Made available in DSpace on 2014-12-17T15:37:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndreLBP_DISSERT.pdf: 2864599 bytes, checksum: a13a1f03e8e2475e1d935276b5b40c0c (MD5) Previous issue date: 2011-04-11 / The hypothalamus is a diencephalic portion located around the third ventricle below the hypothalamic sulcus, limited by the optic chiasm, and by the mammillary bodies, acting as a center that integrates behavioral and homeostatic functions. Serotonin is a neurotransmitter produced in limited sites in the midbrain and brain stem, but is distributed throughout the central nervous system and has many functions, acting through specific receptors that are also distributed throughout the nervous system. Using immunohistochemical techniques, the aim of this study was to delineate the hypothalamic nuclei of the marmoset (Callithrix jacchus) and study the distribution of serotonin transporter and serotonin receptors in the hypothalamus of this species. We used the Nissl method to determine the cytoarchitecture of the hypothalamic nuclei, and immunohistochemistry to reveal the presence of NeuN as a method to determine the contours of the hypothalamic nuclei. As a result, we found serotonin containing fibers and terminals throughout the rostrocaudal extent of the hypothalamus, more concentrated in some nuclei, and even absent in some. Like serotonin, serotonin transporter was observed between pre-optic area and tuberal region of the hypothalamus, in densities and distribution similar to serotonin. The 5-HT1A and 5-HT1B receptors were found with minor differences among itselves regarding the disposition and intensity of staining. / O hipot?lamo ? uma por??o diencef?lica localizada ao redor do terceiro ventr?culo, abaixo do sulco hipotal?mico, ventralmente vemos seu limite anterior feito pelo quiasma ?ptico e posterior pelos corpos mamilares. Atuando como centro que integra fun??es homeost?ticas e comportamentais. A serotonina ? um neurotransmissor produzido em s?tios restritos ao mesenc?falo e tronco encef?lico, mas que ? distribu?do por todo o sistema nervoso central e tem in?meras fun??es, atuando atrav?s de receptores espec?ficos que tamb?m est?o distribu?dos por todo o sistema nervoso. Utilizando t?cnicas imunoistoqu?micas o objetivo desse trabalho foi delimitar os n?cleos hipotal?micos do sagui (Callithrix jacchus), bem como estudar a distribui??o de serotonina, transportador e receptores de serotonina no hipot?lamo dessa esp?cie. Utilizamos o m?todo de nissl para determinar a citoarquitetura dos n?cleos hipotal?micos, e a imunoistoqu?mica para revelar a presen?a de NeuN como m?todo auxiliar para determinar os contornos dos n?cleos hipotal?micos. Como resultados, encontramos fibras e terminais contendo serotonina por toda a extens?o rostro-caudal do hipot?lamo, sendo mais concentrados em alguns n?cleos, e at? mesmo ausente em alguns; assim como a serotonina, o transportador de serotonina foi observado entre a ?rea pr? ?ptica e a regi?o tuberal do hipot?lamo, com densidades e distribui??o semelhantes ?s da serotonina. Os receptores 5-HT1A e 5-HT1B foram encontrados com diferen?as m?nimas, entre si, quanto a disposi??o e intensidade de marca??o.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O estado nutricional perinatal tem influência persistente sobre o desenvolvimento neural e a função cognitiva. Em humanos e outros animais, a malnutrição protéica durante o período perinatal acarreta alterações permanentes, incluindo a síndrome metabólica na idade adulta. A alimentação é modulada principalmente por fatores neuronais e hormonais que chegam ao hipotálamo. As reservas de glicogênio hipotalâmicos são uma fonte de glicose em altas demandas energéticas, como durante o desenvolvimento dos circuitos neurais. Como alguns circuitos hipotalâmicos estão sendo formados durante o período de lactação, focamos o estudo nos efeitos da desnutrição protéica, durante os primeiros 10 dias de lactação, sobre as reservas de glicogênio em núcleos hipotalâmicos envolvidos no controle do metabolismo energético. Ratas grávidas foram aleatoriamente separadas individualmente em gaiolas e alimentadas ad libitum com uma dieta normoproteíca (22% proteína). Após o parto, cada mãe ficava com 6 filhotes machos. Durante os 10 primeiros o grupo experimental recebia uma dieta isenta de proteína (D) e o grupo controle uma dieta normoproteíca (C). Em P10 a marcação para as reservas de glicogênio era muito intensa nos animais C no núcleo arqueado (ARC) e eminência média (EM). Em P20 no animais C, as reservas eram menores em comparação com P10. Os animais D apresentaram uma marcação menor do que os controles. Após P45 foi difícil determinar diferença entre os grupos porque o as reservas estavam diminuídas. Nós também mostramos que os tanicitos eram as células que apresentavam reservas de glicogênio. Nossos dados reforçam que o estado nutricional materno durante a lactação é crítico para a maturação cerebral, pois a malnutrição materna resulta em menor marcação nas reservas de glicogênio no hipotálamo, o que pode ser crítico para o estabelecimento da circuitaria neural. / Perinatal nutrition has persistent influences on neural development and cognition. In humans and other animals protein malnutrition during the perinatal period causes permanent changes, inducing to adulthood metabolic syndrome. Feeding is mainly modulated by neural and hormonal inputs to the hypothalamus. Hypothalamic glycogen stores are a source of glucose in high energetic demands, as during development of neural circuits. As some hypothalamic circuits are formed during lactation, we attempt to study the effects of malnutrition, during the first 10 days of lactation, on glycogen stores in hypothalamic nuclei involved in the control of energy metabolism. Female pregnant rats were fed ad libitum with a normorprotein diet (22% protein). After delivery each dam was kept with 6 male pups. During the first 10 days of lactation dams from experimental group received a protein free diet and the control group a normoprotein diet. By P10 glycogen stores were very high in the arcuate nucleus and median eminence of control group. Glycogen stores decreased during development. In P20 control animals, glycogen stores were lower when compared to P10 control animals. Animals submitted to malnutrition presented a staining even lower than control ones. After P45 it was difficult to determine differences between control and diet groups because glycogen stores were reduced. We also showed that tanycytes were the cells presenting glycogen stores. Our data reinforce that maternal nutritional state during lactation may be critical for neurodevelopment since it resulted in a low hypothalamic glycogen store, which may be critical for establishment of neuronal circuitry.

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Orientador: Marcio Alberto Torsoni / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-10T10:43:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Stoppa_GrazielaRenata_D.pdf: 962117 bytes, checksum: fb40d5cc07f050a2e201d336a61aed9f (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O hipotálamo desempenha importante papel na manutenção da homeostase da glicose. Robustos sinais originados pela leptina e insulina agem coordenando a ingestão alimentar, o gasto energético e o metabolismo periférico. No hipotálamo e nos tecidos periféricos, a AMPK é um sensor energético que regula o metabolismo celular através do controle entre a produção e consumo de ATP. Ela é inibida em resposta à insulina, leptina e na presença de disponibilidade de nutrientes. O citrato é conhecido como um modulador de algumas enzimas, como a fosfofrutoquinase e acetil-CoA carboxilase. Neste estudo a hipótese do citrato modular enzimas relacionadas com controle da saciedade e do metabolismo periférico foi testada. Primeiramente, foi mostrado que o citrato intracerebrbventricular inibe a fosforilação do sistema AMPK/ACC, diminuie a ingestão alimentar, promove a perda de peso, aumenta a expressão de neuropeptídeos anorexigênicos (POMC e CRH) e diminuiu o tecido adiposo epididimal e perirenal. O clearance da glicose avaliado pelo clamp euglicêmicohiperinsulinêmico e GTT foi maior em animais tratados previamente com citrato, bem como ocorreu maior captação de glicose pelo adiposo e pelo músculo esquelético. Corroborando com o efeito do citrato na homeostase da glicose, a fosforilação de IR, IRS1, IRS2 e AKt avaliada por imunoblotting foi maior, em ambos os tecidos, nos animais que receberam previamente o citrato via ICV. A translocação do GLUT para a membrana plasmática também foi potencializada pelo tratamento prévio com citrato via ICV, tanto no tecido adiposo epididimal como no tecido muscular. Por outro lado, a AMPK no músculo esquelético e no adiposo não foi ativada por citrato ICV, descartando seu efeito na captação de glicose. Nós concluímos que o citrato pode participar com um indicador do estado energético nos neurônios e, portanto, modular o comportamento alimentar, captação de glicose e metabolismo periférico / Abstract: Hypothalamic neurons display important role in the glucose homeostase. Robust signals from leptin and insulin act coordinating the food intake, energy expenditure and peripheral metabolism. In the hypothalamus and peripheral tissue the AMPK is an energy sensor that regulates cellular metabolism through its sensitivity to the cellular energy status. It is inhibited in response to insulin, leptin and nutrients availability. The citrate is well known as a modulator of some enzymes, such as phosphofructokinase and acetyl-CoA carboxilase. Here, we hypothesized that citrate participates of neuronal feeding control and glucose homeostasis. Firstly, we show that intracerebroventricular citrate inhibits AMPKlACC phosphorylation. In addition, we show that citrate also decreases food intake; promotes weight loss, increases the expression ofanorexigenic neuropeptides (POMC and CRH) and increases the epididymal fat pad andperirenal adipose tissue. Glucose clearance evaluated by hyperinsulinemic-euglycemic clamp and GTT was increased in animais treated previously with citrate, as well as adipose and skeletal muscle tissue glucose uptake. Corroborating the effect of the citrate on the glucose homeostase, IR, IRS2, IRS1 and AKt phosphorylation evaluated by immunoblotting was improved by citrate treatment in both tissues, as well as GLUT 4 location in thl~ membrane compartment. On the other hand, AMPK in the skeletal muscle anej adipose tissue was not activated by citratelCV injection discarding their effect on the glucose uptake. We concluded that citrate could be an indicator regarding to energy status of the neuron. This in turn changes the neuropeptides expression to modulate feeding behavior, glucose uptake and peripheral metabolism / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-08-05T12:42:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese final_Taisy.corrigida2016.biblioteca.pdf: 2862702 bytes, checksum: 4387dbfa9803b0de752dff7c0388521c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-05T12:42:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese final_Taisy.corrigida2016.biblioteca.pdf: 2862702 bytes, checksum: 4387dbfa9803b0de752dff7c0388521c (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / CNPq / A maturação do sistema de controle de ingestão alimentar pode se moldar em correspondência ao ambiente nutricional, direcionando o seu padrão maduro. Nos primeiros dias de vida, no rato, o principal mediador para a saciedade e fome é a informação de enchimento ou esvaziamento gástrico, respectivamente. Esta informação nesse período é coordenada notadamente pela periferia provavelmente pela a imaturidade do controle central. O controle da ingestão alimentar homeostático é coordenado pelo núcleo do trato solitário e pelos núcleos hipotalâmicos que através de diferentes moléculas, como sensores energéticos, peptídeos e neurotransmissores coordena os sinais oriundos de tecidos periféricos. Portanto, os objetivos do presente trabalho foram avaliar a maturação de controle da ingestão alimentar em ratos neonatos e o papel do sistema serotoninérgico nesse processo. Foram utilizados ratos Wistar em duas idades P10 e P18 submetidos à desnutrição proteica ou não. Foram realizados os seguintes procedimentos experimentais: avaliação de ingestão alimentar, expressão gênica de peptídeos e sensores energéticos no hipotálamo de animais normonutridos e ativação de c-fos em resposta a agonista serotoninérgico no hipotálamo e núcleos da rafe em animais submetidos à desnutrição ou não. Nossos resultados revelaram que os sensores hipotalâmicos respondem precocemente ao estado de jejum (AMPKα1 -10dias: 16,79 ± 1,01, P=0,0174 e mTOR -10 dias: J=37,50 ± 2,67, p=0,036) e alimentado (AMPKα1 10dias: C=11,39 ± 1,17 e mTOR aos 10 dias: C=48,74 ± 4,21). A desnutrição promove inibição da via serotoninérgica além de reduzir a ativação de células imunorreativas aos 18 dias no núcleo PVN (Desnutrido-Fenfluramina: 200,8 ± 24,38, n=5, versus Desnutrido-Salina: 234,5 ± 43,32, n=5 p<0,006), traduzido em maior ganho de peso dos animais Desnutrido-Fenfluramina (2,32±0,36 n=10; p=0,017) em relação ao grupo Desnutrido-Salina (1,19±0,24 n=10). Portanto, nossos resultados revelam que o controle da ingestão alimentar em neonatos é afetado pela desnutrição com alterações na via serotoninérgica aos 18 dias e que os sinalizadores hipotalâmicos aos 10 dias participam sobre o controle da ingestão de alimentos. / The maturation of food intake patterns can be shaped in correspondence to the nutritional environment, directing his mature standard. In the first days of life in the rats, the main mediator for satiety and hunger is filling or gastric emptying, respectively.This information in this period is coordinated notably the periphery probably due to immaturity of the central control. The homeostatic control of food intake is coordinated by the nucleus of the solitary tract and the hypothalamic nuclei by different molecules, such as energy sensors, peptides and neurotransmitters coordinates signals from the periphery.Therefore, the objective of this study was to evaluate the control of maturation of food intake in newborn rats. Wistar rats were used at ages P10 and P18 submitted to protein malnutrition or not.The following experimental procedures were performed: assessment of food intake, gene expression of peptides and energy sensors in the hypothalamus of control animals and c-fos activation in response to agonist serotonin in the hypothalamus and raphe nuclei in animals subjected to malnutrition or not. Our results revealed that the hypothalamic sensors early answer to the fasting state (AMPKα1 10days: 16,79 ± 1,01 p = 0,0174) and mTOR at 10 days ( J = 37,50 ± 2,67; p = 0.036) and fed (AMPKα1 10days: C = 11,39 ± 1,17 and mTOR at 10 days: C = 48,74 ± 4,21). Malnutrition promotes inhibition of serotonin pathway and reduces the activation of immunoreactive cells after 18 days in the PVN core (Low protein-Fenfluramine: 200,8 ± 24,38; n = 5, versus Low protein-Salina: 234,5 ± 43,32; n = 5 p <0.006), translated into higher weight gain of Low protein-Fenfluramine animals (2,32 ± 0,36; n = 10; p = 0,017) compared to the group Low protein-Salina (1,19 ± 0,24, n = 10). Therefore, our results show that the control of food intake in newborns is affected by malnutrition to changes in serotonin via at 18 days and that the hypothalamic sensors at 10 days for the control of food intake.

Orientadores: Claudio Aparecido Casatti, Roelf Justino Cruz Rizzolo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T07:48:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andrade_JoaoCleberTheodorode_D.pdf: 4798610 bytes, checksum: b8d22ab273e3f97ec7f0b085497c5842 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O hormônio concentrador de melanina (MCH) e a orexina A (OXA) são neuromediadores expressos em neurônios distribuídos no diencéfalo, principalmente na área hipotalâmica lateral, que emitem projeções para inúmeras regiões do neuroeixo. Esses neuropeptídeos exercem potente ação orexigênica, estimulando a ingestão alimentar e o controle do balanço energético. Em vista disso, propusemos analisar esses sistemas neuropeptidérgicos no núcleo motor dorsal do nervo vago, um importante grupamento neuronal pré-motor parassimpático responsável pelas modulações da motilidade e secreção do tubo gastrointestinal, que indiretamente colaboram na ingestão alimentar. Para esses propósitos, foram empregados os métodos de transporte neuronal retrógrado e imunoistoquímica. Os principais dados advindos desse estudo neuroanatômico permite concluir que o núcleo motor dorsal do nervo vago apresenta uma distribuição heterogênea da inervação imunorreativa a OXA (OXA-ir) e ao MCH (MCH-ir), com preponderância da inervação OXA-ir. Os neurônios desse núcleo parassimpático que enviam fibras nervosas para a parte abdominal do esôfago, estômago e segmento proximal do duodeno, recebem inúmeros contatos morfológicos dos terminais nervosos OXA-ir ou ao MCH-ir, sugestivos de contatos sinápticos. Finalmente, as aferências diencefálicas OXA-ir ou ao MCH-ir para o DMV, foram elucidadas, revelando que as partes dorsais e laterais da área hipotalâmica lateral são os principais locais de origem dessa inervação neuropeptidérgica. / Abstarct: Melanin-concentrating hormone (MCH) and orexin-A (OXA) are neuromediators expressed in neurons distributed in the diencephalum, mainly in the lateral hypothalamic area, projecting nerve fibers to several parts of the central nervous system. These neuropeptides exert potent orexigenic activity, increasing feeding and controlling the energetic balance. Consequently, these neuropeptidergic systems were evaluated in the dorsal motor nucleus of the vagus nerve, a fundamental premotor parasympathetic nucleus that modulates the motility and secretion of the gastrointestinal tract, indirectly collaborating in the feeding behaviour. For these purposes retrograde neuronal tracing and immunohistochemistry methods were used. The main results from this neuroanatomical study showed that the dorsal motor nucleus of the vagus nerve exhibits a heterogeneous rostro-caudal MCH- or OXA-innervation patterns, being the latter more significant. Parasympathetic neurons that send nerve fibers to subdiafragmatic esophagus, stomach and proximal duodenum receive MCH- or OXA-immunoreactive nerve endings like synapses. Finally, the MCH or OXA-immunoreactive diencephalic afferents to dorsal motor nucleus of the vagus nerve were elucidated. These afferents are mainly from dorsal and lateral parts of the lateral hypothalamic area. / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Jose Barreto Campello Carvalheira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T01:39:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ropelle_EduardoRochete_M.pdf: 1594903 bytes, checksum: c30fea33a399994a7ccd128d77733add (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A patogênese da anorexia induzida pelo câncer é multifatorial e está associada a distúrbios dos mecanismos centrais que controlam a ingestão alimentar. Todavia, os mecanismos neuroquímicos responsáveis pelo desenvolvimento da anorexia induzida pelo câncer são desconhecidos. Este presente estudo demonstra que a infusão crônica de 5-amino-4 imidazolecarboxamide-riboside (AICAR) no terceiro ventrículo hipotalâmico e a injeção intraperitoneal de 2 deoxi-D-glicose (2DG), promoveram a ativação da AMPK hipotalâmica, aumentaram a ingestão alimentar e prolongaram a sobrevida de ratos com anorexia induzida por tumor. Em paralelo, a ativação farmacológica da AMPK hipotalâmica em animais portadores de tumor, reduziu significativamente a produção hipotalâmica da óxido nítrico sintase induzível (iNOS), da Interleucina-1ß (IL-1ß) e do fator de necrose tumoral alfa (TNF-a) e modulou a expressão de neuropeptídeos hipotalâmicos (NPY e POMC) envolvidos no controle da homeostase energética. Além disso, o tratamento diário via oral com metformina, biguanida com ação anti-diabética, também aumentou a fosforilação da AMPK hipotalâmica, aumentou a ingestão alimentar e a sobrevida nos animais com anorexia induzida pelo tumor. Coletivamente, nossos achados sugerem que a ativação da AMPK hipotalâmica reverte a anorexia induzida pelo câncer através da inibição da produção de moléculas pró-inflamatórias e através do controle da expressão de neuropeptídeos no hipotálamo, refletindo em aumento da sobrevida dos ratos portadores de tumor. Assim nossos dados indicam que a ativação da AMPK representa uma atrativa oportunidade para o tratamento da anorexia induzida pelo câncer / Abstract: The pathogenesis of cancer anorexia is multifactorial and is associated with disturbances of the central physiological mechanisms controlling food intake. However the neurochemical mechanisms responsable for cancer induced-anorexia are unclear. Here, we show that chronic infusion of 5-amino-4imidazolecarboxamide-riboside (AICAR) into the third cerebral ventricle and a chronic peripheral injection of 2 deoxy-D-glucose (2DG) promotes hypothalamic AMPK activation, increased food intake and prolongs the survival of anorexic tumor bearing (TB) rats. In parallel, the pharmacological activation of hypothalamic AMPK in TB animals, markedly reduced the hypothalamic production of inducible nitric oxide synthase (iNOS), interleukin-1ß IL-1ß and tumor necrosis factor-alpha (TNF-a and modulated the expression of hypothalamic neuropeptides (NPY and POMC) involved in the control of energy homeostasis. Furthermore, the daily oral treatment with biguanide anti diabetic drug metformin also induced AMPK phosphorylation in the central nervous system and increased food intake and life span in anorexic TB rats. Collectively, the findings of this study suggest that hypothalamic AMPK activation reverses cancer anorexia by inhibiting the production of proinflammatory molecules and controlling the neuropeptide expression in the hypothalamus, reflecting in a prolonged life span in TB rats. Thus, our data indicate that hypothalamic AMPK activation presents an attractive opportunity for the treatment of cancer-induced anorexia / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientadores: Francesco Langone, Licio Augusto Velloso / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T03:39:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_AndreSchwambach_M.pdf: 3969141 bytes, checksum: 53eff5b5bbec953a73e9ddc63cd3ea39 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O Fator Neurotrófico Ciliar (CNTF) é uma neurocitocina com múltiplas atividades biológicas, sendo notável sua habilidade de proteger motoneurônios. Entretanto, a administração de CNTF leva à redução de peso corporal. Por outro lado, a administração do CNTF fusionado a um Domínio de Transdução de Proteínas (PTD), denominado TAT-CNTF, é capaz de proteger motoneurônios da medula espinhal axotomizados sem causar este efeito. O presente trabalho investigou se a administração intracerebroventricular (i.c.v.) de TAT-CNTF produz os conhecidos efeitos catabólicos do CNTF. Para isso, ratos Wistar machos, com uma cânula crônicamente implantada no ventrículo lateral, foram distribuídos em quatro grupos: TAT-CNTF (2,5µg/8µl), CNTF (2,5µg/8µl), Leptina (LEP) (5µg/8µl) e PBS, que receberam uma infusão i.c.v. a cada 12h por 4 dias. O grupo tratado com TAT-CNTF apresentou menor perda de peso quando comparado aos grupos CNTF e LEP. As infusões i.c.v. de TAT-CNTF não reduziram o peso das gorduras retroperitonial (RP), epididimal (EP) e marrom interescapular (GM). O grupo CNTF apresentou redução do peso destas gorduras. Os grupos CNTF e LEP apresentaram aumento da fragmentação do DNA nas gorduras RP e EP. Por outro lado, o grupo TAT-CNTF não apresentou aumento da fragmentação do DNA nas amostras de RP, EP e GM. Um padrão de degradação internucleossomal do DNA e a presença de células TUNEL positivas foram detectados apenas nas gorduras dos animais dos grupos CNTF e LEP. Estes grupos também apresentaram aumento da expressão da UCP1 na GM, ao passo que o grupo TAT-CNTF não apresentou tal resultado. A análise da fosforilação da STAT3 no hipotálamo após uma única infusão i.c.v. de TAT-CNTF demonstrou, após 20 minutos, um efeito menor que o observado após infusão de CNTF. Em conclusão, nossos dados sugerem que o TAT-CNTF possui ação diferente do CNTF nas áreas hipotalâmicas envolvidas no controle da ingesta e do metabolismo / Abstract: The Ciliary Neurotrophic Factor (CNTF) is a neurocitokine with multiple biological activities, being notable its ability to protect lesioned motoneurons. However, administration of CNTF leads to reduction of body mass, while administration of CNTF fusioned with a Protein Transduction Domain (PTD), named TAT-CNTF, protects lesioned spinal motoneurons with no effects on body weight. In the present work, we investigated whether intracerebroventricular (i.c.v.) administration of TAT-CNTF would produce CNTF known catabolic effects. Male Wistar rats with a canula chronically implanted in the lateral ventricle were randomly assigned to four treatment groups: TAT-CNTF (2,5µg/8µl), CNTF (2,5µg/8µl), Leptin (LEP) (5µg/8µl) and PBS, that received an i.c.v. infusion every 12h for 4 days. TAT-CNTF treated group had a reduced weight loss when compared with CNTF and LEP groups. TAT-CNTF i.c.v. infusions did not reduce the weights of retroperitoneal (RP) and epididimal (EP) white adipose tissue, as well as interescapular brown adipose tissue (BAT) while CNTF i.c.v. administration reduced the weight of all these tissues. CNTF and LEP groups showed an increase of DNA fragmentation in RP and EP. On the other hand, TAT-CNTF group had no increase in DNA fragmentation in RP, EP and GM. A DNA ladder pattern and TUNEL positive cells could only be detected in adipose tissues from CNTF and LEP groups. CNTF and LEP treated groups had an increase in the expression of UCP1 in BAT, while TAT-CNTF treatment had no effects on UCP1 expression. An acute i.c.v. administration demonstrated that after 20 minutes TAT-CNTF induced less intense STAT3 phosphorilation in the hypothalamus when compared with CNTF acute infusions. In conclusion these data suggest that TAT-CNTF has a different action on hypothalamic areas involved in the control of food intake and energy metabolism / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Francesco Langone / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-14T15:12:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Facchini_Gustavo_M.pdf: 1152252 bytes, checksum: 2aeaf5af11625ea4d656804e4b4ab4b3 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A melatonina (MLT) é um neurohormônio presente em humanos e outros vertebrados, sendo a glândula pineal principal fonte produtora. Além de sua conhecida ação cronobiológica, a MLT tem papel regulador sobre o metabolismo energético e sobre a massa corporal de mamíferos. A presença de receptores para MLT nos núcleos hipotalâmicos dorso-medial, supraquiasmático, paraventricular do hipotálamo desde a fase embrionária, corrobora a mediação da MLT no controle neural do metabolismo. Dentro deste contexto o presente trabalho avaliou os efeitos da administração de MLT sobre a evolução ponderal e os níveis plasmáticos de glicose, triglicérides, colesterol, ácido graxo livre e insulina. Também foram investigados os efeitos da MLT sobre a fosforilação da AKT e ERK1/2 no hipotálamo de ratos neonatos. Neste estudo foram utilizados ratos neonatos com dois dias de vida (P2) que receberam doses diárias de MLT (1, 10, 50 e 100 mg/kg, s.c.; n=10) e/ou luzindole, antagonista não seletivo da MLT (1 mg/kg, s.c.; n=10). Os animais foram tratados por seis dias e sacrificados 24 horas após a última dose (P8). Três grupos adicionais foram utilizados, dois deles receberam apenas os veículos de diluição da melatonia (n=10) ou luzindole (n=10). O terceiro foi formado por animais não tratados (n=10). Imediatamente após o sacrifício foi coletado sangue para as dosagens plasmáticas, sendo realizada também a dissecação do hipotálamo. Os hipotálamos foram processados para análise por Western Blot (WB) das formas fosforiladas e não fosforiladas das proteínas AKT e ERK1/2. A evolução ponderal dos animais tratados com veículo de diluição foi semelhante ao dos animais sem tratamento. Contrariamente, todos os grupos tratados com MLT e com MLT+LZD apresentaram redução da evolução ponderal ao longo do tempo. A análise da fosforilação de proteínas no hipotálamo mostrou que todos os grupos tratados com MLT exibiram aumento da fosforilação da AKT. Por sua vez, a administração conjunta de MLT e LZD fez com que o valor de pAKT se assemelhasse os grupos controles. Os animais que receberam 10 mg/kg de MLT apresentaram aumento significativo da pERK1/2 quando comparado aos grupos controles. Entretanto, a administração de MLT+LZD tornou os valores de pERK1/2 similares aos valores dos animais controles. As dosagens plasmáticas mostraram que a MLT não alterou valores de colesterol, mas modificou as concentrações de glicose, triglicérides, ácido graxo livre e insulina. Por outro lado, os grupos tratados com o veículo de diluição do LZD apresentaram aumento dos valores de colesterol e diminuição de triglicérides e ácido graxo livre. Nossos dados mostram pela primeira vez que doses farmacológicas de melatonina produzem alterações metabólicas em ratos neonatos e que tais efeitos podem ser conseqüência de sua ação periférica e central. / Abstract: Melatonin (MLT) is a neurohormone present in human and other vertebrates, the pineal gland being its main source. In addition to its known chronobiological action, MLT has a regulatory role on energy metabolism and body mass of mammals. The presence of receptors for MLT in dorsomedial, supraquiasmaic and paraventricular hypothalamic nuclei since embryonic stage, speaks in favor of MLT as a mediator of neural control of metabolism. In this study we used newborn rats with two days of life (P2) who received daily doses of MLT (1, 10, 50 and 100 mg/kg, sc, n = 10) and / or luzindol (LZD; non-selective antagonist of MLT, 1 mg/kg, sc, n = 10). Animals were treated for six days and sacrificed 24 hours after the last dose (P8). Two additional groups received only the vehicle of dilution of melatonin (n = 10) or luzindol (n = 10). Another group was composed of animals not treated pharmacologically (n = 10). Body weight was recorded daily. At the end of treatment rats were killed by decapitation and blood was collected for plasma glucose (GLI), total cholesterol (COL), free triglycerides (TG), free fatty acid (FFA) and insulin (INS) determination. The hypothalamus was also dissected and processed for analysis by Western Blot (WB) of phosphorylated AKT and ERK1/2. The body weight of animals treated with vehicle was similar to that of untreated animals. Conversely, all groups treated with MLT and MLT + LZD showed reduced body weight over time. Analysis of protein phosphorylation in the hypothalamus showed that all groups treated with MLT had increased AKT phosphorylation. Rats that received MLT and LZD had pAKT levels similar to control rats. Animals that received 10 mg / kg of MLT showed significant increase in pERK1/2 compared to control groups. However, rats that received MLT + LZD had pERK1/2 levels similar to control rats. MLT did not alter plasmatic COL, but modified the GLI, TG, AGL and INS plasmatic levels. Moreover, groups treated with vehicle for dilution of LZD showed increase in COL and decrease of TG and FFA. Our data show for the first time that pharmacological doses of melatonin produces metabolic changes in newborn rats and that this effect may be a consequence of its peripheral and central actions. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Licio Augusto Velloso / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T14:17:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Girasol_Alessandra_D.pdf: 2760832 bytes, checksum: a530db3fa7c6c0597b9212552bbcbb52 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Muitos dos efeitos da leptina no sistema imune dependem de sua capacidade de modular a expressão de citocinas e a apoptose no timo. Surpreendentemente, alguns desses efeitos são dependentes de transdução de sinal através do IRS1/PI3-quinase, mas independentes da ativação da JAK2. Uma vez que todos os efeitos conhecidos da leptina em diferentes tipos celulares e tecidos parecem ser dependentes da ativação da JAK2, nós aventamos a hipótese de que, pelo menos para o controle da função tímica, outra quinase, até então desconhecida, poderia mediar a transdução do sinal da leptina através do ObR e pela cascata de sinalização do IRS1/PI3-quinase. Neste trabalho, mostramos que a tirosina quinase Fyn está constitutivamente associada ao ObR em células tímicas. Após um estímulo agudo por leptina, a Fyn é rapidamente fosforilada em tirosina, ativando-se e associando-se ao IRS1 de forma transiente. Todos estes efeitos são independentes da ativação da JAK2, e com a inibição da Fyn a transdução de sinal através do IRS1/PI3-quinase é abolida. Além disso, a inibição da Fyn modifica significativamente os efeitos da leptina sobra a expressão de citocinas no timo. Sendo assim, no timo, a Fyn atua como uma tirosina quinase que transduz o sinal da leptina independentemente da ativação da JAK2, e medeia alguns dos efeitos imunomodulatórios da leptina neste tecido / Abstract: Several effects of leptin in the immune system rely on its capacity to modulate cytokine expression and apoptosis in the thymus. Surprisingly, some of these effects are dependent on signal transduction through the IRS1/PI3-kinase, but not on the activation of JAK2. Since all the well known effects of leptin in different cell types and tissues seem to be dependent on JAK2 activation, we hypothesized that, at least for the control of thymic function, another, unknown kinase could mediate the transduction of the leptin signal from the ObR towards the IRS1/PI3-kinase signaling cascade. Here, we show that the tyrosine kinase Fyn is constitutively associated with the ObR in thymic cells. Following a leptin stimulus, Fyn undergoes an activating tyrosine phosphorylation and a transient association with IRS1. All these effects are independent on JAK2 activation and upon Fyn inhibition the signal transduction towards IRS1/PI3-kinase is abolished. In addition, the inhibition of Fyn significantly modifies the effects of leptin on thymic cytokine expression. Therefore, in the thymus, Fyn acts as a tyrosine kinase that transduces the leptin signal independently of JAK2 activation, and mediates some of the immunomodulatory effects of leptin in this tissue / Doutorado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Doutor em Fisiopatologia Medica