Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / A lo largo del tiempo, los antibacterianos han sido ampliamente utilizados en el tratamiento y control de enfermedades infecciosas. Actualmente la lucha contra varias enfermedades de origen bacteriano se ha vuelto un problema de salud a nivel mundial, debido a la resistencia bacteriana. Sumado a lo anterior, la tendiente disminución en investigación y desarrollo de nuevos antibacterianos nos insta a destinar los esfuerzos en investigar nuevos compuestos activos, idealmente, frente a bacterias multirresistentes, con una estructura química y mecanismo de acción novedoso. En este sentido la cadena transportadora de electrones, y en particular la ubiquinona aparece como un blanco interesante para el desarrollo de nuevos antibacterianos. Por este motivo nuestro grupo de investigación ha llevado a cabo el desarrollo de derivados isoquinolinquinona activos en bacterias Gram positivo. Sin embargo, los factores que modulan la actividad de estos compuestos no han sido estudiados. De esta forma, el objetivo de este estudio es desarrollar un modelo 3D- QSAR/CoMFA y compararlo con la gráfica de Craig para establecer si estos modelos son útiles para el desarrollo de nuevos compuestos antibacterianos. La metodología CoMFA, la cual mide parámetros estéricos y electrostáticos de cada molécula, indica que el primer parámetro es el principal contribuyente de la actividad de esta familia de compuestos. En contraste, la gráfica de Craig, la cual relaciona la constante de hidrofobicidad y el carácter electrónico de los sustituyentes, entrega como resultado que la actividad de esta serie de compuestos depende principalmente del carácter hidrofóbico del sustituyente. Para validar estos resultados se realizó la síntesis de 8 derivados 8-aril-mercapto-pirimidoisoquinolinquinona, obteniéndose en dos pasos, con rendimientos para la última etapa entre 43% y 89%. Los compuestos obtenidos fueron evaluados para determinar su concentración inhibitoria mínima, en 6 bacterias prototipo. Los resultados muestran que 5 compuestos presentaron actividad en las bacterias Gram positivo ensayadas. Ninguno de los compuestos presento actividad en bacterias Gram negativa. En conclusión, se establece que el empleo de la gráfica de Craig y modelo CoMFA resultaron ser herramientas útiles para el desarrollo de nuevos compuestos antibacterianos de estructura 8-(4’-aril-mercapto)-pirimidoisoquinolinquinonas / Antibacterials have been used in treatment and control of infectious diseases in modern times. Today, the struggle against several diseases with bacterial origins has become a global health problem, due to bacterial resistance. In addition, diminishing research and development trends in antibacterial drugs urges us to focus resources on new active compounds. These should target multi-resistant bacteria with novel chemical structures and action mechanisms. In this sense, the electron transport chain and in particular the ubiquinone seems like an interesting target for new antibacterial developments. For this reason, our research group has conducted the development of active isoquinolinquinone derivatives on gram positive bacteria. However, the research of the factors that modulate the activity of these compounds has not been previously performed. The objective of this research is to develop a CoMFA model and compare it with Craig´s graph to establish the usefulness of these models for the development of new antibacterial compounds. The CoMFA methodology measures steric and electrostatic parameters of each molecule and indicates that the first parameters are the main contributors to the activity of this compound family. In contrast, Craig plot relates the hydrophobic and electronic constants of the substituents. From this plot, as a result of the activity of this compound series, it is derived that the hydrophobic properties of the substituents are the main contributor. To validate these results, eight derivatives of 8-aril-mercapto-pirimidoisoquinolinquinone were synthesized, in two steps, with efficiency between 42.7% and 88.5%. These compounds were evaluated to determine the minimum inhibitory concentration, using six prototype bacteria. The results show that five compounds achieved activity on the tested Gram-positive bacteria. None of these compounds revealed activity on Gram-negative bacteria. In conclusion, it has been stablished that both tools, Craig plot and CoMFA, are useful methods in the development of new antibacterial compounds of 8-(4’-aryl-mercapto)-pyrimidoisoquinolinquinone structure

Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico / Los medicamentos esenciales son los productos farmacéuticos indispensables que cubren las necesidades sanitarias básicas de la población, y que son primordiales para el acceso a la salud. En Chile desde el año 1969, existe una lista con los medicamentos esenciales denominado Formulario Nacional de Medicamentos (FNM), el cual se actualizó por última vez en el año 2005. Este trabajo tiene como objetivo realizar un diagnóstico sobre la utilidad que tienen los medicamentos esenciales, tanto en Chile como en el resto del mundo; para generar una recomendación sobre el proceso, la actualización y la utilidad del FNM, incluyendo una propuesta de criterios para la inclusión de medicamentos en el Petitorio Mínimo exigido a las farmacias del sector privado. La Organización Mundial de la Salud (OMS) entrega cada dos años una lista modelo de medicamentos esenciales, los cuales son una guía para las Lista de Medicamentos Esenciales de cada nación, en las que existen criterios de selección, además de la formación de una comisión o comité multidisciplinario asesor que contribuye en la realización y actualización de dicha lista. En Chile la legislación indica cuales son los criterios de selección para la elaboración del FNM, y que son similares a los de la OMS. Sin embargo, a diferencia de la OMS, Chile no ha actualizado su FNM desde el año 2005, por lo que cuenta con productos que no están en el comercio o que están sin un registro sanitario vigente, dejando a la población sin el suministro o la disponibilidad de un producto esencial para su salud. Por lo tanto, para que el FNM cumpla con su objetivo, es indispensable que se revise y se actualice periódicamente, optimizando los recursos económicos en salud, mayor suministro y disponibilidad de medicamentos, entre otros; para aportar con un sistema de salud de calidad y el acceso a la salud de las personas. Este trabajo plantea una recomendación de la actualización del FNM, proponiendo la eliminación de algunos medicamentos basados en la recomendación de la OMS, arsenales fármaco-terapéuticos entre otros; también se recomienda dar cumplimiento a la exigencia de las monografías oficiales que se exigen y se anexan al Formulario, para poder entregar información completa del tratamiento los medicamentos y utilizarlo como una herramienta para el Uso Racional de medicamentos. Por otro lado, se recomienda al Ministerio de Salud que se incorporen de forma regular y periódica las actividades y tareas que demanda el Formulario, asignando los recursos humanos y materiales necesarios que den cumplimiento a la exigencia reglamentaria, en un trabajo coordinado entre los distintos actores del Ministerio de Salud. Finalmente, se recomienda establecer una estrecha red de colaboración entre los distintos actores interministeriales; todo esto servirá como herramienta para la optimización y gestión de compras, suministro y disponibilidad de medicamentos esenciales para contribuir a la salud de las personas

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Buddleja globosa Hope es una planta nativa de Chile que ha demostrado efectos analgésicos, antioxidantes, antiinflamatorio, antibacterianos y antifúngicos. En la Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas de la Universidad de Chile se han realizado estudios que comprueban su actividad analgésica, antiinflamatoria y antioxidante. Además se han evaluado preparados farmacéuticos (crema y gel) en el tratamiento de eritrodisestesia palmo-plantar secundaria a terapia antineoplásica y radioepitelitis. Con estos antecedentes se propone la elaboración de un colutorio a base de un extracto de B. globosa para el tratamiento de mucositis oral, una enfermedad inflamatoria resultante de la terapia contra el cáncer, cuya incidencia es del 40-90% y se manifiesta como lesiones inflamatorias y/o ulcerativas del tracto oral y/o gastrointestinal. Este efecto secundario puede no sólo comprometer la salud de los pacientes que la presentan, sino también, la terapia a la que están sujetos. Hasta hoy no existe ningún producto aprobado para su uso en mucositis oral que haya demostrado eficacia en su prevención y/o tratamiento. El objetivo general de este trabajo consiste en estandarizar un extracto alcohólico de hojas de B. globosa y evaluar mediante un ensayo preclínico la efectividad de un colutorio a base de dicho extracto estandarizado en sus componentes activos. Para la elaboración del extracto etanólico semipurificado (EMAT) se utilizó material vegetal (hojas) recolectado en la Facultad de Ciencias Agronómicas de la Universidad de Chile, Santiago. Con el material seco y molido se realizaron extracciones seriadas con solventes de polaridad creciente (hexano, diclorometano y etanol). La valoración de EMAT y colutorio se realizó por cromatografía líquida de alta eficiencia (CLAE) cuantificando los metabolitos verbascósido y 7-O-glucósido de luteolina mediante curvas de calibración elaboradas con los respectivos patrones. Se evaluó la estabilidad de EMAT y colutorio en estufa a 40°C y a temperatura ambiente. Se realizó un estudio in vivo con Ratas hembras Sprague-Dawley, se estudiaron 7 grupos (control sano, control de mucositis, tratamiento de referencia (glutamina), colutorio al 1% EMAT vía oral, colutorio 5%EMAT vía oral, colutorio 1% EMAT vía tópica y colutorio 5% EMAT vía tópica) evaluando grado de mucositis, peso corporal y consumo de alimento. Además, se realizaron análisis histológicos a muestras de lengua. La metodología CLAE permitió cuantificar los componentes principales (verbascósido y 7-O-glucósido de luteolina) en EMAT (90,58± 1,377 ppm y 9,823± 0,131 ppm) y en las dos formulaciones elaboradas del colutorio, al 1% en EMAT (80,37± 4,454 ppm y 7,068± 0,3942 ppm) y al 5% en EMAT (325,1±9,668 ppm y 38,42± 1,367 ppm) Con respecto a la estabilidad química de los compuestos activos del colutorio, se estableció que se produce degradación, llegando a un 8,09% de verbascósido al tercer mes en estufa a 40°C y 18,96% en el caso de 7-O-glucósido de luteolina. Mientras que en EMAT la concentración del verbascósido fue un 77,63% al cabo de tres meses en estufa a 40°C y el 7-O-glucósido de luteolina de un 82,24% respecto a la concentración inicial. El colutorio a base de EMAT al ser un producto estandarizado en sus compuestos activos asegura la reproducibilidad lote a lote, la trazabilidad de la composición química del producto y por ende su acción farmacológica. En el estudio in vivo no se observan signos físicos de desarrollo de mucositis oral en ningún grupo y no se observan diferencias estadísticamente significativas en el peso y consumo de alimento entre los grupos estudiados. Sin embargo, en el análisis histológico de mucosa lingual revela diferencias entre los grupos, principalmente en el grosor epitelial que se ve más delgado en los grupos de control de mucositis y tratamiento de referencia, no así en los grupos tratados con colutorios que se asemejan más al control sano. En base a los resultados obtenidos en el estudio histológico, se encuentran evidencias que los colutorios al 1% y 5% en EMAT, tanto por vía oral como tópica, podrían ser efectivos en el tratamiento de la mucositis oral inducida por busulfán / Buddleja globosa Hope is a native plant from Chile that has shown analgesic, antioxidant, anti-inflammatory, antibacterial and antifungal effects. In the Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas de la Universidad de Chile, studies that verify its analgesic, anti-inflammatory and antioxidant activity have been carried out. In addition, pharmaceutical formulations (cream and gel) have been evaluated in the treatment of palmar-plantar erythrodysesthesia secondary to antineoplastic therapy and radioepithelitis. With this background it is proposed the development of a mouthwash based on an extract of Buddleja globosa Hope for the treatment of oral mucositis, an inflammatory disease resulting from cancer therapy. Oral mucositis’ incidence is 40-90% and is manifested as inflammatory and/or ulcerative lesions of the oral and/or gastrointestinal tract. This side effect may not only compromise the health of the patients presenting it, but also the therapy to which they are subject. To the date there is no approved product in the treatment and/or prevention of oral mucositis that has been demonstrated efficacious. The general objective of this work is to standardize an alcoholic extract of leaves of Buddleja globosa Hope and to evaluate, by a preclinical test, the effectiveness of a mouthwash based on this standardized extract in its active components. For the elaboration of fractionated ethanolic extract (EMAT) plant material (leaves), collected in the Facultad de Ciencias Agronómicas de la Universidad de Chile, Santiago, was used. With the dry and milled material, serial extractions were carried out with increasing polarity solvents (hexane, dichloromethane and ethanol). The analysis of the extract and mouthwash was performed by HPLC methodology, quantifying the metabolites verbascoside and luteolin 7-O-glucoside using calibration curves elaborated with the respective standards. Stability of the extract and mouthwash was evaluated in an oven at 40 ° C and at room temperature. An in vivo study was performed with 7 groups of female Sprague-Dawley rats (healthy control, mucositis control, standard treatment (glutamine), mouthwash 1% EMAT orally, mouthwash 5% EMAT orally, mouthwash 1% EMAT topically and mouthwash 5% EMAT topically) evaluating the degree of mucositis, body weight and food intake. In addition, histological analyzes were performed on tongue samples. The HPLC methodology allowed quantification of the major components (verbascoside and luteolin 7-O-glucoside) in EMAT (90.58 ± 1.377 ppm and 9.823 ± 0.131 ppm) and in the two formulations of the mouthwash, 1% in EMAT (80, 37 ± 4.454 ppm and 7.068 ± 0.3942 ppm) and 5% in EMAT (325.1 ± 9.668 ppm and 38.42 ± 1.367 ppm) Regarding the chemical stability of the active compounds of the mouthwash it was established that degradation occurs, reaching 8.09% verboscoside at the third month in an oven at 40 ° C and 18.96% in the case of luteolin 7-O- glucoside, while in the dry extract EMAT the concentration of verbascoside was 77.63% after three months in a stove at 40 ° C and luteolin 7-O-glucoside of 82.24% in relation to the initial concentration. The EMAT-based mouthwash as a standardized product concerning its active compounds ensures batch-to-batch reproducibility, traceability of the chemical composition of the product and thus its pharmacological action. In the in vivo study no physical signs of oral mucositis development were observed in any group and no statistically significant differences were observed in weight and feed intake among the groups studied; however, the histological analysis of lingual mucosa reveals differences between them, mainly in the epithelial thickness that was thinner in the control group of mucositis and standard treatment group, but not in the ones treated with mouthwashes, where a resemble to the healthy control group was observed. Based on the results obtained in the histological study, there is evidence that 1% and 5% mouthwashes in EMAT, both orally and topically, could be effective in the treatment of oral mucositis induced by busulfan / 31/12/2018

A análise de fluidos biológicos para detecção de usuários de Cannabis não é rotina em nossos serviços de toxicologia forense pela falta de um método aplicável às condições de trabalho desses laboratórios. Neste trabalho foi estudado um método que utiliza a cromatografia de camada delgada de alta eficiência (CCDAE) como técnica de identificação. Cinco mililitros de urina são submetidos à hidrólise alcalina e à extração Iíquido/líquido, com posterior aplicação do resíduo obtido na cromatoplaca. O limite de detecção em estudo realizado com adicionados foi de 5ng/ml. Urina de usuários de Cannabis quando submetidas a esta metodologia apresentaram resultado semelhante ao do padrão de THCCOOH, principal produto de biotransformação do THC. As amostras utilizadas como branco de referência não apresentaram mancha semelhante. Na análise das amostras de usuários por imunoensaio de fluorescência polarizada (\"cutoff\' 50ng/ml) obteve-se resultado negativo para usuários moderados e ocasionais. Com auxilio de curva-padrão observou-se que a concentração provável de canabinóides nessas amostras estaria entre 20-50ng/ml. No estudo comparativo dos resultados obtidos nas duas técnicas, foi verificada uma correspondência de 100% para as amostras de usuários com padrão de uso intenso. Nos usuários moderados e ocasionais não foi observada boa correspondência entre os resultados. / Abstract not available.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The objective of this study was to evaluate the effect of clomazone herbicide on metabolism of silver catfish (Rhamdia quelen). It was measured levels of lactate, protein and glucose (plasma), glycogen, protein and lactate (liver and muscle), acetylcholinesterase (AChE) activity (brain and muscle), catalase activity (liver), TBARS formation (liver and brain), hematocrit and hemoglobin values, aminotransferases (AST and ALT) activities (liver and plasma) and histological analysis of hepatic tissue. Fishes were exposed to 0.5 and 1.0 mg/L of clomazone for 12, 24, 48, 96 and 192 h. These concentrations are used in rice fields. Some parameters were also assayed after 96 h and 192 h in water without herbicide (recovery periods) after 96 and 192 h of exposure. Levels of muscle glycogen and liver lactate were reduced as well as hematocrit value after experimental period. Hemoglobin content did not changed significantly. Lactate levels diminished in the muscle tissue. Liver glycogen, glucose and lactate in the plasma were enhanced after exposure to herbicide. Protein levels were enhanced in the liver and white muscle, except at last periods of exposure, while plasma protein increased from 48 to 96 h of exposure to the herbicide. Specific AChE activity decreased in brain and muscle after treatments. Catalase activity was reduced in all periods of exposure. Fishes exposed to clomazone increased TBARS production in the liver, while in the brain the fishes showed different responses with exposure period increasing. Aminotransferases activities were elevated in the plasma, while in the liver, ALT increased in the early periods only. Liver AST activity was enhanced after 12 h of exposure, and after 48 h its activity reduced significantly. Hepatic histological analysis presented hepatocyte vacuolation after 192 h of exposure to herbicide concentration of 1.0 mg/L. However, in recovery period of 192 h, hepatocyte vacuolation was observed in both clomazone concentration tested. Most of the metabolic disorders did not persist after recovery period, except to liver AST and ALT activities. The present work shows that clomazone concentrations used in rice fields can cause changes in metabolic state of the fish, which are of moderate intensity and generally reversible. / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do herbicida clomazone sobre o metabolismo do jundiá (Rhamdia quelen). Foram medidos os níveis de lactato, proteína e glicose (plasma), glicogênio, proteína e lactato (fígado e músculo), atividade da enzima AChE (cérebro e músculo), atividade da enzima catalase (fígado), formação de TBARS (fígado e cérebro), valores de hematócrito e hemoglobina, atividade das enzimas aminotransferases (AST e ALT) (fígado e plasma) e análise histológica do tecido hepático. Os peixes foram expostos a 0.5 e 1.0 mg/L de clomazone por 12, 24, 48, 96 e 192 horas. Estas concentrações são utilizadas nas lavouras de arroz. Alguns parâmetros foram também medidos após 96 e 192 horas em água sem o herbicida (períodos de recuperação) após 96 e 192 horas de exposição. Os níveis de glicogênio muscular e lactato hepático estavam reduzidos, assim como o valor do hematócrito, após o período experimental. O conteúdo de hemoglobina não se alterou significativamente. Os níveis de lactato diminuíram no tecido muscular. O glicogênio hepático, glicose e lactato no plasma estavam aumentados após exposição ao herbicida. Os níveis de proteína estavam aumentados no fígado e músculo, exceto nos últimos tempos de exposição, enquanto a proteína no plasma aumentou a partir de 48 até 96 horas de exposição ao herbicida. A atividade específica da AChE diminuiu no cérebro e músculo após os tratamentos. A atividade da catalase foi reduzida em todos os períodos de exposição. Os peixes expostos ao clomazone aumentaram a produção de TBARS no fígado, enquanto no cérebro os peixes apresentaram diferentes respostas com o aumento do tempo de exposição. A atividade das aminotransferases estava elevada no plasma, enquanto no fígado, a ALT aumentou somente nos períodos iniciais. A atividade da AST no fígado estava aumentada após 12 horas de exposição, e após 48 horas, sua atividade reduziu significativamente. A análise histológica demonstrou vacuolização nos hepatócitos após 192 horas de exposição ao herbicida na concentração de 1,0 mg/L. Entretanto, no período de recuperação de 192 horas, a vacuolização foi observada em ambas concentrações testadas do clomazone. A maioria das desordens metabólicas não persistiu após o período de recuperação, exceto as atividades da AST e ALT hepáticas. O presente trabalho mostra que as concentrações de clomazone utilizadas nas lavouras de arroz podem causar mudanças no estado metabólico do peixe, às quais são de moderada intensidade e geralmente reversíveis.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The diazinon (DI) is a commonly organophosphorus (OP) used in pest control around the world. Severe acute poisoning due to ingestion of OP in suicide attempts were reported during the past years. The main toxic effect of OP is through acetylcholinesterase (AChE) inhibition, leading to a greater stimulation of cholinergic synapses in the central nervous system (CNS) which can lead to death. However, poisoning can lead to such state of hyperglycemia. However, the mechanism by which OP lead to this adverse effect is still unknown, even so, it is suggested that glycogenolysis and neoglycogenic pathways are involved. In recent studies, ebselen (EB) has shown pharmacological properties in experimental models of genetically or alloxan induced diabetes, as well as complications resulting from diabetes. Being considered a potential pharmacological agent for hyperglycemia treatment when caused by OP poisoning. Thus, this study evaluated the effects of EB on the glucose metabolism and other biochemical changes induced in rats by DI, as well as the insulin-mimetic effect of EB on glucose uptake in skeletal muscle tissue and the synthesis and breakdown of liver glycogen in tissues of rats. In in vivo experiments, rats were pretreated with a single injection of EB (50 mg/kg) intraperitoneally (i.p.). Thereafter, the animals were treated with a single oral (p.o.) dose of DI (200 mg/kg). Parameters indicative of liver and pancreas damage such as amylase, lipase, aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase (ALP) and lactate dehydrogenase (LDH) activities and serum glucose, hepatic glycogen content and hepatic glucose-6-phosphatase (G6Pase) activity were determined. Pretreatment with EB was effective in preventing against pancreatic and liver damage, as shown by the reduction in the activities of amylase, lipase, AST, ALT, ALP and LDH. EB was able to reduce blood glucose and hepatic glycogen content increased in the animals exposed to DI. In in vitro assays, EB (150 mM) or insulin (IN 10 mM as a positive control) were incubated with either skeletal muscle or liver tissue, in order to measure the absorption of glucose, glycogen synthesis and glycogen breakdown. Thus, EB increased glucose uptake in skeletal muscle, stimulated glycogen synthesis and inhibited hepatic glycogen breakdown in a manner similar to IN. In this context, EB demonstrated insulin-mimetic properties, lowering blood glucose levels in vivo and increasing glucose uptake by skeletal tissue, increasing glycogen synthesis and decreasing glycogen degradation in vitro. In conclusion, EB, possibly through its insulin-mimetic action, protected against pancreatic and hepatic damage caused by DI in rats. / O diazinon (DI) é um dos organofosforados (OP) mais utilizados no controle de pragas ao redor do mundo. Desta forma, são cotidianos os relatos de intoxicações acidentais por estes. Além disso, muitos casos de intoxicações devido à ingestão aguda por OP em tentativas de suicídio foram relatadas durante os últimos anos. Sabe-se que o principal efeito tóxico dos OP é através da inibição da acetilcolinesterase (AChE), levando a um maior estímulo das sinapses colinérgicas no sistema nervoso central (SNC) o que pode provocar à morte. A intoxicação por estes compostos também pode levar a um estado de hiperglicemia. Ainda desconhece-se o mecanismo pelo qual os OP levam a este efeito adverso, contudo, sugere-se que as vias da gliconeogênese e da glicogenólise estejam envolvidas. O ebselen (EB) apresentou propriedades benéficas em modelos experimentais de diabetes induzida com aloxano ou geneticamente, assim como contra complicações consequentes da diabetes. Sendo considerado assim, como um agente farmacológico em potencial para o tratamento da hiperglicemia provocada pela intoxicação por OP. Dessa forma, o presente trabalho avaliou os efeitos do EB in vivo no metabolismo da glicose e em outras alterações bioquímicas induzidas pelo DI em ratos, assim como, o efeito insulino-mimético do EB na captação de glicose em tecido muscular esquelético e na síntese e degradação do glicogênio hepático in vitro. Para os experimentos ex vivo, ratos Wistar machos adultos foram pré-tratados com uma única injeção de EB (50 mg/kg) pela via intraperitoneal (i.p.). Trinta minutos depois, os animais foram tratados com uma única dose de DI (200 mg/kg) pela via oral (v.o). Vinte e quatro horas após, parâmetros indicativos de dano pâncreatico e hepático, como as atividades da amilase, lipase, aspartato aminotransferase (AST), alanina aminotransferase (ALT), fosfatase alcalina (ALP) e lactato desidrogenase (LDH), bem como níveis séricos de glicose, conteúdo de glicogênio hepático e atividade da glicose-6-fosfatase (G6Pase) hepática foram determinados. O pré-tratamento com EB preveniu contra os danos pâncreaticos e hepáticos provocados pelo DI, como mostrado pela redução nas atividades da amilase, lipase, AST, ALT, ALP e LDH. Alem disso, o EB reduziu a hiperglicemia, a qual foi aumentada nos animais expostos ao DI e aumentou o conteúdo de glicogênio hepático, o qual tinha diminuido nestes. Em ensaios in vitro, o EB (150 mM) ou insulina (IN 10 mM, controle positivo) foram incubados com amostras de músculo esquelético ou tecido hepático, com o objetivo de medir a captação de glicose, síntese e quebra de glicogênio. Assim, o EB aumentou a captação de glicose pelo músculo esquelético, estimulou a síntese de glicogênio hepático e inibiu a quebra do glicogênio em uma maneira similar à IN. Neste contexto, o EB apresentou propriedades insulino-miméticas, diminuindo os níveis de glicose sérica in vivo e aumentando a captação de glicose pelo tecido esquelético, aumentando a síntese e diminuindo a quebra de glicogênio in vitro. Desta forma, o EB protegeu da hiperglicemia induzida por OP, agindo de uma forma mimética à insulina.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The peptide bradykinin is one of the most potent algogenic substances and its role in nociception has been intensively studied in the peripheral nervous system. However, its action in pain transmission in central nervous system remains unclear. In this work, we studied the action of this peptide into amygdala, a limbic structure highly involved on pain modulation, in the thermal noxious threshold of rats. Administration of bradykinin (0.025-0.5 nmol/site) into right amygdala of rats promoted a thermal hyperalgesia, verified by a reduction in paw withdrawal latency produced by noxious heat, only in the ipsilateral paw. The hyperalgesic effect of bradykinin (0.25 nmol/site) was not due to an unspecific effect on locomotor activity, visualized on open-field test. The hyperalgesia induced by intra-amygdala injection of bradykinin (0.25 nmol/site) was abolished by co-administration of this peptide with the B2 receptor antagonist Hoe 140 (5 pmol/site), but not by its co-administration with the B1 receptor antagonist des- Arg9-[Leu8]-bradykinin (0.05 nmol/site). This hyperalgesic effect was also inhibited by co-administration of bradykinin (0.25 nmol/site) with the glutamatergic NMDA antagonist MK-801 (5 nmol/site), with the cyclooxygenase inhibitor indomethacin (10 nmol/site) or with the glial metabolic inhibitor fluorocitrate (1 nmol/site) into amygdala of the rats. The results showed that intra-amygdalar administration of bradykinin induces pain sensitization through the release of cyclooxygenase products and the activation of NMDA and B2 receptors present in amygdala s neurones and glia. These findings provide evidence that bradykinin participates of the central pain-modulating circuit. / O peptídeo bradicinina está entre as mais potentes substâncias algogênicas, e seu papel na nocicepção tem sido intensamente estudado no sistema periférico. No entanto, sua participação na transmissão da dor no sistema nervoso central permanece obscura. Neste trabalho avaliou-se a ação desse peptídeo na amígdala, uma estrutura límbica que está amplamente envolvida na modulação da dor, através de um modelo de dor por estimulação térmica. A administração de bradicinina (0,025- 0,5 nmol/sítio) na amígdala direita de ratos promoveu hiperalgesia térmica, verificada como uma redução na latência do reflexo de retirada da pata causado por estimulação térmica nociva, apenas na pata ipsilateral á amígdala injetada. O efeito hiperalgésico da bradicinina (0,25 nmol/sítio) não foi mediado por alteração na atividade locomotora dos animais, avaliada no teste do campo aberto. A hiperalgesia produzida pela injeção intra-amígdalar de bradicinina (0,25 nmol/sítio) foi abolida pela sua co-administração com o antagonista do receptor B2, Hoe 140 (5 pmol/sítio), mas não pela sua coadministração com o antagonista do receptor B1 , des-Arg9-[Leu8]-bradicinina (0,05 nmol/sítio). Esse efeito hiperalgésico também foi inibido pela co-administração de bradicinina (0,25 nmol/sítio) com o antagonista do receptor glutamatérgico do tipo NMDA, MK-801 (5 nmol/sítio), com o inibidor da ciclooxigenase, indometacina (10 nmol/sítio), ou com inibidor do metabolismo da glia, fluorocitrato (1 nmol/sítio), na amígdala de ratos. Os resultados demonstraram que a administração intra-amigdalar de bradicinina induz sensibilização à dor através da liberação de produtos da ciclooxigenase e da ativação dos receptores NMDA e B2 presentes em células neuronais e gliais da amígdala. Esses achados fornecem evidências da participação da bradicinina na modulação central da dor.

A análise de fluidos biológicos para detecção de usuários de Cannabis não é rotina em nossos serviços de toxicologia forense pela falta de um método aplicável às condições de trabalho desses laboratórios. Neste trabalho foi estudado um método que utiliza a cromatografia de camada delgada de alta eficiência (CCDAE) como técnica de identificação. Cinco mililitros de urina são submetidos à hidrólise alcalina e à extração Iíquido/líquido, com posterior aplicação do resíduo obtido na cromatoplaca. O limite de detecção em estudo realizado com adicionados foi de 5ng/ml. Urina de usuários de Cannabis quando submetidas a esta metodologia apresentaram resultado semelhante ao do padrão de THCCOOH, principal produto de biotransformação do THC. As amostras utilizadas como branco de referência não apresentaram mancha semelhante. Na análise das amostras de usuários por imunoensaio de fluorescência polarizada (\"cutoff\' 50ng/ml) obteve-se resultado negativo para usuários moderados e ocasionais. Com auxilio de curva-padrão observou-se que a concentração provável de canabinóides nessas amostras estaria entre 20-50ng/ml. No estudo comparativo dos resultados obtidos nas duas técnicas, foi verificada uma correspondência de 100% para as amostras de usuários com padrão de uso intenso. Nos usuários moderados e ocasionais não foi observada boa correspondência entre os resultados. / Abstract not available.

Apesar da ampla demonstração do potencial tóxico do benzeno ao sistema imune, os mecanismos envolvidos nos seus diferentes efeitos não estão totalmente esclarecidos. Desta forma, o presente trabalho avaliou a mobilização e função de leucócitos polimorfonucleares (PMN) na vigência de resposta inflamatória aguda em ratos expostos a metabólitos do benzeno. Ratos Wistar, machos foram tratados por período de tempo prolongado (50 mg/kg; i. p.; 1 uma vez ao dia, 13 ou 16 doses diárias com intervalos de 2 dias a cada 5 doses) com hidroquinona (HQ), fenol (FE) ou veículo. As respostas inflamatória inata ou adquirida foram induzidas 24 hs após a última dose dos tratamentos. Para avaliar a intensidade de intoxicação, um método analítico foi padronizado para a extração de HQ e FE da urina dos animais por microextração em fase sólida, para subseqüente análise por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa. Os dados da validação mostraram que a técnica analítica é adequada, e a análise das amostras demonstrou o aumento na concentração urinária de HQ, FE e catecol (CAT) em urina dos ratos expostos, confirmando assim a exposição ao FE ou a HQ. A avaliação da resposta inflamatória inata demonstrou que o tratamento com HQ acarretou aumento acentuado no influxo de PMN para a cavidade inflamada. A análise do leucograma mostrou que o tratamento com HQ promoveu neutrofilia, que pode ser decorrente da mobilização destas células da medula, uma vez que número menor de células segmentadas na última etapa de maturação foi encontrado nestes animais. No entanto, durante a vigência de resposta inflamatória, a neutrofilia esperada para este processo não foi detectada nestes animais. Espécies reativas de nitrogênio podem participar dos efeitos aqui detectados em animais tratados com HQ, já que valores aumentados de óxido nítrico (NO) foram mensurados no sangue após o tratamento e no exsudato inflamatório. Diferentemente da exposição à HQ, a administração de FE não alterou a migração de PMN para o foco de lesão na vigência de reposta inflamatória aguda inata. Apesar do tratamento com FE ter acarretado linfocitopenia, a produção das células brancas no compartimento medular e a leucocitose em resposta ao processo inflamatório foram equivalentes ao encontrado em animais controles. No que concerne à resposta inflamatória alérgica, ambos os tratamentos inibiram o influxo de leucócitos para o lavado bronco-alveolar (LBA) e para o tecido pulmonar. A investigação dos mecanismos envolvidos que a exposição à HQ interfere com a síntese de imunoglobulina E e, eventualmente, com a desgranulação de mastócitos. Por outro lado, a exposição ao PHE não alterou estes parâmetros. Em conjunto, os dados aqui apresentados sugerem que os tratamentos com HQ ou FE provocam efeitos distintos na gênese de respostas inflamatórias de diferentes origens quanto à migração leucocitária, e que os mecanismos envolvidos com a imunotoxicidade induzida pelo benzeno é altamente complexa. / Despite toxicity of benzene has been fully demonstrated, the mechanisms involved on its immunotoxicity are not fully comprehended. Then, the present work studied the mobilization and functions of polymorphonuclear cells (PMN) during acute inflammatory reactions in rats exposed to benzene metabolites. Male Wistar rats were treated with hydroquinone (HQ) or phenol (Phe) for prolonged period of time (50 mg/Kg; i.p.; once a day, 13 or 16 doses, 2 days intervals after each 5 doses). Innate or acquired inflammatory reactions were carried out 24 hours after the last dose of treatments. Animals treated with vehicle were employed as control. In order to determine the intensity of intoxications, an extraction method was developed in urine using a solid phase micro-extraction fiber. The subsequent analysis was performed on gas chromatography coupled to mass spectrometry. Data from validation showed the adequacy of methodology and demonstrated the presence of HQ, PHE and CAT in urine from exposed rats, corroborating the exposition to PHE or HQ. The evaluation of innate inflammatory reaction showed that HQ exposition promoted increment on the number of PMN cells to inflamed area. The leucogram demonstrated that treatment evoked neutrophilia, probably due to mobilizations of segmented cells in the last phase of maturation from bone marrow. However, during the inflammatory process, the characteristic neutrophilia was not detected. Nitrogen reactive species may participate of the intoxication, since elevated values of nitric oxide (NO) were found in blood after intoxication and in inflammatory exudates. Differentially from HQ exposition, administrations of PHE did not alter the migration of PMN into inflammatory focus. Despite the treatment promoted reductions on number of lymphocytes, the production of white cells on bone marrow and the neutrophilia during and inflammatory process were equivalent to those found in control animals. Regarding acquired inflammation, both treatments significantly inhibited the influx of leukocytes to bronchoalveolar fluid. This pattern of response did not reflect the accumulation of PMN cells on pulmonary tissue, since the myeloperoxidase activity was not higher when compared to control rats. The investigations of the mechanisms involved in the inhibited leukocyte recruitment, showed that HQ treatment probably impairs the immunoglobulin E synthesis and mast cell degranulation. On the other hand, FE exposition did not present these effects. Together, data herein suggest that HQ or PHE treatments promete singular effects on PMN recruitment during inflammatory reactions elicited by different agents, and the complexity of mechanisms responsible for the immunotoxicity induced by benzene.

Os praguicidas podem ser responsáveis por intoxicações exógenas intencionais ou não intencionais, tanto em seres humanos como em animais, em virtude de sua ampla toxicidade e fácil obtenção do produto, nem sempre por vias legais. O carbofurano é um praguicida carbamato amplamente utilizado no Brasil, como inseticida e nematicida, para o controle de pragas agrícolas; é comercializado na forma de grânulos, vulgarmente conhecido como “chumbinho”. Esse praguicida em animais superiores inibe a enzima acetilcolinesterase, promovendo efeitos tóxicos que podem levar a óbito. Considerando que o carbofurano poderia estar implicado com quadros intoxicações exógenas de animais, no presente estudo se propôs desenvolver e validar um método analítico para detectar e/ou quantificar esse praguicida e seu metabólito, 3-hiroxicarbofurano, em matrizes biológicas de diferentes espécies animais por cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD), a fim de utilizá-lo no Laboratório de Diagnóstico Toxicológico (LADTOX) do Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ) da Universidade de São Paulo (USP). Para desenvolver esse método foram utilizadas amostras biológicas proveniente de fragmentos de, no mínimo, seis animais diferentes, de espécies distintas (cão, gato, porco, boi, rato, camundongo e ave), isentas de suspeita de intoxicação. Realizou-se a fortificação dessas amostras biológicas, previamente homogeneizadas, com soluções contendo o praguicida e seu metabolito, 3-hidroxicarbofurano, em 6 níveis de fortificação que variaram de 6,25 a 100 µg/mL. Avaliaram-se os seguintes parâmetros para validação do método: seletividade, efeito matriz, precisão, exatidão, curva de calibração e efeito residual, limite de detecção (LD) e limite inferior de quantificação (LIQ). Para estabelecer a seletividade do método, verificou-se as respostas de picos interferentes próximo ao tempo de retenção dos analitos, as quais foram inferiores a 20% da resposta do analito nas amostras do LIQ. Quanto ao efeito matriz, não houve interferência relevante entre as matrizes analisadas. Em relação a precisão e exatidão do método, foi possível observar que o coeficiente de variação (CV) e o erro padrão relativo (EPR) não excederam ao limite máximo de 15%. Considerando a curva de calibração, o coeficiente de correlação (r2) apresentou valores iguais ou superiores que 0,99 nas diferentes matrizes para o carbofurano, enquanto para o 3-hidroxicarbofurano duas matrizes (fígado e conteúdo estomacal) apresentaram o valor de 0,98 e as demais superior a 0,99. A extração líquido-líquido forneceu valores de recuperação entre 74,29 a 100,1% para o carbofurano e entre 64,72 a 100,61% para o 3-hidroxicarbofurano, sendo o LIQ de 6,25 µg/mL. Conclui-se que o método se mostrou adequado para identificar e quantificar o carbofurano e seu metabólito em amostras biológicas, apresentando sensibilidade e seletividade adequadas, e os parâmetros de validação encontram-se de acordo com os limites sugeridos para validação de métodos bioanaliticos, sendo, assim, implantado no LADTOX / Pesticides are responsible for intentional or unintentional exogenous poisoning, in both humans and animals, because of their broad toxicity and prompt availability, not always legally. Carbofuran is a carbamate pesticide widely used in Brazil as an insecticide and nematicide for the control of agricultural pests. It is marketed in the form of beads, commonly known as "pellet". This pesticide inhibits acetylcholinesterase enzyme on higher animals, promoting toxic effects, which can lead to death. Considering that carbofuran could be implicated in cases of exogenous poisoning of animals, in the present study we aimed to develop and validate an analytical method for detecting and/or quantifying this pesticide and its metabolite, 3-hiroxicarbofuran, in biological matrices of different animal species by high performance liquid chromatography with diode array detector (HPLC-DAD) in order to use it in the Toxicology Diagnostics Laboratory (LADTOX) of the Department of Pathology, Faculty of Veterinary Medicine and Animal Science (FMVZ), University of São Paulo (USP). To develop this method biological samples obtained from fragments of at least six different animals of different species (dog, cat, pig, ox, rat, mouse and bird), free from suspicion of poisoning. Biological samples were fortified with previously homogenized solutions containing the pesticide and its metabolite, 3-hidroxicarbofurano, in 6 fortification levels ranging from 6.25 to 100 µg/mL We evaluated the following parameters for method validation: selectivity, matrix effects, precision, accuracy, calibration curve and residual effect, limit of detection (LOD) and lower limit of quantitation (LLQ). To establish selectivity of the method, we verified the responses of interfering peaks near the retention times of analytes, which were less than 20% of the analyte response in LLQ samples. As to matrix effects, there was no significant interference between the matrices analyzed. Regarding the precision and accuracy of the method, it was observed that the coefficient of variation (CV) and the relative standard error (RSE) did not exceed the ceiling of 15%. In regard to the calibration curve, the correlation coefficient (r2) presented values that equal or exceed 0.99 in different arrays to carbofuran, while for the 3-hidroxicarbofuran two arrays - liver and stomach contents - had a value of 0.98 while the remaining matrices 0,99. The liquid-liquid extraction recovery values varied between 74.29 to 100.1% for carbofuran and between 64.72 to 100.61% for 3-hidroxicarbofuran, and LOQ of 6.25 µg/ml. We concluded that the method was adequate to identify and quantify carbofuran and its metabolite in biological samples, with adequate sensitivity and selectivity, and the validation parameters are in accordance to the suggested limits for validation of bioanalytical methods, and, thus implanted in LADTOX