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Avaliação de rotas metabólicas como mecanismo de ação da atividade tripanocida de Lignano-Lactonas / Evaluation of metabolic route as trypanocidal action mechanism of Lignan-LactonesJuliana Saraiva 02 April 2007 (has links)
Neste trabalho o metilpluviatolido (1), o matairesinol (7), a hinoquinina (11), a cubebina (17) e seus respectivos derivados, providos de algumas modificações estruturais foram submetidos a testes in vitro para a determinação da atividade citotoxica e tripanocida. As substâncias não apresentaram atividade citotoxica significativa para a linhagem celular utilizada (LLC-MK2). Nos ensaios tripanocida in vitro o dimetoximorelensin (8) e 11 foram as substâncias que determinaram as maiores atividades tripanocida sobre as varias formas e cepas de T. cruzi utilizadas e juntamente com a cubebina foram submetidas os ensaios in vivo. As substâncias determinaram alterações significativas no curso da infecção chagásica experimental. No entanto apenas a 8 apresentou efeito semelhante ao do benzonidazol para ambas as cepas, sendo a cepa BOL em relação a cepa Y mais resistente as substâncias 11 e 17. Algumas rotas metabólicas foram avaliadas como mecanismo de ação das substâncias. As substâncias não apresentaram atividade inibitória sobre a enzima gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) de Trypanosoma cruzi, não induziram a produção de H2O2 e outros peróxidos, bem como não induziram a produção de óxido nítrico, tendo algumas inibindo esta produção. No entanto, apresentaram efeito inibitório sobre a respiração celular e efeito inibitório sobre a enzima ferro superóxido dismutase (Fe-SOD) de Trypanosoma cruzi. Adicionalmente foi demonstrado que em sistema livre de células as substâncias não apresentam atividade scavenger de radicais livres e que o tratamento com a substancia 8, avaliado por microscopia eletrônica, provoca alterações nucleares nas formas epimastigotas do parasita, sugerindo que a atividade tripanocida desta substancia envolva a inibição da síntese de DNA e RNA. Dessa forma, podemos concluir que a atividade tripanocida das varias lignano-lactonas avaliadas é promissora e que a produção de H2O2 e outros peróxidos, atividade inibitória sobre a enzima gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) de Trypanosoma cruzi, bem como a capacidade de indução de óxido nítrico pelos derivados bioativos são mecanismos que parecem não estar envolvidos na atividade tripanocida das substâncias. Além disso, que o efeito inibitório sobre a respiração celular parece contribuir para a atividade tripanocida e pode estar envolvido no mecanismo de citotoxicidade destas substâncias. Ainda, que o efeito inibitório sobre a enzima ferro superóxido dismutase (Fe- SOD) de Trypanosoma cruzi parece ser um dos principais mecanismos envolvidos na atividade tripanocida das substâncias. / In this work the compounds methylpluviatolide (1), matairesinol (7), hinokinin (11), cubebin (17) and its derivatives bearing some structural modifications were submitted to in vitro trypanocidal and citotoxic assays. The compounds do not show significant citotoxicity for the LLC-MK2 cells used. In the in vitro trypanocidal assays, the compounds more active against the different strains and forms of T. cruzi were the dimethoxymorelensin (8) and hinokinin (11). These compounds and cubebin (17) were submitted to in vivo trypanocidal assay. The compounds display significant modifications on the experimental chagasic infection. However, for both strains, Y and BOL, only the 8 displayed similar effect of the benznidazole. The BOL strain was more resistant than Y strain to treatment with 11 and 17. Some metabolic routes were evaluated as compounds action mechanism. The compounds do not showed inhibitory activity under enzyme glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) of Trypanosoma cruzi, they do not induced the production of H2O2 and others peroxides and also do not induced the nitric oxide production, instead some compounds decrease this production. On the other hand, they showed inhibitory effect under the cellular respiration and the enzyme iron superoxide dismutase (Fe-SOD) of Trypanosoma cruzi. In addition, it was demonstrated that on system cells free, the compounds do not showed free radicals scavenger activity and that the treatment with the compound 8, evaluated in electron microscopy, display nuclear alterations on epimastigotes forms, suggesting an inhibitory effect on T. cruzi DNA and RNA biosynthesis. In conclusion, the compounds trypanocidal activity is promising and the production of H2O2 and others peroxides, the activity under enzyme glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) of Trypanosoma cruzi, and the induction of nitric oxide production seem do not be involved in the trypanocidal and citotoxity activity of these group of compounds. The inhibitory effect under cellular respiration seems to be contributing for trypanocidal activity and may be involved on its citotoxic mechanism. Moreover, the inhibitory effect under the enzyme iron superoxide dismutase (Fe-SOD) of Trypanosoma cruzi seems to be the main mechanism involved on trypanocidal activity of these compounds.
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Efeito da administração de melatonina em ratos orquiectomizados e infectados com Trypanosoma cruzi / Effect of melatonin administration in rats orchietomized and infected with Trypanosoma cruziFabricia Helena Santello 13 October 2009 (has links)
Os esteróides gonadais exercem importantes influências no direcionamento da resposta imune do hospedeiro frente à infecção. Alterações decorrentes de sua ausência ou reposição podem significar em uma evolução distinta de determinada parasitose. Existe também uma relação entre a produção de melatonina e o ritmo de atividade do sistema imune. A resposta imune depende de uma interação entre inúmeros hormônios que irão agir sinergicamente com distintas células imunes. O objetivo desse trabalho foi investigar o efeito dos hormônios sexuais masculinos, através da orquiectomia, e da administração oral de melatonina sobre a resposta imune de ratos Wistar machos infectados com a cepa Y de Trypanosoma cruzi, durante a fase aguda da doença de Chagas experimental. Inúmeros parâmetros foram avaliados, entre eles: parasitemia, histologia cardíaca, peso dos animais e órgãos, linfoproliferação de timócitos e esplenócitos, quantificação de macrófagos, dosagem de óxido nítrico, citometria de fluxo para avaliação das populações de CD3+CD4+ e CD3+CD8+; e ensaios imunológicos como IFN-gama, IL-2, IL-6, IL-12, IL-10. Observou-se em todos os parâmetros analisados a ação sinérgica da melatonina e da orquiectomia sobre o sistema imune, favorecendo uma resposta positiva contra o parasita na fase aguda da infecção. Dessa forma, concluiu-se que a melatonina e a redução dos hormônios sexuais masculinos exerceram um papel imunoestimulador importante, que se refletiu em uma resposta mais efetiva do hospedeiro durante a infecção experimental. / Gonadal steroids exert important influence in the host immune response during infection. Changes resulting from the absence or replacement of these hormones may represent a distinct evolution of a particular parasite. There is also a relationship between melatonin production and the rhythmic activity of the immune system. The immune response depends on the interaction of many hormones that will act synergistically with other immune cells. The objective of this research was to evaluate the effect of male sex hormones through orchiectomy, and oral administration of melatonin on the immune response of male Wistar rats infected with the Y strain of Trypanosoma cruzi, during the acute phase of experimental Chagasdisease. Several parameters were evaluated among them: quantification of blood parasites, heart histology, body weight of animals and organs, lymphoproliferation of thymocytes and splenocytes, quantification of peritoneal macrophages, nitric oxide concentration, alterations in CD3+CD4+ and CD3+CD8+ lymphocyte populations by flow cytometry and immunological assays, as IFN-gama, IL-2, IL-6, IL-12, IL-10. It was observed in all parameters examined the synergistic action of melatonin and orchiectomy on the immune system, promoting a positive response against the parasite in the acute phase of infection. Thus, it was concluded that melatonin and the absence of male sex hormones exerted an important immunostimulating role, which reflected a more effective hosts response during the experimental infection.
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Potenciais ações terapêuticas da associação melatonina-meloxicam sobre a cardiomiopatia chagásica crônica em ratos wistar infectados pela cepa Y de Trypanosoma cruzi / Potential therapeutic actions of the melatonin-meloxicam association on the chagasic myocarditis in wistar rats infected with the y strain of Typanosoma. cruziLuiz Gustavo Rodrigues Oliveira 11 October 2013 (has links)
O sistema imune do hospedeiro acometido pela doença de Chagas tem sido alvo de importantes pesquisas que podem favorecer avanços no entendimento dos mecanismos patogênicos relacionados à doença. No presente estudo, investigamos possíveis ações benéficas provenientes de efeitos anti-inflamatórios e antioxidantes da associação terapêutica (melatonina/meloxicam) sobre a cardiomiopatia chagásica crônica. Foram analisadas citocinas e outros mediadores envolvidos no processo inflamatório característico da infecção. Além disso, níveis plasmáticos de Creatina Fosfoquinase MB (CK-MB), número de focos inflamatórios no tecido cardíaco e análise do peso relativo do coração foram avaliados como fatores preditivos da redução dos danos no miocárdio após os diferentes tratamentos. Como modelo experimental, foram utilizados ratos wistar infectados pela cepa Y de T. cruzi e tratados ou não com melatonina, meloxicam, ou associação de ambos. As células inflamatórias e o parasitismo tecidual cardíaco foram avaliados por meio de técnica histológica. A técnica ELISA foi utilizada para detecção e quantificação de citocinas pró-inflamatórias e modulatórias no miocárdio e nos soros dos animais experimentais. Também foram investigados os níveis de nitrito produzidos por macrófagos e por células cardíacas dos grupos experimentais pela reação de Griess. Os parâmetros foram investigados durante a fase: crônica (90, 120 e 180) dias após a infecção. O estudo poderá contribuir para um melhor entendimento das respostas imunológicas anti-T. cruzi, bem como da patogenia da disfunção cardíaca chagásica crônica. / The host immune system affected by Chagas disease has been the subject of important research that can promote advances in the understanding the pathogenic mechanisms related to the disease. In the present study, it was investigated the possible beneficial actions of the anti-inflammatory and antioxidant combination therapy (melatonin / meloxicam) on chronic Chagas cardiomyopathy. Some cytokines and other mediators involved in the inflammatory process characteristic of infection were analyzed. In addition, plasma levels of creatine phosphokinase MB (CK-MB), number of inflammatory foci in the cardiac tissue and analysis of the relative weight of the heart were evaluated as predictors of damage reduction in the myocardium after different treatments. As experimental model, we used Wistar rats infected with the Y strain of T. cruzi. Some groups were untreated and others treated with melatonin, meloxicam, or combination of both. Inflammatory cells and heart tissue parasitism were evaluated by histological technique. Some pro-inflammatory and modulatory cytokines were quantified by ELISA technique in the myocardium and serum from experimental animals. The production of nitrite by macrophages and cardiac cells of the experimental groups was also investigated through Griess reaction. The parameters were observed during the chronic stage: (90, 120, and 180) days after infection. The study may contribute to a better understanding of the anti-T. cruzi immunological responses, as well as the pathogenesis of chronic Chagas heart dysfunction.
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Análise de uma heme oxigenase funcional em Trypanosoma cruzi / Heme oxygenase analysis in Trypanosoma cruziCíntia Fernandes de Souza 21 February 2011 (has links)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da doença de Chagas, transmitida através de insetos vetores triatomíneos durante a alimentação no hospedeiro vertebrado. Os triatomíneos ingerem numa única alimentação cerca de 10 mM de heme ligado à hemoglobina. O heme é uma importante molécula no metabolismo dos organismos. Um mecanismo intracelular importante no controle de sua homeostase é a degradação enzimática pela Heme Oxigenase (HO) formando biliverdina (Bv), monóxido de carbono e ferro. Como esta enzima não está presente no genoma de T. cruzi, esse trabalho tem por objetivo identificar uma atividade funcional de HO neste parasito, uma vez que dados do nosso laboratório mostram a presença de biliverdina nas incubações dessas células com heme. No presente trabalho testamos o efeito do SnPPIX (inibidor da HO-1), CoPPIX (indutor da HO-1) e Bv sobre a proliferação da forma epimastigota do parasito. A adição de SnPPIX diminuiu a proliferação do parasito na tanto na ausência quanto na presença de heme. Quando a Bv foi adicionada à cultura esse efeito foi revertido; a Bv aumenta a proliferação celular na presença de heme. Por outro lado, a adição de CoPPIX não interferiu na proliferação. Posteriormente, mostramos através da técnica de immunoblotting, utilizando anticorpo monoclonal contra a HO-1, um aumento da expressão de uma proteína em resposta ao heme. Diferentemente das HO-1 já descritas que possuem massa molecular de 32 kDa, a única banda reconhecida pelo anticorpo apresenta 45 kDa. Analisamos também a expressão da HO-1 na presença de CoPPIX, SnPPIX e biliverdina, e somente o CoPPIX foi capaz de modular os níveis de expressão da HO-1. A análise estrutural através da técnica de imunocitoquímica mostrou uma maior expressão da enzima na presença de heme, e que a HO-1 de T. cruzi pode ter mais de uma localização, apresentando marcação citoplasmática e glicossomal. A fim de investigar a sequência da HO-1 de T. cruzi, o DNA genômico foi extraído para amplificação por PCR do gene da HO-1 utilizando oligonucleotídeos desenhados no genoma de T. cruzi. Os dois pares de oligonucleotídeos utilizados nao foram capazes de amplificar uma sequência equivalente a uma HO. Em seguida, utilizamos a técnica de imunoprecipitação, seguida de immunoblotting, com anticorpo anti-HO-1, com objetivo de concentrar a proteína alvo, e observamos um aumento significativo do imunocomplexo nas células tratadas com heme 300 mM, cerca de 2 vezes em relação ao controle. Dando seguimento à tentativa de identificação da HO-1 de T. cruzi, utilizamos a técnica de espectrometria de massa a partir de eletroforese unidimensional, que mostrou uma grande alteração do perfil protéico na presença de heme, mas futuros experimentos são necessários, como eletroforese 2D, para a identificação da proteína alvo / Trypanosoma cruzi, the ethiologic agent of Chagas disease, is transmitted through triatomine vectors during their blood-meal on vertebrate host. These hematophagous insects ingest blood about 6 to 12 times its original weight, reaching in a single meal about 10 mM heme bound to hemoglobin. Heme (iron protoporphyrin IX) is an important molecule in metabolism of all living organisms. One important intracellular mechanism to control heme homeostasis is its enzymatic degradation by heme oxygenase (HO). HO catalyzes the degradation of heme to biliverdin (Bv), carbon monoxide and iron. HO is absent in T. cruzi genome, thus we have been investigating the presence of a functional HO in this parasite, since our previous results showed a presence of biliverdin in heme-treated epimastigotes. In the present work, we evaluated the effect of SnPPIX, a HO-1 inhibitor, CoPPIX, a HO inducer, and Bv upon T. cruzi epimastigotes proliferation. The addition of SnPPIX decreased the parasite proliferation in the absence or in the presence of heme. When Bv was added to the culture this effect was reversed; Bv increases the parasite proliferation in the presence of heme. On the other hand, CoPPIX did not interfered on proliferation. Furthermore, we showed through immunoblotting, using an anti-HO-1 monoclonal antibody, an increase in the protein expression in heme-treated epimastigotes. Differently of described HO-1 that has a mass molecular of a 32 kDa, we showed a 45 kDa protein, the only band recognize by the HO-1 antibody. HO-1 expression analysis in the presence of CoPPIX, SnPPIX and biliverdin, showed that only CoPPIX was able to modulate its expression level. Ultrastructural immunocytochemistry analysis suggests a higher expression of the enzyme in heme-treated epimastigotes, and that T. cruzi HO-1 might have a dual distribution, since the anti-HO-1 antibody labeled both cytosol and glycosomes. In order to investigate the T. cruzi HO-1 gene sequence, we isolated genomic DNA from T. cruzi for PCR amplification using primers designed as from the parasite genome. Unfortunately, the two pairs of the designed oligonucleotides tested were unable to amplify a sequence equivalent to a HO-1. In order to isolate the target protein, immunoprecipitation was performed and subsequently immunoblotted with anti-HO-1 antibody. The immunocomplex level was two-fold higher in heme-treated cells. Following the attempt to identify a HO-1 in T. cruzi, we used mass spectrometry from unidimensional electrophoresis. We showed a significant protein profile modification in heme-treated epimastigotes, but further experiments will be necessary, such as mass spectrometry from bidimensional electrophoresis, for identification of the target protein
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Efeito da infecção por Trypanosoma vivax sobre a ingestão de alimento, conversão alimentar, ganho de peso e características da carcaça de ovinos infectados experimentalmente / Effect of Trypanosoma vivax infection on feed intake, feed conversion, weight gain and carcass characteristics of sheep experimentally infectedBrito, Parmênedes Dias de 30 August 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011-08-30 / Trypanosomiasis caused by Trypanosoma vivax, is a debilitating and often fatal
disease in domestic animals, which causes economic losses to cause growth retardation, abortion,
decreased productivity, high costs of treatment and even death of the severely affected animals.
This study aims avaluate the changes caused by T. vivax on performance and carcass characteristics
of sheep, with no racial pattern defined experimentally infected in Mossoró, Rio Grande do Norte,
Brazil. We used 10 ovines, male, without defined racial standard (WDRS), adults of average weight
20 kg, during the finishing stage, arranged in two treatments: control group and the group infected
with strain of T. vivax originating from the outbreak of Paraíba with inoculum of 1,3 x 105 viable
tripomastigostas. The animals were kept in two in sheds covered for 70 days in the same
management conditions and feeding. Clinical symptoms, temperature and parasitemia were
monitored daily. Weekly blood tests were performed, serum biochemistry, evaluation of feed intake
and weight measurements, and calculation of feed efficiency ratio and feed every 15 days. At the
end of the experiment, was the sacrifice of animals for evaluation of performance and carcass traits.
There was a negative effect of T. vivax in feed conversion and feed efficiency ratio (P <0.05). The
average weekly weight gain of the infected group was always lower when compared to the control
group. Inherent in the feed intake was observed that there was no difference (P> 0.05) in total feed
consumed weekly. Only the beef ribs and ham cuts showed a significant difference (P <0.05). But it
is noteworthy that the infected group showed weight of the palette, neck, back and saw, 9%, 16%,
24% and 25% lower compared to the control group. There was a negative effect on fat deposition
surface (P <0.05) and longissimus muscle area (P <0.05). Trypanosomiasis caused by T. vivax can
cause direct losses in animal performance of 19,72% and resulting in economic losses for rural
producers of up to 45,86% when deaths occur in the herd / Tripanossomíase provocada pelo Trypanosoma vivax, é uma enfermidade debilitante e
comumente fatal nos animais domésticos, que acarreta perdas econômicas por provocar crescimento
retardado, aborto, queda na produtividade, altos custos de tratamento e até morte dos animais
severamente afetados. O presente trabalho tem por objetivo avaliar as alterações causadas pelo T.
vivax sobre o desempenho e características da carcaça de ovinos, sem padrão racial definido
(SPRD), infectados experimentalmente, em Mossoró, Rio Grande do Norte, Brasil. Foram
utilizados 10 ovinos machos, SPRD, adultos de peso médio 20kg, na fase de acabamento, dispostos
em dois tratamentos, grupo controle e grupo infectado com cepa de T. vivax oriundo do surto da
Paraíba, com inóculo de 1,3 x 105 tripomastigostas viáveis. Os animais foram mantidos em duas
baias teladas, por 70 dias, em iguais condições de manejo e alimentação. Diariamente realizou-se
acompanhamento de temperatura, parasitemia e sinais clínicos. Semanalmente, foram realizados
exames hematológicos, bioquímico sérico, avaliação do consumo de ração e pesagens, além cálculo
de conversão alimentar e índice de eficiência alimentar a cada 15 dias. Ao final do período
experimental, foi realizado o sacrifício dos animais para avaliação do desempenho e das
características da carcaça. Houve efeito negativo do T. vivax na conversão alimentar e no índice de
eficiência alimentar (P<0,05). O ganho médio de peso semanal do grupo infectado sempre foi
inferior quando comparado ao grupo controle. Inerente ao consumo de ração foi observado que não
houve diferença (P>0,05) no total de ração consumida semanalmente. Somente os cortes cárneos
costilhar e pernil mostraram diferença significativa (P<0,05). Contudo vale ressaltar que o grupo
infectado apresentou peso da paleta, pescoço, lombo e serrote, 9%, 16%, 24% e 25% inferiores em
relação ao grupo controle. Houve um efeito negativo na deposição de gordura superficial (P<0,05) e
área de olho de lombo (P<0,05). A tripanossomíase causada pelo T. vivax pode causar perdas no
diretamente no desempenho animal de 19,72% e resultando em perdas econômicas para o produtor
de até 45.86% quando ocorre óbitos no rebanho.
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Tripanossomíase por Trypanosoma vivax em pequenos ruminantes: descrição de surtos e infecção experimental da doença / Trypanosome s by Trypanosome vivax in little ruminants: description of outbreaks and e experimental infection of the diseasePaiva, Erika de Souza 27 August 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-08-27 / This research has considered Trypanosome s outbreaks by T. vivax that occurred in four groups of little ruminants in three towns of Alto Sertão da Paraíba in 2008 and recreated the disease experimentally in caprines and ovines, in order to relate the cardiac and central nervous system injuries with the parasite. For the statistics analyses the Test of Tukey (SAS) and the Qui-square (Epi Info 6.0) were done. The natural infection evaluation was done in the first outbreak (outbreak 1) and second (outbreak 2) semester of 2008, when the clinic signs were registered, parasitemia, rectal temperature, PCV and body score. 20% of adult caprine and ovine from each flock were chosen. It was noticed that in the first outbreak, the parasitemia was significantly bigger than in the second outbreak for both species, suggesting an acute and chronic stage of the disease. There was also a significant relation between the parasitemia, the temperature, the PCV and the body score in caprines and ovines. The anemia is a more evident clinical signal of the disease, followed by weight loss. At the PCR checkup, it was noticed that all the animals checked had the parasite in the blood. To evaluate the relation between the cardiac injuries with the T. vivax, 14 male ovines were used, SRD, disposed in 3 groups, being G1 the animals evaluated up to the 20th dpi (day pos infection), the G2, animals evaluated up to the 90th dpi and the G3 which is the control group, corresponding to the days of the groups treated. The isolated from T. vivax was from the outbreak occurred from Paraiba, being inoculated 1 ml containing 107 tripomastigotes. Clinical exams were done, hematological and anatomic-pathological. The animals presented hyperthermia, hydrothorax, ascites and hidropericardium. To the necropsy, the heart from an ovine from G2 presented evidences of cardiac failure. In the histological exam, hyaline necrosis was noticed, miocarditis with infiltrated inflammatory, besides fibrosis, suggestive of cardiac failure. In the evaluation of the injuries at the SNC related to T. vivax 12 male caprines were used, SRD, also disposed in three groups: G1 (animals evaluated in the acute stage of the disease), G2 (animals evaluated at the chronic stage of the disease) and G3 (control group). The isolated from T. vivax was due to an outbreak from ovines in Paraíba, being inoculated 1 ml containing 1.25 x 105 tripomastigotes. Within this study, besides the clinical exams, hematological and anatomic-pathological exams, the biochemical exam of the LCR were also done. The animals presented tetany, bruxism, opisthotonos and severe hyperthermia. In the exam of the LCR, there was a significant increase of the proteins in general and cellularity, as well as glicorrhachia and tubidez LCR. In the histological exam, meningoencephalitis was noticed, characterized by the presence of infiltrated inflammatory, besides morules cells (cells of Mott). / Este trabalho avaliou surtos de tripanossomíase por T. vivax que ocorreu em quatro rebanhos de pequenos ruminantes em três municípios do alto sertão da Paraíba em 2008 e reproduziu a doença experimentalmente em caprinos e ovinos, a fim de relacionar as lesões cardíacas e do sistema nervoso central com o parasita. Para análise estatística foi realizado o teste de Tukey (SAS) e o Qui-quadrado (Epi Info 6.0). A avaliação da infecção natural foi realizada no primeiro (surto 1) e segundo (surto 2) semestre de 2008, quando foram registrados os sinais clínicos, parasitemia, temperatura retal, hematócrito e escore corporal. Foram escolhidos 20% de caprinos e ovinos adultos de cada rebanho. Foi observado que no surto 1, a parasitemia foi significativamente maior que no surto 2 para ambas as espécies, sugerindo uma fase aguda e crônica da doença. Houve também uma relação significativa entre a parasitemia, a temperatura, o hematócrito e o escore corporal em caprinos e ovinos. A anemia é o sinal clínico mais evidente na enfermidade, seguida da perda de peso. Ao exame da PCR, foram verificados que todos os animais avaliados possuíam o parasita no sangue. Para avaliar a relação das lesões cardíacas com o T. vivax foram utilizados 14 ovinos machos, SRD, dispostos em 3 grupos, sendo G1 os animais avaliados até o 20o dpi (dias pós-infecção), o G2, animais avaliados até o 90o dpi e o G3 que é o grupo controle, correspondente aos dias dos grupos tratados. O isolado do T. vivax foi proveniente do surto ocorrido na Paraíba, sendo inoculado 1 ml contendo 107 tripomastigotas. Foram realizados exames clínicos, hematológicos e anatomopatológicos. Os animais apresentaram hipertermia, hidrotórax, ascite e hidropericárdio. À necropsia, o coração de um ovino do G2 apresentou evidências de insuficiência cardíaca. No exame histológico, observou-se necrose hialina, miocardite com infiltrado inflamatório, além de fibrose, sugestivo de insuficiência cardíaca. Na avaliação das lesões no SNC relacionadas ao T. vivax foram utilizados 12 caprinos machos, SRD, também dispostos em três grupos: G1 (animais avaliados na fase aguda da doença), G2 (animais avaliados na fase crônica da doença) e G3 (grupo controle). O isolado do T. vivax foi decorrente de um surto em bovinos na Paraíba, sendo inoculado 1 ml contendo 1,25 x 105 tripomastigotas. Neste estudo, além dos exames clínicos, hematológicos e anatomopatológicos foram realizados também o exame bioquímico do LCR. Os animais apresentaram tetania, bruxismo, opistótono e hipermetria acentuada. No exame do LCR, houve um aumento significativo das proteínas totais e celularidade, bem como glicorraquia e tubidez do líquor. No exame histológico foi verificada meningoencefalite, caracterizada pela presença de infiltrado inflamatório, além de células morulares (células de Mott).
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Vias alternativas de transmissão do Trypanosoma vivax em caprinos infectados experimentalmente / Alternative routes of transfer of Trypanosoma vivax in experimentally infected goatsBezerra, Nicholas Morais 16 February 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-02-16 / Agência Nacional do Petróleo / Whereas some species of trypanosomatids are capable of being transmitted by sexual intercourse and colostrum, these ways of transmission have not been proved yet through the trypanosomiasis caused by trypanosoma vivax. The actual study aimed to research trough the polymerase chain reaction (PCR) the presence of DNA of T. vivax on semen from goats infected by experiments and in the colostrum of infected goats at the last trimester of gestation. It also investigates the possibility of transmission in goats from the parasite through sexual intercourse between the male and female infected goats to those proles by breastfeeding six male goats were used in the experiment to test sexual transmission, which were intravenously infected with 0.5 ml of blood containing approximately 1.25 × 10⁵ trypomastigotes of T. vivax and 6 male goats that were not infected for being a group control. It was collected some samples of semen to the T. Vivax DNA analysis through a polymerase chain reaction (PCR). Six not infected goats by T. vivax, the ones of the Saanen breed, were mated with infected males. In order to analyze the transmission of T. vivax through sexual intercourse, after mating, the goats were submitted to parasitological (blood smear) and molecular (PCR) tests. At the experiment to test the transmission by colostrum were used twelve goats of the Saanen breed were assessed at the trial transmission by colostrum. from this analysis, six goats were infected and the other six ones were analyzed as control to observe the presence of the parasite DNA in the colostrum collected after calving, and later, this colostrum was ministered to newborns from others healthy goats. Then, the same ones were submitted to parasitological and molecular tests. The detection of T. vivax DNA (TviCatL-PCR) on samples of semen by the PCR technique proved to be effective in all those animals and periods of observations. It was also observed the presence of the parasite DNA in some colostrum samples from goats. However, the results for the transmission trials on goats of the first experiment and on newborns breastfeed of the second experiment were negative. Despite the negatives results on transmission, we cannot eliminate the possibility of transmission by sexual intercourse and colostrum since others factors may be involved / Considerando que algumas espécies de tripanossomatídeos são capazes de serem transmitidas por via sexual e pelo colostro. Estas vias de transmissão ainda não foram comprovadas na tripanossomose provocado por Trypanosoma vivax, o presente estudo teve como objetivos, pesquisar através da reação em cadeia da polimerase (PCR) a presença do DNA do T. vivax no sêmen de caprinos infectados experimentalmente, no colostro de cabras infectadas no terço final da gestação, investigar a possibilidade da transmissão em caprinos do parasita pela via sexual do macho para a fêmea e das cabras infectadas para bezerros saudáveis através da amamentação. No experimento para testar a transmissão sexual foram utilizados seis caprinos machos, os quais foram infectadas por via intravenosa com 0,5 ml de sangue contendo aproximadamente 1,25 × 105 tripomastigotas de T. vivax e seis caprinos machos que não foram infectados para serem um grupo controle. Foram coletadass de amostras de sêmen, para a pesquisa do DNA do T. vivax no sêmen através da realização do exame de reação em cadeia da polimerase (PCR). Seis cabras da raça saanen não infectadas por T. vivax foram acasaladas com os machos infectados. Para avaliar a transmissão do T. vivax pela via sexual, após o acasalamento as cabras foram submetidas a exames parasitológicos (esfregaço sanguíneo) e moleculares (PCR). No experimento para testar a transmissão pelo colostro foram usadas doze cabras da raça saanen, onde seis foram infectadas e seis foram usadas como controle, para observar a presença do DNA do parasita no colostro coletado após o parto, posteriormente o colostro foi ministrado para filhotes recém-nascidos de outras cabras saudáveis, depois os mesmos foram submetidos a exames parasitológicos e moleculares. A detecção do DNA de T. vivax (TviCatL-PCR) em amostras de sêmen pela técnica de PCR revelaram-se positivas em todos os animais e em todos períodos de observação. Também foi observado a presença do DNA do parasita em algumas amostras de colostro das cabras. Porém os resultados para as possibilidades da transmissão mostraram negativas tanto nas cabras cobertas do primeiro experimento como dos filhotes amamentados do segundo experimento. Apesar dos resultados negativos na transmissão, não podemos anular a possibilidade de transmissão sexual e pelo colostro já que outros fatores podem estar envolvidos / 2017-06-19
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Participação das células T de memória e linfócitos CD4.CD25+Foxp3 (reguladores) nos mecanismos de resistência à infecção experimental pelo trypanosoma cruziNihei, Jorge Sadao January 2013 (has links)
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-10-11T17:20:48Z
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Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A infecção pelo Trypanosoma cruzi (T. cruzi) resulta em uma resposta imune que controla a predominância do parasito, mas é incapaz de eliminá-lo completamente, levando a persistência do parasito. A gravidade da doença de Chagas está correlacionada com a persistência do parasito nos tecidos musculares, neurais e intestinais. A função imunorregulatória das células T reguladoras em limitar a resposta imune poderia ser explorada no sentido de erificar a sua quantidade e qualidade no modelo experimental de infecção por T. cruzi. O principal objetivo deste projeto foi estudar a participação e influência dos linfócitos Treg sobre os mecanismos de resistência a infecção por T. cruzi, principalmente sobre a geração/manutenção de células T CD4+ e CD8+ memória efetora e central. Para tal, foi realizado um estudo comparativo da importância dos linfócitos T, e alterações das células Treg na infecção experimental por T. cruzi, de animais susceptíveis (C57Bl/6) e resistentes (BALB/c) nos dias 10, 20 e 30 apos a infecção. Adicionalmente, com o objetivo de investigar o papel das células T reguladoras, foi realizada a neutralização da citocina IL-2, com o tratamento in vivo com anti-IL-2 monoclonal (clone JES6-1A12), em animais C57Bl/6, durante a infecção com a cepa Tulahuen de T. cruzi. A análise da cinética de infecção (10, 20 e 30 dias) revelou que os animais resistentes (BALB/c) apresentaram maior expansão de células T efetoras CD4+ e CD8+ no baço e no tecido muscular esquelético. Os dados coletados demonstram que o tratamento com anti-IL-2 resultou em diminuição significativa da população de células T CD4+CD25+Foxp3+ nos animais infectados, comparado ao grupo infectado e tratado com imunoglobulina de rato. A diminuição das células Treg nestes animais resultou em alterações importantes nos mecanismos efetores como, por exemplo: o aumento da expansão das células T CD4+ e CD8+ efetoras e a produção de citocinas pró-inflamatórias e anti-inflamatórias no baço e tecido muscular esquelético. O reflexo destas alterações foi relacionado à diminuição da parasitemia e da mortalidade dos animais. Desta forma, as células Treg parecem exercer um controle da resposta imune efetora ao T. cruzi no sentido de tentar controlar a disseminação do patógeno e, ao mesmo tempo, impedir a destruição tecidual decorrente de uma exacerbação da resposta imune. Portanto, sugere-se que as células Treg estariam participando da resposta imune ao T. cruzi no sentido de modular a resposta imune efetora. / The Trypanosoma cruzi (T. cruzi) infection results in an immune response that controls the
parasite prevalence, but is unable to eliminate it completely, leading to infection persistence. The
severity of Chagas’ disease is correlated with the parasite persistence in the muscle, neural and
bowel tissues. The immunorregulatory function of regulatory T cells in limiting the immune
response could be exploited in order to verify its quantity and functional activities in an
experimental model of T. cruzi infection. The main objective of this project was to study the
participation and influence of Treg lymphocytes on the mechanisms of resistance to T. cruzi
infection, mainly on generation and maintenance of central/effector memory T cells. In the first
step, it was conducted a comparative study of the importance of T lymphocytes and alterations
of Treg cells in experimental T. cruzi infection in susceptible (C57BL/6) and resistant (BALB/c)
animals for 10, 20 and 30 days of infection. Additionally, in order to investigate the role of
regulatory T cells, it was performed the neutralization of the cytokine IL-2, with the in vivo
treatment with anti-IL-2 monoclonal antibody (clone JES6-1A12) of C57Bl/6 animals during
infection with Tulahuen strain of T. cruzi. The analysis of the kinetics of infection (10, 20 and 30
days) revealed that the resistant animals (BALB/c) showed greater expansion and effector
activity of the CD4+ and CD8+ splenic T cells and skeletal muscle tissue. The collected data
demonstrate that the treatment with anti-IL-2 resulted in significant reduction of
CD4+CD25+Foxp3+ T cells population in infected animals, compared to those infected and
untreated. The decrease of Treg cells in those animals resulted in significant changes in the
effector mechanisms such as: an increase in expansion of CD4+ and CD8+ T effector cells, and
production of pro-inflammatory and anti-inflammatory cytokines in the spleen and skeletal
muscle tissue. The reflection of these changes was verified by the decrease in parasitemia and
mortality of the animals. Thus, Treg cells seem to have control of the effector immune response
to T. cruzi in trying to control the spread of the pathogen and, at the same time, preventing
tissue destruction due to an exacerbation of the immune response. Therefore, it is suggested
that Treg cells would be participating in the immune response to T. cruzi by modulating the
effector immune response.
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Avaliação da atividade anti-trypanosoma cruzi in vitro e in vivo de derivados de vitamina KCastro, Murilo Fagundes de January 2012 (has links)
Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-10-18T18:15:09Z
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Murilo F. Castro. Avaliação da atividade,,, 2012.pdf: 1468986 bytes, checksum: 7b9241cb49aba27e80628022c24eb12a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-18T18:15:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Murilo F. Castro. Avaliação da atividade,,, 2012.pdf: 1468986 bytes, checksum: 7b9241cb49aba27e80628022c24eb12a (MD5)
Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A doença de Chagas (DC) é considerada um agravo ainda negligenciado. Atualmente, estima-se cerca de 10 milhões de pessoas infectadas pelo Trypanosoma cruzi, em todo o mundo, principalmente na América Latina. Sabe-se que alguns derivados de naftoquinonas podem agir sobre a tripanotiona redutase (TR), enzima específica dos tripanossomatídeos responsável pelo controle oxidativo celular. A inibição da TR favorece um processo oxidativo e morte do protozoário. Este trabalho teve como objetivo investigar o potencial anti-T.cruzi da fitomenadiona, (K1) e menadiona (K3), ambas vitaminas K derivadas de naftoquinonas. Com este propósito, o efeito tripanocida de K1 e K3 foi avaliado através de ensaios in vitro com as formas tripomastigotas e epimastigotas do T. cruzi nas cepas Colombiana e Y utilizando os testes de inibição, citotoxicidade dos compostos, ensaio de infecção em macrófagos, avaliação de alterações ultraestruturais, bem como ensaio em in vivo para avaliação na redução da parasitemia. Os valores de IC50 mais significativos para formas tripomastigotas do T. cruzi foram 27,55 μM para K1, 2,19 μM para K3 e 12,46 μM para o benzonidazol, a droga padrão. Contudo, o tratamento com a vitamina K1 não reduziu a parasitemia in vivo, que permaneceu alta assim como a do controle tratado com veículo. A vitamina K3 foi capaz de inibir ambas as cepas e diferentes formas do parasito em ensaios in vitro. No ensaio de infecção de macrófagos, a vitamina K3 em concentração de 21,4 μM inibiu de forma mais significativa a infecção de células em relação à droga padrão, em concentração de 38,4 μM. Apesar da citotoxicidade mais elevada, esta droga apresentou uma seletividade maior ao parasito do que a células de mamíferos e, em baixas doses, causou a redução na parasitemia in vivo. As avaliações ultraestruturais por microscopia eletrônica de transmissão evidenciaram alterações celulares induzidas por estes compostos, destacando-se a tumefação do cinetoplasto e a presença de vacúolos. A quantificação ultraestrutural na avaliação por microscopia eletrônica de varredura demonstrou alterações em cerca de 80% dos parasitos observados quando tratados com K3 a 5 μM. Nossos resultados demonstram o efeito anti-T. cruzi das moléculas testadas e sugerem que estas possam servir de base para o desenho de novos compostos candidatos a fármacos para o tratamento da doença de Chagas. / Chagas disease (AD) is considered a neglected disease. Currently, it is estimated 10
million people infected with Trypanosoma cruzi, worldwide, mostly in Latin America. It
is known that some derivatives of naphthoquinones can act on the trypanothione
reductase (TR), specific enzyme of trypanosomatids responsible for controlling
oxidative stress. Inhibition of TR favors an oxidative process and death of the
parasite. This work aimed to investigate the potential anti-T. cruzi of
phytomenadione, (K1) and menadione (K3), both vitamin K derived from
naphthoquinones. For this purpose, the trypanocidal effect of K1 and K3 was
evaluated by in vitro assays with epimastigotes and trypomastigotes of T. cruzi in
strains Colombian and Y using the inhibition tests, cytotoxicity of compounds of
infection in macrophages test, evaluation of ultrastructural alterations as well as in
vivo test to evaluate the reduction of the parasitemia. The best IC50 values to
trypomastigote forms of T. cruzi were 27.55 μM to K1 and 2.19 μM to K3, compared
to 12.46 μM of benznidazole, the standard drug. However, the treatment with vitamin
K1 did not reduce parasitemia in vivo, which remains high similar to the vehicletreated
control group. Vitamin K3 was able to inhibit both strains and different forms
of the parasite in in vitro assays. In macrophage infection assay, vitamin K3 at a
concentration of 21.4 μM significantly inhibited T. cruzi infection of cells when
compared to the standard drug (benznidazole) in a concentration of 38.4
μM. Although this compound had a high cytotoxicity, vitamin K3 showed greater
selectivity than the parasite mammalian cells, and in a low dose caused a reduction
in parasitemia in vivo. The ultrastructural evaluation by transmission electron
microscopy revealed cellular alterations induced by these compounds, especially the
swelling of the kinetoplast and the presence of vacuoles. The ultrastructural
quantification in the evaluation by scanning electron microscopy showed changes in
about 80% of parasites observed when treated with 5 μM K3. Our results
demonstrate the anti-T. cruzi molecules tested, suggesting that they may serve as a
basis for designing new drug candidate compounds for the treatment of Chagas
disease.
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Efeito da temperatura na infecção de Rhodnius prolixus por Trypanosoma cruzi e Trypanosoma rangeliRodrigues, Juliana de Oliveira January 2013 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-12-12T12:53:00Z
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Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou / A temperatura ambiental afeta diversos processos bioquímicos, fisiológicos e comportamentais, especialmente em animais ectotérmicos. Mudanças nesse parâmetro podem alterar o fitness de insetos vetores e sua distribuição no ambiente, modificando consequentemente, a dinâmica de transmissão de doenças. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da temperatura no desenvolvimento da infecção de Trypanosoma cruzi e Trypanosoma rangeli em Rhodnius prolixus. Os ensaios com T. rangeli foram desenvolvidos com parasitos submetidos a dois tratamentos.
T. rangeli T1 foram obtidos através de passagens em LIT por três meses. T. rangeli T2 foram mantidos em LIT por um mês após uma passagem triatomíneo-camundongo.
Inicialmente, o crescimento dos parasitos em meio de cultura submetidos a diferentes temperarturas (21, 24, 27 e 30°C) foi avaliado. O crescimento do T. cruzi foi termodependente, com um aumento de 28 vezes da população mantida em 30°C ao final de sete dias. A mortali dade ficou abaixo dos 10%, exceto para os parasitos mantidos a 21°C, onde esse valor ficou próximo aos 20%. Para os dois tratamentos de T. rangeli , o crescimento máximo foi observado a 27°C. Entretanto, as populações de T. rangeli T2 cresceram mais do que as de T. rangeli T1 e apresentaram taxas de mortalidade mais baixas, em torno de 5%. O próximo objetivo foi avaliar diferentes parâmetros fisiológicos de R. prolixus infectados pelos parasitos e submetidos às mesmas condições de temperaturas. A infecção por T. cruzi prolongou o período intermudas em todas as temperaturas e reduziu o número de insetos aparentemente saudáveis em 20%. A virulência do parasito foi dependente da temperatura e do estado nutricional dos insetos.
T. rangeli T1 foi mais virulento do que T. rangeli T2, particularmente nas temperaturas mais baixas.
Finalmente, o crescimento do T. cruzi no inseto foi quantificado por qPCR e câmara de Neubauer. Os resultados, ainda preliminares, corroboraram com os dados do crescimento do parasito em LI T. De maneira geral, os resultados sugerem que os dois parasitos podem ser patogênicos ao vetor na natureza dependo das condições a que são submetidos.
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