O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da utilização da associação do butafosfan e da vitamina B12 (Catosal B12®) na qualidade do sêmen fresco e refrigerado de garanhões. Foram utilizados quatro garanhões divididos aleatoriamente em dois grupos, A e B, cada um com dois garanhões. Um dos grupos serviu como controle e o outro como grupo tratado. Como tratamento utilizaram-se duas aplicações intramusculares de 5 ml /100 kg PV de Catosal por semana. O projeto se dividiu em 4 etapas de 84 dias cada uma. Na primeira etapa o grupo A foi tratado enquanto que o grupo B serviu de controle. Na segunda etapa ambos os grupos deixaram de ser tratados. Na terceira etapa se inverteram os grupos, sendo o B tratado e o A controle. Finalmente na quarta etapa, nenhum dos grupos foi tratado. Imediatamente após a coleta o sêmen foi avaliado e diluído a uma concentração final de 25 x 10 6 de espermatozoides por mililitro. O sêmen fresco e refrigerado a 5ºC foi avaliado quanto a numero total de espermatozoides, motilidade total e progressiva, vigor, morfologia, funcionalidade (HOS test) e integridade de membrana (CFDA/PI staining). Foi realizada ANOVA e as médias pelo teste de Tukey. Não se observaram diferenças significativas entre os grupos tratados e os controles em nenhum dos parâmetros espermáticos avaliados tanto no sêmen fresco quanto no sêmen resfriado. Tampouco foram detectadas interações entre os garanhões para nenhum dos parâmetros observados. O uso prolongado de Catosal intramuscular não teve efeitos negativos e pode ser utilizado com segurança, em garanhões destinados á reprodução. O tratamento intramuscular com Catosal nas doses administradas e recomendadas pelo fabricante, durante 84 dias, não alterou a qualidade do sêmen fresco ou refrigerado por 24 horas dos garanhões jovens e férteis. / The objective of this study was to evaluate the action of butaphosphan, in combination with vitamin B12 (Catosal B12®) on the quality of fresh and cooled stallion semen. Four healthy stallions were randomly assigned to two groups A and B (n=2 per group). One acted as control group and the other one as treatment group. The treatment consisted in two intramuscular applications of 5 ml / 100 kg PV of Catosal per week following the manufacturer’s doses recommendations. The project was divided in 4 stages of 84 days. In the first stage group A was treated while group B was the control. After that both groups were not treated allowing a washout period for the treated group. Then, the groups were reversed, group B was treated and group A acted as a control. Finally in the last 84 days both groups were kept without any treatment. Semen was diluted to 25 million sperm/mL and evaluated for total sperm count, total and progressive sperm motility (light microscopy), membrane integrity (CFDA/PI staining) and membrane functionality (HOS test) at 0 and 24 hours after preservation at 5º C. Data were analyzed by one way ANOVA and means compared by the Tukey test at 5% level of significance. Experimental endpoints were analyzed to compare the values for the treated stallions in the period of time between the sixty and eighty-four days of treatment versus the same stallions without treatment. No significant differences between treatment and control groups were detected for any of the sperm parameter evaluated in this study. No interactions between stallions were detected. Results show that the use of Catosal for 84 days in the given doses does not alter fresh and cooled semen quality of the young and fertile stallions.

O objetivo deste trabalho foi comparar a utilização de diluentes comerciais à base de gema de ovo de galinha com os mesmos diluentes, nos quais se substituiu a gema de galinha pela de ovo de ema (Rhea americana). Foram utilizados Seis garanhões da raça Crioula, comprovadamente férteis e no período fora da estação de monta e utilizados seis ejaculados de cada garanhão. O sêmen foi avaliado macroscopicamente quanto ao volume, aspecto e coloração, a seguir avaliou-se a motilidade progressiva e total. Posteriormente o sêmen foi dividido em quatro alíquotas e diluído na proporção 1:1 com o diluente, Equimix (Nutricell Nutrientes Celulares) para centrifugação. Para adição do diluente de congelamento foram utilizados: diluente A (FR-5, Nutricell Nutrientes Celulares) e diluente B (Botu-crio, Biotech Botucatu S.A.) adicionados de 20 % de gema de ovo de ema, ou de 20 % de gema de ovo de galinha. As amostras foram envasadas, identificadas e submetidas a congelamento conforme o protocolo. As palhetas foram descongeladas, após um período mínimo de 7 dias e examinadas para os seguintes quesitos: motilidade total e progressiva, e integridade física e funcional da membrana plasmática do espermatozoide. Os diluentes comerciais com ou sem adição de gema de ovo de ema não apresentaram diferenças em relação à motilidade total e progressiva, porém observou-se diferença nos parâmetros quando comparados os diluentes comerciais. Houve diferença na funcionalidade da membrana apenas quando comparado diluente A e B com gema de ovo de ema. No quesito integridade de membrana não foi observado diferença estatística. Estes resultados demonstram que a gema de ovo de ema (Rhea americana) pode ser uma alternativa para produção de diluentes para congelamento de sêmen de equinos. / The aim of this study was to compare the use of two commercial extenders using chicken egg yolk with the same extenders, to which ema (Rhea americana) egg yolk was added. Six Criollo breed stallions were used during the off-breeding season period. Six collections per stallion were used. The ejaculate aspect, total and progressive motility were evaluated with a microscope; concentration was determined with a Neubauer counting chamber. After evaluation, semen samples were divided in two aliquots and diluted 1:1 in each of the centrifugation extender Equimix (Nutricell Nutrientes Celulares). For freeze that semen we used two commercial extenders: A (extender with glycerol) or B (extender with methylformamide) and was added 20% rhea egg yolk or 20% chicken egg yolk . Semen samples were examined at least 1 week after freezing, for total and progressive motility, physical and functional membrane integrity (HOST test and CFDA-PI fluorescence) (Lagares et al. 1998; Harrison & Vickers, 1990). The extenders of a given brand with or without rhea egg yolk had no significant difference according to total and progressive motility, although there was difference (p = 0,05) between extenders when different brands were compared, no matter if they were added Rhea egg yolk or not. Membrane functionality showed difference only when compared Extender A and B with Rhea egg yolk. Membrane integrity had no significant difference between all the treatments. These results show that Rhea egg yolk might be an alternative to making an equine semen extender.

O melhoramento genético ovino carece de uma maior conexão genética entre os rebanhos, o que pode solucionado pelo uso mais intensivo do sêmen congelado. Entretanto, com os níveis tecnológicos atualmente disponíveis o sêmen congelado apenas pode ser empregado com eficácia diretamente no útero, dependendo de sincronização de estros e mão de obra especializada para as inseminações via laparoscopia. Uma outra alternativa é o uso de sêmen congelado com 200 milhões de espermatozóides por dose com inseminações efetuadas cerca de doze horas após a identificação do estro, preconizado para a inseminação artificial dos ovinos na Noruega pelos próprios produtores. O presente ensaio consta de uma adaptação local deste modelo com o objetivo geral de verificar a viabilidade de uso da inseminação cervical superficial com sêmen ovino congelado numa dose de 0,25 ml contendo 200 x 106 de espermatozóides em palhetas de 0,50 ml após cio natural, empregando baixo uso de insumos e mão de obra semi-qualificada. As observações foram procedidas em duas propriedades no Rio Grande do Sul, incluindo 1419 ovelhas das raças Merino, Ideal e Texel. Os resultados obtidos indicaram que as diferenças nas taxas de não retorno entre carneiros poderá ser minimizada através da utilização de outros métodos de análise e seleção de carneiros mais férteis após os procedimentos de congelamento/descongelamento, e, adicionalmente que a constatação de uma taxa de não retorno entre 25-35% nas distintas condições investigadas, permitem inferir que os sistemas investigados podem ser utilizados para interligar geneticamente rebanhos via uso de sêmen congelado. / A sheep improvement program depends on genetic connexion among flocks, which could be done by extensive use of frozen semen. However, nowadays-available technology just recommends the employment of frozen semen directly inside the uterine ambient through laparoscopy. Alternatively, there is a model recommended for Norway producers including frozen semen with 200 millions of sperms used in cervical superficial inseminations up to twelve hours from oestrus detection. The present essay is an local adaption of this system aiming to verify the viability of the employment of frozen semen for sheep reproduction in a volume of 0,25 ml, with 200 x 106 sperms in 0,50 ml straws, after natural oestrus, using low input resource and semi-qualified artificial insemination technicians. The observations were done in the two properties located at Rio Grande do Sul, including 1419 ewes from Merino, Ideal and Texel breeds. The results obtained indicate that the differences in non return rates among rams could be minimized by the employment of other methods of ram selection before the freezing procedures, and additionally the observed 25-35% non return rates in the distinct conditions investigated, permits to infer that the tested system could be useful to connect genetically the flocks using frozen semen.

Com os processos de preservação do sêmen, os espermatozoides sofrem danos devido à indução de alterações estruturais e funcionais na membrana e, aliada a estrutura anatômica do cérvix da ovelha, repercute na redução de fertilidade após a inseminação artificial. Muitos protocolos de congelação e de refrigeração aliados a inúmeros diluentes, vêm sendo estudados, a fim de diminuir os danos causados a essas células e aumentar sua capacidade fertilizante. Para otimizar os processos de congelação e de refrigeração, os objetivos deste estudo foram determinar (1) a influência do método de congelação na motilidade, viabilidade, potencial de membrana mitocondrial e nos defeitos acrossomais do semen ovino criopreservado e (2) a influência de três diluentes comerciais na motilidade, viabilidade, potencial de membrana mitocondrial e nos defeitos acrossomais do sêmen ovino refrigerado. Doze ejaculados foram coletados, diluídos e congelados utilizando (A) uma curva manual de congelação (em vapor de nitrogênio liquido) e (B) um congelador programável (CL-8800, Cryologic Freeze Control®). Na curva A, as amostras foram refrigeradas e congeladas à 30°C/min. Na curva B, houve uma redução de temperatura de 20°C até -50°C durante 37min. Imediatamente após as curvas de criopreservação, as amostras foram submersas em nitrogênio líquido (-196ºC). Para o descongelamento, as palhetas foram submetidas à 37°C por 20seg e analisadas. Para os protocolos de refrigeração, o sêmen diluído em Botubov®, Bovimix® e TYB® foi armazenado à 5°C e à 15°C, e avaliado em 0, 24, 48 e 72h pós coleta. As análises de viabilidade e potencial de membrana mitocondrial (MMP) foram realizadas por citometria de fluxo, e a motilidade e os defeitos acrossomais foram avaliados microscopicamente. Motilidade (29%), viabilidade (18%) e MMP (26%) dos espermatozoides criopreservados com o diluente Bovimix® e a curva B foram significativamente (P<0,05) superiores do que todos os outros tratamentos. As amostras refrigeradas e diluídas com o diluente Bovimix® apresentaram resultados superiores, tanto à 5°C quanto à 15°C, para MMP (44% e 51%, respectivamente) e viabilidade (60% e 53%, respectivamente) 72h pós coleta, quando comparado com as amostras diluídas com Botubov® e TYB®. Em conclusão, os protocolos de congelação/descongelação e de refrigeração utilizados nestes experimentos, reduziram a motilidade, viabilidade, MMP e aumentaram os defeitos acrossomais quando comparados com o sêmen fresco. Os protocolos de congelação/descongelação prejudicaram mais a função espermática quando comparado com os protocolos de refrigeração. Por fim, os resultados sugerem que as amostras espermáticas diluídas com o diluente Bovimix® causou menos danos às células espermáticas do que as amostras diluídas com os diluentes Botubov® e TYB®, tanto nos protocolos de congelação, quanto nos protocolos de refrigeração. / The process of sperm preservation damages spermatozoa due to induction of structural and functional changes in the membrane, and allied to the ewe cervix anatomy, reflects the reduction in fertility after artificial insemination. Many semen preservation protocols including freezing and cooling rates coupled with different extenders have been studied in order to reduce sperm cryo-damage, increase the fertilizing capacity and increase the time of storage. To improve freezing and cooling processes, the objectives of this study were to determine (1) the influence of freezing method on sperm motility, viability, mitochondrial membrane potential and defected acrosome of cryopreserved sperm and (2) the influence of three commercial extenders on the motility, viability, mitochondrial membrane potential and defected acrosome of liquid storaged and frozen-thawed sperm. Twelve semen samples were collected from two mature rams, pooled, and diluted in Botubov®, Bovimix® and TYB®, and frozen using (A) a manual freezing method (liquid nitrogen vapor) and (B) an automated programmable freezer (CL-8800, Cryologic Freeze Control®). For curve A, semen samples were maintained at 37°C and then cooled/frozen at 30°C/min. For curve B, the temperature reduced from 20°C to -50°C during 37min. Immediately, after cryopreservation curves, samples were plunged and stored into liquid nitrogen (-196ºC). Then, the straws were thawed at 37°C for 20sec, and analyzed. For cooling studies, pooled ram semen was diluted in Botubov®, Bovimix® and TYB®, stored at 5°C and at 15°C, and evaluated at 0, 24, 48 and 72 h post collection. For viability and mitochondrial membrane potential (MMP) assessments, semen samples were stained and analyzed by flow cytometry. Motility and defected acrosome assessments were analyzed microscopically. Motility (29%), viability (18%) and MMP (26%) of spermatozoa cryopreserved in Bovimix® coupled to curve B were significantly (P<0.05) higher than all other treated groups. Semen samples diluted with Bovimix® and stored at 5°C and at 15°C yielded better MMP (44% and 51%, respectively) than the samples diluted in Botubov® and in TYB®, and also showed higher viability characteristics at 5°C and at 15°C (60% and 53%, respectively) 72h post collection. In conclusion, freezing/thawing and cooling protocols used in these experiments reduced sperm motility, viability, MMP and increased the defects of acrosomes when compared to fresh semen. Freezing/thawing protocols harmed more spermatozoa function than cooling protocols. Furthermore, our results suggest that the semen samples diluted in the extender Bovimix® caused the least cellular injury than the samples diluted in Botubov® and in TYB® on freezing and on cooling protocols.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da utilização da associação do butafosfan e da vitamina B12 (Catosal B12®) na qualidade do sêmen fresco e refrigerado de garanhões. Foram utilizados quatro garanhões divididos aleatoriamente em dois grupos, A e B, cada um com dois garanhões. Um dos grupos serviu como controle e o outro como grupo tratado. Como tratamento utilizaram-se duas aplicações intramusculares de 5 ml /100 kg PV de Catosal por semana. O projeto se dividiu em 4 etapas de 84 dias cada uma. Na primeira etapa o grupo A foi tratado enquanto que o grupo B serviu de controle. Na segunda etapa ambos os grupos deixaram de ser tratados. Na terceira etapa se inverteram os grupos, sendo o B tratado e o A controle. Finalmente na quarta etapa, nenhum dos grupos foi tratado. Imediatamente após a coleta o sêmen foi avaliado e diluído a uma concentração final de 25 x 10 6 de espermatozoides por mililitro. O sêmen fresco e refrigerado a 5ºC foi avaliado quanto a numero total de espermatozoides, motilidade total e progressiva, vigor, morfologia, funcionalidade (HOS test) e integridade de membrana (CFDA/PI staining). Foi realizada ANOVA e as médias pelo teste de Tukey. Não se observaram diferenças significativas entre os grupos tratados e os controles em nenhum dos parâmetros espermáticos avaliados tanto no sêmen fresco quanto no sêmen resfriado. Tampouco foram detectadas interações entre os garanhões para nenhum dos parâmetros observados. O uso prolongado de Catosal intramuscular não teve efeitos negativos e pode ser utilizado com segurança, em garanhões destinados á reprodução. O tratamento intramuscular com Catosal nas doses administradas e recomendadas pelo fabricante, durante 84 dias, não alterou a qualidade do sêmen fresco ou refrigerado por 24 horas dos garanhões jovens e férteis. / The objective of this study was to evaluate the action of butaphosphan, in combination with vitamin B12 (Catosal B12®) on the quality of fresh and cooled stallion semen. Four healthy stallions were randomly assigned to two groups A and B (n=2 per group). One acted as control group and the other one as treatment group. The treatment consisted in two intramuscular applications of 5 ml / 100 kg PV of Catosal per week following the manufacturer’s doses recommendations. The project was divided in 4 stages of 84 days. In the first stage group A was treated while group B was the control. After that both groups were not treated allowing a washout period for the treated group. Then, the groups were reversed, group B was treated and group A acted as a control. Finally in the last 84 days both groups were kept without any treatment. Semen was diluted to 25 million sperm/mL and evaluated for total sperm count, total and progressive sperm motility (light microscopy), membrane integrity (CFDA/PI staining) and membrane functionality (HOS test) at 0 and 24 hours after preservation at 5º C. Data were analyzed by one way ANOVA and means compared by the Tukey test at 5% level of significance. Experimental endpoints were analyzed to compare the values for the treated stallions in the period of time between the sixty and eighty-four days of treatment versus the same stallions without treatment. No significant differences between treatment and control groups were detected for any of the sperm parameter evaluated in this study. No interactions between stallions were detected. Results show that the use of Catosal for 84 days in the given doses does not alter fresh and cooled semen quality of the young and fertile stallions.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:43Z : No. of bitstreams: 1 000831031.pdf: 2511455 bytes, checksum: 5ffd0294e34ec2c25575109974ce6b2c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) é considerado vulnerável à extinção e dados científicos em relação à andrologia e características seminais são escassos. Colheu-se sêmen de oito animais com o intuito de estabeler parâmetros seminais de tamanduás-bandeira de vida livre no que se refere a volume, odor, coloração, motilidade, vigor, concentração e morfologia espermática, e investigar o tempo em que o sêmen mantém-se com motilidade e vigor sob refrigeração à 5ºC. A motilidade e vigor espermáticos foram avaliados de forma subjetiva por microscopia óptica convencional, e a análise morfológica dos espermatozoides foi realizada por microscopia de luz, microscopia de contraste e interferência diferencial e microscopia eletrônica de transmissão. O ejaculado foi caracterizado com duas frações distintas (fração esbranquiçada, leitosa e rica em células espermáticas, e fração gel, incolor e viscosa com ausência de espermatozoides) e volume médio 0,75 ml (±0,13). Os valores médios dos parâmetros (± erro padrão) encontrados nas amostras seminais à fresco foram motilidade 75% (±2,98), vigor 3,21(±0,29), concentração 108,5 x106/ml (±13,46), índice de integridade de membrana plasmática de 71% (±4,01), anormalidades espermáticas em coloração karras-modificado 35,5% (±3,38) e 48,37% (±6,83) em microscopia de contraste de interferência diferencial. Quando submetido a refrigeração o sêmen apresentou motilidade e vigor até no máximo 24 horas, com valores decrescentes em ambos os parâmetros com o decorrer do tempo / The giant anteater (Myrmecophaga tridactyla) is considered vulnerable to extinction and scientific data regarding andrology and seminal characteristics are scarce. The semen were collected from eight animals with the intention of seminal parameters to establish anteaters free life as regards the volume, odor, color, motility, vigor, concentration and morphology, and to investigate the time the semen remains with motility and vigor under refrigeration at a temperature of 5 ° C. The sperm motility and vigor were subjectively assessed by light microscopy and morphological analysis of sperm were performed by conventional optical microscopy, differential interference contrast microscopy and transmission electron microscopy. The ejaculate was characterized with two distinct fractions (fraction whitish, milky and rich in sperm cells, and gel fraction colorless and viscous with absence of sperm) and average volume 0.75 ml (± 0.13). The mean values of the parameters (± standard error) found in the fresh semen samples motility were 75% (± 2.98), vigor 3.21 (± 0.29), concentration x106/ml 108.5 (± 13.46), index of plasma membrane integrity of 71% (± 4.01) and sperm abnormalities in karras-modified staining 35.5% (± 3.38) and 48.37% (± 6.83) in contrast microscopy differential interference. When subjected to cooled semen presented motility and vigor up to 24 hours, with decreasing values in both parameters over time

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-29Bitstream added on 2014-11-10T11:58:47Z : No. of bitstreams: 1 000790225.pdf: 849889 bytes, checksum: ea42408a16377fb6d95fbec0bcbb46cc (MD5) / O sêmen ovino congelado e descongelado sofre alterações morfofuncionais que impossibilitam ou diminuem a eficiência na fecundação. Os métodos de seleção espermática visam melhorar a qualidade e viabilidade do material fecundante. Quatro métodos de seleção espermática utilizando duas soluções de sílica coloidal revestida por silano (silica coloidal-silano) ou por polivinilpirrolidona (silica coloidal-PVP), variando o volume de solução coloidal. Foram testados a cinética espermática no CASA e a recuperação espermática. Os protocolos utilizando silica coloidal-silano apresentaram maior motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP) e porcentagem de espermatozoides rápidos (%RAP) quando comparado aos métodos utilizando a silica coloidal-PVP e às amostras antes da seleção espermática. A silica coloidal-PVP teve maior recuperação espermática quando comparado à silica coloidal-silano. Somente o método utilizando 4mL de silica coloidal-PVP não foi eficiente na seleção de amostras com melhor qualidade quando comparado às amostras analisadas antes da seleção espermática. Os métodos utilizando menores volumes de solução coloidal não diferiram dos métodos de maior volume, sendo a silica coloidal-silano com 1 mL o método que apresentou os melhores resultados. Como conclusão os resultados encontrados no trabalho apontaram a maior eficiência da silica coloidal-silano em selecionar sêmen ovino congelado e descongelado quando comparado à seleção em silica coloidal-PVP. O método utilizando 1mL de silica coloidal-silano foi igualmente eficiente ao método com maior volume, sendo uma alternativa para processar amostras com baixa concentração espermática / Frozen and thawed ovine semen undergo morphofunctional changes that prevent or decrease the efficiency of fertilization. Sperm selection methods have beneficial effects on the selected sperm, improving sperm quality and viability. Four methods of sperm selection were tested using two colloidal silica solutions coated with silane (silica colloid- silane) ou povinilpirrolidone (silica colloid-PVP), varying the volume of colloidal solution. Furthermore, analyses of sperm kinetics in CASA and sperm recovery were carried out. The protocols using silica colloid-silane resulted in greater MT, MP, and %RAP when compared to the methods using silica colloid-PVP and the semen before selection. Silica colloid-PVP had higher sperm recovery when compared to silica colloid-silane. Only the method using 4mL of silica colloid-PVP was not efficient in the selection of best quality samples when compared to the semen before selection. The methods using lower volumes of colloidal solutions did not differ from the methods with higher volumes, being the method with 1mL of silica collois-silane better than the 4mL method. In conclusion the results of the study indicate the superiority of silica colloid-silane in selecting frozen and thawed ovine semen when compared to silica colloid-PVP. The method using 1mL of silica colloid-silane was equally efficient to the standard method and has lower costs, being an interesting alternative to process samples with low sperm concentration

O melhoramento genético ovino carece de uma maior conexão genética entre os rebanhos, o que pode solucionado pelo uso mais intensivo do sêmen congelado. Entretanto, com os níveis tecnológicos atualmente disponíveis o sêmen congelado apenas pode ser empregado com eficácia diretamente no útero, dependendo de sincronização de estros e mão de obra especializada para as inseminações via laparoscopia. Uma outra alternativa é o uso de sêmen congelado com 200 milhões de espermatozóides por dose com inseminações efetuadas cerca de doze horas após a identificação do estro, preconizado para a inseminação artificial dos ovinos na Noruega pelos próprios produtores. O presente ensaio consta de uma adaptação local deste modelo com o objetivo geral de verificar a viabilidade de uso da inseminação cervical superficial com sêmen ovino congelado numa dose de 0,25 ml contendo 200 x 106 de espermatozóides em palhetas de 0,50 ml após cio natural, empregando baixo uso de insumos e mão de obra semi-qualificada. As observações foram procedidas em duas propriedades no Rio Grande do Sul, incluindo 1419 ovelhas das raças Merino, Ideal e Texel. Os resultados obtidos indicaram que as diferenças nas taxas de não retorno entre carneiros poderá ser minimizada através da utilização de outros métodos de análise e seleção de carneiros mais férteis após os procedimentos de congelamento/descongelamento, e, adicionalmente que a constatação de uma taxa de não retorno entre 25-35% nas distintas condições investigadas, permitem inferir que os sistemas investigados podem ser utilizados para interligar geneticamente rebanhos via uso de sêmen congelado. / A sheep improvement program depends on genetic connexion among flocks, which could be done by extensive use of frozen semen. However, nowadays-available technology just recommends the employment of frozen semen directly inside the uterine ambient through laparoscopy. Alternatively, there is a model recommended for Norway producers including frozen semen with 200 millions of sperms used in cervical superficial inseminations up to twelve hours from oestrus detection. The present essay is an local adaption of this system aiming to verify the viability of the employment of frozen semen for sheep reproduction in a volume of 0,25 ml, with 200 x 106 sperms in 0,50 ml straws, after natural oestrus, using low input resource and semi-qualified artificial insemination technicians. The observations were done in the two properties located at Rio Grande do Sul, including 1419 ewes from Merino, Ideal and Texel breeds. The results obtained indicate that the differences in non return rates among rams could be minimized by the employment of other methods of ram selection before the freezing procedures, and additionally the observed 25-35% non return rates in the distinct conditions investigated, permits to infer that the tested system could be useful to connect genetically the flocks using frozen semen.

Resumo: Com a crescente disponibilidade das biotécnicas de reprodução animal, o comércio dos produtos envolvidos com essas práticas também está em expansão, oferecendo a possibilidade de melhoria dos índices zootécnicos às produções de bovinos. Porém deve-se levar em consideração que há riscos sanitários em práticas como a inseminação artificial caso não se realize o controle do material biológico utilizado. Dentre os agentes infecciosos que podem estar presentes no sêmen e passíveis de serem transmitidos por esse estão a leptospirose e a brucelose, enfermidades responsáveis por grandes perdas reprodutivas e econômicas na bovinocultura mundial. Este projeto teve como objetivos detectar molecularmente esses patógenos em amostras de sêmen bovino provenientes de centrais de comercialização brasileiras, utilizando um kit comercial para extração de DNA ("RTP Bacteria DNA Mini Kit" (Invitek®), aperfeiçoá-lo para a extração de DNA bacteriano a partir de sêmen e avaliar sua aplicabilidade à rotina laboratorial. O DNA bacteriano foi extraído e quantificado por eletroforese em gel de agarose. Pretendeu-se também realizar reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando os "primers" B4 e B5 para amplificação do DNA de Brucella spp. e os "primers" Lep 1 e Lep 2 para Leptospira spp. O kit de extração foi otimizado com sucesso, e todas as 96 amostras examinadas foram negativas para qualquer DNA bacteriano. Os resultados podem ser úteis para estabelecer alternativas de controle sanitário em touros doadores de sêmen e permitir o fornecimento de material genético livre de patógenos, aumentando o "status" sanitário da reprodução de bovinos no Brasil / Abstract: With the increasing disponibility of animal reproduction biotechniques, trading of products involved with these activities is also in expansion offering improving possibilities in zootecnic indexes of bovine herds. However, considerations should be taken about sanitary risks in practices like artificial insemination if any control is applied to this biological material. Among infectious agents that could be present and transmitted by semen are leptospirosis and brucellosis, diseases that are responsible for numerous reproductive and economic losses in world's cattle culture. The goals of this project were to molecularly detect these pathogens in bovine semen samples from Brazilian artificial insemination centers using a commercial kit for DNA extraction (RTP Bacteria DNA Mini Kit (Invitek®), to improve it for extracting bacterial DNA from semen and to analyze its applicability in laboratory routine. Bacterial DNA was extracted and quantified by agarose gel electrophoresis. We also intended to realize polymerase chain reaction (PCR) using primers B4 and B5 for amplification of Brucella spp. DNA and primers Lep 1 e Lep 2 for Leptospira spp. DNA. The extraction kit was successfully optimized and all of 96 examined samples were negative for any bacterial DNA. Results could be useful to establish alternative measures of sanitary control in semen donors and to allow the supplying of genetic material free of pathogens, increasing sanitary status of bovine reproduction in Brazil / Orientador: Raul José Silva Gírio / Coorientadora: Fernanda Senter Magajevski / Banca: Luis Antonio Mathias / Banca: Vera Cláudia Lorenzetti Magalhães Cursi / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-22Bitstream added on 2014-06-13T20:59:31Z : No. of bitstreams: 1 000755551.pdf: 414659 bytes, checksum: da80b05f755988e6a99a65d40c8a90bb (MD5) / A inseminação artificial com sêmen refrigerado é uma biotecnia imprescindível para os programas reprodutivos de equinos. Entretanto, durante a refrigeração o espermatozoide pode sofrer danos irreversíveis que irão prejudicar os índices de fertilidade. A incorporação de colesterol ligado a ciclodextrina (CLC) é uma estratégia de aumentar a resistência espermática em baixas temperaturas. No entanto, estudos anteriores tem sugerido que o colesterol presente em altos níveis na membrana plasmática pode interferir no processo de capacitação e consequentemente de fertilização. Para isso, foi realizado um trabalho dividido em cinco experimentos. No experimento 1 o objetivo foi determinar a concentração mais adequada de CLC para a utilização na refrigeração de espermatozoides equinos. No experimento 2 o objetivo foi comparar as temperaturas de 15º C e 5º C para refrigeração de espermatozoides equinos tratados com CLC. No experimento 3 o objetivo foi verificar a influência da adição de CLC sobre a qualidade do sêmen refrigerado de garanhões bad cooler e good cooler. No experimento 4 o objetivo foi avaliar a influência da adição de CLC sobre a ocorrência de reação acrossomal. O objetivo do experimento 5 foi avaliar a fertilidade de espermatozoides refrigerados de garanhões bad cooler (BC) e good cooler (GC) tratados com CLC. No experimento 1 foram utilizados dois ejaculados de 24 garanhões. Após a diluição com Botu-Sêmen® na concentração de 50 x 106 espermatozoides/mL, cada ejaculado foi dividido em quatro grupos: controle (C) e tratado com 1 mg (CLC-1), 1,5 mg (CLC-1,5) e 2 mg (CLC-2) de CLC/120 x 106 de espermatozoides e refrigerado por 48 horas a 5º C. Para o experimento 2 foram utilizados dois ejaculados de 12 garanhões. Cada ejaculado foi diluído conforme o experimento 1, dividido em quatro grupos: C e CLC-1,5 refrigerados a 15º C e a 5 º C por 24 horas. Para o experimento 3 foram utilizados... / Artificial insemination with cooled semen is an invaluable biotechnique for equine reproductive programs. However, the cooling process may cause irreversible damage to spermatozoa, thus reducing fertility rates. The incorporation of cholesterol-loaded cyclodextrin (CLC) to the plasmatic membrane is an strategy to increase sperm resistance to low temperatures. However, previous studies have suggested that high levels of cholesterol may interfere with capacitation process and, consequently, with fertilization. To this end, a study was performed in five experiments. In experiment 1, the aim was to determine the best CLC concentration for the purpose of cooling equine spermatozoa. In experiment 2, the aim was to compare the temperatures of 15 ºC and 5 ºC for cooling equine semen treated with CLC. In experiment 3, the aim was to assess the influence of CLC addition for cooled semen quality of bad cooler (BC) and good cooler (GC) stallions. In experiment 4, the aim was to evaluate the influence of CLC addition for the occurrence of acrosome reaction. The aim of experiment 5 was to evaluate the fertility of cooled CCL-treated semen from BC and GC stallions. In experiment 1, two ejaculates from 24 stallions were used. After dilution with Botu-Sêmen® to a concentration of 50 x 106 cells/mL, each ejaculate was divided into four groups: control (C) and treated with 1 mg (CLC-1), 1.5 mg (CLC-1.5) and 2 mg (CLC-2) and 2 mg (CLC-2) of CLC/120 x 106 cells, and cooled for 48 hours at 5 ºC. For experiment 2, two ejaculates from 12 stallions were used. Each ejaculated, after dilution according to experiment 1, was divided into 4 groups: C and CLC-1.5 cooled at 15 ºC and 5 ºC for 24 hours. For experiment 3, two ejaculates from nine GC and nine BC stallions were used. The ejaculates were diluted according to the previous experiments and divided into two groups: C and CLC-1.5 cooled at 5 ºC for 48 hours. In experiments 1, 2 and 3, sperm ...