A fin de estudiar el efecto antimutagénico y citoprotector del extracto acuoso del fruto de Myrciaria dubia H. B. K. Mc Vaugh “camu camu”, frente al daño producido por el Fluoruro de sodio, se evaluó su capacidad protectora en eritrocitos policromáticos de médula ósea de ratón. Se trabajó con individuos de la cepa albina Swiss Rockefeller divididos en dos grupos de 60 individuos de cada sexo. Se les dió de beber ad libitum el extracto acuoso del fruto de “camu camu”, en concentraciones de 50, 25 y 5 mg/kg de peso corporal, respectivamente durante 10 días consecutivos, a un cuarto grupo se le suministro 25 mg/kg peso corporal de ácido ascórbico químicamente puro. Al control negativo se le inyectó agua ad libitum y al control positivo 125 mg/kg de ciclofosfamida vía intraperitoneal. Al décimo día de tratamiento se les inyectó una dosis única de 20mg/kg de fluoruro de sodio. Al décimo primer día los ratones fueron sacrificados para determinar la frecuencia de MN y el índice de citotoxicidad medular, en células sanguíneas de médula ósea siguiendo las pautas de Schmid, (1975). Se obtuvo las frecuencias de eritrocitos micronucleados en los diferentes tratamientos 3,1 ± 1,79* “TI”, 9,2 ± 1,93* “TII”, 26,8 ± 6,10*”TIII”, 12,3 ± 3,62* “TIV” para los ratones hembras y 3,9 ± 1,79* “TI”, 11 ± 2,58* “TII”, 32 ± 9,20*”TIII”, 10,3 ± 3,91*”TIV” para machos. Siendo el valor promedio del Índice de citotoxicidad para los ratones machos de: 1,59 ± 0,42*”TI”, 0,91 ± 0,23* “TII”, 0,81 ± 0.21* “TIII” y 1,37 ± 0,15*”TIV”, y para las hembras: 1,59 ± 0,42* “TI”, 0,91 ± 0,23*”TII”, 0,81 ± 0.21*”TIII”, 1,37 ± 0,15*”TIV”. Los resultados fueron analizados utilizando la prueba Paramétrica de Tukey con un nivel de significancia del 95%(p<0.05). Se observó diferencias significativas en la frecuencia de micronúcleos en los diversos tratamientos. Se determinó que a mayor concentración del extracto acuoso del fruto de “camu camu”, hubo un mayor efecto antimutagénico y citoprotector sobre los eritrocitos de la médula ósea de ratón Se concluye que el extracto acuoso del fruto de Myrciaria dubia H. B. K. Mc Vaugh “camu camu”, contrarrestó los efectos deletéreos del fluoruro de sodio, en eritrocitos de médula ósea de ratón. / It was evaluated the protective ability of aqueous extract of the fruit of Myrciaria dubia H. B. K. Mc Vaugh "camu camu," in mouse bone marrow polychromatic erythrocytes to evaluated the antimutagenic effect against the mutagenic damage produced by sodium fluoride,. In this work, we used animals houses of the Rockefeller Swiss albino strain divided into two groups, 60 individuals from each sex. Those who drank ad libitum the aqueous extract of M dubia; TI = 50, TII = 25 and TIII = 5 mg / kg body weight respectively for 10 consecutive days; TIV drank 25 mg / kg body weight of ascorbic acid, the fifth group drank water ad libitum, the sixth group was intraperitoneally injected by 125 mg/kg of cyclophosphamide. The day tenth the mice were injected with a single dose of 20mg/kg of sodium fluoride. At day 11 mice were sacrificed to determine the frequency of MN and the rate of bone marrow cytotoxicity in bone marrow blood cells following the guidelines of Schmid (1975). The frequency of micronucleated erythrocytes was: TI = 3.1 ± 1.79* TII = 9.2 ± 1.93*, TIII = 26.8 ± 6.10 * TIV = 12.3 ± 3 62*; for females and TI = 3.9 ± 1.79* TII = 11 ± 2.58* and TIII = 32 ± 9.20* TIV = 10.3 ± 3.91* for males. The average values of the cytotoxicity index for male were: TI = 1.59 ± 0.42*; TII = 0.91 ± 0.23*; TIII = 0.81 ± 0.21* and the TIV = 1.37 ± 0.15*, for females the following values were obtained, TI = 1.59 ± 0.42*; TII = 0.91 ± 0.23*; TIII = 0.81 ± 0.21* and TIV = 1.37 ± 0.15*. These results were analyzed using parametric Tukey test with p <0.05 showing significant differences between them for the different treatments. It was determined that a higher concentration of the aqueous extract of the fruit of Myrciaria dubia produce the highest antimutagenic and cytoprotective effect on the erythrocytes of mice bone marrow. This did not happen with the group that was treated with cyclophosphamide, where polychromatic erythrocytes showed DNA damage as evidenced by the presence of MN. In conclusion, the aqueous extract of the fruit of Myrciaria dubia H. B. K. Mc Vaugh "camu camu" counteracts the deleterious effects of sodium fluoride in erythrocytes of mouse bone marrow. / Tesis

Objetivo: Evaluar la asociación entre la ingesta dietética de vitamina D y exposición a la luz solar, y el exceso de peso en estudiantes universitarios de Lima-Perú, 2021. Diseño: Se realizará un estudio transversal analítico en estudiantes universitarios de Lima, Perú.

Objetivo: Conocer las percepciones sobre cambios en la actividad física y el consumo de frutas ricas en vitamina C durante la pandemia por el COVID 19, en estudiantes de una universidad privada de Lima. Diseño: Es un estudio cualitativo con un diseño de investigación fenomenológica. La fenomenología es un estudio que busca comprender experiencias vividas por el individuo (17,18,19).

El herpesvirus asociado al sarcoma de Kaposi, KSHV, es el agente etiológico del sarcoma de Kaposi. Dentro del genoma viral, el receptor viral acoplado a proteína G (vGPCR) conduce a la oncogénesis y angiogénesis; su expresión persistente y actividad es necesaria para el mantenimiento del tumor. La forma hormonal activa de la vitamina D, 1α,25(OH)2D3, presenta efectos antineoplásicos en varios tipos de tumores. El potencial anti-proliferativo y antiinflamatorio del 1α,25(OH)2D3 en células endoteliales que expresan el vGPCR ha sido explorado por nuestro grupo. En los últimos años se ha incrementado el uso de análogos sintéticos del 1α,25(OH)2D3 con menor actividad calcemica para minimizar la hipercalcemia producida por dosis altas del metabolito. En este trabajo de Tesis Doctoral se profundizó en el mecanismo de acción antineoplásico del 1α,25(OH)2D3 y su análogo menos calcemiante TX 527. Se obtuvo evidencia que ambos compuestos promueven la apoptosis a través de un desbalance entre los miembros de la familia de proteínas Bcl-2 en células vGPCR. Se observó un aumento en los niveles de expresión de la proteína pro-apoptótica BIM y disminución de A20 por un mecanismo dependiente del VDR y un pico de inactivación en la fosforilación de BAD acompañado por la formación de complejos con Bcl-2, alterando posiblemente la integridad de la mitocondria. También, se demostró que el 1α,25(OH)2D3 y TX 527 inducen autofagia a través de la inactivación del eje PI3K/Akt/mTOR y regulación de BECN1 como parte del mecanismo antineoplásico de acción. Asimismo, ambos agonistas regulan la proliferación de las células vGPCR mediante la inactivación de ERK1/2 y p38 y aumento de la expresión de las fosfatasas MKP-3 y MKP-5. Eventos regulados por la expresión del VDR, con excepción de ERK1/2, debido probablemente a una regulación no genómica de esta quinasa. El Bortezomib, inhibidor del proteasoma y de la activación de NF-ĸB, disminuyó la proliferación celular e indujo apoptosis por un mecanismo similar a los agonistas del VDR en células vGPCR. Proceso acompañado además por la activación del factor de transcripción FOXO1, disminución en la expresión génica de VEGF y aumento del inhibidor del ciclo celular, p21. Debido a las limitaciones que presentan los cultivos celulares bidimensionales, se desarrolló un método para obtener esferoides multicelulares a partir de células endoteliales y transformadas por la expresión del vGPCR. Las células vGPCR cultivadas en una superficie de baja adherencia desarrollaron esferoides de mayor tamaño y el tratamiento con 1α,25(OH)2D3 produjo cambios morfológicos con la consecuente inducción de apoptosis. A nivel molecular, se observó un aumento en la expresión génica del VDR, BIM y p21 al aumentar la dosis. Además, el 1α,25(OH)2D3 provocó un aumento en los niveles proteicos de BIM y disminuyó la activación de ERK1/2 y Akt, permitiendo concluir que las células en cultivos tridimensionales responden al agonista de manera similar a lo observado en cultivos en monocapa. Los resultados obtenidos en este trabajo de tesis contribuyen al conocimiento del mecanismo de acción antiproliferativo del 1α,25(OH)2D3 y su análogo menos calcemiante TX 527 en un modelo celular de sarcoma de Kaposi. A su vez, sustenta las bases para dar continuación a otros estudios en modelos in vivo y evaluar su potencial aplicación, sólo o en combinación con Bortezomib, en el tratamiento de esta patología. / The Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus, KSHV, is the etiological agent of Kaposi's sarcoma. Within the viral genome, the viral G protein-coupled receptor (vGPCR) leads to oncogenesis and angiogenesis; its persistent expression and activity are necessary for tumor maintenance. The active hormonal form of vitamin D, 1α,25(OH)2D3, has antineoplastic effects in several types of tumors. The anti-proliferative and antiinflammatory potential of 1α,25(OH)2D3 in endothelial cells expressing vGPCR has been explored by our group. In recent years, the use of synthetic analogues of 1α,25(OH)2D3 with lower calcemic activity has been increased to minimize the hypercalcemia produced by high doses of the metabolite. In this Doctoral Thesis work, the antineoplastic mechanism of action of 1α,25(OH)2D3 and its less calcemic analogue TX 527 was studied. Evidence was obtained that both compounds promote apoptosis through an imbalance of Bcl-2 protein family members in vGPCR cells. An increase of pro-apoptotic BIM and a decrease of A20 protein expression levels by a VDRdependent mechanism was observed, as well as, a peak of inactivation of phosphorylated BAD accompanied by its association with Bcl-2, possibly altering mitochondria integrity. It was also demonstrated that 1α,25(OH)2D3 and TX 527 induce autophagy through the inactivation of the PI3K/Akt/mTOR axis and regulation of BECN1 as part of the antineoplastic mechanism of action. Moreover, both agonists regulate vGPCR cells proliferation by inactivating ERK1/2 and p38 and increasing MKP- 3 and MKP-5 phosphatases expression. These events were regulated by VDR expression, with the exception of ERK1/2, probably due to a non-genomic regulation of this kinase. Bortezomib, an inhibitor of proteasome and NF-ĸB activation, decreased cell proliferation and induced apoptosis by a similar mechanism to VDR agonists in vGPCR cells. Process also accompanied by the activation of the transcription factor FOXO1, decrease in VEGF gene expression and increase of the cell cycle inhibitor, p21. Due to the limitations of two-dimensional cell cultures, a method was developed to obtain multicellular spheroids from endothelial cells and transformed by the expression of vGPCR. vGPCR cells cultured on a low adhesion surface developed larger spheroids and treatment with 1α,25(OH)2D3 triggered morphological changes with consequent apoptosis induction. At molecular level, an increase in VDR, BIM and p21 gene expression was observed when dose was increased. In addition, 1α,25(OH)2D3 caused an increase in BIM protein levels and decreased the activation of ERK1/2 and Akt, allowing to conclude that cells in three-dimensional cultures respond to the agonist in a similar way to that observed in monolayer cultures. The results obtained in this thesis work contribute to the knowledge of the anti-proliferative mechanism of action of 1α,25(OH)2D3 and its less calcemic analogue TX 527 in a cellular model of Kaposi's sarcoma. In turn, it supports the bases to continue other studies in vivo models and evaluate their potential application, either alone or in combination with Bortezomib, in the treatment of this pathology.

En la presente Tesis Doctoral se describe la síntesis de nuevos compuestos bioactivos derivados de 1,2,3-triazol. La reacción de cicloadición 1,3-dipolar de Huisgen se llevó a cabo sobre distintos sustratos de interés, empleando nanopartículas de cobre (CuNPs) como catalizador de la reacción. Las mismas fueron obtenidas a través del sistema CuCl2-Li-DTBB empleado en nuestro grupo de investigación, tanto para la generación de NPs desnudas como soportadas. En todos los casos se obtuvieron los 1,2,3-triazoles 1,4-disustituídos con excelente regioselectividad. En el Apartado I (p.1-33), a modo de introducción general, se detallan antecedentes en la síntesis de 1,2,3-triazoles y las distintas actividades biológicas que poseen este tipo de compuestos. De manera similar se analizan distintos tipos de compuestos fosforados. En el Apartado II (p.34) se detallan los objetivos generales de esta Tesis Doctoral, que se desarrollarán en los siguientes tres capítulos. En el Apartado III (p.35-126), se desarrollará el Capítulo I que explora la síntesis de nuevos moduladores alostéricos del receptor nicotínico α7. Se describe la optimización de las condiciones de reacción para la cicloadición y los estudios de relaciones estructura-actividad realizados. A su vez se detalla la evaluación biológica de estos compuestos, realizada en colaboración con el grupo de la Dra. Cecilia Bouzat (INIBIBB-CONICET). En el Apartado IV (p.127-188) se desarrollará el Capítulo II, donde se describe la síntesis de 1,2,3-triazoles conteniendo derivados de indol. Se detalla la síntesis de los precursores, y la optimización de la reacción de cicloadición 1,3-dipolar para cada tipo de sustrato. Además, se especifican los ensayos biológicos realizados. Este trabajo se realizó en el marco de una estancia pre doctoral en el grupo de Neurofármacos del Instituto de Química Médica (IQM-CSIC) bajo la dirección de la Dra. Ma. Isabel Rodríguez-Franco. En el Apartado V (p.189-222), se desarrolla el Capítulo III donde se expone la síntesis de 1,2,3-triazoles di y trisustituidos, empleados como candidatos para reemplazar el anillo A de la vitamina D. Se discuten también los métodos de acoplamiento empleados para incorporarlos en el biciclo CD de vitamina D. / In this work, the synthesis of novel bioactive compounds, derived from 1,2,3-triazole moiety, is described. 1,3-dipolar cycloaddition (Huisgen reaction) was carried out with different substrates, using copper nanoparticles (CuNPs) as reaction catalyst. These NPs were obtained by reduction of the corresponding metal salt through the CuCl2-Li-DTBB reactive system. In this way, supported and unsupported CuNPs were generated. In all cases, the corresponding 1,4-disubstituted 1,2,3-triazoles were obtained with excellent regioselectivity. In Section I (p.1-33), by way of general introduction, synthesis of 1,2,3-triazoles, and their biological activities, are detailed. In the same way, different types of phosphorated compounds are analysed. In Section II (p.34), the general objectives of this thesis, which will be developed in the next three chapters, are detailed. In Section III (p.35-126), Chapter I will be developed, in which the synthesis of novel allosteric modulators of the α7 nicotinic receptor is explored. The optimization of reaction conditions for the 1,3-dipolar cycloaddition, and the structure-activity relationship (SAR) studies conducted, are described. The biological evaluation of these compounds, carried out in collaboration with Dra Cecilia Bouzat research group (INIBIBB-CONICET), it’s also described. In Section IV (p.127-188), Chapter II will be developed, in which the synthesis of 1,2,3- triazole-Indole derivatives is described. The synthesis of precursors, and the optimization of Huisgen reaction for each type of substrate, is described. The bioassays conducted for these compounds are also detailed. This work was carried out within the framework of a pre-doctoral stay in the NeuroDrugs group of the Medicinal Chemistry Institute at the Spanish National Research Council (IQM-CSIC), under the supervision of Dra. Ma. Isabel Rodríguez-Franco. In Section V (p.189-222), Chapter III will be developed, in which the synthesis of di and trisubstituted 1,2,3-triazoles, used as candidates to replace vitamin D ring A, is described. Coupling methods used to incorporate them into the vitamin D CD bicycle are also discussed.

Cinco décadas de descubrimientos de agentes antineoplásicos han generado una interesante batería de agentes quimioterapéuticos; sin embargo, aunque resultan útiles, se requieren agentes más efectivos ya que estos compuestos tienen poco impacto en las tasas de supervivencia o en la calidad de vida del paciente, especialmente en algunos tipos de cáncer, tales como el Carcinoma Celular Escamoso de Cabeza y Cuello (CCECC) y el Glioblastoma Multiforme (GBM). El presente trabajo de tesis describe resultados que demuestran la potencialidad terapéutica de dos productos sintéticos (análogos del calcitriol) y un compuesto natural (extracto triterpénico de las esporas de Ganoderma lucidum) como agentes terapéuticos en estos dos tipos de cáncer. El calcitriol (1α, 25(OH)2-vitamina D3) es esencial para el mantenimiento de la salud debido a su participación en un crisol de procesos fisiológicos como el control del metabolismo fosfo-cálcico, el crecimiento celular y el sistema inmune. Este compuesto, además, posee potenciales propiedades preventivas y terapéuticas contra diversas enfermedades hiperproliferativas como el cáncer, pero debido a la hipercalcemia que produce al seguir la posología terapéutica, se ve limitado su empleo como agente antitumoral. Por dichos motivos, se sintetizan análogos del calcitriol con el fin de encontrar alguno/s que presenten efectos antitumorales pero que carezcan de los efectos calcemiantes. Nuestro laboratorio, en conjunto con un grupo de investigación de Química Orgánica de la Universidad de Vigo, diseñamos y sintetizamos análogos del calcitriol que contienen un grupo oxolano o un grupo amida en la cadena lateral con el fin de estudiar su potencialidad terapéutica en cáncer. Como parte de este trabajo de tesis evaluamos si estos análogos podían ser efectivos como agentes antitumorales en CCECC y GBM. Por otra parte, la metodología más empleada en la búsqueda de nuevos principios activos naturales es la bioprospección, que incrementa en diez veces la probabilidad de éxito. En la actualidad, el Instituto Nacional del Cáncer (NCI) de USA está intensificando la búsqueda de metabolitos provenientes de la naturaleza para el descubrimiento de nuevas drogas debido a la gran variedad de compuestos que se encuentran en los productos naturales. Ganoderma lucidum es un reconocido hongo comestible y medicinal, empleado por más de dos mil años por la medicina tradicional China, India y Japonesa. Dentro de los efectos farmacológicos se documentaron sus propiedades antitumorales y contiene más de 400 compuestos bioactivos, entre ellos los triterpenoides (la actividad antitumoral se le atribuye a ellos), polisacáridos, nucleótidos y esteroles. También, como parte de este trabajo de tesis comenzamos a evaluar la actividad antitumoral, para el CCECC y los GBM, del extracto triterpénico de las esporas de este hongo producidos por el Laboratorio de Hongos Comestibles y Medicinales, CERZOS-CCT-Bahía Blanca-CONICET. / Five decades of research of anticancer agents have generated an interesting battery of chemotherapeutic agents; however, even though it is useful, more effective agents are needed since these have little impact in survival rates or in the patient‟s life quality, particularly in certain kinds of cancer, such as head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) and glioblastoma multiforme (GBM). This thesis describes results that demonstrate the therapeutic feasibility of two synthetic products (analogues of calcitriol), and a natural compound (extract triterpene Ganoderma lucidum spores) as therapeutics agents in these two kind of cancer. Calcitriol (1α, 25(OH)2-vitamin D3) is essential for the maintenance of health due to its participation in a crucible of physiological processes such as the control of phospho-calcic metabolism, cell growth and immune system. Moreover, this compound has potential preventive and therapeutic properties against various hyper proliferative diseases such as cancer, but due to the hypercalcemia that causes the therapeutic dosage, its use as antitumoral agent is limited. For these reasons, analogues of calcitrol were synthesized to evaluate if any of them shows antitumor effects but lacking calcemiantes effects. Our lab together with a research group Organic Chemistry at the University of Vigo designed and synthesized analogues of calcitriol that contain an oxolane or amide group in the side chain with the goal of studying its therapeutic potentiality in cancer. In this thesis we evaluate if these new analogues can be effective as antitumoral agents in CCECC and GBM. Furthermore, the most used methodology in the search of new natural assets is bioprospecting, increasing tenfold the chances of success. At present, the National Cancer Institute (NCI) of USA is putting emphasis on the search of metabolites from nature for drug discovery because of the wide variety of compounds found in nature. Ganoderma lucidum is a recognized edible and medicinal mushroom used for over two thousand years by traditional Chinese, Indian and Japanese medicine. Among the pharmacological effects, its anti-tumor properties were documented and contains over 400 bioactive compounds among them triterpenoids (antitumor activity is ascribed to them), polysaccharides, nucleotides and sterols. In this thesis we also evaluate the antitumoral activity on CCECC and GBM of triterpene extract spores of this fungus produced by the Laboratory of Edible and Medicinal Mushrooms, CERZOS-CCT-CONICET-Bahia Blanca.

El metabolito activo de la vitamina D es el calcitriol o 1α,25(OH)2 vitamina D3 (1,25D). El 1,25D ingresa a la célula difundiendo a través de la membrana plasmática y se une a su receptor, el receptor de la vitamina D (VDR). Este complejo desencadena acciones rápidas, no genómicos (como la activación de vías de señalización MAPKs, y la generación de segundos mensajeros, como el aumento del Ca2+ intracelular) o efectos genómicos que requieren generación de nuevas proteínas. Dado que la mayor parte de los efectos del 1,25D reportados involucran al VDR y éste se expresa en la mayoría de los tejidos, esta hormona esteroide se considera pleiotrópica. En el laboratorio donde trabajo, se ha demostrado que el VDR se expresa en el músculo esquelético y que el tratamiento con 1,25D (10-9 M) es capaz de promover a proliferación y la activación de vías de señalización como las MAPKs, Akt, con la participación de Src, muy rápidamente, tanto en mioblastos proliferativos como en miotubos diferenciados. Por otro lado está ampliamente documentado que el 1,25D tiene efectos anti-proliferativos y pro-apoptóticos en varios tipos de cáncer. En este trabajo de Tesis Doctoral, se evidenció que en la línea de músculo esquelético normal C2C12, durante la fase proliferativa, el tratamiento con 1,25D (10-9 M) promueve la expresión del VDR y la activación de p38 MAPK y ERK 1/2, que promueven la expresión de las CDK 4/6. Más tarde, durante el arresto promotor de diferenciación, iniciado por el 1,25D, la expresión del VDR y la activación de la p38 MAPK son esenciales para inducir el aumento en la expresión de la ciclina D3, de los CKIs p21Cip1/WAF1 y p27Kip1, y del marcador de diferenciación muscular miogenina, el cual también requiere que la ciclina D3 se exprese. En las células C2C12 que están en la etapa de diferenciación temprana, en la fase de alineación (previo a la fusión celular para la formación del miotubo), la hormona esteroide 1,25D unida a su receptor tiene la capacidad de activar la tirosina quinasa no receptora Src y las MAPKs ERK 1/2 y p38 MAPK, a tiempos cortos (hasta de una hora), sin embargo no es capaz de modificar la expresión de proteínas (como las ciclinas D1 y D3 o la caveolin-1). El rabdomiosarcoma (RMS) es el cáncer de tejido blando más común entre los niños y tiene características de músculo esquelético, a pesar de tener múltiples orígenes. La línea RD es una línea celular de rabdomiosarcoma humano, originada de biopsias de una paciente caucásica de siete años de edad. A pesar de la evidencia acumulada de los efectos antineoplásicos de la hormona esteroide 1,25D, en diferentes tipos de cáncer, solo existe un reporte de los efectos de este esteroide en RMS, en líneas diferentes a la línea RD. En esta Tesis Doctoral, se evidenció que las células RD expresan basalmente VDR y que el tratamiento con la hormona durante 24 y 48 horas promueve un incremento de este receptor. Además el 1,25D (10-9 M) promueve la activación de p38 MAPK, vía su quinasa upstream inmediata MKK 3/6 y Src a tiempos cortos en las células RD. De relevancia, se observó que la activación de p38 MAPK es necesaria para la activación de Src, pese a ser esta una quinasa upstream de las MAPKs. El tratamiento con 1,25D durante 72 horas provoca una marcada disminución en la expresión del VDR junto con una inhibición en la proliferación (ya que decrece la cantidad de células vivas y aumenta la expresión de p15INK4). Conjuntamente, la hormona no promueve la diferenciación celular (ya que no se observan cambios morfológicos y disminuye la expresión de marcadores de diferenciación tempranos) y estimula la apoptosis (aumentando la expresión de los mediadores ciclina D1 y CDK4 y causando picnosis mitocondrial y pérdida de la red mitocondrial). En conclusión, el metabolito activo de la vitamina D, el calcitriol tiene efectos opuestos en el músculo esquelético normal y el transformado, ya que en el primero promueve la proliferación seguida de un arresto pro-diferenciativo, mientras que en RMS es capaz de inducir la apoptosis. / The vitamin D active metabolite is the calcitriol or 1α,25(OH)2-vitamin D3 (1,25D). The 1,25D diffuse into the cell through the plasmatic membrane and it binds to its receptor, the vitamin D receptor (VDR). This complex triggers non-genomic, rapid actions (like activation of MAPKs pathways, and second messengers, like intracellular Ca2+ increase) or genomic effects that require protein synthesis. Almost all of the 1,25D actions require the VDR, and this receptor is expressed in almost all tissues, this steroid hormone is pleiotropic. In the laboratory where I investigate, it was demonstrated that the VDR is expressed in skeletal muscle and 1,25D treatment promotes proliferation and activation of MAPK, Akt, and the tyrosine kinase Src, quickly, in both proliferating myoblast and differentiated myotubes. By another hand, it was largely reported that 1,25D exerts antiproliferative and proapoptotic effects in many different cancer types. In this Ph.D. Thesis, it was evidenced that in normal skeletal muscle cell line C2C12, in the proliferative state, 1,25D (10-9 M) treatment promotes VDR expression and p38 MAPK and ERK 1/2 pathways activation, and all these together induce CDK 4/6 expression. Then, during pro-differentiative arrest induced by 1,25D, the VDR expression, and p38 MAPK activation are key events to promote an increase in Cyclin D3, CKIs p21cip1/WAF1 and p27kip1 and myogenin expression. In C2C12 cell, in an early differentiation state, during myoblast alignment, 1,25D through its receptor induce Src, ERK 1/2 and p38 MAPK pathways activation, within a few minutes, but this short treatment cannot modify some proteins expression involved in differentiation process (like Cyclin D3 and D1, or caveolin-1). Rhabdomyosarcoma (RMS) is the soft tissue cancer most common in children with skeletal muscle features, although it has different origins. The RD cell line is a human RMS cell line, originated from biopsies from a seven years old Caucasian patient. There is accumulated evidence about antineoplastic effects of 1,25D, in different cancer types; nevertheless, there is only one report relative to the effects of this steroid hormone treatment developed in RMS cell lines different to RD. In this PhD. Thesis, it was shown that RD cells express basally VDR and hormone treatment during 24 and 48 hours promotes an increase of this receptor. Moreover, 1.25D (10-9 M) promotes p38 MAPK activation via its immediate upstream kinase, MKK 3/6, and Src at short times of steroid exposition. Of relevance, it was observed that p38 MAPK activation is necessary for the activity of Src, despite this being an upstream kinase of MAPKs. Treatment with 1.25D for 72 hours causes a decrease in VDR expression and the inhibition in proliferation (since it decreases the amount of living cells and increases the expression of p15INK4). This steroid treatment does not promote differentiation, since no morphological changes were observed and the expression of early differentiation markers falls. Furthermore, 1,25Dstimulates apoptosis increasing the expression of cyclin D1 and CDK4 mediators and causing mitochondria pyknosis and disruption of mitochondrial network). In conclusion, the active metabolite of vitamin D, calcitriol has opposite effects on normal and transformed skeletal muscle cells, since in the normal cells it promotes proliferation followed by a pro-differentiative arrest, whereas in RMS it is capable of inducing apoptosis.

[EN] Despite people attitudes concerning healthy eating, western diets still show a low intake of n-3 polyunsaturated fatty acid (PUFA). Among Argentinean people the consumption of fish meat is relatively poor, being beef and chicken meat their main sources of protein. A viable way of increasing the consumption of n-3 PUFA is to raise the intake of products enriched with them. Chicken meat is rated in second place in the consumption of meat in Argentina. This meat, like others, is a nutritive food that contains highly biologically valued proteins, vitamins and minerals. Chicken's proteins are easily assimilable by human body and they provide with essential aminoacids. The fatty acid composition of the lipids of broilers muscle tissues may be adapted to meet recommended values, adjusting the fatty acid composition of the diet. Modifying lipid profile of chicken meat could be considered as an effective way to produce a functional food. Unsaturated fatty acids, as is vastly documented, are prone to oxidation. The oxidation susceptibility of chicken meat is directly related to the degree of unsaturation of fatty acids. The more unsaturated is the fatty acid, the greater its oxidation could be, appearing concomitantly odd flavors and odors. A marked effect of treatments on the content of omega three fatty acids was observed, with treatment 4 which produced the greatest deposition of omega-3s (EPA and DHA). The sensory panel found differences on all treatments 3 and 4 in terms of the appearance of flavors, odors, and these same treatments that had higher levels of oxidation. Treatment 2 had increased sensory acceptability and lower values of thiobarbituric acid reactive substances (TBA), biochemical indicator of lipid oxidation. A 100g serving of chicken breast contribute 50% of the dietary recommendations and the leg-thigh 100% of the dietary recommendations of content of n-3 established by various health agencies in recent years, when the chickens were fed Fish oil 4%. However this meat had the highest levels of lipid oxidation and incorporation of vitamin E combined with organic selenium was not effective enough to prevent it. / [ES] La sociedad argentina, al igual que otras poblaciones occidentales, presenta un déficit en el consumo de ácidos grasos omega tres, esto se debe principalmente a un bajo consumo de pescado. Una de las posibilidades para incrementar la ingesta de estos ácidos grasos es recurrir a productos enriquecidos con los mismos. La carne de pollo ocupa el segundo lugar en cuanto al consumo de carnes, en Argentina. Ésta, al igual que otras carnes, es un alimento nutritivo que contiene gran cantidad de proteína de alto valor biológico, vitaminas y minerales. Sus proteínas son fácilmente asimilables por el ser humano y aportan todos los aminoácidos esenciales. Avances tecnológicos recientes permiten, mediante la modificación de la alimentación de las aves, modificar la composición de lípidos de la carne de pollo. El incremento de ácidos grasos insaturados conlleva generalmente a un aumento en la susceptibilidad a la oxidación de sus ácidos grasos con la concomitante aparición de sabores y olores extraños. Antioxidantes como la vitamina E y el selenio han sido evaluados como eficaces protectores de oxidación de los lípidos. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la incorporación de ácidos grasos de fuentes vegetales y animales junto con el agregando vitamina E y selenio orgánico. Para tal efecto se compararon cuatro tratamientos: T1, dieta control (Maíz-Soja); T2, dieta con aceite de lino 4%; T3 dieta con aceite de lino 3% y aceite de pescado 2% y T4 dieta con aceite de pescado 4%. A cada una de ellas se le agregó vitamina E (200 mg/g) y selenio orgánico (0,3 mg/kg). Las dietas fueron formuladas isonutritivas y fueron suministradas desde los 21 días hasta los 49 días de vida. Posteriormente se evaluaron en dos cortes diferentes, pechuga y pata muslo, la composición de ácidos grasos, la estabilidad oxidativa (valores de TBA) de la carne cocida, el contenido de vitamina E de los tejidos y el comportamiento de los cortes ante un panel sensorial. Se observó un marcado efecto de los tratamientos sobre el contenido de ácidos grasos omega-3, siendo el tratamiento 4 el que produjo la mayor deposición de omega-3 de cadena larga (EPA y DHA). El panel sensorial encontró diferencias sobre todo en los tratamientos 3 y 4 en cuanto a la aparición de sabores y olores extraños, siendo estos mismos tratamientos los que presentaron mayores niveles de oxidación. El tratamiento 2 presentó mayor aceptabilidad sensorial y menores valores de sustancias reactivas al ácido tiobárbitúrico (TBA), indicador bioquímico de oxidación lipídica. Una porción de 100 g de pechuga aportaría el 50% de las recomendaciones dietarias y la pata-muslo el 100% de las recomendaciones dietarias de contenido de n-3 establecidas por diferentes organismos de salud en los últimos años, cuando los pollos fueron alimentados con aceite de pescado al 4%. Sin embargo esta carne presentó los niveles más elevados de oxidación lipídica y la incorporación de vitamina E combinada con selenio orgánico no fue lo suficientemente efectiva para prevenirla. / [CA] a societat argentina, igual que altres poblacions occidentals, presenta un dèficit en el consum d'àcids grassos omega tres, açò es deu principalment a un baix consum de peix. Una de les possibilitats per a incrementar la ingesta d'estos àcids grassos és recórrer a productes enriquits amb els mateixos. La carn de pollastre ocupa el segon lloc quant al consum de carns, a Argentina. Esta, igual que altres carns, és un aliment nutritiu que conté gran quantitat de proteïna d'alt valor biològic, vitamines i minerals. Les seues proteïnes són fàcilment assimilables pel ser humà i aporten tots els aminoàcids essencials. Avanços tecnològics recents permeten, per mitjà de la modificació de l'alimentació de les aus, modificar la composició de lípids de la carn de pollastre. L'increment d'àcids grassos insaturats comporta generalment a un augment en la susceptibilitat a l'oxidació dels seus àcids grassos amb la concomitant aparició de sabors i olors estranyes. Antioxidants com la vitamina E i el seleni han sigut avaluats com a eficaços protectors d'oxidació dels lípids. L'objectiu del present treball va ser avaluar la incorporació d'àcids grassos de fonts vegetals i animals junt amb l'agregant vitamina E i seleni orgànic. Per a tal efecte es van comparar quatre tractaments: T1, dieta control (Dacsa-Soja); T2, dieta amb oli de lli 4%; T3 dieta amb oli de lli 3% i oli de peix 2% i T4 dieta amb oli de peix 4%. A cada una d'elles se li va agregar vitamina E (200 mg/g) i seleni orgànic (0,3 mg/kg). Les dietes van ser formulades isonutritives i van ser subministrades des dels 21 dies fins als 49 dies de vida. Posteriorment es van avaluar en dos talls diferents, pit i pota cuixa, la composició d'àcids grassos, l'estabilitat oxidativa (valors de TBA) de la carn cuita, el contingut de vitamina E dels teixits i el comportament dels talls davant d'un panell sensorial. Es va observar un marcat efecte dels tractaments sobre el contingut d'àcids grassos omega-3, sent el tractament 4 el que va produir la major deposició d'omega-3 de cadena llarga (AU i DHA). El panell sensorial va trobar diferències sobretot en els tractaments 3 i 4 quant a l'aparició de sabors i olors estranyes, sent estos mateixos tractaments els que van presentar majors nivells d'oxidació. El tractament 2 va presentar major acceptabilitat sensorial i menors valors de substàncies reactives a l'àcid tiobárbitúrico (TBA), indicador bioquímic d'oxidació lipídica. Una porció de 100 g de pit aportaria el 50% de les recomanacions dietètiques i la pata-cuixa el 100% de les recomanacions dietètiques de contingut de n-3 establides per diferents organismes de salut en els últims anys, quan els pollastres van ser alimentats amb oli de peix al 4%. No obstant això esta carn va presentar els nivells més elevats d'oxidació lipídica i la incorporació de vitamina E combinada amb seleni orgànic no va ser prou efectiva per a previndre / Gallinger, CI. (2015). Estabilidad oxidativa y calidad sensorial de carne de pollo enriquecida con acidos grasos n-3 proveniente de fuentes de origen vegetal y animal, protegida con vitamina E y selenio orgánico [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/59250

A acne é uma doença de pele com alta prevalência e seu tratamento é importante para evitar lesões cutâneas permanentes ou o agravamento de transtornos psicológicos provenientes do abalo à autoestima. Dessa forma, o desenvolvimento de formulações dermocosméticas eficazes que possam melhorar as condições desse tipo de pele é de grande valia. Dentre os ativos com potenciais benefícios para o controle de alguns dos principais fatores causadores da acne, estão a vitamina B3, um derivado de vitamina B6 e o PCA zinco. Assim o objetivo deste estudo foi o desenvolvimento de formulações dermocosméticas para a pele acnéica contendo vitamina B3, derivado lipossolúvel de vitamina B6 e PCA zinco bem como a avaliação da estabilidade e eficácia clínica dessas formulações. Para tal, foram desenvolvidas diferentes formulações, as quais, em um primeiro momento, foram avaliadas quanto à estabilidade frente à adição do ingrediente ativo Zinc PCA. Após esta etapa, os demais ingredientes ativos foram adicionados e as formulações foram submetidas a testes preliminares de estabilidade e ao estudo da estabilidade física por determinação do comportamento reológico. A formulação mais estável foi avaliada quanto à compatibilidade cutânea e também em relação à comedogenicidade do veículo. A formulação composta pelos ingredientes ativos foi avaliada, ainda, quanto as suas características sensoriais e eficácia clínica. Os estudos de eficácia foram realizados por meio de métodos objetivos e subjetivos, após seis semanas do uso da formulação. Os métodos objetivos consistiram no uso de metodologias in vivo, não invasivas (métodos biofísicos e de imagem), sendo avaliados parâmetros relacionados à hidratação, função barreira, conteúdo lipídico, pH cutâneo, contagem de porfirinas, de microcomedões e de lesões inflamatórias. Em relação aos métodos subjetivos, foi realizada a percepção da eficácia por meio de um questionário para a comparação da pele antes e após o tratamento. Os resultados mostraram que, de todas as formulações desenvolvidas, apenas uma mostrou-se estável frente aos testes de estabilidade realizados. A formulação (veículo e adicionada de ingredientes ativos) apresentou compatibilidade cutânea considerada como \"muito boa\", de acordo com o teste realizado, e o veículo sem potencial comedogênico. Na avaliação sensorial as frequências obtidas para os parâmetros considerados como ruins foram baixas, indicando que o sensorial da formulação mostrou-se adequado para as finalidades propostas. No estudo de eficácia clínica, a formulação não alterou a hidratação e a função barreira da pele e mostrou-se eficaz na redução da contagem de porfirinas e das lesões inflamatórias (p<0,05). A avaliação clínica por métodos subjetivos mostrou a eficácia da formulação quanto à melhora da acne inflamatória, oleosidade da pele, hidratação e maciez. Por fim, os resultados obtidos mostraram que a formulação desenvolvida é eficaz e compatível com a pele, bem como a importância da pesquisa e desenvolvimento para a obtenção de formulações estáveis, seguras, eficazes e com sensorial adequado. / Acne is a skin disease with high prevalence and its treatment is important to prevent permanent skin lesions or the aggravation of psychological disorders due to self-esteem shaken. This way, the development of effective dermocosmetic formulations, that can improve the conditions of this skin type, is very important. Vitamin B3, a vitamin B6 derivative and zinc PCA are among the active ingredients which present potential benefits in the controlling of some pathogenic factors of acne. Thus, the aim of this research was to develop cosmetic formulations for acneic skin containing vitamin B3, vitamin B6 lipophilic derivative and zinc PCA, as well as the evaluation of stability and clinical efficacy. For this purpose, were developed different formulations which, at first, were evaluated in terms of stability face to zinc PCA addition. After this, the others active ingredients were added and the formulations were submitted to preliminary tests of stability and physical stability studies by rheological behavior determination. The most stable formulation was subject to skin compatibility evaluation and vehicle comedogenicity. The formulation with the active ingredients was also evaluated regarding their sensorial characteristics and clinical efficacy. Efficacy studies were performed by means of objective and subjective methods, after a sixweek- period of use of the formulation. The objective methods consisted in non-invasive in vivo methodologies (biophysical techniques and image analysis) where were evaluated hydration, barrier function, lipid content, skin pH and the counting of porphyrins, microcomedones and inflammatories lesions. In relation to subjective methods, was performed the efficacy perception using a questionnaire in order to compare the skin before and after the treatment. The results showed that among the formulations developed, only one kept stable after the stability tests. The formulations were considered as \"very good\" on skin compatibility test and showed no comedogenic potential. In sensorial evaluation, frequencies obtained for the parameters considered bad were low, which indicate the sensorial of the formulation was adequate for the purposes. In clinical efficacy study, the formulation under study did not alter the parameters related to hydration and skin barrier function and was effective in reducing the counting of porphyrins and inflammatories lesions (p<0,05). Clinical evaluation by subjective methods showed the formulation effectiveness regarding the improvement of inflammatory acne, skin oiliness, hydration and softness. Finally, the results obtained showed the formulation developed is effective and compatible with the skin and, besides the importance of research and development for obtaining stable, safe and effective formulations with suitable sensorial.

Introdução - O receptor de vitamina D (VDR) é expresso em vários tecidos e quando este se encontra na sua forma ativada, modula a expressão de diversos genes. Esses incluem variações dos níveis circulantes de 1,25(OH) 2 D , variações na densidade mineral óssea, secreção e sensibilidade à insulina em resposta à glicose, suscetibilidade à diabetes tipo 1 e 2, obesidade, dislipidemias e hipertensão arterial. Atualmente, evidências têm sugerido o envolvimento da vitamina D com a síndrome metabólica. Objetivo - Investigar a concentração sérica da vitamina D e sua relação com a síndrome metabólica e avaliar a potencial associação entre estes fatores com a presença de polimorfismos no gene do receptor de vitamina D (VDR) em indivíduos adultos. Métodos - Trata-se de um estudo transversal, onde foram avaliados 372 indivíduos adultos. Foram coletadas amostras sanguíneas para dosagens laboratoriais da 25(OH)D 3 , PTH e exames bioquímicos relacionados à SM, além disso foram realizadas avaliações antropométricas (peso, altura, IMC). A síndrome metabólica (SM) foi classificada usando o critério proposto pelo National Cholesterol Education Program-Adult Treatment Panel III (NCEP-ATP III). A resistência a insulina foi estimada pelo cálculo de HOMA IR e a função da célula pelo cálculo de HOMA . A 25(OH)D foi dosada por HPLC e a insuficiência foi determinada pelo ponto de corte da curva Roc (52,6nmol/l). Foram avaliados também PTH intacto e cálcio sérico. Os polimorfismos BsmI e FokI foram detectados através da digestão das enzimas de restrições específicas para cada polimorfismo e confirmados através da técnica PCR alelo específico (ASPCR) ou amplificação de mutação refratária (ARMs) nos indivíduos com e sem SM (52 por cento vs. 48 por cento , respectivamente). A análise estatística inclui construção da curva ROC, teste T de Student, testes de correlação, teste de equilíbrio de Hardy-Weinberg, ANOVA, regressão logística binária (Odds Ratio). Estas análises foram conduzidas no software SPSS para Windows, versão 18 e p < 0,05 foi considerado significante. Resultados - A idade média dos participantes foi 51(15) anos, o IMC médio 29(6) kg/m 3 2 e 48 por cento apresentaram SM. Como esperado, os 3 indivíduos com SM apresentaram maiores valores de idade 57(12) anos, IMC 32(6) Kg/m , circunferência de cintura 103(13) cm, pressão sistólica 138(17) mmHg e diastólica 83(10) mmHg, glicemia de jejum 98(12) mg/dl, triglicérides 165(76) mg/dl, índices HOMA-IR 2.2(1.7) e 116(95), e menores valores de colesterol HDL colesterol 41(11) mg/dl. Com relação às concentrações séricas de 25(OH)D propostas pela análise da curva ROC, 43 por cento dos indivíduos com SM e 57 por cento dos indivíduos sem SM apresentam insuficiência desta vitamina. Correlações entre 25(OH)D 3 3 com PTH (r = -0.153; p = 0.005) e com circunferência da cintura (r = -0.106; p = 0.05) foram observada em todos os participantes. Considerando os polimorfismos do gene VDR, nos pacientes com SM, não houve associação entre o polimorfismo BsmI e os componentes da SM, HOMA e IR, 25(OH)D e PTH. No entanto, indivíduos sem SM, mas com homozigose para polimorfismo BsmI (genótipo recessivo bb ), apresentaram concentrações mais baixas de 25(OH)D 3 3 do que aqueles com o genótipo BB normal. Além disso, os indivíduos com SM e heterozigose para o polimorfismo FokI (genótipo Ff) têm maiores concentrações de PTH e HOMA do que aqueles com genótipo normal FF. Nesse mesmo grupo, os indivíduos com o genótipo recessivo ff têm maior resistência à insulina do que aqueles com genótipo Ff. Por outro lado, os pacientes sem SM, mas carregando o genótipo Ff, apresentaram maiores concentrações de triglicerídeos e baixos níveis de HDL do que aqueles com genótipo FF. A presença de um alelo f no genótipo (Ff ou ff) é, aparentemente, o suficiente para aumentar os níveis de triglicérides e resistência à insulina, quando comparados ao genótipo normal FF. Conclusão - Os resultados demonstram que o polimorfismo FokI no gene VDR associa-se a resistência à insulina e maiores concentrações de PTH em pacientes que apresentam SM. Além disso, o polimorfismo BsmI associa-se a menores concentrações de 25(OH)D em indivíduos sem SM. Portanto, esses novos dados indicam que polimorfismos no gene do VDR estão associados a diferentes fenótipos dos componentes da SM / Introduction - The vitamin D receptor (VDR) is expressed in many tissues and when it is in its activated form modulates the expression of several genes. These include changes in circulating levels of 1,25(OH)2D3, variations in bone mineral density, sensitivity and secretion of insulin in response to glucose, susceptibility to type 1 and 2 diabetes mellitus, obesity, dyslipidemia and hypertension. Currently, evidences have suggested the involvement of vitamin D with the metabolic syndrome. Objective - To investigate the serum concentrations of vitamin D and its relationship with metabolic syndrome (MS) and to evaluate the potential association between these factors with the presence of polymorphisms in vitamin D receptor gene in individuals adults. Methods - This is a cross-sectional study, which evaluated 243 adults and elderly. We collected blood samples for measurements of 25(OH)D3, iPTH, biochemical tests related to MS, and anthropometric evaluation (weight, height, BMI) were also assessed. MS was classified using the criteria proposed by the National Cholesterol Education Program-Adult Treatment Panel III (NCEP-ATP III). Insulin resistance and cell secretion were estimated by calculating HOMA IR and HOMA , respectively. The 25(OH)D3 was measured by HPLC and insufficiency was determined by the Roc curve cut-off (52.6 nmol/L). Intact PTH and serum calcium were also evaluated. The BsmI and FokI polymorphisms were detected by enzymatic digestion with specific enzymes and confirmed by allele specific PCR (ASPCR) or amplification of refractory mutation (ARM) in individuals with or without MS (52 per cent vs. 48 per cent , respectively). Statistical analyses include construction of Roc curves, Student T test, correlation tests, Hardy-Weinberg test, ANOVA, binary logistic regression (odds ratio), and TwoStep Cluster. These analyses were conducted with SPSS for Windows, version 18 and p < 0.05 was considered significant. Results - The mean age of participants was 51(15) years, mean BMI was 29(6) kg/m2, and 48 per cent of individuals presented MS. As expected, subjects with MS showed higher values of age (57(12) years), BMI was 32(6) kg/m2, waist circumference was 103(13) cm, systolic blood pressure was 138(17) mmHg, diastolic was 83(10) mmHg, fasting glucose was 98(12) mg/dl, triglycerides was 165(76) mg/dl, HOMA-IR was 2.2(1.7), HOMA was 116(95), and lower levels of HDL cholesterol was observed (41 mg/dl(11)). With respect to serum 25(OH)D3 proposed by ROC curve analysis, 43 per cent of individuals with MS and 57 per cent of individuals without MS presented insufficiency of this vitamin. Correlations between 25(OH)D3, iPTH (r = -0,153, p = 0.005), and waist circumference (r = -0,106, p = 0.05) were observed in all participants. Considering the VDR gene polymorphisms, in patients with MetSyn, there is no association among BsmI polymorphism and components of MetSyn, HOMA IR and , 25(OH)D3, and PTH. However, subjects without MetSyn, but with homozygosis for BsmI polymorphism (recessive bb genotype), presented lower levels of 25(OH)D3 than those with normal BB genotype. In addition, individuals with MetSyn and heterozygosis for FokI polymorphism (Ff genotype) have higher concentrations of PTH and HOMA than those with normal FF genotype. In this same group, subjects with the recessive ff genotype have higher insulin resistance than those with Ff genotype. On the other hand, patients without MetSyn, but carrying the Ff genotype, have higher concentration of triglycerides and lower levels of HDL than those with FF genotype. Interestingly, the presence of one allele f in the (Ff or ff) genotype is apparently enough to increase triglycerides levels and insulin resistance, when compared to the normal FF genotype. Conclusion - The results show that FokI polymorphism in the VDR gene is associated to insulin resistance and higher concentrations of PTH in patients with MetSyn. Moreover, BsmI polymorphism is related to a lower concentration of 25(OH)D3 in individuals without MetSyn. Therefore, the results indicated that VDR gene polymorphisms are associated to different phenotypes of MetSyn components