Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-04-24T19:07:37Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Tatiana Moura.pdf: 1314903 bytes, checksum: d553217eb6f2d6d979a75a8179ee209b (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-04-26T16:49:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Tatiana Moura.pdf: 1314903 bytes, checksum: d553217eb6f2d6d979a75a8179ee209b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-26T16:49:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Tatiana Moura.pdf: 1314903 bytes, checksum: d553217eb6f2d6d979a75a8179ee209b (MD5) / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença endêmica no Brasil. No entanto, não existe um bom modelo experimental para o estudo da doença. Nosso objetivo foi desenvolver um modelo de infecção com L. braziliensis, o principal agente etiológico da LTA em nosso país, levando em consideração o inoculo de parasitas e o sítio de infecção. [MATERIAL E MÉTODOS] Camundongos BALB/c foram infectados com 105 Leishmania braziliensis (MHOM/BR/01/BA788), na derme da orelha. Os animais foram acompanhados durante 10 semanas para a avaliação do desenvolvimento da lesão e para a avaliação da resposta imune. [RESULTADOS] Observamos que a expansão parasitária foi acompanhada pelo desenvolvimento de uma lesão na derme da orelha, similar à observada em pacientes com LTA (lesão nodular e ulcerada no centro), a qual regrediu espontaneamente, como evidenciado pela presença de uma cicatriz. A análise histopatológica da orelha infectada mostrou a presença de, inicialmente, um infiltrado focal constituído por células mononucleares (linfócitos e monócitos), neutrófilos e poucos parasitas. No auge do desenvolvimento da lesão, havia predominância de macrófagos infectados os quais foram, em seguida, substituídos por um infiltrado inflamatório constituído por histiócitos, plasmócitos, neutrófilos e fibroblastos e pela ausência de parasitas. Os parasitas podem ser detectados no linfonodo regional, durante toda a infecção. A análise da expressão de quimiocinas no linfonodo regional mostra um aumento na expressão de quimiocinas recrutadoras de monócitos/macrófagos e neutrófilos Observamos também um aumento na expressão de IFN-γ, IL-4, IL-5 e IL-10, tanto por células T CD4+ quanto por células T CD8+. Com a regressão da lesão, a expressão destas citocinas diminuiu. [CONCLUSÃO] A inoculação de L. braziliensis na derme da orelha de camundongos constitui um modelo de resistência devido ao desenvolvimento de uma resposta imune do tipo Th1. Contudo, nesse modelo, os parasitas são capazes de sobreviver no linfonodo regional de camundongos infectados apesar do desenvolvimento de uma resposta imune capaz de curar a lesão / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-08-13T18:18:32Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Angela Giudice Diniz.pdf: 1118441 bytes, checksum: a3651deda168fee418b2f5acb8f9b6a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-13T18:18:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Angela Giudice Diniz.pdf: 1118441 bytes, checksum: a3651deda168fee418b2f5acb8f9b6a9 (MD5) / NIH Grant AI30639;Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq);Universal 472198/2009-2. / Introdução: Na leishmaniose cutânea (LC) e mucosa (LM) causadas por Leishmania braziliensis, a patologia está associada com a produção exacerbada de citocinas pró-inflamatórias. Cerca de 10% dos indivíduos residentes em Corte de Pedra- BA, uma área de transmissão de L. Braziliensis apresentam reação de hipersensibilidade tardia ao antígeno de Leishmania, não apresentam evidências de doença clínica e são considerados como tendo uma forma subclínica (SC) da doença. linfócitos desses indivíduos não produzem ou apresentam uma produção menor de IFN- e TNF- quando comparados a pacientes com LC. Até o momento não está claro porque esses indivíduos têm a capacidade de controlar a doença. Como a erradicação do parasito ou a ocorrência de formas assintomáticas da infecção não podem ser explicadas pela ação efetiva da resposta imune adaptativa, é necessário um maior aprofundamento do conhecimento do papel da resposta imune inata no controle da infecção. Os macrófagos são as principais células que abrigam a Leishmania e consequentemente a sobrevivência ou morte desse parasito depende da ativação dessas células, da produção de oxidantes e de moléculas inflamatórias. Todavia na LC e na LM os parasitos não são totalmente destruídos e uma constante ativação macrofágica pode vir a contribuir para a reação inflamatória e patogênese da doença. Objetivo: Avaliar o papel dos monócitos /macrófagos na imunopatogênese da leishmaniose tegumentar. Metodologia: Macrófagos de pacientes com LC, LM e indivíduos SC foram infectados in vitro com L. braziliensis e avaliados quanto à suscetibilidade a infecção por Leishmania e a capacidade de matar o parasito. No sobrenadante dos macrófagos infectados foram avaliadas as produções de óxido nítrico (NO), superóxido (O2-) pelo reagente de Griess, quimiocinas e TNF-α por teste imunoenzimático. Foram também avaliadas a frequência de monócitos inflamatórios (CD14+CD16+), assim como a caracterização fenotípica dessas células por citometria de fluxo nos diferentes grupos estudados. Resultados: Após a exposição a L. braziliensis, macrófagos de indivíduos SC apresentaram uma diminuição significante na percentagem de células infectadas e no número de amastigotas por 100 macrófagos em comparação com as células de pacientes com LC e LM. A produção de NO e O2- foi detectada, mas não houve variação significante entre os diferentes grupos. A produção de quimiocinas e de TNF-α foi maior em pacientes com LC e LM quando comparado com a do grupo SC. A frequência de monócitos CD14+CD16+ foi maior em doentes com LC em comparação com indivíduos SC. Conclusão: Nossos dados sugerem que monócitos/macrófagos desempenham um papel importante no controle da infecção por L. braziliensis e na patologia da leishmaniose tegumentar. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-08-14T18:24:44Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Adriano Queiroz Silva.pdf: 2240394 bytes, checksum: 2fa6a497fafbeb3f32dc8203e75c3307 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-08-14T18:24:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_Adriano Queiroz Silva.pdf: 2240394 bytes, checksum: 2fa6a497fafbeb3f32dc8203e75c3307 (MD5) / NIH Grant P50AI30639-16;R03AI067663-02 / As leishmanioses constituem um espectro de doenças que ocorrem, sobretudo, em regiões tropicais e subtropicais do globo. Mais de 15 Leishmania spp. estão relacionadas a infecções, cujas manifestações vão desde úlceras localizadas, muitas vezes auto-limitadas, até as formas metastáticas, podendo afetar o baço, as mucosas nasofaríngeas ou causar lesões, papulosas ou ulceradas, que se espalham por todo o corpo do paciente. O ciclo de vida desses protozoários inclui a transmissão entre flebotomíneos e uma variedade de mamíferos silvestres ou peridomésticos, e entre os flebotomíneos e o homem. A diversidade genética desses parasitas parece ter influência no desfecho da doença e está relacionada com a interação dos parasitas e seus vetores e reservatórios. Na região que compreende a área endêmica de Corte de Pedra, a Leishmania braziliensis é a espécie dominante e causa de três formas de Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA): a leishmaniose cutânea (LC), a leishmaniose mucosa (LM) e a leishmaniose disseminada (LD). Além disso, em Corte de Pedra, a L. braziliensis é multiclonal e há uma associação com à compartimentalização da doença na região. Os principais objetivos desse trabalho foram: 1 - Desenvolver um método de tipagem, baseado na análise de sequência de DNA que seja capaz de distinguir sub-populações Leishmania braziliensis isolados de pacientes com LC, LM ou LD; 2 - Avaliar as distribuições temporais e espaciais da LC, LM e LD na região que compreende a área endêmica de Corte de Pedra. No manuscrito 1, foram comparadas as sequências de 6 segmentos de DNA (Loci) inicialmente identificados eu um ensaio de amplificação randômica para identificar genótipos de L. braziliensis obtidos de pacientes com LC, LM e LD. As variações alélicas foram definidas pela presença de Single nucleotide Polymorphisms (SNPs) e INDELs nos seis loci avaliados, os quais foram associadas com as três formas da doença. Foram encontrados 27 polimorfismos distribuídos nos seis loci da L. braziliensis; destes, 5 apresentaram uma associação com a forma disseminada da doença e com razões de risco que variaram entre 4,4 até 10,7. Os SNPs e INDELs de cada locus foram organizados em 15 haplótipos, destes, 6 apresentaram associação estatisticamente significantes com LD e com razões de risco variando entre 3,0 até 8,5. No manuscrito 2, foram apresentadas as coordenadas geográficas dos locais de residência dos casos de LC, LM e LD da região de Corte de Pedra no período de 2008 até 2011. O estudo foi feito com base na distribuição dos casos de LC, LM e LD em cada um dos três anos de estudo. A análise de agregação dos casos de LD e LM mostrou que não há diferença nas suas distribuições. Os casos de LC tiveram o mesmo padrão de distribuição dos casos de LM e LD no primeiro ano, e um padrão distinto a partir do segundo ano. Esses resultados sugerem que a forma como a leishmaniose se apresenta no hospedeiro humano é influenciada pela cepa parasitária e também que a doença está constantemente mudando o padrão de distribuição na área endêmica. Os fatores que promovem essas mudanças não estão totalmente claros. Talvez, conciliar as informações das distribuições dos casos com a genotipagem dos parasitas, permita um melhor entendimento da dinâmica da leishmaniose em Corte de Pedra. / Salvador

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-06-03T12:50:25Z No. of bitstreams: 1 Tese-Rafael Assis.pdf: 16998488 bytes, checksum: 138dc6a874eb36a1c66935f3dfab1da4 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-03T12:50:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese-Rafael Assis.pdf: 16998488 bytes, checksum: 138dc6a874eb36a1c66935f3dfab1da4 (MD5) Previous issue date: 2012 / Os glicoconjugados de Leishmaniatem sido extensivamente estudados, mas ainda pouco se sabe sobre o quanto polimorfismos intra e interespecíficos contribuem com o desenvolvimento das diferentes imunopatologias das leishmanioses. Por este motivo, duas espécies de importância epidemiológica foram examinadas, L. braziliensise L. infantum, agentes causadores das leishmanioses cutânea e visceral, respectivamente. O LPG de L. braziliensisnão possui cadeias laterais enquanto o LPG de L. infantumcarrega em sua estrutura oligômeros de até três β-glicoses como cadeias laterais. Por outro lado a estrutura dos GIPLs destas espécies era desconhecida e foi objeto de estudo deste trabalho. A análise estrutural dos GIPLs mostrou que L. infantumpossui GIPLs pequenos e ricos em manose, sugerindo predominância de GIPLs do tipoI e híbridos enquanto L. braziliensis apresenta GIPLs grandes e ricos em galactose, sugestivo do tipo II. Para analisar o papel destas moléculas na interação com o hospedeiro, macrófagosperitoneais murinos foram tratados com LPG ou GIPLs e a produção de nitrito, citocinas, bem como a ativação de MAPKs foram avaliados. De forma geral, macrófagos estimulados com LPG de L. braziliensis, demonstraram uma produção maior de TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO do que os estimulados com LPG de L. infantum, adicionalmente, células tratadas com LPG de ambas as espécies mostraram uma resposta pro inflamatória mais proeminente. Além disto, os GIPLsmostraram a capacidade de inibir a produção de IL-12 e NO em macrófagos estimulados com IFN-γe LPS. Finalmente, os glicoconjugados destas duas espécies resultaram em uma cinética diferencial na ativação de MAPKs. O LPG de L. braziliensis mostrou uma ativação transiente enquanto o de L. infantum uma ativação gradual. Os GIPLs de ambas espécies falharam em ativar MAPKs / Leismania LPG has being extensively studied but little is known about in what extent interspecies variations contribute to the differentimmunopathologies of leishmaniases. Similarly, for GIPLs, a relatively neglected molecule, little is known about its polymorphisms among Leishmania species and its role during infection. To address this issue, two epidemiologically important South American species of Leishmania were examined, L. braziliensis and L. infantum, causative agents of cutaneous and visceral leishmaniasis, respectively. The LPG from these two species differ in structure, being L. braziliensis LPG devoid of side chains while L. infantum LPG carries one to three β-glucoses on its side chains. In the other hand the structure of the GIPLs from these two species is still unknown and was addressed in this present work. A structural analysis of the GIPLs showed that L. infantum has small, mannose rich GIPLs, suggestive of type I and Hybrid GIPLs while L. braziliensis has larger and galactose rich GIPLs, suggestive of Type II GIPLs. To address the role of these molecules upon macrophage invasion, mouse peritoneal macrophages were treatedwith either LPG or GIPLs and Nitrite and cytokine production, as well as MAPKs activation were evaluated. Overall, macrophages stimulated with L. braziliensis LPG, had a higher TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO production than those stimulated with that of L. infantum, also, IFN-γprimed macrophages stimulated with LPG, had a higher production of NO and TNF-αthan GIPLs stimulated cells. Additionally, GIPLs showed the capacity of inhibit IL-12 and NO production in IFN-γand LPS stimulated macrophages. Furthermore, the glycoconjugates from the two species resulted in differential kinetics of signaling via MAPK activation. L. infantum LPG exhibited a gradual activation profile, whereas L. braziliensisLPG showed a sharp but transient activation, while GIPLs failed to activate MAPKs

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-06-14T12:31:47Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Raquel Gontijo.pdf: 2958488 bytes, checksum: 8dbc875d07ab2eefcee30117ac6d2fbf (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-14T12:31:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Raquel Gontijo.pdf: 2958488 bytes, checksum: 8dbc875d07ab2eefcee30117ac6d2fbf (MD5) Previous issue date: 2013 / Infecções causadas por Leishmania (Viannia) braziliensisapresentam manifestações clínicas diversas e a leishmaniose cutânea localizada (LCL) é a forma clínica mais comum. Na Terra Indígena Xakriabá, localizada no norte de Minas Gerais, 212 casos autóctones de LCL foram registrados no período de 2001 a 2007. O grande número de casos e as particularidades da área reforçam o interesse de investigar aspectos da resposta imune do hospedeiro em relação à infecção.O óxido nítrico (NO) é um potente agente citotóxico presente na resposta imune anti-Leishmania. Na LCL, um dos mecanismos de produção de NO envolve a ligação de IgE ao receptor CD23 de macrófagos num microambiente de citocinas IFN-γou IL-4. Apesar do papel crucial do NO no curso da infecção, tem sido relatada a existência de isolados de L. (V.) braziliensis resistentes à ação dessa molécula. Assim, os objetivos do presente trabalho foram avaliar por citometria de fluxo, o perfil de expressão do marcador de ativação CD23 e de produção de NO intracelular por monócitose o perfil de expressão das citocinas IFN-γe IL-4 por linfócitos T do sangue periférico de indivíduos não infectados (NI, n=10), Teste de Montenegro positivosem lesão (TM +, n=13) e portadores de leishmaniose cutânea localizada (LCL,n=17), considerando o tempo de evolução da lesão (LCL<60 dias, n=7; LCL>60 dias, n=10). Foi feita também a dosagem dos níveis séricos de IgE dos indivíduos participantes. Além disso, investigou-se a possível presença de L. (V.) braziliensis resistentes/susceptíveis ao NO em isolados de pacientes responsivos (C, n=5) e refratários ao tratamento (FT, n=5) com Glucantime®. Para o estudo imunológico foram realizadas culturas de leucócitos do sangue periférico na ausência (CC) ou presença de formas promastigotas vivas de L. (V.) braziliensis (LEISH) ou na presença de antígeno solúvel de L. (V.) braziliensis. A dosagem dos níveis séricos de IgE foi feita utilizando-se kit específico baseado na técnica ELISA sanduíche. Para identificação do perfil de resistência dos isolados foram feitos ensaios de viabilidade utilizando-se a técnica do MTT. Os resultados obtidos com o estudo imunológico mostram que o grupo LCL apresentou maior expressão de CD23 e maior produção de NO por monócitos em relação aosgrupos TM + e NI, além de menor expressão de IFN-γe IL-4 por linfócitos T CD4+ em relação ao grupo TM +. Por outro lado, o grupo TM + apresentou aumento relevante no percentual de altoprodutores das citocinas avaliadas, NO e CD23 quando comparadoao grupo NI. Ao dividirmos o grupo LCL por tempo de lesão, observamos no grupo LCL<60 grande frequência de alto produtores de IL-4, NO e CD23, indicando um perfil misto de ativação/modulação da imunidade inata. Os níveis séricos de IgE total foram menores no grupo LCL quando comparado aos grupos NI e TM + , havendo redução do grupo TM + em relação ao grupo NI. Além disso, dos 10 isolados testados, 8 foram resistentes à ação do NO, sendo que, os 2 sensíveis foram provenientes de indivíduos responsivos ao tratamento com Glucantime®. Diante disso, foi possível inferir queo utras fontes celulares, além dos linfócitos T, podem estar envolvidas na produção de citocinas no grupo LCL e que no grupo TM + há forte indício da participação do mecanismo de ativação de monócitos e indução de NO investigado neste estudo, favorecendoo controle da infecção, impedindo assim, o aparecimento de lesões. Além disso, a existência de isolados de L. (V.) braziliensis resistentes à ação do NO corrobora com achados de outros autores e pode estar diretamente relacionada com a resistência à ação do Glucantime®. / Infections caused by Leishmania (Viannia) braziliensis presents many clinical manifestations and localized cutaneous leishmaniasis (LCL) is the most common clinical form. At the Xakriabá Indigenous Land, located in the northern Minas Gerais, 212 autochtone cases of LCL was reported during theperiod of 2001 to 2007. The elevated number of cases and particularities of thearea reinforces the interest to investigate aspects of the host immune response in relation with infection. Nitric oxide (NO) it’s a potent cytotoxical agent present in theanti-Leishmania immune response. In LCL, one of many mechanisms of NO production involves the IgE bind to the macrophages CD23 receptor in a cytokines IFN-γor IL-4 microenvironment. Despite the crucial role of NO in the infection course, hasbeen related the existence of Leishmania (Viannia) braziliensis isolates resistant to NO action. Thus, the aims of this study was evaluate, by flow cytometry, the expression profile of CD23 activation marker and NO production by monocytes, and the expression profile of cytokines IFN-γ and IL-4 by T lymphocytes subpopulations of peripheral blood of noninfected individuals (NI, n=10), Positive Montenegro Skin Test without lesion (TM+, n=13) and patients with Localized Cutaneous Leishmaniasis (LCL, n=17), considering the evolution time of the lesion (LCL<60 days, n=7; LCL>60 days, n=10). Was made too, the seric IgE levels dosage in the participants. Besides this, was investigated the possible presence of the resistant/susceptible L. (V.) braziliensis isolates from responsive (C, n=5) and refractory (FT, n=5) patients to treatment with Glucantime®. For the immunological study, was realized leucocytes cultures of peripheral blood in the absence (CC) or presence of live L. (V.) braziliensis promastigotes/L. (V.) braziliensis soluble antigen (LEISH). The dosage of seric IgE levels was made using a specific kit based on sandwich ELISA technique. For the resistant/susceptible profile investigation, viability assays was made using the MTT technique. The obtained results with immunological study show that the LCL group present higher CD23 expression and higher NO production by monocytes in relation with TM + e NI groups, besides lower expression of IFN-γe IL-4 by CD4+ T lymphocytes when compared to TM + group. On the other side, TM + group presents relevant increase in the percentage of higher producers of evaluated cytokines, NO and CD23 when compared with NI group. Dividing LCL group for lesion evolution time, was observed in LCL<60 increase frequency of higher producers of IL-4, NO and CD23,indicating a mixed profile of activation/modulation of the innate immunity. The total IgE seric levels was lower in the LCL group when compared to the NI and TM + groups, with a reduction of TM + in relation with NI group. Besides this, of 10 isolates tested, 8 was resistant to NO action and the 2 sensible was obtained from individuals that was responsible to the treatment with Glucantime®. In front this, was possible to infer that other cellular sources, besides T lymphocytes, could be involved in the cytokine production in LCL group and in the TM + group there is a strong possibility for the participation of monocytes activation and induction mechanism and NO induction investigated in this study, favoring the infection control, preventing the occurrence of skin lesions.Besides this, the existence of NO resistant L. (V.) braziliensis isolates, corroborates with other authors findings and could be directly related with Glucantime® treatment resistance.

COELHO, Zirlane Castelo Branco Coelho. Efeito da via de sinalização slam sobre células T na resposta in vitro à leishmania braziliensis. 2011. 139 f. Tese (Doutorado) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina. Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2011-10-06T16:31:31Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_coelho.pdf: 25504477 bytes, checksum: a82cdf50308ae9157f67686e4e70241e (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2011-10-07T16:41:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_coelho.pdf: 25504477 bytes, checksum: a82cdf50308ae9157f67686e4e70241e (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-07T16:41:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_coelho.pdf: 25504477 bytes, checksum: a82cdf50308ae9157f67686e4e70241e (MD5) Previous issue date: 2011 / Immune cells activation is modulated by balancing the signals triggered by a variety of cell surface receptors, including receptor activators, co-stimulating receptors and inhibitory receptors. Receptor-related signaling molecule in lymphocyte activation (SLAM) influences the immune cell activation. In this study we investigated the role of SLAM in immune response of cutaneous leishmaniasis caused by L. braziliensis, as well as if the response of individuals high (HP) or low (LP) IFN-γ producers is modulated by SLAM signaling pathway. Peripheral blood monocuclear cells (PBMC) isolated from 43 health individuals were cultured in vitro with anti-SLAM, rIFN-γ, rIL-12 and phytohemagglutinin in the presence or in the absence of L. braziliensis. It was found that L. braziliensis promoted a significantly reduced SLAM expression in T cells, after 120 h of cultured, possibly indicating activation of this pathway in the initial immune response. SLAM expression behaved differently in HP and LP groups. In LP group, L. braziliensis did not modify SLAM expression in T cells in early immune response. The effect of anti-SLAM on SLAM pathway reduced the expression of this protein in the early stages of the immune response of PBMC stimulated with L. braziliensis. After 120 h the effect of anti-SLAM did not alter CD3+SLAM+ expression in both groups. The proinflammatory cytokines, rIFN-γ and rIL-12, present in the microenvironment with L. braziliensis, reduced SLAM expression only in HP group after 6 h of culture and did not change this response after 120 h. Anti-SLAM at a concentration of 10 μg/ml presented no effect on production of cytokines IFN-γ and IL-13 in both groups, but significantly increased IL-10 production in the HP group. Furthermore anti-SLAM associated with L. braziliensis and rIFN-γ simultaneously did not modify IFN-γ, IL-13 and IL-10 productions. Anti-SLAM associated with L. braziliensis and rIL-12 simultaneously induced an increase of IFN-γ in LP group, and increased IL-13 in HP group. These results suggest that in vitro immune response of PBMC exposed to L. braziliensis, the SLAM signaling pathway acts in modulating Th1 response in HP group and induces a condition of temporary immunosuppression in LP group, not previously described in literature. / A ativação das células do sistema imunológico é modulada através dos sinais acionados por uma diversidade de receptores de superfície celular, incluindo os receptores ativadores, receptores coestimuladores e receptores inibidores. Receptores relacionados à molécula sinalizadora na ativação do linfócito (SLAM) têm influência na ativação imunológica celular. Neste trabalho, investigou-se a função de SLAM na resposta imunológica à Leishmania braziliensis, e se a resposta de indivíduos alto (AP) ou baixo (BP) produtores de IFN-γ seria modulada pela via de sinalização SLAM. Células monocucleadas do sangue periférico (CMSP) de 43 indivíduos foram bloqueadas com α-SLAM, rIFN-γ, rIL-12 e fitohemaglutinina, após estimulação com L. brazilensis. Verificou-se que L. braziliensis promoveu uma significante redução da expressão de SLAM nas células T, com 120h de cultivo, possivelmente indicando ativação desta via na resposta imunológica inicial. A expressão de SLAM se comportou de modo diferenciado nos indivíduos AP e BP. Nos indivíduos BP, L. braziliensis não alterou a expressão de SLAM nas células T, na fase inicial da resposta imunológica. O bloqueio da via de SLAM com α-SLAM reduziu significativamente a expressão desta proteína nos primeiros momentos da resposta imunológica das CMSP estimuladas com L. braziliensis. O bloqueio com α-SLAM, avaliado com 120 horas, não alterou a expressão de CD3+SLAM+, em ambos os grupos. As citocinas proinflamatórias, rIFN-γ e rIL-12, presentes no microambiente com L. braziliensis, reduziram a expressão de SLAM apenas em indivíduos AP com 6h de sensibilização e não modificaram esta resposta com 120h de cultivo, na presença do antígeno. O bloqueio com α-SLAM, na concentração de 10μg/ml, não interferiu na produção das citocinas IFN-γ e IL-13, em ambos os grupos, entretanto aumentou de forma significativa a produção de IL-10 em indivíduos AP. O bloqueio da via de SLAM associado à L. braziliensis e rIFN-γ não modificou a produção de IFN-γ, IL-13 e IL-10. O bloqueio da via de SLAM associado à L. braziliensis e rIL-12 induziu aumento de IFN-γ, nos indivíduos BP, e aumento de IL-13, nos indivíduos AP. Os resultados deste trabalho sugerem que, na resposta in vitro de CMSP, sensibilizadas com L. braziliensis, a via de sinalização SLAM atua na modulação da resposta Th1 em indivíduos AP e induz uma condição de imunossupressão temporária nos indivíduos BP, não descrita anteriormente na literatura.

DUTRA, Brunheld Maia. Efeito imunomodulador de CXCL10 em camundongos BALB/C infectados com cepa de Leishmania braziliensis refratária ao tratamento com antimônio. 2015. 78 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-12-01T11:34:02Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_bmdutra.pdf: 917921 bytes, checksum: 088bf681abe483ebcbf34475f6929795 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-12-01T11:36:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_bmdutra.pdf: 917921 bytes, checksum: 088bf681abe483ebcbf34475f6929795 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-01T11:36:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_bmdutra.pdf: 917921 bytes, checksum: 088bf681abe483ebcbf34475f6929795 (MD5) / Leishmania braziliensis from antimony-resistant patient is able to induce high levels of IL-4 and Arginase in mice, contributing to the increased virulence of the strain and the severity of the disease. CXCL10 is a chemokine that recruits and activates Th1 cells, NK, macrophages, dendritic cells and lymphocytes B. The objective of this study was to evaluate in vivo the effect of CXCL10 in the infection by strain of L. braziliensis refractory to treatment with antimony. BALB/c mice (n=64) were infected intradermally in the right ear 107 promastigotes (20 µl), and after appearance of lesions (5ª week), the animals were divided into four groups (16/group): 1. Control untreated; 2.Glucantime (100mg/kg/day, I.M.); 3.CXCL10 (100 ng/10μL, I.M.); 4.Glucantime+CXCL10 (100ng/10µL+100mg/kg/day, I.M.). The animals were treated for 7 days, followed by weekly measurements of lesions, and were euthanized in the first and fourth week post-treatment (w.p.t) for the evaluation of some parameters: parasite burden (lesions, and draining lymph node-LN), production of the cytokines IFN-γ, IL-4, IL-10 and TGF-β (LN) and histological changes (lesions). The results showed CXCL10 and Glucantime induced, early as the first s.p.t., non-ulcerated lesions that regressed significantly (0.35 ± 0.07, 0.047 ± 0.27, p <0.05) compared to controls (0.63 ± 0.12) and Glucantime (0.56 ± 0.12). This was associated with a significant decrease in parasite load observed in CXCL10 and CXCL10 + Glucantime groups, in the lymph node (1.17x103 ± 0.85x103, 2.05x103 ± 1.50x103, respectively) compared to control (3.2x104 ± 1.97x104) and Glucantime (1.18x105 ± 1.12x105). Regarding to cytokines, CXCL10 treated animals showed high levels of IFN-γ, IL-10 and TGF-β, and low IL-4 production. In contrast, was observed in the control and Glucantime groups increased production of IL-4. These data also corroborate the histopathological findings showing that animals treated with CXCL10, with or without Glucantime, showed a non-exacerbated inflammation, with absence of necrosis, lower parasitism, granulomas and cellular infiltrate with more activated macrophages, many lymphocytes and few plasma cells, compared to control and Glucantime. In conclusion, CXCL10 and the association CXCL10+Glucantime induced minor injuries, lesions non-ulcerated, with decreased earlier parasite load, leading to the resolution of the disease through an immune response with high IFN-γ and low IL-4 production, and with the control of inflammation mediated by IL-10 and TGF-β. / Leishmania braziliensis proveniente de paciente resistente ao antimônio é capaz de induzir altos níveis de IL-4 e de Arginase em camundongos, contribuindo para a maior virulência da cepa e gravidade da doença. CXCL10 é uma quimiocina que recruta e ativa células Th1, NK, macrófagos, células dendríticas e linfócitos B. O objetivo deste trabalho foi avaliar in vivo o efeito de CXCL10 na infecção por cepa de L. braziliensis refratária ao tratamento com antimônio. Camundongos BALB/c (n=64) foram infectados por via intradérmica na orelha direita, 107 promastigotas (20µL) e após o aparecimento das lesões (5a sem), os animais foram divididos em quatro grupos (16 animais/grupo): 1. Controle não tratado; 2. Glucantime (100mg/kg/dia, I.M); 3. CXCL10 (100ng/10µL, I.M.); 4. Glucantime+CXCL10 (100ng/10µL + 100mg/kg/dia, I.M.). Os animais foram tratados por 7 dias, acompanhados com medidas semanais das lesões e eutanasiados na 1ª e 3ª semanas pós-tratamento (s.p.t.) para a avaliação de alguns parâmetros: carga parasitária (lesões e linfonodo de drenagem-LN), produção das citocinas IFN-γ, IL-4, IL-10 e TGF-β (linfonodo) e alterações histológicas (lesões). Os resultados mostraram que CXCL10 e CXCL10+Glucantime induziram, já a partir da 1a s.p.t, lesões não ulceradas e que regrediram significativamente (0,35±0,07; 0,047±0,27; p<0,05), quando comparado ao Controle (0,63±0,12) e ao Glucantime (0,56±0,12). Isso foi relacionado com a importante diminuição da carga parasitária observada nos grupos CXCL10 e CXCL10+Glucantime, no LN (1,17x103 ± 0,85 x 103; 2,05x103 ± 1,50x103, respectivamente) quando comparado ao Controle (3,2x104 ± 1,97x104) e ao Glucantime (1,18x105 ± 1,12x105). Em relação às citocinas, o tratamento com CXCL10 mostrou altas concentrações de IFN-γ, IL-10 e TGF-β, e baixa produção de IL-4. Em contrapartida, nos grupos Controle e Glucantime, foi observada maior produção de IL-4. Esses dados corroboram também com os achados histopatológicos que mostraram que os animais tratados com CXCL10, associado ou não ao Glucantime, apresentaram uma inflamação não exacerbada, com ausência de necrose, menor parasitismo, presença de granulomas e infiltrado celular com mais macrófagos ativados, muitos linfócitos e poucos plasmócitos, em relação ao Controle e ao Glucantime. Em suma, CXCL10 e a associação CXCL10+Glucantime induziram lesões menores, não ulceradas, com diminuição da carga parasitária mais precocemente, conduzindo à resolução da doença através de uma resposta imunológica com alta produção de IFN-γ e baixa produção de IL-4, e controle da inflamação modulado por IL-10 e TGF-

Made available in DSpace on 2014-12-05T18:36:50Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) luciana_miranda_ipec_mest_2011.pdf: 2273487 bytes, checksum: 2458e3ceb6d02fad0808bbad9e7f3bd5 (MD5) Previous issue date: 2014-10-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas, Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os antimoniais pentavalentes representam a principal opção para tratamento das leishmanioses, sendo utilizado no Brasil, o antimoniato de meglumina (Glucantime\F0D2). A variabilidade da resposta ao tratamento pode estar condicionada a fatores relacionados ao hospedeiro, aos parasitas ou mesmo aos esquemas terapêuticos empregados. Neste estudo, avaliamos amostras de Leishmania (Viannia) braziliensis em ensaios in vitro quanto à sensibilidade ao antimoniato de meglumina. Foram comparadas as DL50 observadas, tanto para formas promastigotas quanto para formas amastigotas, de amostras isoladas no momento do diagnóstico antes do tratamento (amostra A) e de amostras isoladas após o primeiro ciclo de tratamento (amostra B). Sete pares de amostras (A e B) foram selecionados, sendo quatro isolados de pacientes com falha terapêutica e três de pacientes com reativação. As formas promastigotas foram expostas a concentrações de antimoniato de meglumina entre 3,955 \03BCg e 8,1 mg/mL e avaliadas após 24 e 48 horas de exposição. As formas amastigotas, em macrófagos murinos, foram expostas a concentrações de 20, 40 e 80 \03BCg/mL de antimoniato de meglumina, cuja cinética de infecção foi avaliada em intervalos de 0, 24, 48 e 72 horas, baseada em dois parâmetros: percentual de células infectadas e número médio de amastigotas por macrófago Todas as amostras B de formas promastigotas apresentaram valores da DL50 superiores aos obtidos com as amostras A, exceto para as amostras de um paciente. Nos ensaios com formas amastigotas, as amostras B apresentaram valores da DL50 mais elevados que a amostra A em 4 casos, com aumentos que variaram de 17 a 20% em 3 pacientes e de 100% em um caso. Nos demais pacientes, os valores da DL50 de A e B foram semelhantes. Dos sete pacientes estudados, um abandonou o tratamento e seis apresentaram cura, após retratamento, pelo uso da Anfotericina B (4 casos) ou antimoniato de meglumina (2 casos). Não foi possível correlacionar os resultados obtidos neste estudo com a clínica ou a resposta ao tratamento. É possível que outros fatores relacionados aos pacientes, tais como a condição imunológica e a resposta frente à infecção possam influenciar na resposta à terapêutica antimonial / Pentavalent antimonials are the first drug of choice for leishmaniasis treatment and in Brazil meglumine antimoniate (Gl u cantime  ) is used. The variability of the re sponse to treatment may be conditioned to factors related to the host, the parasites or even the therapeutic plan. In this study we assessed the susceptibility to meglumine antimoniate of samples of Leishmania (Viannia) braziliensis in in vitro tests. We compared the DL 50 of both promastigote and amastigote forms of samples isolated at diagnosis before treatment (sample A ) and samples isolated after the first cycle of treatment (sample B ). Seven pairs of samples ( A and B ) were selected, four isolated from patients with treatment failure and three from patients with reactivation. The promastigote forms were exposed to meglumine antimoniate concentrations between 3,955 μg and 8,1 mg/mL and were assessed after 24 and 48 hours of exposition. The amastigotes, in murine macrophages, were exposed to concentrations of 20, 40 and 80 μg/mL of meglumine antimoniate, and the infection kinetics was assessed at time intervals of 0, 24, 48 and 72 hours, through two parameters: percentage of infected cells and average numbe r of amastigotes per macrophage. All B samples of promastigotes presented DL 50 values higher than those obtained with A samples, except for one patient. In tests with amastigotes, the B samples showed higher DL 50 values than sample A in 4 cases, with incr eases ranging from 17 to 20% in 3 patients and 100% increase in one case. In other patients, DL 50 values of A and B were similar. One of the seven patients studied abandoned treatment and six were clinically healed after retreatment with Anphotericin B (4 cases) or meglumine antimoniate (2 cases). It was not possible to correlate the results of this study with the clinics or response to treatment. It is possible that other patient related factors such as immunological condition or response to infection may influence the response to antimonial treatment

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T16:07:48Z No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_FabianadaSilvaVieiraMatrangolo.pdf: 1842322 bytes, checksum: 73bd382ffd0cc26f8f984240d3143696 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T16:07:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_FabianadaSilvaVieiraMatrangolo.pdf: 1842322 bytes, checksum: 73bd382ffd0cc26f8f984240d3143696 (MD5) / Approved for entry into archive by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-16T16:08:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_FabianadaSilvaVieiraMatrangolo.pdf: 1842322 bytes, checksum: 73bd382ffd0cc26f8f984240d3143696 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-16T16:08:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_BCM_FabianadaSilvaVieiraMatrangolo.pdf: 1842322 bytes, checksum: 73bd382ffd0cc26f8f984240d3143696 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A emergência de espécies de Leishmania resistentes ao antimonial é um grave problema em vários países. A quimioterapia é a medida mais importante para o controle das leishmanioses, visto que não existe ainda uma vacina eficiente para uso em humanos. Além disso, o controle vetorial é difícil em razão das características ambientais muito diversas e da existência de um grande número de reservatórios domésticos e silvestres dificulta também o controle. Os antimoniais pentavalentes, SbV, são os medicamentos de primeira escolha no tratamento de todas as formas de leishmaniose em vários países. Apesar de serem amplamente utilizados na quimioterapia das leishmanioses por mais de setenta anos, apresentam alta toxicidade no tratamento clínico. Também, alguns pacientes são resistentes ao tratamento clínico com esses compostos. Neste trabalho, realizou-se uma análise proteômica comparativa entre linhagens de L. braziliensis e L. infantum sensíveis e resistentes ao SbIII mediante a utilização da metodologia 2-DE, seguida por espectrometria de massas (LC/MS/MS). Nesta tese utiliza-se a nomenclatura L. infantum (syn. L. chagasi). A análise comparativa dos perfis proteômicos entre as linhagens de Leishmania analisadas revelou que 192 spots foram únicos e/ou mais abundantes. Dos 132 spots proteicos submetidos à análise por MS, 80 foram identificados correspondendo a 57 proteínas distintas. A análise comparativa dos dados mostrou que a maioria das proteínas com abundância diferencial em ambas as espécies está envolvida na defesa antioxidante, na resposta geral ao estresse, no metabolismo de glicose e de aminoácidos e na organização do citoesqueleto. Cinco proteínas foram mais abundantes em ambas as linhagens de Leishmania resistentes ao SbIII: triparedoxina peroxidase, alfa-tubulina, HSP83, HSP70 e HSP60. Os ensaios de Western blotting 1-DE e 2-DE confirmaram os dados da análise proteômica. Estes ensaios revelaram que a ciclofilina-A é menos expressa em ambas as linhagens resistentes, LbSbR e LcSbR. De outro lado, a pteridina redutase é mais expressa na linhagem resistente LbSbR e apresenta nível de expressão similar entre as linhagens sensíveis e resistentes de L. infantum. A triparedoxina peroxidase é mais abundante em ambas as linhagens resistentes, LbSbR e LcSbR. Estes resultados sugerem que o aumento da expressão de enzimas da defesa antioxidante pode desempenhar papel significativo na resistência dos parasitos aos antimoniais. Em conjunto, os dados mostram que o mecanismo de resistência de Leishmania spp. ao antimônio é complexo e multifatorial. É importante ressaltar que entre as 57 proteínas identificadas como diferencialmente adundantes entre as linhagens de Leishmania spp. sensíveis e resistentes ao antimonial 17 foram identificadas anteriormente por outros autores e que as outras 40 foram observadas apenas em nossa análise proteômica de linhagens de Leishmania spp. Resistentes ao SbIII. Acreditamos que algumas dessas proteínas estejam associadas com a resposta geral ao estresse e que outras podem estar associadas ao mecanismo de resistência ao antimônio em Leishmania spp. Neste contexto, a futura análise funcional será muito importante para determinar a possível associação destas proteínas com o fenótipo de resistência de Leishmania aos antimoniais. / The emergence of drug-resistant Leishmania species is a significant problem in several countries. Chemotherapy is the most important alternative for controlling leishmaniases, since there is no effective vaccine for using in humans. Furthermore, the vector control is difficult due to different environmental characteristics and the existence of a large number of domestic and wild reservoirs. Pentavalent antimonials, Sb V, are the first-choice drugs in the treatment of all forms of leishmaniases in several Countries. Although they are widely used in the chemotherapy of leishmaniases for more than 60 years, they have high toxicity and some patients are resistant to clinical treatment with these compounds. In this study, we carried out a comparative proteomic analysis of antimony-susceptible and antimony-resistant Leishmania braziliensis (LbSbR) and Leishmania infantum (syn. L. chagasi) (LcSbR) lines using twodimensional gel electrophoresis (2-DE) followed by mass spectrometry (LC/MS/MS) for protein identification. Comparative analysis of proteomic profiles between the Leishmania lines analyzed showed that 192 spots were unique and/or most abundant. Out of 132 protein spots submitted to MS, we identified 80 that corresponded to 57 distinct proteins. Comparative analysis showed that most of the protein spots with differential abundance in both species are involved in antioxidant defense, general stress response, glucose and amino acid metabolism, and cytoskeleton organization. Five proteins were more abundant in both SbIII-resistant Leishmania lines: tryparedoxin peroxidase, alpha-tubulin, HSP83, HSP70, and HSP60. Analysis of protein abundance by Western blotting assays 1-DE e 2-DE confirmed our proteomic data. These assays revealed that cyclophilin-A is less expressed in both LbSbR and LcSbR lines. On the other hand, the expression of pteridine reductase is higher in the LbSbR line, and it has similar expression level between SbIII-susceptible and -resistant L. infantum lines. The tryparedoxin peroxidase is overexpressed in both LbSbR and LcSbR lines. These results suggest that an increased in expression of anti-oxidant defense enzymes may play a significant role in the antimonial resistance in these parasites. Together, these results showed that the mechanism of antimony-resistance in Leishmania spp. is complex and multifactorial. Interestingly, among the 17out of 57 proteins identified as differentially abundant between SbIII-susceptible and -resistant lines, were also previously identified by others authors and the other 40 proteins were observed only in our proteomic analysis of SbIII-resistant Leishmania spp. lines. We believe that some of them are associated with the general stress response and others may be associated with the mechanism of resistance of Leishmania spp. to antimony. In this context, functional analysis will be very important to determine a possible association of these proteins with the antimony-resistance phenotype in Leishmania.

Made available in DSpace on 2015-05-27T13:34:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 695.pdf: 4459312 bytes, checksum: 5c20207fa2c78a768fa3f491b2525c00 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / A história natural da leishmaniose tegumentar americana apresenta poucos estudos relacionados ao conhecimento dos reservatórios associados à Leishmania (Viannia) braziliensis. Com o objetivo de caracterizar a infecciosidade experimental de Necromys lasiurius, Nectomys squamipes e Rattus rattus, para incriminação de hospedeiros reservatórios de L. (V.) braziliensis, foram realizados dois experimentos, utilizando Lutzomyia longipalpis e dez animais de cada espécie, ambos colonizados em laboratório. Como grupo controle foi utilizado dois hamsters (Mesocricetus auratus) para cada grupo de dez animais. No primeiro experimento, os animais foram inoculados com 5,5x106/ml de promatigotas de fase log de L. (V.) braziliensis e o segundo com um inóculo de 2,8x105/ml, para posterior realização de xenodiagnóstico. Amostras obtidas de sangue, pele, fígado e baço dos animais e exemplares de flebotomíneos foram processadas para a visualização do parasito, através do exame direto e detecção de DNA por meio de PCR específica para o subgênero Viannia. No primeiro experimento, 570 exemplares de fêmeas foram submetidos ao xenodiagnóstico e dentre estes, 338 foram dissecados e observados formas compatíveis com promastigotas em 7,7 por cento. Dos 26 animais, 06 apresentaram resultados positivos de infectividade no teste de PCR e 08 exemplares de flebotomíneos foram positivos. No segundo experimento, 678 fêmeas foram submetidas ao xenodiagnóstico e 467 dissecadas. No exame direto, 37,3 por cento foram positivas. Foi verificada a positividade no teste de PCR em 15, dos 29 animais submetidos ao xenodiagnóstico. 27 exemplares de flebotomíneos foram positivos na PCR específica. Estes resultados sugerem que os roedores silvestre N. lasiurus, N. squamipes e o sinantrópico R. rattus são infectivos e prováveis hospedeiros reservatórios de L. (V.) braziliensis