Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Os recifes de corais são ecossistemas diversos com alta densidade de biodiversidade, o que leva a intensa competição entre as espécies. Estas espécies podem produzir substâncias desconhecidas, muitas com valor farmacológico. Chromonephthea braziliensis é um coral mole invasor, originário do Oceano Indo-Pacífico, que foi possivelmente transportado por plataformas de petróleo e cuja presença é uma ameaça para a biodiversidade da região de Arraial do Cabo (RJ). Esta espécie produz metabólitos secundários que são responsáveis pela indução de danos para o ecossistema local. A finalidade deste estudo é a busca de novas substâncias para quimioterapia geral com base na estrutura de compostos bioativos. Extratos desse coral foram preparados a partir de colônias liofilizadas (solventes: hexano, diclorometano, acetato de etila e metanol). Realizaram-se análises químicas para a caracterização dos extratos e avaliaram-se as atividades: mutagênicas e citotóxicas, usando o ensaio de mutação reversa bacteriana (Salmonella/microssoma) com as linhagens TA97, TA98, TA100 e TA102; genotóxicas, utilizando análise da quebra do DNA e formação de micronúcleos na linhagem RAW 264,7 de macrófagos e; tóxicas para náuplios de microcrustáceos Artemia salina. Observou-se citotoxicidade, na presença de S9 mix, dos extratos diclorometano para a linhagem TA102 na concentração de 20 g/100 L/placa e metanol para a TA97 com 5 e 20 g/100 L/placa. Os extratos diclorometano, acetato de etila e metanol apresentaram genotoxicidade no DNA plasmidial em concentrações elevadas (250 g/mL), mas nenhum dano ao DNA foi observado no ensaio de micronúcleo. Todos os extratos foram tóxicos para os náuplios de microcrustáceos em pelo menos uma das concentrações usadas (0,01 1000 g/mL), e a LC50 pode ser determinada apenas para os extratos hexano, diclorometano e acetato de etila. / Coral reefs are diverse ecosystems that have a high density of biodiversity leading to intense competition among species. These species may produce unknown substances, many with pharmacological value. Chromonephthea braziliensis is an invasive soft coral from the Indo-Pacific Ocean that has been possibly transported by oil platforms and whose presence can be a threat to Arraial do Cabo regions biodiversity. This species produces secondary metabolites that are responsible for inducing damage to the local ecosystem. The purpose of this study is the search of new drugs for generally chemotherapy based on the structure of bioactive compounds. Coral extracts were prepared from dried colonies (solvents: hexane, dichloromethane, ethyl acetate, and methanol). Chemical analyses were performed to characterize the extracts and evaluated their cytotoxic and mutagenic activities, using the bacterial reverse mutation assay (Salmonella/microsome) with TA97 strains, TA98, TA100 and TA102; genotoxic activity, using DNA breakage analysis and micronucleus formation and; toxic effects for nauplii microcrustaceans. Cytotoxicity was observed in the presence of S9 mix for dichloromethane extract for strain TA102 at the 20 g/plate concentration and methanol extract for TA97 at 5 and 20 g/plate. The dichloromethane, ethyl acetate and methanol extracts present genotoxicity for plasmidial DNA at high concentrations (250 g/mL), but no DNA damage was observed in micronucleus assay. All extracts were toxic for nauplii microcrustaceans at least one of tested concentrations (0.01 1000 g/mL), but LC50 was calculated only for the hexane, dichloromethane and ethyl acetate extracts.

Leishmania braziliensis é o agente responsável pela maior parte dos casos de leishmaniose tegumentar e mucocutânea no Brasil. Entre as espécies incriminadas como vetoras, na região Sudeste encontram-se Nyssomyia intermedia e Nyssomyia neivai. A comprovação destas espécies como responsáveis pela transmissão de Leishmania sp. depende de vários fatores, entre estes, a competência vetorial, definida como a capacidade da espécie se infectar e repassar a infecção para um hospedeiro vertebrado. Objetivo: O presente estudo teve como objetivo avaliar experimentalmente a competência vetorial de Ny. intermedia e Ny. neivai para transmitir L. braziliensis. Métodos: Fêmeas de primeira geração de ambas as espécies foram alimentadas em hamster infectado com L. braziliensis e após a oviposição, desafiados a um segundo repasto sanguíneo em hamsters susceptíveis (limpos). Adicionalmente, foram obtidos dados do desenvolvimento imaturo das duas espécies. Resultados: em relação ao ciclo imaturo, observou-se que a maior mortalidade ocorreu no primeiro instar larval para ambas as espécies, 27,6% para Ny. intermedia e 53,9% para Ny. neivai. O quarto instar larval teve a maior duração, com mediana de 8 a 12 dias. Quanto à susceptibilidade à infecção das fêmeas colonizadas de ambas as espécies 0,89% das fêmeas de Ny. intermedia e 8,33 % das fêmeas de Ny. neivai apresentaram infecção por L. braziliensis. Nenhuma fêmea de Ny. intermedia realizou um segundo repasto sanguíneo, enquanto que 3 fêmeas de Ny. neivai realizaram. Destas, duas estavam infectadas e o hamster potencialmente infectado ficou em observação por dois meses. Amostras de tecido do hamster exposto demostraram, por meio de PCR, a presença de L. braziliensis. Conclusão: Nyssomyia intermedia apresentou desenvolvimento de formas flageladas porém não repassou a infecção a um hospedeiro suscetível. Nyssomyia neivai, além de se infectar com a L. braziliensis, também repassou a infecção a um hospedeiro suscetível, demostrando assim sua competência vetora. / Leishmania braziliensis is the agent related to cases of cutaneous and mucocutaneous leishmaniasis in Brazil. Among the sandflies involved in the Leishmania sp transmission in the Southeast Region, Ny. intermedia and Ny. neivai are suspected vectors. However, the incrimination of these species as vectors in the transmission of Leishmania sp. depends of several factors, including vector competence, defined as the ability of the species to develop the agent and transmit it to a vertebrate host. Objective: The present study aimed to demonstrate the vector competence to Ny. intermedia and Ny. neivai for L. braziliensis. Methods: To develop the experiments,specimens of both species were reared under laboratory conditions and the adults obtained were used to evaluate the vector competence. Thefemales were fed in infected hamsters and after oviposition, challenged to take a bloodmeal in suscetible hamsters (without infection). All females fed on infected hamster were dissected. The hamster bitted in the exposition were follow up for two months, after that, were euthanatized to evaluate the infection by PCR. Result: The highest immature mortality occurred in the first instar larval for both species, 27.6% for Ny. intermedia and 53.9% for Ny. neivai. The fourth larval instar had the longest duration, with a median varying between 8 to 12 days. About the females of Ny intermedia, only 0.89% of them develop the flagellates. For Ny. neivai, among 36 females feed on infected hamster, 2 were infected. None female of Ny intermedia take a second blood meal and 3 of Ny. neivai have had. The hamsters bitted by the infected females were follow up for 60 days. After that the hamster were euthanatized and the infection was observed. Conclusion: The vector competence of Ny. neivai to transmit Leishmania braziiensis was demonstrated. The susceptibility of Ny. intermedia to develop this leishmania was corroborated.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-14T12:57:03Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jéssica Cristina dos Santos - 2015.pdf: 1711392 bytes, checksum: d1eea60511eac5a148136f47fc2cfe24 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-14T12:59:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jéssica Cristina dos Santos - 2015.pdf: 1711392 bytes, checksum: d1eea60511eac5a148136f47fc2cfe24 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-14T12:59:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Jéssica Cristina dos Santos - 2015.pdf: 1711392 bytes, checksum: d1eea60511eac5a148136f47fc2cfe24 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Promastigote forms of Leishmania (V.) braziliensis can be mantained in vitro for use in research. The bovine fetal serum (BFS) is an important component in several culture medium, however, its composition varies from batch to batch. This work aims to evaluate the performance of different BFS batches for preparation of Leishmania (V.) braziliensis culture media, comparing information supplied by different known techniques. PPS6m and CSA7c leishmanias strains were from samples obtained from American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) patients and five different batches of BFS were tested in Grace’s medium. The parasite growth curve was evaluated by a daily hemocitometer counting, the metabolism was evaluated by the parasite’s ability to metabolize 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT), the percentage of promastigote metacyclic forms was quantified by an agglutination test using Bauhinia purpuera (BPL) lectin and the ability to promote mice lesions evaluated by a weekly measurement of lesions. The biochemical components of the BFS batches was also performed. It was observed that two or more passages in culture were necessary to identify bad batches of BFS by the growth curve analysis, while the metabolic analysis showed that an inadequate BFS batch of provided a metabolic rate higher or equal to the best BFS batch. A lower percentage of metaciclic forms of PPS6m strain was observed in one of the media, however, the percentage of metacyclic promastigotes was similar among all the CSA7c culture media, independently of the parasite number. Besides, the stationary phase parasite’s ability to cause lesions in BALB/c mice did not depend on the SBF batch present in the cultures. Data reveals that the best method to select good culture serum is to observe the growth curve for two or more passages, besides this, bad SBF batches are able to produce parasites with the same ability to infect mice. / Formas promastigotas de Leishmania (V.) braziliensis podem ser mantidas in vitro para utilização em diversos estudos. O soro bovino fetal (SBF) é um componente importante em vários meios de cultura, no entanto, a sua constituição varia em diferentes lotes. Este trabalho teve como objetivo avaliar o desempenho de diferentes lotes de SBF no preparo de meio para cultura de Leishmania (V.) braziliensis, comparando as informações fornecidas por diferentes técnicas conhecidas. Foram utilizadas as cepas PPS6m e CSA7c de leishmânias obtidas de pacientes com leishmaniose tegumentar americana e foram testados cinco diferentes lotes de SBF em meio de Grace. A curva de crescimento dos parasitos no meio foi avaliada por contagem diária em hematocitômetro, o metabolismo avaliado pela capacidade do parasito em metabolizar o 3-(4,5-dimetilazol-2i)-2,5-difenil brometo de tetrazólio (MTT), a porcentagem de formas promastigotas metacíclicas quantificada pelo ensaio de aglutinação com lectina de Bauhinia purpurea (BPL) e a capacidade de produzir lesão em camundongos avaliada pelo acompanhamento semanal das lesões. Foi também realizada a dosagem dos constituintes bioquímicos dos diferentes lotes de SBF. Observou-se que são necessárias duas ou mais passagens dos parasitos em cultura para que sejam discriminados lotes de SBF ruins pelo acompanhamento da curva de crescimento enquanto a análise do metabolismo mostrou que um lote de SBF inadequado para cultura proporcionou um metabolismo maior ou igual que o melhor lote de SBF. Observou-se uma menor porcentagem de formas promastigotas metacíclicas geradas durante o cultivo da cepa PPS6m em um dos meios, porém, a porcentagem de metacíclicas foi semelhante para todos os meios de cultura de CSA7c, independente do número de parasitos obtido ao final da cultura. Além disto, a capacidade de parasitos em fase estacionária de cultura causarem lesões em camundongos BALB/c não dependeu do lote de soro presentes nas culturas. Os dados revelam que o melhor método para selecionar um bom soro para cultura é o acompanhamento da curva de crescimento por dois ou mais repiques, além disto, lotes ruins para a manutenção de leishmânia são capazes de gerar parasitos com a mesma capacidade de infectar camundongos.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-18T14:57:11Z No. of bitstreams: 2 Tese - Clayson Moura Gomes - 2015.pdf: 2080474 bytes, checksum: e53c02c9eac98545d091fb13331c2b9a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-18T14:58:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Clayson Moura Gomes - 2015.pdf: 2080474 bytes, checksum: e53c02c9eac98545d091fb13331c2b9a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T14:58:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Clayson Moura Gomes - 2015.pdf: 2080474 bytes, checksum: e53c02c9eac98545d091fb13331c2b9a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-08-05 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Leishmaniasis are zoonoses present in several countries, being Leishmania (Viannia) braziliensis the main parasite that causes localized cutaneous (LCL) and / or mucous leishmaniasis (LM) in Brazil. It is not clear yet which factors favor the development of the mucosal form of the disease. The aim of this study was to evaluate the profile of experimental leishmaniasis in wild type mice and mice lacking the IFN, inos or gp91phox genes, after infection with L. (V.) braziliensis amastigotes isolated from patients with LCL or LM. Mice were inoculated with different amount of amastigote parasites in the foot paw and lesion development was measured weekly. Histopathological analyses were performed in hematoxilin eosin stained slides. The number of parasites present in the infected foot paw, lymph node and spleen during infection was estimated by the limiting dilution assay. It was observed that IFNγ or Phox KO mice infected with amastigotes isolated from LCL patients develop lesion earlier than mice infected with amastigotes from LM patients. iNOS KO mice infected with 1000 amastigotes isolated from LM patients developed greater lesion and more severe inflammation than mice infected with parasites from LCL at the 5th week. The IFNγ, iNOS and gp91phox mice had similar parasite number in the infected foot paw after infection with LM or LCL parasites .The parasite burden in lymph node and spleen was higher after infection with parasites from LM than LCL patients. The low ability of human macrophages to produce sufficient amount of NO can favor survive of LM parasites. Additionally, the increased ability of LM parasite to disseminate will facilitate migration to mucosal tissue to promote the mucosal disease. / As leishmanioses são zoonoses presentes em vários países do mundo, sendo Leishmania (Viania) braziliensis o parasito que causa a leishmaniose cutânea e/ou a leishmaniose mucosa no Brasil. Ainda não são claros os fatores que favorecem o desenvolvimento da forma mucosa da doença, porém é possível que fatores presentes nos parasitos sejam responsáveis pelo aparecimento de lesões mucosas. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil imunopatológico da leishmaniose experimental em camundongos do tipo selvagem e também em deficientes nos genes de IFN, inos ou gp91phox após a infecção com amastigotas de L. (V.) braziliensis isoladas de pacientes com leishmaniose cutânea localizada (LCL) ou leishmaniose mucosa (LM). Foram inoculadas diferentes quantidades de parasitos na pata dos camundongos e a progressão da lesão foi mensurada semanalmente. A análise histopatológica da lesão foi feita em lâminas coradas com hematoxilina e eosina. O número de parasitos presentes na pata infectada, linfonodo e baço dos animais infectados foi estimado pelo método de diluição limitante. Observou-se que os camundongos desprovidos de IFN ou phox infectados com amastigotas isoladas de pacientes com LCL desenvolveram a lesão mais precocemente do que camundongos infectados com amastigotas isoladas de pacientes com LM. A infecção de camundongos desprovidos de iNOS com 1000 amastigotas de pacientes com LM desencadeou uma lesão maior e com uma inflamação mais severa que aquela causada por parasitos de pacientes com LCL a partir da 5a semana. Animais deficientes de IFN, iNOS e gp91phox possuíam um número similar de parasitos na pata infectada, independente dos parasitos serem oriundos de pacientes com LCL ou LM. Nos linfonodos e baço foi observado mais parasitos quando os animais eram infectados com amastigotas de pacientes com LM. A pequena habilidade dos macrófagos humanos de produzir uma quantidade suficiente de NO pode favorecer a sobrevida de parasitos oriundos de LM. Além disso, o aumento da habilidade de parasitos de LM em se disseminar facilitaria a migração para os tecidos mucosos e promoveriam a doença na mucosa.

As chaperonas moleculares da família Hsp70 desempenham funções cruciais nas células de todos os organismos vivos, de procariotos a eucariotos. Nestes, estão presentes em todos os compartimentos celulares e nas mitocôndrias é expressa uma isoforma própria (mtHsp70), que participa dos processos enovelamento e maturação de proteínas bem como de sua importação para a matriz mitocondrial. Diante da crescente demanda de pesquisa sobre doenças tropicais negligenciadas, foi tomado como objeto de estudo neste trabalho uma Hsp70 mitocondrial de Leishmania braziliensis (LbmtHsp70) com o intuito de caracterizá-la estrutural e funcionalmente em comparação à ortóloga humana com maior identidade: a mtHsp70 também chamada de mortalina, GRP75, HspA9 ou PBP74. A LbmtHsp70 foi purificada em sua forma enovelada, em sistema monodisperso apresentando dados hidrodinâmicos condizentes com a forma monomérica, foi testada sua estabilidade quanto à influência de nucleotídeos de adenosina (ATP e ADP) à sua estrutura e, por fim, foram feitos ensaios para avaliar sua atividade ATPásica e de energia de interação com nucleotídeos. De forma geral, a LbmtHsp70 é bastante similar à mortalina, como pode ser evidenciado pelos resultados obtidos com algumas particularidades. / The molecular chaperones from the Hsp70 family perform critical cell roles in all organisms, from prokaryotes to eukaryotes. In the last ones, they are found in all cell compartments and a particular isoform is expressed in the mitochondria, where it carries out folding and maturation processes as well as the import of proteins to the mitochondrial matrix. In face of the growing demand for research about neglected tropical diseases, in this study a Hsp70 from Leishmania braziliensis\'s mitochondria was taken as object of study for further structural and functional characterization in comparison to the human orthologous which presents the highest identity to LbmtHsp70: the mtHsp70 also known as mortalin, GRP75, HspA9 or PB74. LbmtHsp70 was obtained in folded state in monodisperse system with hydrodynamic data consistent to monomeric conformer, stability and adenosine nucleotides influence to its structure were analyzed, and were performed assays for ATPase activity and nucleotide interaction energy. In a general way LbmtHsp70 is very similar to mortalin as can be shown through the results, but with some peculiarities.

nÃo hà / A leishmaniose cutÃnea à um importante problema de saÃde no Brasil, existindo como doenÃa autÃctone em todos os estados brasileiros. No perÃodo de 1980 a 2005, foram registrados 613.644 casos no paÃs. No CearÃ, à uma doenÃa endÃmica em vÃrias regiÃes e em muitos municÃpios faz centenas de vÃtimas todos os anos. Em Ãpocas de epidemias, o nÃmero de registros tem chegado a mais de 4000 notificaÃÃes por ano. Nos Ãltimos 28 anos (1980-2008) foram diagnosticados 55.925 pessoas acometidas da doenÃa, o que reflete uma mÃdia de 2000 vÃtimas de leishmaniose cutÃnea por ano. Sabe-se que os primeiros registros da doenÃa no Cearà datam de 1925. Apesar de ter todo este impacto na saÃde pÃblica do estado, existem muitas lacunas no conhecimento desta infecÃÃo, quer seja do ponto de vista histÃrico; do ponto de vista clÃnico e relacionadas ao tratamento. Objetivo: Fazer um levantamento sobre os aspectos histÃricos e as descobertas mais relevantes relacionadas Ãs leishmanioses; investigar quando e como foi introduzida no estado do CearÃ, bem como seus descobridores; descrever de modo detalhado as manifestaÃÃes clÃnicas da leishmaniose cutÃnea no CearÃ; relatar a evoluÃÃo histÃrica do tratamento, bem como apresentar uma alternativa de tratamento para a leishmaniose cutÃnea. Metodologia: Foram consultadas fontes primÃrias e fontes secundÃrias. Fontes SecundÃrias 1. Livros textos clÃssicos sobre leishmaniose; livros de escritores cearenses sobre tema envolvendo saÃde do inÃcio do sÃculo passado; teses; artigos de revistas cientÃficas. 2. Acervo de bibliotecas em Fortaleza (CE), Salvador (BA), Rio de Janeiro (RJ), SÃo Paulo(SP), Estados Unidos (Universidade de VirgÃnia, Universidade de Miami) e Inglaterra (London School of Tropical Medicine & Hygiene e FundaÃÃo Wellcome). 3. Pesquisas no Pubmed, Lilacs e Medline; 4. Pesquisa de microfilmes de jornais e de RelatÃrios da Provincia do CearÃ, do perÃodo de 1850 a 1930, do Acervo da Biblioteca PÃblica Menezes Pimentel (Fortaleza-CE). 5. Pesquisa nas pÃginas da OMS e do yahoo e google, em especial para as biografias. Fontes PrimÃrias: 1. Entrevistas com pesquisadores que viveram a histÃria da leishmaniose, com familiares de pesquisadores que fizeram a histÃria; 2. Dados e fotografias de lesÃes de pacientes de acervo pessoal. Resultados: Os primeiros registros da doenÃa (em livros) no Cearà sÃo de 1909 e registros oficiais (documentos de governo) somente existem a partir de 1917. O surgimento da leishmaniose cutanea ocorreu apÃs a grande seca e a epidemia de varÃola (1877-1879), que forÃaram a migraÃÃo de milhares de cearenses para a regiÃo AmazÃnica, para trabalhar na exploraÃÃo da borracha. Ao retornarem para o Cearà trouxeram a infecÃÃo, que aqui encontrou condiÃÃes propÃcias para se transmitir. Os primeiros registros da leishmaniose na AmazÃnia datam de 1820. Do ponto de vista clÃnico observamos que a infecÃÃo pela Leishmania braziliensis causa febre, adinamia e linfadenopatia satÃlite e alguns pacientes apresentam hepatoesplenomegalia. O aspirado dos linfonodos mostrou, na maioria dos casos, a presenÃa de leishmania e a cultura do creme leucocitÃrio em um paciente isolou o parasita. Do ponto de vista terapÃutico, de 21 pacientes tratados com fluconazol na dose de 7mg/kg/dia, durante uma mÃdia de 7 semanas, 18 tiveram as Ãlceras totalmente cicatrizadas e dois pacientes dos trÃs que inicialmente nÃo responderam, obtendo a cura com associaÃÃes de medicamentos que incluÃram o fluconazol como uma das drogas administradas. ConclusÃo: A leishmaniose cutÃnea do Cearà à uma doenÃa importada da AmazÃnia, onde a enfermidade jà existia desde o inÃcio do sÃculo XIX e que deve ter chegado no Cearà antes do inicio do sÃculo XX; a infecÃÃo pela Leishmania braziliensis causa uma doenÃa sistÃmica devido ao parasitismo e à provavelmente nesta fase que a leishmania se localiza nas mucosas onde poderà causar doenÃa mais tarde; o fluconazol à uma alternativa para o tratmento da leishmaniose cutÃnea. / Cutaneous leishmaniasis is an important health problem in Brazil.The disease has spread to all regions and autochtonous cases have been reported from all states. The total number of cases reported in the country from 1980 to 2005, was 613, 644. In CearÃ, cutaneous leishmaniasis is an endemic disease in all regions of the state and in many municipalities hundreds of cases are reported every year. In times of epidemics the number of cases has reached more than 4000 per year. In the 28 years from 1980 to 2008, 55.925 new cases were reported in the state. The first well documented cases of cutaneous leishmaniasis in Cearà date back to 1925. Even though it causes a great impact in public health, many informations related to the knowledge of the disease are lacking in its historical, clinical and therapeutics aspect. Objective:1.To study all relevant historical aspects related to the leishmaniasis;2. To investigate when and how it emerged in CearÃ, as well as who studied it; 3. To describe in a detailed form the clinical manifestations of cutaneous leishmaniasis; 4. To describe the historical evolution of therapy as well as to propose a therapeutic alternative for the disease. Methods:We consulted primary and secondary sources. Secondary sources. 1. Old books (classics) on leishmaniais; Books and articles from the beginning of the XX century by writers from Cearà as well as thesis and articles from scientific journals. 2. Archives of Libraries in Fortaleza(Ce), Salvador(BA), Rio de Janeiro(RJ), SÃo Paulo (SP), EUA( Universidade de Virginia, Universidade de Miami) and England (London School of Tropical Medicine & Hygiene and Wellcome Foundation); 3. Search in pubmed, Medline and lilacs; 4. To search information from microfilms of newspapers and reports from the Government Province of Cearà from 1850 to 1930 in the archives of Menezes Pimentel Public Library in Fortaleza (Ce); 5. WHO home page, yahoo.com and google.com, specially for scientists biographies. Primary sources: 1. Interview with researchers, family members of old researchers that made the history. 2. Author personal archives of photographs of cutaneous leishmaniasis patients skin and mucosal lesions as well as lymph nodes. Results: The first references to the existence of the disease (in books) in Cearà are form 1909 and in government reports are from 1917. The emergence of the disease in Cearà occurred after the great drought and the smallpox epidemic (1877-1879). These phenomenons forced migration of dozens thousands of people to the Amazon, to work on rubber production. In their return they brought with them the infection and the disease found here the appropriate conditions to develop. The first documented information on the disease in the Amazon region date back to 1820. From the clinical point of view, we documented that the infection by Leishmania braziliensis causes fever, malaise and satellite lymph nodes enlargement and in some patients liver and spleen enlargement is seen. Lymph nodes aspirates demonstrated Leishmania in most patients and Leishmania was cultured from Buffy coat of one patient. Concerning therapy, 21 patients were treated with fluconazole 7mg/kg/day for an average of 7 weeks, 18 were cured, and 2 of the three that did not responded to fluconazole initially, were cured with drugs associations that included fluconazole in the therapeutic scheme. Conclusion: 1. Cutaneous leishmaniasis in Cearà is an imported disease from the Amazon region, where the condition exists since the beginning of the XIX century and had its arrival in Cearà at the end of the XIX century; 2. Leishmania braziliensis infection causes a systemic disease due to parasite dissemination and it is probable in this phase, that leishmania locates in the mucosa, where it may causes disease in a later phase; 3. Fluconazole is a therapeutic alternative for cutaneous leishmaniasis.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-02-13T10:24:59Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rosidete Pereira de Bastos - 2008.pdf: 938423 bytes, checksum: 1e65715cda59aae81ec161a84d517cb6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-02-20T11:34:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rosidete Pereira de Bastos - 2008.pdf: 938423 bytes, checksum: 1e65715cda59aae81ec161a84d517cb6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-20T11:34:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rosidete Pereira de Bastos - 2008.pdf: 938423 bytes, checksum: 1e65715cda59aae81ec161a84d517cb6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2008-03-14 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The knowledge about immunology of Leishmania (Viannia) braziliensis-murine infection is poorly known, especially concerning innate immune response and the involvement of leukotrienes in the resistance mechanisms. Leukotrienes are lipid mediators of inflammation that activate microbicidal mechanisms in leukocytes. The present study aimed to evaluate the BALB/c and C57Bl/6 murine infection with two L. (V.) braziliensis isolates obtained from cutaneous leishmaniasis patients and the involvement of leukotrienes in the resistance of infection. Thus, IMG3 and RPL5 isolates were identified as L. (V.) braziliensis by using molecular techniques and the in vitro growth of parasites in Grace´s medium (26°C) was evaluated. The time course of lesion after footpad infection was followed in BALB/c and C57Bl/6 mice. C57Bl/6 mice genetically deficient in interferon gamma (IFNγ) were infected to evaluate the relevance of this cytokine in resistance. The parasite burden in draining lymph nodes and spleens was detected by limiting dilution assay. BALB/c- and C57Bl/6-infected footpads were processed after 12 weeks of infection and those from IFNγ-defecient mice after 4 weeks for histopathological analyses. Tissue sections were stained by hematoxylin-eosin. Parasite capacity to induce nitric oxide (NO) was analyzed in RAW 264.7 cell cultures treated or not with IFNγ and lipopolysaccharide (LPS). Nitrites were detected by using Griess reaction. The NO modulation by endogenous leukotrienes was evaluated through treatment of the cultures with a 5-lipoxygenase (5-LO) inhibitor and a leukotriene B4 (LTB4) antagonist. Macrophage leishmanicidal activity against IMG3 isolate was evaluated in thioglycolateelicited peritoneal macrophages of C57Bl/6 mice. In these cultures, NO was inhibited by aminoguanidine. In vivo leukotriene inhibition was achieved by using a 5-LO inhibitor. In vitro-parasite growth profiles were similar and parasites at the 5th day of culture were used to infection. The lesion course was also similar between isolates in both two mouse stains used, but C57Bl/6 mice presented healing after 12 weeks of infection whereas in BALB/c mice the lesion was persistent. In IFNγ-deficient mice there progressive lesions and visceralization in IMG3- as well as in RPL5-infected mice. Corroborating these data, the parasite burden in draining lymph nodes of BALB/c mice was higher than in C57Bl/6 mice after 12 weeks of infection with IMG3, and parasites (IMG3 and RPL5) were identified in about 50% of the IFNγ-deficient mouse spleens. The histopathological analyses showed an intense dermal infiltrate with vacuolated macrophages heavily parasitized in BALB/c mice (12 weeks) an in IFNγ-deficient mice (4 weeks), but not in C57Bl/6 mice (12 weeks), similarly for IMG3 and RPL5. Both isolates IMG3 an RPL5 induced NO production in RAW 264.7 celll cultures presenting synergism with IFNγ. Endogenous leukotrienes did not affect NO production in these cultures. C57Bl/6 peritoneal macrophages activated with IFNγ/LPS killed IMG3 parasites depending on NO release. In vivo inhibition of leukotriene synthesis did not change the course of infection in C57Bl/6 mice infected with IMG3 isolate. The relevant findings are: BALB/c mouse is susceptible to infection with IMG3 an RPL5 isolates whereas C57Bl/6 is resistant; IFNγ is crucial to the control of the infection; the isolates induce NO and this molecule contributes to macrophage leishmanicidal activity; and also the data suggest that endogenous leukotrienes are not involved in the control of L. (V.) braziliensis in C576Bl/6 mouse. / A imunologia da infecção murina por Leishmaia (Viannia) braziliensis é pouco conhecida, especialmente considerando a imunidade inata e a participação dos leucotrienos nos mecanismos de resistência à infecção. Os leucotrienos são mediadores lipídicos da inflamação que ativam mecanismos microbicidas dos leucócitos. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o perfil da infecção de camundongos BALB/c e C57Bl/6 por dois isolados de L. (V.) braziliensis obtidos de pacientes com leishmaniose cutânea e o envolvimento dos leucotrienos endógenos na resistência à infecção. Para isto, os isolados denominados IMG3 e RPL5 foram identificados como L. (V.) braziliensis por meio de técnicas moleculares e foram avaliados quanto ao crescimento in vitro em meio Grace (26°C), e quanto ao curso da evolução da lesão, em camundongos BALB/c e em C57Bl/6. Camundongos C57Bl/6 geneticamente deficientes em interferon gama (IFNγ) foram infectados para avaliar a importância desta citocina no controle da infecção. A carga parasitária foi obtida pelo ensaio da diluição limitante em linfonodos drenantes da lesão e nos baços. As patas dos camundongos BALB/c e C57Bl/6 foram colhidas após 12 semanas de infecção, e dos camundongos deficientes em IFNγ, na 4ª semana, e foram processadas para análises hitopatológicas. A capacidade de indução de óxido nítrico (NO) pelos isolados foi avaliada em culturas de células RAW 264.7 tratadas ou não com IFNγ e lipopolissacarídeo (LPS), sendo os nitritos detectados por reação de Griess. A regulação da produção de NO pelos leucotrienos endógenos foi avaliada por tratamento das culturas de macrófagos com um inibidor de 5-lipoxigenase (5-LO) e um antagonista de receptor de leucotrieno B4 (LTB4). A atividade microbicida dos macrófagos foi avaliada em macrófagos peritoneais (C57Bl/6) infectados com o isolado IMG3, sendo o NO inibido por aminoguanidina. O efeito da inibição de leucotrienos, in vivo, foi avaliado em camundongos C57Bl/6 infectados com o isolado IMG3 e tratados com um inibidor de 5- LO. As curvas de crescimento in vitro foram similares para os dois isolados e os parasitos no 5° dia de cultivo foram usados nos experimentos de infecção. O curso da lesão foi similar entre os dois isolados nos camundongos BALB/c e C57Bl/6, porém enquanto a lesão regrediu nos C57Bl/6, nos camundongos BALB/c, a lesão foi persistente até a 12ª semana de infecção. Em camundongos deficientes em IFNγ houve crescimento progressivo das lesões e visceralização, tanto com o isolado IMG3 quanto com o RPL5. Confirmando estes dados, a carga parasitária nos linfonodos drenantes da lesão nos camundongos BALB/c foi maior do que a encontrada nos C57Bl/6 após 12 semanas de infecção com IMG3 e os parasitos (IMG3 e RPL5) foram encontrados em cerca de 50% dos baços dos camundongos deficientes em IFNγ. As análises histopatológicas mostraram um acentuado infiltrado inflamatório na derme, com macrófagos vacuolizados repletos de parasitos nos camundongos BALB/c (12 semanas), e nos deficientes de IFNγ (4 semanas), mas não nos camundongos C57Bl/6 (12 semanas), similarmente para IMG3 e RPL5. Os isolados IMG3 e RPL5 induziram NO em células RAW 264.7 em sinergismo com IFNγ e os leucotrienos endógenos não alteraram a produção de NO destas células. Macrófagos peritoneais murinos mostraram atividade microbicida de maneira dependente de NO. A inibição in vivo da síntese de leucotrienos não alterou o curso da infecção pelo isolado IMG3 em camundongos C57Bl/6. Coletivamente, os dados mostram que o camundongo BALB/c é suscetível à infecção pelos dois isolados, enquanto o C57Bl/6 é resistente; o IFNγ é essencial para o controle da infecção; os isolados induzem a produção de NO, o qual contribui para a eliminação dos parasitos; e os dados sugerem que os leucotrienos endógenos não estão envolvidos nos mecanismos de resistência dos camundongos C57Bl/6 a L. (V.) braziliensis.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-08-29T13:16:30Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Josiane Silva Martins Carvalho.pdf: 768971 bytes, checksum: 1b2302804a368fa23b8330cae55b6d4a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-29T13:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Josiane Silva Martins Carvalho.pdf: 768971 bytes, checksum: 1b2302804a368fa23b8330cae55b6d4a (MD5) / Leishmania braziliensis é um dos principais causadores da leishmaniose tegumentar americana (LTA), doença endêmica na região de Corte de Pedra - Bahia, Brasil e em aproximadamente 88 países em todo o mundo, com maior concentração em áreas tropicais e subtropicais. Diversos estudos foram realizados empregando antígeno solúvel de leishmania (SLA), porém poucos relatam sobre antígenos de L. braziliensis, nativos ou recombinantes. São descritos na literatura antígenos de elevado peso molecular, o lipofosfoglicano (LPG) de membrana, moléculas de 72, 63, 46, 30, 20 e 11 KDa, além de histonas e heat-shock proteins (HSP). O presente trabalho teve como objetivos fracionar SLA de promastigotas de L. braziliensis e caracterizar as respostas imunológicas humoral e celular induzidas. Foram utilizados promastigotas cultivados em meio Schneider. O extrato total após sonicação, foi submetido à cromatografia em coluna de Bio-Gel P-60 e as frações obtidas foram analisadas por eletroforese em gel de poliacrilamida a 10% e revelado com nitrato de prata. A reatividade humoral foi determinada por immunoblotting empregando plasma de pacientes com leishmaniose cutânea. A partir dos resultados obtidos, foram selecionadas duas fracões: F-VI: 64 KDa e F-V: 64, 47, 32 e 19 KDa, com as quais foi realizado o estudo da resposta celular. A medida da produção de citocinas (IFN-, TNF- e IL-10) por células mononucleares do sangue periférico (CMSP) de 15 pacientes com leishmaniose cutânea (LC) e 5 pacientes com leishmaniose mucosa (LM) foi determinada pelo método de ELISA. Foram obtidos os seguintes resultados: para LC: IFN-: 180,0233,2 pg/mL (F-VI) e 611,6 603,4 pg/mL (F-V) (p=0,0164); TNF-: 793,9555,6pg/mL (F-VI) e 780,3739,7 pg/mL (F-V) (p>0,05) e IL-10: 54,663,5 pg/mL (F-VI) e 35,938,8 pg/mL (F-V) (p>0,05). Para os pacientes com LM: IFN-: 69,2  64,9 pg/mL (F-VI) e 389,0612,6 pg/mL (F-V) (p>0,05); TNF-: 583,1637,4 pg/mL (F-VI) e 552,2589,2 pg/mL (F-V) (p>0,05) e IL-10: 22,324,0 pg/mL (F-VI) e 30,950,6 pg/mL (F-V) (p>0,05). CMSP de pacientes com LC foram estimuladas a produzir altos níveis de IFN- e TNF- e baixos níveis de IL-10, especialmente pela FÇ-V. Nas CMSP dos pacientes com LM, houve alta produção das citocinas de resposta Th1, porém sem diferença estatisticamente significativa, além de uma discreta produção de IL-10. A avaliação da correlação mostrou que nas CMSP dos pacientes LM estimuladas pela FÇ-V, o IFN- produzido favoreceu significativamente a produção de TNF- (p=0,037). A reação sorológica revelou que apenas os plasmas dos pacientes com LC reconheceram as moléculas de 64, 32 e, mais fracamente, 19 KDa. Esses dados sugerem uma provável participação ativa destas moléculas na indução da resposta à leishmaniose e que, em LM a associação destes antígenos pode contribuir para o aumento da lesão, enquanto que nos pacientes LC esta associação pode ter um efeito imunoprotetor.

Submitted by Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (mebiotec.ufba@gmail.com) on 2017-04-06T12:35:58Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO EVARISTO FINAL (1).pdf: 3619384 bytes, checksum: ce2f500cb5c5efadf38bd2d0f730d863 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2017-06-29T14:36:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO EVARISTO FINAL (1).pdf: 3619384 bytes, checksum: ce2f500cb5c5efadf38bd2d0f730d863 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T14:36:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO EVARISTO FINAL (1).pdf: 3619384 bytes, checksum: ce2f500cb5c5efadf38bd2d0f730d863 (MD5) / CNPq / A leishmaniose é uma doença de grande relevância à saúde pública em que a Leishmania braziliensis é um dos agentes etiológicos. Seu tratamento é realizado através da administração de medicamentos considerados tóxicos às células humanas, caros e ineficientes às diversas espécies de Leishmania, podendo resultar em cepas resistentes e por essas razões, estudos que abordem novas terapias com vista a reduzir os efeitos indesejados são de suma importância. A terapia fotodinâmica (TFD), é uma das técnicas ditas como sendo promissoras no tratamento de inúmeras doenças parasitárias. Portanto, foi proposto este trabalho com o objectivo de avaliar os efeitos da TFD na L. braziliensis, bem como a interação deste parasito com macrófagos J774, utilizando como fotossensibilizador, o azul de metileno na concentração de 12,5 µg/mL associado ao LASER vermelho de baixa potência com λ = 660 nm; 40 mW; 8,4J /cm2. Os testes foram realizados em triplicata, e as amostras foram distribuídas em quatro grupos: Grupo Controle, Grupo Fotossensibilizador, Grupo LASER, Grupo TFD. Como métodos avaliativos da morfologia e ultraestrura das promastigotas face aos efeitos da TFD sobre a Leishmania, foram utilizadas as microscopias eletrônicas de varredura e de transmissão. Para a avaliação da interação, foi utilizada a microscopia ótica. Nela, foram realizadas contagens de macrófagos infetados e não infetados. Como resultado, foi observado que a TFD foi capaz de criar deformações morfológicas e estruturais compatíveis com alterações promovidas por ‘stress’ oxidativo. Após a analise dos ensaios de interação foi observado que a infecção de macrófagos no grupo TFD apresentou taxa de infecção menor que no controle com uma significância de p=0.0339 e p=0.0181 nos períodos respetivos de 24 e 48 horas. Aavaliação estatística foi realizada através do teste ANOVA com pós-teste de Tukey, p <0,05. Assim, conclui-se que a TFD além de ser eficaz em causar danos potencialmente letais à promastigotas de Leishmania braziliensis ela também, é capaz de estimular a resposta do sistema imune, desempenhando um papel sinergístico. / Leishmaniasis is a disease of great importance to public health in what Leishmania braziliensis is one of the etiological agents. The treatment is performed by administering drugs considered toxic to human cells, expensive and inefficient to several species of Leishmania and can result in resistant strains and for these reasons, studies that address new therapies to reduce the unwanted effects are of paramount importance. Photodynamic therapy (PDT) is a technique said to be promising in the treatment of many parasitic diseases. Therefore, we proposed this work aimed to evaluate the effects of PDT in L. braziliensis and the interaction of this parasite with J774 macrophages, using as a photosensitizer, methylene blue at a concentration of 12.5 µg/mL associated with red Low power LASER with λ = 660 nm; 40 mW; 8,4 J/cm2. The tests were performed in triplicate, and the samples were divided into four groups: control Group, photosensitizer Group, LASER Group and TFD Group. As evaluative methods of morphology and structure, promastigotes against the effects of PDT on Leishmania, electronic microscopy scanning and transmission were used. For the evaluation of the interaction, the optical microscope was used. Here, infected macrophage counts were performed and uninfected. As a result, it was found that PDT was able to create morphological and structural deformation compatible with alterations resulting Oxidative stress. After the analysis of the interaction tests was observed that infection of macrophages in the PDT group showed lower infection rate than the control with a significance of p = 0.0339 and p = 0.0181 in the respective periods of 24 and 48 hours. Statistical analysis was performed using ANOVA with Tukey's post-test, p <0.05. Thus, the conclution is that PDT is effective in causing potentially lethal damage to Leishmania braziliensis promastigotes it is able to stimulate the immune system response and plays a synergistic role.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2017-05-05T16:28:47Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Fernanda Ventin de Oliveira Prates.pdf: 4623431 bytes, checksum: 429fe54a0879690aab4c7df414262e0d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-05T16:28:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Fernanda Ventin de Oliveira Prates.pdf: 4623431 bytes, checksum: 429fe54a0879690aab4c7df414262e0d (MD5) / CNPq;FAPESB / ENSAIO CLÍNICO RANDOMIZADO E CONTROLADO DO USO DE FLUCONAZOL NO TRATAMENTO DA LEISHMANIOSE CUTÂNEA CAUSADA POR LEISHMANIA (VIANNIA) BRAZILIENSIS. Objetivo: Avaliar a resposta terapêutica e a segurança do Fluconazol no tratamento de pacientes com leishmaniose cutânea (LC) causada por L. braziliensis em Corte de Pedra-BA. Métodos: Ensaio clínico randomizado de fase III, comparando Fluconazol com Glucantime ® no tratamento da LC. Resultados: Da amostra calculada de 70 pacientes com LC, foram incluídos 53 indivíduos. Destes, 26 foram tratados com Glucantime®, na dose de 20mg/kg/dia por 20 dias, e 27 tratados com Fluconazol, por via oral, por 28 dias, com dose diária de 6,5-8,0mg/Kg. A análise por intenção de tratar, mostrou uma taxa de cura inicial (2 meses após o tratamento) de 22,2% (6/27) no grupo Fluconazol, e de 53,8% (14/26) no grupo Glucantime ® (P=0,037). Na avaliação 6 meses após o tratamento, as taxas de cura foram mantidas; 22,2% (6/27) no grupo Fluconazol e 53,8% (14/26) no grupo Glucantime ® (P=0,037), o que indicou a interrupção na inclusão de novos pacientes. O tempo médio de cicatrização das lesões ulceradas foi de 157,6 dias no grupo Fluconazol e de 117,2 dias no grupo Glucantime ® (P=0,014). A ocorrência de efeitos colaterais no grupo Glucantime ® foi de 34,6% (9/26), e os mais comuns foram mialgia (23%) e artralgia (11,5%). No grupo Fluconazol, essa taxa foi de 37,0% (10/27), e os mais comuns foram: tontura (22,2%) e náuseas (11,1%). Conclusão: Fluconazol utilizado na dose de 6,5- 8mg/kg/dia por 28 dias não pode ser considerado como um tratamento eficaz para LC por L. braziliensis em Corte de Pedra-BA.