Comparamos os resultados obtidos por meio de sorotipagem com o painel de mAbs acrescido dos mAbs para os sorotipos 7 e 10 , produzidos pelo Instituto Adolfo Lutz com os resultados obtidos pela ribotipagem. O estudo incluiu 95 cepas pertencentes ao sorogrupo B que expressaram o sorotipo 4, representados pelos fenótipos B:4; B;4,1; B:4,7; B:4,10 e B:4,21. A ribotipagem utilizando a endonuclease de restrição C/a\\ dividiu as cepas em dez ribotipos e a endonuclease EcoRV em outros cinco padrões. Quando os padrões de bandas foram combinados, formaram-se 12 ribotipos (Rb A-L). Ribotipos com 85% de similaridade entre as bandas foram combinados em grupos, Rb-1, incluindo os ribotipos C e D (sorotipo B:4,10) e Rb-2, incluindo os ribotipos A, B, E, F e I (sorotipo B:4,7). O Rb-H (sorotipo B:4,1) e Rb-G (sorotipo B:4,21) representaram distintos ribotipos diferindo dos dois primeiros grupos por mais de 25% de diferença entre as bandas. Nossos resultados sugerem que a caracterização de múltiplos epítopos de sorotipo podem melhorar a correlação entre o método fenotípico e genotípico para cepas de meningococo sorogrupo B. / The purpose of this study was to assess the correlation between phenotypic- and genotypic- methods for typing Neisseria meningitidis. We compare the results obtained by serotyping of PorB epitopes using an expanded panel of monoclonal antibodies (MAb) including MAb 7 and MAb 10, with results obtained by RFLP of rRNA genes (ribotyping). The study included a total of 95 serogroup B strains that express epitope 4 representing the phenotypes B:4; B:4,1; B:4,7; B:4, 10, and B:4,21. The ribotypes obtained using C/ai or EcoRV endonucleases divided the strains into ten and five different patterns, respectively. When banding patterns for the two enzymes were combined, twelve unique ribotypes were obtained (Rb A-L). Particular ribotypes with ≥ 85% identical bands were combined into groups, RbGroup1, including Rbs C and D (B:4,10 strains), and RbGroup-2 including Rbs A, B, E, F, and I (B:4,7 strains). The Rb-H (B:4,1 strains) and Rb-G (B:4,21 strains) represent distinct ribotypes differing from the first two groups by more than 25% of band mismatches. The phenotypic characterization of more than one PorB VR epitope on the same PorB protein was able to divide our collection of B:4 strains in groups of strains genetic related. This additional characterization of PorB epitopes improved the correlation between these two methods of typing N.meningitidis.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:37:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_talita_roos.pdf: 1034703 bytes, checksum: 735f21674158cdd6ec6435bbd7c8bd5f (MD5) Previous issue date: 2009-11-09 / The immunization of livestock as a means to control infectious diseases began more than a century ago. It has however aroused new interest in view of new demands by consumer markets, restricting the use of antibiotics and other chemotherapeutical drugs. In addition, more effective vaccines, with fewer side effects, have been developed through the use of adjuvants and purified antigens. Probiotics modulate the immune response, enhancing the effect of vaccines, which opens up a new perspective on their possible uses. Bacillus cereus var. Toyoi and Saccharomyces boulardii are resistant to environmental conditions, which facilitate their use in the production, conservation and management of animal feed. The objective of the present study was to evaluate the immunomodulatory effects of Bacillus cereus var. Toyoi and Saccharomyces boulardii on the immune response of animals both during and after the interruption of its administration. Two experiments were conducted, one with mice and the other with sheep. In each experiment, the animals were divided into three groups, one supplemented with B. cereus var. Toyoi, another with S. boulardii and the third was the control group, i.e., without supplementation. As experimental model we used an inactivated vaccine against BoHV-5. Seroconversion and neutralization were used to evaluate the humoral immune response and cytokine expression in splenocytes and peripheral leukocytes, so as to evaluate the cellular response. All of the groups showed increased levels of antibodies due to vaccination. The calves fed probiotics had higher antibody levels than the control group both during supplementation and after its suspension. In the supplemented animals a change was observed in the profile of the immune response in Th1 as compared to Th2. This effect was observed through the data represented by the cytokine profile, as well as through the IgG isotype. Each probiotic had a distinct profile of cytokines, suggesting that the B. cereus var. Toyoi and S. boulardii mediated immunomodulation have distinct mechanisms of action. These data suggest that the use of B. cereus var. Toyoi and S. boulardii probiotics are effective modulators of vaccine response, and are a viable alternative for increasing the efficiency of commercial vaccines. / A imunização dos animais domésticos para controlar as doenças infecciosas, iniciada há mais de um século, tem despertado novo interesse em vista das restrições impostas pelos mercados consumidores ao uso de antibióticos e outros quimioterápicos. Vacinas mais eficientes e com menores efeitos colaterais foram desenvolvidas mediante a utilização de adjuvantes e antígenos purificados. Probióticos modulam a resposta imune, potencializando o efeito das vacinas, o que abre uma nova perspectiva de sua utilização. Bacillus cereus var. Toyoi e Saccharomyces boulardii resistem às condições ambientais, o que facilita seu uso na elaboração, conservação e administração de rações para animais. O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos imunomoduladores de Bacillus cereus var. Toyoi e Saccharomyces boulardii na resposta imune em animais durante e após parar sua administração. Foram realizados dois experimentos, um com camundongos e outro em ovinos. Em cada experimento os animais foram divididos em três grupos, sendo um suplementado com B. cereus var. Toyoi, outro com S. boulardii e o terceiro sem suplementação grupo controle. Como modelo experimental foi utilizado uma vacina inativada contra BoHV-5. Foram utilizados, soroconversão e soroneutralização, para avaliação da resposta imune humoral e expressão de citocinas, de esplenócitos ou leucócitos periféricos, para avaliação da resposta celular. Todos os grupos mostraram aumento dos níveis de anticorpos em razão da vacinação. Os animais suplementados apresentaram níveis de anticorpos superiores, quando comparados ao grupo controle, durante a suplementação assim como após sua suspensão. Nos animais suplementados foi observada uma alteração no perfil da resposta imune de Th2 para Th1 este efeito observado através dos dados representados pelo perfil de citocinas, bem como pelo isotípo de IgG. Cada probiotico apresentou um perfil distinto de citocinas, sugerindo que a imunomodulção mediada por B. cereus var. Toyoi e S. boulardii possuem mecanismos distintos. Estes dados sugerem que a utilização de probioticos a base de B. cereus var. Toyoi e S. boulardii são eficientes moduladores da resposta vacinal, sendo uma alternativa viável a incrementar a eficiência de vacinas comercias.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_michel_quevedo_fagundes.pdf: 823551 bytes, checksum: 36c28ca5bd55c0c0403915db568e103e (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / Leptospirosis is considered a global problem regarding both veterinary medicine and public health. In Brazil, the disease has greater impact in vulnerable populations, living in slums of great cities, where high morbidity and mortality occur. This situation requires the establishment of new intervention policies in order to reduce cases. Available vaccines to prevent the disease in humans and animals are notoriously underachieving, producing short term, serovar specific protection and collateral effects. New strategies are being employed to develop novel vaccines against leptospirosis, such as the characterization of recombinant proteins, construction of DNA vaccines, and use of alternative adjuvants. Surface exposed proteins LipL32, LigB, and LigA are highly conserved and found only in pathogenic serovars, therefore these were selected to be used in this study. LigA and LipL32 genes were cloned into the pVAX eukaryote expression vector to be used as DNA vaccines. rLigBNI and rLipL32 were assessed as subunit recombinant antigens using propolis as a co-adjuvant. Hamsters were immunized and the response was assessed through qPCR, ELISA, and lethal challenge. DNA vaccine containing the LipL32 gene, and the subunit rLigBNI vaccine had the highest results in the immune-stimulation assays. Furthermore, these imunogens were able to significantly protect animals against lethal challenge, demonstrating their potential for leptospirosis vaccine development. / A leptospirose é considerada um problema global para a saúde pública e veterinária. No Brasil, a enfermidade possui maior impacto em populações vulneráveis, as quais estão distribuídas nas favelas das grandes cidades, onde tradicionalmente ocorre elevada morbidade e mortalidade. Desta forma, torna-se necessário o estabelecimento de novas efetivas de intervenção para a redução dos casos. As vacinas disponíveis para a prevenção da enfermidade em humanos e animais são comprovadamente limitadas, já que induzem imunidade pouco duradoura e sorovar-específica, além de provocarem efeitos colaterais. Novas estratégias para o desenvolvimento de uma vacina contra a leptospirose têm sido empregadas, como a caracterização de proteínas recombinantes, a construção de vacinas de DNA e o teste de novos adjuvantes para modulação da resposta imune. Neste contexto, as proteínas de membrana externa LipL32, LigB e LigA foram selecionadas para este trabalho, pois são conservadas e encontradas somente entre sorovares patogênicos de Leptospira. Assim, os genes lipL32 e ligA foram clonados no vetor de expressão em eucariotos pVAX para a obtenção de vacinas de DNA, e as proteínas rLigBNI e rLipL32 foram testadas utilizando o própolis como co-adjuvante na forma de vacinas de subunidade. Após a produção das vacinas, hamsters foram vacinados e a resposta imune foi avaliada através de ELISA, qPCR e desafio. Dentre as preparações testadas, a resposta imune teve níveis mais elevados e significativos para a vacina de DNA contendo o gene lipL32 e para a vacina de subunidade de LigBNI. Além disso, estas vacinas foram capazes de proteger significativamente os animais contra o desafio homólogo, mostrando o potencial destas formulações para o desenvolvimento de uma vacina recombinante para a leptospirose.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_silvana_beutinger_marchioro.pdf: 842737 bytes, checksum: 032d940f684cacf69ead32db6268d1cc (MD5) Previous issue date: 2013-06-27 / Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae) is the causative agent of enzootic pneumonia (EP) in pigs, a chronic respiratory disease characterized by low mortality and high morbidity, responsible by significant economic losses in the pig industry worldwide. M. hyopneumoniae infection can be controlled by optimizing management practices and housing conditions, as well as with the use of antibiotics and vaccination. Commercial vaccines consist of adjuvanted inactivated whole cell preparations, and are frequently used worldwide in countries with an intensive pig production. The currently available vaccines are beneficial from an economic point of view, but they do not provide a sustainable control of the disease. They cannot prevent colonization of M. hyopneumoniae in the respiratory tract, and do not significantly reduce the transmission of the pathogen. Also, little is known about the exact mechanisms of the partial protection they induce. In this context, the general aims of this thesis were to assess the mode of the action of an existing commercial vaccine on the one hand and to develop and evaluate a new recombinant vaccine against M. hyopneumoniae on the other hand, looking for more effective strategies for disease control. For development of the recombinant vaccine a chimeric protein was developed and evaluated. This protein was based on proteins known to play a role in the adhesion and that were able to induce an immune response and a partial protection against M. hyopneumoniae infection when evaluated individually. From the studies described in this thesis, it can be concluded that intramuscular vaccination with an adjuvanted bacterin is able to stimulate both systemic and local immune responses, and that the new recombinant vaccine developed against EP might be promises strategies to control the disease. / Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyopneumoniae) é o agente etiológico da pneumonia enzoótica (EP) suína, uma doença crônica de baixa mortalidade e alta morbidade, responsável por perdas econômicas significativas na cadeia suinícola em todo o mundo. A infecção por M. hyopneumoniae pode ser controlada pela otimização das práticas de manejo e das condições de alojamento, bem como com o uso de antibióticos e vacinação. Vacinas comerciais consistem em preparações de células inteiras inativadas do agente, fornecidas com adjuvante, e são frequentemente utilizadas em todo o mundo. As vacinas disponíveis atualmente são benéficas do ponto de vista econômico, mas elas não fornecem um controle sustentável da doença. Elas não previnem a colonização do M. hyopneumoniae no trato respiratório, e não reduzem significativamente a transmissão do agente patogênico. Além disso, pouco se sabe sobre os mecanismos exatos envolvidos na proteção que elas induzem. Desta forma, os objetivos gerais desta tese foram avaliar o modo de ação de uma vacina comercial existente e desenvolver e avaliar uma nova vacina recombinante contra M. hyopneumoniae, buscando estratégias mais eficazes para o controle da doença. Para o desenvolvimento desta vacina recombinante uma proteína quimérica foi produzida, baseada em proteínas envolvidas na adesão do agente e que foram capazes de induzir uma resposta imune e uma proteção parcial contra a infecção por M. hyopneumoniae quando avaliadas individualmente, e avaliada seu potencial protetor em teste de infecção experimental de suínos. A partir dos estudos descritos nesta tese, pode-se concluir que a vacinação intramuscular com uma bacterina comercial é capaz de estimular tanto uma resposta imune sistêmica quanto local, e que a nova vacina recombinante desenvolvida contra a EP pode ser considerada uma estratégia promissora para o controle da doença.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_andrea_silva_rezende.pdf: 962700 bytes, checksum: df4059413746b2684f76e1ecfa28b49b (MD5) Previous issue date: 2013-08-23 / The caseous lymphadenitis (CLA) is a disease that affects mainly small ruminants and is caused by the bacteria Corynebacterium pseudotuberculosis. In Brazil the clinical prevalence CLA is 30%. The control measures are vaccination and diagnosis of infected animals. Currently, commercial vaccines are not completely effective, the same occur with the methods of diagnosis, because the medical signs are not immediately detectable. By sequencing and additional proteomic analysis, several targets were identified, including cp1002_0369 gene, which codifies a secreted protein which is probably described as a potentially antigenic phosphoesterase, that can subsequently be used in the development of recombinant vaccines and development of diagnostic tests. This protein was used as recombinant and it was tested as subunit vaccine and as a DNA vaccine and also to develop a diagnostic test based on ELISA. For this, the cp1002_0369 gene was cloned in the eukaryotic expression vector pTARGET and in a vector of expression in prokaryotes pAE. The recombinant protein CP0369 was purified and evaluated as a recombinant vaccine associated with both of the adjuvants xanthan and aluminum hydroxide and then measured in an indirect ELISA with sheep serum. The immunoprotective potential was assessed in a murine model by challenge with 104 CFU of strain Mic-6 of C. pseudotuberculosis in 9 vaccinal groups. The vaccine formulation that increased the survival rate of animals after challenge was the group containing the recombinant protein (rCP0369 + aluminum hydroxide). The ELISA for diagnostic of CL was evaluated by ROC analysis of 182 sera and showed a sensitivity and specificity of 90% and 75.6%, respectively. The format of ELISA assay (ELISA-rCP0369) can be used in the diagnosis of LC sheep herds with a good sensitivity index. However, new vaccine strategies employing the CP0369 protein will be evaluated to improve the effectiveness of the vaccine. / A linfadenite Caseosa (LC) é uma doença que acomete principalmente pequenos ruminantes sendo causada pela bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis. No Brasil a prevalência clínica da LC é de 30%. As medidas de controle são a vacinação e o diagnóstico dos animais infectados. As vacinas disponíveis comercialmente não são totalmente eficazes, o mesmo ocorre com os métodos de diagnóstico, pois os sinais clínicos não são perceptíveis de imediato. Através de sequenciamento e da análise proteômica complementar foram identificados vários alvos, dentre eles o gene cp1002_0369, que codifica para uma proteína secretada sendo esta descrita provavelmente como uma fosfoesterase, potencialmente antigênica, a qual pode vir a ser utilizada no desenvolvimento de vacinas recombinantes e no desenvolvimento de testes de diagnóstico. Esta proteína foi utilizada na forma recombinante como vacina de subunidade e como vacina de DNA e também para o desenvolvimento de um teste de diagnóstico baseado em ELISA. Para isso o gene cp1002_0369 foi clonado no vetor de expressão em eucariotos pTARGET e de expressão em procariotos pAE. A proteína CP0369 recombinante foi purificada e avaliada como vacina recombinante associada aos adjuvantes xantana e hidróxido de alumínio e em um ELISA indireto com soros de ovinos. O potencial imunoprotetor foi avaliado em modelo murino através de desafio com a 104 UFC da cepa Mic6 de C. pseudotuberculosis em 9 grupos vacinais. A formulação vacinal que aumentou a taxa de sobrevida dos animais após o desafio foi o grupo contendo a proteína recombinante (rCP0369 + hidróxido de alumínio). O ELISA para diagnóstico de LC foi avaliado através da análise ROC em um total de 182 soros revelou uma sensibilidade e a especificidade de 90% e 75,6%, respectivamente. O formato de ELISA (ELISA-rCP0369) pode ser utilizado no diagnóstico de LC em rebanhos ovinos com bom índice de sensibilidade. No entanto, novas estratégias vacinas empregando a proteína CP0369 serão avaliadas para melhorar a eficácia da vacina.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_juliano_lacava_pereira.pdf: 1194037 bytes, checksum: 9990bc185909cc08288cd6230c0a9be6 (MD5) Previous issue date: 2011-07-18 / Several recombinant proteins have been studied as immunocontraception agents in mammals, among them the Gonadotropin-releasing hormone (GnRH). Nevertheless, due to its low molecular weight, GnRH needs to be conjugated with a carrier protein. Among the eukaryotic platforms the yeast Pichia pastoris, which are able of promoting post-translational modifications to expressed recombinant protein. The aim of this study was to clone and express the GnRH/LTB chimera in P. pastoris, and to test it as an immunocontraceptive. In order to accomplish this, sequences of P. pastoris codons usage were synthesized and cloned into the plasmid pPICZαB. The plasmid containing the sequence were propagated and transformed into yeast by electroporation. The transformed colonies were selected by resistance to antibiotics and confirmed by Colony Blotting. The selected clone was cultivated, induced and the protein expressed in supernatant. The protein was concentrated and used as a vaccine antigen. BALB/c males mice were vaccinated twice 15 apart with 100µg de LTB/GnRH adjuvanted with aluminum hydroxide. The immune response was evaluated by ELISA, showing seraconversion in vaccinated animals. The sperm concentration in the control group was 16.93 x 107 and 8.00 x 107 sperm/mL in the immunized group. Vaccination caused a reduction of spermatogenesis (p < 0,05), vacuolization and disorganization of the seminiferous tubules. We concluded that the yeast was able to express the recombinant protein LTB/GnRH, and it demonstrated immunocontraceptive potential in mice. / Diversas proteínas recombinantes estão sendo pesquisadas para utilização na imunocontracepção de mamíferos. Entre elas, o hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH), entretanto devido ao seu baixo peso molecular há necessidade de associá-lo a uma molécula carreadora. Dentre as plataformas eucarióticas, encontra-se a levedura Pichia pastoris que tem possibilitado expressão e modificações pós-traducionais das proteínas recombinantes. O objetivo deste trabalho foi clonar e expressar a quimera LTB/GnRH em P. pastoris, visando sua utilização como imunocontraceptivo. Para tanto, sequências com os códons preferenciais de P. pastoris da proteína foram sintetizadas e clonada no plasmídeo pPICZαB. O plasmídeo foi propagado e transformado na levedura por eletroporação. As colônias transformadas foram selecionadas por resistência antibiótica e confirmadas por Colony Blotting. O clone selecionado foi cultivado e após indução expressou a proteína no sobrenadante. A proteína foi concentrada e utilizada como antígeno vacinal. Camundongos BALB/c machos foram vacinados com duas doses de 100µg de LTB/GnRH adsorvidas em hidróxido de alumínio com intervalo de 15 dias. A resposta imune foi avaliada por ELISA, mostrando soroconversão nos animais imunizados. A concentração espermática no grupo controle foi 16,93 x 107 e no grupo imunizado 8,00 x 107 espermatozóides/mL. A imunização induziu a redução da espermatogênese (p < 0,05), vacuolização nos túbulos seminíferos e desorganização testicular. Concluiu-se que a levedura foi capaz de expressar a proteína LTB/GnRH recombinante e a mesma apresentou potencial imunocontraceptivo em camundongos.

Orientador: Marcelo Lancellotti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T07:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Varela_JuliaNogueira_M.pdf: 1464845 bytes, checksum: 930cccae996588333b99f1aaa50988c0 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Haemophilus influenzae é uma bactéria causadora de doenças tipicamente associadas ao trato respiratório superior e inferior. Tal bactéria é classificada em linhagens capsuladas e não capsuladas - as não tipadas. As grandes responsáveis por patogenias mais severas são as capsuladas, especialmente as do sorotipo b, a existência de uma vacina para somente esse sorotipo, faz com que ocorra uma emergência de casos com H. influenzae não tipado - NTHi. A crescente resistência a antibióticos dessa bactéria está associada à plasmídios de resistência, bem como sua competência natural. A presença desses patógeno é maior em países nos quais não existe acesso a vacina, devido ao alto custo da mesma, que acabam utilizando antibióticos mais acessíveis como o cloranfenicol no tratamento. Esse trabalho estudou a transferência horizontal do gene ompP2 em diversas cepas de H. influenzae com a ajuda de nanopartículas de óxido de grafeno. Essas nanopartículas mimetizam uma atmosfera rica em partículas suspensas como as grandes cidades e zonas de agricultura precoce, já que, nesses locais ocorrem com maior frequência mutações e adaptações desse patógeno. Quando as nanopartículas encontravam-se no meio de cultura, verificou-se um aumento da taxa de transformação dessas bactérias. Assim como uma modificação no padrão de adesão celular das bactérias mutadas quando comparadas com as selvagens em linhagens celulares distintas e expostas ao antibiótico de resistência, levando a um aumento da taxa de adesão das cepas mutadas com relação às cepas selvagens. Como esse gene é e de possível aquisição entre cepas de H. influenzae em seu ambiente natural seria possível utilizá-lo para obtenção de uma proteína recombinante, com possível antigenicidade. Uma vez que a taxa de adesão aumenta com a presença do mesmo, levando a uma possível nova vacina que também protegeria contra cepas não tipadas e não somente capsuladas / Abstract: Haemophilus influenzae is a bacteria that causes diseases typically associated with the upper and lower respiratory tract. Their strains are divided in capsulated and non-capsulated - the non typable. The major responsible for more severe cases are the capsulated types, specially the b type. The existence of a vaccine for the serotype b, allows the emergence of cases of non typable H. influenzae - NTHi. The growing resistance is associated with resistance plasmids, and with its natural competence, that enables the bacteria to acquire DNA fragments between it's' species. Since this pathogen is common in countries that there is no access to this vaccine, therefore the use of accessible and cheaper antibiotics, such as chloramphenicol for treatment is. This work studied the horizontal transference of the ompP2 gene from multiresistant strains of H. influenzae, with the aid of grafen oxide nanoparticles, that mimesis an atmosphere rich in suspended particles, such as great urban areas and ancient agricultural zones. In these environments a great frequency in mutation and adaptations of these bacteria is verified. When we look at the adhesion patterns of these bacteria we can see that it is modified when they are mutated and exposed to the resistance antibiotic. Leading to an augmentation of the adhesion patterns when we compare to the wild strains. Since this gene was present in all strains and it was of easy acquisition between strains, it would be possible to use it to obtain a recombinant protein with likely antigen properties. Because the adhesion tax enhances with the presence of this gene. Leading to a possible new vaccine target, for NTHi and capsulated strains also / Mestrado / Fármacos, Medicamentos e Insumos para Saúde / Mestra em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos

Orientadores: Cecilia Maria Roteli Martins, Guilherme Loureiro Werneck / Tese (Doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T01:04:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Souza_EduardoPernambucode_D.pdf: 331602 bytes, checksum: 3072dd8963dd0c40266dfc9a9fe6b12d (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Objetivos: Determinar as prevalências da infecção genital por papilomavírus humano (HPV) e de anormalidades citológicas cervicais em mulheres jovens de cinco cidades brasileiras e investigar a associação entre fatores sociodemográficos, comportamentais e reprodutivos e a detecção do DNA do HPV. Sujeitos e métodos: Entre agosto e dezembro de 2000, 1.489 mulheres saudáveis, de 15 a 25 anos de idade, atendidas em unidades públicas de saúde de cinco cidades brasileiras participaram deste estudo do tipo transversal. Amostras cervicais foram coletadas para a realização da colpocitologia em meio líquido e para a detecção do DNA do HPV através da reação em cadeia da polimerase (PCR) mediada pelos iniciadores SPF10. A genotipagem do HPV foi realizada pelo line probe assay (LIPA) ou, em amostras negativas pelo LIPA, pelo seqüenciamento dos produtos da PCR. Todas as mulheres completaram um questionário de saúde. Utilizou-se a análise por regressão logística para a investigação dos fatores associados às infecções por tipos de alto ou baixo risco do HPV. Resultados: Entre as 1.318 mulheres sexualmente ativas, as prevalências das infecções por HPV (qualquer tipo), por HPV de alto risco e por HPV de baixo risco foram de 38,5%, 27,9% e 12,9%, respectivamente. A freqüência destas infecções foi bastante similar entre as mulheres recrutadas em cada uma das cinco cidades estudadas. O HPV 16 foi o tipo de alto risco mais freqüente, seguido dos tipos 52, 31, 51, 68 e 18. Citologia anormal foi observada em 17,8% das mulheres (ASCUS=10,7%; LSIL=6,0%; HSIL=0,8%). O DNA de tipos de alto risco do HPV foi detectado em 53,5% das mulheres com ASCUS, em 81,3% das mulheres com LSIL e em 72,7% das mulheres com HSIL. Número de parceiros sexuais durante a vida e situação conjugal (ser solteira, divorciada ou viúva) foram fatores associados à detecção tanto dos tipos de alto risco como dos tipos de baixo risco do HPV. O uso regular de anticoncepcionais orais teve uma associação negativa com a infecção por tipos de alto risco do HPV, enquanto o número de parceiros sexuais no último ano foi um fator determinante exclusivamente da infecção por tipos de baixo risco. Entre as 171 mulheres que não haviam iniciado a atividade sexual, a prevalência da infecção por HPV foi de 6,4%. Conclusões: Neste grupo de mulheres brasileiras, jovens e sexualmente ativas, a infecção por HPV e as anormalidades citológicas cervicais foram freqüentes e nenhuma diferença significativa foi observada entre as mulheres recrutadas em cada uma das cinco cidades. A infecção por HPV estava associada com fatores relacionados ao comportamento sexual da mulher e, principalmente, com a sua situação conjugal e número de parceiros sexuais / Abstract: Objective: To determine the prevalences of genital infection with HPV and abnormal cervical cytology in young women from five Brazilian cities and to investigate the association between detection of HPV DNA and socio-demographic, behavioral and reproductive factors. Subjects and methods: Between August and December 2000, 1,489 healthy women, ages 15 to 25 years, attending public health centers in five Brazilian cities participated in this cross-sectional study. Cervical samples were collected for liquid-based cytology and for HPV DNA detection by a SPF10 rimermediated polymerase chain reaction (PCR). HPV genotyping was performed with a line probe assay (LIPA) or by sequence analysis of PCR products in LIPA negative samples. All women completed a health questionnaire. Logistic regression analysis was conducted to investigate factors associated with low-risk and highrisk HPV infections. Results: Among 1,318 sexually active women the prevalence of HPV infection with any type, high-risk types and low-risk types were 38,5%, 27,9% and 12,9%, respectively. The frequency of those infections was very similar among women enrolled in each of the five cities. HPV 16 was the most frequent high-risk type detected followed by types 52, 31, 51, 68 and 18. Abnormal Summary xxii cytology was observed in 17,8% of the women (ASCUS=10,7%; LSIL=6,0%; HSIL=0,8%). HPV DNA was detected in 53,5% of the women with ASCUS, in 81,3% of those with LSIL and in 72,7% of those with HSIL. Lifetime number of sexual partners and marital status (being single, divorced or widow) were factors associated with both high-risk and low-risk HPV infections. The regular use of oral contraceptives was negatively associated with the detection of high-risk types while number of sexual partners during the last year was a determinant factor of infection with low-risk HPV types, only. Among 171 women who were not sexually active, the overall HPV prevalence was 6,4%. Conclusions: in this group of young and sexually active Brazilian women, HPV infection and abnormal cervical cytology were frequent and no significant difference was observed among women enrolled in each of the five cities. HPV infection was associated with factors related to the woman's sexual behavior and mainly with her marital status and number of sexual partners / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Tocoginecologia

Orientador: Wanderley Dias da Silveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T10:08:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendonca_Sergiode_M.pdf: 2918078 bytes, checksum: aeeeeec5bff54c7dcfc9509300308c5e (MD5) Previous issue date: 1994 / Mestrado / Genetica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Luiz Carlos Zeferino / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-28T09:15:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CamposTeixeira_CirbiaSilva_M.pdf: 1128371 bytes, checksum: f7ee3c8128bb7ec40c81ec62521ca6bf (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Introdução: O câncer cérvico-uterino é causado pelo HPV e a vacinação contra este vírus poderá alterar a prevalência destes na população. Objetivo: avaliar o impacto da vacinação contra HPV na detecção dos diferentes tipos de HPV no período de 12 anos pós-vacinação. Métodos: Em 2001, 91 mulheres do Centro de Campinas para estudos clínicos com a vacina contra HPV-16/18 da GSK, receberam três doses da `vacina¿ contra HPV ou de placebo (Al[OH]3) de forma randomizada e duplo-cega. Elas foram seguidas e realizaram testes de HPV (SPF-10 LiPA) em amostras cervicais coletadas semestralmente até 2010. Informações epidemiológicas, reprodutivas e comportamentais foram obtidas em 2001, 2005, 2010. Em 2012, este estudo local, as participantes retornaram, atualizaram suas informações e coletaram nova amostra, testada por CLART-HPV2 test. Os resultados disponíveis foram agrupados com total de 1492 testes de HPV. Foi analisada a proporção de mulheres com detecção de HPV, por agrupamento viral, a ocorrência de infecção persistente por seis meses (IP6m) por um mesmo HPV de alto risco (HR-HPV) e a relação com idade, novo parceiro sexual nos últimos 12 meses, uso de contraceptivo hormonal ou de preservativos, tabagismo, tipo de vacinação e o tempo decorrido. A análise estatística foi realizada por momento e evolutiva em 12 anos e comparados com a vacina recebida. A análise utilizou os testes x2, exato de Fisher, Mann-Whitney, GEE (equações de estimativa generalizada) e odds ratio com intervalo de confiança de 95% e p<0.5 para significância estatística. Resultados: Os grupos de mulheres `vacinadas¿ e `placebo¿ não apresentaram diferenças na idade e fatores de risco relacionados à aquisição de HPV. Não foi observada diferença na detecção de HPV por momento de coleta da amostra nos 12 anos, avaliados por vacina recebida (53% se vacina contra HPV vs. 47,4% se placebo, p=0,90). Também não houve diferenças significativas para os agrupamentos de HR-HPV, HR-HPV não-HPV16/18, HPV-16/18 e HPV de baixo risco (LR-HPV). Na análise longitudinal a detecção de DNA-HPV apresentou uma tendência de aumento com o tempo para HR-HPV não-HPV16/18 (p=0,03), e de menor detecção de HPV-16/18 (p=0,05) e LR-HPV (p=0,04). Apenas para os HPV-16/18 esta diminuição esteve associada com a vacinação prévia (p=0,05). O uso regular de contraceptivo hormonal esteve associado com 2,4 vezes mais de detecção de LR-HPV (p=0,03), sem relação com a vacinação. Houve 44 episódios de IP6m de HR-HPV, sendo duas vezes mais frequentes em mulheres tabagistas (p=0,03), mas sem relação com a vacinação. Foi observada uma redução, embora não significativa, de IP6m de HR-HPV nas mulheres vacinadas ao longo do tempo (OR=0,68; 95% CI: 0,36-1,28; p=0,23). Conclusões: Não houve diferença na proporção de mulheres com detecção de HPV de qualquer tipo, HR-HPV não-HPV16/18, HPV-16/18 e LR-HPV em relação à vacinação contra HPV-16/18 ou com placebo, em avaliações repetidas por 12 anos. Nas avaliações longitudinais houve uma tendência de menor detecção de HPV-16/18 e menos casos de IP6m por um mesmo HR-HPV detectados nas mulheres previamente vacinadas contra HPV-16/18 / Abstract: Introduction: The cervix cancer is caused by HPV and the vaccination in population base against this virus can change their prevalence. Objective: To assess the impact of HPV vaccination in the detection of different types of HPV in 12-years post-vaccination period. Methods: In 2001, 91 women from Campinas Centre started their participation in clinical trial with HPV-16/18 vaccine (GSK) and received three doses of the HPV vaccine or placebo (Al [OH] 3) in a randomized and double-blinded study. They were followed and performed HPV testing (SPF-10 LiPA) in cervical samples collected every six months, until 2010. Information epidemiologic, reproductive and behavioral was obtained in 2001, 2005 and 2010. In 2012, the participants were invited to return in a local study, when the information were updated and a new cervix sample was collected and tested by CLART-HPV2 test. The available results were gathered with a total of 1492 HPV tests. We analyzed the proportion of women with HPV detection by virus group, the occurrence of 6-month persistent infection (6MPI) by the same high-risk HPV (HR-HPV) and the relationship with age, new sexual partner in the last 12 months, use of hormonal contraception or condoms, smoking, type of vaccination and over 12 years. The statistical analysis was performed by moment of sample collection and longitudinally for 12-year period studied and compared by vaccination performed in 2001. The analysis used the tests chi-square, Fisher's exact, Mann-Whitney, GEE (generalized estimating equations) and odds ratios with 95% confidence interval and p<0.5 for statistical significance. Results: the women from groups 'vaccinated' and 'placebo' did not differ in age and risk factors related to the HPV acquisition. There was no difference in HPV detection by time of sample collection for over 12 years, according to the received vaccine (53% for HPV vaccine vs. 47.4% for placebo, p=0.90). There were also no significant differences for HPV groupments, HR-HPV, HR-HPV non-HPV16/18, HPV-16/18 and low risk HPV (LR-HPV). The longitudinal analysis of DNA-HPV detection showed an increasing trend over time for HR-HPV non-HPV16/18 detection (p=0.03), and a decreasing trend for detection of HPV-16/18 (p=0.05) and LR-HPV (p=0.04). Just for HPV-16/18 the decrease trend was associated with prior HPV vaccination (p=0.05). Regular use of hormonal contraceptive was associated with 2.4 times more LR-HPV detection (p=0.03), but unrelated to vaccination. There were 44 episodes of HR-HPV 6MPI, and their occurred twice more if the women smokes (p=0.03), but unrelated to vaccination. The HR-HPV 6MPI over the 12-year studied had a decreasing pattern in HPV vaccinated women, although not significant (odds ratio=0.68, 95% CI: 0.36 - 1.28; p=0.23). Conclusions: There was no difference in the proportion of women with detection of HPV (any type), HR-HPV non-HPV16/18, HPV-16/18 and LR-HPV in relation to vaccination against HPV-16/18 or placebo in repeated cervix samples for 12 years. In the longitudinal assessments there was a decreasing trend for detecting HPV-16/18 and less episodes of 6MPI of the same HR-HPV in women previously vaccinated against HPV-16/18 / Mestrado / Oncologia Ginecológica e Mamária / Mestra em Ciências da Saúde