Introdução: Os carcinomas vulvares são tumores raros com morbidade elevada associada ao tratamento cirúrgico padrão e altos índices de recorrência loco-regional. Os vasos linfáticos são importantes vias de disseminação regional e o estado linfonodal é o principal indicador prognóstico. A densidade linfática do tumor, assim como moléculas relacionadas à linfangiogênese tem sido avaliadas em vários tumores para prever metástase linfonodal e para identificar possíveis alvos terapêuticos. Entre as moléculas relacionadas ao controle da linfangiogênese destaca-se a podoplanina, cuja expressão por células neoplásicas de tipo escamoso pode inibir a disseminação linfática. Não identificamos até o momento nenhum estudo que tenha avaliado o papel da densidade de vasos linfáticos intratumorais ou da expressão de podoplanina pelas células neoplásicas no comportamento de carcinomas escamosos vulvares. Objetivos: Nossos objetivos foram estudar a densidade intratumoral dos vasos linfáticos (DVL) e a expressão de podoplanina pelas células neoplásicas em carcinomas escamosos vulvares no sentido de determinar sua relação com o desfecho e fatores prognósticos clássicos, incluindo metástase linfonodal. Métodos: Selecionamos 35 pacientes com carcinoma de células escamosas vulvares submetidas à tratamento cirúrgico primário incluindo vulvectomia e dissecção regional de nódulos linfáticos. Após revisão dos dados dos prontuários médicos (idade da paciente, estadiamento, tipo de tratamento e tamanho do tumor), todas as lâminas foram reexaminadas para determinar o grau histológico, invasão linfática peritumoral e profundidade da infiltração. Foram selecionadas áreas do tumor para a construção de blocos de parafina com microarranjos de tecidos e identificação imunoistoquímica de podoplanina pelo anticorpo D2-40. A DVL intratumoral foi quantificada pela contagem de vasos marcados nas áreas de maior densidade. O número de vasos foi contado em 10 campos microscópicos de grande aumento e a média foi o valor atribuído para a DVL em cada caso. A expressão de podoplanina pelas células neoplásicas foi considerada positiva quando mais de 10% das células apresentaram coloração citoplasmática de intensidade moderada a intensa. Investigamos a associação das duas variáveis com as características prognósticas clássicas (idade, estadiamento, tamanho do tumor, grau histológico, embolização vascular peritumoral, nível de infiltração do tumor, comprometimento linfonodal), assim como sua associação com desfecho. Resultados: Valores mais elevados de DVL intratumoral foram identificados em tumores de baixo grau, em estádios iniciais, em tumores sem invasão linfática e naqueles com menor infiltração estromal. Na análise univariada, DVL intratumoral elevada foi associada a maior sobrevida geral . A expressão de podoplanina pelas células neoplásicas não se relacionou a nenhuma das variáveis prognósticas, comprometimento linfonodal ou sobrevida, assim como não se associou à DVL. Conclusões: A DVL intratumoral em carcinomas escamosos vulvares associa-se a características prognósticas favoráveis. Já a expressão de podoplanina pelas células neoplásicas não parece interferir na apresentação e comportamento destes carcinomas. / Introduction: Vulvar carcinomas are rare tumors presenting high morbidity associated to the standard surgical treatment and high rates of locoregional recurrence. Lymphatic vessels serves as major routes for regional dissemination and the lymph node status is the main prognostic indicator. Tumor lymphatic density as well as lymphangiogenesis-related molecules has being studied in various tumors in order to predict lymph node metastasis and to identify a possible candidate to target therapy. Among the molecules related to lymphangiogenesis in the group of squamous cell carcinomas podoplanin expression by neoplastic cells emerges as an inhibitor of lymphatic dissemination. To our knowledge, no study evaluated the role of intratumoral lymphatic vessels or podoplanin expression by neoplastic cells in the behavior of vulvar squamous carcinomas. Objectives: Our aims were to study the intratumoral lymphatic vessel density (LVD) and podoplanin expression by neoplastic cells in vulvar squamous carcinoma according their relationship with outcome and classical prognostic factors, including lymph node metastasis. Methods: We selected 35 cases of patients with vulvar squamous cell carcinoma submitted to primary surgical treatment that included vulvectomy and regional lymph nodes dissection. After revision of medical records data (age of patient, stage, type of surgery and tumor size), all the slides were reviewed to achieve histological grade, peritumoral lymphatic invasion and depth of infiltration. Areas of the tumor were selected to construction of tissue microarrays paraffin blocs and immunohistochemical identification of podoplanin by the D2-40 antibody. Intratumoral LVD was quantified by counting the stained vessels in hotspots areas. The number of vessels was counted in 10 high power microscopic fields and the mean was the value of the LVD for each case. Podoplanin expression by neoplastic cells was considered positive when more than 10% of the cells showed moderate to strong cytoplasmatic stained. We investigated the association of the two variables with classical prognostic features (age of patient, stage, tumor size, histologic grade, vascular involvement, depth of infiltration, lymph node involvement as well outcome. Results: Higher values of intratumoral LVD were identified in low grade and low stage tumors, in tumors without lymphatic invasion and those with lesser stromal infiltration. In univariate analysis, high intratumoral LVD was associated to higher overall survival. Podoplanin expression by neoplastic cells did not show association with any of the prognostic variable, nor with lymph node involvement or outcome. Conclusions: Intratumoral LVD in vulvar squamous carcinoma is associated with prognostic favorable features. On the other hand, podoplanin expression by neoplastic cells did not seem to influence the behavior of these carcinomas

A carcinogênese do córtex da supra-renal é um processo complexo que envolve alterações genéticas múltiplas e seqüenciais. Embora algumas dessas alterações já tenham sido caracterizadas, de modo geral estes mecanismos permanecem pouco compreendidos. Um conhecimento mais aprofundado dos mesmos não só levaria à descoberta de novos marcadores de prognóstico como também a alvos terapêuticos em potencial. A fim de melhor caracterizarmos os mecanismos envolvidos na progressão maligna do tumor e selecionarmos genes candidatos a serem marcadores de malignidade e alvos terapêuticos, nós estudamos os RNAs de uma linhagem celular derivada de um tumor adrenocortical maligno (NCI-H295A) e um espécime de tumor do córtex da supra-renal por \"Differential Display\" (DDRT-PCR). Foi selecionado um total de 317 transcritos únicos diferencialmente expressos, com base na análise densitométrica digital dos géis de DDRTPCR. A anotação funcional dos genes hiper-expressos mostrou relação com motilidade celular e proliferação. Entre os hipo-expressos foram identificados genes envolvidos na regulação de transcrição, síntese e processamento de RNA e remodelamento da cromatina. A expressão de dois genes entre os transcritos selecionados foi verificada por RT-PCR semi-quantitativa em 19 tumores adrenocorticais adultos e pediátricos, metastáticos e não metastáticos. Os genes da fucosiltransferase-11 e do supressor tumoral BCSC-1 (hiper- e hipo-regulado, respectivamente) encontraram-se diferencialmente expressos nos subgrupos específicos das 19 amostras tumorais. Em suma, o DDRT-PCR revelou-se uma ferramenta valiosa para uma análise global dos transcritomas do córtex da supra-renal e para selecionar genes com possível envolvimento na tumorigênese adrenocortical. Novos aspectos da biologia, progressão e possíveis alvos terapêuticos moleculares puderam ser vislumbrados. / There are important gaps in the present knowledge about adrenocortical tumorigenesis. For this reason we compared by Differential Display RNAs from a carcinoma-derived cell line (NCI-H295A) and a metastatic adrenocortical tumor and characterized 317 differentially expressed transcripts. The up-regulated genes are mainly related to cell motility and proliferation. Among the down-regulated genes, those involved in regulation of transcription, RNA synthesis and processing and chromatin remodeling were identified. Differential expression of FUTT11 and BCSC-1 tumor suppressor gene were confirmed in specific subsets of 19 adult and pediatric adrenocortical tumors and might serve as marker for malignancy. Our data revealed previously unknown aspects of adrenal tumorigenesis.

O tumor odontogênico queratocístico é um tumor odontogênico benigno recentemente classificado como tal pela Organização Mundial de Saúde. O alto índice de recidiva, a similaridade com outras lesões odontogênicas císticas e mutações genéticas associadas, estimulam continuamente estudos com finalidade de aprimorar o diagnóstico e o entendimento do comportamento desta lesão. As citoqueratinas, principal componente do citoesqueleto epitelial, têm sido utilizadas como possíveis marcadores no diagnóstico do tumor odontogênico queratocístico, apesar da discrepância dos resultados publicados. O gene PTCH1, com mutação já relatada associada ao tumor odontogênico queratocístico, expressa proteína de mesmo nome que parece estar associada com a etiologia ou com o prognóstico do tumor odontogênico queratocístico. Vinte casos de tumor odontogênico queratocístico foram submetidos à técnica de imunoistoquímica para detecção da expressão das citoqueratinas 10, 13, 17 e 19 e da proteína PTCH1. Cada caso foi representado por dois momentos distintos da mesma lesão, sendo metade dos casos representados por lesões sem história de recidiva e a outra metade constituída de casos com história de recidiva. A marcação obtida em cada um dos momentos foi comparada, verificando assim a estabilidade de expressão. A influência da inflamação na expressão imunoistoquímica também foi avaliada. As citoqueratinas 10 e 17 se mostraram com maior porcentagem de positividade (82, 5% e 97,5%, respectivamente) e com maior estabilidade entre os momentos (65% e 95%, respectivamente). A proteína PTCH1 foi positiva em todos os momentos, apresentando assim estabilidade total para os casos estudados. Não houve diferença estatisticamente significante, para nenhum dos anticorpos utilizados, entre os grupos sem ou com história de recidiva ou de expressão nas áreas de inflamação. A estabilidade das citoqueratinas 10 e 17 sugere que estas possam ser utilizadas associadamente como auxiliar de diagnóstico do tumor odontogênico queratocístico. A proteína PTCH1 demonstrou alta positividade e estabilidade; porém não pôde ser relacionado ao comportamento do tumor odontogênico queratocístico. / The keratocystic odontogenic tumor is a benign odontogenic tumor recently classified as such by the World Health Organization. The high recurrence rate, the similarity with other odontogenic cystic lesions and the genetic associated mutations continuous stimulate studies intending diagnostic enhancement and behavior understanding of such lesion. The citokeratins, main component of the epithelial cytoskeleton, have been used as possible diagnostic markers of the keratocystic odontogenic tumor, in spite the discrepancy of the published results. The PTCH1 gene, with already reported mutation associated with the keratocystic odontogenic tumor, expresses a protein with the same name that seems to be associated with the etiology or the prognosis of the keratocystic odontogenic tumor. Twenty cases of keratocystic odontogenic tumor were submitted to the immunohistochemical technique for detection of the expression of citokeratins 10, 13, 17 and 19 and the protein PTCH1. Each case was represented by two distinct moments of the same lesion, being half of the cases represented by lesion without recurrence history and the other half constituted of lesion with recurrence history. The obtained staining in each moment was compared, thus verifying the expression stability. The influence of inflammation in the immunohistochemical expression was also evaluated. The cytokeratins 10 and 17 demonstrated higher positivity percentage (82.5% and 97.5%, respectively) and greater stability among the moments (65% and 97.5%, respectively). The PTCH1 protein was positive in all moments, thus presenting total stability for the studied cases. There was no statistical difference, for none of the antibodies, either among the groups without or with history of recurrence or in the expression in areas with inflammation. The stability of the cytokeratins 10 and 17 suggests that they can be used together as auxiliary for the diagnosis of the keratocystic odontogenic tumor. The protein PTCH1 demonstrated high positivity and stability; however it could not be related to the behavior of the keratocystic odontogenic tumor.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-06-27T14:12:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoGenomaTumores.pdf: 2749832 bytes, checksum: e6649779ee4f854ea903101a84af2063 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-07-31T12:53:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoGenomaTumores.pdf: 2749832 bytes, checksum: e6649779ee4f854ea903101a84af2063 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-31T12:53:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_CaracterizacaoGenomaTumores.pdf: 2749832 bytes, checksum: e6649779ee4f854ea903101a84af2063 (MD5) Previous issue date: 2014 / Os tumores bem diferenciados da tireóide representam mais de 95% das neoplasias malignas da glândula. A identificação pré-operatória dos carcinomas papilíferos está bem estabelecida através dos métodos de Punção aspirativa por Agulha fina e Ultrassonografia, com quase 100% de acurácia, enquanto os tumores foliculares significam um dilema para o cirurgião, visto que os métodos existentes não conseguem determinar com eficiência o diagnóstico sendo que 60-80% dos casos operados são benignos. Dessa forma, com o intuito de se analisar alterações genômicas do tipo variações no número de cópias (CNVs) que possam diferenciar esse tumor de outros tipos de doenças da tireóide, foram analisados 13 pacientes com doença tireoidiana (3 bócios, 2 hiperplasias, 4 adenomas foliculares e 4 carcinomas foliculares ) mais 1 individuo sadio através do método de aCGH, para identificação de CNVs que pudessem determinar com eficiência a presença de carcinoma folicular. Os achados foram confrontados com dados de carcinomas papilífero clássico (4 pacientes) e variante folicular (2 pacientes). Foram encontradas 725 CNVs na amostra, 703 dos pacientes com patologia. Dentre estas foram selecionadas 18 regiões mais frequentes. Houve um padrão de amplificação maior em pacientes jovens com adenomas e deleção em pacientes mais velhos. Os pacientes com carcinoma apresentaram taxas de CNVs muito próximas. Os carcinomas foliculares apresentaram padrões exclusivos de alteração nos cromossomos 8 e 12. Concluímos, assim, que os carcinomas foliculares da tireoide são uma patologia com um padrão exclusivo de alterações, não havendo correlação de progressão tumoral a partir de adenomas foliculares, sendo que duas regiões -8p22 e 12p13.32-p13.33, estão presentes em 100% e 75% das amostras respectivamente, podendo ser fortes candidatos a marcadores desse tipo tumoral. / More than 95% of thyroid gland malignancies are well-differentiated tumors. Preoperative diagnosis accuracy for papillary carcinomas, based on FNAC (Fine Needle Aspiration Cytology) and ultrasound screenings, has become nearly 100%. Nevertheless, when follicular neoplasm diagnosis is concerned, this reality is quite different. Using current preoperative screening tools, 60 – 80% of patients suspected to present follicular thyroid cancer, when operated turn out to suffer from benign disease. Therefore, in an effort to improve these results, genomic analysis of Copy Number Variations (CNV) that may more precisely differentiate follicular tumor from other thyroid conditions were carried out in 13 patients (3 bearing goiters, 2 hyperplasias, 4 follicular adenomas, 4 follicular carcinomas, 1 healthy individual). CNVs were tracked through aCGH method in order to detect follicular carcinoma most accurately. Results were compared with classic papillary carcinoma (4 subjects) and follicular variant (2 subjects). Samples demonstrated 725 CNVs, 703 of which belonging to patients with disease. Among these, 18 most frequent regions were selected. Patterns of amplification were more frequent in younger patients, while deletions were more frequent in the elder ones. Carcinoma patients presented very close CNV rates. Also, exclusive patterns of chromosomes 8 and 12 alterations were noticed in follicular carcinoma. Thus, it is possible to conclude that thyroid follicular carcinoma is a condition comprehending exclusive patterns of alterations, and progression of this disease is not related to follicular adenomas. Finally, regions -8p22 and 12p13.32-p12.33 were detected in 100% and 75% of samples respectively, therefore, may be deemed as possible tumoral markers.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-07-03T13:32:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AnaliseProteinasRelacionadas.pdf: 1329774 bytes, checksum: 6d2f5cb5398656b8164140d35fba2f75 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-08-03T01:00:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AnaliseProteinasRelacionadas.pdf: 1329774 bytes, checksum: 6d2f5cb5398656b8164140d35fba2f75 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-03T01:00:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AnaliseProteinasRelacionadas.pdf: 1329774 bytes, checksum: 6d2f5cb5398656b8164140d35fba2f75 (MD5) Previous issue date: 2014 / O câncer gástrico representa um grave problema de saúde pública mundial. A alta incidência de tumores avançados com baixa sobrevida pelas metástases, sobretudo no norte do país, nos fez realizar o estudo comparativo das linhagens de adenocarcinomas gástricos metastáticos (AGP01) com adenocarcinomas gástricos sem metástases (ACP02) através da avaliação proteômica da via de mobilidade celular, que possam ter relação com a formação dessas metástases. Foi realizado estudo proteômico das linhagens AGP01 e ACP02 através da técnica da cromatografia líquida de alta performance 2D Nanoultra (UPLC) em conjunto com nanoESI-MSE (MudPIT) e análise funcional das proteínas diferencialmente expressas no programa Ingenuity Pathways Analysis (IPA). Observamos 19 proteínas com aumento da expressão na linhagem AGP01 em relação a ACP02, as quais apresentam relação com movimento, organização e morfologia celular, onde podemos sugerir que as proteínas ACTB, ANXA1, LGALS1, IQGAP1, EZR, MSN, MYH9 e S100A11, de acordo com nossos achados e corroborados pela literatura pesquisada, tem associação com a metástase de adenocarcinomas gástricos. Outras proteínas se mostraram em forte expressão em nosso estudo, mas na literatura pesquisada sua expressão tem relação com as vias de disseminação apenas de outros tumores, como: mama (RAB5C), pulmão (PLS1 e CAP1), reto (ACTN1) e GIST (SYNE2). Conflitantes com nosso estudo, as expressões das proteínas CAPZA1, FLNA e FLNC, foram observadas na literatura como um inibidor de avanço tumoral, enquanto que as expressão das proteínas MYL6, MYL6B, e ACTN2, aparecem pela primeira vez como tendo relação com a mobilidade celular, invasão e metástase em câncer. / Gastric cancer is a serious public health problem worldwide. The high incidence of advanced tumors with poor survival by metastasis, especially in the north, made us realize the comparative study of strains of metastatic gastric adenocarcinoma (AGP01) with gastric adenocarcinoma without metastasis (ACP02) by proteomic evaluation of cell motility that may be related to the formation of these metastasis. Proteomic study was conducted strains AGP01 and ACP02 through the technique of high performance liquid chromatography 2D Nanoultra (UPLC) together with nanoESI - (MSE mudpit) and functional analysis of differentially expressed proteins in the Ingenuity Pathways Analysis (IPA) software. We observed 19 proteins with increased expression in AGP01 lineage regarding ACP02, which are related to movement, organization and cell morphology, where we suggest that ACTB, ANXA1, LGALS1, IQGAP1, EZR, MSN, MYH9 and S100A11 proteins, according to our findings and supported by the research literature is associated with metastasis of gastric adenocarcinomas. Other proteins showed strong expression in our study, but its expression in the research literature is related to the dissemination routes only other tumors, such as breast (RAB5C), lung (PLS1 and CAP1), rectum (ACTN1) and GIST (SYNE2). Conflicting with our study, the expressions of CAPZA1, FLNA and FLNC protein, were observed in the literature as an inhibitor of tumor advancement, where the expression of MYL6, MYL6B and ACTN2 proteins first appear as being related to cell motility, invasion and metastasis in cancer.

Introdução: Os carcinomas vulvares são tumores raros com morbidade elevada associada ao tratamento cirúrgico padrão e altos índices de recorrência loco-regional. Os vasos linfáticos são importantes vias de disseminação regional e o estado linfonodal é o principal indicador prognóstico. A densidade linfática do tumor, assim como moléculas relacionadas à linfangiogênese tem sido avaliadas em vários tumores para prever metástase linfonodal e para identificar possíveis alvos terapêuticos. Entre as moléculas relacionadas ao controle da linfangiogênese destaca-se a podoplanina, cuja expressão por células neoplásicas de tipo escamoso pode inibir a disseminação linfática. Não identificamos até o momento nenhum estudo que tenha avaliado o papel da densidade de vasos linfáticos intratumorais ou da expressão de podoplanina pelas células neoplásicas no comportamento de carcinomas escamosos vulvares. Objetivos: Nossos objetivos foram estudar a densidade intratumoral dos vasos linfáticos (DVL) e a expressão de podoplanina pelas células neoplásicas em carcinomas escamosos vulvares no sentido de determinar sua relação com o desfecho e fatores prognósticos clássicos, incluindo metástase linfonodal. Métodos: Selecionamos 35 pacientes com carcinoma de células escamosas vulvares submetidas à tratamento cirúrgico primário incluindo vulvectomia e dissecção regional de nódulos linfáticos. Após revisão dos dados dos prontuários médicos (idade da paciente, estadiamento, tipo de tratamento e tamanho do tumor), todas as lâminas foram reexaminadas para determinar o grau histológico, invasão linfática peritumoral e profundidade da infiltração. Foram selecionadas áreas do tumor para a construção de blocos de parafina com microarranjos de tecidos e identificação imunoistoquímica de podoplanina pelo anticorpo D2-40. A DVL intratumoral foi quantificada pela contagem de vasos marcados nas áreas de maior densidade. O número de vasos foi contado em 10 campos microscópicos de grande aumento e a média foi o valor atribuído para a DVL em cada caso. A expressão de podoplanina pelas células neoplásicas foi considerada positiva quando mais de 10% das células apresentaram coloração citoplasmática de intensidade moderada a intensa. Investigamos a associação das duas variáveis com as características prognósticas clássicas (idade, estadiamento, tamanho do tumor, grau histológico, embolização vascular peritumoral, nível de infiltração do tumor, comprometimento linfonodal), assim como sua associação com desfecho. Resultados: Valores mais elevados de DVL intratumoral foram identificados em tumores de baixo grau, em estádios iniciais, em tumores sem invasão linfática e naqueles com menor infiltração estromal. Na análise univariada, DVL intratumoral elevada foi associada a maior sobrevida geral . A expressão de podoplanina pelas células neoplásicas não se relacionou a nenhuma das variáveis prognósticas, comprometimento linfonodal ou sobrevida, assim como não se associou à DVL. Conclusões: A DVL intratumoral em carcinomas escamosos vulvares associa-se a características prognósticas favoráveis. Já a expressão de podoplanina pelas células neoplásicas não parece interferir na apresentação e comportamento destes carcinomas. / Introduction: Vulvar carcinomas are rare tumors presenting high morbidity associated to the standard surgical treatment and high rates of locoregional recurrence. Lymphatic vessels serves as major routes for regional dissemination and the lymph node status is the main prognostic indicator. Tumor lymphatic density as well as lymphangiogenesis-related molecules has being studied in various tumors in order to predict lymph node metastasis and to identify a possible candidate to target therapy. Among the molecules related to lymphangiogenesis in the group of squamous cell carcinomas podoplanin expression by neoplastic cells emerges as an inhibitor of lymphatic dissemination. To our knowledge, no study evaluated the role of intratumoral lymphatic vessels or podoplanin expression by neoplastic cells in the behavior of vulvar squamous carcinomas. Objectives: Our aims were to study the intratumoral lymphatic vessel density (LVD) and podoplanin expression by neoplastic cells in vulvar squamous carcinoma according their relationship with outcome and classical prognostic factors, including lymph node metastasis. Methods: We selected 35 cases of patients with vulvar squamous cell carcinoma submitted to primary surgical treatment that included vulvectomy and regional lymph nodes dissection. After revision of medical records data (age of patient, stage, type of surgery and tumor size), all the slides were reviewed to achieve histological grade, peritumoral lymphatic invasion and depth of infiltration. Areas of the tumor were selected to construction of tissue microarrays paraffin blocs and immunohistochemical identification of podoplanin by the D2-40 antibody. Intratumoral LVD was quantified by counting the stained vessels in hotspots areas. The number of vessels was counted in 10 high power microscopic fields and the mean was the value of the LVD for each case. Podoplanin expression by neoplastic cells was considered positive when more than 10% of the cells showed moderate to strong cytoplasmatic stained. We investigated the association of the two variables with classical prognostic features (age of patient, stage, tumor size, histologic grade, vascular involvement, depth of infiltration, lymph node involvement as well outcome. Results: Higher values of intratumoral LVD were identified in low grade and low stage tumors, in tumors without lymphatic invasion and those with lesser stromal infiltration. In univariate analysis, high intratumoral LVD was associated to higher overall survival. Podoplanin expression by neoplastic cells did not show association with any of the prognostic variable, nor with lymph node involvement or outcome. Conclusions: Intratumoral LVD in vulvar squamous carcinoma is associated with prognostic favorable features. On the other hand, podoplanin expression by neoplastic cells did not seem to influence the behavior of these carcinomas

A carcinogênese do córtex da supra-renal é um processo complexo que envolve alterações genéticas múltiplas e seqüenciais. Embora algumas dessas alterações já tenham sido caracterizadas, de modo geral estes mecanismos permanecem pouco compreendidos. Um conhecimento mais aprofundado dos mesmos não só levaria à descoberta de novos marcadores de prognóstico como também a alvos terapêuticos em potencial. A fim de melhor caracterizarmos os mecanismos envolvidos na progressão maligna do tumor e selecionarmos genes candidatos a serem marcadores de malignidade e alvos terapêuticos, nós estudamos os RNAs de uma linhagem celular derivada de um tumor adrenocortical maligno (NCI-H295A) e um espécime de tumor do córtex da supra-renal por \"Differential Display\" (DDRT-PCR). Foi selecionado um total de 317 transcritos únicos diferencialmente expressos, com base na análise densitométrica digital dos géis de DDRTPCR. A anotação funcional dos genes hiper-expressos mostrou relação com motilidade celular e proliferação. Entre os hipo-expressos foram identificados genes envolvidos na regulação de transcrição, síntese e processamento de RNA e remodelamento da cromatina. A expressão de dois genes entre os transcritos selecionados foi verificada por RT-PCR semi-quantitativa em 19 tumores adrenocorticais adultos e pediátricos, metastáticos e não metastáticos. Os genes da fucosiltransferase-11 e do supressor tumoral BCSC-1 (hiper- e hipo-regulado, respectivamente) encontraram-se diferencialmente expressos nos subgrupos específicos das 19 amostras tumorais. Em suma, o DDRT-PCR revelou-se uma ferramenta valiosa para uma análise global dos transcritomas do córtex da supra-renal e para selecionar genes com possível envolvimento na tumorigênese adrenocortical. Novos aspectos da biologia, progressão e possíveis alvos terapêuticos moleculares puderam ser vislumbrados. / There are important gaps in the present knowledge about adrenocortical tumorigenesis. For this reason we compared by Differential Display RNAs from a carcinoma-derived cell line (NCI-H295A) and a metastatic adrenocortical tumor and characterized 317 differentially expressed transcripts. The up-regulated genes are mainly related to cell motility and proliferation. Among the down-regulated genes, those involved in regulation of transcription, RNA synthesis and processing and chromatin remodeling were identified. Differential expression of FUTT11 and BCSC-1 tumor suppressor gene were confirmed in specific subsets of 19 adult and pediatric adrenocortical tumors and might serve as marker for malignancy. Our data revealed previously unknown aspects of adrenal tumorigenesis.

OBJETIVO: Determinar os valores séricos do ligante do receptor do ativador do fator nuclear Kappa B (RANKL) e da osteoprotegerina (OPG) em pacientes com Artrite Idiopática Juvenil de início poliarticular (AIJp) em atividade e avaliar a possível correlação destes valores com a presença radiológica de erosões ósseas. MÉTODOS: Trinta pacientes do sexo feminino com diagnóstico de AIJ de início poliarticular segundo os critérios da ILAR (International League of Associations for Rheumatology) em atividade e trinta crianças saudáveis (controles) pareadas por idade e sexo foram selecionadas consecutivamente para este estudo. Todas as articulações comprometidas foram radiografadas e avaliadas, com especial interesse, para a presença de erosões ósseas. Concentrações séricas do RANKL e OPG foram medidas por enzima-imunoensaio (Biomedica, Vienna, Austria). RESULTADOS: Pacientes com AIJp em atividade apresentaram altos valores séricos de RANKL e menores taxas de OPG/RANKL comparadas com controles [2,90 (0,1-37,4) vs. 0,25 (0,1-5,7) pg/ml, p=0,007 e 21,25 (1,8- 897,6) vs. 347,5 (9-947,8)] pg/ml, p=0,005). Diferentemente, não houve diferença em relação à concentração sérica de OPG quando se comparou os pacientes e controles [55,24 (28,34-89,76) vs. 64,42 (30,68-111,28) pg/ml, p=0,256]. Maiores concentrações de RANKL e menores taxas de OPG/RANKL também foram observadas em pacientes com AIJp em atividade com erosões ósseas comparadas com controles [3,49 (0,1-37,4) vs. 0,25 (0,1-5,7) pg/ml, p=0,0115 e 14,3 (1,8-897.6) vs. 347,5 (9-947,8) p=0,016]. Em contraste, valores séricos de RANKL e a taxa de OPG/RANKL foram semelhantes em pacientes com AIJp sem erosões ósseas comparadas com controles [1,75 (0,1-10,9) vs 0,25 (0,1-5,7) pg/ml, p=0,055 e 29,2 (3,3-756,8) vs. 347,5 (9- 947,8), p=0,281]. CONCLUSÃO: Estes dados sugerem que pacientes com AIJp em atividade com erosões ósseas apresentam altos valores séricos de RANKL e baixa taxa de OPG/RANKL indicando que estas alterações podem refletir o comprometimento ósseo nesta doença. / OBJECTIVE: To determine the serum levels of receptor activator of nuclear factor kB-ligand (RANKL) and osteoprotegerin (OPG) in active polyarticularonset Juvenile Idiopathic Arthritis patients (pJIA) and evaluate its possible correlation with bone erosions on the X-ray. METHODS: Thirty female girls with active pJIA diagnosis according ILAR criteria (International League of Associations for Rheumatology) and 30 healthy children gender and agematched controls were consecutively selected for this study. All involved articulations were evaluated by X-ray and analyzed for the presence of bone erosions. The serum levels of RANKL and OPG were measured using an enzyme-linked immunosorbent (Biomedica, Vienna, Austria). RESULTS: Results: Patients with active pJIA had higher levels of serum RANKL and lower OPG/RANKL ratio compared to controls [2.90 (0.1-37.4) vs. 0.25 (0.1- 5.7) pg/ml, p=0.007] and 21.25 (1.8-897.6) vs. 347.5 (9-947.8) pg/ml, p=0.005]. However, levels of OPG were comparable in both groups [55.24 (28.34-89.76) vs. 64.42 (30.68-111.28) pg/ml, p=0.256]. Higher levels of serum RANKL and lower OPG/RANKL ratio was also observed in active pJIA patients with bone erosions compared to controls [3.49 (0.1-37.4) vs. 0.25 (0.1-5.7) pg/ml, p=0.0115 and 14.3 (1.8-897.6) vs. 347.5 (9-947.8), p=0.016]. In contrast, RANKL levels and OPG/RANKL ratio were alike in pJIA patients without bone erosion and controls [1.75 (0.1-10.9) vs. 0.25 (0.1- 5.7) pg/ml, p=0.055 and 29.2 (3.3-756.8) vs. 347.5 (9-947.8), p=0.281]. CONCLUSION: These data suggest that active pJIA with bone erosion is associated with high serum levels of RANKL and low OPG/RANKL ratio indicating that these alterations may reflect bone damage in this disease.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:03:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000418046-Texto+Completo-0.pdf: 4060677 bytes, checksum: 5a23c04f46b75d342b7b1205a3877568 (MD5) Previous issue date: 2009 / Introduction: metabolic syndrome (MS) is defined as a set of atherothrombotic and inflammatory abnormalities. These patients are predisposed to increased morbidity and mortality from cardiovascular disease (CVD) and type 2 diabetes mellitus (DM2). Several inflammatory biomarkers of lipid metabolism-related oxidative and ischemic pathophysiology of MS have been investigated. Recent studies suggest that ischemia modified albumin (IMA) is a biomarker of ischemia and that its levels are a possible indication of microvascular dysfunction in patients with MS. Objective: to investigate the association between these lipids, oxidatives and inflammatory processes potentially associated with ischemic in patients with MS. Material and methods: prospective, case-control study that included 32 (30. 2%) healthy subjects (control - C) and 74 (69. 8%) subjects with MS (case group - MS). Individuals with MS were recruited at cardiometabolic risk center of Cardiology Service, Hospital São Lucas da Pontificia Universidade Catolica do Rio Grande do Sul and the healthy were recruited from the Universidade Federal de Santa Maria (UFSM - students, staff and teachers). The diagnostic criteria of MS was used NCEP-ATPIII. Glucose, total cholesterol (TC), HDL and triglycerides (TG) were determined by enzymatic colorimetric method (Ortho-Clinical Diagnostics), LDL was determined by the Friedewald equation; ultra C-sensitive protein (CRP) was measured by nephelometry, autoantibody anti-oxidized LDL (anti -oxLDL) and oxidized LDL (oxLDL) were determined by ELISA; IMA was measured by colorimetric assay with cobalt.Results: The sample included 34 men and 72 women. The average age of group C was 55. 2 ± 8. 8 years and the MS group 57. 6 ± 8. 3 years (p = 0. 142). The MS group had a higher BMI (32. 6 ± 6. 1 kg/m2, p = 0. 0001), systolic blood pressure (147 ± 26. 8 mmHg, p = 0. 001), diastolic blood pressure (85. 9 ± 15. 9 mmHg, p = 0. 01), glucose (133. 7 ± 68. 7 mg/dL, p=0. 001), TC (204 ± 58. 1 mg/dL, p=0. 001), LDL (114. 4 ± 49. 5 mg/dL, p=0. 001), TG (214. 9 ± / 34. 8 mg/dL, p=0001 ) compared with C group. IMA levels, CRP, IL-6, oxLDL and anti-oxLDL were significantly higher (0. 618 ± 0. 1355, p=0. 0001; 1. 72 ± 0964, p=0. 0001; 53. 20 ± 14. 52, p=0. 0001; 0662 ± 0461, p= 0. 001; 27,822 ± 17,010, p=0. 001) respectively in MS group, compared to C group. Multivariate analysis showed an association between elevated levels of IMA and MS and this was independent of sex, age, DM2 and hypercholesterolemia (p=0,0405). Conclusion: This study reports an association between IMA, inflammatory biomarkers of oxidative and lipid metabolism with MS, indicating that those individuals with MS are more likely to trigger the atherothrombotic events. Additional studies involving genetic and environmental interactions in patients with MS can help to elucidate the potential clinical role of the IMA, to become a predictor of atherothrombotic events, aiming to reduce the morbidity and mortality by CVD. / Introdução: síndrome metabólica (SM) é definida como um conjunto de anormalidades aterotrombóticas e inflamatórias. Seus portadores apresentam predisposição aumentada a morbi-mortalidade por doenças cardiovasculares (DCV) e diabetes mellitus tipo 2 (DM2). Diversos biomarcadores inflamatórios, do metabolismo lipídico, oxidativo e isquêmico, ligados a fisiopatologia da SM têm sido investigados. Recentes estudos sugerem que a albumina modificada pela isquemia (IMA) é um biomarcador de isquêmia e que seus níveis elevados representam uma possível indicação de disfunção microvascular em pacientes com SM. Objetivo: investigar a associação de marcadores lipidicos, oxidativos e inflamatórios potencialmente associados a processos isquêmicos em pacientes com síndrome metabólica. Material e métodos: estudo prospectivo, do tipo caso-controle, onde foram incluídos 32 (30,2%) indivíduos saudáveis (grupo controle – C) e 74 (69,8%) indivíduos com SM (grupo caso – SM). Os indivíduos com SM foram recrutados no ambulatório de risco cardiometabólico do Serviço de Cardiologia do Hospital São Lucas da Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul e os saudáveis foram recrutados na Universidade Federal de Santa Maria (UFSM - alunos, funcionários e professores). O critério diagnóstico de SM utilizado foi o NCEP-ATPIII. Glicose, colesterol total (CT), HDL e triglicerídeos (TG) foram determinados por método enzimático colorimétrico (Ortho-clinical Diagnostics); LDL foi determinada pela equação de Friedwald; Proteína C ultra Sensível (PCR-us) foi determinada por nefelometria, autoanticorpo anti-LDL-oxidada (anti-OxLDL) e LDL oxidada (OxLDL) foram determinadas por ensaio imunoenzimatico (ELISA); IMA foi mensurada por ensaio colorimétrico com cobalto.Resultados: a amostra incluiu 34 homens e 72 mulheres. A média de idade do grupo C foi 55,2±8,8 anos e do grupo SM 57,6±8,3 anos (p=0,142). O grupo SM apresentou maior IMC (32,6±6,1 kg/m2, p=0,0001), pressão arterial sistólica (147±26,8 mmHg, p=0,001), pressão arterial diastólica (85,9±15,9 mmHg, p=0,01), glicose (133,7±68,7 mg/dL, p=0,001), CT (204±58,1 mg/dL, p=0,001), LDL (114,4±49,5 mg/dL, p=0,001), TG (214,9±/34,8 mg/dL, p=0,001) em comparação com o grupo C. Níveis de IMA, PCR-us, IL-6, OxLDL e anti-OxLDL foram significativamente mais elevados (0,618±0,1355, p=0,0001; 1,72±0,964, p=0,0001; 53,20±14,52, p=0,0001; 0,662±0,461, p=0,001; 27,822±17,010, p=0,001) respectivamente no grupo SM, em relação ao grupo C. A análise multivariada mostrou associação entre níveis elevados de IMA e SM e esta foi independente de sexo, idade DM2 e hipercolesterolemia (p=0,0405). Conclusão: no presente estudo, observou-se associação entre IMA, biomarcadores inflamatórios, do metabolismo lipídico e oxidativo com SM, indicando que esses indivíduos portadores de SM estão mais propensos a desencadearem processos aterotrombóticos. Estudos adicionais envolvendo interações genéticas e ambientais em pacientes com SM podem contribuir para elucidarmos o potencial papel clínico da IMA, para que se torne um preditor de eventos aterotrombóticos, com vistas à diminuição da morbi-mortalidade cardiovascular.

Made available in DSpace on 2016-06-02T19:32:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 4148.pdf: 1575415 bytes, checksum: cf40520ac0a070a3c946be9bfd2efafe (MD5) Previous issue date: 2011-03-30 / Universidade Federal de Sao Carlos / Estuarine and coastal regions are often impacted by various anthropogenic influences derived from industries, port activities, agriculture and sewage. Two Brazilian estuaries (Piraque-açu - ES and Santa Maria - ES) were evaluated in order to correlate genetic, biochemical, morphological and physiological biomarkers determined in the fish Centropomus parallelus with water quality parameters, metals in superficial and interstitial water and sediments. Integrated physical and chemical parameters were measured in Victoria Bay and Santa Cruz during the winter and summer. Al, Cr, Mn, Fe, Ni, Cu, Zn, Se, Ag, Cd, Pb, Hg were observed in samples of water, interstitial water, sediment and fish muscle. Biomarkers include the frequency of micronuclei and nuclear alterations, NKA activity, histopathological changes and cellular chloride. The biomarkers showed changes mostly at reversible, triggering mild to moderate level of contamination. The characteristics of the estuary, as organic matter and dissolved oxygen are correlated with the concentration of metals present in C. parallelus, influencing the bioavailability of the same. The combined use of biomarkers to measures of water quality shows the importance of assessing the degree of contamination and its consequences for aquatic biota. / Regiões estuarinas e costeiras são frequentemente impactadas por vários tipos de influências antropogênicas derivadas de indústrias, atividades portuárias, agricultura e esgoto. Dois estuários brasileiros (Piraque-açu ES e Santa Maria ES) foram avaliados com o objetivo de correlacionar biomarcadores genéticos, bioquímicos, morfológicos e fisiológicos determinados no peixe Centropomus parallelus com parâmetros de qualidade da água, metais na água, água intersticial e sedimentos. Parâmetros físico-químicos integrados foram medidos na Baía de Vitória e em Santa Cruz durante as estações de inverno e verão. Al, Cr, Mn, Fe, Ni, Cu, Zn, As, Se, Ag, Cd, Pb, Hg foram observadas em amostras de água, água intersticial, sedimentos e no músculo do peixe. Biomarcadores incluem a freqüência de alterações nucleares e micronúcleo, atividade da NKA, alterações histopatológicas e número de células cloreto. Os biomarcadores apresentaram alterações em sua maioria a nível reversível, detonando nível leve a moderado de contaminação. As características do estuário, como matéria orgânica e oxigênio dissolvido se correlacionaram com a concentração de metais presentes em C. parallelus, influenciando na biodisponibilidade dos mesmos. O uso combinado de biomarcadores com parâmetros de qualidade da água mostra a importância de avaliar o grau de contaminação e suas consequências sobre a biota aquática.