction. Apyrase activity was also evaluated in R. neglectus saliva, both in solution and by in gel zymography. Salivary proteins with apyrase activity were identified by mass spectrometry of bands excised from the zymogram containing ADP as substrate. R. prolixus anti-apyrase antibodies cross-reacted with R. neglectus salivary antigens. Results show that species from both Rhodniini and Triatomini tribes share similar antigen 5, triabin, and apyrase epitopes. As a perspective, soluble recombinant triabin can be evaluated as biomarker candidate to triatomine exposure, for potential pharmacological activities and may contribute in the understanding of host-vector dynamic interactions.
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Carcinogênese quimicamente induzida por DMBA em glândulas salivares submandibulares de ratos (rattus norvegicus)Mainenti, Pietro [UNESP] 21 July 2006 (has links) (PDF)
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mainenti_p_me_sjc.pdf: 623200 bytes, checksum: d227d4d10a271c7131a651e433d811a0 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A carcinogênese consiste em um processo de alterações genéticas após contato celular com agentes físicos, químicos ou biológicos. Esta interação pode culminar em manifestações de fenótipos malignos celulares. No estudo experimental da carcinogênese em glândulas salivares animais, os autores são unânimes em apontar os hidrocarbonetos policíclicos aromáticos (HPA) como potentes agentes carcinogênicos. O 7,12 - dimetilbenzantraceno (DMBA), pertencente ao grupo dos HPA, é considerado o carcinógeno químico de eleição para a tumorigênese de glândulas salivares animais. Este trabalho visou o estudo de DMBA injetado em glândulas salivares submandibulares de ratos. Foram utilizados 28 ratos (Rattus norvegicus), com três meses de idade e peso aproximado de 300g. Os resultados revelaram, na 5ª semana, sete casos de sialadenite crônica. Na 10ª semana, um caso com atipia celular ductal, dois casos de carcinoma epidermóide e quatro de sialadenite crônica. Entre a 15ª e 20ª semanas, foram observados três casos de hiperemia, três casos de carcinoma epidermóide, um caso de sarcoma e sete casos de carcinossarcoma. A análise dos dados, em porcentagem, revelou: 3,6% de atipia celular, 3,6% de sarcoma, 10,7% de hiperemia, 17,9% de carcinoma epidermóide, 25% de carcinossarcoma e 39,4% de sialadenite crônica. Conclusão: Os dados obtidos permitiram o estudo da história natural da carcinogênese glandular por DMBA desde os processos inflamatórios iniciais até à formação de neoplasias mesenquimais, epiteliais e mistas. / The carcinogenesis consists in a process in which the direct contact between cells and some physical, chemical or biological agents results in cell malignization. In the scope of experimental salivary gland carcinogenesis there is a consensus in the use of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) as carcinogens. The 7,12 - dimethylbenzanthracene (DMBA) is the most used PAH. This paper aims the investigations of the DMBA injected in rats submandibular glands. For this purpose, 28 rats (Rattus norvegicus), three months old (300 gr. weight, approximately) were used. The animals were divided into four groups of seven each. All animals were anesthetized and shaved in the neck. After antisepsis, one ventral neck incision, followed by dissection was performed in each animal. The left submandibular gland was injected with 0.1 ml of 2% DMBA in acetone. The skin was closed with 3-Ø silk suture. By the end of the 5th, 10th, 15th and 20th weeks the animals were sacrificed by lethal doses of anesthetics. The results in the 5th week presented seven cases of chronic sialadenitis. After 10 weeks one case of ductal cell atypia was evident, two cases of squamous cell carcinoma and four cases of chronic sialadenitis were also seen. Between the 15th and 20th weeks the cases were diagnosed as follows: three cases of hyperemia, three cases of squamous cell carcinoma, one case of sarcoma and seven cases of carcinosarcoma. The data analysis showed 3.6% of cellular atypia, 3.6% of sarcoma, 10.7% of hyperemia, 17.9% of squamous cell carcinoma, 25% of carcinosarcoma and 39.4% of chronic sialadenitis. Conclusion: the results allowed the investigation of the glandular carcinogenesis natural history after DMBA injection, from the beginning of inflammatory changes to the neoplastic manifestation of mesenquimal, epithelial and mixed tumours.
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Estudo imunoistoquímico da expressão de actina, vimentina, calponina e caldesmona no adenoma pleomórfico, adenocarcinoma polimorfo de baixo grau de malignidade e carcinoma adenóide cístico de glândulas salivaresRodrigues Junior, Nei Carlos [UNESP] 25 June 2008 (has links) (PDF)
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rodriguesjunior_nc_me_sjc.pdf: 733585 bytes, checksum: d0b8a1ee0d12715fcf4c0a558000b2c1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Dentre as neoplasias de glândulas salivares com participação das células mioepiteliais, encontra-se o adenoma pleomórfico (AP), o mioepitelioma (ME), o adenocarcinoma polimorfo de baixo grau de malignidade (APBGM) e o carcinoma adenóide cístico (CAC). A proposta deste trabalho foi estudar a expressão de actinas, vimentina, calponina e caldesmona no AP, ME, APBGM e CAC, buscando estabelecer diferenças entre essas neoplasias e facilitar o diagnóstico definitivo das mesmas. Foram estudados 27 casos de AP, 6 de ME, 9 de CAC e 6 de APBGM. Foram realizadas reações imunoistoquímicas, pela técnica da streptavidina biotina peroxidase com os anticorpos HHF35 (anti-actina músculo específica), 1A4 (anti-α-actina de músculo liso), V9 (anti-vimentina), CALP (anticalponina) e h-CD (anti-h-caldesmona). Nos adenomas pleomórficos a maioria das células não luminais, fusiformes e plasmocitóides exibiu forte marcação para vimentina. As células luminais foram sempre negativas. Grande número de células não luminais e fusiformes foi positivo para α-AML e CALP e algumas para HHF35. Nos mioepiteliomas, a marcação para vimentina e HHF35 foi semelhante à dos AP. Nos carcinomas adenóide císticos a maioria das células não luminais mostrou forte coloração para VIM, α-AML e CALP. Nos APBGM houve marcação positiva para VIM. A maioria das células neoplásicas foi negativa para HHF35, α-AML e CALP. Concluiu-se que a VIM foi o melhor marcador de células mioepiteliais neoplásicas em AP, ME e CAC, seguida da α-AML e CALP nos AP e CAC. A VIM foi o melhor marcador de células neoplásicas em APBGM. / Among the salivary gland tumors in which there are participation of myoepithelial cells, it is found the pleomorphic adenoma (PA) and the myoepithelioma (ME), which may have overlapping histopathological features with polymorphous low-grade adenocarcinoma (PLGA), and adenoid cystic carcinoma (ACC). The aim of this work is to study the expression of actins, vimentin, calponin and caldesmon in the PA, ME, PLGA, ACC, seeking to establish differences between these tumours and facilitate the definitive diagnosis of them. We studied 27 PA, 6 ME, 9 ACC, and 6 PLGA. Immunohistochemical reactions were held, by the technique of streptavidin biotin peroxidase with antibodies HHF35 (Anti-specific muscle actin, 1A4 (anti-α-smooth muscle actin), V9 (anti-vimentin), CALP (anti-calponin) e h-CD (anti-h-caldesmon). In PA, most non luminal cells, spindle and plasmocytoid cells exhibited strong stainning for VIM. The luminal cells were always negative. A lot of non-luminal and spindle cells were positive for α-SMA and CALP and some for HHF35. In ME, the staining for VIM and HHF35 was similar to PA. In ACC the majority of nonluminal cells showed strong staining for VIM, α-SMA and CALP. In PLGA, there was positive staining for VIM. Most tumoral cells were negative for HHF35, α-SMA and CALP. In conclusion, VIM was the best marker for neoplastic myoepithelial cells in PA, ME and ACC, followed by α-smooth muscle actin and CALP in PA and the ACC. VIM was the best marker for neoplastic cells of PLGA.
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Papel dos receptores andrenérgicos da preóptica medial (APM) no controle da salivação induzida pela ativação colinérgica em ratos.Almeida, Roberto Lopes de 17 December 2004 (has links)
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DissRLA.pdf: 423500 bytes, checksum: 48847345bf5289e81fbcf58a5684edce (MD5)
Previous issue date: 2004-12-17 / Universidade Federal de Sao Carlos / The present work had as objective to investigate the participation of the
mechanisms adrenergics of the medial preoptic area (APM) in the salivary secretion
induced for the peripheral colinergic stimulation (pilocarpine injection). Holtzman
rats had been used (280-320 g). A part of the animals suffered electrolytic lesion in
the APM through the ticket from electric chain (1mA x 3x10s), to serve as control,
and another part of the animals was submitted to the same procedures of cerebral
surgery, except that it was not displayed to the electric chain ticket (SHAM). Animals
that suffered the surgery from implant of cannulas guides in the APM for the
injection of adrenergics agonists and antagonists were also used. The saliva was
collected using previously weighted and inserted balls of cotton in the mouth of the
animal that was under anesthesia with quetamina (1mg/mL/kg). Salivation was
induced for intraperitoneal injection (IP) of pilocarpine (1mg/mL/kg). The APM
lesion in such a way reduced peripheral the pilocarpine-induced salivation group that
suffered APM lesion 24 hours before the experiment (APM lesion 340,7 ± 41,1
mg/7min, versus SHAM 428,4 ± 31,6 mg/7min) as much as in the group that suffered
APM lesion 5 days before the experiment (APM lesion 310,2 ± 35,4 mg/7min, versus
SHAM 494,9 ± 35,5 mg/7min). Reduction in the peripheral pilocarpine-induced
salivation was not verified in those animals that had suffered APM lesion 15 days
before the experiment (APM lesion 461,6 ± 81,4 mg/7min, versus SHAM 575,7 ±
34,9 mg/7min). The injection of noradrenaline (80 nmol/0,5µL) in the APM did not
reduce the peripheral pilocarpine-induced salivation (NOR + Pilo 356,0 ± 36,0
mg/7min versus Saline + Pilo 475,0 ± 73,0 mg/7min). This same drug in the dose of
160 nmol/0,5 µL reduced the peripheral pilocarpine-induced salivation (NOR + Pilo
251,0 ± 50,0 mg/7min versus Saline + Pilo 468,0 ± 59,0 mg/7min). The inhibitory
effect of the injection in the APM of noradrenaline (160 nmol/0,5µL) in the
peripheral pilocarpine-induced salivation was not reduced by the previous injection of
the antagonist of adrenoceptors α2, RX-821002 in the dose of 80 nmol/0,5µL (RX +
NOR + Pilo 244,1 ± 29,2 mg/7 min, versus Saline + NOR + Pilo 202,3 ± 34,8 mg/7
min). On the other hand, this same drug injected in the dose of 160 nmol/0,5µL,
partially reverted the inhibitory effect of the injection in the APM of noradrenalina
(160 nmol/0,5µL) in the peripheral pilocarpine-induced salivation (RX + NOR + Pilo
329,9 ± 77,8 mg/7min, versus Saline + NOR + Pilo 148,2 ± 30,3 mg/7min). The RX-
821002 injected in the APM in the dose of 320 nmol/0,5µL, failed in showing the
reversion of the inhibitory effect of the injection in the APM of noradrenaline
(160nmol/0,5µL) in the peripheral pilocarpine-induced salivation (RX + NOR +
261,3 ± 18,9 mg/7min, versus Saline + NOR + Pilo 320,4 ± 30,2 mg/7min). The
antagonist of adrenergics receptors α1, Prazosin, did not reveal efficient, therefore the
inhibitory effect of the injection in the APM of noradrenaline (160 nmol/0,5µL) in the
peripheral pilocarpine-induced salivation was not reduced by the previous injection of
the adrenergic antagonist α1, Prazosin, in the dose of 160 nmol/0,5µL (Prazosin +
NOR + Pilo 223,6 ± 35,8 mg/7min, versus Saline + NOR + Pilo 256,0 ± 58,5
mg/7min). The results show that the noradrenaline injected in the APM reduces the
peripheral pilocarpine-induced salivation and this effect is reduced by the previous
blockade of the receiving adrenergics α2 of the same area, suggesting to the
existence of an adrenergic α2 inhibitory mechanism of the salivation in the APM. / O objetivo deste trabalho foi investigar a participação dos mecanismos
adrenérgicos da área preóptica medial (APM) na secreção salivar induzida pela
estimulação colinérgica (injeção de pilocarpina) periférica. Foram utilizados Ratos
Holtzman (280-320 g). Uma parte dos animais sofreu lesão na APM através da
passagem de corrente elétrica (1mA x 3x10s), para servir de controle, uma outra parte
dos animais foi submetida aos mesmos procedimentos de cirurgia cerebral, exceto
que não foi exposta à passagem de corrente elétrica (lesão fictícia). Foram utilizados
também animais que sofreram a cirurgia de implante de cânulas guia na APM para a
injeção de agonistas e antagonistas adrenérgicos. A saliva foi coletada utilizando-se
bolas de algodão previamente pesadas e inseridas na boca do animal que se
encontrava sob anestesia por quetamina (1mg/mL/kg). A salivação foi induzida por
injeção intraperitoneal (ip) de pilocarpina (1mg/mL/kg). A lesão da APM reduziu a
salivação induzida por pilocarpina ip tanto no grupo que sofreu lesão da APM 24
horas antes do experimento (lesão APM 340,7 ± 41,1 mg/7min, vs. LF 428,4 ± 31,6
mg/7min) quanto no grupo que sofreu a lesão 5 dias antes do experimento (lesão
APM 310,2 ± 35,4 mg/7min, vs. LF 494,9 ± 35,5 mg/7min). Não foi verificada
redução na salivação induzida por pilocarpina ip nos animais que sofreram lesão 15
dias antes do experimento. (lesão APM 461,6 ± 81,4 mg/7min, vs. LF 575,7 ± 34,9
mg/7min). A injeção de noradrenalina (80 nmol/0,5µL) na APM não reduziu a
salivação induzida por pilocarpina ip (NOR + Pilo 356,0 ± 36,0 mg/7min vs. Salina +
Pilo 475,0 ± 73,0 mg/7min) Essa mesma droga na dose de 160 nmol/0,5µL reduziu a
salivação induzida por pilocarpina ip (NOR + Pilo 251,0 ± 50,0 mg/7min vs. Salina +
Pilo 468,0 ± 59,0 mg/7min). O efeito inibitório da injeção na APM de noradrenalina
(160 nmol/0,5µL) na salivação induzida por pilocarpina ip não foi reduzido pela
injeção prévia do antagonista de receptores adrenégicos α2, RX-821002 na dose de 80
nmol/0,5µL (RX + NOR + Pilo 244,1 ± 29,2 mg/7 min, vs. Salina + NOR + Pilo
202,3 ± 34,8 mg/7min). Já essa mesma droga injetada na dose de 160 nmol/0,5µL,
reverteu parcialmente o efeito inibitório da injeção na APM de noradrenalina (160
nmol/0,5µL) na salivação induzida por pilocarpina ip (RX + NOR + Pilo 329,9 ± 77,8
mg/7 min, vs. Salina + NOR + Pilo 148,2 ± 30,3 mg/7min). O RX-821002 injetado na
APM na dose de 320 nmol/0,5µL, falhou em mostrar a reversão do efeito inibitório
da injeção também na APM de noradrenalina (160nmol/0,5µL) na salivação induzida
por pilocarpina ip (RX + NOR + Pilo 261,3 ± 18,9 mg/7 min, vs. Salina + NOR +
Pilo 320,4 ± 30,2 mg/7min). O antagonista de receptores adrenégicos α1, Prazosin,
não se mostrou eficaz pois o efeito inibitório da injeção na APM de noradrenalina
(160 nmol/0,5µL) na salivação induzida por pilocarpina ip não foi reduzido pela
injeção prévia do antagonista adrenégico α1, Prazosin, na dose de 160 nmol/0,5µL
(Prazosin + NOR + Pilo 223,6 ± 35,8 mg/7 min, vs. Salina + NOR + Pilo 256,0 ±
58,5 mg/7min). Os resultados mostram que a noradrenalina injetada na APM reduz a
salivação induzida pela pilocarpina ip e que esse efeito é reduzido pelo bloqueio
prévio dos receptores adrenérgicos α2 da mesma área, sugerindo a existência de um
mecanismo adrenérgico α2 inibitório da salivação na APM.
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Identificação da região da saglin que interage com o domínio-A da proteína Thrombospondin Related Anonymous Protein (TRAP) e caracterização da interação entre TRAP e saglin em Anopheles sppDegelo, Giovana Caramaschi [UNESP] 31 August 2015 (has links) (PDF)
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000868765.pdf: 2521331 bytes, checksum: 991fffa9898ac1fb4f910430954d436c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Bolsa Estágio de Pesquisa no Exterior (BEPE) / A invasão da glândula salivar pela forma de esporozoítos do gênero Plasmodium é um passo crucial para o ciclo de vida nos mosquitos do gênero Anopheles, e um passo obrigatório para que a transmissão da malária ocorra. A TRAP domínio-A, uma proteína de esporozoítos que é secretada na face anterior do parasita quando em contato com a glândula salivar, interage com a saglin, proteína majoritária da glândula. Esta interação é fundamental para que ocorra a invasão. Este processo ocorre em Anopheles gambiae infectado com Plasmodium0berghei ou Plasmodium0 falciparum. No Brasil, o Anopheles darlingi é o principal veto do parasita da malária. Aproximadamente 80% dos!casos de malária são!causados por Plasmodium vivax, anualmente e aproximadamente 20% por Plasmodium falciparum. Em um estudo prévio de nosso grupo, foi observado! 80% de infecção por P. 0falciparum nos An. darlingi coletados em Rondônia, Porto Velho. Isto pode ser provavelmente porque o An. darlingi pode se infectar facilmente com P. falciparum, mas não o transmite de uma maneira eficiente. Comparamos a sequência da saglin de An. gambiae com sequências!de An. darlingi, e SG1 e SG1B foram as sequências mais relacionadas, com 27% de similaridade. Sequenciamos isolados de P alciparum!brasileiros, e!aminoácidos chave no!processo de invasão da glândula se apresentaram conservados. Caracterizamos, pela primeira vez, a região da saglin de An. gambiae, responsável pela interação com o domínio-A da TRAP, e observamos que esta sequência nao encontra homologia com sequências de An. darlingi. Anofelinos!da espécie An.gambiae e An. darlingi, divergiram há aproximadamente 79 milhões de anos, e o processo de especiação provocou o surgimento de algumas barreiras para o desenvolvimento de espécies de Plasmodium, que habitam regiões geográficas distintas. Parasitas da espécie P. falciparum chegaram no Brasil a aproximadamente 500 anos junto... / Salivary!gland!invasion!by!sporozoites!of!Plasmodium!genus!is!a!crucial!step! to! life! cycle! in! mosquitoes! of! Anopheles! genus, and! an! obligate! step! to! malaria! transmission! occurs.! TRAP! A! domain,! a! sporozoite! protein! that! is! secreted! on! anterior! tip! of! parasite! upon! contact! with! salivary! glands,! interacts! with! saglin,! a! major!gland!protein.!This!interaction!is!fundamental!to!gland!invasion.!This!process! occurs! in! Anopheles0 gambiae! infected! with! Plasmodium0 berghei! or! Plasmodium0 falciparum.!In!Brazil,!Anopheles0darlingi!is!the!main!vector!of!malaria!parasite.!Near! 80%! of!malaria! cases! are! due! Plasmodium0vivax,! annually,! and! about! 20%! due! to! Plasmodium0falciparum.! In! previous! studies! of! our! lab,! it!was! observed! 80%! of! P.! falciparum! infection! in! An.0 darlingi! collected! in! Rondonia,! Porto! Velho.! This! probably!happens!because!An.0darlingi!can!be!easily!infected!with!P.0falciparum,!but! can!not!efficiently!transmit!them.!We!compare!An.0gambiae!saglin!sequence!with0An.0 darlingi0sequences,!and!SG1!and!SG1B!were!the!most!related!sequences,!with!27%! of!similarity.!Brazilian!P.0falciparum!isolated!were!sequenced,!and!key!amino!acids! related!to!salivary!gland!invasion,!are!preserved.!We!characterize!for!the!first!time,! An.0gambiae! saglin! region! responsible! to! interact!with! A!domain!of!TRAP,! and!we! observed!that!these!sequences!have!no!homology!with!An.0darling!ones.!An.gambiae... / FAPESP: 2011/09400-6 / Bolsa Estágio de Pesquisa no Exterior (BEPE): 2012/16103-0
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