Em Leptospira interrogans algumas proteínas com capacidade de ligação aos componentes de matriz extracelular foram identificadas e, em sua maioria, são fatores de virulência. Phage display é considerada uma técnica poderosa na identificação de novos ligantes, inclusive de moléculas adesinas, importantes no primeiro estágio de infecção do hospedeiro. A técnica de shotgun phage display foi utilizada visando à obtenção de ligantes à células de mamíferos. Quatro bibliotecas, por inserção de fragmentos aleatórios obtidos por sonicação do DNA de L. interrogans nos fagomídeos pG8SAET (BBT1 e BBT2) e pG3DSS (BBT5 e BBT6), foram construídas. As bibliotecas BBT1 e BBT5 contém insertos maiores e as BBT2 e BBT6 contém insertos menores, com tamanhos médios de 1500 pb e 350 pb, respectivamente. Após ensaio de panning da BBT5 contra células de mamíferos e soro fetal bovino, as sequências de clones selecionados foram analisadas quanto a orientação correta e se a fusão estava em fase com a proteína pIII. As proteínas codificadas pelos genes LIC11719, LIC10769, LIC13143 e LIC12976 foram selecionadas com estas características. Os genes que codificam a LIC12976, LIC10768, LIC10769 e LIC13418, tiveram sua conservação avaliada em diferentes sorovares da espécie patogênica L. interrogans e no sorovar Patoc da espécie de vida livre L. biflexa. As proteínas LIC12976 (selecionada pela técnica de phage display) e LIC13418 (selecionada por ferramentas de bioinformática) tiveram suas sequências amplificadas por PCR, clonadas em pGEM T easy, subclonadas em vetor de expressão pAE e expressas na fração celular correspondente ao corpúsculo de inclusão em E. coli BL21 (DE3) Star pLysS e E. coli BL21 SI, respectivamente. Após renaturação e purificação destas proteínas por cromatografia de afinidade a metal bivalente, um grupo de cinco animais BALB/c fêmeas foi imunizado. Ambas as proteínas se mostraram imunogênicas com títulos dos soros policlonais 1:256000 e 1:512000, respectivamente. Em ensaio de Western Blot os soros foram específicos no reconhecimento das proteínas recombinantes e as proteínas nativas foram verificadas em extratos de sorovares patogênicos de L. interrogans. Em ensaios de adesão, as proteínas recombinantes aderiram às células A31, LLC-PK1 e Vero e especificamente à laminina. Em ensaios de interferência em células usando laminina houve um aumento da adesão das proteínas recombinantes, o que pode ser explicado pela ligação da laminina às células e uma maior ligação das LICs estudadas. Em ensaio de localização celular usando imunofluorescência e microscopia eletrônica, foi observado que ambas as proteínas se encontram na superfície da L. interrogans. No experimento de desafio animal, a LIC12976 e a LIC13418 não se mostraram protetoras. Este trabalho contribuiu para a identificação das novas adesinas LIC13418 e LIC12976 que podem participar da virulência de leptospiras patogênicas envolvendo a primeira etapa da infecção na interação patógeno-hospedeiro / In Leptospira interrogans, proteins capable to bind to extracellular matrix components have been identified and most of them are important virulence factors. Phage display is a powerful technique to identify new ligands, including adhesin molecules that are important in the first stage of host infection. A shotgun phage display technique was used in order to obtain cell ligands. Four libraries were constructed by inserting random fragments obtained by sonication of L. interrogans DNA into phagemids pG8SAET (BBT1 and BBT2) and pG3DSS (BBT5 and BBT6). The libraries BBT1 and BBT5 contain larger inserts and BBT2 and BBT6 contain smaller inserts, with 1500 bp and 350 bp average sizes, respectively. After panning of BBT5 against mammalian cells and bovine fetal serum, the sequences of selected clones were analyzed for correct orientation and fusion with pIII protein. The proteins encoded by genes LIC11719, LIC10769, LIC13143 and LIC12976 were selected. The genes LIC12976, LIC10768, LIC10769 and LIC13418 were evaluated for their conservation in different pathogenic serovars of L. interrogans and free-living L. biflexa serovar Patoc. Proteins LIC12976 (selected by phage display technique) and also LIC13418 that was selected by bioinformatic tools, were amplified by PCR, cloned into pGEM T easy, subcloned into expression vector pAE and expressed in cellular fraction corresponding to the inclusion body in E. coli BL21 (DE3) Star pLysS and E. coli BL21 SI, respectively. After protein renaturation protocol and purification by affinity chromatography, a group of five BALB/c mice was immunized with the purified proteins. Both proteins were shown to be immunogenic with 1:256000 and 1:512000 polyclonal sera titers, respectively. In Western blot the sera were specific to recognize recombinant proteins and native proteins were detected in pathogenic L. interrogans serovars extracts. In binding assays, recombinant proteins bind to A31, LLC-PK1 and Vero cells and specifically to laminin. In interference cell assay using laminin there was an increase of recombinant protein bindings, which can be explained by the laminin binding to cells and further binding of the recombinant LICs. In cellular localization assay using immunofluorescence and electron microscopy, it was observed that both are surface proteins of L. interrogans. In the animal challenge, the LIC12976 and LIC13418 were not protective. As a whole, this work contributed to the identification of LIC12976 and LIC13418 as new adhesins and they can participate in the virulence of pathogenic Leptospira in the first stage of host pathogen interaction.

A paracoccidioidomicose (PCM) é uma doença sistêmica de caráter granulomatoso, causada pelo fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis. A PCM é endêmica nas Américas do Sul e Central. Vacina de DNA é uma abordagem promissora e atual na imunoterapia. O peptídeo P10 contem um epítopo da gp43 reconhecido por linfócitos T-CD4+ e é protetor contra a PCM experimental. No presente trabalho analizamos o uso de vacinas de DNA usando vetores de expressão de P10, IL-12 e HSP60 em camundongos infectados intratraquealmente (i.t.) com P. brasiliensis. Esquema Profilático: camundongos BALB/c foram imunizados com pCDNA3 com sequências codificadoras de P10, HSP60 ou IL-12 e foram infectados i.t com 3x105 leveduras do isolado Pb18. Esquema Terapêutico: Camundongos BALB/c e B10.A foram infectados i.t. e após 30 dias foram submetidos à imunização por 4 semanas, ou 5 meses somente para B10.A, com pCDNA3 codificando P10 e/ou IL-12. Níveis de anticorpos, unidades formadoras de colônias (UFC) e produção de citocinas foram analizados. Foi observada redução significativa de UFC nos pulmões dos camundongos imunizados com vetor contendo P10/IL-12. A histopatologia dos pulmões mostrou áreas preservadas e redução de inflamação nestes animais. O nível de citocinas nos pulmões mostrou aumento de IFN-g e IL-12 caracterizando uma resposta Th1. Tratamento de animais B10. A com pP10 até 5 meses, reduziu o número de leveduras infectantes perto de esterilização. / Paracoccidiodomycosis (PCM) is a systemic granulomatous disease caused by the thermo-dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. It is widespread in South and Central America. Gene therapy is a promising approach to Ag-specific immunotherapy. Peptide 10 contains the T-cell epitope of gp43 and is protective against experimental infection in mice. Presently, we analyzed the used of DNA-based vaccine encoding P10, IL-12 and HSP60 in mice intratracheally infected with P. brasiliensis. Prophylactic protocol: BALB/c mice were immunized with pCDNA3 encoding P10, HSP60 or IL-12 prior to intratracheal infection with 3x105 yeast cells of isolate Pb18. Therapeutic protocol: BALB/c and B10. A mice were infected and after 30 days, they were immunized for 4 weeks, or 5 months for B10.A only, with pCDNA3 encoding P10 and/or IL-12. Antibody titers in sera, colony forming units (CFU) and cytokine production were measured. A significant reduction of CFU in the lungs of mice immunized with plasmid encoding P10/IL-12 was observed. The lung histopathology confirmed the results showing preserved areas and reduction of inflammation in vaccinated animals. The cytokine levels in lungs showed enhanced levels of IFN-g and IL-12 characterizing a Th1 response. Further treatment of B10.A mice up to 5 months with pP10 reduced the number of infective yeasts close to sterilization.

O câncer cervical é o segundo maior responsável por mortes atribuídas a câncer em mulheres e dados epidemiológicos tem demonstrado a associação entre a infecção do HPV e o desenvolvimento da neoplasia. Sabe-se que num dado momento da infecção pelo HPV, ocorre integração do genoma viral ao genoma da célula hospedeira e consequente hiperexpressão de dois oncogenes virais, E6 e E7, o que contribui fortemente para a transformação celular. O presente trabalho propõe o uso de vacinas terapêuticas expressando a oncoproteína E7 do HPV-16 geneticamente fusionada à porção amino terminal da flagelina FliCd de Salmonella enterica sv müenchen; e verificação de seu possível papel adjuvante. Vacinas de DNA foram construídas de modo a direcionar as proteínas hibridas ao espaço intracitoplasmático. A verificação da expressão in vitro foi feita utilizando transfecções de culturas celulares, seguida de imunofluorescência e imunodetecção. Em seguida, essas construções vacinais foram administradas em camundongos C57BL6. Ensaios de ELISPOT foram feitos para mensuração o nível de linfócitos T secretores de IFN-g. Os dados de imunofluorescência e imunodetecção demonstraram a correta expressão da proteína. Ensaios de proteção realizados com 5 x 106 células TC-1 administrada por via subcutânea mostraram 80% de proteção em camundongos que haviam recebido previamente 4 doses das vacinas de DNA por biobalística. Ensaios de ELISPOT mostraram em média 9 células do baço secretoras de IFN-g por 106 células do baço (INF-g+/106) responsivas ao peptídeo CD8 / E7 de forma específica. Nossos dados sugerem que a formulação vacinal possui um efeito terapêutico significativo frente ao desafio com as células tumorais TC-1. Em paralelo, foi construída a cepa de salmonela vacinal SL FlaE7 que não mostrou efeito protetor frente ao desafio com células TC-1. / The cervical cancer is the second major responsible for deaths attributed to cancer in women and epidemiologic data have been demonstrating the association between the infection of HPV and the development of this illness. It is known that in a certain moment of the infection with HPV, occurs the integration of the viral genome in the genome of the host cell and consequent over expression of two oncogenes, E6 and E7, it strongly contributes to the transformation of that cell. The present work proposes the use of DNA vaccines expressing the oncoprotein E7 of HPV-16 genetically fused to the portion A-terminal of the flagellin FliCd of Salmonella enterica sv müencheun and verification of your possible performance as adjuvant. The DNA vaccines were constructed in expression vector for eukaryotic to address the hybrid proteins to the intracitoplasmatic space. The verification of the expression in vitro was made using transfections of cellular cultures (COS-7) followed by immunofluorescence and western blot analyses. Soon after, those vaccines were injected in mice C57BL6 that were challenged then with 5^105 tumor cells TC-1 subcutaneous. ELISPOT assays were performed for measure the level of spleen cells secreting interferon g. The immunofluorescence and Western blot data are complementary demonstrating the correct expression of the protein. Protection assays showed 80% of protection in mice that had previously received 4 doses of the DNA vaccines in gene gun form. Assays of ELISPOT show 9 cells of the spleen secreting of IFN-g (average) for 106 cells of the spleen (INF-g /106). Our data suggest that the formulation of vaccines possesses a significant therapeutic effect front to the challenge with the tumor cells TC-1 accompanist splenocyte IFN-g secretory.

Toxina de Shiga produzida por linhagens de Escherichia coli (STEC) causa a Síndrome Hemolítica Urêmica (SHU), uma doença severa. A Stx é uma toxina AB5 formada pela monomérica subunidade A catalítica, com efeito inibitório da síntese proteica, e cinco subunidades B, envolvidas na ligação ao receptor glicolipídico na superfície das células alvo. A proteína Stx2DAB foi administrada em camundongos combinada com diferentes adjuvants: toxina termo-lábel (LT) derivada de E. coli enterotoxigênica, a flagelina FliCi de S. Typhimurium, hidróxido de alumínio ou adjuvante de Freund. Adicionalmente os animais foram imunizados com toxina desnaturada. Os resultados mostraram que os soros dos animais imunizados com a Stx2DAB e adjuvante de Freund apresentaram os maiores títulos de anticorpos anti-Stx2 com a proteção máxima de 77% ao desafio letal com a toxina Stx2, entretanto animais imunizados com a toxina desnaturada não apresentaram proteção. Os resultados mostram o potencial protetor do antígeno vacinal como vacina de subunidade e a importância da conformação na proteção. / Shiga toxin (Stx)-producing Escherichia coli strains (STEC) cause the Hemolytic Uremic Syndrome (HUS), a severe illness. The Stx is an AB5 toxin and comprises a single catalytic A subunit, endowed with protein synthesis inhibitory effect, and five B subunits, involved in the binding to glycolipid receptors on the surface of target cells. The protein Stx2DAB was administered to mice combined with different adjuvants: a heat-labile toxin (LT), derived from enterotoxigenic E. coli (ETEC) strains, the flagellin FliCi of S. Typhimurium, alum or Freund\'s adjuvant. Additionally mice were immunized with denatured toxin. The results showed that sera from mice immunized with recombinant Stx2DAB plus Freund adjuvant displayed the highest anti-Stx2 antibody titers with maximum protection of 77% to a lethal challenge with the Stx2 holotoxin, however animals immunized with denatured toxin showed no protection, despite high serum titers achieved. The results show the potential protector of vaccine antigen as a vaccine subunit and the importance of conformation in the protection.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-08-05Bitstream added on 2014-06-13T20:35:31Z : No. of bitstreams: 1 lopes_bp_me_jabo.pdf: 2441029 bytes, checksum: 9d91faa58722dae99b55f32ecfbd0b52 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O Clostridium chauvoei é o agente causador do carbúnculo sintomático, doença que acomete bovinos e ovinos. É um dos principais problemas sanitários que ocorre nos rebanhos pecuários em todo o mundo. A vacinação dos animais jovens é a medida profilática indicada, visto que esta medida preventiva nos sistemas de produção é de extrema importância econômica e reconhecida pelos produtores, mesmo sendo de aplicação voluntária. Três grupos de bovinos, contendo 20 animais em cada grupo, foram vacinados com três vacinas comerciais contra o carbúnculo sintomático para a avaliação sorológica dos mesmos por meio do teste de aglutinação rápida em placa. Os animais foram vacinados no dia 0, e o reforço vacinal foi realizado 30 dias após a primeira dose. Após 21 dias do reforço, o sangue foi coletado da veia jugular, e o soro foi obtido a temperatura ambiente quando ocorreu a coagulação sanguínea e separação do soro. Foi comparada a resposta de indução de anticorpos nos grupos de animais reagentes a esse teste com antígenos obtidos de duas cepas, uma de referência (MT) do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) e outra cepa de campo. Os resultados demonstraram que a resposta dos animais imunizados frente à cepa de referência foi satisfatória, não existindo diferença entre as três vacinas testadas. No entanto, quando este mesmo teste foi realizado com antígenos produzidos com a cepa de campo identificada por PCR, verificou-se a ausência de anticorpos aglutinantes na maioria dos bovinos avaliados. Na análise estatística ficou comprovado que existem diferenças significativas nos resultados dos testes de aglutinação rápida em placa quando se utilizam cepas distintas de Clostridium chauvoei, provavelmente em decorrência de diferenças antigênicas existentes entre as cepas. / The Clostridium chauvoei is the agent which causes black leg, a disease that attacks the bovine and ovine. It is one of the main sanitary problems that occur with cattle-raising flocks in the world. The vaccination of young animals is the best prevention measure in production systems and is of extreme economic importance and is recognized by producers even if the application is voluntary. Three bovine groups, containing 20 animals each group, were vaccinated using three commercial vaccines against the black leg, for evaluation of bovine serological by tests of plate agglutination. The cattle were treated on day 0 and another dose was given on day 30. After 21 days, the blood was colleted of jugular vein and serum was obtained at 25°C, by blood coagulation. The comparison was made by detection of antibodies response between the animals that react to the test with antigens obtained from two strains which were used, one referred (MT) as Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) and another strain isolated from the field cases. The results determined that the response of the immunized animals faced by the referred strain was satisfactory with non-existing differences between the three tested vaccines. However, when the same test was conducted with antigens obtained from the field strain identified by PCR, it was verified the absence of agglutinating antibodies agglutinants in the majority of the bovines evaluated. In the statistics analysis were confirmed that significant differences were obtained in the agglutination plate test when different strains of Clostridium chauvoei were used, maybe because of the occurrence of antigenic difference, between the two strains tested.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-18Bitstream added on 2014-06-13T19:57:05Z : No. of bitstreams: 1 penhafilho_rac_me_jabo.pdf: 391172 bytes, checksum: 766b9bf2041c86185eae35cbd749e2ac (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Salmonella Gallinarum (SG) causa o Tifo Aviário, uma doença caracterizada por alta mortalidade e morbidade em aves. Salmonella Enteritidis (SE) é uma salmonela paratífica, capaz de acometer aves e mamíferos. Carne de aves e ovos são as principais fontes de transmissão de SE, causando doença transmitida por alimentos em humanos. O controle destas bactérias nas criações avícolas é feito através da combinação de medidas sanitárias e a vacinação das aves. As vacinas vivas mostram-se melhores do que as inativadas para combater esses sorotipos, no entanto, a proteção contra SE, é parcial. A cepa SG cobS cbiA é incapaz de sintetizar vitamina B12. A ausência dessa substância prejudicou a sobrevivência da bactéria no organismo parasitado, causando atenuação na virulência. Neste trabalho, foram avaliadas a mortalidade e a infecção sistêmica causadas por SG cobS cbiA em comparação com uma cepa selvagem de SG. Também foi avaliado seu potencial vacinal contra SG e SE em aves de postura e sua utilização para impedir a colonização cecal por SE em pintinhos de corte de um dia. As aves de postura foram vacinadas com uma dose aos cinco dias, ou com duas doses aos cinco e vinte e cinco dias de vida e foram desafiadas com as respectivas cepas de SG e SE aos 45 dias de vida. As aves que receberam tanto uma quanto duas doses da cepa vacinal foram parcialmente protegidas contra SG. A proteção contra SE foi significativa no grupo de aves que recebeu duas doses de SG cobS cbiA. Porém, a inoculação de SG cobS cbiA em pintinhos com um dia de vida não impediu a colonização do ceco por SE. A cepa SG cobS cbiA demonstrou ter potencial vacinal contra SG e SE. / Salmonella Gallinarum (SG) causes Fowl Typhoid, a disease caracterized by high mortality and morbidity rates in poultry. Salmonella Enteritidis (SE) is a paratyphoid salmonelae that infects birds and mammals. Poultry meat and eggs are the main sources of transmission of SE, causing foodborne disease in humans. The control of these bacterias inside the avian breeding sites is done by the combination of sanitary measures and poultry vaccination. Live vaccines have demonstrated greater efficacy on the protection of poultry against these serovars than the killed vaccines, though, protection against SE is still partial. The strain SG cobS cbiA is uncapable to synthesize vitamin B12. The absence of this substance harmed the bacterial survival in the infected organism, causing attenuation of the virulence. On this work, the mortality and the sistemic infection by SG cobS cbiA were measured and compared with a wild strain of SG. It was also evaluated the potential use of the attenuated strain as a vaccine against SG and SE in laying hens and its utilization to prevent the colonization of the ceca by SE on 1-day-old chickens. The laying hens were vaccinated with one dose at 5- day-old, or with two doses at 5 and 25-day-old and were challenged at 45-day-old with the respective strain of SG or SE. The vaccination either with one or two doses was able to protect the birds against challenge with SG. The administration of two doses of SG cobS cbiA protected the laying hens against SE. Although, the inoculation of SG cobS cbiA by oral gavage on newly hatched chicks was unable to prevent the colonization of the ceca by SE. The protection confered by the strain SG cobS cbiA demonstrated its potential to be used as a vaccine.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-03-05Bitstream added on 2014-06-13T20:31:22Z : No. of bitstreams: 1 seger_j_me_botfm.pdf: 389931 bytes, checksum: 81c6da647f5f07996792ee710b5e8a1e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A necessidade de uma vacina mais segura e eficaz para a profilaxia da tuberculose (TB) e consenso na comunidade cientifica. A vacina genica contendo o gene da proteina de choque termico de 65 KDa (hsp65) do Mycobacterium leprae, e denominada pVAXhsp65, vem sendo investigada no Brasil. Esta vacina induz imunidade protetora contra a TB experimental em camundongos e cobaias. Como o gene desta vacina codifica uma proteina altamente conservada, existe a preocupacao de que a mesma induza autoimunidade. O objetivo deste trabalho foi, portanto, investigar se esta vacina modula o desenvolvimento da encefalite autoimune experimental (EAE), que e um modelo para estudo de Esclerose Multipla. Esta investigacao foi feita em tres etapas: padronizacao da EAE em ratos Lewis, caracterizacao da resposta imune induzida pela vacina pVAXhsp65 nestes animais e, finalmente, avaliacao do efeito desta vacina nas caracteristicas clinicas e imunologicas da EAE induzida nestes animais. Ratos Lewis femeas imunizados no coxim plantar com 50 Êg de mielina, associada ao Adjuvante Completo de Freund, desenvolveram doenca tipica, caracterizada por perda acentuada de peso, escore clinico elevado e alta producao de IFN-Á e TNF-¿. A imunizacao dos animais com 3 doses de pVAXhsp65 por via intramuscular nao desencadeou resposta imune humoral, entretanto, induziu resposta imune celular, caracterizada pela producao de IFN-Á por celulas esplenicas. Animais previamente vacinados desenvolveram EAE com caracteristicas clinicas e imunologicas similares as observadas em animais nao vacinados. Portanto, este trabalho permitiu padronizar de forma satisfatoria a EAE em ratos Lewis o que permitira a utilizacao deste modelo em futuras investigacoes. Alem disso, constatamos que a imunizacao destes animais com DNAhsp65 nao alterou o desenvolvimento tipico da EAE, ou seja, esta doenca nao se manifestou de forma mais grave ou branda. / The development of an effective tuberculosis (TB) vaccine is an urgent priority. A genetic vaccine containing the heat shock protein (hsp65) gene from Mycobacterium leprae (pVAXhsp65) showed prophylactic and therapeutic activity in experimental TB. As anti-hsp65 immune response is present in both, multiple sclerosis and experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE), it is important to evaluate if pVAXhsp65 immunization affects EAE development. To test this possibility we first optimized EAE development in female Lewis rats. The best procedure included immunization in the footpad with 50 ìg of myelin associated with Complete Freund Adjuvant. This triggered a typical disease, characterized by significant weight loss, high clinical scores and elevated IFN-ã and TNF-á production. Immunization with pVAXhsp65 induced immune response characterized by absence of anti-hsp65 antibodies but significant IFN-ã production by splenic cells stimulated with recombinant rhsp65. Animals previously immunized with pVAXhsp65 developed an EAE with weight loss, clinical score and immune response very similar to non-immunized rats. This investigation allowed the optimization of a very promising model of multiple sclerosis that will benefit other research projects in our laboratory. In addition, these results showed that immunization of Lewis rats with pVAXhsp65 did not exacerbate or delay EAE development.

Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-08-22. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:14:10Z : No. of bitstreams: 1 000866290.pdf: 647674 bytes, checksum: 4f5b629fd7ab086c433234638ac87a25 (MD5) / Introdução: A seroconversão à vacina contra o vírus da hepatite B (VHB) em indivíduos imunocompetentes varia de 90-95% enquanto nos pacientes em hemodiálise varia de 40-80%. Manter níveis adequados de anticorpos contra o VHB nas unidades de diálise é estratégia importante para diminuição do risco de transmissão do VHB e redução da incidência de complicações crônicas da hepatite B. Objetivo: Avaliar os fatores que influenciam a seroconversão do anticorpo anti- HbS, em pacientes vacinados contra o VHB, em diferentes estádios da doença renal crônica (DRC) e nos tratados por hemodiálise (HD) e diálise peritoneal (DP). Pacientes e Métodos: Foram incluídos pacientes maiores que 18 anos, portadores de DRC prevalentes em dezembro de 2011 e incidentes entre janeiro de 2012 e abril de 2014, que receberam o primeiro esquema de vacinação completo contra o VHB. Os pacientes foram divididos em quatro grupos conforme o estádio da DRC e a modalidade de diálise: grupo DRC (pacientes no estádio IV da DRC), grupo Pré-diálise (pacientes no estádio V da DRC), grupo DP (pacientes tratados por DP) e grupo HD (pacientes tratados por HD). Associações entre fatores demográficos, laboratoriais, clínicos, dialíticos e nutricionais com a seroconversão à vacina contra o VHB (anticorpo anti-Hbs >10 UI/dl) foram analisadas por regressão logística univariada e multivariada. Resultados: Foram incluídos 191 pacientes, 72 no grupo HD, 40 no DP, 36 no DRC e 43 no Pré diálise). A média de idade foi de 59,6 ± 15,1 anos; 49,7% eram masculinos, 83,5% da raça branca e 47,6% diabéticos. A porcentagem geral de seroconversão foi de 72,8%, sendo 76,4% para o grupo HD, 67,5% para o grupo DP, 75% para o grupo DRC e 69,8% para o grupo Pré-Diálise (p=0,72). Os fatores independentemente associados à maior chance de seroconversão foram a contagem total de linfócitos (p=0,02) e o ângulo de fase (p= 0,02), considerando a amostra total de... / Introduction: Seroconversion to the vaccine against hepatitis B virus (HBV) in immunocompetent individuals ranges from 90-95% while in hemodialysis patients varies from 40-80%. The maintenance of adequate levels of antibodies against HBV in the dialysis units is an important strategy for reducing the risk of HBV transmission and of incidence of chronic complications of hepatitis B. Objectives: To evaluate the factors influencing seroconversion of antibody anti-HbS in patients vaccinated against HBV in different stages of chronic kidney disease (CKD) and treated by hemodialysis (HD) or peritoneal dialysis (PD). Patients and Methods: We included patients greater than 18 years, patients with CKD prevalent in December 2011 and 2012 incidents between January and April 2014, who received the first full vaccination scheme against HBV. The patients were divided into four groups according to the stage of CKD and dialysis modality: DRC Group (patients in stage IV of the CKD), Pre-dialysis group (patients in stage V of the CKD), HD group (patients treated by HD), and PD Group (patients treated by PD). Associations between demographic, clinical, laboratory, dialytic, and nutritional factors with seroconversion to the vaccine against HBV (antibody anti-HBS > 10 IU/dl) were analyzed by univariate and multivariate logistic regression. Results: A total of 191 patients were included; 72 in the HD, 40 at DP, 36 in the DRC, and 43 in the Pre dialysis group). The average age was 59.6 ± 15.1 years; 49.7% were male, 83.5% of the white race and 47.6% diabetics. The overall percentage of seroconversion was 72.8%; 76.4% for the HD, 67.5% for DP, 75% for the DRC and 69.8% for Pre dialysis group (p = 0.72). The factors independently associated with the greater chance of seroconversion were the total lymphocyte count (p = 0.02) and the phase angle (p = 0.02), considering the total sample of patients; the total lymphocyte count (p = 0.033) and the use of vitamin D ...

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-03. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:00Z : No. of bitstreams: 1 000865792_20170703.pdf: 136663 bytes, checksum: 598a2569b5cb9578699b2241ca94ae90 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-07-24T11:34:12Z: 000865792_20170703.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-07-24T11:35:17Z : No. of bitstreams: 1 000865792.pdf: 3649957 bytes, checksum: a33acc20fc89748c7c69172c8ee96434 (MD5) / A esporotricose é uma infecção subaguda ou crônica que afeta seres humanos e outros mamíferos, causada pelo complexo de espécies Sporothrix schenckii. A doença tem uma distribuição mundial, mas é endêmica no Brasil, principalmente no estado do Rio de Janeiro, onde o gato tem se tornado o principal agente transmissor. O tratamento antifúngico convencional é demorado e está associado a efeitos adversos, apontando a necessidade de terapias mais eficazes e seguras, sendo a vacinação profilática ou terapêutica provavelmente a alternativa mais promissora. Neste estudo foi avaliada a imunogenicidade e a toxicidade de candidatos vacinais à base de proteínas da superfície celular (PSCs) de S. schenckii stricto sensu. As PSCs isoladas com o agente redutor Ditiotreitol foram caracterizadas por eletroforese, espectrometria de massas e pelo programa preditor de adesinas FungalRV. As PCSs foram formuladas com dois adjuvantes, hidróxido de alumínio (HA) ou Gel PetA, em duas concentrações ou usadas isoladamente. As formulações resultantes (PSC10, PSC100, HA+PSC10, HA+PSC100, PetA+PSC10 e PetA+PSC100) foram administradas em duas doses pela via subcutânea em camundongos Balb/C com intervalo de 2 semanas. O soro obtido de cada grupo sete dias após a segunda dose foi usado para analisar a imunogenicidade de cada formulação. O soro de todos os grupos vacinados, exceto os grupos PSC10 e HA+PSC10, reagiram com uma banda de 47 kDa, previamente identificada como a enzima glicolítica enolase e predita como uma adesina pela base dados FungalRV. Posteriormente foi demonstrada por citometria de fluxo a presença dessa proteína na parede celular de S. schenckii, sugerindo o papel imunogênico da mesma. A indução das imunoglobulinas IgG e IgG2a foi significativamente maior com HA+PSC100 e Pet+PSC100 em relação a PSC10, PSC100, HA+PSC10 e PetA+PSC10. A indução... / Sporotrichosis is a subacute or chronic infection affecting humans and other mammals, caused by the Sporothrix schenckii species complex. The disease has a worldwide distribution, but is considered endemic in Brazil, mainly in the state of Rio de Janeiro, where the cat has become the main transmitting agent. The antifungal treatment is very long and often associated to adverse effects indicating the demand for preventive or more effective and safe therapeutic strategies. One of the more promissory approaches would probably be the prophylactic or therapeutic vaccination. This study evaluated the immunogenicity and toxicity of cell surface protein-based (CSP) vaccine candidates of S. schenckii stricto sensu. The CSPs isolated with dithiotreitol were characterized by electrophoresis, mass spectrometry and FungalRV adhesin predictor. The CSPs were formulated with two adjuvants, aluminum hydroxide (AH) or gel PetA, or used alone, in two concentrations. The obtained formulations (CSP10, CSP100, AH+CSP10, AH+CSP100, PetA+ CSP10 and PetA+ CSP100) were administered to Balb/C mice in two subcutaneous doses at 2 weeks interval. The serum obtained from each group 7 days after the second dose was used to analyze the immunogenicity of each formulation. All the serum obtained from vaccinated groups, except those from CSP10 and AH+CSP10 groups, reacted with a 47 kDa band, previously identified as the glycolytic enolase enzyme and predicted as an adhesin in the FungalRV program. Subsequently, we demonstrated the presence this protein in the cell wall of S. schenckii, suggesting its immunogenic role. The induction of IgG and IgG2a immunoglobulins was significantly higher with AH+CSP100 and PetA+CSP100 formulations with respect to CSP10, CSP100, AH+CSP10, and PetA+CSP10. The significant induction of IgG1 and IgG2a subtypes and IL-12, IFN-γ, IL4 and IL-17 by AH+CSP100, suggests a balance ...

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndrewDMoura_DISSERT.pdf: 2171367 bytes, checksum: f41e94b4a019b04f63123834b3af9d4c (MD5) Previous issue date: 2013-04-02 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Toxoplasmosis is a zoonosis of worldwide distribution caused by the protozoan Toxoplasma gondii, triggering dangerous complications in immunocompromised patients and pregnant women, as well as having great economic impact for the livestock. So far the control of toxoplasmosis is made primarily by chemotherapy. However, most drugs used routinely have some limitations. In order to control this disease, several research groups, including ours, has been working to develop a medical-veterinary vaccine based on parasite antigens, vectors and protocols of immunization. In this study were implemented and standardized methodologies for amplification and cloning of recombinant immunogens in the system for the development of a prototype vaccine, based on the surface antigens of T. gondii and recombinant adenovirus encoding these antigens. Genes encoding BAG1, GRA2 and SAG1 proteins were amplified. We established a strategy for cloning SAG1, SAG2, SAG3 and TgAMA1- genes in recombinant system. The genes encoding SAG1 and SAG2 were cloned and their sequences showed high similarity with sequences from GenBank. The virtual translation of these proteins showed polymorphisms in the amino acid sequence, which can be correlated with levels of antigenicity. Simultaneously, the adenovirus encoding the SAGs (HAdSAGs) were expanded, purificated and characterizated. Immunization of C57bl/6 mice, using viral supernatant was not enought to elicit immune responses at high levels, being required HAdSAGs titration for future immunizations. Therefore, this study allowed the cloning of the two genes important for the development of a prototype vaccine. Besides, implementations methodologies that permit advancements in the development of a vaccine against toxoplasmosis using adenovirus to express proteins of the parasite / A toxoplasmose ? uma zoonose de distribui??o mundial causada pelo protozo?rio Toxoplasma gondi podendo desencadear graves complica??es em pacientes imunossuprimidos e gestantes; bem como acarretando grande impacto econ?mico para a pecu?ria. At? o momento o controle da toxoplasmose ? feito basicamente pela quimioterapia. Contudo, a maioria das drogas utilizadas na rotina apresentam alguma limita??o. No intuito do controle dessa parasitose, diversos grupos de pesquisas, inclusive o nosso, v?m trabalhando para o desenvolvimento de uma vacina m?dico-veterin?ria com base em ant?genos do parasito, vetores e protocolos para imuniza??o. Nesse estudo foram implantadas e padronizadas metodologias para amplifica??o e clonagem de imun?genos em sistema recombinante visando o desenvolvimento de um prot?tipo vacinal, tendo como base os ant?genos de superf?cie de T. gondii e adenov?rus recombinante codificando esses ant?genos. Os genes que codificam as prote?nas BAG1, GRA2 e SAG1 foram amplificados. Foi estabelecida uma estrat?gia de clonagem dos genes SAG1, SAG2, SAG3 e TgAMA-1 em sistema recombinante. Os genes que codificam SAG1 e SAG2 foram clonados e suas sequ?ncias apresentaram grande similaridade com sequ?ncias depositadas no GenBank. A tradu??o virtual dessas prote?nas apresentou polimorfismos no n?vel de amino?cidos, que poder?o ser correlacionadas com n?veis de antigenicidade. Paralelamente, foi realizada a expans?o, purifica??o e caracteriza??o dos adenov?rus que codificam as SAGs (HAdSAGs). A imuniza??o de camundongos C57BL/6, utilizando o sobrenadante viral, n?o foi suficiente para desencadear respostas imunol?gicas em altos n?veis, sendo necess?ria a titula??o dos HAdSAGs para futuras imuniza??es. Portanto, esse estudo permitiu a clonagem de dois genes importantes para o desenvolvimento de um prot?tipo vacinal, al?m de implementa??es de metodologias que permitir?o avan?os para o desenvolvimento de uma vacina contra a toxoplasmose usando adenov?rus que expressem prote?nas do parasito