Orientador: Carmen Veríssima Ferreira Halder / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T12:47:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gomez_CintiaElisabeth_M.pdf: 3156937 bytes, checksum: f31ea6c3519ce92ea0573b1cfd1549a1 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O câncer de pâncreas é considerado a quarta causa de morte por doenças malignas nos países ocidentais. Entre os tipos de câncer de pâncreas exócrino cerca de 80-90% dos casos correspondem ao adenocarcinoma ductal, um câncer altamente agressivo, invasivo, potencialmente metastático e altamente resistente às quimio e radioterapias convencionais. Deste modo, novos compostos que diminuam o comportamento agressivo das células de câncer de pâncreas são necessários. Atualmente os inibidores das anidrases carbônicas (IAC), da família das sulfonamidas heterocíclicas/aromáticas (ex. etoxzolamida - EZA), estão sendo estudados como agentes antitumorais, antiepilépticos, entre outros. No entanto, pouco se sabe sobre o mecanismo molecular de ação antitumoral destes compostos. Deste modo, pela primeira vez, foi avaliado o efeito da EZA em câncer de pâncreas e outros tipos de tumores sólidos (melanoma e próstata) com fenótipos altamente agressivos. As linhagens celulares SKMel-103 (melanoma) e PANC-1 (câncer de pâncreas) apresentaram sensibilidade similar frente à EZA nos tempos de tratamentos de 48 e 72 h, PC-3 (câncer de próstata) apresentou maior resistência. Diante destes resultados prévios, e tendo em vista o interesse do nosso grupo de pesquisa em entender melhor a biologia do câncer de pâncreas, foi escolhida a linhagem celular PANC-1. O objetivo principal deste projeto foi estudar o mecanismo molecular de ação pela qual a EZA diminui a proliferação e a agressividade tumoral, analisando a expressão e função de biomarcadores chaves destes processos. EZA diminuiu a viabilidade das células PANC-1 (IC50 = 222 ?M) e induziu parada do ciclo celular na fase G0/G1 o que foi confirmado pelo decréscimo da expressão das proteínas chaves do ciclo celular, como ciclina D1 e CDK4. Adicionalmente, a expressão da quinase Pim-1, associada com resistência e sobrevivência foi marcadamente diminuída, sendo observada também uma redução da expressão da P-glicoproteína (Pgp), proteína associada com resistência a múltiplas drogas. Adicionalmente foi observado um aumento da atividade da quinase AKT, resultado que foi relacionado com o estresse no retículo endoplasmático (ERE). De forma interessante tanto a expressão quanto a atividade das metaloproteinases (MMPs) foram diminuídas, assim como a expressão da integrina ?v?3 e FAK, proteínas que estão relacionadas com fenótipos agressivos e invasivos do câncer de pâncreas. Deste modo, nossos resultados mostram, pela primeira vez, detalhes moleculares da ação antitumoral da EZA, os quais reforçam o potencial desta classe de compostos como interessantes agentes quimioterápicos / Abstract: Pancreatic cancer is considerate the fourth-leading cause of disease malignancies-related death in the western world. About 80-90% of exocrine pancreatic cancer correspond to ductal adenocarcinoma and remains highly aggressive, invasive, potentially metastatic and highly resistant to conventional chemotherapy and radiotherapy. In this regard, novel compounds that diminish the aggressiveness behavior of pancreatic cancer cells are urgently called for. Currently the carbonic anhydrase inhibitors (CAI), aromatic and heterocyclic sulfonamides (e.g. ethoxzolamide - EZA), have been investigated as antitumoral, antiepileptic agents, among others. However, little is known about the molecular mechanisms of action of these compounds. Thus, for the first time, it has been evaluated the effect of EZA in pancreatic cancer and other types of solid tumors (melanoma and prostate cancer) that display highly aggressive phenotypes. The cells lines SKMel-103 (melanoma) and PANC-1 (pancreatic cancer) presented similar sensibility towards EZA after treatment for 48 and 72 h, however PC-3 displayed higher resistance. Considering these previous results and in view of the interest of our research group to better understand the biology of pancreatic cancer, we chosen PANC-1 cell line as model. The main goal of this study was to examine the molecular mechanism by which EZA diminished the proliferation rate and the tumoral aggressiveness of PANC-1 cells by checking the expression/function of some key biomarkers of those processes. EZA decreases PANC-1 cells viability (IC50 = 222 ?M) and caused cell cycle arrest at phase G0/G1 confirmed by decreasing expression of key proteins of cell cycle, such as, cyclin D1 and CDK4. In addition, the expression of pro-survival kinase, Pim-1, associated with cell resistance and survival was markedly diminished, it was also observed reduction in the P-glycoprotein (Pgp) expression level, an important protein associated with multidrug resistance (MDR). In addition, it was observed an augment of AKT kinase activity. This activation of AKT might be related with endoplasmic reticulum (ER) stress. Interestingly, both expression and activity of metalloproteinases (MMPs) were diminished, as well as integrins ?v?3 expression and FAK activity, all of them are key proteins involved with aggressive and invasive phenotypes in pancreatic cancer cells. Our findings revealed, for the first time, the molecular details of EZA antitumoral action, which reinforce the potential of this class of compounds as interesting chemotherapeutic agents / Mestrado / Bioquimica / Mestra em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Laura Sterian Ward, Luiz Ricardo Goulart Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-23T19:36:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reis_CarolinaFernandes_D.pdf: 11022078 bytes, checksum: 4506c2c2816405721c293e78c8fc5c46 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A incidência do câncer de tireóide vem aumentando nas últimas décadas no Brasil, assim como em quase todos os países do mundo. Novos marcadores para uso no diagnóstico e prognóstico são essenciais para diminuir o número de cirurgias desnecessárias e melhorar a qualidade do tratamento dos pacientes, sendo que as técnicas utilizadas ainda não conseguiram obter marcadores de ampla utilidade. Os objetivos principais foram validar o peptídeo CaT12, um ligante de carcinoma papilífero de tireóide (CP) selecionado por Phage Display e avaliar em nódulos tireoidianos os possíveis alvos deste peptídeo. O CaT12 foi tumor específico quando testado em imunohistoquímica, foram usados um total de 775 tecidos de lesões não neoplásicas e neoplásicas (benignas e malignas), sendo 232 nódulos tireoidianos (15 sem neoplasia, 53 bócios, 54 adenomas, 69 carcinomas papilíferos e 41 carcinomas foliculares). O peptídeo CaT12 foi eficiente para identificar carcinomas papilíferos com 91,2% de sensibilidade e 85,1% de especificidade; este peptídeo também ajuda caracterizar lesões foliculares distinguindo carcinomas papilíferos de variante folicular (CPVF) de adenomas com 91,9% de acurácia. Tecidos benignos (nevos atípicos e nevos comuns) e não neoplásicos (vários tecidos sem neoplasia tais como mama, próstata, rim, cérebro, tireóide e outros) apresentaram apenas 13,74% de positividade, enquanto os carcinomas de mama, próstata e rim apresentaram 53,96%, 70,18% e 74,29% de positividade para o CaT12 respectivamente. Após verificar a eficiência do marcador CaT12 investigamos os possíveis ligantes que foram identificados como sendo queratinas (KRT), a expressão gênica de algumas dessas queratinas foram analisadas em tecidos micro dissecados de 114 nódulos tireoidianos, sendo 12 tecidos sem neoplasia, 38 com doença benigna (24 bócios e 14 adenomas) e 64 com carcinomas papilíferos (32 de variante folicular e 32 de variante clássica). As queratinas KRT5 (P=0,0002) e KRT14 (P<0,0001) estão mais expressas em pacientes com doença maligna, enquanto as queratinas KRT2 (P<0,0001), KRT6A (P=0,0014) e KRT10 (P<0,0001) foram expressas preferencialmente nos pacientes com doenças benignas. Ensaios de citotoxicidade e indução de inflamação avaliaram o possível uso não só como marcador, mas como carreador de drogas para uso terapêutico. O CaT12 não foi citotóxico para as células NPA e TPC1 (linhagens celulares de carcinoma papilífero de tireoide) e não demonstrou resposta imunológica quando testado em leucócitos de camundongos isogênicos. Visando futura aplicação deste peptídeo como carreador de drogas testamos a prostaglandina 15-dPGJ2 que foi tóxica para as células TPC1 (IC50=9,3 uM) e poderá ser utilizada conjugada ao CaT12 para entregar a droga apenas para as células cancerígenas. Outros peptídeos foram selecionados (CaT19, CaT42 e CaT66) para reconhecimento da superfície celular e poderão ser utilizados como marcadores auxiliares no diagnóstico durante a biópsia por agulha fina. Concluímos que o peptídeo CaT12 foi eficiente para distinguir malignidade em lesões tireoidianas, podendo ser usado para identificar carcinomas diferenciando as lesões malignas das benignas. O CaT12 também reconheceu malignidade em tumores de próstata, mama e rim. Além disso, foi demonstrado que a expressão gênica das queratinas são importantes na tumorigênese tireoidiana / Abstract: Incidence of thyroid cancer has increased in Brazil, as well as in almost countries of the world. New diagnostic and prognostic markers are essential to reduce numbers of unnecessary surgeries and improve the quality of patient's care. Unfortunately, recent markers used are not prove broad utility. Aim was validate CaT12 peptide selected by Phage Display as a marker to separate benign from malignant follicular lesions and evaluate in thyroid nodules possible targets for CaT12. The antibody-like peptide CaT12 was tumor-specific, which was further tested by immunohistochemistry against tissue comprised of 775 human benign and malignant tissues, including 232 thyroid nodular lesions: 15 normal thyroid tissues, 53 nodular goiters, 54 follicular adenomas; 69 papillary thyroid carcinomas (PTC); and 41 follicular carcinomas. CaT12 was able to identify PTC among thyroid nodular lesions with 91.2% sensitivity and 85.1% specificity; this peptide helped characterize follicular lesions distinguishing the follicular variant of PTC (FVPTC) from FA with 91.9% accuracy. Benign tissues (nevus atypical and nevus communes) and non neoplastic tissues (differents human non neoplastic tissues) showed only 13.74% positivity, while breast, prostate and kidney carcinomas showed respectively, 53.96%, 70.18% e 74.29% CaT12 positivity. After verifying the efficiency of marker CaT12 we investigated the possible ligands that have been identified as keratins (KRT), the mRNA expression these keratins were analyzed in microdissected tissues of 114 thyroid nodules: 12 tissues without cancer, 38 with benign disease (24 goiters and 14 adenomas) and 64 with papillary carcinomas (32 follicular variant and 32classic variant). The KRT5 (P = 0.0002) and KRT14 (P <0.0001) were most expressed in patients with malignant disease, while KRT2 (P <0.0001), KRT6A (P = 0.0014) and KRT10 (P <0.0001) were preferentially expressed in patients with benign diseases. Cytotoxicity and induction of inflammation assays evaluated the possible use as a biomarker and therapeutic by drug delivery. We showed CaT12 was not cytotoxic to NPA and TPC1 cells (papillary thyroid carcinoma cell lines) and no immune response demonstrated when tested in leukocytes of inbred mice. To future application of this peptide as a carrier of drugs we tested prostaglandin 15-dPGJ2 in TPC1 cells and was toxic to the cells (IC50 = 9.3 uM), this drug may be used conjugate with CaT12 for 15-dPGJ2 to be delivered only to cancer cells. Other peptides were selected (CaT19, CaT42 and CaT66) for recognition of cell surface and can be used as markers auxiliary to fine needle biopsy or drug deliveries. In conclusion, our CaT12 peptide was highly effective and resulted in a useful antibody-like biomarker that recognizes malignancy among thyroid nodules and may help distinguish follicular patterned lesions. CaT12 also recognized malignancy in prostate, breast and kidney tumors. Furthermore, it was demonstrated that the gene expression of keratins are important in thyroid tumorigenesis / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Clínica Médica

Orientador: Lucia Helena Simões da Costa Paiva / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-19T10:58:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AntunesJunior_Armando_D.pdf: 4955938 bytes, checksum: 48f57d77f59634d799326ec35e3baa55 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Introdução: Os pólipos endometriais são achados frequentes em mulheres na pós-menopausa e têm sido raramente associados a lesões precursoras e neoplasia endometrial. O desconhecimento de sua patogênese e potencial de malignidade tem levado a polipectomia de rotina o que pode estar expondo muitas mulheres a um risco cirúrgico desnecessário. Objetivo: Avaliar a prevalência de malignidade e a expressão de receptores de estrógeno e progesterona, marcadores tumorais e COX-2 em pólipos endometriais malignos e benignos em mulheres na pós-menopausa. Sujeitos e métodos: Realizou-se um estudo de corte transversal com mulheres submetidas à polipectomia no período de janeiro de 1998 a dezembro de 2008 no Hospital da Mulher "Prof. Dr. José Aristodemo Pinotti"-CAISM-UNICAMP. Foram incluídas 390 mulheres na pós-menopausa que não eram usuárias de terapia hormonal e tamoxifeno. Foram avaliadas as características clínicas como idade, sangramento pós-menopausa, paridade, presença de hipertensão arterial, diabetes mellitus, obesidade e diagnóstico histológico dos pólipos. Foi avaliada a expressão imuno-histoquímica de RE e RP e dos marcadores Bcl-2, Ki-67 e COX-2 em microarranjo de amostras teciduais (TMA). Foi comparada a expressão desses receptores e marcadores entre pólipos benignos e pré-malignos/malignos. Análise estatística: Para análise estatística os pólipos foram agrupados em benignos e pré-malignos/malignos. As características clínicas entre os grupos benignos/pré-malignos e malignos foram comparadas utilizando-se os testes qui-quadrado, exato de Fisher ou não paramétrico de Mann-Whitney. Para a comparação do escore final dos receptores e marcadores foram utilizados os testes exato de Fisher, qui-quadrado ou teste de Mann- Whitney. Resultados: A prevalência de malignidade nos pólipos endometriais em estudo foi de 7,1% e esteve associada ao sangramento pós-menopausa e à baixa expressão de RE no estroma. O escore final da expressão do RE no estroma dos pólipos foi maior nos benignos em relação aos pré-malignos/malignos, sendo esta diferença significativa. Não houve diferença de expressão do RP, Ki-67 e Bcl-2 entre os pólipos benignos e pré-malignos/malignos. O escore final da expressão da COX- 2 foi significativamente maior nos pólipos pré-malignos/malignos em relação aos benignos no epitélio glandular e no estroma. Conclusões: Os pólipos na pósmenopausa apresentam uma alta expressão dos RE no estroma e no epitélio glandular. Esta expressão foi menor nos pólipos pré-malignos/malignos em relação aos benignos. Observou-se alta expressão da COX- 2, sendo maior nos pólipos prémalignos/ malignos em relação aos benignos / Abstract: Introduction: Endometrial polyps are common findings in postmenopausal women that are rarely associated with precursor lesions and endometrial neoplasm. Lack of understating of the pathogenesis and oncogenic potential of polyps has led to the routine performance of polypectomy which may expose many women to unnecessary surgical risks. Objective: To evaluate the prevalence of malignancy and expression of estrogen/progesterone receptors, tumor markers and COX-2 in malignant and benign endometrial polyps in postmenopausal women. Subjects and Methods: A cross-sectional study was conducted with women undergoing polypectomy from January 1998 to December 2008 in the "Prof. Dr. José Aristodemo Pinotti" Women's Hospital-CAISM-UNICAMP. Included in the study were 390 postmenopausal women who were non-users of hormone therapy and tamoxifen. Clinical characteristics such as age, postmenopausal bleeding, parity, presence of arterial hypertension, diabetes mellitus, obesity and histologic diagnosis of polyps were assessed. Immunohistochemical expression of ER/PR, Bcl-2, Ki-67 and COX-2 markers in tissue microarray (TMA) samples was evaluated. A comparison of these receptors and markers was made between benign and premalignant/malignant polyps. Statistical analysis: For statistical analysis, polyps were grouped into benign and premalignant/malignant. Clinical characteristics between the benign/premalignant group and the malignant group were compared using the chi-square, Fisher exact or Mann-Whitney nonparametric test. To compare the final score of receptors and biomarkers, the Fisher exact tests, chi-square or Mann-Whitney test were used. Results: The prevalence of malignancy in endometrial polyps in the study was 7.1% and was associated with postmenopausal bleeding and low ER expression in the stroma. The final score of ER expression in the stromal component of the polyp was higher in benign polyps than in premalignant/malignant and this was a significant difference. There was no difference in PR, Ki-67 and Bcl-2 expression between benign and premalignant/malignant polyps. The final score of COX-2 expression was significantly higher in premalignant/malignant polyps in comparison to benign polyps in the glandular epithelium and stroma. Conclusions: Polyps in the postmenopause show a high ER expression in the stroma and glandular epithelium. Expression was lower in premalignant/malignant polyps than in benign polyps. Elevated COX-2 expression was observed that was higher in premalignant/malignant polyps than in benign polyps / Doutorado / Fisiopatologia Ginecológica / Doutor em Ciências da Saúde

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-18T09:48:44Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1370187 bytes, checksum: ceb35f582d1346864b2f244421578979 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-18T09:48:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1370187 bytes, checksum: ceb35f582d1346864b2f244421578979 (MD5) Previous issue date: 2015-07-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O uso intensivo de agrotóxicos na agricultura tem levado à contaminação dos ambientes aquáticos. O diflubenzuron (Dimilin®) é um inseticida bastante usado em áreas agrícolas no combate a pragas de insetos e tem sido frequentemente utilizado nas pisciculturas devido à sua eficácia no controle de ectoparasitas em peixes. O uso indiscriminado deste inseticida nas pisciculturas pode resultar em toxicidade causando danos à saúde dos peixes. O objetivo desse trabalho foi discriminar a possível influência do sexo dos peixes em resposta à ação do inseticida Dimilin®, e determinar se a exposição subletal a este inseticida causa alterações na morfologia das brânquias de machos e fêmeas de Hyphessobrycon eques. Os peixes foram expostos às concentrações de 0,01, 0,1 e 1,0 mg.L-1 de Dimilin® por 96 h e 17 dias. No experimento de 96 h foi realizada uma única aplicação do tóxico na água, e no experimento de 17 dias foram realizadas duas aplicações, sendo uma no primeiro dia e a outra no quarto dia de experimento. Ao final do experimento, amostras do tecido branquial de 10 animais de cada grupo foram coletados e processados para estudo histológico. Foram analisados dados morfométricos e histopatológicos em 10 campos por animal. A análise da água mostrou-se em conformidade com as condições de cultivo e criação de peixes tropicais. Alterações histológicas foram encontradas nas brânquias de machos e fêmeas de H. eques. As análises histopatológicas e morfométricas mostraram diferenças estatísticas (P<0,05) entre as concentrações dentro de um mesmo experimento no mesmo sexo. O Índice de Alteração Histopatológica (IAH), tanto em machos quanto em fêmeas, foi maior nas maiores concentrações (0,1 e 1,0 mg.L-1) nos experimentos de 96 h e 17 dias, indicando diferenças na comparação com o grupo controle e entre as concentrações dentro de um mesmo experimento. O Valor Médio de Alteração (VMA) foi maior em todos os grupos expostos ao Dimilin® nos tempos de exposição de 96 h e 17 dias em comparação com grupo controle. O IAH, o VMA e as análises morfométricas não mostraram reação específica do sexo, indicando que as brânquias de machos e fêmeas não reagiram de maneira diferente (P>0,05) após exposição a concentrações subletais do inseticida Dimilin®. Os resultados mostraram que mesmo nas concentrações mais baixas, o inseticida causou alterações morfológicas leves a moderadas nas brânquias de machos e fêmeas, comprometendo a função deste tecido. Assim, H. eques pode ser considerado bioindicador da contaminação ambiental por Dimilin®, e ser utilizado como modelo em ensaios toxicológicos e avaliações ambientais. / The intensive use of pesticides in agriculture has caused contamination of aquatic environments. Diflubenzuron (Dimilin®) is a widely used insecticide for agricultural areas in combating insect pests, and has been frequently used in fish farms due to its effectiveness in the control of fish ectoparasites. The indiscriminate use of this pesticide in pisciculture can result in toxicity causing fish health problems. The aim of this study to discriminate the possible influence of sex of the fish in response to the action of Dimilin®, to determine whether sublethal exposure to this pesticide causes changes in the morphology of the gills of male and female Hyphessobrycon eques. The fish were exposed to concentrations of 0.01, 0.1 and 1.0 mg.L-1 Dimilin® for 96 hours and 17 days. In the 96 hour experiment a single application of toxic in water was carried out and in the 17 days experiment two applications were performed, one one the first day and another on the fourth day of the experiment. At the end of the experiment, gill tissue samples of 10 animals from each group were collected and processed for histological study. Morphometric and histopathological findings in 10 fields per animal were analyzed. Analysis of the water showed in to be in accordance with the conditions for cultivation and creation of tropical fish. Histological changes were found in the gills of male and female Hyphessobrycon eques. Histologic and morphometric analyses showed significant differences (P<0.05) between the concentrations within the same experiment in the same sex. The histopathological alteration index (HAI), in both males and females was greater at higher concentrations (0.1 and 1.0 mg.L-1) in the 96 hours and 17 days experiments, indicating differences in comparison with the control group and between the concentrations within the same experiment. The mean alteration value (MAV) was higher in all groups exposed to Dimilin® in exposure times of 96 hours and 17 days compared to the control group. The HAI, the MAV and the morphometric analysis did not show a specific reaction of sex, indicating that the gills of males and females do not respond differently (P>0.05) after exposure to sublethal concentrations of insecticide Dimilin®. The results showed that even at lower concentrations the insecticide caused mild to moderate morphological changes in the gills of males and females, compromising tissue function. So, Hyphessonbrycon eques can be considered bioindicator of environmental contamination by Dimilin® and be used as a model in toxicological tests and environmental assessments.

Orientadores: Fabio Rogerio, Roger Frigerio Castilho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-26T11:42:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Montgomery_RichardMurdoch_M.pdf: 6430086 bytes, checksum: b22d372909e0e103dfbe11071ef9ebd2 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Glioblastoma multiforme (GBM) é o tumor cerebral primário mais frequente. Cerca de 90% dos GBMs são classificados como primários. Tais lesões acometem principalmente idosos, têm rápida evolução e não apresentam evidências de lesão precursora. Por outro lado, GBMs secundários acometem indivíduos mais jovens e progridem lentamente a partir de astrocitoma difuso de menor grau. As alterações moleculares apresentadas pelos tumores astrocitários são várias e seu conhecimento é importante para o melhor entendimento da fisiopatogênese e possível aferição prognóstica. Neste trabalho, investigamos a prevalência de casos de GBM tratados no Hospital de Clínicas da Faculdade de Ciências Médicas da Universidade Estadual de Campinas, entre janeiro de 2008 e dezembro de 2012, com informações clínico-radiológicas completas disponíveis (n=36), e descrevemos as características clínicas e histológicas. Ainda, classificamos a distribuição tecidual dos seguintes marcadores biológicos através de imunoistoquímica: forma selvagem do receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR), formas mutantes da proteína p53 e isocitrato desidrogenase 1 (IDH-1) e a proteína murina 2 (MDM2). Correlacionamos achados morfológicos e imunoistoquímicos com dados da evolução clínica e resposta ao tratamento com cirurgia, quimioterapia com Temozolamida e radioterapia. Observamos que a localização predominante do tumor foi o lobo frontal, sendo cerca de 97% dos casos primários. Em média, o tempo livre de doença clinica ou sintomática foi de 7,56 meses e, o tempo livre de doença radiológica (TLDR), de 7,14 meses. A média do número de figuras de mitose / 10 campos de grande aumento foi 3,9. A correlação entre a sobrevida total e as classes de imunomarcação para p53, IDH-1, EGFR e MDM2 não foi significativa para nenhum dos marcadores. Observou-se relação estatisticamente significativa entre p53 e MDM-2 (p-valor=0,00) e entre EGFR e MDM2 (p-valor=0,04). Por outro lado, não foi detectada relação estatisticamente significativa entre p53 e EGFR (p-valor=0,09). Quanto a correlação entre classes de imunomarcação para p53, MDM2 e EGFR com a sobrevida clínica e com a radiológica, a única relação estatisticamente significativa foi entre p53 e sobrevida clínica (p-valor=0,02), sendo observado que quanto maior a classe de p53, menor a sobrevida clínica. Não houve relação significativa entre imunomarcação para IDH-1, EGFR, MDM2 e a sobrevida total clínica e radiológica. A correlação entre a expressão de MDM2 e do EGFR selvagem também foi positiva (p-valor=0,04). As correlações entre as sobrevidas clínica, radiológica e total foram significativas (p-valor < 0,0001) e positivas, ou seja, o aumento de uma sobrevida implica aumento de outra. As correlações do gênero com as sobrevidas clínica, radiológica e total não foram significativas, assim como a relação da marcação da p53, MDM2 e EGFR com número de mitose e extensão de ressecção tumoral. Quanto à correlação das sobrevidas clínica, radiológica e total com a localização do tumor e a idade, não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas em nenhuma das sobrevidas. Nossos resultados clínicos e morfológicos refletem parcialmente alguns dados da literatura. Especificamente, o fato de termos detectado correlação significativa apenas entre a marcação para p53 e sobrevida clínica pode ser decorrente da limitada amostragem disponível para avaliação / Abstract: Glioblastoma (GBM) is the most common primary brain tumor. About 90 % of GBMs are classified as primary. Such lesions occur mostly in the elderly, evolve rapidly and show no evidence of precursor lesions. However, secondary GBMs affect younger individuals and progress slowly from lower grade diffuse astrocytomas. Molecular alterations in astrocytic tumors are diverse and their knowledge is important to understand the pathophysiology and prognosis of patients with GBM. Here we investigated the prevalence of GBM treated at the Hospital of the Faculty of Medical Sciences, State University of Campinas, from January 2008 to December 2012, with complete radiological and outcome information available (n = 36), and described the clinical and histopathological findings. Furthermore, we immunohistochemically classified the tissue distribution of four biomarkers: wild form of the epidermal growth factor receptor (EGFR), mutated forms of p53 protein and isocitrate dehydrogenase 1 (IDH-1) and murine protein 2 (MDM2). Morphological and immunohistochemical findings were correlated with data from the clinical course and response to treatment with surgery, chemotherapy and radiotherapy. We observed that the most common location of the tumor was the frontal lobe and about 97 % of cases were primary. On average, time free from clinical or symptomatic disease was 7.56 months and the free time of radiological disease (TLDR) was 7.14 months. The average number of mitotic figures/10 high power fields was 3.9. The correlation between overall survival and classes of p53, IDH- 1, MDM2 and EGFR immunostaining was not significant for any of the markers. There was a statistically significant relationship between p53 and MDM2 (p-value = 0.01) and between EGFR and MDM2 (p-value = 0.04). On the other hand, no significant relationship was detected between p53 and EGFR (p=0.09). Concerning the correlations between classes of immunostaining for p53, MDM2 and EGFR with clinical and radiological survival, the only significant relation was between p53 and clinical survival (p-value = 0.02), with the higher class of p53, the poorer the clinical survival. There was no significant relationship between immunostaining for IDH-1, EGFR, MDM2 and the total clinical and radiological survival. The correlation between the expression of MDM2 and wild type EGFR was also positive (p-value = 0.04). The correlations between clinical, radiological and overall survival were significant (p-value <0.0001) and positive, ie, an increase in one implies an increase in mean survival of another. The correlations of gender with clinical, radiological and overall survival were not significant, as the ratio of labeling of p53, MDM2 and EGFR with number of mitosis and extent of tumor resection. The correlations of clinical, radiological, and total survival with tumor location and age were not statistically significant. Our clinical and morphological results partially corroborate previous data by other authors. Specifically, we detected a significant correlation between staining for p53 and clinical survival only. The other correlations, expected to be positive but detected as negative, may be due to the limited sample available for analyses / Mestrado / Neurociencias / Mestre em Ciências

Orientadores: Laurecir Gomes, Luiz Carlos Alves / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-26T11:11:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Figueiroa_MariadasNeves_D.pdf: 2089352 bytes, checksum: b6d8c26d5559031071110da172790cad (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O câncer de pênis é raro em países industrializados, mas frequente em países em desenvolvimento. O Brasil figura dentre os países com maior incidência, marcadamente em suas regiões Norte e Nordeste. Apesar do conhecimento de aspectos clínicos dessa enfermidade, ainda há carência de estudos sobre prognóstico, risco de metástases assim como recorrência do câncer de pênis, sendo a pesquisa de marcadores tumorais uma ferramenta importante para subsidiar a conduta terapêutica. O estudo foi desenvolvido com o propósito de caracterizar aspectos clínicos e epidemiológicos do câncer de pênis no estado de Pernambuco e avaliar a expressão de biomarcadores tumorais em amostras de carcinoma de células escamosas neste órgão. Em estudo analítico, retrospectivo ao período de 2000 a 2009, transversal, foram incluídos 305 pacientes submetidos à penectomia no Hospital de Câncer de Pernambuco. Características sociodemográficas, de exposição a fatores de risco, diagnóstico, grau histológico, estadio tumoral e tratamento foram as variáveis levantadas. Adicionalmente realizou-se a imunomarcação dos antígenos c-Myc, MMP-2, receptor Toll-like 2, TNF-? e p53, bem como a determinação do índice apoptótico de amostras de tumor de pênis de células escamosas de 50 pacientes submetidos a penectomia no Hospital Universitário Oswaldo Cruz, com idade entre 30 e 84 anos. As amostras foram classificadas de acordo com grau histológico após coloração por Hematoxilina-Eosina. A análise epidemiológica evidenciou maioria de pacientes idosos, com baixa escolaridade e renda, residentes fora da região metropolitana do Recife. Os primeiros sinais e sintomas identificados foram tumores ou úlceras associados à dor, em pacientes com higiene precária, fimose e tabagismo, como fatores de risco. O carcinoma de células escamosas, Grau I e sem metástase predominou e a penectomia parcial foi o tratamento mais realizado. Quando analisados os biomarcadores nas amostras tumorais, foi identificado aumento significativo na imunorreatividade para p53 nos tumores de Graus II e III. Nos tumores de Graus I e II houve aumento da imunorreatividade da MMP-2 e menor nos de Grau III, com marcante remodelação da matriz extracelular nos tumores de baixo grau o que pode caracterizar a neoangiogênese desse microambiente. A imunorreatividade para o antígeno Toll-like2 revelou decréscimo com aumento do grau histológico tumoral, bem como houve alta e constante imunorreatividade no TNF?. O estudo epidemiológico permitiu concluir que é necessário implantar um programa permanente para promoção da educação em saúde, objetivando mudança de comportamento da população no sentido de prevenir a doença. A imunomarcação nas células tumorais mostrou que a utilização de marcadores tumorais é uma ferramenta eficaz que pode contribuir significativamente para prognóstico e definição da conduta terapêutica / Abstract: Penile carcinoma is rare in developed countries, however it is frequent in developing countries. Brazil is among the countries with the highest incidence, markedly in its North and Northeast regions. Although its clinical aspects are known, there is still a lack of studies on prognosis, metastasis risk, as well as the recurrence of penile cancer, and the immunohistochemistry of tumoral markers is an aspiration. The research was directed to characterize clinical and epidemiological aspects of penile cancer in Pernambuco State, Brazil and to evaluate the expression of tumoral biomarkers in samples of penile squamous cell carcinoma. In a cross section study, retrospective from 2000 to 2009, 305 patients, submitted to penectomy at the Cancer Hospital of Pernambuco, were included. Sociodemographic characteristics, exposure to risk factors, diagnosis, histological grade, tumoral status and treatment were the variables employed. Additionally, this study proceeded to the immunostaining of the antigens c-Myc, MMP-2, Toll-like receptor 2, TNF-? and p53, as well as to the determination of the apoptotic index of samples of penile squamous cell carcinoma of 50 men, undergoing penectomy at Hospital Universitário Oswaldo Cruz, aged from 30 to 84 years old. The samples were classified as to histological grade after hematoxylin-eosin staining. The epidemiological analysis highlighted that most subjects were elder; with low education and income level, and lived outside the metropolitan region of Recife. The first signs and symptoms were tumors or ulcers associated with pain in patients having precarious hygiene, phimosis and smoking, as risk factors. The squamous cell carcinoma grade I, without metastasis, predominated. Partial penectomy was the most common treatment. By analyzing biomarkers in tumoral samples, a significant increase in the immunoreactivity of p53 was identified in grade II and III tumors. In Grade I and II tumors, there was increased immunoreactivity for MMP-2, but it was lowest in Grade III tumors, with remarkable remodeling of the extracellular matrix of low grade tumors. This could be used to identify neoangiogenesis of this microenvironment. The immunoreactivity for the Toll-like 2 antigen diminished with increasing tumoral histological grade, while there was a high and constant immunoreactivity for TNF?. The epidemiological study leads to the conclusion that there is a need to implement a permanent program to promote health education, aimed at changing this population's behavior so as to prevent the disease. The immunostaining of tumoral cells demonstrated that the use of tumoral markers as an efficient tool that can significantly contribute to prognosis and definition of therapeutic management / Doutorado / Biologia Celular / Doutora em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Laura Sterian Ward, Márcio José da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T06:56:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Batista_FernandodeAssis_M.pdf: 3590924 bytes, checksum: 1fef7139c4c821dd4dd2c2d3d10f7393 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Nódulos de tireoide, benignos e malignos, tem se tornado cada vez mais frequentes, obrigando a busca de marcadores de diagnóstico e prognóstico. Três fatores de transcrição tireoide-específicos estão envolvidos na manutenção do estado diferenciado da glândula e em sua carcinogênese: TTF-1, FOXE1 e PAX8. Os níveis de expressão destes genes estão relacionados com o grau de diferenciação tecidual em tumores tireoidianos. O repressor transcricional DREAM também está envolvido na expressão gênica tireoide-específica através da interação com o gene da tireoglobulina e com os fatores de transcrição TTF-1, FOXE1 e PAX8. O aumento da expressão de DREAM na tireoide está relacionado com o aumento da glândula e desenvolvimento nodular. O objetivo do presente estudo foi analisar a expressão dos genes TTF-1, FOXE1, PAX8 e DREAM em tecidos tumorais benignos e malignos da tireoide, além de identificar possíveis mutações no gene DREAM em pacientes com nódulos tireoidianos. Para tanto foram coletadas 200 amostras de tecido nodular, sendo 50 adenomas foliculares (AF), 49 bócios nodulares, 63 carcinomas papilíferos clássicos (CPTC), 36 carcinomas papilíferos de variante folicular (CPTVF). Todos os pacientes foram submetidos a um mesmo protocolo padrão e acompanhados por 12-87 meses (38 ± 17 meses). Foram extraídos DNA e RNA de todas as amostras. A análise de expressão foi realizada por qPCR e a detecção de mutações no gene DREAM foi feita por sequenciamento automático. Os dados obtidos foram relacionados com dados clínicos e de evolução dos pacientes. Demonstramos que, embora a expressão de TTF-1 tenha sido similar entre os diferentes nódulos analisados (p=0.7056), FOXE1 (p<0,0001), PAX8(p<0,0001) e DREAM (p<0,0001) foram significativamente mais expressos em tecidos benignos (AF e bócio) do que em malignos (CPTC e CPTVF) identificando malignidade com 75,9%; 70,6%; e 75,3% de acurácia respectivamente.Os três genes foram ainda diferencialmente expressos entre as lesões de padrão folicular AF e CPTVF (FOXE1,p=0,0052; PAX8, p=0,0002; DREAM, p<0,0001), diferenciando estas lesões com 67,9%; 70,6%; e 71,6% de acurácia respectivamente. No entanto, a expressão dos genes investigados não se associou a características de agressividade tumoral ou de evolução. Embora não tenhamos encontrado nenhuma alteração em regiões codificantes do gene DREAM, pudemos observar a ocorrência de 6 alterações em áreas não codificantes próximas aos éxons. A alteração IVS-95T>A está localizada na região promotora e foi encontrada em apenas um paciente. As alterações IVS2-131C>T e IVS3+17T>C foram encontradas em regiões intrônicas (intron 1 e 3 respectivamente) em um paciente cada. As alterações IVS1+41C>G, IVS3+10G>C e IVS8-118C>T foram encontradas em vários pacientes por se tratarem de polimorfismos já descritos (rs2248415, rs117109173 e rs58372613 respectivamente). As frequências alélicas e genotípicas das alterações não se associaram as características clínicas, de agressividade ou evolução. Concluímos que a expressão dos genes FOXE1, PAX8 e DREAM pode auxiliar o diagnóstico de malignidade e a diferenciação de lesões tireoidianas, mas não possui utilidade como marcador de prognóstico. Além disso, mutações e polimorfismos do gene DREAM em pacientes com nódulos tireoidianos não possuem clínica como biomarcadores de diagnóstico ou prognóstico do CT / Abstract: Thyroid nodules, benign and malignant, have become increasingly frequent, impelling the search for markers for their diagnosis and prognosis. Three thyroid-specific transcription factors are involved in maintaining the differentiation of the gland and its carcinogenesis: TTF-1, FOXE1 and PAX8. The expression levels of these genes are related to the degree of tissue differentiation in thyroid tumors. The transcriptional repressor DREAM is also involved in thyroid-specific gene expression through interaction with the thyroglobulin gene and the transcription factors TTF-1, FOXE1 and PAX8. An increased expression of DREAM was related to the thyroid enlargement and nodular development. The purpose of this study was to analyze the expression of TTF-1, FOXE1, PAX8 and DREAM genes in benign and malignant thyroid tumor tissues and identify possible mutations in the DREAM gene in patients with thyroid nodules. For that purpose, we collected 200 thyroid nodules samples: 50 follicular adenomas (FA), 49 nodular goiters, 63 classic papillary carcinomas (CPTC), 36 follicular variant of papillary thyroid carcinomas (FVPTC). All patients were submitted to the same standard treatment protocol and followed by 12-87 months (38 ± 17 months). Gene expression analysis was performed by real time PCR and we performed automatic sequencing in order to detect mutations of DREAM gene. The data obtained were correlated to clinical and pathological features and to patients¿ outcomes. We demonstrated that FOXE1 (p<0.0001), PAX8 (p<0.0001) and DREAM (p<0.0001) genes¿ expression, but not TTF-1 (p=0.7056), were higher in benign (FA and goiter) than in malignant thyroid lesions (CPTC and FVPTC), being able to identify malignancy with an accuracy of 75.9%, 70.6% and 75.3%, respectively. The three genes were also differentially expressed between follicular lesions FA and FVPTC (FOXE1, p=0.0052; PAX8, p=0.0002; DREAM, p<0.0001), identifying these lesions with 67.9%, 70.6% and 71.6% accuracy respectively. However, the expression of the investigated genes was not associated with any feature of tumor aggressiveness or patients¿ outcome. Although we did not find genetic alterations in coding regions of DREAM gene, we observed the occurrence of 6 alterations in non-coding regions near the exons. The alteration IVS-95T> A is located in the promoter region of the gene and was found in one patient. The alterations IVS2-131C>T and IVS3+17T> C were found in intronic regions (introns 1 and 3 respectively), each in one patient. The alterations IVS1+41C>G, IVS3+10G>C and IVS8-118C>T, corresponding to already described polymorphisms (rs2248415, rs58372613 and rs117109173 respectively), were found in several patients. Allelic and genotypic frequencies of the alterations were not associated with any clinical or pathological feature of aggressiveness or with outcome. We conclude that the expression of FOXE1, PAX8 and DREAM may help diagnose thyroid nodules, identifying malignancy and characterizing follicular-patterned thyroid lesions, but is not useful as a prognostic marker. In addition, mutations and polymorphisms in non-coding regions of the DREAM gene in patients with thyroid nodules are not associated with clinical features, not having utility as diagnostic or prognosis biomarkers for TC / Mestrado / Clinica Medica / Mestre em Ciências

Este estudo comparou a ingestão de flúor (F) através da dieta e do dentifrício bem como a excreção urinária de F de 24 horas de crianças recebendo diferentes fontes de F sistêmico: água artificialmente fluoretada (A-Bauru, SP-Brasil, 0,6-0,8 mgF/L, água naturalmente fluoretada (B-Brejo dos Santos, PB-Brasil, 0,6-0,9 mgF/L), sal fluoretado (C-Lima, Peru, 180-200 mgF/Kg) e leite fluoretado (D-Trujillo, Peru, 250 mL de leite contendo 1,0 mgF/L). Crianças de 4-6 anos (n=21-26) participaram em cada comunidade. Uma comunidade com água não fluoretada (<0,1 mgF/L) (E-Pirajuí, SP-Brasil) foi incluída como controle (n=24). A quantidade de F ingerida através da dieta foi determinada pela \"dieta duplicada\", considerando seus diferentes constituintes (água, outros líquidos e sólidos). A ingestão de F através do dentifrício foi determinada pela escovação simulada. A excreção urinária de F de 24 h e a concentração de F das unhas das mãos e dos pés também foram avaliadas. O F foi analisado por eletrodo, depois de difusão facilitada por hexametildiloxano ou após tamponameno com TISAB. A análise estatística foi feita pelos teste de Kruskall-Wallis, Dunn e regressão linear (p<0,05). A média (±DP) da ingestão total de F (mg/Kg peso corporal/ dia) foi 0,065±0,030a,, 0,084±0,029a, 0,088±0044a,, 0,088±0,052a e 0,027±0,022b para A, B, C, D e E, respectivamente. Considerando somente a dieta, a média foi de 0,042±0,012b, 0,058±0,016a,b, 0,048±0,023a,b, 0,059±0,012a e 0,007±0,004c, respectivamente. A maior contribuição através da dieta para A/B e C/D/E foram a água e os sólidos, respectivamente. A média da quantidade F ingerida através do dentifrício variou entre 0,020 (E) e 0,040 (C) mg/Kg peso corporal/ dia e não foi significativamente diferente entre as comunidades. A média (±DP) da excreção urinária de F (mg) de 24 horas foi 0,693±0,198a, 0,625±0,297a,b, 0,808±0,305a, 0,666±0,194a e 0,478±0,321b para A, B, C, D e E, respectivamente. Houve uma correlação significativa entre a excreção urinária de F e a ingestão de F através da dieta (r=0,355, p<0,0001) e ingestão total (dieta mais dentifrício) e excreção urinária (r=0,278, p=0,002). Houve uma correlação significativa entre a excreção urinária de F e concentração de F nas unhas das mãos (r=0,237, p=0,010) e dos pés (r=0,221, p=0,016) e uma forte correlação entre as concentrações de F nas unhas das mãos e dos pés (r=0,730, p<0,0001). Os resultados indicam que a ingestão total de F de crianças deve ser determinada antes que um método de fluoretação sistêmica seja implementado. / This study compared the fluoride (F) intake from diet and dentifrice, as well as 24-hour urinary F excretion of children receiving systemic F from different sources: artificially fluoridated water (A-Brazil, 0.6-0.8 mgF/L), naturally fluoridated water (B-Brazil, 0.6-0.9 mgF/L), fluoridated salt (C-Peru, 180-200 mgF/Kg) and fluoridated milk (D-Peru, 250 mL of milk containing 1.0 mgF/L). Children (n=21-26) aged 4-6 years old participated in each community. A non-fluoridated (<0.1 mgF/L) Brazilian community (E) was evaluated as control (n=24). Children had their F intake from diet monitored by the \"duplicate plate\" method, considering its different constituents (water, other liquids and solids). F ingested from dentifrice was determined by simulated toothbrushings. Twenty-four hour urinary F excretion was also evaluated. F was analyzed with the electrode, after hexamethyldisiloxane-facilitated diffusion or after buffering with TISAB. Data were tested by Kruskall-Wallis and Dunn´s post hoc tests and linear regression (p<0.05). Mean (±SD) total F intake (mg/Kg b.w./day) was 0.065±0.030a, 0.084±0.029a, 0.088±0.044a, 0.088±0.052a and 0.027±0.022b for A, B, C, D and E, respectively. Considering diet only, it was 0.042±0.012b, 0.058±0.016a,b, 0.048±0.023a,b, 0.059±0.012a and 0.007±0.004c, respectively. The main dietary contributors for A/B and C/D/E were water and solids, respectively. Mean F intake from dentifrice ranged between 0.020 (E) and 0.040 (C) mg/Kg b.w./day and was not significantly different among the communities. Mean (±SD) 24-h urinary F excretion (mg) was 0.693±0.198a, 0.625±0.297a,b, 0.808±0.305a, 0.666±0.194a and 0.478±0.321b for A, B, C, D and E, respectively. There was a significant correlation between daily F intake from diet and urinary F excretion (r=0.355, p<0.0001) and total intake (diet and dentifrice) and urinary F excretion (r=0.278, p=0.002). There was a significant correlation between urinary F excretion and fluoride concentration in fingernails (r=0.237, p=0.010) and toenails (r=0.221, p=0.016) and a strong correlation between F concentration from fingernails and toenails (r=0.730, p<0.0001). The results indicate that the total F intake of children must be taken into account before a systemic method of fluoridation is implemented.

Orientador: Julio Lopes Sequeira / Banca: Alessandre Hataka / Banca: Sara Maria de Carvalho e Suzano / Resumo: Os linfomas estão entre as neoplasias mais frequentes na espécie canina e apresentam diversas características em comum com o linfoma do homem, e por isso, as classificações utilizadas se baseiam naquelas propostas para os linfomas humanos. O aumento no número de casos de linfoma nos seres humanos durante as últimas décadas torna o estudo comparativo entre as duas espécies de extrema importância, já que ambas compartilham o mesmo ambiente, estando sujeitas às mesmas influências ambientais, o que torna o cão um sentinela biológico muito útil. Objetiva-se neste trabalho aplicar os critérios da World Health Organization (WHO) aos linfomas caninos comparando-os aos da classificação de Kiel atualizada, utilizando a avaliação imunoistoquímica para expressão de marcadores biológicos do câncer (Ki-67, Caspase-3 e p53) pelo método de Tissue microarray (TMA), comparando-o ao método convencional, além de avaliar a eficiência do PAX5 BSAP (B cell specific activator protein) como marcador de linfomas B em comparação ao CD79a. No presente trabalho, concluímos que os critérios estabelecidos pela Histological Classification of Hematopoietic Tumors of Domestic Animals (WHO) permitem a correlação com os tipos de linfoma descritos pela classificação de Kiel. O método de TMA permite a avaliação de marcadores de proliferação e apoptose nos linfomas caninos independentemente do diâmetro dos cores. Para os linfomas B caninos o anticorpo anti-PAX-5 mostrou-se mais eficiente como marcador do que o anticorpo anti-CD79a, devendo ser associado ao painel de imunofenotipagem / Abstract: Lymphomas are among the most common neoplasms in dogs and have several features in common with lymphoma of human, and therefore, the classifications used are based on those proposed for human lymphomas. The increase in the number of cases of lymphoma in humans during the last decades makes the comparison between the two kinds of extreme importance, since both share the same environment and are subject to the same environmental influences, which makes the dog a biological sentinel very useful. Objective of this work is to apply the criteria of the World Health Organization (WHO) for canine lymphoma comparing them to the updated Kiel classification, using the immunohistochemical evaluation for biological markers of cancer (Ki-67, p53 and Caspase-3) by the method of Tissue microarray (TMA), compared to the conventional method, and to evaluate the efficiency of PAX5 BSAP (B cell specific activator protein) as a marker of B-cell lymphomas compared to CD79a. In the present study, we conclude that the criteria established by Histological Classification of Hematopoietic Tumors of Domestic Animals (WHO) allow correlation with the types of lymphoma described by the Kiel classification. The method allows the evaluation of MRI markers of proliferation and apoptosis in canine lymphoma regardless of the diameter of colors. For B-cell lymphomas canine anti-Pax-5 antibody was more efficient than the marker anti-CD79a antibody should be associated with immunophenotyping panel / Mestre

INTRODUÇÃO E OBJETIVO: Recidiva da hepatite C crônica com progressão acelerada, embora imprevisível, da fibrose é responsável por piora no prognóstico após o transplante de fígado (Tx). Biópsia hepática protocolar é considerada o padrão ouro para estadiamento da fibrose na recidiva da hepatite C pós-Tx. Para superar as limitações da biópsia, principalmente custo e complicações, marcadores simples e não invasivos de fibrose hepática têm sido propostos para pacientes imunocompetentes, porém com escassos estudos disponíveis no contexto pós-Tx. O objetivo desse estudo é avaliar o desempenho diagnóstico dos marcadores não-invasivos para estadiar fibrose hepática em pacientes pós-Tx. MÉTODOS: Pacientes consecutivos receptores de Tx com recidiva da hepatite C (n=45) que foram submetidos a 118 biópsias hepáticas foram incluídos. Variáveis laboratoriais dentro de trinta dias de cada biópsia foram consideradas. Índice da razão AST-plaqueta (APRI), razão AST/ALT, Escore discriminativo de Bonacini (EDB), Escore de Pohl e índice idade-plaqueta foram calculados para cada biópsia. Fibrose significante foi definida como estágio METAVIR 2. RESULTADO: A área sob a curva ROC (receiver operating characteristic) do Escore discriminativo de Bonacini para predizer fibrose significante foi 0,68, superior aos outros testes avaliados. Utilizando-se o melhor ponto de corte, um valor de Escore discriminativo de Bonacini 8 foi 42% sensível e 95% específico, com razão de verossimilhança positiva e negativa de 7,98 e 0,62, respectivamente. Análise multivariada identificou razão AST/ALT como preditor independente de fibrose significante (OR=4.2; CI 95%=1.5-11.4; p-valor=0.005, ponto de corte 0,89). Análise adicional considerando apenas uma biópsia por paciente confirmou o desempenho superior do Escore discriminativo de Bonacini em relaçãoaos outros testes avaliados, com uma área sob a curva de 0,76. CONCLUSÃO: Escore discriminativo de Bonacini foi o marcador laboratorial não invasivo com melhor desempenho diagnóstico para predizer fibrose hepática significante em pacientes com recidiva de hepatite C crônica pós-Tx / BACKGROUND AND AIM: Recurrent hepatitis C with accelerated, although unpredictable, fibrosis progression accounts for a poor prognosis after liver transplantation (LT). Per protocol liver biopsy is considered the gold standard for fibrosis staging in recurrent hepatitis C after LT to overcome the limitations of liver biopsy, mainly cost and complications, simple non-invasive liver fibrosis tests have been proposed for immunocompetent patients, butfew data are available in the post-transplant setting. The aim of this study was to evaluate diagnostic performance of noninvasive tests to stage liver fibrosis in LT setting. METHOD: Consecutive LT patients with recurrent hepatitis C (n=45) who have undergone 118 liver biopsy were included. Laboratory variables at the time of biopsies were recorded. AST to platelet ratio index (APRI), AST/ALT ratio, Bonacini discriminant score (BDS), Pohl score and age-platelet index were calculated at the time of biopsies. Significant fibrosis was defined as METAVIR stage 2. RESULT: The area under the receiver operating characteristic (ROC) curve (AUC) of Bonacini discriminant score for predicting significant fibrosis was 0,68, better than the other non-invasive liver fibrosis tests. Using the best cutoff value, Bonacini discriminant score value 8 was 42% sensitive and 95% specific, with positive and negative likelihood ratio of 7,98 and 0,62, respectively. Multivariate analysis identified AST/ALT ratio as an independent predictor of significant fibrosis (OR=4.2; CI 95%=1.5-11.4; p-value=0.005, cutoff point 0,89). Additional analysis considering only one biopsy per patient confirmed the superior performance of Bonacini discriminant score compared to the other non-invasive liver fibrosis tests, with an AUC of 0,76. CONCLUSION: Bonacini discriminant score was the non-invasive liver fibrosis test with the best performance for significant liver transplant patients with recurrent hepatitis C