Orientador : Profª. Drª. Célia Regina Cavichiolo Franco / Coorientador : Prof. Dr. Edvaldo da Silva Trindade / Autor não autorizou a divulgação de impresso e digital / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 29/02/2012 / Inclui referências : f. 105-109 / Área de concentração: Biologia celular e molecular / Resumo: Sete milhões e seiscentos mil pessoas no mundo morreram de câncer em 2008. Câncer é uma doença que apresenta controle anormal da divisão celular, resultando em crescimentos invasivos, ou formação de tumores, que podem se difundir por todo o corpo. Desde tempos antigos há uma busca por compostos naturais para a cura de doenças, sendo associado à medicina popular, assim pesquisas científicas têm sido intensificadas por todo o mundo. Drogas extraídas de diferentes fontes naturais podem ser utilizadas na quimioterapia para o câncer e no combate a outras doenças. O presente trabalho teve por objetivo avaliar o potencial biológico de diferentes polissacarídeos, obtidos de cogumelos dos gêneros Pleurotus, Lentinus e Agaricus, em células de melanoma murino, linhagem B16F10. Quatro diferentes polissacarídeos foram empregados nesta pesquisa, denominados de P1, P2, P5 e P6. Após os experimentos realizados, os resultados demonstram que o P1 não apresenta citotoxicidade, não altera a proliferação celular, aumenta o espraiamento celular e reduz a capacidade invasiva das células. Já o polissacarídeo P2, também reduz a capacidade invasiva das células e aumentou a capacidade de adesão celular em laminina. O P6 modificou a morfologia celular visualizada em microscopia eletrônica de varredura. Já o P5 foi o menos promissor, pois modificou apenas o espraiamento celular. Evidências na literatura atual demonstram corroborar com nossos resultados, visto que muitos polissacarídeos apresentam as mesmas alterações em células tumorais, sendo promissores também em análises in vivo. Assim podemos concluir que os polissacarídeos P1, P2 e P6 serão possíveis agentes antitumorais. Estes resultados alcançados com os respectivos polissacarídeos, de forma promissora, nos dão motivação para seguir com estudos posteriores, que possam comprovar a eficiência desses compostos em modelos tumorigênicos in vivo. Palavras-chave: Melanoma. Polissacarídeos. Cogumelos. Pleurotus. Lentinus. Agaricus. B16F10. / Abstract: Seven and six hundred thousand million people worldwide died from cancer in 2008. Cancer is a disease that shows abnormal control of cell division, resulting in invasive growth or tumor formation which can spread throughout the body. Since ancient times there is a search for natural compounds for curing diseases being associated to popular medicine as well scientific research have intensified worldwide. Drugs extracted from different natural sources can be used in chemotherapy for cancer and to combat other diseases. This study aimed to assess the biological potential of different polysaccharides obtained from mushrooms of the genera Pleurotus, Lentinus and Agaricus; in murine melanoma cells, B16F10 line. Four different polysaccharides were used in this study, called P1, P2, P5 and P6. After the experiments, the results show that P1 non-cytotoxic, does not alter cell proliferation, increased cell spreading and reduces the invasiveness of cells. Since P2 polysaccharide also reduces the invasiveness of the cells and increase cell adhesiveness laminin. The P6 modified cell morphology displayed in scanning electron microscopy. But the P5 was the least promising because only modified cell spreading. Evidence in the literature demonstrates corroborate our results, as many polysaccharides have the same changes in tumor a cell, also promising and in vivo analyzes. Thus we conclude that the polysaccharides P1, P2 and P6 are possible antitumor agents. These results achieved with the respective polysaccharides, promisingly, give us motivation to continue with further studies that can demonstrate the effectiveness of these compounds in vivo tumorigenic models. Keywords: Melanoma. Polysaccharides. Mushrooms. Pleurotus. Lentinus. Agaricus. B16F10.

Orientador: Augusto Ferreira da Eira / Resumo: Foram estudadas as interações entre quatro fórmulas de substratos e as linhagens LE 96/17, LE 98/51, LE 98/53 e LE 98/56 na cinética de crescimento micelial e produção do cogumelo Shiitake (Lentinula edodes (Berk.) Pegler), em cultivo axênico, no primeiro fluxo. As linhagens utilizadas foram provenientes da Micoteca do Módulo de Cogumelos da Faculdade de Ciências Agronômicas - UNESP - Campus de Botucatu. Os isolados foram obtidos por via vegetativa, pela técnica de fragmentos de basidiocarpos e repicados em meio de cultura de serragem-dextrose-ágar. No estudo da cinética de crescimento miceliano, avaliaram-se os parâmetros crescimento em área (mm2) e vigor, em meio de cultura, através de monitoramento digital. O crescimento das linhagens de L. edodes foi fotografado diariamente, até a colonização total do meio de cultura, em placa de Petri. As fotos digitais, foram analisadas pelo programa UTHSCSA ImageTool, versão 2.0, 1997, desenvolvido pela University of Texas Health Science Center, San Antonio, Texas. Para avaliar a produção do L. edodes, foram utilizados os parâmetros massa fresca dos cogumelos, número total de cogumelos, massa fresca média do cogumelo e Eficiência Biológica (EB=(g cogumelo fresco g-1substrato seco)x100). Para tanto, foram utilizados sacos de polietileno de alta densidade (PEAD), com 20cm de largura por 40 cm de comprimento, nos quais foram ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: It was studied the interaction among four substratum formula and the strains LE 96/17, LE 98/51, LE 98/53 and LE 98/56 on mycelium growth kinetics and shiitake mushroom yield at the first flush of the axenic sawdust culture. The strains were from the mycological collection of the Faculdade de Ciências Agronômicas, Unesp de Botucatu. Mycelium fragments were transferred to a Petri dish with Sawdust-Dextrose-Agar medium. Mycelium growth kinetics was evaluated by measuring mycelium growth area and vigor on Petri dishes with digital camera and the program UTHSCSA ImageTool, version 2.0, 1997, developed by the University of Texas Health Science Center, San Antonio, Texas. The mushroom yield was evaluated by the Biological Efficiency (BE), total fresh mass and number of mushrooms. The fungus was cultivated in plastic bags of 20 x 40 cm and with 1200g ±10g of substratum. After autoclaved at 121ºC for 4 h the mycelium was inoculated and the bags incubated at 24ºC for 123 days. Primordia were induced at temperature of 8ºC for 72 h in a cold room and after that soaked in cold water at the same temperature for 48 h. It was observed that the best statistical model of curve that adjusts for mycelium growth kinetics was the Gompertz function. The vigor evaluated by mycelium color was in the maximum value between the 4th and 5th day of incubation. The highest yield of mushroom was from substrate with smaller than higher quantity of brain (wheat and rice bran). The higher quantity of bran inhibited the yield. Strains LE 96/17 e 98/56 had the highest yield (174,2 and 145,2 g kg-1, respectively) and the highest BE (40,3 and 33,3%, respectively) on 14 days of culture, the highest value found in this researched literature. / Doutor

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-13T17:40:40Z No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 102581 bytes, checksum: 6314ebfd93d2770787b8eabe59f04a49 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-13T17:40:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 resumo.pdf: 102581 bytes, checksum: 6314ebfd93d2770787b8eabe59f04a49 (MD5) Previous issue date: 2003-12-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Lentinula edodes (Berk.) Pegler é um fungo incluído entre os causadores da podridão branca, que pode ser cultivado em toras de madeira maciça de eucalipto ou toras artificiais, formadas por casca de eucalipto, um resíduo ligninocelulósico abundante em indústrias de papel e celulose no Brasil. Este trabalho teve como objetivo determinar o perfil das enzimas ligninocelulolíticas de três isolados de L. edodes, UFV52, UFV52 e UFV77, crescidos em substrato a base de casca de eucalipto e, também, investigar os efeito da adição ao meio de crescimento desse fungo de compostos que aumentam a atividade ou síntese de lacase, visando a melhoria da eficiência no processo de degradação da lignina e celulose presentes no substrato. O monitoramento semanal das atividades durante 75 dias de crescimento em substrato constituído por 80% de casca de eucalipto e 20% de farelo de arroz, adicionado de CaCO 3 e CaSO 4 , demonstrou a existência da síntese de lacase, manganês peroxidase, celulase e lanase, mas não de lignina peroxidase. O isolado UFV52 foi o que apresentou maior atividade de lacase, e para ele determinou- vse que as concentrações de 2,6 mM de N, como NH 4 NO 3 e de 250 μM de Cu, como CuSO 4 , em meio de cultura líquido foram as que propiciaram a maior atividade desta enzima. A atividade de lacase foi três vezes maior do que a do tratamento controle em micélio crescido em meio de cultura adicionado de tartarato de amônia (55 μM), sem contudo aumentar a concentração de proteína solúvel. A vanilina (1 mM) e o ácido 3 hidróxi benzóico (1 mM) aumentaram a degradação da lignina e celulose, sem, contudo, modificar a atividade de lacase. O padrão eletroforético da lacase demostrou que o efeito do tartarato não foi o de indução de novas isoformas, mas sim o de aumentar a atividade da enzima presente. O aumento na atividade da lacase e na eficiência de utilização do substrato pelo L. edodes UFV52 não redundou em indução de corpos de frutificação do fungo. Assim, para a produção do fungo comestível há necessidade de se selecionar isolados de L. edodes adaptados ao cultivo em toras artificiais a base de casca de eucalipto. / Lentinula edodes (Berk.) Pegler belongs to the white rot fungi group, and can be cultivated in wood logs of eucalypt or artificial logs, made with eucalypt bark, a lignocellulosic residue abundant in the paper and pulp industry in Brazil. This study aimed to determine the lignocellulolytic enzymatic profile of three L. edodes isolates UFV52, UFV52 and UFV77 cultivated in eucalypt bark - based substrate and also to investigate the effects of the addition of compounds to the culture medium in increasing the activity or synthesis of laccase, in order to increase the efficiency in the lignin and cellulose degradation process. The enzymatic assays were performed weekly for 75 days in substrate made from 80% eucalypt bark and 20% rice bran, with the addition of CaCO 3 and CaSO 4 , and laccase, manganese peroxidase, xylanase and cellulase, but not lignin peroxidase, were determined. The isolate UFV52 presented the highest laccase activity, and, in liquid medium, the N (NH 4 NO 3 ) and Cu (CuSO 4 ) concentrations that provided the highest laccase activity were 2.6 mM and 250 μM, respectively. Laccase activity were three time higher in medium receiving xammonium tartrate (55 μM), but no increase in soluble protein level were observed. Vanillin (1 mM) and 3 hidroxy benzoic acid (1 mM) increased lignin and cellulose degradation without modifying laccase activity. The electrophoretic pattern of laccase demonstrated that ammonium tartrate did not induce new isoforms, but enhanced the activity of the constitutive form. The increase in laccase activity and in the efficiency of utilization of the substrate by L. edodes UFV52 did not induce mushrooms formation. In this way, for the mushroom production in eucalypt bark-based artificial logs there must be selected adapted L. edodes isolates.

Orientadora: Dejanira de Franceschi de Angelis / Banca: Daiane Cristina Sass / Banca: Octavio Antonio Valsechi / Resumo: O constante crescimento na produção de etanol acarreta em aumento da produção de bagaço de cana-de-açúcar, surgindo necessidade de desenvolver novas formas de aproveitamento deste produto. Sendo assim, o acréscimo de valor agregado no bagaço afim de que seja utilizado em ração animal pode ser uma alternativa economicamente interessante. Este trabalho utilizou Lentinula edodes (shiitake) e o Pleurotus ostreatus (shimeji) na biotranformação e enriquecimento do bagaço de cana-de-açúcar termo hidrolisado, considerando-se tempo e aditivos nutricionais, para obtenção de biomassa com melhores condições nutricionais e proteicas. Na primeira etapa do projeto foram testadas diversas combinações de meio a fim de se encontrar aquele mais adequado para o desenvolvimento fungico. Concluiu-se que o 1% carbonato de cálcio e 1% levedura seca são essenciais para o desenvolvimento dos microrganismos neste substrato. Com relação à quantidade de inóculo, para P. ostreatus assumiu-se 3% como ideal e para L. edodes, assumiu-se 8% como a quantidade ideal. Foram quantificados proteína bruta, lipídios, valor nutricional relativo (VNR) pelo método com Enterococcus zymogenes, toxicidade aguda realizado com Daphinia similis, DQO e DBO das amostras. Quanto a quantidade de proteína, houve um aumento significativo quando comparado ao bagaço original passando de aproximadamente 1% para 3,43% e 3,20% para L.edodes e P.ostreatus respectivamente com 45 dias de incubação as 25+/- 20C. Os valores de lipídeos foram baixos mesmo após a colonização. O valor nutricional relativo do bagaço de cana termo hidrolisado antes do tratamento microbiológico apresentava valores de 23,07% passando para 84,61% para L.edodes e para 73,07% para P.ostreatus. A toxicidade aguda apresentou uma diminuição após o desenvolvimento fúngico sendo que L.edodes apresentou-se ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The constantly growing in ethanol production will lead to consequent increased production of sugarcane bagasse emerging need to develop new ways to use this product, Therefore the increase in value in order that residue to be used as forage for animal feed can be an economically interesting alternative. This paper used Lentinula edodes (shiitake) and Pleurotus ostreatus (shimeji) in biotranformação and enrichment of sugarcane bagasse term hydrolyzate, considering time and nutritional additives, to obtain biomass with better nutritional and protein conditions. In the first stage of the project were tested several combinations of substrate in order to find the most suitable for fungal development. It was concluded that 1% calcium carbonate and 1% dried yeast are essential for the development of microorganisms in the substrate. About the amount of inoculum, P. ostreatus assumed as an ideal 3% and L. edodes, 8% was assumed as the ideal amount. The following were quantified crude protein, lipids, nutritional value relative (NVR) by method with Enterococcus zymogenes, acute toxicity performed with Daphinia similis,, COD and BOD of amostras.susbstrato As the amount of protein, there was significant increase when compared to the original bagasse which has approximately 1% to 3.43% and 3.20% for L.edodes and P.ostreatus respectively 45 days incubaçõa the 25 +/- 20C . Lipid values were low even after colonization. The nutritional value of the term hydrolyzate sugarcane bagasse before the microbiological treatment had values of 23.07% and grows to 84.61 to 73.07 for L.edodes and to P.ostreat. The acute toxicity is decreasing after fungal growth and L.edodes presented more efficient in the detoxification. The results of COD and BOD also point to an improvement in the biodegradation of solubilized sugarcane bagasse for the two species of fungi when compared to the original substrate / Mestre

CAPES / O cultivo de cogumelos comestíveis vem ganhando espaço no meio agrícola em todo o país, contribuindo assim com uma nova opção de produto no mercado de alimentos. A atividade está ligada a manejos culturais e artesanais com princípios ambientalmente sustentáveis e gera renda para a pequena propriedade rural. Neste contexto, o presente estudo avaliou as potencialidades do cultivo artesanal do Shiitake como uma atividade para agroecossistemas sustentáveis. Para tanto, foi realizado um resgate do histórico da implantação e evolução do cultivo artesanal do cogumelo Shiitake em propriedades consideradas modelos, localizadas nos municípios de Pato Branco, Guarapuava e São José dos Pinhais no estado do Paraná e Frei Rogério em Santa Catarina. Na sequência, uma análise comparativa entre os sistemas de cultivo das propriedades e o aproveitamento de áreas de fragmentos florestais ou reflorestamento foi conduzido. Foram avaliados também aspectos de produção, renda da atividade e pluralismo do estabelecimento rural, bem como, efetuada uma caracterização dos parâmetros de qualidade nutricional dos cogumelos produzidos nas diferentes propriedades. Os resultados obtidos revelam potencialidades econômicas na produção do Shiitake. A atividade também possui potenciais para o aproveitamento sustentável de áreas de mata nativa e de reflorestamento, contribuindo para a otimização do uso do espaço físico na pequena propriedade. A cultura artesanal do Shiitake interage de forma sistêmica, aproveitando à madeira oriunda do próprio estabelecimento rural, evitando a contaminação através de agroquímicos no produto e no ambiente e auxiliando na renovação da biomassa do agroecossistema. Por fim, ficou constada a elevada qualidade nutricional dos cogumelos produzidos nos diferentes substratos utilizados nas propriedades estudadas. As amostras de Shiitake apresentaram elevados conteúdos de proteínas, fibras, minerais e baixos conteúdos de gordura. / Edible mushroom cultivation has been gaining ground in the agricultural environment throughout the country, creating a new product option in the food market. This activity is linked to cultural and artisanal management with environmentally sustainable principles and generates income for small farms. In this context, the present study evaluated the potential for artisanal cultivation of Shiitake as an activity for sustainable agroecosystems. Initially, the historic of implementation and evolution of artisanal cultivation of Shiitake mushroom on properties considered models in Pato Branco, Guarapuava and São José dos Pinhais (Paraná) and Frei Rogerio, (Santa Catarina) were carried out. Consequently, a comparative analysis between the cultivation systems of these properties and the use of small wooded areas and reforested areas was conducted. Aspects of production, income and pluralism of the farms, were also performed. At the end, the nutritional quality parameters of mushrooms produced in different properties were evaluated. The results show economic potential in Shiitake production. The activity also has potential for the sustainable exploitation of native forest and reforested areas, contributing to the optimal use of physical space small properties. In artisanal cultivation of Shiitake there is a systemic interaction verified by the use of wood from the same farm, assisting in the renewal of biomass of the agroecosystem. Finally, it was found that mushrooms produced on different substrates used in the studied properties have high nutritional quality. Shiitake samples exhibited high contents of protein, fiber, minerals and low fat content.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:44Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-05-15Bitstream added on 2014-06-13T21:00:07Z : No. of bitstreams: 1 andrade_mcn_me_ilha.pdf: 261991 bytes, checksum: 006fec132b03beb5f46f5030a336fa9b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A ocorrência de fungos contaminantes e competidores é comum durante o cultivo de shiitake em toros. No Brasil, poucos são os trabalhos que identificam e analisam os efeitos destes microrganismos na produção de shiitake. No entanto, sabe-se que a incidência destes fungos em grandes proporções pode levar à improdutividade dos toros. Portanto, o presente trabalho teve como objetivo testar o efeito da cal hidratada e do fungicida benomyl no controle de fungos contaminantes e sua resposta na produção de shiitake em toros. Para tanto, testou-se anteriormente in vitro o efeito do benomyl nas concentrações 0,5; 1,0; 2,0; 4,0; 8,0 e 16,0 mg/mL no crescimento micelial das linhagens de shiitake JAB-L; JAB-K; LE-96/17; LE-95/01 e LE-96/22, de modo a selecionar a linhagem mais tolerante as concentrações de benomyl propostas, comparando com o crescimento das mesmas sem a presença deste fungicida (testemunha). O delineamento deste experimento foi inteiramente casualizado em fatorial 5X7, tendo no total trinta e cinco tratamentos, cada qual com três repetições, sendo cada repetição correspondente a uma placa de Petri. Observou-se que a única linhagem de shiitake a não sofrer qualquer efeito do benomyl nas concentrações propostas foi a LE-96/17, sendo a escolhida para ser utilizada no experimento em toros, a qual foi submetida a maior concentração de benomyl (16,0 mg/mL). O delineamento do experimento em toros foi inteiramente casualizado, com três tratamentos: testemunha; cal (8 kg de cal/ 60 litros de água) aplicados nos toros de produção logo após a inoculação e após cada choque de indução; e benomyl (16,0 mg/mL) aplicados quinzenalmente a partir da inoculação dos toros. Cada tratamento conteve 60 repetições, sendo a unidade experimental correspondente a um toro. Os toros utilizados foram de Eucalyptus urophylla, os quais foram inoculados... .

Shiitake growers in Virginia are experiencing considerable diminution of the fruiting life of oak logs, due primarily to Ascomycetous, competing, wood-rotting, contaminating "weed fungi" that either invade the logs after trees are felled or are present in tree tissues before felling. We surveyed several shiitake farms, and, although the fungal flora differed among them, the predominant colonizing fungi were identified as Graphostroma platystoma (also identified as Diatrype stygma), Eutypa spinosa and Slereum aff. complicatum. Other less frequently observed fungi were Stereum ostrea, Schizophyllum commune, Hymenochaete sp., Poria sp., Hypoxylon atropunctatum and Hypoxylon punctulatum. Site and means of invasion (colonization) of these "weed fungi" were studied by monitoring endophytic fungal populations in stressed and non-stressed oak trees in the Jefferson National Forest Montgomery County, Virginia. Twenty-six samples from Poverty Creek (non-stressed) and 23 from Brush Mountain (stressed) were studied. Fifty percent of the samples from the non-stressed were sterile, 23% yielded Paecilomyces variota., and 27% were colonized by other fungi. On the other hand, 100% of the samples from stressed trees (Brush Mountain) were colonized by fungi; 74% yielded P. variotii and 26% by other fungi. Thirty samples from a pin oak (Quercus paluslris) plot at Virginia Tech (non-stressed) were 74% sterile, 16% colonized by an unidentified yeast, and 10% colonized by other unknown fungi. / Master of Science

Os cogumelos comestíveis contêm substâncias funcionais de interesse, tais como proteínas e glucanas, as quais apresentam potencial antimicrobiano contra bactérias, fungos e até mesmo propriedades antivirais. O objetivo deste trabalho foi identificar extratos do cultivo in vitro do micélio de Lentinula edodes com propriedades contra fitopatógenos. Duas linhagens de L. edodes foram cultivadas em pequena escala em três diferentes meios de cultivo e após 0, 20, 40 e 60 dias, o micélio e o filtrado foram extraídos com solventes de diferentes polaridades. Os extratos foram testados contra Xanthomonas axonopodis pv passiflorae e Guignardia citricarpa, para verificar as melhores condições de cultivo para a produção de compostos bioativos. Com isso, foram selecionados os meios GPL (glicose, peptona e extrato de levedura) e SML (sacarose, extrato de malte e extrato de levedura) para o cultivo em grande escala de L. edodes. Após 60 dias, o micélio foi extraído com etanol, etanol 70% e água. O filtrado foi extraído com acetato de etila através de partição líquido-líquido. Os extratos foram testados contra G. citricarpa, Colletotrichum sublineolum e o Vírus do mosaico do fumo (TMV). Os extratos etanol e etanol 70% do meio SML foram ativos in vitro contra os fungos, constatando-se através de RMNH1, a presença, nestes extratos, de possíveis açúcares ausentes no meio de cultivo. As suspensões de TMV foram inoculadas mecanicamente em Nicotiana tabacum var. TNN (hospedeira de lesão local) cultivadas em casa de vegetação, através do método da meia-folha. Somente o extrato aquoso do micélio da linhagem LE 96/17 inibiu a expressão de sintomas de lesão local pelo TMV e a taxa de inibição foi de 82% na concentração de 0,5 mg/mL. Este extrato ativo foi purificado por coluna de Sephadex, rendendo 16 frações, sendo que as frações ativas 6/7 e 8/9 reduziram a infectividade do TMV em 95,5 % e 79%, respectivamente. Os espectros de RMNH1 sugeriram que estas frações são constituídas possivelmente por peptídeos e composto aromático. Os resultados de espectrometria de massas revelaram a provável presença de compostos já descritos na literatura e que apresentam conhecida atividade antimicrobiana. Experimentos comprovaram que o extrato bruto ativo não apresentou efeito viricida e, este mesmo extrato e a subfração resultante, não induziram resistência nas plantas de fumo. / Edible mushrooms contain functional compounds, such as proteins and glucans, which exhibit antimicrobial potential against bacteria, fungi and antiviral activity. The aim of this work was to identify extracts from submerged mycelium of Lentinula edodes with antimicrobial properties against phytopathogens. Two strains of L. edodes were grown in small scale in three different culture media and after 0, 20, 40 and 60 days, the mycelium and the filtrate were extracted with solvents of different polarities. Extracts were bioassayed against Xanthomonas axonopodis pv passiflorae and Guignardia citricarpa to verify the best condition for growth to produce bioactive compounds. After this, L. edodes was grown in large scale in the selected media, GPL (glucose, peptone and yeast extract) and SML (sucrose, malt extract and yeast extract). After 60 days, the mycelium was extracted with ethanol, ethanol 70% and water. The filtrate was extracted through liquid-liquid partition with ethyl acetate. The extracts were bioassayed against G. citricarpa, Colletotrichum sublineolum and Tobacco Mosaic Virus (TMV). The ethanol and ethanol 70% extracts from medium SML were active in vitro against the fungi and it was verified through H1NMR, the possible presence of sugars in these extracts, which were absent in the culture medium. The TMV suspensions were mechanically inoculated in Nicotiana tabacum TNN (local lesion host) grown in greenhouse, through the half-leaf method. Only the mycelium aqueous extract of strain LE 96/17 inhibited the expression of symptoms of local lesions by TMV and the inhibition ratio was around 82% at 0.5 mg/mL. This active extract was purified by Sephadex column, yielding 16 fractions. Active fractions 6/7 and 8/9 reduced infectivity by 95.5 and 79%, respectively. The H1NMR spectra suggested that fractions 6/7 and 8/9 possibly have peptides and aromatic compound. The results of mass spectrometry revealed the possible presence of compounds already described in the literature and exhibiting antimicrobial activity. The experiments showed that the active crude extract did not exhibit viricidal effect and that such extract and its resulting subfraction inhibited the infectivity of TMV and did not induce resistance in tobacco plants.

Os cogumelos comestíveis contêm substâncias funcionais de interesse, tais como proteínas e glucanas, as quais apresentam potencial antimicrobiano contra bactérias, fungos e até mesmo propriedades antivirais. O objetivo deste trabalho foi identificar extratos do cultivo in vitro do micélio de Lentinula edodes com propriedades contra fitopatógenos. Duas linhagens de L. edodes foram cultivadas em pequena escala em três diferentes meios de cultivo e após 0, 20, 40 e 60 dias, o micélio e o filtrado foram extraídos com solventes de diferentes polaridades. Os extratos foram testados contra Xanthomonas axonopodis pv passiflorae e Guignardia citricarpa, para verificar as melhores condições de cultivo para a produção de compostos bioativos. Com isso, foram selecionados os meios GPL (glicose, peptona e extrato de levedura) e SML (sacarose, extrato de malte e extrato de levedura) para o cultivo em grande escala de L. edodes. Após 60 dias, o micélio foi extraído com etanol, etanol 70% e água. O filtrado foi extraído com acetato de etila através de partição líquido-líquido. Os extratos foram testados contra G. citricarpa, Colletotrichum sublineolum e o Vírus do mosaico do fumo (TMV). Os extratos etanol e etanol 70% do meio SML foram ativos in vitro contra os fungos, constatando-se através de RMNH1, a presença, nestes extratos, de possíveis açúcares ausentes no meio de cultivo. As suspensões de TMV foram inoculadas mecanicamente em Nicotiana tabacum var. TNN (hospedeira de lesão local) cultivadas em casa de vegetação, através do método da meia-folha. Somente o extrato aquoso do micélio da linhagem LE 96/17 inibiu a expressão de sintomas de lesão local pelo TMV e a taxa de inibição foi de 82% na concentração de 0,5 mg/mL. Este extrato ativo foi purificado por coluna de Sephadex, rendendo 16 frações, sendo que as frações ativas 6/7 e 8/9 reduziram a infectividade do TMV em 95,5 % e 79%, respectivamente. Os espectros de RMNH1 sugeriram que estas frações são constituídas possivelmente por peptídeos e composto aromático. Os resultados de espectrometria de massas revelaram a provável presença de compostos já descritos na literatura e que apresentam conhecida atividade antimicrobiana. Experimentos comprovaram que o extrato bruto ativo não apresentou efeito viricida e, este mesmo extrato e a subfração resultante, não induziram resistência nas plantas de fumo. / Edible mushrooms contain functional compounds, such as proteins and glucans, which exhibit antimicrobial potential against bacteria, fungi and antiviral activity. The aim of this work was to identify extracts from submerged mycelium of Lentinula edodes with antimicrobial properties against phytopathogens. Two strains of L. edodes were grown in small scale in three different culture media and after 0, 20, 40 and 60 days, the mycelium and the filtrate were extracted with solvents of different polarities. Extracts were bioassayed against Xanthomonas axonopodis pv passiflorae and Guignardia citricarpa to verify the best condition for growth to produce bioactive compounds. After this, L. edodes was grown in large scale in the selected media, GPL (glucose, peptone and yeast extract) and SML (sucrose, malt extract and yeast extract). After 60 days, the mycelium was extracted with ethanol, ethanol 70% and water. The filtrate was extracted through liquid-liquid partition with ethyl acetate. The extracts were bioassayed against G. citricarpa, Colletotrichum sublineolum and Tobacco Mosaic Virus (TMV). The ethanol and ethanol 70% extracts from medium SML were active in vitro against the fungi and it was verified through H1NMR, the possible presence of sugars in these extracts, which were absent in the culture medium. The TMV suspensions were mechanically inoculated in Nicotiana tabacum TNN (local lesion host) grown in greenhouse, through the half-leaf method. Only the mycelium aqueous extract of strain LE 96/17 inhibited the expression of symptoms of local lesions by TMV and the inhibition ratio was around 82% at 0.5 mg/mL. This active extract was purified by Sephadex column, yielding 16 fractions. Active fractions 6/7 and 8/9 reduced infectivity by 95.5 and 79%, respectively. The H1NMR spectra suggested that fractions 6/7 and 8/9 possibly have peptides and aromatic compound. The results of mass spectrometry revealed the possible presence of compounds already described in the literature and exhibiting antimicrobial activity. The experiments showed that the active crude extract did not exhibit viricidal effect and that such extract and its resulting subfraction inhibited the infectivity of TMV and did not induce resistance in tobacco plants.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-06-18Bitstream added on 2014-06-13T19:50:15Z : No. of bitstreams: 1 silva_ac_me_sjrp.pdf: 1046454 bytes, checksum: 547fb3dce95575f9068f714d5bf9af35 (MD5) / O presente trabalho teve como principais objetivos: conhecer a atividade antioxidante do shiitake (Lentinus edodes) e do cogumelo do sol (Agaricus blazei) conforme os métodos radical livre DPPH e sistema -caroteno/ácido linoléico; avaliar a estabilidade oxidativa do óleo de soja adicionado dos extratos que apresentaram maior atividade antioxidante e a influência dos extratos de cogumelos na retenção de tocoferóis em óleo de soja, quando submetido ao teste de estocagem acelerada. Os extratos de cogumelos foram obtidos sob diferentes condições: solventes de diferentes polaridades e dois tipos de extração, lenta (shaker, 3 horas, 120 rpm) e rápida (liquidificador, 30 minutos). Os solventes utilizados foram: água, metanol:água (1:1), etanol:água (1:1), metanol e etanol. Independente de qual variedade apresentou maior atividade antioxidante, ambas foram selecionadas para serem aplicadas ao óleo de soja. Os tratamentos: Controle (óleo de soja sem antioxidantes), TBHQ (óleo de soja + 100 mg/kg de TBHQ), BHT (óleo de soja + 100 mg/kg de BHT), Shiitake (óleo de soja + 3.500 mg/kg de extrato de shiitake) e Cogumelo do sol (óleo de soja + 3.500 mg/kg de extrato de cogumelo do sol) foram preparados e submetidos ao teste de estabilidade oxidativa por meio do Rancimat (100ºC) com fluxo de ar a 20L/h e ao teste de estocagem acelerada em estufa, a 60ºC durante 15 dias. As amostras foram recolhidas a cada 3 dias e analisadas quanto ao índice de peróxidos, dienos conjugados, ácidos graxos livres e tocoferóis naturalmente presentes no óleo de soja. Além disso, as amostras também foram analisadas diariamente quanto ao ganho de massa. Os resultados obtidos das determinações analíticas foram submetidos às análises de variância, em esquema fatorial, no delineamento inteiramente casualizado. Os extratos metanólicos, de ambas as variedades, independente do tipo... / The present work had as its main goals: cognize the antioxidant activity of shiitake (Lentinus edodes) and cogumelo do sol (Agaricus blazei) according to the method of free radicals DPPH and the system -carotene/acid linoleic; evaluate the oxidative stability of soybean oil added of the extracts that presented higher antioxidant activity and asses the mushroom’s extract influence over the retention of tocopherols in soybean oil, when subjected to the accelerated storage test. The mushroom’s extracts were obtained under different conditions: solvents of different polarities and two types of extraction, slow (shaker, 3 hours, 120 rpm) and fast (blender, 30 minutes). The solvents used, in decreasing order of polarity, were: water, methanol: water (1:1), ethanol: water (1:1), methanol and ethanol. Irrespective of which variety had shown higher antioxidant activity, both were selected to be applied to the soybean oil. The treatments: Control (soybean oil without antioxidants), TBHQ (soybean oil + 100 mg/kg de TBHQ), BHT (soybean oil + 100 mg/kg of BHT), Shiitake (soybean oil + 3,500 mg/kg of extract of the shiitake) and cogumelo do sol (soybean oil + 3,500 mg/kg of extract of the cogumelo do sol) were prepared and subjected to the oxidative stability’s test through the Rancimat (100ºC) with airflow at 20 L/h and to the accelerated storage test in an oven, at 60ºC for 15 days. The samples were collected every 3 days and analyzed regarding the index of peroxides, conjugated dienes, free fatty acids and tocopherols naturally found in the soybean oil added to the mushroom’s extracts. Beyond that, the samples were also analyzed daily regarding the weight gain. The results obtained from the analytics determinations were submitted to the variance analysis, in a factorial scheme, over a full randomized lineation. The methanolic extracts of both varieties, irrespective from... (Complete abstract click electronic access below)