Objetivo: Seleccionar e identificar aptámeros de ADN capaces de reconocer con alta afinidad y de forma específica péptidos de proteínas de membrana de Leishmania braziliensis. Diseño: El presente estudio es un estudio experimental in vitro que involucra las áreas de biomedicina y biotecnología debido a que se usará péptidos sintéticos para evaluar la afinidad de unión a los aptámeros seleccionados usando la plataforma ELONA.

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Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-19T16:13:35Z No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Maria Elisa Alves Rosa.pdf: 3316589 bytes, checksum: 97596f3066b2982c655ce211d84132f9 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-09-22T16:47:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Maria Elisa Alves Rosa.pdf: 3316589 bytes, checksum: 97596f3066b2982c655ce211d84132f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-22T16:47:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Med_Maria Elisa Alves Rosa.pdf: 3316589 bytes, checksum: 97596f3066b2982c655ce211d84132f9 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq);Fundação de Amparo à Pesquisa (FAPESB);National Institutes of Health (NIH). / A Leishmaniose Disseminada (LD) é forma grave de Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA), caracterizada pelo aparecimento de múltiplas lesões pleiomórficas, em mais de 2 segmentos corporais não contíguos. Ainda pouco compreendida, importante pelo caráter emergente, gravidade das lesões e dificuldade de tratamento. Objetivo: descrição dos aspectos clínicos, epidemiológicos, imunológicos e terapêuticos da LD. Desenho do Estudo: Série de casos, Corte Transversal e Coorte. Casuística, Material e Métodos: acompanhamento clínico de 121 pacientes de LD. Sangue periférico e tecido de 64 pacientes de LD e de Leishmaniose Cutânea (LC) foram avaliados quanto à produção in vitro e expressão tecidual de INFγ, TNFα, IL5, IL10, CCL2, CCL3, CCL11, CXCL9 e CXCL10. Resultados: apresentam maior risco de desenvolverem LD indivíduos adultos, do gênero masculino e lavradores. Envolvimento mucoso foi observado em 50% dos casos, 64% apresentaram entre 10 e 50 lesões, a reação de Montenegro foi positiva em 65% e Leishmania braziliensis foi identificada em 97% dos pacientes. Cura clínica foi observada em 36,8% dos pacientes com o uso de 1 a 4 séries de antimonial pentavalente (SbV); anfotericina B foi utilizada como medicação de resgate em 29% dos casos, com cura clínica em 100%. Pacientes adultos apresentaram um risco 9 vezes maior de falha terapêutica com o SbV que os menores de 18 anos. A produção in vitro de IFNγ e de TNFα foi mais baixa em pacientes com LD. A produção de CXCL9 foi mais elevado nos portadores de LD. A expressão tecidual das citocinas e quimiocinas foi equivalente nas 2 formas. Conclusões: adultos apresentam maior risco de falha terapêutica com o SbV. A avaliação imunológica sugere que os pacientes de LD apresentam resposta Th1 deslocada para os tecidos. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-18T17:17:11Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Juliana Almeida Silva.pdf: 2705428 bytes, checksum: 23e8edabaaee4957ced9d4431671b1ed (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira (flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-10-31T16:47:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Juliana Almeida Silva.pdf: 2705428 bytes, checksum: 23e8edabaaee4957ced9d4431671b1ed (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-31T16:47:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Juliana Almeida Silva.pdf: 2705428 bytes, checksum: 23e8edabaaee4957ced9d4431671b1ed (MD5) / NIH - National Institute of Health (Grant P50AI30639-16 e R03AI067663-02); TMRC – Tropical Medicine Research Centers; INCT – DT – Instituto Nacional de Ciências e Tecnologia de Doenças Tropicais; CAPES – Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior. / A leishmaniose tegumentar Americana (LTA) pode resultar de infecções humanas com Leishmania (Viannia) braziliensis, o qual é responsável por três formas de doença: leishmaniose cutânea (LC), mucosa (LM) e disseminada (LD). As LC, LM e LD podem ser encontradas em Corte de Pedra (CP), Bahia / Brasil. O objetivo deste estudo foi investigar os mecanismos de manutenção da endemicidade da LTA em CP. Foi verificado se os casos humanos de LTA nesta região ocorrem por meio de surtos ou de casos esporádicos. No período de 2008 a 2011, 47 casos de LC, 35 de LM e 47 de LD (129 LTA) foram incluídos no estudo. As coordenadas geográficas dos locais de moradia desses pacientes foram coletadas por GPS e plotadas numa foto de satélite de alta definição da região e geo-referenciada, usando o sistema de informação geográfica (SIG). Cada forma de LTA foi analisada separadamente. Para cada caso novo de uma forma de LTA diagnosticado (ex. LC, LM e LD), a distância dos casos anteriores e que ocorreram nos 3, 6 e 12 meses anteriores, foram calculados usando a ferramenta SIG. Em seguida, foi avaliada a correlação entre a frequência de casos recentes próximos aos casos novos diagnosticados e as distâncias destes novos casos diagnosticados. De forma geral e na maioria dos estratos considerados, os casos de LC e LD mostraram uma correlação inversa significante entre as frequências de casos recentes e a distâncias dos casos novos diagnosticados, sugerindo que, para estas formas de doença e em CP, os surtos são mais frequentes do que os casos esporádicos. Os casos de LM não apresentaram correlações sugestivas de agrupamento da doença. Isto sugere que a LM possivelmente ocorre como forma de doença esporádica, embora uma amostragem maior seria necessária para reforçar esta conclusão. Procurou-se também trazer a luz do conhecimento a clonalidade destas infecções de dentro do hospedeiro. Na avaliação preliminar, foram cultivados e genotipados 94 parasitos obtidos de pacientes com LTA incluídos no estudo. Na caracterização genotípica, foi realizado o sequenciamento de um locus polimórfico, localizado a partir da posição 3074 do cromossomo 24. Em 87% dos isolados testados, apenas 1 ou 2 haplótipos de SNP e indels foram detectados no locus CHR24/3074, sugerindo que estas infecções apresentaram um ou dois clones predominantes de L. (V.) braziliensis. Entretanto, estas análises precisam ser expandidas para os materiais biopsiados, os quais refletem melhor o que ocorre no tecido do hospedeiro, particularmente devido à tendência de alguns clones parasitários se adaptarem melhor ao cultivo in vitro do que outros. Finalmente, avaliou-se a distribuição dos 4 haplótipos mais frequentes na população de L. (V.) braziliensis previamente genotipada. A análise visual dos mapas plotados com os hapótipos indicou uma ampla dispersão dos 4 haplótipos na área endêmica. A falta de agregação dos haplótipos na área de estudo sugere que esses haplótipos iniciaram a sua dispersão alguns anos atrás e isso permitiu a eles ocuparem toda a região de CP. A outra possibilidade é que talvez o locus CHR24/3074 seja conservado demais para distinguir a população L. (V.) braziliensis estudada. De forma geral, o cenário que foi descrito aqui é de infecções humanas oligoclonais, os quais ocorreram a partir de surtos de LC e LD, e de casos esporádicos de LM. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-16T18:10:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Viviane Magalhães.pdf: 3760330 bytes, checksum: 352f3d7caf0d3827d385de4db6afdba1 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira (flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-10-31T16:56:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Viviane Magalhães.pdf: 3760330 bytes, checksum: 352f3d7caf0d3827d385de4db6afdba1 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-31T16:56:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Viviane Magalhães.pdf: 3760330 bytes, checksum: 352f3d7caf0d3827d385de4db6afdba1 (MD5) / NIH - National Institute of Health (Grant P50AI30639-16 e R03AI067663-02); TMRC- Tropical Medicine Research Centers / National Institute of Health; CAPES- Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior. / Leishmania (Viannia) braziliensis é a principal causa da leishmaniose tegumentar americana (LTA) no Brasil. L. (V.) braziliensis causa três formas de leishmaniose na Bahia: cutânea localizada (LC), leishmaniose mucosa (LM) e leishmaniose disseminada (LD). Como passo inicial para a melhor compreensão dos eventos parasita-hospedeiro que podem ajudar a determinar o desfecho da infecção, avaliamos o padrão de expressão gênica global em macrófagos derivados de monócitos (MDM) de voluntários saudáveis infectados com parasitas isolados das três formas clinicas de LTA. Uma multiplicidade de infecção de 2 parasitas por MDM foi usada na análise de microarranjo de DNA proveniente dos MDM no ponto de 4h de infecção. Nesse ponto de tempo, aproximadamente 80% dos MDM em cultura foram infectados, com uma média de cinco parasitas por célula hospedeira. Mais de 500 genes do hospedeiro, pertencentes a diferentes grupos funcionais, apresentou mudanças significativas em seu comportamento, onde a grande maioria se mostrou reprimido nos MDM infectados. Para validar os achados gerais e estender as análises a pontos de tempo posteriores, realizamos uma avaliação cinética (30 min, 4, 24 e 48 horas pós-infecção), utilizando duas cepas do parasita. Avaliou-se a expressão por PCR em tempo real de 21 transcritos, representando as diversas classes de genes afetados no estudo inicial. Os níveis de infecção dos MDM permaneceram estáveis ao longo da avaliação cinética. Aproximadamente 80% dos MDM foram infectados nas culturas, no entanto, o número de parasitas por MDM aumentou constantemente desde cerca de 5 no ponto de tempo de 4 horas a cerca de 20 parasitas por célula. Em relação a expressão gênica, a 4h os níveis dos 21 transcritos avaliados na validação foram semelhantes aos do estudo original. Ao comparar os pontos de 4h contra 24h, oito do total de genes afetados (IL-10RB, MyD88H, PARK7, TRERF1, UBC, NDUFA11, NUP214, NUP62) mostraram uma mudança significativa nos seus níveis de expressão. Na avaliação cinética estendida até 48h pós-infecção encontrou mudanças significativas em algum ponto em oito dos 21 genes. Entre estes, seis genes são semelhantes aos pontos de comparação entre 4 e 24 horas (IL-10RB, MyD88H, PARK7, UBC, NDUFA11, NUP214), enquanto dois mostraram alterações significativas após o ponto 24h (MT1M foi induzida e NUB1 foi reprimida) correspondendo a funções importantes relacionadas com a resposta celular a alterações ambientais. Nos ensaios de transwell houve uma supressão dos genes nas duas condições, 2:1 e 10:1, demonstrando que a passagem de partículas solúveis na membrana da câmara implicou na interação das moléculas das células resultando em modificações na sua expressão gênica. No seu conjunto, os dados indicam que, durante a interação inicial entre L. (V.) braziliensis e o macrófago hospedeiro há uma supressão geral dos principais processos na célula, o que pode ser importante para o parasita estabelecer a infecção. No entanto a compreensão precisa da relação hospedeiro-parasita requer uma avaliação completa, incluindo vários pontos de tempo ao longo do processo infeccioso. / Salvador

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-09-16T18:37:13Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Silvana Conceição.pdf: 993066 bytes, checksum: ac16fedc0180b5cad548853e0231eb14 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira (flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-10-31T17:04:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Silvana Conceição.pdf: 993066 bytes, checksum: ac16fedc0180b5cad548853e0231eb14 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-31T17:04:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_Silvana Conceição.pdf: 993066 bytes, checksum: ac16fedc0180b5cad548853e0231eb14 (MD5) / Tropical Medicine Research Center (TMRC); Instituto Nacional de Ciências e Tecnologia de Doenças Tropicais (INCT-DT); Bolsa de Estudo da CNPq; NIH - National Institute of Health (Grant P50AI30639-16 e R03AI067663-02). / Introdução: A primeira linha de tratamento da leishmaniose tegumentar americana (LTA) é baseada nos derivados do antimonial. A refratariedade ao antimônio é frequente entre os pacientes com LTA. Leishmania (Viannia) braziliensis é a principal causa de LTA no Brasil. A L. (V.) braziliensis causa três formas de leishmaniose na Bahia: leishmaniose cutânea localizada (LC), a mais comum com pequenas lesões auto curáveis até as formas mais grave e de difícil tratamento, a leishmaniose mucosa (LM), e a leishmaniose disseminada (LD). Métodos e Resultados: Neste estudo, foram incluídos 91 casos de LTA (67 LC, 7 LM e 17 LD) de uma região endêmica para L. (V.) braziliensis, chamada Corte de Pedra (CP), no estado da Bahia/Brasil, e os quais apresentaram culturas de parasítos positivas. Foram avaliados: (1) associação entre o genótipo de L.(V) braziliensis e a resposta dos pacientes ao antimoniato de meglumina (Glucantime®); (2) a distribuição geográfica dos pacientes refratários ao glucantime dentro da região afetada; e (3) a resistência da L. (V.) braziliensis ao Glucantime® in vitro. Os parasitas foram genotipados com base no sequenciamento de um único locus polimórfico (que começa na posição 3074 do cromossomo 24) desta população de L. (V.) braziliensis. Para a avaliação da distribuição geográfica dos casos responsivos e refratários, as coordenadas geográficas dos locais de moradia dos pacientes foram adquiridas por GPS e comparados usando o teste de Cusick and Edwards. As coordenadas dos locais de moradia dos pacientes foram plotadas em uma foto de satélite da região para inspeção visual, usando o sistema de informação geográfica (SIG). Foi encontrado que a refratariedade é amplamente distribuída na região, quase que uniformemente, contudo não foi possível detectar associações entre os genótipos dos parasitos e a resposta ao tratamento. A sensibilidade ao antimônio foi avaliada expondo as formas promastigotas da L.(V) braziliensis a concentrações crescentes do antimoniato de meglumina (Glucantime®) in vitro. Os parasitos de pacientes com LM e LD foram significantemente mais resistentes ao antimonial do que aqueles isolados dos casos de LC. Assim, a resistência ao antimônio observada in vitro está de acordo com o que tem sido observado em campo, onde os pacientes com LM e LD tendem a ter uma resposta menor ao tratamento com Glucantime® do que os indivíduos com LC. Embora não tenha sido encontrada associação entre as cepas parasitárias e a resposta ao tratamento nestes pacientes com LTA, na genotipagem dos isolados foi usado um único locus, o qual certamente limitou o poder discriminatório da técnica. Conclusão: Nos estudos futuros, estas associações devem ser repetidas aplicando mais loci polimórficos na genotipagem dos isolados de L. (V.) braziliensis de Corte de Pedra. / Salvador

Submitted by Everaldo Pereira (pereira.evera@gmail.com) on 2017-02-18T14:30:26Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Priscila_Gonçalves_2010.pdf: 2464796 bytes, checksum: 6c1805188f085817c0186601453b66c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-18T14:30:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Priscila_Gonçalves_2010.pdf: 2464796 bytes, checksum: 6c1805188f085817c0186601453b66c0 (MD5) / A calcificação do esqueleto dos corais é controlada pela temperatura da água do mar, pela atividade fotossintética dos simbiontes e pela alcalinidade da água do mar. Em função disso, esse esqueleto vem sendo utilizado cada vez mais como um bom arquivo de condições ambientais. A incorporação de isótopos de O e de C, além de elementos como o Sr são também controlados por parâmetros oceanográficos, notadamente a temperatura, a salinidade e a turbidez (disponibilidade de luz) da água do mar. Estudos recentes realizados com várias espécies de corais de Abrolhos mostraram que a exemplo dos corais de outros oceanos, essas espécies formam bandas de densidade com periodicidade anual. Os objetivos deste estudo foram verificar o comportamento da incorporação das razões isotópicas δ18O e δ13C e da razão geoquímica Sr/Ca no esqueleto do coral Mussimila braziliensis, verificar a influencia de parâmetros climáticos na incorporação destes elementos, validar a razão isotópica δ18O como indicador proxy de temperatura da superfície do mar (TSM) e relacionar com a razão geoquímica Sr/Ca estudada por Santedicola (2008). Verificou-se também o comportamento do δ13C, δ18O e Sr / Ca em relação à calcificação do esqueleto da espécie e quais os fatores que interferem nesse processo. / The calcification of coral skeletons is controlled by seawater temperature, the photosynthetic activity of zooxanthellae and the alkalinity of sea water. As a result, this skeleton has been used increasingly as a good environmental conditions archive. The incorporation of isotopes of O and C, along with elements such as Sr are also controlled by oceanographic parameters, mainly temperature, salinity and turbidity (light availability) of seawater. Recent studies with various species of corals from Abrolhos reefs showed that as occurs in other oceans, these species form density bands on an annual basis. The objectives of this study was to assess the incorporation of isotopic ratios δ18O and δ13C and the ratio Sr/Ca in the skeleton of the coral Mussimila braziliensis to check the influence of climatic parameters on the incorporation of these elements, validate the isotope ratio as an indicator δ18O proxy of sea surface temperature (SST) and correlate it with the geochemical ratio of Sr/Ca, studied by Santedicola (2008). It was also assessed the behavior of δ13C, δ18O and Sr/Ca in relation to this calcification of the species and what factors affected this process.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-04-24T19:50:20Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Maria Teixeira.pdf: 2708323 bytes, checksum: 1ed381eedc13288f43ff7b4dbfeb7222 (MD5) / Approved for entry into archive by Flávia Ferreira(flaviaccf@yahoo.com.br) on 2013-04-25T16:46:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Maria Teixeira.pdf: 2708323 bytes, checksum: 1ed381eedc13288f43ff7b4dbfeb7222 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-25T16:46:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_Med_ Maria Teixeira.pdf: 2708323 bytes, checksum: 1ed381eedc13288f43ff7b4dbfeb7222 (MD5) / CNPq, CAPES, PROCAD – 0018/01-5, FAPESB / Dois artigos científicos resumem o presente estudo. No primeiro, é mostrado que duas cepas de L. braziliensis, isoladas de pacientes de diferentes Estados (Ceará e Bahia), são geneticamente diferentes e apresentam processos patológicos distintos em camundongos BALB/c. No segundo trabalho é demonstrada uma correlação entre padrões de expressão de quimiocinas, induzidas por estas duas cepas de L braziliensis, com a formação de lesão e a atração de leucócitos para o sítio inflamatório. O terceiro trabalho é uma revisão sobre o papel das quimiocinas e receptores de quimiocinas nas interações parasito-hospedeiro em leishmaniose. Em particular, a revisão focaliza os estudos que contribuíram para a compreensão sobre quimiocinas na infecção por leishmania. Os principais achados desses estudos são: 1. A L. braziliensis H3227 do Ceará apresentou genótipo diferente da L. braziliensis BA788 da Bahia, demonstrado por RAPD. 2. A cepa H3227 levou ao desenvolvimento de lesões pequenas que se resolveram, enquanto BA788 não causou lesões em camundongos BALB/c. 3. Em ambos os grupos de camundongos, a carga parasitária não diferiu significativamente no sítio de infecção e começou a reduzir com 30 dias de infecção. Nos linfonodos drenantes, entretanto, o número de parasitos aumentou durante o decorrer do estudo. 4. Após a inoculação do parasito, a cepa BA788 pareceu ativar mais precocemente uma reposta mais intensa tipo Th1. Camundongos infectados com BA788 produziram níveis mais altos de IFN-γ, o que se correlacionou com um maior número de células NK nas lesões destes animais. 5. Numa fase mais tardia, camundongos infectados com H3227 produziram mais IL-12p70 e IL-10 no sobrenadante de células recuperadas dos linfonodos. Esta regulação da produção de IL-10 coincidiu com o pico máximo do desenvolvimento da lesão e da carga parasitária nestes animais. 6. As maiores lesões causadas por H3227, em camundongos BALB/c, foi diretamente correlacionada com o aumento progressivo da reação inflamatória, mas não com a carga parasitária. 7. A expressão mais precoce e intensa das quimiocinas CCL2/MCP-1, CCL3/MIP-1α, CXCL1/KC, CCL11/eotaxina, XCL1/linfotactina e dos seus respectivos receptores correlacionou-se com o maior influxo de leucócitos para as lesões induzidas por H3227 e com o aumento do processo inflamatório observado nos camundongos infectados com esta cepa, após 15 dias de infecção. 8. As diferenças observadas no processo inflamatório estavam correlacionadas com a virulência do parasito, uma vez que a cepa mais patogênica H3227 mostrou-se um recrutador mais potente de todas as células observadas no sistema do bolsão inflamatório, do que a menos patogênica BA788. Em conclusão, os achados apresentados aqui indicam que duas cepas de L. braziliensis geneticamente diferentes, embora apresentem carga parasitária semelhante no sítio de inoculação, podem estabelecer processos patológicos distintos e induzir expressão de quimiocinas em diferentes tempos e/ou intensidades, levando ao recrutamento diverso de células e respostas inflamatórias diferenciadas que poderiam finalmente estar envolvidas em diferentes apresentações da doença. / Salvador

FONSECA, F. R. M. Influência da carga parasitária e do sítio de inoculação na imunopatogênese da leishmaniose cutânea causada por Leishmania braziliensis em hamster. 2016. 90 f. Dissertação (mestrado em Patologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T13:12:30Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmfonseca.pdf: 2138163 bytes, checksum: 3e062bb4c798155f09a76054e3bb8348 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-18T13:12:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmfonseca.pdf: 2138163 bytes, checksum: 3e062bb4c798155f09a76054e3bb8348 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-18T13:12:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_frmfonseca.pdf: 2138163 bytes, checksum: 3e062bb4c798155f09a76054e3bb8348 (MD5) Previous issue date: 2016-02-22 / Leishmania braziliensis is the main causative agent of cutaneous leishmaniasis in Brazil and despite its importance for public health, there is a lack of an experimental model that can be used for testing new therapies and vaccines. The aim of this study was to investigate the influence of parasite burden and the inoculation site in the immunopathogenesis of cutaneous leishmaniasis caused by Leishmania braziliensis in hamsters using ear dermis infection model. Groups of animals (n = 48) were infected intradermally in the ear (n = 24) or paw (n = 24) with 105 promastigotes of L. braziliensis. Afterwards, other groups of animals (n=32) were infected intradermally in the ear with 105 (n=16) or 106 (n=16) promastigotes. The lesions were measured every 5 days for 60 days. The animals were euthanized at 30, 45 and 60 d.p.i., and had their infected ears and paws, as well as lymph nodes (retromaxilar or popliteal), livers and spleens collected for evaluation of parasite burden and expression of inflammatory mediators, and analysis of histopathological changes. The lesions arose at 20 d.p.i. both paw and ear. The ear lesions ulcerated and were bigger (p< 0.0001) in contrast to paw lesions that presented themselves as small nodules without ulcers. It was observed significant parasitic burden in the ear after 30, 40 and 60 d.p.i. at the lesion and in the lymph node, with parasite burden being always bigger at the lesion. Regardless of the route of inoculation, neither liver and spleen were enlarged nor had lumps or parasites. In the retromaxillary lymph node, it was observed a greater expression of inflammatory cytokines IFN- ɣ, TNF- α and IL -6 and the enzyme arginase, 30 and 60 d.p.i., and it was corroborated by histological changes observed in the ear, intenser inflammatory process and chronicity of the disease. On the contrary, the popliteal lymph node (paw) presented a combination of pro and anti-inflammatory cytokines indicating a precocious regulation of immune and inflammatory response. It was also observed that the bigger the inoculum, the more intense the inflammatory response and bigger the lesions, however, without parasite dissemination to the liver and spleen, indicating lesser systemic commitment and increased survival time of the animal. In short, the data indicates that the inoculum of 105 parasites through the ear dermis infection model could make easier the visualization of a possible protective effect of new drugs or vaccine candidates. / Leishmania braziliensis é o principal agente causador de leishmaniose cutânea no Brasil, e apesar de sua importância para a Saúde Pública, há carência de um modelo experimental que possa ser usado para testar novas terapias e vacinas. O objetivo deste estudo foi investigar a influência da carga parasitária e do sítio de inoculação na imunopatogênese da leishmaniose cutânea causada por Leishmania braziliensis em hamster no modelo de infecção na derme da orelha. Grupos de animais (n=48) foram infectados por via intradérmica, na orelha (n=24) ou na pata (n=24), com 105 promastigotas de L. braziliensis. Em seguida, outros grupos de animais (n=32) foram infectados por via intradérmica na orelha, com 105 (n=16) ou 106 (n=16) promastigotas. As lesões foram medidas a cada 5 dias por 60 dias. Os animais foram eutanasiados com 30, 45 e 60d.p.i, e coletados a orelha e pata infectada, linfonodos (retromaxilar ou poplíteo), fígado e baço, para a avaliação da carga parasitária, expressão de mediadores inflamatórios e análise das alterações histopatológicas. As lesões surgiram com 20d.p.i., tanto na pata como na orelha. As lesões na orelha ulceraram e foram maiores (p<0,0001) ao contrário das lesões da pata, que se apresentaram como pequenos nódulos, sem úlceras. Na orelha foi observada significante carga parasitária após 30, 40 e 60d.p.i., tanto na lesão como no linfonodo, sendo a carga parasitária sempre maior na lesão. Independente da via de inoculação, o fígado e baço não estavam aumentados, não apresentavam nódulos e nem parasitos. No linfonodo retromaxilar, observou-se uma maior expressão das citocinas inflamatórias IFN-ɣ, TNF-α e IL-6 e da enzima arginase, com 30 e 60d.p.i., e isso foi corroborado com as alterações histológicas observadas na orelha, processo inflamatório mais intenso e cronicidade da doença. Ao contrário, no linfonodo poplíteo (pata), apresentou um misto de citocinas inflamatórias e anti-inflamatórias, sugerindo uma regulação bem precoce da resposta imunológica e inflamatória. Observou-se também que quanto maior o inóculo, mais intensa a resposta inflamatória e maiores as lesões, entretanto, sem disseminação do parasito para fígado e baço, sugerindo menor comprometimento sistêmico e maior tempo de sobrevida para o animal. Em suma, os dados indicam que o inóculo de 105 parasitos no modelo de infecção na orelha poderia facilitar a visualização de um possível efeito protetor de novos fármacos ou candidatos vacinais.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-01T16:28:46Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2181156 bytes, checksum: 1a75ca604e9d172abff343dcc414bc44 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T16:28:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2181156 bytes, checksum: 1a75ca604e9d172abff343dcc414bc44 (MD5) Previous issue date: 2016-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As leishmanioses são uma das mais significantes doenças tropicais negligenciadas em todo o mundo, apresentando cerca de 1,3 milhão de novos casos anualmente e 20.000 a 30.000 mortes no mesmo período. Leishmania braziliensis é a principal espécie responsável pela Leishmaniose Tegumentar no Novo Mundo, sendo o Brasil o país com a maior incidência da doença frente a outros países da América do Sul. O arsenal terapêutico contra a Leishmaniose Tegumentar é ainda bastante restrito, e mesmo quando eficazes, as drogas de escolha causam efeitos colaterais graves. Dessa forma, este trabalho é parte de um esforço de várias instituições nacionais e internacionais, financiado pela Comunidade Europeia através do consórcio A- ParaDDisE (http://a-paraddise.cebio.org/), cujo objetivo é a descoberta de novas drogas para o tratamento de doenças parasitárias negligenciadas, incluindo as Leishmanioses. Enzimas modificadoras de Histonas (HMEs), como as histonas deacetilases (HDACs), estão envolvidas em processos celulares cruciais, como a ativação e inibição da expressão gênica. Inibidores dessas enzimas têm sido investigados como drogas candidatas para aplicação na quimioterapia de uma variedade de doenças, incluindo o câncer e doenças parasitárias, uma vez que eles inibem a progressão do ciclo celular e/ou induzem a apoptose. Neste trabalho foram testados compostos inibidores de HMEs (iHMEs), enviados por pesquisadores parceiros do consórcio A-ParaDDisE, em formas promastigotas axênicas e amastigotas intracelulares de L. braziliensis em infeção de células hospedeiras (macrófagos da linhagem Raw 264.7). Os resultados mostram diferentes efeitos para esses iHMEs em promastigotas e amastigotas, como observado para os compostos BSF38 e BSF39, que apresentaram efeito significante em promastigotas, mas não em amastigotas. Já o composto BSF2 foi eficaz em matar tanto as formas promastigotas axênicas quanto as amastigotas intracelulares, atingindo cerca de 95% de ação leishmanicida, similar à droga controle Anfotericina B. Além disto, a toxicidade destes compostos para macrófagos foi mínima ou não existiu. Sendo assim, o BSF2 pode ser considerado um bom alvo para continuidade do desenvolvimento de novas drogas leishmanicidas com ação sobre L. braziliensis. / Leishmaniasis is one of the major neglected tropical diseases worldwide, featuring about 1.3 million new cases annually and 20.000 - 30.000 deaths in the same period. Leishmania braziliensis is the main species responsible for cutaneous leishmaniasis in New World, and Brazil is the country with the highest incidence of the front disease to other countries in South America. The therapeutic arsenal against cutaneous leishmaniasis is still quite limited, and even when effective, the choice drugs cause serious side effects. Thus, this work is part of an effort of several national and international institutions, financed by the European Community by the consortium A-ParaDDisE (http://a-paraddise.cebio.org/), whose objective is the discovery of new drugs for the treatment of neglected parasitic diseases, including leishmaniasis. Histone modifying enzymes (HMEs), such as histone deacetylases (HDACs), are involved in key cellular processes such as activation and inhibition of gene expression. Inhibitors of these enzymes have been studied as candidate drugs for use in the chemotherapy of a variety of diseases, including cancer and parasitic diseases since they inhibit cell cycle progression and / or induce apoptosis. In this study we tested HMEs compounds inhibitors (iHMEs), submitted by A-ParaDDisE research partners, in promastigotes and intracellular amastigotes of L. braziliensis infection in host cells (macrophages of Raw 264.7 lineage). The results show different effects of these iHMEs in promastigotes and amastigotes, as observed for compounds BSF38 and BSF39, which showed significant effect in promastigotes, but not in amastigotes. BSF2 compound was effective in killing both promastigotes axenic forms as intracellular amastigotes, reaching about 95% of leishmanicidal action, similar to drug control Amphotericin B. In addition, the toxicity of these compounds to macrophages was minimal or did not exist. Thus, the BSF2 can be considered a good target for continued development of new drugs acting against L. braziliensis.