A leucemia mielóide crônica (LMC) é uma doença mieloproliferativa clonal caracterizada pela presença do cromossomo Philadelphia e o oncogene BCR-ABL1. Este oncogene codifica a oncoproteína Bcr-Abl com atividade tirosina-quinase constitutiva. A proteína Bcr-Abl é responsável pela resistência das células leucêmicas a apoptose. Atualmente, os pacientes com LMC são tratados com os inibidores de tirosina-quinase - mesilato de imatinibe, dasatinibe e nilotinibe. Apesar de o tratamento ser eficiente, pacientes em fases avançadas e mesmo na fase crônica da doença, apresentam resistência à terapia. Desta forma, novos fármacos devem ser investigados para melhorar o tratamento da LMC. As L-aminoácido oxidases (LAAOs) têm sido descritas como substâncias citotóxicas e indutoras de apoptose. Assim, o principal objetivo do presente estudo foi investigar o potencial antitumoral da LAAO isolada da serpente Calloselasma rhodostoma (CR-LAAO) nas células Bcr-Abl positivas. Avaliou-se a citotoxicidade da CR-LAAO nas linhagens HL-60 (linhagem Bcr-Abl negativa), HL-60.Bcr-Abl, K562 e KCL22 (linhagens Bcr-Abl positivas) e nas células mononucleares (MNC) de sangue periférico de indivíduos saudáveis, na presença ou ausência da catalase. Para investigar os mecanismos da ação citotóxica da CR-LAAO, realizou-se os ensaios de indução de apoptose por meio da quantificação das percentagens de núcleos hipodiplóides e anexina V-FITC, nas linhagens celulares e nas células MNC de indivíduos saudáveis e pacientes com LMC. Avaliou-se também os níveis de expressão das caspases 3, 8 e 9, o potencial de membrana mitocondrial, danos no DNA e o efeito apoptótico da toxina combinada com os inibidores de tirosina-quinase nas linhagens Bcr-Abl positivas. Além disso, investigamos se a CR-LAAO foi capaz de modular a expressão dos apoptomiRs miR-15a, miR-16, miR-145, miR-26a, hsa-let-7d, miR-142-3p, miR-29c, miR-146a, miR-21, miR-130a e miR-130b, assim como das proteínas pro- e anti-apoptóticas Bak, Bax, Bid, Bim, A1, Bcl-2, c-Flip, Ciap-2 e Mcl-1 nas linhagens Bcr-Abl positivas. Nossos resultados mostraram que o efeito citotóxico da CR-LAAO foi mais potente nas linhagens Bcr-Abl positivas em relação às células MNC de indivíduos saudáveis, e está associado ao peróxido de hidrogênio produzido durante a reação enzimática da CR-LAAO. Demonstrou-se também que a CR-LAAO induziu apoptose nas linhagens Bcr-Abl postivas testadas e nas células MNC de pacientes com LMC na fase crônica da doença. Em todas as linhagens celulares detectou-se danos no DNA, perda do potencial de membrana e ativação das caspases 3, 8 e 9. A percentagem de apoptose aumentou quando as células HL-60.Bcr-Abl foram tratadas com a CR-LAAO combinada com os inibidores de tirosina-quinase. A CR-LAAO modulou a expressão dos apoptomiRs miR-15a, miR-16, miR-145, miR-26a, hsa-let-7d, miR-142-3p, miR-29c, miR-21, miR-130a e miR-130b e de possíveis proteínas alvos nas linhagens Bcr-Abl positivas. Sendo assim, os resultados obtidos sugerem que a CR-LAAO apresenta uma ação antitumoral capaz de destruir as células leucêmicas / Chronic myeloid leukemia (CML) is a clonal myeloproliferative disease characterized by the presence of Philadelphia chromosome and BCR-ABL1 oncogene. This oncogene encodes the Bcr-Abl tyrosine kinase (TK) which presents a constitutive activity. The Bcr-Abl is responsible for leukemic cells resistance to apoptosis. The CML patients are currently treated with tyrosine kinase inhibitors (TKI) - imatinib mesylate, dasatinib and nilotinib. Although TKI are efficient for CML treatment, patients in advanced phases and even in chronic phase of the disease present resistance to therapy. Thus, potential new drugs must be investigated to improve the CML treatment. The L-amino acid oxidases (LAAOs) have been described as cytotoxic and apoptosis-inducing substances. Here, we investigated the LAAO from Calloselasma rhodostoma (CR-LAAO) antitumoral potential against Bcr-Abl positive cells. We evaluated the CR-LAAO cytotoxic effect against HL-60 (Bcr-Abl negative cell line), HL-60.Bcr-Abl, K562, KCL22 (Bcr-Abl positive cell lines) and the peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from healthy subjects, in the presence or absence of catalase. To investigate the mechanisms underlying the CR-LAAO cytotoxic action, we performed the apoptosis induction assays through the hypodiploid nuclei and annexin-V quantification in the cell lines and PBMC from healthy subjects and CML patients. We also evaluated the levels of caspases 3, 8 and 9 expression, the mitochondrial membrane potential, DNA damage and the apoptotic effect of CR-LAAO combined with TKI on Bcr-Abl positive cells. In addition we investigated if CR-LAAO was capable of modulating the apoptomiRs miR-15a, miR-16, miR-29c, hsa-let-7d, miR-145, miR-146a, miR-21, miR-130a, miR-130b, miR-142-3p and miR-26a, the pro- and anti-apoptotic proteins (Bak, Bax, Bid, Bim, A1, Bcl-2, c-Flip, Ciap-2 and Mcl-1 expression in HL-60, HL-60.Bcr-Abl, K562 and KCL22 cells. Our results showed that the CR-LAAO cytotoxic effect was more potent in Bcr-Abl positive cell lines than in PBMC from healthy subjects and it is linked to hydrogen peroxide produced during the enzymatic action of CR-LAAO. It was also demonstrated that CR-LAAO was capable of inducing apoptosis in Bcr-Abl positive cell lines and CML patient\'s cells in chronic phase of the disease. In all tested cell lines, the loss of mitochondrial membrane potential, DNA damage and caspases 3, 8 and 9 activation were detected. The apoptosis percentage was improved when HL-60.Bcr-Abl cells were treated with CR-LAAO combined with TKI. The CR-LAAO modulated the apoptomiRs miR-15a, miR-16, miR-145, miR-26a, hsa-let-7d, miR-142-3p, miR-29c, miR-21, miR-130a and miR-130b expression as well the predict target proteins levels on Bcr-Abl positive cells. Thus, our results suggest that CR-LAAO presents an antitumoral action capable of destroying the CML cells.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:47:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thais_Lorana_Savoldi.pdf: 1377046 bytes, checksum: ce52257de202a1ec71a096f32d36ad42 (MD5) Previous issue date: 2012-10-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Two experiments were conducted to evaluate the effects of levels of metabolizable energy (ME) and digestible lysine (LD) in the pre-starter diet on broiler chicks 1-10 days and 8-21 days, about the characteristics of performance and morphometry of the intestinal mucosa of broiler chicks. In the first experiment, the objective was to evaluate the effect of levels of metabolizable energy (ME) and digestible lysine (LD), on the performance of broiler chicks 1-10 days old and intestinal morphometric characteristics. We used 1152 broiler chicks, with an average weight of 55g, distributed in a completely randomized in a 4x4 factorial, four levels of ME (2700, 2825, 2950, and 3075 kcal.kg-1) and four levels of LD (1.080, 1.187 , 1.295 and 1.403%), resulting in 16 treatments with three replications and 24 birds each. The levels of lysine and metabolizable energy acted independently in the performance of broiler chicks in the pre-start, where the energy levels exerted a linear increase (P <0.05) in final weight and weight gain, and effect quadratic (P <0.05) on feed intake and feed conversion. The levels of lysine quadratic effect (P <0.05) on the final weight, weight gain and feed conversion, and increased linearly (P <0.05) on feed intake exerted a quadratic effect. In the variable rate of deposition of protein (TDP) and fat (TDG) was not significantly influenced, however, TDG were affected linearly by increasing levels of lysine. Significant effect between levels of MS and LD on the morphometry of the intestinal mucosa (P <0.05) on the villus height of duodenum, jejunum and villous: crypt ileum. It was observed that for the pre-initial chicks level of digestible lysine for greater weight gain is 1.271% and feed conversion, 1.221%, and the level of metabolizable energy for gain weight and feed conversion is 3075 kcal.kg-1. We observed that the levels of 3075 kcal.kg-1 of 1.403% and LD yielded improved performance and morphology of the intestinal mucosa in birds in the pre-start. In the second experiment the objective was to evaluate the effect of levels of energy and digestible lysine on performance of broiler chicks 8-21 days old (early stage) and morphometry of the intestinal mucosa. We used 864 broiler chicks, with 8 days of age, with an average weight of 125g were randomly distributed in 48 pens in a 4x4 factorial design with four levels of ME (2700, 2825, 2950, and 3075 kcal.kg-1) and four levels of LD (1.080, 1.187, 1.295 and 1.403%) for a total of 16 treatments with three replicates each. The highest level of LD study (1.403%) and the highest levels (3075 kcal.kg-1) provided better results for final weight and weight gain for broilers from 8 to 21 days old. To better feed the indicated level is 3075 kcal.kg-1 to 1.080% digestible lysine. The highest levels (3,075 kcal.kg-1) and LD (1.403%) promoted better rate of protein deposition in the carcass while the higher levels of MS and LD promoted a higher rate of fat deposition in the carcass. The simultaneous increase of metabolizable energy and digestible lysine caused a linear effect (P <0.05) villus height in the duodenum, jejunum and villous: crypt ileum. The lysine levels for best performance of broiler chicks 8-21 days and morphometric characteristics is less than 1.403%. The level of 3075 kcal.kg-1 is sufficient for good performance of the bird / Foram conduzidos dois experimentos com o objetivo de avaliar os efeitos dos níveis de energia metabolizável (EM) e lisina digestível (LD) na dieta pré-inicial em pintos de corte de 1 a 10 dias e de 8 a 21 dias, sobre as características de desempenho, taxa de deposição de proteína e gordura corporal e morfometria da mucosa intestinal de pintos de corte. No primeiro experimento, o objetivo foi avaliar o efeito dos níveis de energia metabolizável (EM) e de lisina digestível (LD), sobre o desempenho de pintos de corte de 1 a 10 dias de idade, taxa de deposição de proteína e características morfométricas intestinais. Foram utilizados 1.152 pintos de corte, com peso médio de 55g, distribuídos em delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial 4x4, sendo quatro níveis de EM (2.700; 2.825; 2.950; e 3.075 kcal.kg-1) e quatro níveis de LD (1,080; 1,187; 1,295 e 1,403%), resultando em 16 tratamentos com três repetições e 24 aves cada. Os níveis de lisina digestível e energia metabolizável atuaram de maneira independente no desempenho de pintos de corte na fase pré-inicial, onde os níveis de energia metabolizável exerceram aumento linear (P<0,05) no ganho de peso, e em relação ao consumo de ração e conversão alimentar exerceram efeito quadrático (P<0,05). Os níveis de lisina digestível exerceram efeito quadrático (P<0,05) para o ganho de peso e conversão alimentar, e para o consumo de ração exerceu aumento linear (P<0,05). Em relação a taxa de deposição de proteína (TDP) e de gordura (TDG) não foram influenciadas significativamente, no entanto, a TDG foi influenciada de forma linear pelos níveis crescentes de lisina. Houve interação significativa entre os níveis de EM e LD sobre a morfometria da mucosa intestinal (P<0,05) referente à altura de vilosidade do duodeno, jejuno e relação vilo:cripta do íleo. Observou-se que para a fase pré-inicial de pintos de corte o nível de lisina digestível para maior ganho de peso é de 1,271% e para conversão alimentar, 1,221%; sendo que o nível de energia metabolizável para ganho de peso e conversão alimentar é de 3075 kcal.kg-1. Os níveis de lisina digestível e energia metabolizável apresentam efeito positivo sobre o desenvolvimento intestinal dos pintos de corte na fase pré-inicial. No segundo experimento o objetivo foi avaliar o efeito dos níveis de energia metabolizável e lisina digestível no desempenho de pintos de corte de 8 a 21 dias de idade (fase inicial), taxa de deposição de proteína e gordura na carcaça e morfometria da mucosa intestinal. Foram utilizados 864 pintos de corte, com 8 dias de idade, com peso médio de 125g, distribuídos ao acaso em 48 boxes, em esquema fatorial 4x4 sendo quatro níveis de EM (2.700; 2.825; 2.950; e 3.075 kcal.kg-1) e quatro níveis de LD (1,080; 1,187; 1,295 e 1,403%) totalizando em 16 tratamentos com três repetições cada. O maior nível de LD estudado (1,403%) e o maior nível de EM (3075 kcal.kg-1) proporcionaram melhores resultados de para peso final e ganho de peso para frangos de corte de 8 a 21 dias de idade. Para melhor conversão alimentar o nível indicado é de 3075 kcal.kg-1 para 1,080% de lisina digestível. O maior nível de EM (3.075 kcal.kg-1) e de LD (1,403%) promoveram melhor taxa de deposição de proteína na carcaça enquanto que os maiores níveis de EM e LD promoveram maior taxa de deposição de gordura na carcaça. O aumento simultâneo de energia metabolizável e lisina digestível provocaram um efeito linear (P<0,05) na altura de vilosidade do duodeno, jejuno e relação vilo:cripta do íleo. Os níveis de energia metabolizável e lisina digestível da dieta influenciam o desempenho de pintos de corte, no período de 8 a 21 dias de idade. Recomenda-se o uso de 3.075 kcal.kg-1 de EM e 1,403% de LD, ou maior, para melhor desempenho, taxa de deposição de proteína, bem como melhor desenvolvimento das características morfométricas intestinais de pintos de corte na fase inicial, de 8 a 21 dias de idade

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:48:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Doglas_Lazzeri.pdf: 319692 bytes, checksum: ab1f14cee65939d583d1aaf7427d892d (MD5) Previous issue date: 2011-07-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Aiming to determine the digestible isoleucine requirement for barrows from 15 to 30 kg, two experiments were conducted, being one of digestibility and another of performance. Ten crossbreed barrows with average initial weight of 15.00 ± 0.27 kg were used to determine the ileal digestibility coefficient of amino acids from basal diet. The animals were housed individually in metabolic cages in a completely randomized design, with two treatments, five replicates and one animal per experimental unit. The treatments consisted of a basal diet with 14.13% crude protein and 0.45% isoleucine, and a free protein diet. Forty crossbreed barrows with average initial weight of 15.00 ± 0.87 kg were used to determine the digestible isoleucine requirement. The animals were distributed in a randomized block design with five treatments (0.45, 0.52, 0.59, 0.66 and 0.73% digestible isoleucine), four replicates and two animals per experimental unit. The coefficients of true ileal digestibility of essential amino acids were higher than the coefficients of apparent ileal digestibility and threonine, methionine+cystine and valine had the biggest increases. The true ileal digestibility of basal diet for lysine, threonine and tryptophan were higher than the true ileal digestible calculated amino acids. The same was not observed for true ileal digestibility of basal diet of arginine, histidine, isoleucine, leucine, methionine, methionine+cystine, phenylalanine and valine. The protein deposition rate had a quadratic effect (P<0.05) which the level of 0.600% digestible isoleucine had the highest protein deposition in carcasses of pigs. The daily isoleucine intake had quadratic effect (P<0.01), which level of 0.938% digestible isoleucine provided the higher intake. There was linear effect (P<0.01) on efficiency of isoleucine utilization for weight gain, with reduction on values of EIleUWG as levels of digestible isoleucine increased in rations. A quadratic effect (P=0.09) of digestible isoleucine levels on the final weight was observed, with better values for the level 0.599%. The level of 0.60% digestible isoleucine obtained in the present work provided a digestible isoleucine:lysine relation of 0.60. The daily requirement of digestible isoleucine was 5.86 g/day, providing 1.76g of digestible isoleucine/Mcal of metabolizable energy / Com o objetivo de determinar a exigência de isoleucina digestível para suínos machos castrados dos 15 aos 30 kg de peso vivo, foram realizados dois experimentos, um de digestibilidade e outro de desempenho. Para determinar o coeficiente de digestibilidade ileal dos aminoácidos da ração basal, foram utilizados 10 suínos, machos castrados, mestiços, com peso médio inicial de 15,00±0,27 kg, alojados individualmente em gaiolas de metabolismo, em um delineamento inteiramente ao acaso, com dois tratamentos, cinco repetições e um animal por unidade experimental. Os tratamentos consistiram de uma dieta basal, com 14,13% de proteína bruta e 0,450% de isoleucina, e uma dieta isenta de proteína. Na determinação da exigência de isoleucina digestível para suínos machos castrados, foram utilizados 40 suínos mestiços, com peso médio inicial de 15,00±0,87 kg, distribuídos em um delineamento experimental de blocos casualizados, com cinco tratamentos (0,45; 0,52; 0,59; 0,66 e 0,73% de isoleucina digestível), quatro repetições e dois animais por unidade experimental. Os valores dos coeficientes de digestibilidade ileal verdadeira dos aminoácidos essenciais foram maiores do que os coeficientes de digestibilidade ileal aparente, sendo a treonina, a metionina + cistina e a valina os aminoácidos que apresentaram os maiores aumentos. Os valores de digestibilidade ileal verdadeira da dieta basal para lisina, treonina e triptofano foram superiores aos valores de aminoácidos digestíveis ileais verdadeiros calculados. O mesmo não foi observado para os valores de digestibilidade ileal verdadeira da dieta basal dos aminoácidos arginina, histidina, isoleucina, leucina, metionina, metionina + cistina, fenilalanina e valina. A taxa de deposição de proteína apresentou efeito quadrático (P<0,05), em que o nível de 0,600% de isoleucina digestível proporcionou a maior deposição de proteína na carcaça dos suínos. Houve efeito quadrático (P<0,01) dos níveis de isoleucina digestível sobre o consumo diário de isoleucina, com estimativas de melhor consumo para o nível de 0,938%. Foi observada diferença linear (P<0,01) apenas para a eficiência de utilização de isoleucina para ganho, em que o modelo linear apresentou redução nos valores de eficiência à medida que aumentaram os níveis de isoleucina digestível nas rações. Foi observado efeito quadrático (P=0,09) dos níveis de isoleucina digestível sobre o peso final, com melhores valores obtidos para o nível de 0,599%. O nível de 0,60% de isoleucina digestível, obtido no presente estudo, proporcionou uma relação isoleucina:lisina digestível de 0,60. A exigência diária de isoleucina digestível foi de 5,86 g/dia, proporcionando um consumo de 1,76 g de isoleucina digestível/Mcal de energia metabolizável

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:48:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sandra_Elisa_Schneider.PDF: 294647 bytes, checksum: 05675a02350b5b1d8181899f53ffda67 (MD5) Previous issue date: 2011-09-30 / Two experiments were carried with the aiming at determining the nutritional requirement of digestible lysine for brow-egg laying hens. The first experiment was performed at the end of the first production cycle, in the period from 50 a 66 weeks of age and the second with birds in the period from 74 to 90 weeks of age. In both experiments, 150 layers Shaver Brow laying hens, distributed in a completely randomized design, with five treatments (digestible lysine levels: 0.79, 0.82, 0.85, 0.8 and 0.91%), six replications and five birds for experimental unit. The experimental period lasted 16 weeks and it was divided in four periods of collection of the eggs, being each one corresponding to 28 days. The parameters evaluates were the productive performance (production, mass and egg´ weight), of the intake consumption (feed and lysine), of the feed conversion (mass and egg dozen), egg components (albumen, yolk and shell), of the egg quality (albumen and yolk index, Haugh units and egg shell specific quality). In the first experiment, the productive performance, the feed intake, the feeds conversions, the components percentage, egg quality and yolk index were not influenced (P>0.05) by the levels of digestible lysine, except for the lysine intake which show a linear response (P<0.05) with increase in the digestible lysine levels. For the albumen index and Haugh units, the LRP model (Linear Response Plateau) adjusted better to the data, estimating at 0.832% and 0.883 % of the lysine digestible, respectively. In the second experiment, was observed a linear increase (P<0.05) of lysine intake increased as the level of dietary lysine and quadratic effect (P<0.05) of the yolk percentages, estimating the level of 0,837% digestible lysine for the lowest percentage of yolk. Variables such as performance, consumption, feed conversion, components percents and egg quality had not shown significant differences (P>0.05). Based on productive parameters that were not influenced by levels of lysine diets in both experiments, suggested the level of 0.79% of lysine, for brow-egg laying hens in the period from 50 to 66 weeks and 74 to 90 weeks of age / Foram conduzidos dois experimentos com o objetivo de determinar a exigência nutricional de lisina digestível para poedeiras semipesadas. O primeiro experimento foi realizado ao final do primeiro ciclo de produção, no período de 50 a 66 semanas de idade e o segundo com aves no período de 74 a 90 semanas de idade. Em ambos os experimentos, foram utilizadas 150 poedeiras semipesadas da linhagem Shaver Brow, distribuídas em um delineamento inteiramente casualizado (DIC) contendo cinco tratamentos (níveis de lisina digestível: 0,79; 0,82; 0,85; 0,88 e 0,91%), seis repetições e cinco aves por unidade experimental. Cada período experimental teve duração de 16 semanas, subdividido em quatro períodos de coleta dos ovos, sendo cada um correspondente a 28 dias. Foram avaliados os parâmetros de desempenho (produção, peso e massa de ovos), de consumo (ração e lisina), de conversão alimentar (dúzia e massa de ovos), de componentes dos ovos (porcentagem de gema, de casca e de albúmen) e de qualidade interna e externa dos ovos (índice de gema e de albúmen, unidade Haugh e gravidade específica). No primeiro experimento, o consumo de ração, as conversões alimentares, os percentuais dos componentes, a qualidade externa e o índice de gema dos ovos não foram influenciados (P>0,05) pelos níveis de lisina digestível, com exceção para consumo de lisina que aumentou linearmente (P<0,05) conforme aumentou o nível deste aminoácido na ração. Para o índice de albúmen e unidade Haugh, o modelo LRP (Linear Response Plateau) melhor se ajustou aos dados, estimando em 0,832% e 0,883% de lisina digestível, respectivamente. No segundo experimento, observou-se aumento linear (P<0,05) sobre o consumo de lisina conforme aumentou o nível deste aminoácido na ração e efeito quadrático (P<0,05) sobre a porcentagem de gema, estimando-se o nível de 0,837% de lisina digestível para menor valor desta variável. Os parâmetros de desempenho, consumo, conversão alimentar, porcentagens dos componentes, qualidade interna e externa não apresentaram diferenças significativas (P>0,05). Com base nos parâmetros produtivos que não foram influenciados pelos níveis de lisina das rações em ambos os experimentos é sugerido o nível de 0,79% de lisina digestível, para poedeiras semipesadas nos períodos de 50 a 66 semanas e de 74 a 90 semanas de idade

Made available in DSpace on 2017-07-10T18:13:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Romulo Batista Rodrigues.pdf: 1330851 bytes, checksum: 4991e2d69fa6f7d58830a99378844e76 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The valine is part of the branched chain amino group together with leucine and isoleucine, and has an important structural role and anabolic. Two experiments were conducted in order to determine the requirement of valine for fingerlings and juveniles of tilapia, by assessing the growth performance, and analysis of chemical composition of housing, hematological and biochemical blood, and white muscle morphometric. In the first experiment were used 270 tilapia fingerlings whit initial average weight of 1.57 ± 0.05 g total initial length of 4.16 ± 0.46 cm, distributed in completely randomized design with six treatments and three replications, using 18 boxes with 250 liter of capacity during the experimental period of 79 days. In the second experiment were used 216 tilapia juveniles with initial average weight of 21.40 ± 0.42g and initial total length of 10.07 ± 1.00 cm, distributed in 18 boxes whit 500 liters of capacity during the experimental period of 77 days. The treatments consisted of diets with increasing concentrations of valine, being for fingerlings (0.82, 0.86, 0.98, 1.04, 1.10 and 1.26% valine) and juvenile (0.54, 0.63, 0.72, 0.81, 0.90 and 0.99% valine). Feed has been held four times a day to apparent satiation. Evaluated the growth performance (weight gain, feed conversion, daily weight gain, protein efficiency ratio, condition factor, survival, protein retention efficiency, visceral fat, liver somatic index, specific growth rate and uniformity of the lot) for fingerlings and juveniles; fish proximate composition (moisture, crude protein, lipids and ash) for fingerlings and juveniles; hematological and biochemical indices of the blood (hemoglobin, erythrocytes count, hematocrit percent, total leukocytes, total thrombocytes, plasma protein, glucose, triglyceride and cholesterol) for juvenile and distribution of muscle fibers to fingerlings and juveniles. There was no statistical difference (P>0.05) for the performance variables, chemical composition and histology between the different treatments evaluated to fingerlings. For juvenile tilapia, on the performance were observed significant differences (P<0.05) between treatments for weight gain, daily weight gain and feed conversion. For hematological and biochemical parameters of blood, there were significant differences (P<0.05) between treatments for hemoglobin, total triglycerides and total cholesterol. Significant differences in the chemical composition of fish and frequency of muscle fibers were observed. It is concluded that the nutritional requirements are met with valine 0.82% valine in the diet (2.65% valine crude protein) for minnows and 0.81% of valine in the diet (2.90% valine crude protein) for juvenile Nile tilapia. / A valina faz parte do grupo de aminoácidos de cadeia ramificada, juntamente com a leucina e isoleucina, e possui importante papel estrutural e anabólico. Foram realizados dois experimentos com o objetivo de determinar a exigência nutricional de valina para alevinos e juvenis de tilápias do Nilo, por meio da avaliação do desempenho zootécnico, e das análises de composição química da carcaça, perfil hematológico e bioquímico do sangue, e da morfometria do músculo esquelético. No primeiro experimento, foram utilizados 270 alevinos de tilápia com peso médio inicial de 1,57 ± 0,05 g e comprimento total inicial de 4,16 ± 0,46 cm, distribuídos em um delineamento inteiramente ao acaso com seis tratamentos e três repetições, utilizando 18 caixas com 250 litros de capacidade, durante período experimental de 79 dias. No segundo experimento, foram utilizados 216 juvenis de tilápia com peso médio inicial de 21,40 ± 0,42 g e comprimento total inicial de 10,07 ± 1,00 cm, distribuídos em um delineamento inteiramente ao acaso com seis tratamentos e três repetições, utilizando 18 caixas com 500 litros de capacidade, durante período experimental de 77 dias. Os tratamentos consistiam em dietas com concentrações crescentes de valina, sendo para alevinos (0,82; 0,86; 0,98; 1,04; 1,10 e 1,26 % de valina na dieta) e para juvenis (0,54; 0,63; 0,72; 0,81; 0,90 e 0,99 % de valina na dieta). A alimentação foi realizada quatro vezes ao dia até a saciedade aparente. Avaliou-se o desempenho zootécnico (ganho em peso, conversão alimentar aparente, ganho em peso diário, taxa de eficiência proteica, fator de condição, sobrevivência, eficiência de retenção proteica, gordura visceral, índice hepatossomático, taxa de crescimento específico e uniformidade do lote) para alevinos e juvenis; a composição centesimal dos peixes (umidade, proteína bruta, extrato etéreo e cinzas) para alevinos e juvenis; os índices hematológicos e bioquímicos do sangue (taxa de hemoglobina, contagem de eritrócitos, percentual de hematócritos, leucócitos totais, trombócitos totais, proteína plasmática, glicose, triglicerídeos e colesterol) para juvenis e a distribuição das fibras musculares para alevinos e juvenis. Não houve diferença estatística (P>0,05) para as variáveis de desempenho, composição centesimal e histologia entre os diferentes tratamentos avaliados para alevinos. Para os juvenis de tilápia, no desempenho zootécnico observaram-se diferenças significativas (P<0,05) entre os tratamentos para o ganho em peso, ganho em peso diário e conversão alimentar aparente. Para os parâmetros hematológicos e bioquímicos do sangue, observaram-se diferenças significativas (P<0,05) entre os tratamentos para taxa de hemoglobina, triglicerídeos totais e colesterol total. Não foram observadas diferenças significativas para a composição centesimal dos peixes e frequência das fibras musculares. Conclui-se que as exigências nutricionais de valina são atendidas com 0,82% de valina na dieta (2,65% de valina da proteína bruta) para alevinos e 0,81% de valina na dieta (2,90% de valina) para juvenis de tilápias do Nilo.

A restrição calórica (RC) é uma intervenção dietética capaz de estender a longevidade de vários organismos. O modelo para RC em Saccharomyces cerevisiae consiste da diminuição da concentração de glicose no meio de cultura e mostra um aumentado tanto do tempo de vida cronológico quanto replicativo. Nosso objetivo foi investigar experimentalmente a ação da RC, focando principalmente nas causas e consequências das modificações de geração de EROs mitocondriais e como estas estão associadas ao processo de envelhecimento. Em um primeiro período de estudos, verificamos quais as fontes mitocondriais de EROs, e comprovamos que uma quantidade significativa se origina de proteínas da matriz mitocondrial, e não da cadeia de transporte de elétrons. Nós estudamos a participação de glicose e de outras fontes de carbono sobre o tempo de vida cronológico em leveduras e mostramos que o aumento da longevidade promovida pela RC está associado à uma mudança de metabolismo fermentativo para respiratório, com participação da via de sinalização de glicose. No estágio realizado no laboratório do Professor Francis Sluse na Université de Liegè, Bélgica, estudamos a ação da RC em leveduras focando nas consequências das modificações no proteoma mitocondrial. Em nosso estudo proteômico, encontramos grandes modificações em proteínas envolvidas com o metabolismo de aminoácidos. Monitoramos a atividade de enzimas relacionadas ao metabolismo de aminoácidos e o tempo de vida cronológico de S. cerevisiae e as mutantes nulas bat2&#916;, gdh1&#916;, gdh2&#916; e gdh3&#916;, que codificam a aminotransferase de aminoácidos de cadeia ramificada citosólica, NADP glutamato desidrogenase citosólica, a NAD glutamato desidrogenase mitocondrial, e a NADP glutamato desidrogenase mitocondrial, respectivamente. A atividade da NAD glutamato desidrogenase é aumentada em RC, mas a de NADP glutamato desidrogenase decresce em células controle. Aumentos do tempo de vida cronológico foram observados nas mutantes bat2&#916; e gdh1&#916; devido a RC, mas nenhuma diferença significativa foi encontrada nas mutantes nulas para Gdh2p e Gdh3p em fase estacionária, indicando que essas proteínas são essenciais para os efeitos benéficos da RC. Nessas células WT crescidas em condições normais e as mutantes nulas apresentam iguais longevidades. Juntos, nossos resultados indicam que o aumento da longevidade em S. cerevisiae promovida pela RC depende da interação entre o sinal de glicose e o metabolismo de aminoácidos. / Calorie restriction (CR) is a dietary intervention capable of extending lifespans in a wide range of organisms. A yeast model of CR has been developed in which limiting the concentration of glucose in growth media of Saccharomyces cerevisiae leads to enhanced chronological and replicative life spans. Our aim was to experimentally investigate the effects of CR, focusing mainly on the causes and consequences of changes in mitochondrial reactive oxygen species (ROS) generation and how these are associated with the aging process. Initially, we looked for sources of mitochondrial ROS, and found that a significant amount of ROS comes from mitochondrial matrix enzymes and not from the electron transport chain. We studied the participation of glucose and other carbon sources in chronological lifespan and show that increased longevity promoted by CR is associated with a metabolism change from fermentation to respiration, with participation of glucose repression pathway. During studies performed in the laboratory of Professor Francis Sluse at the Université de Liège, Belgium, we studied the effect of CR in yeast with focus on the consequences of changes in the mitochondrial proteome. We found large proteomic changes in proteins involved in amino acid metabolism. We monitored the activity of enzymes related to amino acid metabolism and chronological life span of S. cerevisiae null mutants bat2&#916;, gdh1&#916;, gdh2&#916;, and gdh3&#916;, which encode for the cytosolic branched-chain amino acid aminotransferase, cytosolic NADP glutamate dehydrogenase, mitochondrial NAD glutamate dehydrogenase and mitochondrial NADP glutamate dehydrogenase, respectively. The activity of NAD glutamate dehydrogenase is increased in CR, but NADP glutamate dehydrogenase decreases in control cells. Increases in chronological life span due to RC were observed in bat2&#916; and gdh1&#916; mutants, but no significant difference was found in Gdh2p and Gdh3p null mutants in the stationary phase, indicating that these proteins are essential for the beneficial effects of CR. In rich medium, WT cells and null mutants have similar life spans. Together, our results indicate that longevity enhancement by CR in S. cerevisiae depends on the interaction between glucose signals and amino acid metabolism

No presente experimento, foi testada a inclusão do éster isopropílico do análogo de metionina (HMBi) no concentrado de vacas Holandesas (HPB) e vacas ½ HPB ½ Jersey mantidas em pastagens de capim Elefante, com o objetivo de atingir relação entre lisina e metionina de 3:1 na proteína metabolizável. As variáveis avaliadas foram a produção e composição de leite. A massa de forragem e as composições nutricional e morfológica da pastagem também foram avaliadas. Foram utilizadas 16 vacas HPB e 12 vacas ½ HPB ½ Jersey, com aproximadamente 150 dias em lactação no início do período experimental. A pastagem de capim Elefante foi manejada em sistema rotacionado com dois dias de ocupação e período de descanso variável, determinado pela altura do dossel de 1m para a entrada dos animais no piquete. A pastagem foi adubada com 80 kg de N por ciclo de pastejo. As vacas experimentais faziam o pastejo no primeiro dia de ocupação e animais extras do rebanho realizavam o repasse no segundo dia de ocupação de cada piquete, garantindo que o resíduo pós pastejo ficasse em torno de 40 cm. A pastagem continha em média 22% de PB, 66% de FDN e 71,5% de DIVMS. O concentrado foi fornecido individualmente, na dose média de 6,6 kg de MN por vaca/dia com base na relação 1 kg de concentrado para cada 3 kg de leite, estabelecida no início do período experimental. O concentrado era idêntico entre os tratamentos, com exceção da inclusão ou não do éster análogo da metionina (HMBi). O delineamento experimental utilizado foi em crossover (2x2), dois tratamentos e dois períodos. Exceto os dados de contagem de células somáticas, os dados foram analisados pelo PROC MIXED (SAS® versão 9.1.3, 2003). Para os dados de células somáticas foi utilizada uma distribuição de Poisson, sendo analisados sob abordagem de modelos lineares generalizados. Não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas para produção de leite (16,20 x 16,49), produção de leite corrigido para 3,50% de gordura (16,34 x 16,61), concentração de gordura no leite (3,57 x 3,57%) e concentração protéica no leite (3,12 x 3,13%), respectivamente para as vacas do grupo controle e as que receberam HMBi. Vacas ½ HPB ½ Jersey, apesar do menor peso corporal e menor consumo de concentrado, produziram leite com maior teor protéico que vacas HPB, e produziram a mesma quantidade de gordura e de proteína láctea. / In this trial, was tested the inclusion of isopropyl ester of methionine analogue (HMBi) in the concentrate of BWH cows and ½ BWH ½ Jersey cows kept in pastures of Elephant grass, with the goal of achieving lysine: methionine ratio of 3:1 in metabolizable protein. Variables analyzed were milk production and composition. The forage mass and the nutritional composition and morphology of the pasture were also evaluated. 16 Holstein cows and 12 ½ WBH ½ Jersey cows, with approximately 150 days in milk at the beginning of the trial period were used. The Elephant grass pasture was managed by rotational system with two days of occupation and variable rest period, determined by the sward height of 1m at the entry of animals in each paddock. The pasture was fertilized with 80 kg N per grazing cycle. The experimental cows were grazed in the first occupation day and extra animals of the herd grazed on the second occupation day of each paddock, ensuring the post grazing residue to be around 40 cm. The pasture contained on average 22% of CP, 66% of NDF and 71.5% of IVDDM. The concentrate was provided individually, the average dose of 6.6 kilograms of MN per cow per day, based on 1 kg of concentrate for every 3 kg of milk, established at the beginning of the trial period. The concentrate was similar among treatments, except for the inclusion or not of methionine ester analog (HMBi). The experimental design was a crossover (2x2), two treatments and two periods. Except the somatic cell count, the data were analyzed by the PROC MIXED (SAS ® version 9.1.3, 2003). For SCC data was used a Poisson distribution, and examined under approach of generalized linear models. There were no statistically significant differences in milk production (16.20 x 16.49), 3,50% fat corrected milk production (16.34 x 16.61), milk fat concentration (3.57 x 3.57%) and milk protein concentration (3.12 x 3.13%) respectively for cows from the control group and those receiving HMBi. Cows ½ BWH ½ Jersey, despite the lower body weight and lower concentrate intake, produced milk with higher protein content than cows BWH, and produced the same amount of milk fat and protein.

O aumento da participação dos biocombustíveis na matriz energética mundial pode ajudar a prolongar a existência das reservas de petróleo, mitigar as ameaças representadas pela mudança climática e permitir melhor segurança do fornecimento de energia em uma escala global. Neste cenário, o processo brasileiro da produção de etanol a partir da cana-de-açúcar tem ganhado papel de destaque, pelo alto rendimento e baixo custo da produção. Linhagens de S. cerevisiae são amplamente empregadas nas fermentações industriais e, embora sejam consideradas mais tolerantes em relação a outras, o processo brasileiro impõe uma variedade de fatores estressantes sob a mesma, afetando o seu metabolismo e crescimento. A fermentação com alto teor alcoólico, realizada a partir da utilização de mostos contendo altas concentrações de açúcares, é uma das maneiras mais eficientes de se obter elevados níveis de etanol. No entanto, tal tecnologia procede ocasionando efeitos deletérios adicionais à levedura. Neste contexto, aumentar a tolerância da levedura é de fundamental importância para alcançar um desempenho fermentativo satisfatório. Neste estudo foram avaliadas linhagens de S. cerevisiae, isogênicas a linhagem industrial CAT-1, com a sobre-expressão dos genes TRP1 e MSN2, envolvidos na biossíntese de triptofano e na resposta geral ao estresse, respectivamente. Tais linhagens foram avaliadas quanto ao seu potencial para realizar fermentações com alto teor alcoólico, simulando as condições industriais brasileiras. Os resultados revelaram que o gene MSN2, na versão truncada, favoreceu a linhagem principalmente com relação ao estresse osmótico, aumentando a velocidade de fermentação e o consumo de açúcares. O gene TRP1 promoveu maior crescimento da linhagem em meio YEPD com 8% de etanol, contudo, tornou a linhagem menos viável em concentrações acima deste nível. No presente trabalho também foi avaliado o efeito da suplementação de aminoácidos na fisiologia da linhagem CAT-1 em meio YNB e em mostos de melaço e xarope de cana-de-açúcar. A suplementação com histidida promoveu maior crescimento e viabilidade celular nos diferentes meios testados. Além de histidina, os aminoácidos lisina e alanina aumentaram o crescimento da CAT-1 em mosto de melaço. A suplementação de triptofano e asparagina também promoveu aumento da viabilidade celular em mosto de xarope. Por outro lado, nos testes em microplacas a suplementação com cisteína depreciou o crescimento da linhagem em meio YNB com 10 e 12% de etanol e em mosto de melaço com 20% de ART. Os resultados obtidos indicam que tanto a engenharia genética, quanto a suplementação de aminoácidos podem ser alternativas viáveis para aumentar a tolerância de S. cerevisiae, para suportar condições de múltiplo estresse, encontradas em destilarias brasileiras. / The expansion biofuels participation in the world energy matrix would help to extend the existence of fossil fuel reservoirs, mitigate the threats of climate change, and enable a better security of energy supply. The Brazilian process of ethanol production from sugarcane has gained an important role in the global energy scenario, for the high yield and low production cost. S. cerevisiae species is widely used in industrial fermentations for being resistant, but the Brazilian process imposes a variety of stressing factors to the yeast, affecting its metabolism and growth. The Very High Gravity Fermentation is performed by the utilization of musts with high sugar concentration and is one of the most efficient ways for obtaining high ethanol levels. However, this technology causes additional deleterious effects to the yeast. In this context, increasing yeast tolerance is of fundamental importance for a satisfactory fermentative performance. In this study we assessed S. cerevisiae strains - isogenic to the industrial strain CAT-1 - with over expression of TRP1 and MSN2 genes involved to tryptophan biosynthesis and in general stress response, respectively. These strains were evaluated for their potential to perform fermentations with high ethanol content, simulating the conditions of Brazilian distilleries. The results showed that the MSN2 gene in the truncated version improved strain mainly to respond to the osmotic stress, increasing in fermentation velocity and the consumption of sugars. The TRP1 gene overexpression promoted higher growth in YEPD medium with 8% ethanol, however, decreased viability at concentrations above this level. The present work also evaluated the effect of amino acid supplementation on the physiology of the CAT-1 strain in YNB medium and in molasses and syrup of sugarcane. Histidide supplementation increased the growth and cell viability in the different media tested. In addition to histidine, the amino acids lysine and alanine increased the growth of CAT-1 in molasses. Supplementation of tryptophan and asparagine also promoted increased cell viability in sugarcane syrup. On the other hand, in microplate assays, cysteine supplementation decreased growth in YNB medium with 10 and 12% ethanol, and in molasses with 20% ART. The results indicate that both genetic engineering and amino acid supplementation may be viable alternatives to increase tolerance of S. cerevisiae to supporting multiple stress conditions typical in Brazilian distilleries.

O tratamento atual indicado para casos de envenenamentos por peçonhas é a administração intravenosa de antivenenos, produzidos através da hiperimunização de animais. Entretanto, os antivenenos disponíveis podem, algumas vezes, não proteger os pacientes e causar reações de hipersensibilidade. Fosfolipases A2 (PLA2), L-aminoácido oxidases (LAAO), metalo e serinoproteases são os principais componentes de peçonhas ofídicas e contribuem para a neurotoxicidade, hemorragia, hemólise, miotoxicidade, cardiotoxicidade e formação de edemas. Foram empregados ensaios para avaliar as atividades das enzimas presentes na peçonha de serpentes da espécie Lachesis muta rhombeata e aquele para atividade de protease foi otimizado. A tecnologia de Phage display foi empregada para a seleção de fagos-anticorpos capazes de reconhecer a peçonha bruta. Os fagos foram amplificados em Escherichia coli TG1 e usados para infectar E. coli HB2151, a qual produz fragmentos de anticorpos humanos solúveis. Estes foram purificados e utilizados em testes de inibição de alguns dos componentes tóxicos da peçonha. Os testes de atividade para PLA2, protease e Laminoácido oxidase foram padronizados com sucesso e as 3 proteínas mostraram elevada atividade enzimática. Após otimização, a quantidade de peçonha necessária para o ensaio de protease foi reduzida em 25 vezes. A massa molecular de PLA2 foi estimada em 17 kDa e as massas moleculares de proteases foram estimadas em 40, 35 e 24 kDa, através de zimogramas. O método de bio panning foi eficiente para a seleção de fagos-anticorpos contra a peçonha bruta. Diversos fragmentos de anticorpos foram purificados e incubados com a peçonha bruta para testar suas capacidades de neutralização sobre cada enzima. Cinco clones demonstraram-se hábeis em inibir a PLA2 através da inibição da hemólise. O clone 4E inibiu 100% da hemólise durante as duas horas de ensaio quando pré-incubado na proporção 2:1 (scFv:peçonha). Os clones 2C e 4E inibiram 100% durante uma hora quando pré-incubados na proporção 1:1 e os clones 2F e 9F inibiram a hemólise parcialmente. Outros testes serão conduzidos para a seleção de clones capazes de neutralizar as demais enzimas, os quais, juntamente com os clones já selecionados, serão analisados através de ensaios in vivo. Espera-se que eles possam contribuir para a construção de um novo antiveneno capaz de superar algumas das dificuldades associadas às técnicas de imunoterapia convencionais / The current treatment for animal envenoming is the intravenous administration of antivenoms, produced by animal hyperimmunization. Unfortunately, available antivenoms sometimes do not protect patients and may cause hypersensitivity reactions. Phospholipases A2 (PLA2), L-amino acid oxidases, metallo and serine proteases are considered the most important snake venom components and contribute to neurotoxicity, hemorrhage, hemolysis, myotoxicity, edematogeny and cardiotoxicity. Assays for evaluating the enzymes present in Lachesis muta rhombeata venom were developed and the protease one was optimized. Phage display technology was used to select phage antibodies able to recognize the crude venom. Phages were amplified in Escherichia coli TG1 and used to infect E. coli HB2151, which produces human antibody fragments. Inhibition tests aiming the neutralization of some toxic components of the venom were performed using purified antibody fragments. Activity assays for evaluating PLA2, protease and L-aminoacid oxidase were successfully performed and all enzymes showed high activity levels. The molecular mass of PLA2 was estimated in 17 kDa and the molecular mass of proteases were estimated in 40, 35 and 24 kDa, by zymography. After optimizing the conditions for proteolytic assay, it was possible to use 25 times less venom than it was necessary at first. The bio panning method was efficient for selecting specific phage antibodies against the crude venom. Several clones were selected to infect HB2151 and to produce soluble antibody fragments, which were purified and incubated with the venom to test their inhibition capacity over each enzyme. Five clones demonstrated ability to neutralize PLA2 by inhibiting hemolysis. The clone 4E could inhibit 100% of hemolysis for over 2 hours when preincubated at the ratio 2:1 (scFv:venom). Clones 2C and 4E could inhibit 100% for 1 hour when preincubated at the ratio 1:1 and clones 2F e 9F could inhibit partially. Other tests will be performed to select clones able to neutralize other enzymes and, together with the clones already selected, will be evaluated by in vivo experiments. It is expected that they may contribute to the construction of a potential new antivenom able to overcome some of the problems associated with conventional immunotherapy

O pacu, Piaractus mesopotamicus, é um caracídeo neotropical autóctone, de hábito alimentar onívoro, largamente utilizado na aqüicultura brasileira. No entanto, alguns aspectos da sua nutrição permanecem controversos ou desconhecidos. O presente trabalho visou determinar a exigência em proteína, energia e aminoácidos para juvenis de pacu por meio da avaliação de parâmetros de desempenho, composição corporal e hematológicos em dois ensaios distintos. No primeiro ensaio, juvenis de pacu (15.5±0.4 g) foram alimentados durante 10 semanas, duas vezes ao dia, com dietas contendo teores de proteína bruta (PB) entre 22 e 38% (incremento de 4%) e energia digestível (ED) entre 2600 e 3400 kcal kg-1 (incremento 200 kcal kg-1), em um delineamento totalmente aleatorizado, em esquema fatorial 5 × 5 (n=3). O ganho de peso (GP) e a taxa de crescimento específico (TCE) aumentaram significativamente com a elevação da PB dietética. A retenção de nitrogênio (RN) e a taxa de eficiência protéica (TEP) diminuíram (p<0,05) com o aumento da proteína das dietas em todos os níveis de ED testados. As concentrações de ED afetaram (p<0,05) a concentração de umidade, proteína, gordura, matéria mineral e energia bruta corporal e o fator de condição. A taxa de eficiência econômica foi influenciada pela proteína (p<0,05) e energia digestível (p<0,05) das dietas e pela interação entre ambas (p<0,05). Entretanto, o índice de lucratividade econômica somente foi influenciado pela concentração de proteína bruta (p<0,05) das dietas. Efeito significativo (p<0,05) dos tratamentos nos parâmetros hematológicos foi registrado para taxa de hemoglobina, concentração de hemoglobina corpuscular média, proteína plasmática total e glicose plasmática. A exigência mínima para ganho de peso de juvenis de pacu é 27% de PB, com relação PB:ED ótima de 92,9 mg PB kcal-1 ED. As concentrações protéicas e energéticas estudadas não causaram prejuízos a saúde dos peixes. A exigência em lisina dietética para juvenis do pacu Piaractus mesopotamicus, com peso inicial de 4,3 g, foi determinada fornecendo cinco dietas experimentais isonitrogenadas (32% proteína bruta) contendo caseína, gelatina e L-aminoácidos cristalinos com níveis crescentes de lisina (0,90; 1,17; 1,44; 1,69 e 1,96% da matéria seca da dieta) por 74 dias. Cada dieta foi aleatoriamente designada para grupos (n=4) de 18 peixes alimentados três vezes ao dia até a aparente saciedade. Não foram observados mortalidade ou sinais de deficiência além da redução no desempenho dos peixes alimentados com dietas deficientes ou com excesso de lisina. O peso final (PF), GP, TCE, índice de eficiência alimentar (IEA), TEP, VPP, composição corporal, morfometria e hematologia foram afetados (p<0,05) pelas concentrações de lisina dietética. A análise polinomial quadrática indicou a exigência em lisina em 1,45, 1,51 e 1,43% da matéria seca da dieta, respectivamente para GP, IEA e VPP. Foram obtidos valores de lipídios e proteína corporais significativamente mais altos nos peixes alimentados com as dietas com 0,9 e 1,96% de lisina. Foi então determinado que a exigência em lisina para juvenis de pacu é de 1,5% da matéria seca da dieta. / Pacu, Piaractus mesopotamicus, a neotropical, omnivorous native characin, widely used in Brazilian aquaculture. However, some aspects of your nutrition are controversial or ignored. This work aimed at determining dietary protein, energy and amino acids requirements of juvenile pacu through the evaluation of performance, body composition and hematological parameters. In a first trial, pacu juveniles (15.5±0.4 g) were fed twice a day for 10 weeks until apparent saciety with diets containing crude protein (CP) from 22 to 38 % (intervals of 4%) and digestible energy levels among 2600 and 3400 kcal kg-1 (intervals of 200 kcal), in a totally randomized experimental design, 5 × 5 factorial scheme (n=3). Weight gain (WG) and specific growth rate (SGR) increased significantly with amount dietary CP. Nitrogen retention (NR) and protein efficiency ratio (PER) decreased (p<0.05) with increasing dietary protein at all tested levels of dietary energy. DE levels affected (p<0.05) whole body moisture, protein, fat, ash, gross energy and condition factor. Economic efficiency ratio was influenced by dietary protein (p<0.05) and digestible energy (p<0.05), and by interaction between the two factors. However, income was affected by dietary protein level (p<0.05) alone. Significant effect of treatments in hematological parameters were registered for mean corpuscular hemoglobin concentration, total plasma protein and plasma glucose. Crude protein requirements and optimum protein:energy ratio for weight gain of juveniles of pacu were 271 g kg-1 and 92.9 mg kcal-1, respectively. All dietary crude protein and digestible energy levels studied did not pose harms to fish health. Dietary lysine requirement of juvenile pacu Piaractus mesopotamicus (4.3 g) was determined by feeding five isonitrogenous (32% crude protein) amino acid test diets containing casein, gelatin and Lcrystalline amino acids with graded levels of lysine (0.90, 1.17, 1.44, 1.69 and 1.96% of dry diet) for 74 days, three times a day until apparent satiation, to groups (n=4) of 18 fish in a totally randomized design trial. No mortality or nutritional deficiency signs were observed; reduced growth was recorded for fish fed diets with either the lower or the higher lysine contents. Final weight (FW), WG, SGR, feed efficiency (FE), PER, NR, proximate whole body composition, morphometry and hematology were affected (p<0.05) by dietary lysine concentrations. Seconddegree polynomial regression analysis of WG and PER data indicated dietary lysine requirement of 1.45, 1,51 and 1.43% of dry diet, respectively to WG, FE and PPV. Significantly higher lipid and protein contents values were obtained for whole body of fish fed the diets with 0.9 and 1.96% of lysine. Lysine requirement of juvenile pacu was determined as being 1.5% of dry diet.