Diversos estudos em modelo animal indicam claramente que a transferência materna de IgG alérgeno-específica previne a resposta alérgica na prole. A presença de alérgeno no leite também mostrou proteger a prole por induzir tolerância oral. Neste estudo, analisamos em humanos a transferência materna de alérgenos dos ácaros Der p e Blo t e anticorpos específicos durante a gestação e amamentação em uma coorte de 91 amostras pareadas de soro materno, colostro e cordão umbilical. Demonstramos que tanto o Der p 1 como Blo t 5 podem estar presentes em amostras de colostro e cordão umbilical e identificamos a atopia materna como fator crítico para o aumento de IgG específica nestes compartimentos. No cordão umbilical, a maior diferença entre mães atópicas e não atópicas foi para a IgG4. A concentração de Der p 1 e Blo t 5 não apresentou correlação com o estado atópico materno ou concentração de anticorpos específicos. No colostro, apenas para o alérgeno Der p 1 a concentração foi maior em mães atópicas e apresentou correlação com os níveis de anticorpos IgG específicos. / Experimental data in rodents indicate that maternal allergen-specific IgG prevents allergic sensitization in the progeny. Airborne allergens in maternal milk also protects breastfeed mice by oral tolerance induction. In this study, we assessed in humans whether Der p and Blo t allergens and specific antibodies were transferred during pregnancy and breastfeeding in a cohort of 91 paired samples of maternal blood, colostrums and umbilical cord blood. Our study indicates that Der p 1 and Blo t 5 can be found in both, cord blood and colostrums, and identifies maternal atopy as a critical factor for increased levels of allergen-specific IgG in these compartments. In the cord blood the biggest difference between atopic and non atopic mothers was observed for IgG4. Der p 1 and Blo t 5 concentrations were not correlated with maternal atopic status nor specific-antibodies levels. In colostrums, only the concentration of Der p 1 was higher in atopic mothers and correlated with colostrums specific-IgG levels.

As células dendríticas (DCs) são as principais células apresentadoras de antígenos (APCs). Foi proposto que as DCs selecionam os Ags que serão apresentados em MHC-II baseado na presença de ligantes para TLR na partícula fagocitada. Contudo, esse fenômeno não foi estudado em classe I. Assim, o objetivo deste estudo foi investigar se o acoplamento de Ags particulados a um agonista de TLR melhoraria a apresentação cruzada (AC) dos mesmos por DCs humanas tratadas com as moléculas acopladas. Nós vimos que a presença de um ligante de TLR no material fagocitado não contribuiu nem para a maturação do fagossomo, nem para a via endossômica de AC. A AC não envolve acidificação endossômica e depende de moléculas de MHC recém-sintetizadas do retículo endoplasmático. Nossos dados confirmam também a importância do estado de maturação das DCs para a indução de proliferação de LT CD8+, embora este não tenha sido associado com o nível de apresentação do complexo MHC-I/peptídeo, ou com as moléculas normalmente utilizadas para indicar a maturação das DCs. / Dendritic cells (DCs) are the main antigen presenting cells (APCs). It was proposed that DCs select the Ags that will be presented at their surfaces on class II based on the presence of a TLR-ligand on the cargo. However, the relevance of the coupling of the Ag to a TLR-ligand on class I was not yet addressed. Thus, the goal of this study was to investigate whether the coupling of particulate Ags to a TLR-agonist improve the cross-presentation (CP). We saw that the CP does not involve endosomal acidification and it relies on newly synthesized MHC-I molecules from the endoplasmic reticulum. Also, the presence of a TLR-ligand on the cargo neither contributed to the phagosome maturation nor to the endosomic route of CP. Furthermore, the maturation status of DCs was crucial for the induction of CD8+ T cells proliferation. Although the coupling of the Ag to the adjuvant has neither changed the expression of the markers related to maturation nor the presentation of the complex MHC-I/peptide at the DC surface, it affected its capacity of stimulating CD8+ T cells.

A tuberculose é responsável por mais de 2 milhões de mortes ao ano. A imunidade protetora contra a tuberculose está relacionada com a ativação de linfócitos CD4+ e CD8+ produtores de IFN-g, citocina que potencializa os mecanismos microbicidas dos macrófagos para eliminação dos bacilos. Nos últimos anos, o leucotrieno B4 (LTB4) destacou-se como mediador lipídico que participa da imunidade protetora contra diversas infecções, incluindo a tuberculose. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi avaliar o papel dos leucotrienos na proteção induzida pela imunização homóloga com DNA-HSP65 ou heteróloga com BCG/DNA-HSP65. Para isso, inicialmente, nós confirmamos a participação dos leucotrienos no controle da infecção por M. tuberculosis ao mostrar que animais C57BL/6, que controlam a replicação dos bacilos, secretam mais LTB4; e ao bloquear a síntese de leucotrienos com a droga MK-886, estes animais ficaram suscetíveis à infecção. Em seguida, nós passamos a avaliar se os leucotrienos participavam da proteção conferida pela imunização homóloga com DNA-HSP65 ou heteróloga (prime-boost) com BCG/DNA-HSP65. Nossos resultados mostraram que animais deficientes para a síntese de LT (5-LO KO) infectados foram mais suscetíveis à infecção em relação aos animais WT. A maior suscetibilidade dos animais 5-LO KO foi associada à redução na secreção de IFN-g, nitrito e IL-17, aumento na secreção de PGE2, defeitos no recrutamento de células inflamatórias e aumento no influxo de células Foxp3+ para os pulmões. A imunização homóloga perdeu completamente seu efeito protetor na ausência de leucotrienos, enquanto a imunização heteróloga induziu proteção parcial. Animais 5-LO KO imunizados pelo esquema prime-boost secretaram concentrações mais elevadas de IL-17 e tiveram menor influxo de células Foxp3+ para os pulmões quando comparados aos animais 5-LO KO não imunizados e infectados. A inibição da síntese de prostaglandinas durante o protocolo de imunização pela estratégia prime-boost reduziu a capacidade protetora da vacina tanto em animais WT como nos 5-LO KO, sugerindo que as prostaglandinas podem desempenhar papel no processo de imunização. Em conjunto, nossos resultados reforçam a importância dos leucotrienos na imunidade protetora contra tuberculose, sugerindo sua atuação indireta, uma vez que, além de contribuírem para síntese de IFN-g e nitrito, também parecem colaborar na síntese de IL-17. / Tuberculosis is responsible for more than 2 millions of death for year. The immune response against tuberculosis is related to activation of IFN-g-producing CD4+ and CD8+ cells. IFN-g increases the microbicidal mechanisms of macrophages to kill intracellular bacilli. Recently, the lipid mediator leukotriene B4 (LTB4) has been related to protection against several diseases, including tuberculosis. In this sense, the aim of this study was to evaluate the role of leukotrienes in the protection induced by homologous immunization with DNA-HSP65 or heterologous with BCG/DNA-HSP65 (prime-boost). Firstly, we confirmed the role of leukotrienes to control the replication of M. tuberculosis when we showed that C57BL/6 mice, which are able to contain bacilli growth, secreted high levels of LTB4; and when we blocked leukotrienes synthesis by treatment with MK-886, C57BL/6 mice became more susceptible to infection. Then, we evaluated the role of leukotrienes in the protection induced by homologous or heterologous (prime-boost) immunization. Our data showed that animals deficient in leukotrienes synthesis (5-LO KO) infected with M. tuberculosis were more susceptible to infection than WT mice. The higher susceptibility of 5-LO KO was related to the decreasing of IFN-g, nitrite and IL-17 production, increasing of PGE2 secretion, defective recruitment of inflammatory cells and increased influx of Foxp3+ cells to the lungs. Homologous immunization has lost completely its protector effect in the absence of leukotrienes, while heterologous immunization induced only partial protection. Prime-boost-immunized 5-LO KO mice secreted higher levels of IL-17 and had lower influx of Foxp3+ cells to the lungs, when compared to non-immunized infected 5-LO KO. The abrogation of the synthesis of prostaglandins during the immunization by prime-boost reduced the protector effect of the vaccine either in WT and 5-LO KO mice, suggesting that prostaglandins may be important to the process of immunization. Together, our data reinforce the key role of leukotrines in immune response against tuberculosis, suggesting that these lipid mediators may act indirectly to induce IFN-g, nitrite and IL-17 synthesis.

A Doença Infecciosa da Bolsa de Fabrício (DIB) é uma doença viral altamente contagiosa que afeta as galinhas nas primeiras semanas de vida. Ela pode causar altas taxas de morbidade e mortalidade dependendo da cepa viral envolvida no surto. Como o vírus é muito resistente no ambiente, a vacinação é requerida em alta pressão de infecção. Devido às variações no grau de virulência das vacinas disponíveis para o controle da DIB, o presente estudo objetivou avaliar a patogenicidade e imunogenicidade de três vacinas comerciais: as vacinas recombinante, complexo-imune e intermediária. Quatro grupos com 55 aves specific pathogen free (SPF) cada foram imunizadas no primeiro dia e desafiadas aos 25 dias com a cepa muito virulenta G11 para verificar o grau de proteção conferido pelas vacinas. As aves foram examinadas, sangradas, eutanaziadas e necropsiadas aos 25, 30 e 35 dias de idade. As bolsas de Fabrício (BF) foram coletadas, pesadas, mensurados seus diâmetros e pesos relativos e submetidas ao exame histopatológico para verificar a presença de lesões. Amostras de soro foram submetidas ao teste de ELISA para quantificação dos anticorpos contra a DIB. Aos 23 dias de idade, as aves SPF foram submetidas à prova de hipersensibilidade cutânea à fitohemaglutinina para avaliar o efeito das vacinas sobre a imunidade celular. Os resultados mostraram que a vacina complexo-imune induziu a maior redução no peso relativo e diâmetro e o maior grau de lesões nas BF. A vacina recombinante foi a que apresentou os melhores resultados, preservando a integridade tecidual e celular das BF. A vacina intermediária apenas induziu um discreto grau de atrofia nas BF. As análises sorológicas, antes do desafio, revelaram que as três vacinas testadas induziram com a mesma intensidade a imunidade humoral das aves SPF, apresentando semelhantes títulos de anticorpos. A avaliação da imunidade celular mostrou que a resposta à fitohemaglutinina das aves SPF imunizadas com as vacinas recombinante e complexo-imune foi menor do que as aves do grupo não vacinado. Nas condições em que o experimento foi conduzido verificou-se que a vacina complexo-imune é a mais patogênica, causando lesões em maior número e severidade nas BF. Todas as vacinas, quando administradas no primeiro dia, são eficazes em proteger as aves SPF contra o desafio com a cepa muito virulenta G11. / Infectious Bursal Disease (IBD) is a highly contagious viral disease that affects chickens in their first weeks of life. It may cause high morbidity and mortality depending on the strain involved in the outbreak. As the virus is very resistant to the environment, vaccination is required under high pressure of infection. Hence, due to variations in the degree of the virulence of vaccines available to control DIB, this study aimed to evaluate the pathogenicity and immunogenicity of three vaccines against Infectious Bursal Disease (IBD): recombinant, immune-complex and intermediate vaccines. Four experimental groups, with fifty-five specific pathogen free (SPF) chickens each, were vaccinated on the first day and challenged on the twenty-fifth day with the very virulent G11 strain in order to verify the protection conferred by the vaccines. The Chickens were examined, bled, euthanized and necropsied on the twenty-fifth, thirtieth and thirty-fifth days of age, and the Bursas of Fabricius (BF) were collected, weighed, having their diameter and relative weight measured, were subjected to histological examination to verify the presence of lesions, Serum samples were subjected to ELISA for the quantification of antibodies against IBD. On the twenty-third day of age, the chickens were submitted to cutaneous basophil hypersensitivity test at phytohemagglutinin to evaluate the immunosuppressive effect of the vaccines on the cell-mediated immunity. The results indicated that the immune-complex vaccine induced not only the greatest reduction in relative weight and diameter, but also the greatest lesion degree on the BF. The recombinant vaccine showed the best results, preserving the tissue and cellular integrity of the BF. The intermediate vaccine induced only a slight degree of atrophy on the BF. The intermediate vaccine induced only a slight degree of atrophy on the BF. The serological analyses, before the challenge, revealed that the three tested vaccines induced humoral immunity of SPF chickens with the same intensity, presenting similar antibody titers. In addition, the evaluation of the cellmediated immunity demonstrated that the cellular reaction to phytohemagglutinin of the immunized SPF chickens with the recombinant and immune-complex vaccines was smaller than the unvaccinated group. Thus, these results have indicated that, under the conditions of the experiment, the immune-complex vaccine is the most pathogenic, causing the highest atrophy degrees on the BF. Therefore, all vaccines, when administered on the first day, are considered effective to protect SPF chickens against the challenge with the very virulent G11 strain.

Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é uma importante causa de diarreia infantil. EPEC adere no epitélio intestinal e causa uma lesão conhecida como attaching and effacing (A/E). Cepas recombinantes de Mycobacterium smegmatis (Smeg) e Mycobacterium bovis (BCG) foram construídas para expressar BfpA ou Intimina. Os genes dessas proteínas foram amplificadas por PCR do DNA genômico de EPEC e inseridos nos sítios de BamHI/KpnI do vetor pMIP12. Os plasmídeos construídos pMIP-bfpA e pMIP-intimina foram introduzidos, separadamente,nas cepas de Smeg e BCG. Clones recombinantes foram selecionados baseado na resistência a kanamicina e nomeados como rSmeg pMIP (bfpA ou intimina) and rBCG pMIP (bfpA ou intimina). A expressão dos genes bfpA e intimina foram detectados por Western blotting usando anticorpos primários policonais anti-BfpA e anti-intimina. A imunogenicidade dessas proteínas foi avaliada em camundongos C57BL/6 pela presença de anticorpos anti-BfpA e anti-intimina IgA e IgG nas fezes e soro, respectivamente. TNF-a e INF-g foram produzidas in vitro por céulas do baço de camundongos imunizados com a vacina recombinante com BfpA e Intimina. A adesão de EPEC (E2348/69) em células alvo Hep-2 foi bloqueada pelos anticorpos IgA ou IgG de camundongos imunizados com as vacinas recombinantes, mas não por anticorpos de animais não imunizados. Vacinas recombinantes contendo as proteínas BfpA e Intimina de EPEC podem ser candidatas promissoras. / Enteropathogenic Escherichia coli (EPEC) is an important cause of diarrhea in children. EPEC adheres to the intestinal epithelium and causes attaching and effacing (A/E) lesions. Recombinant Mycobacterium smegmatis (Smeg) and Mycobacterium bovis BCG strains were constructed to express either BfpA or intimin. The entire bfpA gene and a portion of the intimin gene were amplified by PCR from EPEC genomic DNA and inserted into the pMIP12 vector at the BamHI/KpnI sites. The pMIP bfpA and pMIP intimin vectors were introduced separately into Smeg and BCG. Recombinant clones were selected based on kanamycin resistance and designated rSmeg pMIP (bfpA or intimin) and rBCG pMIP (bfpA or intimin). The expres-sion of bfpA and intimin was detected by Western blotting using polyclonal anti-BfpA and anti-intimin primary antibodies. The immunogenicity of these proteins was assessed in C57BL/6 mice by assaying the feces and serum for the presence of anti-BfpA and anti-intimin IgA and IgG antibodies. TNF-a and INF-g were produced in vitro by spleen cells from mice immunized with recombinant BfpA, whereas TNF-g was produced in mice immunized with recombinant intimin. The adhesion of EPEC (E2348/69) to Hep-2 target cells was blocked by IgA or IgG antibodies from mice immunized with recombinant BfpA or intimin but not by antibodies from non-immunized mice. Immunogenic non-infectious vectors containing relevant EPEC virulence genes may be promising vaccine candidates.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Malaria remains a major responsible factor for morbidity and mortality in many tropical and subtropical countries. Due to the several attempts to control this protozoan infection, vaccines have been subject of intensive research, since this seems to be a promising way for the effective control of malaria. Individuals, who are frequently exposed to the parasite by living in endemic areas, develop specific immune responses, leading to a reduction of parasite load and clinical manifestations. Moreover, the serum of such individuals may impair fertilization of gametes in the mosquito, blocking the transmission of this parasite into the vector. The Pvs48/45 protein is found on the surface of gametocytes and used as a target of antibodies enabling this strategy a transmission blocking vaccine. The aim of this study is to evaluate the antibody response in naturally acquired infections by Plasmodium vivax against Pvs48/45 protein. The research of antibodies IgG anti- Pvs48/45 was performed by ELISA in sera from 281 samples of malarial patients living in the Brazilian Amazon. The cutoff point was established using serum from volunteers who never had contact with the plasmodium, establishing the mean optical density (OD) plus three standard deviations. Samples were analyzed in duplicate and the mean OD was divided by cutting point to establish the reactivity index (RI), while samples with IR ≥ 1 are considered positive. Of 281 sera analyzed, in 22.4% were found specific antibody response anti-Pvs48/45 and indices of parasitemia and gametocyte did not influence the antigenic recognition of this protein. With the analysis of the subgroups was obtained that the CTerminal + Central region of Pvs48/45 was the one with the highest antigenic recognition in the study sample. Therefore, studies using this region of the protein may facilitate the understanding of the immunogenic potential of this antigen. This study aims to contribute to the development of an efficient transmission blocking vaccine against Pvs48/45 protein in future trials. / A malária continua sendo responsável por grande morbidade e mortalidade em muitos países tropicais e subtropicais. Diante de várias tentativas de controle dessa protozoose, as vacinas têm sido alvo de intensa pesquisa, uma vez que esse parece ser o caminho promissor para o controle efetivo da malária. Indivíduos que estão frequentemente expostos ao parasito, por habitarem áreas endêmicas desenvolvem respostas imunes específicas, levando a uma redução da carga parasitária e das manifestações clínicas. Além disso, o soro desses indivíduos pode impossibilitar a fertilização dos gametas nos mosquitos, bloqueando a transmissão desse parasito para o vetor. A proteína Pvs48/45 é encontrada na superfície dos gametócitos e utilizada como alvo dos anticorpos viabilizando essa estratégia de uma vacina de bloqueio de transmissão. O objetivo desse estudo é avaliar a resposta de anticorpos naturalmente adquirida em infecções por Plasmodium vivax contra a proteína Pvs48/45. A pesquisa de anticorpos IgG anti-Pvs48/45 foi realizada por ELISA no soro de 281 amostras de pacientes maláricos residentes na região amazônica brasileira. O ponto de corte foi estabelecido utilizando soro de voluntários que nunca tiveram contato com o plasmódio, estabelecendo a média da densidade óptica (DO) mais três desvios padrão. As amostras foram analisadas em duplicatas e a média da DO foi dividida pelo ponto de corte para estabelecer o índice de reatividade (IR), sendo que amostras com IR ≥ 1 são consideradas positivas. Dos 281soros analisados, em 22,4% foram encontradas respostas de anticorpos específicos anti-Pvs48/45 e os índices de parasitemia e os gametócitos não influenciaram o reconhecimento antigênico desta proteína. Na análise dos subfragmentos, obteve-se que a região C-Terminal + Central da Pvs48/45 foi a que apresentou maior reconhecimento antigênico na amostra em estudo (32%). Diante disso, estudos com a utilização dessa região da proteína podem facilitar o entendimento do potencial imunogênico desse antígeno. Esse estudo visa contribuir para o desenvolvimento de uma vacina de bloqueio de transmissão eficiente contra a proteína Pvs48/45 em ensaios futuros.

Orientadores: Neiva Sellan Lopes Gonçales, Fernando Lopes Gonçales Júnior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T12:25:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_CeliaFigueiredode_M.pdf: 786699 bytes, checksum: 0a829d305315144f635715b049fcb800 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: As hepatites virais constituem um importante problema de saúde pública. São doenças provocadas por agente etiológicos com tropismo primário pelo tecido hepático com características epidemiológicas, clínicas e laboratoriais semelhantes com importantes particularidades. O objetivo desta pesquisa foi determinar a prevalência das hepatites A, B e C em estudantes universitários utilizando marcadores sorológicos. Avaliar seus fatores de risco, o nível de conhecimento dos estudantes sobre as vias de transmissão e prevenção e caracterizar a proteção vacinal pelo marcador anti-HBs. O estudo foi realizado em 685 estudantes universitários. Foi aplicado um questionário para avaliar os aspectos sócio-econômicos, epidemiológicos e laboratoriais dos estudantes quanto às hepatites A, B e C. Foi coletado sangue para análise dos marcadores sorológicos anti-HBc, anti-HBs, HBsAg, Anti-HCV, anti-VHA IgG. A prevalência da hepatite A foi de 19,5%, da hepatite B 1,17% e da hepatite C 0,15%. O marcador sorológico anti-HBs com títulos superiores a 10mUI/ml, o qual confere soroproteção, estava presente em 61,2% dos universitários. A análise dos questionários mostrou que os fatores de risco relevantes entre a população estudada foram: o contato com material biológico em atividades laboratoriais (45,1%), com pacientes (38,6%), acupuntura (14,8%), tatuagem (13,5%), droga inalatória (8,09%) e droga injetável (0,73%). Quanto ao comportamento sexual, 71,5% já tiveram de 1 a 3 relacionamentos regulares e 42,9% usavam preservativos e 7,7% nunca fizeram uso. Dos estudantes universitários analisados, 88,7% relataram ter conhecimento das vias de transmissão e prevenção das hepatites. A análise dos dados mostra que é de extrema importância quando os estudantes universitários iniciam sua jornada acadêmica, independente do curso ser da área da saúde deveriam ser vacinados (vacina para VHA e VHB) uma vez que se trata de uma população exposta aos fatores de risco para aquisição de hepatites. Seria interessante incluir no calendário escolar, palestras que possibilite sempre a atualização sobre o conhecimento das hepatites principalmente sobre transmissão parenteral e sexual, da prevenção, da importância do conhecimento do seu status vacinal / Abstract: The objective this study was to determinate the prevalence of the hepatitis A, B and C among graduate students using serological markers. To evaluate their risk factors, the knowledgement level of the students about the transmission pathways and prevention and to characterize the vaccine-related protection by the anti-Hbs marker. Six hundred eighty five graduate students were enrolled in this study. The students were submitted to enquiry about to evaluate the socio economic, epidemiological and laboratorial aspects of the students concerning hepatitis A, B and C. Peripheral blood was collected from students to perform the following serological marker: anti-HBc, anti-HBs, HBsAg, anti-HCV and HAV IgG. The prevalence of hepatitis A was 19.5%, hepatitis B was 1.17% and hepatitis C was 0.15%. The anti-HBs marker with titles higher than 10 mUI/mL which is consistent with protection was present in 61.2% of the students. The analysis of enquires showed that the relevant risk factors among the studied cohort were: contact to biological materials during laboratorial proceedings (45.1%), contact to patients (38.6%), acupuncture (14.8%), tattoo (13.5%), inhalatory drug (8.09%) and injectable drugs (0.73%). Whereas sexual practices, 71.5% already had from 1 to 3 regular relationship, 42.9% of them used condom and 7.7% had never used. Among the students enrolled in this study, 88.7% reported to have knowledge about the transmission pathways and prevention of the hepatitis. The data analysis showed that is extremely important to the students to have access to lectures concerning general knowledge about hepatitis and about pathways of transmission, prevention and about the importance of vaccine-related prophylaxis. Access to that lectures should begin when the students start their academic journey, independently if the course is or not included among health courses. In addition, vaccination should be included in their academic programming / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientadores: Luiz Jacintho da Silva, Mariangela Ribeiro Resende / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T15:51:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Morais_ElianedeOliveira_D.pdf: 3278461 bytes, checksum: abbd8e7c590c9cf33a356bf37a2a2616 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Pacientes renais crônicos (RC) em estágio terminal dialisados ou não apresentam menores taxas de soroconversão após vacina de hepatite B. O objetivo do estudo foi avaliar de forma prospectiva a imunogenicidade da vacina de hepatite B por via intradérmica (ID) em pacientes RC (fase dialítica e pré-dialítica) com idade maior ou igual a 18 anos, bem como o seguimento dos títulos de anticorpos por um período de 12 meses. Incluídos pacientes que nunca tinham sido vacinados para hepatite B(anti-Hbs<lO) e pacientes já vacinados anteriormente, porém não respondedores (anti-Hbs<lO). Também foram avaliadas variáveis demográficas e doença de base como fatores de interferência à resposta vacinal. Dos 70 pacientes do estudo: 27 não tinham vacinação prévia (Grupo I) e 43 tinham vacinação 1M prévia (Grupo II). Os dois grupos receberam 0,25ml (5~g) ID de vacina de hepatite B (Greencross Vaccine Corporation-Life Sciences, IKsan-si, Korea-Iote-2061074 e lote WVX1O21), em ambas as faces dos antebraços, semanalmente, por um período de oito semanas, num total de 16 doses. Antes do esquema vacinal proposto, foram realizadas as seguintes sorologias: HbsAg, anti-Hbc e anti-Hbs, anti-HIV e hepatite C. Títulos de anticorpos anti-Hbs foram feitos um mês após o término do esquema vacinal, e repetidos a cada 3 meses por um período de um ano. Títulos de anticorpos maiores ou iguais a 10mUIlml foram considerados protetores. Os 70 pacientes iniciais completaram o esquema. Um total de 57(81,5%) deles apresentou soroconversão um mês após o esquema vacinal. Títulos protetores ocorreram em 22(81,5%) pacientes do grupo I e em 35(81,4%) do grupo lI. A idade, a duração do tratamento de insuficiência renal, diabetes, tabagismo e o índice de massa corporal não foram relacionados à soroconversão. Foram excluídos 11 pacientes dos 57 que apresentaram soroconversão, considerando-se para análise de seguimento somente 46 pacientes. Completaram o acompanhamento sorológico até 1 ano, 29 pacientes. Títulos protetores foram vistos em 27(58,7%) pacientes com mediana de 165mUIlml, após 12 meses de seguimento. Eventos adversos não foram considerados de relevância. Conclusões: A vacina intradérmica de hepatite B tem resposta imune adequada em falência renal crônica (CRF) e serve como alternativa para vacinação primária desses pacientes. Também deve ser considerada para esquema de revacinação de não respondedores ao calendário que utiliza a via 1Mem renais crônicos, além de ser um esquema mais rápido na aquisição de títulos protetores / Abstract: Background: HBV infection remains a significant public health problem, even with a highly effective vaccine. Patients with end-stage renal failure undergoing dialysis treatment or not present a poor response to HBV vaccination. Aim: To evaluate the immunogenicity of intradermal hepatitis B vaccination in patients with advanced chronic renal failure. Methods: A 12-month prospective study in adult (>18 years old) patients with end-stage renal failure on (or preparing to) dialysis, with or without previous HBV vaccination and antibody titers for anti-Hbs <10 mUI/mL. AlI patients received recombinant hepatitis B vaccines available in the Brazilian vaccination program during the study (Green Cross Vaccine Corporation-LG Life Sciences, Iksan-si-Korea-2061O74 and WVX1O21). Vaccination was intradermal (ID), 16 injections over eight-week period, two (0,25mL, 5mg) at each visit, one in each forearm. Patients had antibody titers assessed before vaccination, one month after and each three months for a year. Antibody titers of IOmUI/mLor more were considered protective. Results: 70 patients completed the protocol, 27 in group I (no previous vaccination) and 43 in group TI(with previous vaccination IM). Protective titers were elicited in 22(81,5%) in group I and 35(81,4%) in group TI. Age, time under dialysis, diabetes, smoking and body-mass index (BMI) were not associated with seroconversion. or the 70 patients, 24 were excluded .A total of 46 patients were followed for one year and had antibody titers assessed 30 days (46; 100%), 90(39; 84,8%), 180(36; 78,2%), 270(31; 67,4%), 360(27; 58,7%) days afterwards. Persistent protective titers > 12 months occurred in 27(58,7%), with a median antibody titer leveI of 165mUIlmL. Adverse events occured in 18(25,7%): local pruritus 17(24,3%), local hiperpigmentation 11(15,7%), hyperemia 5(7,1%), mialgia 2(2,90,10h),eadache 1(1,4%) and nausea 1(1,4%). Theyare not important. Conclusion: ID HBV vaccination is one alternative in end-stage renal failure. The more rapid acquisition of protective titers compared with intramuscular schemes is one advantage. The ID vaccine schedule seems to be an etTective option for revaccinating non-responders to 1Mschedule / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Marcelo Brocchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T15:02:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendes_GuilhermeMartinesTeixeira_M.pdf: 1976901 bytes, checksum: 9e7c5547a60ab82c824934c40b10ce27 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O gênero Salmonella spp é formado por bacilos gram-negativos, que podem ser divididos em 3 espécies: S. enterica, S. bongori e S. subterranea. A maioria das sorovariedades patogênicas para o homem está incluída no subgrupo I da espécie S. enterica. A infecção por S. enterica inicia-se com a ingestão de água ou alimentos contaminados. Estes microrganismos são patógenos intracelulares facultativos e, uma vez ingeridos, apresentam a capacidade de aderir e invadir células da mucosa intestinal, preferencialmente células M. Uma vez ultrapassada a mucosa intestinal, S. enterica invade, persiste e prolifera no interior de vacúolos de células do sistema retículo endotelial podendo assim, alcançar diferentes órgãos e tecidos do hospedeiro, causando infecção sistêmica. Sendo assim, linhagens mutantes avirulentas, mas ainda capazes de causar infecção transitória, são boas candidatas a potenciais vacinas vivas orais. Tais mutantes são potenciais carreadores de proteínas heterólogas, compondo, assim, as chamadas vacinas multi-valentes. Que seja de nosso conhecimento, não existem mutantes atenuados de S. enterica desenvolvidos inteiramente no Brasil, havendo necessidade de pagamento de patentes a grupos estrangeiros para sua utilização. Em eucariotos, o DNA cromossômico bacteriano está associado a proteínas (histonas) formando o núcleo, enquanto em procariotos, estas proteínas são denominadas histona-like, formando um nucleóide. Dentre essas proteínas podemos citar a IHF (integration host factor), um heterodímero que controla ou influencia vários processos celulares, como a duplicação e recombinação do DNA, além de regular positiva ou negativamente a expressão de vários genes. Neste estudo, mutantes nulos para os genes himA e himD de IHF foram criados pela técnica de recombinação homóloga mediada pelo sistema ? Red (Datsenko e Wanner, 2000) e testados quanto a atenuação da virulência e capacidade de desencadear resposta imune efetiva e protetora contra a salmonelose murina. Os mutantes também foram caracterizados quanto a diversas características biológicas, como a capacidade de invasão e sobrevivência intracelular, resistência a radicais reativos de oxigênio e nitrogênio, ente outras, sendo os resultados comparados com as respectivas linhagens selvagens. Os mutantes himA e himD de S. enterica foram atenuados e capazes de induzir resposta imune protetora quando desafiados com doses elevadas da linhagem selvagem, indicando que estas linhagens recombinantes são potenciais candidatas a vacinais vivas orais / Abstract: The genus Salmonella sp is formed by gram-negative bacilli, which can be divided into 3 species: S. enterica, S. bongori and S. subterranea. The majority of the serovars pathogenic to humans is included in the subgroup I of the S. enterica species. The infection with S. enterica starts either the ingestion of contaminated water or food. These microorganisms are facultative intracellular pathogens and, once ingested, they have the capacity to adhere and invade cells of the intestinal mucosa, with preference for M cells. Then, S. enterica can invade and proliferate within vacuoles of immune cells, particularly macrophages, achieving different organs and tissues of the host, causing systemic infection. Mutant strains of S. enterica with attenuation of the virulence but that are still able to cause a transient infection, are good candidates for potential live oral vaccines. These mutants are also good carriers of heterologous antigens to cells of the immunological system, been able to induce an effective immunological response. To the best of our knowledge, no mutants of this type were developed in Brazil leading to the needed to pay royalties to foreign groups for their use. In prokaryotes the genomic DNA are associated with a number of proteins, the so called histone-like proteins, with structural and regulatory properties, forming the nucleoid. The IHF (Integration Host Factor) is one of the more abundant histone-like in prokaryotes. IHF is a heterodimeric DNA-binding protein that controls a number of cellular processes, such as DNA duplication and DNA recombination and also modulates the expression of different genes. In this work we constructed recombinant strains of S. enterica mutants for the himA and himD genes that encode for the IHF subunits using the ? Red system (Datsenko and Wanner, 2000) and tested for attenuation and immunogenicity. The mutant strains were also characterized and compared to the parental strains for other biological characteristics such as the capacity to invade and proliferate into eukaryotic cells and to survive to different stress conditions. The S. enterica himA and himD mutant strains were attenuated for virulence and able to induce a protective immunity against the wild type strain of S. enterica indicating that these recombinant strains are candidates to formulate a new live oral vaccine / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

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Objectives: (i) to compare the prevalence of S. pneumoniae nasopharyngeal colonization by using real-time PCR (RT-PCR) and multiplex PCR, and culture (“gold standard”) in children residing in Goiania municipality; (ii) to evaluate the simultaneous colonization by different serotypes by using the multiplex PCR technique. Methods: A household populationbased survey was carried out between October/2010 and March/2011 by using a systematic sampling, weighted by census tract. Based on previous studies, the sample size was calculated taking into account an estimated 50% of pneumocococcal carriage. A total of 1,437 nasopharyngeal swabs were collected from children less than 24 months of age. Broth-enriched culture of nasopharynx specimens followed by pneumococcal isolation by both, culture and RT-PCR targeting the lytA gene (S. pneumoniae) were performed. Pneumococcal carriage was defined for RT-PCR Cycle threshold (Ct) < 35.0, and therefore all samples were submitted to multiplex PCR to detect serotypes. ROC curve (Receiver Operating Characteristics) were built up to identify Ct values predicted of S. pneumoniae positive culture. Results: The prevalence of pneumococcal carriage by RT-PCR (56.9%) was statistically higher (p< 0,001), compared to that obtained by culture (39.3%), regardless of the vaccination status. Among the 818 positive children/samples by RT-PCR, in 54.2% of them it was possible to detect the serotype. Simultaneous colonization by different types was found in 6.9% of the children. Ct values Ct33.0 showed the best accuracy (91.4%) to predict positive pneumococcal culture (Sensitivity=88% and Specificity=81.2%). When using Ct values  32.0 we found the best accuracy of multiplex PCR in detecting serotypes (Sensitivity =90% and Specificity =84,7%). Conclusion: Our findings suggest that RT-PCR and multiplex PCR techniques showed great potential to be used in evaluating the vaccination impact. Further studies are needed to evaluate the cost-effectiveness of using these technologies on a large scale. / O Brasil foi o primeiro pais a introduzir a vacina pneumocócica conjugada, 10-valente (PCV10), no Programa de Imunização infantil, em 2010. A colonização nasofaringeana pelo Streptococcus pneumoniae ocorre na infância e é etapa obrigatória para desenvolvimento da doença invasiva. Até o momento nenhum estudo avaliou o impacto da vacinação na redução do estado de portador. Para avaliação do impacto de vacinas deve-se utilizar tecnologias de alta acurácia. Este estudo utiliza técnicas moleculares, recentemente desenvolvidas, para detecção de pneumococo e sorotipos de secreção nasofaringeana.Objetivos: (i) Comparar a prevalência de colonização nasofaringeana por S. pneumoniae pelas técnicas de PCR em tempo real (RT-PCR) e cultura (―padrão-ouro‖) em crianças residentes em Goiânia no primeiro ano de introdução da PCV10; (ii) avaliar a colonização simultânea por pneumococo por diferentes sorotipos por meio da reação de PCR multiplex. Métodos: Um inquérito populacional domiciliar foi conduzido de outubro/2010 a março/2011, com coleta de 1.437 swabs nasofaríngeos de crianças < 24 meses de idade. A amostragem foi sistemática, ponderada por setor censitário, com tamanho da amostra calculado para prevalência esperada de 50% de portador. O isolamento do pneumococo foi realizado a partir do caldo enriquecido (meio STGG). A cultura foi realizada pela semeadura do caldo em placas de Agar sangue de carneiro. A RT-PCR foi direcionada para o gene lytA do pneumococo, utilizando como positividade valores do ciclo da PCR (Ct-Cycle threshold) <35,0. A reação de PCR multiplex para sorotipagem foi realizada para amostras com valores de Ct<35,0. Foram construídas curvas ROC (Receiver Operating Characteristics) para identificação de valores de Ct preditivos de cultura positiva e de tipo capsular. Resultados: A prevalência de pneumococo obtida pela RT-PCR foi de 56,9%, estatisticamente maior do que a prevalência de 39,3% obtida pela cultura (p< 0,001), independente da situação vacinal da criança. Dentre as 818 crianças positivas pela RT-PCR, em 54,2% delas foi possível detectar-se o tipo capsular. Cocolonização por diferentes sorotipos foi encontrada em 6,9% (100/1.437) das crianças. Valores de Ct33,0 apresentaram a melhor acurácia (91,4%) na predição de cultura positiva para pneumococo (sensibilidade/S=88% e especificidade/E=81,2%). Para detecção de sorotipos a melhor acurácia da PCR multiplex foi para valores de Ct32,0 (S=90% e E=84,7%). Conclusão: Os resultados sugerem que as técnicas de PCR em tempo real e multiplex apresentam grande potencial para serem utilizadas em estudos de avaliação de impacto da vacinação, respectivamente no portador e nos sorotipos vacinais. Estudos deverão ser conduzidos para se avaliar o custo-benefício da utilização desta tecnologia em larga escala.