Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6489_dissertação final Maria Augusta Dario.pdf: 2504051 bytes, checksum: 0df5dafa721b780da5475f34c2c60ab7 (MD5) Previous issue date: 2013-06-06 / Estudos moleculares têm sido utilizados para caracterização dos diferentes isolados de Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, que apresenta populações complexas. No estado do Espírito Santo, Brasil, foram obtidos isolados de T. cruzi provenientes de triatomíneos silvestres, no período de junho de 2010 a maio de 2012 e o DNA de 89 amostras foi extraído. Foi realizada a amplificação da região intergênica do gene de calmodulina e para o gene TcSC5D. As amostras foram sequenciadas e analisadas pelo software Mega 5.05. Setenta e oito amostras foram amplificadas para a região intergênica do gene de calmodulina, sendo que destas, 66 amostras foram sequenciadas, identificando as linhagens TcIII (9,1%), TcIV (7,6%), TcII (19,7%) e TcII-like (63,6%). Sessenta e duas amostras foram amplificadas e sequenciadas para o gene TcSC5D, identificando linhagens TcI (1,6%), TcII (82,2%), TcIII (8,1%) e TcIV (8,1%). Neste estudo foi possível observar que a população de T. cruzi que circula nas espécies de triatomíneos do ES é heterogênea, predominando a linhagem TcII e em menor proporção TcI, TcIII e TcIV. Sabe-se muito pouco sobre os animais reservatórios silvestres onde essas populações circulam na mata Atlântica, dificultando a correlação destas nesse ambiente. A caracterização molecular permitiu identificar linhagens do protozoário procedentes da floresta, porém capazes de se adaptar a ciclos de transmissão domiciliar da doença de Chagas. Palavras-chave: Trypanosoma cruzi, caracterização molecular, triatomíneos, mata Atlântica, Espírito Santo.

A tripanossomíase americana ou doença de Chagas (DC) é um dos maiores problemas de saúde pública da América Latina. A região Nordeste do Brasil é a mais preocupante em relação à doença devido à grande concentração de vetores, que são os triatomíneos, devido às precárias condições de vida de pessoas carentes da zona rural. A principal forma de transmissão dessa doença é a vetorial, o que corresponde a 80% dos casos. A confecção deste guia que compreende fotografias, chaves dicotômicas e descrições dos ecótopos de triatomíneos têm por intuito contribuir com vigilância entomológica desses vetores e, consequentemente colaborar com a vigilância da doença de Chagas que ocorre nas cinco regiões biogeográficas do referido Estado. Neste trabalho utilizou-se de triatomíneos obtidos no Insetário de Triatominae da Faculdade de Ciências Farmacêuticas (UNESP) localizado no Campus de Araraquara em abril de 2017. Os exemplares foram preparados para a coleção e para registro no Laboratório de Entomologia da Faculdade de Saúde Pública (USP). O conhecimento atualizado da distribuição geográfica dos vetores da doença de Chagas é importante para fundamentar ações integradas entre os serviços de saúde, o que contribui para a vigilância entomológica e ao controle dos triatomíneos. / American trypanosomiasis or Chagas\' disease (DC) is one of the biggest public health problems in Latin America. The Northeastern region of Brazil is the most worrisome in relation to the disease due to the great concentration of vectors, which are triatomines, due to the precarious living conditions of people in need in rural areas. The main form of transmission of this disease is the vector, which corresponds to 80% of the cases. The preparation of this guide, which includes photographs, dichotomous keys and descriptions of the triatomine ecotypes, is intended to contribute to the entomological surveillance of these vectors and, consequently, to collaborate with the surveillance of Chagas\' disease that occurs in the five biogeographical regions of that State. Triatominae obtained from Triatominae Insetaria of the Faculty of Pharmaceutical Sciences (UNESP) located in the Campus of Araraquara in April 2017 were used. The specimens were prepared for collection and for registration in the Laboratory of Entomology of the Faculty of Public Health (USP). The updated knowledge of the geographical distribution of Chagas\' disease vectors is important to support integrated actions among health services, which contributes to the entomological surveillance and control of triatomines.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2018. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-05-08T17:24:45Z No. of bitstreams: 1 2017_DéborahBiancaSantosMartins.pdf: 4320625 bytes, checksum: 8a3bd1eead0328739a78a254969a6ecf (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-05-15T16:13:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_DéborahBiancaSantosMartins.pdf: 4320625 bytes, checksum: 8a3bd1eead0328739a78a254969a6ecf (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-15T16:13:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_DéborahBiancaSantosMartins.pdf: 4320625 bytes, checksum: 8a3bd1eead0328739a78a254969a6ecf (MD5) Previous issue date: 2018-05-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Fundação de Apoio a Pesquisa do Distrito Federal (FAPDF). / Rhodnius neglectus (Hemiptera: Reduviidae) é um vetor potencial do Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas. Ele apresenta em suas glândulas salivares moléculas importantes que neutralizam os mecanismos hemostáticos do hospedeiro, auxiliam na alimentação sanguínea e, de forma indireta, na transmissão do T. cruzi. Assim, a saliva desse inseto hematófago se torna um relevante alvo de pesquisas devido à presença de moléculas com elevado potencial farmacológico. Este estudo teve por objetivos, a expressão heteróloga de membros das famílias de proteínas salivares triabina e antígeno 5 e a avaliação da atividade apirásica salivar de R. neglectus. As sequências nucleotídicas das proteínas foram obtidas a partir do transcriptoma de R. neglectus, clonadas no vetor pET100/D-TOPO e expressas em bactérias Escherichia coli da linhagem BL21(DE3). Ambas as proteínas recombinantes, triabina e antígeno 5, foram observadas na fração insolúvel após a lise das bactérias. Essas foram purificadas por cromatografia de afinidade e usadas para a produção de anticorpos policlonais em camundongos, os quais reagiram cruzadamente com antígenos das salivas das espécies R. prolixus e T. infestans. Após a otimização do protocolo de expressão, somente a triabina foi expressa na fração solúvel do lisado bacteriano. A atividade apirásica também foi avaliada na saliva de R. neglectus em solução e por zimografia em gel. As proteínas salivares com atividade apirásica foram identificadas por espectrometria de massas das bandas excisadas do zimograma contendo ADP como substrato. Os anticorpos antiapirase de R. prolixus reagiram cruzadamente com antígenos da saliva de R. neglectus. Os resultados mostram que há espécies nas tribos Rhodniini e Triatomini que compartilham epítopos semelhantes de triabina, antígeno 5 e apirase. Como perspectiva, a triabina recombinante solúvel poderá ser avaliada como potencial marcador de exposição aos triatomíneos, bem como ter determinadas as suas potenciais atividades farmacológicas e contribuir na compreensão das interações dinâmicas hospedeiro-vetor. / Rhodnius neglectus (Hemiptera: Reduviidae) is a potential vector for Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas disease. It presents in its salivary glands important molecules that neutralize the hemostatic mechanisms of the host, assist in the blood supply and in T. cruzi transmission. The saliva of this hematophagous insect is, therefore, a research target due to the presence of molecules with pharmacological potential. In this study, the heterologous expression of members from triabin and antigen 5 families and the evaluation of R. neglectus salivary apyrase activity are reported. Protein nucleotide sequences were selected from R. neglectus transcriptome, cloned into pET100/D-TOPO vector and expressed in Escherichia coli strain BL21(DE3). Both recombinant proteins, triabin and antigen 5, were observed in the insoluble fraction after bacterial lysis. They were purified by affinity chromatography and used to raise polyclonal antibodies in mice, which cross-reacted with antigens from saliva of R. prolixus and Triatoma infestans. After optimization of the expression protocol, only triabin was expressed in the bacterial soluble fraction. Apyrase activity was also evaluated in R. neglectus saliva, both in solution and by in gel zymography. Salivary proteins with apyrase activity were identified by mass spectrometry of bands excised from the zymogram containing ADP as substrate. R. prolixus anti-apyrase antibodies cross-reacted with R. neglectus salivary antigens. Results show that species from both Rhodniini and Triatomini tribes share similar antigen 5, triabin, and apyrase epitopes. As a perspective, soluble recombinant triabin can be evaluated as biomarker candidate to triatomine exposure, for potential pharmacological activities and may contribute in the understanding of host-vector dynamic interactions.

Submitted by Alberto Vieira (martins_vieira@ibest.com.br) on 2017-09-14T00:04:08Z No. of bitstreams: 1 200813.pdf: 4829624 bytes, checksum: 3b8e5808ed3e15c86b4227cbc22c8594 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-14T00:04:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 200813.pdf: 4829624 bytes, checksum: 3b8e5808ed3e15c86b4227cbc22c8594 (MD5) Previous issue date: 1980 / CAPES / Neste trabalho foram analisados os perfis eletroforéticos dos sistemas oxidoredutases, transferases e hidrolases, e proteínas gerais, da hemolinfa de triatomíneos dos gêneros Triatoma, Panstrongylus e Rhodnius. Foi observado atividade enzimática de ODH, ADH, MDH, CAL. DH, SOR.DH, AcPh, AiPh, IPO, LAP, ALFA END BETA EST, na hemolinfa destes percevejos. Os resultados mostram que há monomorfismo para maioria dos sistemas de oxidoredutases e transferases. No entanto, na classe 3.1 de hidrolases, localizamos um polimorfismo em Rhodnius prolixus para um locus cujos alelos denominamos R (rápido), M (médio) e L (lento). São possíveis seis diferentes fenótipos como consequência dos vários arranjos com os três alelos. O dimorfismo sexual e a idade não alteram o padrão eletroforético. A alimentação em hospedeiros diferentes (Mus musculus, Cavia porcellus, Gallus gallus e Columba livia) não produziu variações qualitativas nos padrões eletroforéticos dos sistemas enzimáticos analisados. / In this work isoenzymes electrophoretic spots of oxidoredutases, transferases and hydrolases, and general proteins, in the haemolymph of Triatominae bugs: belonging to the genera Triatoma, Panstrongylus and Rhodnius were analysed. Enzimatic activity of ODH, ADH, MDH, GAL . DH, SOR. DH, AcPh, AiPh, IPO, LAP, alfa and beta EST in these bugs were observed. The results s how that there is usually monomorphism in the oxidoredutases and transferases systems. But in hydrolases' class 3. 1, polymorphism in R. prolixus for one locus wich allels we called R (quickly), M (rniddle) and L (sowly) were detected. There are 6 possible different phenotypes as a consequence of various arrangements with 3 alleles. The sexual dimorphism and age do not alter the electrophoretic pattern. Alimentation in different hosts does not produce qualitative variations in the electrophoretic patterns of the isoenzymatic systems analized.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000389724-Texto+Completo-0.pdf: 1507104 bytes, checksum: d66164492503d9b8044243e149198bf8 (MD5) Previous issue date: 2007 / Panstrongylus megistus is one of the most significant triatomine regarding the secondary transmission of Chagas’ disease in Brazil. In the southern states of Brazil this species occurs mainly in wild ecotopes, contrary to the states of Minas Gerais, Bahia and other areas in the northeast region where it is found in artificial ecotopes, presenting greater epidemiological value. This work aimed to evaluate the indexes of infection by Trypanosoma cruzi for P. megistus and for the Didelphis albiventris opossum, the most important wild host of the protozoan, as well as the feeding sources used by the triatomines. The area of gathering is inserted in a forest fragment, located at the Ponta Grossa neighborhood, in the periurban region of the Porto Alegre municipality. The collections occurred between October of 2005 and September of 2006, during which the annexes throughout the peridomicile and lairs were investigated, mainly for opossums, in wild environment. To find the lairs, “spool and line” and transect techniques were applied. The spool and line were installed on the opossums, which were set free in the end of the afternoon, and the liberated line was followed the next morning. Transects were delineated using the north – south orientation of the fragment, and lairs found within 5 meters of the stipulated line were considered. The infection of opossums was determined by xenodiagnosis and the T. cruzi sample identified with polymerase chain reaction (PCR). The analysis of the feeding sources for the collected triatomines was made through the precipitin test. The adult P. megistus were only captured in the peridomiciliar environment. From 33 individuals found, 28 were analyzed and 18 (64%) were infected by T. cruzi. The triatomines were observed from October to February, and December was the month of greatest occurence.The sampling of the natural environment indicated the presence of 61 lairs, being that 10 of them (16%) presented nymphs or traces of triatomines. The presence of the kissing bug was verified only in tree lairs, indicating an arborical preference by the species. In these lairs, 27 nymphs were found and 26 were analyzed, from which 19 (73%) were infected by T. cruzi. Among the 43 captured opossums, 39 were analyzed and 27 (69%) were infected by the protozoan. The precipitin analysis resulted in seven feeding sources used by the adult triatomines, they are: bird (13/28 – 46,4%), rodent (8/28 – 28,6%), opossum (4/28 – 14,3%), armadillo (3/28 – 10,7%), cat (3/28 – 10,7%), dog (3/28 – 10,7%) and lizard (2/28 – 7,1%); and six associated to the nymphs: bird (12/26 – 46,2%), rodent (9/26 – 34,6 %), opossum (7/26 – 26,9%), armadillo (1/26 – 3,8%), horse (1/26 – 3,8%) and ox (1/26 – 3,8%). The number of feeding sources indicates an alimentary eclecticism for nymphs and adults of P. megistus. The high indexes of infection by T. cruzi, in triatomines as well as opossums, and the presence of nymphs feeding on opossums within the hollow parts of tree trunks on the natural environment indicate that both individuals are responsible for the maintenance of the local wild cycle of the protozoan. The absence of peridomiciliar colonies and the similarity between the feeding sources of adults and nymphs show a low invasive tendency of the species at the local, possibly due to the state of preservation of the forest. / O triatomíneo Panstrongylus megistus é um dos mais importantes vetores na transmissão secundária da doença de Chagas no Brasil. Nos estados do sul, esta espécie ocorre principalmente em ecótopos silvestres, ao contrário de Minas Gerais, Bahia e algumas áreas da região nordeste, onde é encontrado em ecótopos artificiais, apresentando maior valor epidemiológico. O presente estudo buscou avaliar os índices de infecção por Trypanosoma cruzi em P. megistus e no gambá, Didelphis albiventris, o mais importante reservatório silvestre do protozoário, bem como as fontes alimentares utilizadas por estes insetos. A área de coleta está inserida em um fragmento de floresta, localizado no bairro Ponta Grossa, zona periurbana do município de Porto Alegre. As coletas ocorreram entre outubro de 2005 e setembro de 2006, onde foram investigados anexos no peridomicílio e tocas, principalmente de gambás, no ambiente silvestre. Para o encontro das tocas utilizaram-se as técnicas de carretel de rastreamento e transecto. Os transectos foram traçados no sentido norte – sul do fragmento, considerando tocas encontradas até 5 metros da linha estipulada. A infecção dos gambás foi determinada por xenodiagnóstico e a amostra de T. cruzi caracterizada por reação de polimerização em cadeia (PCR). A análise de fonte alimentar dos barbeiros coletados foi realizada através do teste de preciptina. Os P. megistus adultos foram capturados apenas no ambiente peridomiciliar. Dos 33 encontrados, 28 foram analisados e 18 (64%) estavam infectados por T. cruzi. Os triatomíneos foram observados de outubro a fevereiro e o mês de dezembro foi o de maior ocorrência.A amostragem do ambiente natural indicou 61 tocas, sendo que, no total, 10 (16%) apresentaram ninfas ou vestígios de barbeiros. A presença do barbeiro foi constatada somente em tocas de árvores, o que indica uma preferência arborícola da espécie. Nestas tocas foram obtidas 27 ninfas, onde 19 (73%), das 26 analisadas, estavam infectadas por T. cruzi. Entre os 43 gambás capturados, 39 foram analisados e 27 (69%) estavam infectados pelo protozoário. A análise de preciptina resultou em sete fontes alimentares utilizadas pelos barbeiros adultos: ave (13/28 – 46,4%), roedor (8/28 – 28,6%), gambá (4/28 – 14,3%), tatu (3/28 – 10,7%), gato (3/28 – 10,7%), cão (3/28 – 10,7%) e lagarto (2/28 – 7,1%); e seis associadas a ninfas: ave (12/26 – 46,2%), roedor (9/26 – 34,6 %), gambá (7/26 – 26,9%), tatu (1/26 – 3,8%), cavalo (1/26 – 3,8%) e boi (1/26 – 3,8%). O número de fontes alimentares encontradas indica o ecletismo alimentar tanto em ninfas como em adulto de P. megistus. Os altos índices de infecção por T. cruzi encontrados, tanto nos barbeiros como nos gambás, e a presença de ninfas alimentadas em gambás nos ocos de árvores do ambiente natural, indicam que ambos os indivíduos são responsáveis pela manutenção do ciclo silvestre do protozoário no local. A ausência de colônias peridomiciliares e a semelhança entre as fontes alimentares dos adultos e das ninfas mostram a baixa tendência invasiva da espécie no local, possivelmente devido ao estado de preservação da mata somado ao clima úmido.

T. cruzi compreende populações heterogêneas classificadas nas linhagens TCI e TCIIa-e. Neste estudo, foi caracterizado um grande número de isolados de mamíferos e vetores silvestres de diversas origens geográficas, além de isolados humanos da Amazônia. Análises filogenéticas baseadas em SSU rDNA e Cyb foram utilizadas para inferir relações entre linhagens e padrões biogeográficos. Além de análises ITS1 rDNA e RAPD para detectar polimorfismo intraespecífico. TCIIa circula em primatas e é transmitida por Rhodnius, no ecótopo arbóreo da Amazônia brasileira ocasionalmente infectando o homem. TCI é mais prevalente em macacos e no homem na Amazônia onde pode causar doença severa, como demonstramos no Nordeste. No Brasil, morcegos são infectados por três espécies de tripanossomas, incluindo uma nova linhagem de T. cruzi (TCbat). Foram caracterizados T. rangeli de macacos e morcegos. A linhagem TCIIc possui ampla distribuição no Brasil, associada com mamíferos e triatomíneos terrestres. Isolados TCIIa dos USA pertencem a uma linhagem, aparentemente ausente no Brasil. / T. cruzi comprises highly heterogeneous populations classified as TCI and TCIIa-e lineages. This study characterized large wild mammal and vector strains of various geographical origins, and human isolates from Amazonia. Phylogenetic analysis using SSU rDNA and Cyb genes inferred relationships among lineages and their biogeographic patterns. ITS1 rDNA and RAPD detected intraspecific polymorphism. TCIIa circulates in primates in the Brazilian Amazon, transmitted by Rhodnius in arboreal ecotopes sporadically infecting humans. TCI is the most prevalent in the Amazonian primates and humans, and can induce severe Chagas disease as demonstrated in a patient from Northeast Brazil. Bats of several biomes were found infected by three trypanosome species, including a new lineage of T. cruzi denominated TCbat. Isolates from monkeys and bats were also molecularly characterized. The lineage TCIIc showed to be widespread in Brazil, and was associated to terrestrial mammals and triatomines. TCIIa from the USA corresponds to an independent lineage, probably absent in Brazil.

Submitted by Automação e Estatística (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-07-02T21:19:59Z No. of bitstreams: 1 VicenteToscanoDeAraujoNeto_DISSERT.pdf: 1344963 bytes, checksum: 6addc1f91b5c4d2493f13722eb19b47b (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2018-07-05T13:54:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 VicenteToscanoDeAraujoNeto_DISSERT.pdf: 1344963 bytes, checksum: 6addc1f91b5c4d2493f13722eb19b47b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-05T13:54:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 VicenteToscanoDeAraujoNeto_DISSERT.pdf: 1344963 bytes, checksum: 6addc1f91b5c4d2493f13722eb19b47b (MD5) Previous issue date: 2018-03-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / A infecção pelo Tripanosoma cruzi em Canis familiaris e triatomíneos foi avaliada nos ambientes domiciliar e peridomiciliar de localidades rurais de alguns municípios do Estado do Rio Grande do Norte. Amostras de sangue de 43 cães foram coletadas nos municípios de Acari, Caicó, Caraúbas e Marcelino Vieira e avaliadas quanto a infecção pelo T. cruzi por meio de testes sorológicos e pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Inicialmente, testes sorológicos como o DPP® (Dual Path Platform, BioManguinhos/FIOCRUZ) e ELISA (Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay) foram realizados para verificar a presença de anticorpos anti-Leishmania. Para a detecção de anticorpos anti-T. cruzi foram realizadoso ELISA in house para IgM e IgG e a reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). As capturas de triatomíneos foram realizadas nas mesmas localidades em que foram coletadas as amostras de sangue de cão. A infecção foi avaliada por exame direto e/ou PCR. Na sorologia para T. cruzi, 16,3% dos cães apresentaram reatividade sugestiva de fase aguda e 11,6% de fase crônica. A sorologia para Leishmania foi reativa em 9,3% dos animais dos quatro municípios investigados, sendo mais elevado no município de Acari com 12,5% . A reatividade entre os testes para Leishmania e T. cruzi foi de 23,2% das amostras, relacionada provavelmente com sobreposição /de áreas endêmicas. Na detecção do kDNA pela PCR, 41,9% das amostras apresentam a banda 330pb, as quais 20,9% eram do município de Caraúbas, 9,3% de Marcelino Vieira, 9,3% de Acari e 2,3% de Caicó. Nesses municípios, ninfas e adultos de Triatoma brasiliensis, Triatoma pseudomaculata e Rhodnius nasutus foram capturados em ambientes peridomiciliar e/ou intradomiciliar. As análises do conteúdo intestinal avaliados pela PCR apontaram 59,5% de positividade. Os resultados apontam elevada taxa de infecção de cães e triatomíneos pelo T. cruzi em diferentes municípios do Rio Grande do Norte, o que pode favorecer a infecção em humanos e a manutenção da infecção ativa pelo T. cruzi no Estado. / The infection by Trypanosoma cruzi in Canis familiaris and Triatomines was evaluated in the home and peridomiciliary environment of rural communities in the State of Rio Grande do Norte. Blood samples from 43 dogs from rural areas in the municipalities of Acari, Caicó, Caraúbas and Marcelino Vieira were evaluated for T. cruzi infection by serological techniques and by Polymerase Chain Reaction (PCR) to identify T. cruzi kDNA. Serology was initially performed to identify anti-T.cruzi antibodies by ELISA (Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay) for IgM and IgG in house and the Indirect Immunofluorescence (IFR) reaction. The presence of anti-Leishmania antibodies with DPP® (Dual Path Platform, Bio-Manguinhos / FIOCRUZ) and ELISA were also used. The catches of triatomines were carried out in the same locations and in the same period in which the dog samples were collected and the infection evaluated by direct examination and/or PCR. The criterion for positivity in T. cruzi serology was the agreement between two different techniques, which resulted in 16.3% (7/43) of the samples suggestive of acute phase and 11.6% (5/43) of chronic phase. The reactive serology for Leishmania was 9.3% of the animals in the four municipalities studied, being more reactive in the municipalities of Acari. These results of reactivity for Leishmania and T. cruzi may be related to the overlap of endemic areas. In the identification of kDNA by PCR in blood samples from dogs, 41.9% (18/43) of the samples present the band 330pb, of these 6.8% (4/43) are in the municipality of Acari, 2.3% (1/43) in Caicó, 20.9% (9/43) in Caraúbas and 9.3% (4/43) in Marcelino Vieira. The catches of triatomines identified adults and nymphs of T. brasiliensis, T. pseudomaculata, R. nasutus and adults of P. lutzi in peridomiciliary and/or intradomiciliary environments of all the studied localities. The analysis of the intestinal contents evaluated by PCR found positivity of 78.5% (95/121) of the triatomines that cohabitated these environments with the dogs. The natural T. cruzi infection was identified in dogs and triatomines in all municipalities studied, probably helping to maintain active T. cruzi infection in the domiciliary area and increasing the risk of infection in the human population.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-07-23T17:05:59Z No. of bitstreams: 1 Carlos Gustavo Silva dos Santos Caracterização molecular....pdf: 1743940 bytes, checksum: 3a0047fb24b0ac8cad48dfd0a4088b8f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-07-23T17:06:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Carlos Gustavo Silva dos Santos Caracterização molecular....pdf: 1743940 bytes, checksum: 3a0047fb24b0ac8cad48dfd0a4088b8f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-23T17:06:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carlos Gustavo Silva dos Santos Caracterização molecular....pdf: 1743940 bytes, checksum: 3a0047fb24b0ac8cad48dfd0a4088b8f (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A Doença de Chagas é uma infecção parasitária causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi. As cepas de T. cruzi se constituem de uma população heterogênea, apresentando várias subpopulações. Essas populações circulam entre animais vertebrados domésticos, silvestres e humanos, além de insetos vetores. Devido a essas múltiplas relações, o T. cruzi demostra uma grande variedade biológica, genética, bioquímica e imunológica. A caracterização das cepas de T. cruzi pode utilizar várias metodologias que pode ter foco biológico, bioquímico, isoenzimático e molecular. Dentre essas, a molecular vem ganhando destaque devido a rapidez, sensibilidade e precisão do método. Deste modo, com a presente pesquisa o objetivo foi caracterizar molecularmente as cepas de Tripanosoma cruzi (Chagas 1909) isoladas em vetores e reservatórios na zona urbana de Salvador. Foram incluídas neste estudo amostras de T. cruzi isoladas de triatomíneos e reservatórios provenientes de diversas localidades da cidade de Salvador, capturados entre Julho de 2007 e Junho de 2011, perfazendo um total de 4 anos de amostragem. Adotamos a técnica de tipagem molecular do T. cruzi sugerida por Zingales et al. (2009) em sistema de eletroforese capilar. Das 930 amostras de triatomíneos avaliados, 99,35% da espécie Triatoma tibiamaculata, 482 amostras (52%) não estavam em condições de análise. Das 448 amostras passíveis de análises foram randomizadas 192 amostras (43%) para avaliação das linhagens de T. cruzi. Dentre as amostras analisadas, 20 (10,4%) não apresentaram sinal satisfatório na eletroforese capilar e foram excluídas, restando 172 amostras. Foi detectado T. cruzi em 21,5% das amostras de triatomíneos (n=37). A tipagem revelou o seguinte perfil nas amostras positivas: T. cruzi 1 (32,4%), T. cruzi 2 (59,4%), T. cruzi 3 (2,7%). Foi detectado também triatomíneos com múltipla infecção com linhagens diferentes de T. cruzi 1 & 2 (5,4%). Adicionalmente, foram avaliados 78 marsupiais, Didelphis spp. A taxa de infecção nos marsupiais foi de 29,4%, e nas amostras positivas foi observado o seguinte perfil molecular de tipagem pelo T. cruzi: T. cruzi 1 (30,4%), T. cruzi 2 (60,8%), T. cruzi 1 e 2 (8,6%). A alta taxa de infecção dos vetores e reservatórios avaliados pode ser efeito da fragmentação florestal, causada pela expansão urbana. O Triatoma tibiamaculata já foi associado à transmissão oral do T. cruzi por alimentos infectados no Brasil e a ocorrência de exemplares infectados desta espécie no ambiente intradomicíliar na cidade de Salvador é fator de risco para a transmissão da doença de Chagas para a população local. Os dados obtidos na tipagem molecular das cepas isoladas em Salvador demonstrou maior prevalência do T. cruzi 2 em seguida do T. cruzi 1 nos vetores e reservatórios avaliados. A presença de triatomíneos e marsupiais infectados, co-habitando e albergando diversas linhagens do T. cruzi em áreas de ocupação urbana é razão de alerta para os órgãos de vigilância em saúde locais. / Chagas disease is a parasitic infection caused by the flagellate protozoan Trypanosoma cruzi. The T. cruzi strains constitute a heterogeneous population, with several subpopulations. These populations move between domestic vertebrate animals, wildlife and humans, and insect vectors. Because of these multiple relationships, T. cruzi demonstrates great biological diversity, genetic, biochemical and immunological. The characterization of T. cruzi strains can use various methodologies that may have biological, biochemical, and molecular isoenzyme focus. Among these, the molecular been gaining attention due to speed, sensitivity and precision of the method. Thus, the present study the objective was to characterize molecularly strains of Trypanosoma cruzi (Chagas 1909) isolated in vectors and reservoirs in the urban area of Salvador. Were included in this study T. cruzi samples of insects and shells from different localities of the city of Salvador, captured between July 2007 and June 2011, a total of four years of sampling. We adopt molecular typing technique of T. cruzi suggested by Zingales et al. (2009) in a capillary electrophoresis system. Of the 930 samples evaluated triatomine 99.35% of Triatoma tibiamaculata, 482 samples (52%) were not in analytical conditions. Of the 448 samples amenable to analysis 192 samples were randomized (43%) for evaluation of T. cruzi strain. Among the samples analyzed, 20 (10.4%) had no satisfactory signal in capillary electrophoresis and were excluded, leaving 172 samples. T. cruzi was detected in 21.5% of samples of insects (n = 37). The typing revealed the following profile in positive samples: T. cruzi 1 (32.4%) T. cruzi 2 (59.4%) T. cruzi 3 (2.7%). Triatominae was also detected with multiple infections with different strains of T. cruzi 1 & 2 (5.4%). Additionally, we evaluated 78 marsupials, Didelphis spp. The infection rate in marsupials was 29.4%, and the positive samples was observed the following molecular profile of typing T. cruzi: T. cruzi 1 (30.4%), T. cruzi 2 (60.8% ), T. cruzi 1 and 2 (8.6%). The high rate of infection vectors and reservoirs can be evaluated effect of forest fragmentation caused by urban sprawl. Triatoma tibiamaculata has been associated with oral transmission of T. cruzi by infected food in Brazil and the occurrence of infected specimens of this species within domestic environments in the city of Salvador is a risk factor for the transmission of Chagas disease to the local population. The data obtained in the molecular typing of strains isolated from Salvador showed a greater prevalence of T. cruzi 2 then 1 of T. cruzi in vectors and reservoirs evaluated. The presence of infected bugs and marsupials, co-habiting and harboring various strains of T. cruzi in urban areas of occupation is warning reason for the oversight bodies in local health

T. cruzi compreende populações heterogêneas classificadas nas linhagens TCI e TCIIa-e. Neste estudo, foi caracterizado um grande número de isolados de mamíferos e vetores silvestres de diversas origens geográficas, além de isolados humanos da Amazônia. Análises filogenéticas baseadas em SSU rDNA e Cyb foram utilizadas para inferir relações entre linhagens e padrões biogeográficos. Além de análises ITS1 rDNA e RAPD para detectar polimorfismo intraespecífico. TCIIa circula em primatas e é transmitida por Rhodnius, no ecótopo arbóreo da Amazônia brasileira ocasionalmente infectando o homem. TCI é mais prevalente em macacos e no homem na Amazônia onde pode causar doença severa, como demonstramos no Nordeste. No Brasil, morcegos são infectados por três espécies de tripanossomas, incluindo uma nova linhagem de T. cruzi (TCbat). Foram caracterizados T. rangeli de macacos e morcegos. A linhagem TCIIc possui ampla distribuição no Brasil, associada com mamíferos e triatomíneos terrestres. Isolados TCIIa dos USA pertencem a uma linhagem, aparentemente ausente no Brasil. / T. cruzi comprises highly heterogeneous populations classified as TCI and TCIIa-e lineages. This study characterized large wild mammal and vector strains of various geographical origins, and human isolates from Amazonia. Phylogenetic analysis using SSU rDNA and Cyb genes inferred relationships among lineages and their biogeographic patterns. ITS1 rDNA and RAPD detected intraspecific polymorphism. TCIIa circulates in primates in the Brazilian Amazon, transmitted by Rhodnius in arboreal ecotopes sporadically infecting humans. TCI is the most prevalent in the Amazonian primates and humans, and can induce severe Chagas disease as demonstrated in a patient from Northeast Brazil. Bats of several biomes were found infected by three trypanosome species, including a new lineage of T. cruzi denominated TCbat. Isolates from monkeys and bats were also molecularly characterized. The lineage TCIIc showed to be widespread in Brazil, and was associated to terrestrial mammals and triatomines. TCIIa from the USA corresponds to an independent lineage, probably absent in Brazil.

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Dessa forma, novas abordagens são necessárias para caracterizar um táxon e análises citogenéticas têm se mostrado como importantes ferramentas para a caracterização taxonômica e o conhecimento evolução desses vetores. Assim, o presente trabalho teve como objetivos principais: caracterizar os subcomplexos Brasiliensis, Rubrovaria, Matogrossensis, Maculata e Rubrofasciata; auxiliar na revalidação de Triatoma bahiensis; avaliar o status específico de Rhodnius montenegrensis, Rhodnius sp. (afim de R. neglectus), T. pintodiasi, T. lenti e T. sherlocki; analisar a relação evolutiva da tribo Rhodniini; caracterizar o fenômeno de persistência nucleolar na subfamília Triatominae e analisar a variabilidade genética intraespecífica de T. sordida proveniente do Brasil. Os resultados obtidos permitiram caracterizar citogeneticamente as espécies do subcomplexo Brasiliensis; revalidar T. bahiensis e corroborar que essa espécie, bem como T. lenti e T. petrocchiae são membros do subcomplexo Brasiliensis; corroborar o status específico de T. lenti, T. sherlocki e T. bahiensis pela presença de barreira de isolamento reprodutivo pós-zigótica (desmoronamento do híbrido); sugerir que durante a muda imaginal, os triatomíneos cessam a meiose e estimulam a espermiogênese para diminuir os gastos energéticos e garantir a chance de paternidade; caracterizar citogeneticamente os subcomplexos Matogrossensis e Rubrovaria e distingui-los dos outros subcomplexos da América do Sul; reagrupar as espécies dos subcomplexos Matogrossensis, Sordida, Maculata e Rubrovaria, com base na disposição do DNAr 45S; propor a criação de um novo subcomplexo (subcomplexo T. vitticeps), com base em dados fenotípicos e genotípicos; caracterizar citogeneticamente o subcomplexo Maculata e diferenciar T. wygodzinskyi e T. arthurneivai; diferenciar T. rubrofasciata de todas as outras espécies de triatomíneos pela citotaxonomia e cariossistemática; corroborar, por meio da análise cariotípica e das espermátides, que a tribo Rhodniini é um grupo monofilético; caracterizar a evolução cromossômica no grupo pallescens e relacionar a perda de heterocromatina com a ocupação de diferentes ambientes; corroborar o status específico de R. montenegrensis (com base na posição do DNAr 45S) e de T. pintodiasi (com base no comportamento meiótico e na distância genética para o gene mitocondrial 16S); demonstrar que R. neglectus não apresenta variação cromossômica intraespecífica e descrever uma nova espécies do gênero Rhodnius, a saber, R. taquarussuensis sp. n.; discorrer sobre a evolução cariotípica nas tribos Rhodniini, Triatomini e Cavernicolini; confirmar o fenômeno de persistência nucleolar como uma sinapomorfia de Triatominae e, por fim, demonstrar que T. sordida do Brasil não apresenta variação cromossômica intraespecífica e corroborar o status desses vetores como T. sordida sensu strito. Esses resultados mostraram-se de extrema importância para elucidar várias questões sobre a biologia, taxonomia e evolução dos triatomíneos. / The taxonomy and systematics of triatomines are mainly based on morphological characters. However, there are very similar or even identical species (cryptic species) from the morphological point of view. Thus, new approaches are necessary to characterize a taxon and cytogenetic analyzes have been shown as important tools for the taxonomic characterization and the evolutionary knowledge of these vectors. Thus, the main objectives of this study were: characterize the Brasiliensis, Rubrovaria, Matogrossensis, Maculata and Rubrofasciata subcomplexes; assist in the revalidation of Triatoma bahiensis; evaluate the specific status of Rhodnius montenegrensis, Rhodnius sp., T. pintodiasi, T. lenti and T. sherlocki; analyze the evolutionary relationship of the Rhodniini tribe; characterize the nucleolar persistence phenomenon in the Triatominae subfamily and analyze the intraspecific genetic variability of T. sordida from Brazil. The results obtained allowed characterize cytogenetically the species of the Brasiliensis subcomplex; revalidate T. bahiensis and corroborate that this species, as well as T. lenti and T. petrocchiae are members of the Brasiliensis subcomplex; corroborate the specific status of T. lenti, T. sherlocki and T. bahiensis by the presence of a post-zygotic reproductive isolation barrier (collapse of the hybrid); suggest that during the imaginal molt, cell division is disrupted (reduce energy costs) and the differentiation into sperm is stimulated (ensure the paternity of the adult male); characterize cytogenetically the Matogrossensis and Rubrovaria subcomplexes and distinguish them from other subcomplexes of South American; regroup the species of the Matogrossensis, Sordida, Maculata and Rubrovaria subcomplexes, based on the arrangement of the 45S rDNA; propose the creation of a new subcomplex (T. vitticeps subcomplex), based on phenotypic and genotypic data; characterized cytogenetically the Maculata subcomplex and differentiate the T. arthurneivai and T. wygodzinskyi; differentiate T. rubrofasciata from all other triatomine species by cytotaxonomy and karyosystematics; corroborate, by means of karyotypic and spermatids analysis, the monophyly of the Rhodniini tribe; characterize the chromosomal evolution in the pallescens group and relate the loss of heterochromatin with the occupation of different environments; corroborate the specific status of R. montenegrensis (based on the position of the 45 rDNA) and T. pintodiasi (based on meiotic behavior and genetic distance for the 16S mitochondrial gene); demonstrate that R. neglectus does not present intraspecific chromosomal variation and describe a new species of the genus Rhodnius, namely, R. taquarussuensis sp. n.; discuss karyotype evolution in the Rhodniini, Triatomini and Cavernicolini tribes; confirming the nucleolar persistence phenomenon as a Triatominae synapomorphy, and, finally, demonstrate that T. sordida from Brazil does not present intraspecific chromosome variation and corroborate the status of these vectors as T. sordida sensu strito. These results were extremely important to elucidate several questions about the biology, taxonomy and evolution of triatomines. / FAPESP: 2013/19764-0