Orientador : Admar Costa de Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T14:49:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_FlaviaQueirogaAranhade_D.pdf: 8110954 bytes, checksum: f73d7dc068fcb0d734553e9c7d6917da (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O objetivo, deste trabalho, foi estudar o possível efeito protetor da vitamina E sobre a oxidação lipídica no sangue e no fígado de ratos Wistar, alimentados conforme dietas AIN93-G e suplementados por gavagem com ácidos graxos poliinsaturados ômega-3. Para o primeiro ensaio biológico, foram utilizados 60 ratos machos albinos, recém-desmamados, distribuídos aleatoriamente em 6 grupos experimentais, no qual foram divididos, de acordo com a quantidade de suplemento e marca, com e sem vitamina E: GRUPO 1 - Controle -Suplementação com 2 g/dia de óleo de soja; GRUPO 2 - Suplementação com 2 g/dia de ácidos graxos ômega-3 da marca A com vitamina E (120 mg/dia); GRUPO 3 - Suplementação com 2 g/dia de ácidos graxos ômega-3 da marca B, sem vitamina E; GRUPO 4 - Suplementação com 1 g/dia de ácidos graxos ômega-3 da marca A, com vitamina E (60 mg/dia); GRUPO 5 - Suplementação com 1 g/dia de ácidos graxos ômega-3 da marca B, sem vitamina E; GRUPO 6 - -Suplementação com 2 g/dia de ácidos graxos ômega-3 da marca B, sem vitamina E, por um período de 30 dias e, posteriormente, durante 15 dias, suplementação com vitamina E (marca C - 400 mg de acetato de DL-?--tocoferol). Nesse grupo, não houve sacrificio de animais no Tempo 1. Foram realizadas análises em três tempos: T0 - valor de referência após 3 dias em adaptação com dieta basal (sacrificados 12 animais, n=12); T1, com 30 dias de suplementação (sacrificados 4 animais por grupo, n=8), e T2, aos 45 dias de suplementação (sacrificados 4 animais por grupo, n=4). Para o segundo ensaio biológico, foram utilizados 80 ratos machos albinos, da linhagem Wistar, recém--desmamados. Inicialmente os 80 animais foram pesados e submetidos a um período de aclimatação ao ambiente, em gaiolas de crescimento individuais, durante 8 dias, em dieta não purificada de fórmula fechada Nuvital® para ganho de peso; em seguida, foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos experimentais, com 16 animais por grupo; os mesmos permaneceram por 4 dias em adaptação recebendo dieta basal e, ao final desse período, era feito o alinhamento do peso, retirando 4 animais por grupo, que foram sacrificados para análise lipídica do sangue e fígado; essa análise foi considerada "valor de referência" e denominada "Tempo 0". Permaneceram 64 animais (16 animais por grupo) dos quais, após 30 dias de experimento foram retirados 8 animais por grupo, para análise de sangue e fígado, denominado "Tempo 1", e, após 15 dias, foi feita mais uma análise, denominada "Tempo 2", nos animais restantes por grupo, para as avaliações dos perfis lipídicos sérico e hepático, dos lípides totais, ácidos graxos poliinsaturados ômega-3 e dosagem de vitamina E, como também a ação antioxidante da vitamina E. Os animais foram suplementados por gavagem, durante 45 dias consecutivos, por via oral. Os grupos experimentais, em estudo, foram divididos de acordo com a quantidade de suplemento com e sem vitamina E: GRUPO 1 - Controle - suplementação com 2 g/dia de óleo de soja; GRUPO 2 - Suplementação com 2 g/dia de ácidos graxos ômega-3 da marca A, com vitamina E (120 mg/dia); GRUPO 3 - Suplementação com 2 g/dia de ácidos graxos ômega-3 da marca B, sem vitamina E; GRUPO 4 - -Suplementação com 2 g/dia de ácidos graxos ômega-3 da marca B, sem vitamina E, por um período de 30 dias e posteriormente durante 15 dias, suplementação com vitamina E (marca C - 400 mg de acetato de DL-?- tocoferol). Nesse grupo, não houve sacrifício de animais no Tempo 1. No que diz respeito ao efeito antioxidante da vitamina E, nos teores de índice de peróxido (IP) e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), observou- se que, nos grupos experimentais que receberam suplementação de AGPI ?-3 sem vitamina E, os teores de índice de peróxido e também os teores de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico apresentaram valores muito superiores do que nos grupos experimentais que receberam suplementos de AGPI (?-3 com vitamina E. Assim, verificou-se que a vitamina E mostrou uma proteção efetiva contra a oxidação lipídica, em ratos Wistar, suplementados com produtos à base de ácidos graxos poliinsaturados (AGPI) ômega-3 (? - 3). Observou-se que não houve diferença significativa (p>0,05), nas médias no consumo de dieta (g) e do ganho de peso (g), entre os grupos em estudo, mostrando que as suplementações à base de ácidos graxos poliinsaturados ?-3, com e sem vitamina E, não interferiram nessas variáveis; que o tempo de suplementação com ácidos graxos poliinsaturados ômega-3 não foi capaz de melhorar o perfil lipídico sérico dos ratos, observando-se apenas uma redução dos teores de LDL-colesterol sérico dos ratos. A suplementação com ácidos graxos poliinsaturados ômega-3 não reduziu os teores hepáticos do colesterol total e triacilgliceróis dos ratos. Com relação à variação dos teores no sangue e no figado dos ácidos graxos saturados, monoinsaturados e poliinsaturados, observou-se que, ao longo da suplementação de 45 dias com AGPI ?-3, houve um aumento nos teores de ácidos graxos saturados palmítico, esteárico e dos insaturados, ácido oléico, ?-linolênico e DHA. A adição da vitamina E não interferiu nos teores encontrados. Tendo em vista os resultados encontrados, fica a recomendação de que, ao fazer uso de suplementação com ácidos graxos poliinsaturados ômega-3, sob forma concentrada em cápsulas gelatinosas, a mesma deve estar associada com vitamina E, para evitar os riscos de oxidação ao nível celular e, com isso, causar efeitos danosos a saúde / Abstract: The objective of this research was to study a possible protective effect of vitamin E against lipid oxidation in the blood and liver of Wistar rats fed on a AIN93-G diet supplemented by gavagem with polyunsaturated omega-3 fatty acids. For the first biological assay, 60 albino recent1y weaned male Wistar rats were used, distributed at random into 6 experimental groups. The experimental groups under study were divided according to the amount and brand of supplement, with and without vitamin E: GROUP 1 - Control - supplementation with 2 g/day soybean oil; GROUP 2 - supplementation with 2 g/day brand A omega-3 fatty acids with vitamin E (120 mg/day); GROUP 3 - supplementation with 2 g/day brand B omega-3 fatty acids without vitamin E; GROUP 4 -supplementation with 1 g/day brand A omega-3 fatty acids with vitamin E (60 mg/day); GROUP 5 - supplementation with 1 g/day brand B omega-3 fatty acids without vitamin E; GROUP 6 ¿ supplementation with 2 g/day brand B omega-3 fatty acids without vitamin E for a period of 30 days and subsequent1y for 15 days with vitamin E (brand C - 400 mg DL-?-tocopherol). In this group no animals were sacrificed at Time 1. In the second biological assay, 80 albino recently weaned male Wistar rats were used. Analyses were carried out at 3 points in time: TO - reference value after 3 days of adaptation on the basal diet (12 animals sacrificed, n=12); T1 after 30 days of supplementation (4 animals sacrificed per group, n=8) and T2 after 45 days of supplementation (4 animals sacrificed per group, n=4). The 80 animals were first weighed and submitted to an eight day period of acclimatization to the environment in individual growth cages, fed on a non-purified closed formula Nuvital® diet in order to gain weight. They were then distributed at random into four experimental groups, 16 animals per group, and fed for a further 4 days of adaptation on the basal diet before carrying out a weight alignment, when 4 animals per group were removed and sacrificed for a lipid analysis of their blood and liver. This analysis was considered as the "reference value" and denominated "Time O". Sixty-four animals thus remained (16 animals per group) of which, after 30 days of the experiment, 8 animals per group were removed for blood and liver analyses, denominated "Time 1", and after a further 15 days, another analysis, denominated "Time 2" was carried out on the remaining animals to evaluate the serum and hepatic lipid profiles, total lipids, omega-3 polyunsaturated fatty acids and the vitamin E content, as well as the anti-oxidant activity of the vitamin E. The animals were supplemented by gavagem for 45 consecutive days, via oral. The experimental groups under study were divided according to the amount and brand of supplement, with and without vitamin E: GROUP 1 - Control - supplementation with 2 g/day soybean oil; GROUP 2 - supplementation with 2 g/day brand A omega-3 fatty acids with vitamin E (120 mg/day); GROUP 3 -supplementation with 2 g/day brand B omega-3 fatty acids without vitamin E; GROUP 4 - supplementation with 2 g/day brand B omega-3 fatty acids without vitamin E; GROUP 5 - supplementation with 2 g/day brand B omega-3 fatty acids without vitamin E for a period of 30 days and subsequent1y for 15 days with vitamin E (brand C - 400 mg DL-?-tocopherol). In this group no animals were sacrificed at Time 1. With respect to the anti-oxidant effect of vitamin E on the peroxide index (PI) values and on the thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), it was observed that in the experimental groups receiving ?-3 PUFA without vitamin E, the values for PI and for TBARS were much higher than for the experimental groups supplemented with ? -3 PUFA with vitamin E. Thus it was shown that vitamin E had a protective effect against lipid oxidation at the cellular level in Wistar rates supplemented with products based on ?-3 PUFA. No significant difference (p>0,05) was observed between the means for diet consumption (g) and weight gain (g), showing that supplementation with ?-3 PUFA, with and without vitamin E, did not interfere with these variables, and that the time of supplementation with ?-3 PUFA was not capable of improving the serum lipid profile of the rats, just a reduction in the levels of serum LDL-cholesterol being observed. Supplementation with ?-3 PUF A did not reduce the levels of total cholesterol or triglycerides in the rat livers. With respect to the variation of the levels of saturated, mono-unsaturated and poly-unsaturated fatty acids in the blood and liver, it was observed that during the 45 days of supplementation with ?-3 PUF A, there was an increase in the levels of the saturated fatty acids palmitic and stearic acids, oleic acid, ?-linolenic acid and DHA. The addition of vitamin E did not interfere with the values found. Considering the results obtained it can be recommended that, if using supplementation with ?-3 PUFA in a concentrated form in soft gels, it should be associated with vitamin E to avoid risks of oxidation at the cellular level, thus causing damage to the health / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Vitamin C is used in the diets in order to improve growth, resistance to stress and disease, as well as the survival of fish. It can also be effective in the conservation of fish during processing and storage, inhibiting the degradation of lipids by oxidation. This study evaluated the stocking density and the effects of supplementation of vitamin C in the final quality of the fillet tilapia (Oreochromis nilotius, Linneaus, 1875). We used one hundred and twenty fingerlings for each trial, the study of fish stocking density had an initial weight of 4.0 g and evaluation of supplementation with vitamin C, 11.0 g. Both studies had a randomized design, comprising four treatments of different stocking densities (50, 75, 100 and 125 fish/m3) with five replications. Already working with vitamin C (ascorbic acid 2 - sulfate acid - protected form) was carried out in four treatments with six replicates, characterized by four levels of supplementation of vitamin C in the diets (250, 500 and 750 mg/kg diet) and control group (zero mg/kg diet) with two different stocking densities (50 and 100 fish/m3). The ration given to the first study contained 36% crude protein and 3100 kcal/DE/kg feed and the second was 28% crude protein and 3400 kcal/DE/kg. After ninety days, the fish were slaughtered and evaluated the growth performance parameters for the study of stocking density, chemical composition, cholesterol content, fatty acid profile, quality of lipid fraction in both studies. The liver of fish from the second stage of labor was frozen at - 80°C for lipid peroxidation analysis and determination of enzyme activity of oxidative stress (catalase and superoxide dismutase). It follows that for the study of stoking significant difference ρ <0.05 between the final average weight and total weight gain between the different densities tested, the highest weight was found in the group density of 75 fish/m3. The body composition analysis, differences were observed ρ <0.05 between the densities on moisture, total lipid content, protein, calories and cholesterol. The ratio polyunsaturated / saturated was higher in density of 11.76 for 100 fish/m3, since the density of 50 fish/m3 presented a sum of 6.85 for the levels of EPA + DHA. In assessing the nutritional quality of lipids, the densities studied showed the contents of n-6/n-3, hypocholesterolemic/hypercholesterolemic index of polyunsaturated fatty acids of atherogenicity and index of thrombogenicity as favorable for consumption. Fish reared at a density of 50 fish/m3 can be seen as a good food from a nutritional standpoint, they presented a good level of fatty acids, especially omega-3 fatty acid and its value in hypocholesterolemic/hypercholesterolemic. Regarding the second stage of labor was observed difference ρ<0.05 between the levels of vitamin C supplementation levels in total lipid content, crude protein, calories and cholesterol. The ratio polyunsaturated/saturated was higher in the supplementation level of 250 mg of vitamin C (1.26), since the level of 500 mg of vitamin C showed a sum of 6.48 for the levels of EPA + DHA. In assessing the nutritional quality of lipids, the levels of vitamin C study showed rates of n-6/n-3, hypocholesterolemic / hypercholesterolemic index of atherogenicity and index of thrombogenicity for subsequent food consumption. Fish reared with diets supplemented with 750 mg of vitamin C in the density of 50 fish/m3 can be seen as a good food from a nutritional standpoint, they presented a good level of fatty acids, especially omega-3 fatty acid and its value in hypocholesterolemic/hypercholesterolemic. In the study of redox balance results showed that there was an increase in lipid peroxidation, suggesting that there may have been damage to the liver of animals and the antioxidant defenses were not sufficient to prevent oxidative stress. Density of 50 fish/m3, the dietary supplementation with vitamin C can be pro-oxidant. Since the density 100 fish/m3, vitamin C supplementation may be an antioxidant. The catalase activity of the enzyme showed low activity, suggesting an impairment in hepatic redox balance for this enzyme in animals receiving diets containing different levels of vitamin C. Since superoxide dismutase activity of the enzyme showed high activity, suggesting a redox balance in protecting liver for this enzyme in animals receiving diets containing different levels of vitamin C. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A vitamina C é usada nas dietas com a finalidade de melhorar o crescimento, a resistência ao estresse e às doenças, assim como a sobrevivência de peixes. Também pode ser eficiente na conservação do pescado durante o processamento e estocagem, inibindo a degradação dos lipídeos pela oxidação. O presente trabalho avaliou a densidade de estocagem e os efeitos da suplementação de vitamina C na qualidade final do filé de Tilápia-do-Nilo (Oreochromis nilotius, Linneaus, 1875). Foram utilizados cento e vinte alevinos para cada estudo, sendo que os peixes do estudo da densidade de estocagem tinham peso inicial de 4,0 g e os da avaliação com a suplementação de vitamina C de 11,0 g. O delineamento inteiramente casualizado foi utilizado em ambos os estudos perfazendo quatro tratamentos de diferentes densidades de estocagem (50, 75, 100 e 125 peixes/m3) com cinco repetições. Já o trabalho com a vitamina C (ácido 2 - sulfato ascórbico - forma protegida) foi realizado em quatro tratamentos com seis repetições, caracterizado pela suplementação de quatro níveis de vitamina C nas rações (250, 500 e 750 mg/kg de ração) e o grupo controle (zero mg/kg de ração) com duas diferentes densidades de estocagem (50 e 100 peixes/m3). A ração fornecida para o primeiro estudo continha 36% de proteína bruta e 3100 kcal/energia digestiva/kg de ração e a segunda tinha 28% de proteína bruta e 3400 kcal/energia digestiva/kg. Após noventa dias, os peixes foram abatidos e foram avaliados os parâmetros de desempenho zootécnico para o estudo de densidade de estocagem, composição centesimal, teor de colesterol, perfil de ácidos graxos, qualidade da fração lipídica para ambos os estudos. O fígado dos peixes da segunda etapa do trabalho foi congelado a – 80ºC para análises de peroxidação lipídica e determinação da atividade das enzimas do estresse oxidativo (catalase e superóxido dismutase). Conclui-se que para o estudo de densidade de estocagem houve diferença significativa ρ<0,05 entre o peso médio final e no ganho de peso total entre as diferentes densidades populacionais testadas; o maior peso foi encontrado no grupo de densidade de 75 peixes/m3. Quanto à análise da composição corporal observou-se diferença ρ<0,05 entre as densidades nos teores de umidade, lipídeos totais, teor de proteína bruta, valor calórico e de colesterol. A relação poliinsaturados/saturados foi mais elevada na densidade de 100 peixes/m3 de 11,76, já a densidade de 50 peixes/m3 apresentou uma somatória de 6,85 para os teores de ácido eicosapentaenóico + ácido docosahexaenóico. Na avaliação da qualidade nutricional dos lipídeos, as densidades estudadas mostraram os índices de n-6/n-3, hipocolesterolêmicos/hipercolesterolêmicos, índice de ácidos graxos poliinsaturados de aterogenicidade e índice de trombogenicidade como favoráveis para consumo alimentar. Os peixes criados na densidade de 50 peixes/m3 podem ser considerados como um bom alimento do ponto de vista nutricional, pois apresentaram um bom teor de ácidos graxos, principalmente de ácido ômega-3 e pelo seu valor em hipocolesterolêmicos/hipercolesterolêmicos. Com relação à segunda etapa do trabalho foi observado diferença ρ<0,05 entre os níveis de suplementação da vitamina C nos teores de lipídeos totais; teor de proteína bruta; valor calórico e de colesterol. A relação poliinsaturados/saturados foi mais elevada no nível de suplementação de 250 mg de vitamina C (1,26), já o nível de 500 mg de vitamina C apresentou um somatório de 6,48 para os teores de ácido eicosapentaenóico + ácido docosahexaenóico. Na avaliação da qualidade nutricional dos lipídeos, os níveis de suplementação de vitamina C estudados mostraram os índices de n-6/n-3, hipocolesterolêmicos/hipercolesterolêmicos, índice de aterogenicidade e índice de trombogenicidade favoráveis quanto ao consumo alimentar. Os peixes criados com ração suplementada com 750 mg de vitamina C na densidade de 50 peixes/m3 podem ser considerados como um bom alimento do ponto de vista nutricional, pois apresentaram um bom teor de ácidos graxos, principalmente de ácido ômega-3 e pelo seu valor em hipocolesterolêmicos/hipercolesterolêmicos. Já no estudo do balanço redox os resultados mostraram que houve aumento na peroxidação lipídica, sugerindo que podem ter existido danos ao fígado dos animais e as defesas antioxidantes não foram suficientes para evitar o estresse oxidativo. Na densidade de 50 peixes/m3, a ração suplementada com vitamina C pode ser pró-oxidante. Já na densidade 100 peixes/m3, a vitamina C suplementada pode ser antioxidante. A atividade da enzima catalase apresentou uma baixa atividade, sugerindo um comprometimento no balanço redox hepático para esta enzima nos animais submetidos à ração com diferentes níveis de suplementação de vitamina C. Já atividade da enzima superóxido dismutase apresentou elevada atividade, sugerindo uma proteção no balanço redox hepático para esta enzima nos animais submetidos à ração com diferentes níveis de suplementação de vitamina C.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-07-13T13:03:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Desirré versão CD.pdf: 1453622 bytes, checksum: 2158dbbaaefcb134f3cde4599b120f6e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-13T13:03:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação Desirré versão CD.pdf: 1453622 bytes, checksum: 2158dbbaaefcb134f3cde4599b120f6e (MD5) Previous issue date: 2016-06-22 / O leite materno é um alimento completo, além de ser a única e mais importante fonte de vitamina A durante o período neonatal para o lactente alimentado exclusivamente ao seio.Por fornecer informações relacionadas ao estado nutricional materno-infantil, a concentração de vitamina A no leite humano é um importante indicador do status orgânico dessa vitamina nesse grupo etário.Foi desenvolvido um estudo observacional, do tipo série de casos, cujo objetivo de avaliar o status de vitamina A e a sua associação com algumas variáveis materno-infantis, bem como, determinar o efeito da pasteurização e do armazenamento em condições ambientais sobre a concentração de retinol no leite humano. Participaram do estudo 43 puérperas, idade entre 18 e 39 anos,cadastradas como doadoras do Banco de Leite Humano do Instituto de Medicina Integral Prof. Fernando Figueira. Recife, Nordeste do BrasilAs concentrações de retinol foram avaliadas no leite cru, leite pasteurizado e no leite armazenado em condições ambientais, usando-se a cromatografia líquida de alta resolução. O percentual de deficiência de vitamina A(<1,05 μmol/L), foi de 41,9% e 83,7% das nutrizes apresentaram consumo de vitamina A abaixo da ingestão dietética recomendada para a lactação (1300µg/dia). As concentrações de retinol foram mais elevadas em nutrizes multíparas (p= 0,021). A pasteurização não interferiu nas concentrações de retinol (p= 0,313). No entanto, elas foram menores no leite armazenado em condições ambientais, quando comparadas com àquelas observadas no leite cru (p=0,023). Os resultados sugerem um baixo consumo de vitamina A, bem como uma elevadaproporção de deficiência dessa vitamina no leite materno. A pasteurização não compromete o teor de vitamina A, embora o armazenamento do leite em condições ambientais reduzasuas concentrações. / Breast milk is a complete food, as well as being the single most important source of vitamin A during the neonatal period to infants exclusively fed fromthe breast. For providing information related to maternal and child nutritional status, vitamin A concentration in human milk is an important indicator of the organic status of this vitamin in this age group. an observational study, the case series was developed, aimed to assess vitamin A status and its association with some maternal and child variables and determine the effect of pasteurization and storage under ambient conditions on the concentration of retinol in human milk. The study included 43 mothers, aged between 18 and 39 years, registered as donors of the Human Milk Bank of Integrative Medicine Institute Prof. Fernando Figueira. Recife, northeastern Brazil The retinol concentrations were evaluated in raw milk, pasteurized milk and milk stored in ambient conditions using the high performance liquid chromatography resolution. The vitamin deficiency percentage A (<1.05 mmol / L) was 41.9% and 83.7% of the mothers had vitamin A intake below the recommended dietary intake for lactation (1300μg / day). Retinol concentrations were higher in multiparous lactating women (p = 0.021). Pasteurization did not interfere with retinol concentrations (p = 0.313). However, they were lower in milk stored at ambient conditions, as compared to those observed in raw milk (p = 0.023). The results suggest a low intake of vitamin A, as well as a high proportion of vitamin deficiency in human milk. Pasteurization does not compromise the level of vitamin A, although the milk storage environmental conditions to reduce their concentrations.

Orientadores: Berenice Cunha Wilke, Jaime Amaya-Farfan / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-18T18:35:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Passos_PaulaAndreaLiboni_M.pdf: 3738601 bytes, checksum: bbf4fbca81f80dc927e149d200a623fa (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: A vitamina A é essencial ao adequado crescimento e desenvolvimento fetal e infantil atuando na diferenciação e manutenção epitelial, em mecanismos de resposta imune e em várias outras funções sistêmicas. Os carotenóides, além de atuarem como pró-vitamina A, também atuam na resposta imune e são importantes antioxidantes naturais. Apesar da importância desses nutrientes para o neonato, particularmente para o prematuro, há poucos estudos na caracterização do leite materno com relação aos carotenóides, que possam auxiliar na elucidação dos mecanismos de transferência de vitamina A e de carotenóides do sangue para o leite materno, assim como dos fatores intervenientes neste processo. Esse estudo tem como objetivos a avaliação do estado nutricional em vitamina A de mães de recém nascidos pretermo e a composição do colostro destas mães com relação ao conteúdo de vitamina A e de carotenóides. O estado nutricional foi avaliado através de : 1- dosagem dó retinol sérico por cromatografia líquida de alta ,eficiência (CLAE), 2- estimativa do consumo de vitamina A através de aplicação de inquérito seletivo de freqüência alimentar, 3- exame citológico pelo teste de impressão cito lógica da conjuntiva ocular (ICCO). O teor sérico médio de retinol das 10 mães estudadas foi de 23 +/- 8 ugfdL. O consumo estimado de vitamina A foi de (781 +/- 247 ERfdia) e não foram registrados exames positivos para o teste de ICCO. Não foi portanto, caracterizada carência de vitamina A no grupo pelos critérios do International vitamin A Consultative Group (IVACG).Foram identificados e quantificados, através de CLAE, os principais carotenóides do colostro quais sejam: B-criptoxantina, a e B-caroteno (carotenóides precursores de vitamina A) e licopeno (antioxidante importante). Os teores médios obtidos foram de 8 +/- 14 ug/dL. para B-criptoxantina, 12 +/- 12 ug/dL para licopeno e 6 +/- 4 ug/dL para B-caroteno. O a-caroteno apresentou-se em menor quantidade em todos os colostros, tendo sido quantificado apenas em duas amostras com concentração de 3 ug/dL. O retinol, também determinado por CLAE, apresentou teor médio de 71 +/- 43 ug/dL. Nas condições deste estudo, não foi encontrada correlação (p < 0,05) entre as taxas de retinol no soro ou no colostro, assim como entre o consumo estimado vitamina A e os mesmos teores / Abstract: Vitamin A is essential for the growth and development of both the fetus and the neonate with regard to cell differentiation, tissue maintenance, immune response and various other systemic functions. Carotenoids, in turn, have a critical role as provitamin A sourcep antioxidants and enhancers of the immune system o In spite of the recognized importance of these nutrients for the neonate and the premature, in particular, there are few studies caracterizing human milk in terms of carotenoids and which could serve in the elucidation of the mechanisms of both vitamin A and carotenoids transfer from the blood stream to the milk, as well as other phenomena underlying this process. The present study is an evaluation of the vitamin A nutritional status of ten Brazilian mothers of preterm neonate and assessment of colostra in terms of vitamin A and selected carotenoids. The nutritional status was ascertained though 1. serum retinol determinafion by high performance liquid chromatography (HPLC) 2. estimative of vitamin A intake by a selective nutrient questionnaire and 3 citology by the conjunctival impression cytology technique (CIC). The average serum retinol leveI observed was 23 +/- 8 ug/dL. The average daily intake of vitamin A among the mothers was 781~ 247 RE and no positive cases were found by eIe test, thus no deficiency could be detected according to the criteria of the International vitamin A e onsultative Group (IVACG). The principal carotenoids. B-cryptoxanthin; a and B -carotene(vitamin A precursors) and lycopene (chief antioxidant) p were identified and quantitified by HPLC in the colostra (mean values 8 +/- 14; 12 +/- 12, 6 +/- 4 ug/dL for B-cryptoxanthin, lycopene and B-carotene, respectively). A-carotene was present in measurable levels in only two of the samples (average of 3 ug/dL). Average retinol in the colostra was 71 +/- 43 ug/dL. Under the conditions of the study, no significant correlation (P < 0,05) was found between vitamin A intake and levels of this nutrient in either the serum or colostrum / Mestrado / Mestre em Ciência da Nutrição

A administração de princípios ativos pela mucosa oral é uma forma eficiente para a distribuição de fármacos e nutrientes, oferecendo diversas vantagens como uma fácil aplicação, evitando o metabolismo de primeira passagem hepática e potencialmente melhorando a biodisponibilidade dessas substâncias. A acerola e o camu-camu apresentam uma alta concentração de vitamina C e são consideradas fontes de diferentes compostos ativos, porém a vitamina C presente nas frutas é facilmente oxidada pelos fatores ambientais, e essas frutas são pouco acessíveis ao consumo populacional. Filmes de desintegração oral (FDO) podem apresentar rápido tempo de desintegração e fácil administração, o que os torna um material interessante para a veiculação de compostos com atividades farmacêuticas ou nutricionais. Assim, este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e caracterização de filmes de desintegração oral à base de amido e gelatina com adição de extrato seco de acerola e camu-camu produzidos por \"spray dryer\" como uma alternativa para a administração de vitamina C. Os FDOs foram produzidos pela técnica de casting, variando-se a proporção de amido e gelatina. Como plastificante foi utilizado o sorbitol (20 g / 100 g de polímero), mantendo-se constante a concentração de polímeros (2 g /100 g de solução filmogênica) e de extrato seco de acerola (4 g /100 g de solução filmogênica) e camu-camu (4 g / 100 g de solução filmogênica). Os extratos secos de acerola e camu-camu foram caracterizados com relação à concentração da vitamina C e da estabilidade desses extratos nessas condições (30 °C, UR 75 % e 40 °C, UR 75%). Os FDOs foram caracterizados em relação a espessura, propriedades mecânicas, ângulo de contato, FT-IR, microscopia electrônica de varredura, concentração de vitamina C, atividade antioxidante, atividade antimicrobiana, estabilidade da vitamina C, tempo de desintegração, estabilidade da atividade de eliminação de radicais de DPPH&bull;, avaliação sensorial. Os extratos secos apresentaram uma boa estabilidade em relação à vitamina C e aos compostos antioxidantes (sequestro do radical DPPH&bull;). Os FDOs sem adição de extrato, independente da formulação, mostraram-se homogêneos, com ausência de partículas insolúveis e alta capacidade de formação de filme. Para os FDOs com maior concentração de amido foi observado reduzido tempo de desintegração e pH próximo ao bucal. Após a adição dos extratos, os FDOs apresentaram redução do tempo de desintegração, boa aceitação sensorial, propriedades antioxidantes e estabilidade pelo sequestro do radical DPPH&bull;. O pH de superfície dos filmes com adição de extrato seco de acerola foi mais próximo ao bucal quando comparado com os filmes com camu-camu. No entanto, os FDOs com acerola apresentaram reduzida estabilidade da vitamina C em relação ao tempo de armazenamento, enquanto que os filmes com camu-camu apresentaram melhor estabilidade. De modo geral, na formulação produzida apenas com amido (100 g de amido / 100 g de polímeros) observou-se uma maior concentração da vitamina C no final da estabilidade realizada à 30 °C e umidade relativa de 75 %, elevada estabilidade dos compostos ativos (DPPH) e alta taxa de uniformidade na distribuição da vitamina C no filme de desintegração oral. Dessa forma, os FDOs podem ser considerados uma boa alternativa para a suplementação de vitamina C. / The administration of active ingredients through the oral mucosa is an efficient way to deliver drugs and nutrients because it offers various advantages such as easy application, avoiding the hepatic metabolism of the first pass and potentially improving the bioavailability these substances. Acerola and camu-camu have high concentration of vitamin C and are considered sources of different active compounds, however the vitamin C present in fruits is easily oxidized by environmental factors, and such fruits are poorly accessible to population consumption. Orally disintegrating films (ODF) can provide rapid disintegration and easy administration, which makes them interesting materials to deliver compounds with pharmaceutical or nutritional properties. This work aimed at the development and characterization of orally disintegrating films based on starch and gelatin with addition of acerola and camu-camu dry extract produced by spray dryer as an alternative to vitamin C administration. ODFs were produced with casting technique by varying the ratio of starch and gelatin. Sorbitol (20 g / 100 g polymer) was used as plasticizer, with constant the concentration of polymer (2 g / 100 g filmogenic solution), and dry extracts of acerola and camu-camu (4 g / 100 g filmogenic solution). Acerola and camu-camu dry extracts were characterized regarding vitamin C concentration and stability (30 °C, RH 75% and 40 °C, RH 75%). ODFs were characterized considering thickness, mechanical properties, contact angle, FT-IR, scanning electron microscopy, vitamin C concentration, antioxidant activity, antimicrobial activity, vitamin C stability, disintegration time, stability of the scavenging activity of DPPH&bull; radical, and sensory evaluation. Dry extracts showed good stability for vitamin C and antioxidant compounds (scavenging activity of DPPH&bull; radical). ODFs without extract addition, regardless of the formulation, were homogeneous, without insoluble particles and with high film formation capacity. Reduced disintegration time and pH similar to oral pH was observed for ODFs with high starch concentration. After the addition of extracts, ODFs presented decreased disintegration time and good sensorial acceptation, antioxidant properties and stability of the scavenging activity of DPPH&bull; radical. Surface pH of films with acerola dry extract was the closest to oral pH when compared with films with camu-camu dry extracts. However, ODFs with acerola dry extract showed reduced stability of vitamin C regarding storage time, whereas films with camu-camu dry extract showed better stability. In general, the formulation produced only with starch (100 g starch / 100 g polymer) presented higher concentration of vitamin C at the end of stability assay performed at 30 °C and 75% relative humidity, as well as high stability of active compounds (DPPH) and high uniformity rate in vitamin C distribution in the orally disintegrating film. Thus, ODFs can be considered a good alternative for the supplementation of vitamin C.

A falta de uma vacina eficaz e o problema da resistência aos fármacos têm dificultado o controle da malária. A busca de novos alvos biológicos para o desenvolvimento de antimaláricos eficazes tem se concentrado, em parte, na pesquisa e compreensão de vias metabólicas exclusivas do parasita. Nosso grupo vem investigando e caracterizando produtos da biossíntese de isoprenóides em P. falciparum. Resultados preliminares identificaram a biossíntese das duas formas da vitamina K: filoquinona (PhQ) e menaquinona (MQ), ambas provenientes das vias do chiquimato e da via 2-C-metil-D-eritritol-4-fosfato (MEP). Salienta-se, ainda, que as vias do chiquimato e MEP são exclusivas do parasita, portanto alvos interessantes para o estudo e desenvolvimento de drogas alternativas contra a malária. Ensaios enzimáticos demonstraram a participação da MQ-4 na cadeia respiratória como transportadora de elétrons. Resultados indicaram que o parasita controla a concentração de ubiquinona e menaquinona (UQ/MQ) de acordo com as condições de aeração a qual é submetido, assim como descrito em E. coli e Ascaris suum. A biossíntese de MQ em P. falciparum é bloqueada pelo composto Ro 48-8071, inibidor da enzima 1,4-dihidroxi-2-naftoato preniltransferase da via de biossíntese de MQ. Em relação a PhQ, dados preliminares mostram uma provável participação na proteção antioxidante no ciclo intraeritrocítico de P. falciparum. Finalmente, por meio de ensaios de Real Time-PCR, investigou-se o padrão de transcrição de prováveis genes que supostamente codificariam algumas enzimas da via de biossíntese de MQ, PhQ, e UQ (esse último previamente caracterizado). Os resultados demonstraram que não há alterações na transcrição desses genes prováveis nos parasitas mantidos em diferentes condições de pressão de O2. / The lack of an effective vaccine and the problem of drug resistance haves hampered the control of malaria. The search for new biological targets for the development of effective antimalarials in part has focused on research and understanding of metabolic pathways unique to the parasite. Our group has investigated and characterized the products of the isoprenoids biosynthesis in P. falciparum. Preliminary results have identified the biosynthesis of two forms of vitamin K: phylloquinone (PhQ) and menaquinone (MQ), both derived from the Shikimate pathway and 2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate pathway (MEP). The shikimate and MEP pathways are unique to the parasite therefore are interesting targets for study and development of alternative drugs against the malaria. The enzimatic assay showed the participation of MQ-4 in the respiratory chain as electron carrier. Results indicated that the parasite controls the concentration of ubiquinone and menaquinone (UQ / MQ) according to the aeration conditions which is submitted, as described in E. coli and Ascaris suum. The MQ biosynthesis in P. falciparum is blocked by the compound Ro 48-8071, an inhibitor of the enzyme 1,4-dihydroxy-2-naftoato prenyltransferase. Also was described in the parasite, the biosynthesis of another form of vitamin K (PhQ) , and preliminary results showed probably participation of PhQ in the antioxidant protection in the cycle of P. falciparum. Finally, by the Real Time-PCR, we investigated the pattern of transcription of putative genes some enzymes of MQ, PhQ and UQ biosynthesis (the last was previously characterized). The results showed no changes in the transcription profile in the parasites kept in different conditions of O2 pressure.

O estudo da biossíntese de isoprenóides em P. falciparum por meio da via 2C-metil-D-eritritol-4-fosfato (MEP) é apontado como possível alvo terapêutico, visto a via ser ausente em humanos. Foi descrito que nos estágios intraeritrocitários de P. falciparum a via essencial de biossíntese de isoprenóides é a via MEP. As vias do Chiquimato e MEP são precursoras da biossíntese de vitamina E e ambas já foram descritas em P. falciparum. É sugerido que a biossíntese de vitamina E possa ocorrer no parasita, representando um possível alvo para o desenvolvimento de novas drogas antimaláricas. Empregando marcações metabólicas com precursores radioativos, três diferentes métodos de RP-HPLC e análises por espectrometria de massas confirmamos a biossíntese de vitamina E nos três estágios intraeritrocíticos do parasita. O tratamento com ácido úsnico, mostrou inibição dessa biossíntese no estágio esquizonte e do crescimento do parasita. Demonstramos por meio de uma sonda fluorescente, ácido Parinárico, que a vitamina E atua como antioxidante lipofílico, protegendo a lipoperoxidação. Esses resultados não só contribuem para a compreensão da biologia de P. falciparum, mas também elucidam partes das vias MEP e do Chiquimato que podem servir como alvos terapêuticos. / The study of isoprenoid biosynthesis in Plasmodium falciparum by 2C-methyl-D-erythritol-4-phosphate pathway (MEP) it is presented as a therapeutic target once that it is absent in humans. It was found in intraerythrocytic stages of P. falciparum the biosynthesis of isoprenoids by the MEP pathway. The shikimate and MEP pathways are the precursors of biosynthesis of vitamin E and both pathways have already been described in P. falciparum. It is suggested that the biosynthesis of vitamin E might occur in the parasite, representing a possible target for developing new antimalarial drugs. Using metabolic labelling with radiolabelled precursors, three different methods of RP-HPLC and mass spectrometry analyses confirmed the biosynthesis of vitamin E in the three intraerythrocytic stages of parasite. The treatment with usnic acid showed an inhibition of this biosynthesis and of the growth of parasite. We demonstrated by means of a fluorescent probe, the acid Parinaric, that vitamin E acts as a lipophilic antioxidant protecting the membrane of lipoperoxidation. These findings not only contribute to the current understanding of P. falciparum biology but shed light on a pathway that could serve as a chemotherapeutic target.

Nesta dissertação, foi caracterizada a via de biossíntese de tiamina (Vitamina B1) nas três formas intraeritrocitárias de P. falciparum. Foram realizadas marcações metabólicas, utilizando diferentes precursores radioativos envolvidos na biossíntese de tiamina, já descritos para outros organismos. A utilização do precursor [1-14C] acetato de sódio demonstrou que a via de biossíntese de tiamina encontra-se ativa em todos os estágios intraeritrocitários de P. falciparum. Investigamos os precursores que poderiam estar envolvidos na biossíntese do intermediário tiazol, e nossos dados sugerem que a cistéina é a doadora do enxofre presente na molécula de tiamina; que o aminoácido tirosina pode ser o precursor da biossíntese de tiamina, e nicotinamida não é utilizada como precursor em P. falciparum. Também se avaliou o efeito da fosmidomicina e 3ClDHP e foi demonstrado que ambos propiciaram uma inibição no crescimento dos parasitas. Estes dados sugerem que a via de biossíntese de tiamina, pode ser explorada como alvo para drogas antimaláricas, devido ausência em humanos. / In the present work we have demonstrated the biosynthesis of thiamin (vitamin B1) in the intraerytrocytic stages of P. falciparum. We have demonstrated active biosynthesis of thiamine in the three parasite stages metabolically labeled with [1-14C] sodium acetate. We also investigated which precursors could be involved in the biosynthesis of the thiazole intermediate, by metabolic labelling with different precursors. Our data suggest that the sulphur present in the thiamine molecule is formed from cysteine white that tyrosine can be the precursor of thiamine biosynthesis. Nicotinamide is not utilized as a precursor in P.falciparum. We also investigated the effect of fosmidomycin (an inhibitor of the DOXP reductoisomerase in the MEP pathway) and 3CIDHP (an analogue of bacimethrin) in vitro cultures and both showed an inhibitory effect on parasite growth. These data suggest that the biosynthesis of thiamine can be an attractive target for the development of antimalarial drugs since this pathway is absent in humans.

As vacinas pertussis celulares apresentam certa reatogenicidade e as acelulares, menos reatogênicas, têm seu uso restrito, devido a seu alto custo. O Instituto Butantan desenvolveu uma vacina pertussis celular (Plow), com baixo teor de lipopolissacarídeo e outra acelular (Pa), por metodologia simples e econômica. Essas preparações, combinadas aos toxóides diftérico e tetânico (DTPlow e DTPa, respectivamente), foram comparadas à DTP tradicional, com diferentes adjuvantes: vitamina A, surfactante pulmonar, BCG, monofosforil lipídeo A (MPL) e Al(OH)3. A resposta humoral em camundongos foi semelhante para as diferentes formulações e independente do adjuvante utilizado. As vacinas induziram níveis equilibrados de IgG1/IgG2a anti-pertussis e a DTPlow mostrou-se menos reatogênica, induzindo níveis significativamente menores de IL-6 sérica. A adição de MPL sugeriu tendência de proteção contra a colonização nasotraqueal no grupo imunizado com DTPa e levou à indução de IFN-g nos grupos imunizados com DTP e DTPa, sugerindo possível atividade imunomodulatória para Th1. / The whole cell pertussis vaccines present some reactogenicity and the acellular, less reactogenic, have prohibitive use due to its high cost. Instituto Butantan developed a less reactogenic whole cell pertussis vaccine (Plow), with low lipopolysaccharide content and an acellular vaccine (Pa), by simple and economic methodology. These preparations, combined to diphtheria and tetanus toxoids (DTPlow and DTPa, respectively), were compared with the traditional DTP, with different adjuvants: vitamin A, pulmonary surfactant, BCG, monophosphoryl lipid A (MPL) and Al(OH)3. The humoral immune response induced in mice by the different vaccine formulations, was similar and independent of the adjuvant used. The vaccines induced balanced levels of IgG1/IgG2a anti-pertussis and DTPlow showed to be less rectogenic, inducing lower levels of serum IL-6. The use of MPL suggested to induce higher protection against nasotracheal colonization in DTPa group and induced IFN-g in the DTP and DTPa groups, suggesting a possible immunemodulatory activity for Th1.

Leaves are responsible for the majority of the fixed carbon in most plant species. Along leaf development, the photosynthetic capacity increases until the organ reaches maturity. Consequently, at the onset of senescence the leaves have the highest photosynthetic activity, then, as the chloroplasts are dismantled and the photosynthetic machinery is degraded, leaves gradually lose the rate of carbon assimilation. Although the capacity to fix carbon declines as senescence progresses, nutrient remobilization from macromolecule degradation nourishes the developing sink organs. In this regard, delaying leaf senescence stands out as a promising strategy to increase plant yield as extends the window of time with maximum carbon fixation rate. Another approach that is receiving much attention is the manipulation of chlorophyll degradation once it potentially regulates photosynthetic capacity and affects the nutritional quality of harvestable organs. As chlorophyll is degraded, the released phytol is recycled and can be either stored (i.e. as fatty acid phytyl esters), used for chlorophyll synthesis or be incorporated in tocopherol biosynthesis. Tocopherols have high nutraceutical value due to their antioxidant properties. However, the majority of the studies regarding senescence and chlorophyll degradation were carried out in the model plant Arabidopsis thaliana or grasses, creating a knowledge gap about these processes in fleshy fruit-bearing plants of human diet interest. In this regard, the tomato, Solanum lycopersicum, is an excellent model not only for the genetic and genomic resources, but also for its agronomic and nutritional importance. Thus, this project aims to extend what is known about the effects of chlorophyll degradation and senescence manipulation over the metabolism and yield of tomato plants, as well as fruit nutritional quality. In order to evaluate the consequences of alteration in chlorophyll degradation, first the enzymes chlorophyllase and pheophytinase, both capable of dephytylating the chlorophyll molecule, were identified and characterised. An extensive phylogenetic, evolutive and transcriptional analysis allowed the identification of two groups of chlorophyllases, one putatively involved in the response to different stimuli, while the other may act in chlorophyll homeostasis. As for pheophytinase, only one group was identified, being related to physiologically programmed processes that trigger chlorophyll degradation (i.e. leaf senescence and fruit ripening). Given this scenario, pheophytinase was chosen to be constitutively knocked-down in order to evaluate the effects over the metabolism of leaves and fruits. As consequence of this manipulation, transgenic plants were impaired in the leaf senescence-associated chlorophyll breakdown, but, although with an initial delay, fruit ripening-associated degreening was not compromised. Several photosynthetic and biochemical parameters were signs of photoinhibition, possibly due to a deficiency in chlorophyll recycling in leaves. This led to an increase in sugar exportation towards fruits, ultimately increasing soluble sugar content of ripe fruits. However, as a consequence, carotenoid levels were reduced, what, at least partially, it was compensated by an increase in tocopherol content. The results indicated that pheophytinase plays a role beyond senescence-associated chlorophyll degradation and its manipulation led to the development of fruit with increased soluble sugars and tocopherols at the cost of lowering carotenoid levels. Thus, these evidences support the manipulation of chlorophyll breakdown as a strategy for improvement of fleshy fruit plants. In order to address the effects of senescence over yield and fruit quality, the transcription factor ORESARA1, which has been widely characterised in A. thaliana and is considered a key regulator of senescence initiation, was targeted. After a comprehensive phylogenetic analysis and the characterization of the regulatory mechanisms, one putative ortholog was selected to be silenced. As consequence of this manipulation, leaves displayed increased chlorophyll content. Moreover, as senescence was delayed, the extent of photosynthetic activity of the leaves was also expanded. As the number of fruits was increased in the knockdown lines, this reflected in an increment in the harvest index. Ripe fruits accumulated more soluble sugars and tocopherols. Collectively, the results support the manipulation of leaf senescence as a strategy for tomato yield improvement. Altogether, data obtained enhance the knowledge about the impacts of chlorophyll degradation and leaf senescence over the metabolism of fleshy-fruit plants, providing strategies to increase yield and nutritional quality of fruits / As folhas, para a maioria das espécies vegetais, são o principal órgão responsável pela fixação de carbono. Durante o desenvolvimento foliar, o potencial fotossintético aumenta até a folha atingir a sua maturidade. Consequentemente, no momento que o programa de senescência se inicia, a folha apresenta a maior taxa de fotossíntese, a qual passa então a declinar conforme o cloroplasto se desorganiza e a maquinaria fotossintética é degradada. Apesar da redução na fixação de carbono, o catabolismo de macromoléculas possibilita a remobilização de nutrientes para os órgãos dreno em desenvolvimento. Neste contexto, atrasar a senescência destaca-se como uma promissora estratégia para aumento da produtividade, uma vez que estende o período de máxima fixação de carbono das folhas. Outra estratégia que tem recebido atenção por, potencialmente, regular a capacidade fotossintética e afetar a qualidade nutricional dos órgãos coletáveis é a manipulação da degradação da clorofila. Durante o catabolismo deste pigmento, o fitol liberado é reciclado podendo ser armazenado (i.e. na forma de ésteres de fitil com ácidos graxos), ser utilizado na síntese de novas moléculas de clorofila ou ser incorporado na rota biossintética de tocoferóis. Estes últimos compostos, por seu potencial antioxidante, possuem alto valor nutracêutico. No entanto, a maior parte dos estudos sobre senescência e degradação de clorofila foi realizada na planta modelo Arabidopsis thaliana ou em gramíneas, tornando escassas as informações relativas a plantas com frutos carnosos de interesse para a dieta humana. Nesse âmbito, o tomateiro, Solanum lycopersicum, é um excelente modelo de estudo não apenas pela disponibilidade de recursos genético e genômicos, mas também pela importância agronômica e nutricional desta espécie. Assim, este trabalho pretende expandir o conhecimento acerca dos efeitos da manipulação da degradação de clorofila e da senescência sobre o metabolismo e produtividade do tomateiro, bem como sobre a qualidade nutricional dos frutos. De modo a se avaliar as consequências de alterações na degradação de clorofila, iniciou-se por identificar e caracterizar em tomateiro as enzimas clorofilase e feofitinase, as quais catalisam a defitilação da molécula de clorofila. Uma vasta análise filogenética, evolutiva e transcricional permitiu a identificação de dois grupos de clorofilases, um dos quais estaria envolvido na plasticidade de respostas a estímulos e o outro na homeostase dos níveis de clorofila. Já para feofitinase, somente um grupo foi identificado, o qual está relacionado a processos fisiologicamente programados que levam à degradação de clorofila (i.e. senescência foliar e amadurecimento de frutos). Dado o panorama obtido, a feofitinase foi escolhida para ser constitutivamente silenciada de modo a se avaliar as consequências para o metabolismo de folhas e frutos. Como consequência do silenciamento, as linhagens transgênicas mostraram-se incapazes de degradar clorofila durante a senescência, mas, embora com um atraso nas etapas iniciais, a degradação ao longo do amadurecimento de frutos não foi comprometida. Diversos parâmetros fotossintéticos e bioquímicos foram indicativos de fotoinibição, possivelmente em virtude de uma deficiência na reciclagem da clorofila em folhas. Isto acarretou em um aumento na exportação de açúcares para frutos, incrementando a concentração de açúcares solúveis nos frutos maduros, que, em contrapartida, resultou na queda nos teores de carotenoides. A queda nestes compostos antioxidantes foi, ao menos parcialmente, compensada por um aumento nos níveis de tocoferóis. Os resultados indicaram que a feofitinase possui um papel além da degradação de clorofila associada à senescência, e que sua manipulação leva ao desenvolvimento de frutos com maior teor de açúcares solúveis e de tocoferóis ao custo da redução no de carotenoides. Desta forma, estas evidências suportam a manipulação da clorofila como estratégia para o melhoramento de frutos carnosos. Para investigar o efeito da senescência sobre a produtividade e qualidade de frutos foi escolhido o fator de transcrição ORESARA1, o qual está amplamente caracterizado em A. thaliana e é considerado um regulador chave no desencadeamento deste processo. A partir de uma extensa análise filogenética e da caracterização de sua regulação, um putativo ortólogo foi selecionado como alvo para silenciamento. Como consequência desta manipulação, folhas apresentaram os níveis de clorofila incrementados. Além disto, taxas fotossintéticas maiores que as do genótipo controle foram mantidas por maior tempo indicando que a iniciação da senescência foi retardada. Assim, estas plantas produziram um maior número de frutos, consequentemente, aumentando o índice de colheita dessas linhagens. Os frutos maduros apresentaram maiores teores de açúcares solúveis e de tocoferóis. Os resultados demostraram que o retardo do início da senescência é uma estratégia efetiva para aumento da produtividade de tomateiro. Coletivamente, os resultados obtidos aprofundam o conhecimento acerta dos impactos da degradação de clorofila e senescência sobre o metabolismo de plantas com frutos carnoso, além de prover estratégias para se incrementar a produtividade e a qualidade nutricional de frutos