Introdução A mastocitose abrange um grupo heterogêneo de condições crônicas caracterizado pela proliferação excessiva de mastócitos nos tecidos. Os sinais e sintomas clínicos são decorrentes da distribuição anatômica dos mastócitos e do efeito funcional dos mediadores produzidos e liberados por estas células. Na infância, a doença é considerada uma condição benigna na maioria dos casos, cujo comprometimento característico é o cutâneo. As mais freqüentes manifestações na pele são os mastocitomas e a urticária pigmentosa. Lesões cutâneas bolhosas podem manifestar-se e acompanhar todas as formas de mastocitose e quando esta apresentação é a predominante, é denominada de mastocitose bolhosa. O diagnóstico de mastocitose é suspeitado clinicamente e confirmado pela histologia. A demonstração do aumento do número de mastócitos nas lesões cutâneas características se constitui no principal critério diagnóstico. Contudo, este método tem dificuldades técnicas que impedem a adequada reprodutibilidade dos achados, dificultando a elucidação de casos duvidosos e retardando seu tratamento. Considerando as propriedades imunológicas e a importância clínica dos mastócitos reveste-se de maior importância compreender o papel destas células nas doenças, sendo indispensável identificá-las e enumerá-las com acurácia nos tecidos. Objetivos Quantificar o número de mastócitos marcados com anticorpo monoclonal antitriptase, através de técnica imuno-histoquímica e análise de imagem, em biópsias cutâneas de crianças, com diagnóstico clínico de mastocitose. Descrever os achados histológicos; quantificar o número de mastócitos marcados com o anticorpo antitriptase entre as diferentes expressões clínicas da mastocitose cutânea; comparar o número de mastócitos entre os casos de mastocitose cutânea e mastocitose associada à sintomas sistêmicos e correlacionar as contagens de mastócitos entre os dois diferentes métodos (coloração por Giemsa com contagem manual e marcação com anticorpo antitriptase e análise digital). Material e Método Foram incluídas no estudo biópsias cutâneas de crianças de 0 a 14 anos, com diagnóstico clínico e histológico de mastocitose. Os casos foram classificados de acordo com a apresentação clínica cutânea em mastocitoma, urticária pigmentosa ou mastocitose bolhosa e assinalada a presença de sintomas sistêmicos associados. Os fragmentos de pele fixados em formalina e emblocados em parafina foram cortados e utilizados para diagnóstico histopatológico convencional, corados com hematoxilina-eosina e Giemsa, e para análise imuno-histoquímica com estreptavidina peroxidase marcados com anticorpo antitriptase. A densidade de mastócitos (número de células por área) foi realizada por um único observador na técnica histológica e através de um sistema de análise de imagem de vídeo no método imuno-histoquímico. Resultados Foram avaliados 33 casos de mastocitose, sendo 21 do sexo masculino. Dez casos (30,3%) apresentavam mastocitoma, 21 (63,6%) urticária pigmentosa e 2 (6,1%) mastocitose bolhosa. Todos os casos da amostra foram classificados como tendo mastocitose incipiente e em 6 (18,8%) pacientes pôde ser identificada a associação com sintomas sistêmicos. Prurido foi o sintoma mais freqüente, sendo relatado em 21 casos. Em 21 dos 33 casos foi identificada a infiltração de mastócitos na derme havendo predominância pela região perivascular (p=0,001, teste exato de Fisher). Não houve diferenças significativas entre a presença de infiltrado mastocitário e as várias formas cutâneas de mastocitose ou a mastocitose sistêmica. A presença de eosinófilos foi identificada em 15 casos (45,5%) e em 10 casos associadamente ao infiltrado perivascular de mastócitos. A densidade de mastócitos na técnica histológica, incluindo-se todos os casos, foi 50,00 células/mm2. Não houve diferença significativa das contagens entre os pacientes com mastocitoma e aqueles com urticária pigmentosa, assim como entre os pacientes com e sem sintomas sistêmicos associados aos cutâneos. A densidade de mastócitos encontrada com a técnica imuno-histoquímica e contagem por análise de imagem foi 158,85 células/mm2. Não houve diferença significativa das contagens entre os pacientes com mastocitoma e aqueles com urticária pigmentosa, assim como entre aqueles com e sem sintomas sistêmicos. Comparando-se a contagem dos mastócitos por área (densidade) entre a histologia e a imuno-histoquímica houve uma diferença significativa (p=0,0001 teste não-paramétrico de Wilcoxon). A média da diferença entre as contagens foi 199,98 células/mm2 (±365,31 DP). Também não houve semelhança, entre os dois métodos, nos grupos mastocitoma e urticária pigmentosa (p=0,005 e p=0,01, respectivamente, teste não-paramétrico de Wilcoxon). Puderam ser identificados 518% a mais de mastócitos com a técnica imunohistoquímica quando comparada com a histológica. Conclusões O presente estudo permite concluir que: 1) a localização preferencial da infiltração de mastócitos é dérmica e perivascular, não sendo possível identificar diferenças histológicas entre casos de urticária pigmentosa e mastocitoma; 2) o número de mastócitos marcados com o anticorpo monoclonal antitriptase e contados com análise digital de imagem, em biópsia de pele de crianças com diagnóstico clínico de mastocitose, foi 159 células por milímetro quadrado; 3) a densidade de mastócitos, foi semelhante entre os casos de urticária pigmentosa e mastocitoma e entre os casos com e sem sintomas sistêmicos associados nas duas diferentes técnicas empregadas; 4) o número de mastócitos por milímetro quadrado com a técnica imuno-histoquímica e a contagem através de análise de imagem foi significativamente maior quando comparada com a coloração através de Giemsa e a contagem manual, com uma diferença média entre os dois métodos de 200 células por milímetro quadrado; 5) a densidade de mastócitos com a técnica imunohistoquímica foi significativamente maior tanto nos casos com urticária pigmentosa quanto nos com mastocitoma, quando comparada com a técnica empregada rotineiramente e 6) com a técnica imuno-histoquímica e a contagem através de análise de imagem foi possível identificar 518% a mais de mastócitos quando comparada com a técnica histológica. / Introduction Mastocytosis includes a heterogeneous group of chronic conditions characterized by increased proliferation of mast cells in the tissues. The clinical signs and symptoms result from the anatomic distribution of mast cells and from the functional effect of mediators produced and discharged by these cells. In childhood, the disease is considered a benign condition, in the majority of the cases, whose characteristic implication is cutaneous. The most frequent manifestations in the skin are mastocytomas and urticaria pigmentosa. Bullous cutaneous lesions may be manifested and accompany all kinds of mastocytosis and when this presentation is predominant, it is named bullous mastocytosis. The diagnosis of mastocytosis is clinically suspected and confirmed by histology. The demonstration of increased number of mast cells in proper cutaneous lesions is the main diagnostic criterion. Although, this method has technical problems that impede the adequate reproduction of the findings, complicating the elucidation of doubtful cases and delaying the treatment. Considering the immunological properties and the clinical significance of mast cells becomes of great relevance to understand the role of these cells in the diseases, being absolutely necessary to identify and enumerate them with accuracy in the tissues. Aims To count the number of marked mast cells with anti-tryptase monoclonal antibody, by immunohistochemical technique and image analysis in cutaneous biopsies of children with clinical diagnosis of mastocytosis. To describe the histological findings; to count the number of marked mast cells with anti-tryptase antibody among the different clinical expressions of cutaneous mastocytosis; to compare the number of mast cells among the cases of cutaneous mastocytosis and systemic mastocytosis and to correlate the counting of mast cells between both different methods (stained by Giemsa with handy counting and marked with anti-tryptase antibody and digital analysis). Material and Methods Cutaneous biopsies of children from 0 to 14 years old were included in the study, with clinical and histological diagnosis of mastocytosis. The cases were classified according to the clinical presentation in mastocytoma, urticaria pigmentosa or bullous mastocytosis and distinguished the presence of associated systemic symptoms. The blocks of formalin fixed and paraffin embedded fragments of skin were cut and utilized for conventional histopathologic diagnosis, stained with hematoxylin eosin and Giemsa. Similar sections were processed for immunohistochemical analysis with streptavidin peroxidase marked with anti-tryptase antibody. The evaluation of the density of mast cells (number of cells by area) was performed by only one observer in the histological technique and by a video image analysis system in the immunohistochemical method. Results Thirty-three cases of mastocytosis were appraised, 21 of them belonging to the masculine sex. Ten cases (30,3%) presented mastocytoma, 21 (63,6%) urticaria pigmentosa and 2 (6,1%) bullous mastocytosis. All patients of the sample were classified as having indolent mastocytosis and in 6 (18,8%) of them the association with systemic symptoms could be identified. Pruritus was the most frequent symptom, being related in 21 cases. In 21 of the 33 cases dermal infiltration of mast cells was identified predominating in the perivascular region (p=0,00l, exact test of Fisher). There were no significant differences regarding to the presence of infiltrated mast cells in the diverse cutaneous forms of mastocytosis or the systemic mastocytosis. The presence of eosinophils was identified in 15 cases (45,5%) and in 10 of them associated to the perivascular infiltrated of mast cells. The density of mast cells in the histological technique, including all cases, was 50,00 cells/mm2. There was no significant difference in the counting of cells, taking into account patients with mastocytoma in comparison with those with urticaria pigmentosa; the same happened when patients with or without systemic symptoms associated to cutaneous manifestations were considered. The density of mast cells found with the immunohistochemical technique and the counting by the analysis of image was 158,85 cells/mm2. There was no significant difference in the counting between the patients with mastocytoma and those with urticaria pigmentosa, and also between those ones with or without systemic symptoms. Comparing the counting of mast cells by area (density) between the regular histology and the immunohistochemistry there was a significant difference (p=0;0001, nonparametric test of Wilcoxon). The mean of the difference among the countings was 199,98 cells/mm2 (±365,31 SD). Also, there was not resemblance between both methods in the mastocytoma and the urticaria pigmentosa groups (p=0,005 and p=0,01, respectively, nonparametric test of Wilcoxon). With the immunohistochemical technique, an increase of 518% in the number of mast cells could be demonstrated when compared with the histological method. Conclusions The present study allows to conclude that: 1) the preferential location of the infiltration of mast cells is dermic and perivascular, not being possible to identify histological differences between the cases of urticaria pigmentosa and mastocytoma; 2) the number of anti-tryptase monoclonal antibody marked mast cells and counted by digital image analysis in skin biopsies of children with clinical diagnosis of mastocytosis, was 159 cells by square millimeter; 3) the density of mast cells was similar in cases of urticaria pigmentosa and mastocytoma and also in those with and without associated systemic symptoms in both distincts techniques; 4) the number of mast cells, by square millimeter, marked by immunohistochemical technique and counted by image analysis was significantly greater than the number obtained by Giemsa staining and handy counting, with an average difference of 200 cells by square millimeter between both methods; 5) the density of mast cells marked by immunohistochemical technique was significantly greater in both, urticaria pigmentosa and mastocytoma cases, when compared with the regular histopathological technique, and 6) the use of the immunohistochemical technique and the digital image analysis counting allowed the detection of 518% more mast cells than the histological method.

Resumo não disponível.

Sabe-se que o refluxo crônico pode induzir lesão mucosa, estimular a proliferação de células e promover tumorigênese no esôfago distal. Ainda não é sabido por que apenas uma parcela dos pacientes com refluxo esofágico progrediram para uma metaplasia intestinal (Esôfago de Barrett) e adenocarcinoma. O estresse oxidativo parece exercer um papel importante nessa progressão . Assim sendo, examinamos o padrão de expressão da enzima Heme Oxigenase-1 (HO-1), enzima indutora do estresse oxidativo, em peças de esôfago obtidos de um estudo experimental com ratos que avaliou o papel do refluxo gástrico e duodenoesofágico na carcinogênese esofágica. Métodos: Uma amostra de três (3) peças de esôfago de cada grupo de ratos submetidos a tratamentos diferentes tiveram a expressão da enzima Heme Oxigenase-1 avaliada através de imunohistoquímica. Os ratos foram divididos nos seguintes grupos: (1) cardioplastia para induzir refluxo predominantemente gástrico, (2) anastomose esofagoduodenal para induzir refluxo duodenal, (3) sem tratamento, (4) cardioplastia+dietilnitrosamina (DEN), (5) anastomose esofagoduodenal +DEN, (6) DEN. Resultados: Não houve desenvolvimento de câncer ou metaplasia intestinal nos animais que não foram expostos ao refluxo de conteúdo duodenal. A expressão de HO-1 foi observada apenas em ratos submetidos à anastomose esofagoduodenal (Grupos 2 e 5) e a análise da média de intensidade de fluorescência demonstrou uma diferença significante de expressão de HO-1 (4,8 e 4,6 vezes respectivamente) comparando-se ao controle (Grupo 3) (p<0,05). O alvo principal para expressão da HO-1 foram as células inflamatórias dentro do tumor ou em áreas subepiteleiais. Os ratos expostos ao refluxo gástrico não desenvolveram tumores ou expressaram a HO-1. Conclusões: A esofagite de refluxo induzida por refluxo esofágico com conteúdo duodenal provocou estresse oxidativo considerável e pode desempenhar um papel importante na carcinogênese esofágica. O refluxo gástrico não foi suficiente para induzir estresse oxidativo neste modelo experimental.

Objetivo: Evaluar in vitro el efecto antibacteriano de cuatro extractos metanólicos de Macrocystis pyrifera, Lessonia trabeculata, Lessonia nigrescens y Chondracanthus chamissoi sobre Streptococcus mutans (ATCC®35668™). Metodología: El presente estudio fue de tipo experimental in vitro, en el cual se prepararon cuatro extractos metanólicos de Macrocystis pyrifera, Lessonia trabeculata, Lessonia nigrescens y Chondracanthus chamissoi. Para cada extracto se realizaron 6 pruebas independientes y como control positivo se utilizó la solución de Clorhexidina al 0.12%. Para evaluar el efecto antibacteriano de los extractos se utilizó el método de difusión en pozo de Kirby-Bauer. La concentración mínima inhibitoria (CMI) y la concentración mínima bactericida (CMB) fueron evaluadas mediante el método de microdilución y el efecto citotóxico fue determinado por el método de MTT. Resultados: Se observó mayor efecto antibacteriano de los extractos metanólicos de Lessonia trabeculata y Macrocystis pyrifera sobre cepas de Streptococcus mutans, mostrando halos de inhibición de 18.1 mm + 0.75 mm y 12.25 mm + 0.69 mm respectivamente. Mientras que los extractos metanólicos de Lessonia nigrescens y Chondracanthus chamissoi mostraron menor efecto antibacteriano sobre cepas de Streptococcus mutans, observándose halos de 10.08 mm + 0.46 mm y 9.32 mm + 0.49 mm respectivamente. En todos los casos, los extractos metanólicos muestran una baja citoxicidad sobre células MDCK, observando una viabilidad celular de 66% para el caso de Lessonia trabeculata, 85% para el caso de Chondracanthus chamissoi, 65% para el caso de Lessonia nigrescens y 79% para el caso de Macrocystis pyrifera. Conclusiones: Se determinó que los cuatro extractos metanólicos de Macrocystis pyrifera, Lessonia trabeculata, Lessonia nigrescens y Chondracantus chamissoi presentan efecto antibacteriano sobre cepas de Streptococcus mutans, mostrando diferencias significativas entre ellos. Además, los cuatro extractos metanólicos presentan bajo efecto citotóxico sobre MDCK a altas concentraciones. / Objective: The aim of this study was to evaluate the antibacterial of the methanolic extracts of Macrocystis pyrifera, Lessonia trabeculata, Lessonia nigrescens and Chondracanthus chamissoi againts Streptococcus mutans (ATCC ®35668™). Material and methods: The present study was of experimental type in vitro, in which four methanolic extracts of Macrocystis pyrifera, Lessonia trabeculata, Lessonia nigrescens and Chondracanthus chamissoi were prepared. For each extract 6 independent tests were performed and as a positive control, the 0.12% Chlorhexidine solution was used. He went with the method of diffusion in the well of Kirby-Bauer, then proceeded to the reading of the halos with an external cover Vernier. Likewise, the minimum inhibitory concentration (MIC) and the minimum bactericidal concentration (CMB) of the extracts were found and the cytotoxic effect of each methanolic extract was determined with the MTT method. Results: A higher antibacterial effect was found in the methanolic extracts of Lessonia trabeculata and Macrocystis pyrifera with halos of 18.1 mm + 0.75 mm and 12.25 mm + 0.69 mm respectively on Streptococcus mutans respectively; however, it has the minor antibacterial effect of the methanolic extracts of Lessonia nigrescens and Chondracanthus chamissoi with halos of 10.08 mm + 0.46 mm and 9.32 mm + 0.49 mm. In cell viability, Lessonia trabeculata showed an effect at 66% of concentration similar to or less than 10000 mg / ml of the extract, while the extract of Chondracanthus chamissoi showed an effect superior to 84%, the extract of Lessonia nigrescens to 65% and the extract derived from Macrocystis pyrifera at 79%. Conclusions: It was determined that the four algae have an antibacterial effect against Streptococcus mutans, however there is a statistically significant difference between the extracts of Macrocystis pyrifera and Lessonia trabeculata with the extracts of Lessonia nigrescens and Chondracantus chamissoi. Likewise, the four algae have low cytotoxic effect at high concentrations. / Tesis

Made available in DSpace on 2015-12-06T22:54:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: O melanoma é decorrente de um crescimento celular descontrolado, com perda de inibição por contato e alterações no núcleo, afetando a manutenção dos telômeros. A telomerase, responsável pela síntese do telômero, protege o final da molécula de DNA. Sua atividade está ausente na maioria das células somáticas humanas e presente em quase todas linhagens de células tronco, germinativas e em mais de 90% dos tumores humanos. Estudos sugerem que a progressão de doenças malignas depende da reativação da telomerase, e que um agente inibidor dessa enzima poderia ser uma droga antitumoral efetiva, entre elas, o azidotimidinatrifosfato (AZT), sendo provado que o uso dessa droga em algumas neoplasias inibe in vitro sua ação. Objetivo: Avaliação da atividade da telomerase e da proliferação de células imortalizadas de melanoma Hs839T catalogo CRL-7572 submetidas à ação do AZT. Métodos: Foram utilizadas, linhagens de células de melanoma Hs839T catalogo CRL-7572, adquiridas via American Type Culture Collection, derivada da pele de um indivíduo caucasiano do sexo feminino de 42 anos. As células foram cultivadas em meio de cultura, suplementadas com diferentes concentrações de AZT em triplicata com 50, 100 e 200µM por 24h e 48h e comparados seus efeitos ao grupo controle. A avaliação da proliferação celular foi realizada pela técnica de MTT. A detecção da atividade da telomerase por KIT TRAPEZE® RT s7710 e PCR ELISA. Resultados: No tempo de 24 horas, quando comparado ao grupo controle, não houve inibição da proliferação celular e da atividade da telomerase da linhagem de melanoma Hs839T catalogo CRL-7572, embora sugira tendência à diminuição, quando comparados os grupos controle e 200µM. No tempo de 48 horas, houve uma diminuição momentânea, seguida de rápida recuperação, sugerindo que as células de linhagem utilizadas neste estudo são sensíveis ao AZT, mas que recuperam a atividade enzimática e proliferativa. Conclusão: A ação do AZT em células de melanoma HS839.T catalogo CRL-7572 estudadas nas concentrações e tempos propostos, não inibiu a atividade da telomerase e não afetou a proliferação celular. / Introduction: Melanoma is caused by an uncontrolled cell growth, with lossof inhibition contact and changes in the nucleus, affecting the maintenance of telomeres. Telomerase, responsible for telomere synthesis, protects the end of the DNA molecule. Its activity is absent in most human somatic cells and present in almost all lines of stem cells, germinatives, and in more than 90% of human tumors. Studies suggest that the malignancy progression depends on the telomerase reactivation, and that an inhibitor of this enzyme could be an effective antitumor drug, including the Azidothymidine-triphosphate (AZT) and proved that the use of this drug in some neoplasms inhibits their action “in vitro”. Objective: Evaluation of telomerase activity and proliferation of melanoma cells immortalized Hs839T catalog CRL-7572 subjected to the AZT action. Methods: We used melanoma cell lines of Hs839T catalog CRL-7572, acquired through American Type Culture Collection, derived from the skin of a 42-year-old Caucasian female person. The cells were grown in culture environment supplemented with different AZT concentrations in triplicate 50, 100 and 200µM) withim 24 and 48 hours and its effects compared to the control group. The cell proliferation evaluation was performed by MTT. Detection of telomerase activity by KIT S7710 TRAPEZE ® RT and PCR ELISA. Results: In 24 hours time, when compared to the control group, there was no inhibition of proliferation cell and telomerase activity, although there was tendency to decrease when compared to the control group and 200µM. In 48 hours time, there was a momentary decrease, followed by rapid recovery, suggesting that the cell lines used in this study are sensitive to AZT, but they recover the enzyme activity and proliferation. Conclusion: The action of AZT in melanoma cells HS839.T studied in the proposed concentrations and times did not inhibit telomerase activity and did not affect cell proliferation. / FAPESP: 07/59225-0 / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:02:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002 / O presente estudo teve como objetivo verificar o efeito da Vitamina C em culturas de queratinocitos humanos submetidos a hipoxia gasosa, quanto a agressao celular e ao estresse oxidativo. O metodo constitui-se no isolamento e cultivo de queratinocitos humanos em 40 garrafas, que foram divididas em quatro grupos: controle, controle com vitamina C, hipoxia e hipoxia com vitamina C. Os queratinocitos foram submetidos a hipoxia por substituicao gasosa no interior das garrafas por uma mistura contendo 95 por cento de nitrogenio e 5 por cento de C02,durante 30 minutos. Foram avaliados a agressao celular atraves de dosagem DHL e o estresse oxidativo pela dosagem de MDA. Os resultados demonstraram que a hipoxia aumentou em cerca de 8 vezes a liberacao de DHL pelos queratinocitos e que a vitamina C foi eficaz em inibir esta agressao. Quanto a producao de radicais livres, a hipoxia dobrou os valores de MDA dos grupos controle, sendo que a vitamina C levou a um aumento de peroxidacao lipidica. Assim, concluimos que a vitamina C foi capaz de diminuir de maneira significante a agressao celular pela hipoxia, havendo entretanto piorado o estresse oxidativo (nao significante) / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:05:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O Enterobacter spp. é um patógeno clinicamente importante em infecções de corrente sangüínea, e está freqüentemente associado à resistência às cefalosporinas de amplo espectro. Neste microrganismo, a resistência geralmente ocorre devido à desrepressão do gene ampC, mas outros mecanismos de resistência também podem existir, como a produção de beta-lactamases de espectro ampliado mediada por plasmídios (ESBL), o que limita as opções da terapêutica antimicrobiana. Objetivos: A análise do perfil de sensibilidade, da resistência à cefalosporina de quarta geração, da similaridade genética, e da adequação da terapia antimicrobiana entre amostras de Enterobacter spp. isoladas em infecções de corrente sangüínea no complexo Hospital São Paulo/ UNIFESP, em 2003 e 2004. Métodos: Um total de 93 amostras de bacteremia, consecutivamente coletadas entre janeiro de 2003 e março de 2004, foram testadas quanto ao perfil de sensibilidade para 7 agentes antimicrobianos, utilizando a metodologia do Etest e, seguindo o procedimento para os testes de ágar difusão, descritos pelo NCCLS. Foram utilizadas fitas de Etest ESBL screen para a detecção de beta-lactamases de espectro ampliado nos isolados de Enterobacter spp.. As amostras de Enterobacter spp. resistentes à cefepima foram selecionadas para a avaliação da similaridade genética através da ribotipagem automatizada, e os dados clínicos e demográficos dos pacientes com hemocultura positiva para esses isolados foram avaliados quanto a adequação da terapia antimicrobiana. Resultados: As taxas de resistência em Enterobacter spp. variaram de 28% para ceftazidima, 18,3% para cefotaxima e 12,9% para cefepima. O imipenem foi o antimicrobiano mais ativo (100% de sensibilidade), mesmo contra os isolados AmpC estavelmente desreprimidos. A ordem decrescente de atividade (% sensibilidade) contra os 93 isolados testados foi: imipenem (100%) >amicacina (86,0%) >cefepima (84,9%) = gatifloxacina (84,9%) >piperacilina/tazobactam (81,7%) >ceftazidima (72,0%) >cefotaxima (68,8%). Apenas 46,2% dos isolados de Enterobacter spp. resistentes à ceftazidima apresentaram sensibilidade à cefepima. A resistência cruzada com outros antimicrobianos foi comum entre as amostras resistentes à ceftazidima e àquelas resistentes à cefepima. A produção de ESBL foi encontrada em 5 isolados de Enterobacter spp.. Foram observados 7 ribotipos distintos entre as 14 amostras de Enterobacter spp. resistentes à cefepima. Os pacientes com bacteremia por Enterobacter spp. resistente à cefepima, em sua maioria, possuíam doença de base potencialmente ou rapidamente fatal e xvi encontravam-se internados em unidades de terapia intensiva ou unidades cirúrgicas. Cinco entre 16 pacientes com bacteremia por Enterobacter spp. com sensibilidade reduzida à cefepima receberam terapia antimicrobiana inicial apropriada. A taxa de mortalidade foi maior no grupo com terapia antimicrobiana empírica inadequada comparado aquele com terapia antimicrobiana adequada. Conclusões: Este estudo mostrou altas taxas de resistência à cefepima em Enterobacter spp. isolados de bacteremia, devido a presença de mecanismos adicionais de resistência além da produção de ESBL, e sugere que o uso prévio das cefalosporinas de amplo espectro pode estar relacionado com a emergência de isolados resistentes, e que a terapia antimicrobiana empírica inadequada pode estar associada a maior mortalidade entre esses pacientes. A grande variabilidade genética encontrada entre as amostras de Enterobacter spp. resistentes à cefepima alerta à importância da política do uso apropriado dos agentes antimicrobianos, particularmente das cefalosporinas de amplo espectro, para restringir a seleção de isolados resistentes. / Background: Enterobacter spp. is an important clinical pathogen in nosocomial bloodstream infections that frequently exhibits resistance to high spectrum cephalosporins. In this microrganism, resistance is usually due to derepression of AmpC locus, but other resistance mechanisms can also occur, like plasmid-encoded extended-spectrum beta-lactamases (ESBLs), which makes antimicrobial therapy options much more limited. Purpose: The main objectives of this study were to evaluate susceptibility profile, fourth-generation cephalosporin resistance, genetic similarity, and antimicrobial therapy adequacy among Enterobacter spp. isolated from bloodstream infections at Hospital São Paulo complex, in 2003 and 2004. Methods: A total of 93 bloodstream isolates consecutively collected between January 2003 and March 2004 were susceptibility tested for 7 broad-spectrum agents by using Etest and following the NCCLS procedures for agar difusion tests. ESBL Etest strips for the detection of extended-spectrum beta-lactamases were used to determine ESBL phenotypes in Enterobacter spp. strains. The bloodstream cefepime-resistant Enterobacter spp. were further selected for molecular typing by automated ribotyping, and the medical records of all patients with positive blood culture for these cefepime resistant pathogens were examined to evaluate antimicrobial therapy adequacy and the effect of inappropriate empirical antibiotic therapy on patients outcome. Results:. Resistance rates among Enterobacter spp. ranged from 28% for ceftazidime, 18,3% for cefotaxime and 12,9% for cefepime. Imipenem showed the highest susceptibility rate (100.0% susceptible) and was active even against the stably derepressed AmpC-producers. The overall rank order of spectrum (% susceptible) was: imipenem (100%) amikacin (86,0%) >cefepime (84,9%) = gatifloxacin (84,9%) >piperacillin/tazobactam (81,7%) >ceftazidime (72,0%) >cefotaxime (68,8%). Only 46,2% of ceftazidime-resistant Enterobacter spp. were susceptible to cefepime. Co-resistance to other antimicrobial agents was common amog ceftazidime-resistant and cefepime-resistant isolates. Five strains of Enterobacter spp. were phenotypically detected as ESBL producers. Seven distinct ribotyping patterns were observed among the 14 cefepime-resistant Enterobacter spp.. Most of cefepimeresistant Enterobacter spp. bacteremias were from patients with severe comorbidities and admitted in intensive care units or surgical units. Of the 16 patients infected with cefepime-susceptibility-reduced Enterobacter spp., 5 received appropriate initial antimicrobial therapy. The mortality rate was higher in the inadequately treated group. Conclusions: This study shows high rates of cefepime resistance in bloodstream Enterobacter spp. isolates due to the presence of additional mechanisms of antimicrobial resistance, other than ESBL production; and suggests that previous broadspectrum cephalosporin administration could be related to resistance emergence, and empirical inappropriate antimicrobial therapy could adversely affect patients outcome. The great genomic variability found among cefepime-resistant Enterobacter spp. highlights the importance of appropriate use of antimicrobial agents, particularly broadspectrum cephalosporins, to restrict selection of resistant isolates. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Geociências (bigeoufba2016@gmail.com) on 2016-08-26T12:42:28Z No. of bitstreams: 1 Roberto_Rodrigues_Evangelista_Dissertacao_Final.pdf: 863544 bytes, checksum: c12c076a52548e2903e32113f742c151 (MD5) / Approved for entry into archive by Geociências (bigeoufba2016@gmail.com) on 2016-08-26T14:36:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Roberto_Rodrigues_Evangelista_Dissertacao_Final.pdf: 863544 bytes, checksum: c12c076a52548e2903e32113f742c151 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-26T14:36:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Roberto_Rodrigues_Evangelista_Dissertacao_Final.pdf: 863544 bytes, checksum: c12c076a52548e2903e32113f742c151 (MD5) / RESUMO A Dissertação analisa as desigualdades entre pessoas brancas e pessoas negras, de acordo com a declaração de pertencimento racial feita pelas pessoas aos Censos do IBGE, quanto ao acesso às técnicas no espaço de Salvador. Compreendendo as técnicas como um conjunto de meios instrumentais e sociais que são ponto de partida para os processos de constituição e usos do território e de produção e habitação do espaço. Além de tomar as técnicas como ponto de partida para a realização dos diversos processos de trabalho realizados pelos homens e mulheres na transformação da natureza, tornando-a cada vez mais adequada para a reprodução da vida humana, o texto identifica e analisa os processos de formação sócio-espacial e de constituição e usos do território e de produção e habitação do espaço, tendo como delimitação territorial e espacial a cidade de Salvador, e como o grupo racial branco e grupo racial negro se inserem e participam nesses processos. O texto também aborda os processos de organização do espaço em Salvador, como decorrência da forma como ocorreu a inserção do território e de sua fração na divisão territorial do trabalho. Também é identificada no texto a distribuição espacial das técnicas em áreas da cidade de Salvador e como os grupos raciais que habitam essas áreas estão presentes e acessando as técnicas. As técnicas escolhidas para análise do acesso dos grupos raciais brancos e negros foram: trabalho e respectiva renda, educação, micro computador, automóvel particular, telefonia fixa, energia elétrica e coleta de lixo. / ABSTRACT The dissertation examines inequalities between white people and black people, according to the statement made by persons belonging to racial IBGE Census, as access to the techniques in the area of Salvador. Understanding the techniques as a set of instrumental and social media that are the starting point for the process of formation and uses of land and production and housing space. Besides taking techniques as a starting point for achieving the various work processes performed by men and women in the transformation of nature by making it increasingly suitable for reproduction of human life, the text identifies and analyzes the processes of formation socio-spatial formation and uses of land and production and housing space, with the space and territorial delimitation the city of Salvador, and as the white racial group and racial group are part black and part in these processes. The text also addresses the processes of spatial organization in Salvador, as a result of how the insertion occurred in the territory of his faction and the territorial division of labor. Also identified in the text is the spatial distribution of technical areas in the city of Salvador and how the racial groups that inhabit these areas are present and accessing techniques. The techniques used to analyze the access of black and white racial groups were working and their income, education, micro computer, private vehicles, fixed telephony, electricity and garbage collection.

Objetivo: Evaluar in vitro el efecto antibacteriano del extracto metanólico de Uncaria Tomentosa (Uña de Gato) sobre cepas de Staphylococcus aureus (ATCC®25923™) y Fusobacterium nucleatun (ATCC®25586™) Materiales y métodos: El estudio fue de tipo experimental in vitro. Para la actividad antibacteriana se utilizó el método de Difusión en Agar y para determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) se trabajó con el método de dilución en caldo en medio Brain Heart infusión Broth (BHI). Mientras que, la evaluación del efecto citotoxico del extracto se evaluó mediante el ensayo colorímetro del 3-(4.5-dimeltiltiazol-2-yl) -2.5-difeniltetrazolio bromuro (MTT) utilizando la línea celular Madin Darby Canine Kidney (MDCK). Resultados : El extracto metanólico de Uncaria Tomentosa tiene efecto antibacteriano frente a la cepa de Staphylococcus aureus, observándose halos de inhibición de 31.3 ± 2.66 mm. Se utilizó la Clorhexidina al 0.12% como control positivo, con resultados superiores de 59.1 mm ± 3.6 mm. En el caso de Fusobacterium nucleatun, no se evidenció efecto antibacteriano con el extracto metanólico de Uncaria Tomentosa. La CMI del extracto fue de 0.0016 mg/ml frente al Staphylococcus. La viabilidad celular del extracto se mantiene con valores altos (16 000 mg/ml), no se encontró efecto citotóxico. Conclusiones: Con la actividad antimicrobiana del extracto de Uncaria tomentosa, se sugiere seguir con más investigaciones que aporten al conocimiento científico y a partir de ello, se puedan desarrollar nuevos medicamentos antibacterianos en distintas presentaciones y así afrontar los diferentes problemas en la salud oral. / Objective: The aim of this study was to evaluate the antibacterial effect of the methanolic extracts of Uncaria tomentosa (Cat´s Claw) againts Staphylococcus aureus (ATCC® 25923™) y Fusobacterium nucleatun (ATCC® 25586™). Material and Methods: The study was of experimental type in vitro. For the antibacterial activity the diffusion method was used in agar and to determine the minimum inhibitory concentration (MIC), the broth dilution method was used in Brain Heart Broth infusion medium (BHI). While the evaluation of the cytotoxic effect of the extract was evaluated by the colorimeter assay of 3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)-2,5- diphenyltetrazolium bromide (MTT) using the Madin Darby Canine Kidney cell line (MDCK). Results: There is an antibacterial effect of the methanolic extract of Uncaria Tomentosa against Staphylococcus aureus, where inhibition halo of 31.3 ± 2.66 mm were observed. Clorhexidine 0.12% was used as a positive control with superior results of 59.1 mm ± 3.6 mm. On the other hand, there was not antibacterial effect against the Fusobacterium nucleatum strains. Then, the MIC of the extract was 0.0016 mg/ml against Staphylococcus aureus. The cell viability of the extract is maintained at high values (16,000 mg/ml), no cytotoxic effect was found. Conclusion: With the antimicrobial activity of the extract of Uncaria tomentosa, it´s suggested to continue with more research that contributes to scientific knowledge and from this, new antibacterial drugs can be developed in different presentations and thus face the different problems in oral health. / Tesis

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Matemática / Made available in DSpace on 2012-10-22T23:42:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 239122.pdf: 886789 bytes, checksum: 3bd9f5fbe509a113eb5a53cc7213991f (MD5) / O jiló foi selecionado entre diversos vegetais como fonte da enzima peroxidase para a construção dos biossensores. Como suporte sólido para imobilização desta enzima foi usado quitosana previamente reticulada com (I) glutaraldeído, (II) glutaraldeído e carbodiimida e (III) glutaraldeído e epicloridrina. Os biossensores (I, II e III) desenvolvidos a partir dos diferentes procedimentos de imobilização, apresentaram bons resultados quanto a repetibilidade, reprodutibilidade, sensibilidade, seletividade na determinação de hidroquinona em amostras reais. O biossensor (III) selecionado para determinação de rutina, apresentou características favoráveis para determinação deste flavonóide em fármacos. Os sensores biomiméticos empregando complexos modelos polifenol oxidase e fosfatase ácida púrpura, apresentaram bom desempenho na determinação de compostos fenólicos, em ampla faixa de concentração e limites de detecção menor aos encontrados usando os biosssensores contendo peroxidase de vegetal imobilizada em matriz de quitosana previamente reticulada. Entretanto, os biossensores e os sensores biomiméticos desenvolvidos neste trabalho oferecem uma alternativa para determinação de compostos fenólicos com alta precisão e exatidão. Além disso, a construção destes eletrodos de pasta de carbono modificados, são facilmente preparados, apresentam baixo custo, rapidez nas análises, sensibilidade e estabilidade.