Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 370964 bytes, checksum: 4fbb1985432d879bf053fe1416468899 (MD5) Previous issue date: 2008-10-06 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / B chromosomes, called supernumerary or accessory too, has been founded in fungi, plants and animals. This chromosomes have a rate of no mendelian segregation and he can occurs, since one to many copies by individual. In the gender Partamona, of six citogenetic characterazed species nowadays, only P. helleri owned B chromosome. RAPD mark has been identified as associated to this chromosome in a colony from Viçosa City-MG. After this, it has been cloned, sequenciated and transformated in a SCAR mark. This same mark has been identified in P. cupira, P. criptica and P. rustica, what suggested this species have B chromosome, too. Moreover, this same mark has been identified in a colony of Salvador City-BA. whose individuals have a big heterochromatic B chromosome. How it's possible that there is a association between the presence of B chromosomes, this work had as aim detect the presence of B chromosome in P. cupira and verified a possible association between them and the presence of SCAR mark described above. Another object was the sequenciation of SCAR fragment from P. cupira, P. criptica, P. rustica and P. helleri (Salvador City-BA), with the aim of comparer the level of identity between the SCAR sequences. As resulted, the four colony at all from P. cupira analised, only two ownied the chromosomic number 2n=34, otherwise the other two colonies ownied same individuals that demonstrated have the presence of a great B chromosome (GUI 1 E GUI 11). Another observation was CMA3 mark in the short arm of this supernumerary chromosomes, what suggest that them may have owned ribossomal DNA sequeces. Moreover, it has been verified a clear association between the presence of SCAR mark and B chromosomes in the individuals from colonies GUI 1 E GUI 11. It's considered that sequences compared at all, have been only same gaps and almost none variable site, between them, what suggests that the level of identity between sequences is extremely high. It's suggests some kind of importance in relation to the adaptation of chromosome B, nowadays unknown, or the born of B, throw interspecific mating no detected yet. Future studies will analyze the different hypothesis about the origin of B chromosomes in the genera Partamona and the association between fragments from SCAR primers with the presence of Bs in P. criptica, P. rustica e P. helleri (Salvador City-BA). / Cromossomos B, também chamados de cromossomos extra- numerários ou acessórios ocorrem em fungos, plantas e animais. Estes cromossomos possuem um padrão de segregação não mendeliano, podendo existir de uma a várias cópias por indivíduo. No gênero Partamona, de seis espécies caracterizadas citogeneticamente até então, somente P. helleri apresentou cromossomo B. Um marcador RAPD foi identificado como associado a esse cromossomo em uma colônia oriunda de Viçosa-MG, sendo posteriormente clonado, sequenciado e transformado em marcador SCAR. Este mesmo marcador foi identificado em P. cupira, P. criptica e P. rustica, o que sugere que estas espécies também possuem cromossomos B. Além disso, esse mesmo marcador foi detectado em indivíduos de um ninho de P. helleri de Salvador - BA, cujos indivíduos possuíam um grande cromossomo B heterocromático. Podendo haver uma ligação entre a presença do marcador SCAR nestas espécies e a presença de cromossomos Bs, este trabalho teve como objetivo detectar a presença de cromossomos B em P. cupira e verificar se existe uma associação entre ele e a presença do marcador SCAR descrito acima. Um outro objetivo foi o sequenciamento dos fragmentos SCARs de P. cupira, P. criptica, P. rustica e P. helleri de Salvador-BA, com o propósito de comparar o nível de identidade entre as sequencias de SCAR. Como resultado, das 4 colônias de P. cupira analisadas, duas apresentaram o número de 2n=34, ao passo que as outras duas apresentaram em alguns indivíduos um cromossomo B de grande tamanho (colônias GUI 1 e GUI 11). Observou-se ainda, uma marcação de CMA3 no braço curto destes cromossomos extranumerários, o que sugere que o mesmo pode conter sequencias de genes de DNA ribossomal nesta espécie. Verificou-se também uma clara associação entre a presença do marcador SCAR e a de cromossomos B, nos indivíduos das colônias GUI 1 e GUI 11. Levando em conta que as sequências, comparadas em conjunto possuíam apenas alguns gaps e quase nenhum sítio variável entre elas, pode-se dizer que o nível de identidade entre elas é extremamente alto, o que sugere algum tipo importância adaptativa em relação ao cromossomo B, ainda desconhecida, ou o surgimento deste último, através de cruzamentos interespecíficos, ainda não detectados entre as espécies do gênero. Estudos futuros deverão analisar as diferentes hipóteses levantadas sobre a origem dos cromossomos B no gênero Partamona, bem como a associação dos fragmentos oriundos dos primers SCAR de P. helleri com a presença destes cromossomos em P. criptica, P. rustica e P. helleri de Salvador BA.

Submitted by Bruno Wakayama null (bru_nowakayama@hotmail.com) on 2016-11-20T14:35:31Z No. of bitstreams: 1 BRUNO WAKAYAMA - Dissertação.pdf: 1262027 bytes, checksum: 67a6e66329a22825763157d5501c30b4 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-11-24T16:18:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 wakayama_b_me_arafo.pdf: 1262027 bytes, checksum: 67a6e66329a22825763157d5501c30b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-24T16:18:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 wakayama_b_me_arafo.pdf: 1262027 bytes, checksum: 67a6e66329a22825763157d5501c30b4 (MD5) Previous issue date: 2016-11-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A hepatite B e a AIDS são doenças virais de grandes destaques na saúde pública, devido seus elevados índices epidemiológicos, de morbidade e mortalidade. O estigma criado às doenças virais, principalmente pelo vírus da hepatite B (VHB) e vírus da imunodeficiência humana (HIV), repercute de forma negativa e impactante à vida da pessoa infectada, gerando atitudes discriminatórias e preconceituosas, principalmente no acesso aos serviços de saúde. Entre as duas doenças, a hepatite B é a única que tem a imunoprevenção, a qual é realizada através da vacinação. A imunização contra VHB é a principal forma de prevenção da doença, além de ser uma medida de autocuidado que deve ser preconizado no exercício da odontologia. O objetivo deste estudo foi avaliar o conhecimento e a existência da discriminação, através das atitudes dos graduandos em odontologia, frente à representação da Hepatite B e HIV/AIDS; e verificar a imunização dos graduandos, contra o vírus da hepatite B utilizando o teste imunocromatográfico, para o rastreamento de anticorpos anti-HBs. No primeiro capítulo, o universo amostral do estudo foi composto de todos os alunos de graduação regularmente matriculados (n=525). Foi criado um inquérito semiestruturado e autoaplicável, exclusivamente para este estudo, que versava sobre HIV/AIDS e Hepatite B. No segundo capítulo, foram convidados a participar da pesquisa, todos os alunos que desenvolviam atividades clínicas (n=263). Como instrumento de pesquisa, foi utilizado um inquérito semiestruturado e autoaplicável que abordava o tema hepatite B. Além disso, para verificar a existência de anticorpos contra o VHB entre os participantes do estudo, foi empregado o teste imunocromatográfico anti-HBsAg (Wama-Brasil). Para análise estatística dos dados, foi utilizado o pacote estatístico SPSS versão 21.0 (Statistical Package for the Social Sciences). Em relação aos resultados, a taxa de participação do estudo foi de 88% (462). Quanto ao conhecimento dos alunos sobre o agente etiológico da AIDS e hepatite B, 58,9% e 55,8%, respectivamente, acertaram. Observou-se que 91,8% e 85,3% dos alunos, respectivamente, atenderiam em seus consultórios pacientes infectados pelo VHB e HIV, entretanto, grande parte dos mesmos, acreditava na existência de diferenças no protocolo clínico de atendimento a esses indivíduos. Além disso, verificou-se que apenas 31,4% e 38,7% dos graduandos consentiriam em ser atendido por um cirurgião-dentista com AIDS e hepatite B. No segundo capítulo, obteve-se 89,35% (n=235) de taxa de participação ao estudo. Dos 208 (89,7%) alunos que tomaram a vacina contra o VHB, apenas 53,2% estavam imunizados contra o vírus. Verificaram-se associações estatísticas em relação àqueles que tomaram menos de três doses (OR=2,539) e que não sabiam quantas doses tinham tomado (OR=3,022). Já a idade, (OR=0,834) se mostrou como um fator de proteção à imunização. Conclui-se que as atitudes dos alunos frente ao VHB e HIV, foram consideradas discriminatórias, principalmente pelos acadêmicos do primeiro ano de graduação. Houve uma maior expressividade no receio de ser atendido por um profissional infectado, ao invés de tratar um paciente doente. Além disso, verificou-se uma baixa prevalência de graduandos em odontologia imunizados contra o vírus da hepatite B. / Hepatitis B and AIDS are viral diseases of great impact in the public health system because its high epidemiological morbidity and mortality. The stigma created about viral diseases, especially hepatitis B (HBV) and HIV affects negatively and is impacting the life of the infected person, generating discriminatory and prejudicial attitudes, especially in access to health services. Among the two diseases, hepatitis B is the one that has the vaccine prevention, which is reached by vaccination. Immunization against HBV is the main way to prevent the disease, as well as being a matter of self-care, which should be emphasized in the practice of dentistry. The aim of this study was to evaluate the knowledge and the existence of discrimination, the attitudes of students in dentistry, in relationship to the representation of Hepatitis B and HIV / AIDS; also checked the immunization of students in dentistry, against hepatitis B virus using the imuno test for the search of anti-HBs antibodies. In the first chapter, the samples of the study were all from undergraduate students enrolled (n = 525). A self-administered semi-structured survey was exclusively created for this study, which was about HIV / AIDS and Hepatitis B. In the second chapter, were invited to participate in the study, all students who developed clinical activities (n = 263). The research was used in a self-administered semi-structured survey that addressed the theme hepatitis B. In addition, to check for antibodies against HBV among the participants of the study, we used the immunoassay anti-HBsAg (Wama-Brazil). For the statistical analysis, we used the statistical package SPSS version 21.0 (Statistical Package for Social Sciences). Regarding the results, the rate of participation in the study was 88% (462). As the students' knowledge of the etiological agent of AIDS and hepatitis B, 55.8% and 58.9% were respectively coherent. It was observed that 91.8% and 85.3% of students, would attend in their offices patients infected with HBV and HIV, however, most of them believed in the existence of differences in the clinical protocol of care for those individuals. Moreover, it was found that only 38.7% and 31.4% of the students consent to be treated by a dental surgeon with hepatitis B or AIDS. In the second chapter, it obtained 89.35% (n = 235) rate of participation in the study. From 208 (89.7%) students who took the vaccine against HBV, only 53.2% were immunized against the virus. There were statistical associations, compared to those who took less than three doses (OR = 2.539) and did not know how many doses should be taken (OR = 3,022). In contrast, age (OR = 0.834) was shown as a protective factor to immunization. In conclusion, the attitudes of students regarding HIV and HBV, were considered discriminatory, especially by academics of the first year of graduation. There was a greater expressiveness in fear of being seen by a professional infected, instead of treating a sick patient. Furthermore, there was a low prevalence of dental students immunized against the virus of hepatitis B.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:44:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGPV14MA145.pdf: 557284 bytes, checksum: c1f697a8e08ea10590159b51ac90bac8 (MD5) Previous issue date: 2014-03-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / For bud burst induction the main practice adopted is hydrogen cyanamide with mineral oil spraying. However, hydrogen cyanamide is classified as class I toxicity (highly toxic). Therefore, it is essential to study eficiente alternative methods in breaking dormancy, when cold requirements are not achieved. This study aimed to evaluate alternatives products to the use of hydrogen cyanamide to induce budding on apple Maxi Gala and the effect of these on orchard yield. The experimente was conducted in a randomized block design with five replications in a comercial orchard located at the city Vacaria RS during the agricultural years 2012/13 and 2013/14. The treatments were: T1 control (no treatment); T2 OM (Mineral Oil) 2%; T3 OV (egetable Oil) 2%; T4 - OV 4%; T5 OM 2% + OV 2%; T6 OM 2% + 4% OV; T7 - Dormex® + OM and T8 - Erger® + Ca nitrate. Thwe results were subjected to anova and means comparison by Duncan s test. The variables analyzed were budding percentage and yield per plant; the highest budding was observed in the treatment T8 (89.39), however this had the lowest production (11.86 kg plant-¹. The highest yield was observed in treatments T1, T4 and T6 (24, 22.6, and 22.5 kg plant-¹, respectively). The mixo f mineral oil 2% + vegetable oil 4% (T6) for this experimente proved to bean alternative to the use of hydrogen cyanamide allowing a good percentage of budding and good fruit yield. The treatment with Erger-¹ despite having the highest budding was not eficiente on fruit yield. In the last evaluation T8 treatment proved to be superior to other treatments with 90.23% of budding. T1 had the best yield per plant with 24.65 kg. The highest number of fruits was on T3. The largest amount of soluble solids ocurred in treatment T8 (13.07). in the next vegetative and productive cycle there was no significant difference for the variables, average fruit weight, number of fruit, soluble solids firmness. Treatment with Erger®, mineral oil 2% + vegetable oil 4% and only vegetable oil 4% had the highest yield. For the agricultural year 2012/13 and 2013/14 all treatments anticipated and standardized the shoots compared to control. The treatment of OM 2% + OV 4% promotes budding of apple plants with the same efficiency as the use hydrogen cyanamide. The treatment with Erger® promoted higher budding, but reduced the yield, causing alternation over the years / Para a indução de brotação a principal prática adotada é a pulverização com cianamida hidrogenada juntamente com óleo mineral. Entretanto, a cianamida hidrogenada é classificada como classe toxicológica I (extremamente tóxica). Portanto, torna-se imprescindível a realização de estudos sobre métodos alternativos eficientes na superação de dormência, quando as exigências de frio não forem satisfeitas. Este trabalho objetivou avaliar produtos alternativos ao uso de cianamida hidrogenada para indução da brotação em macieira Maxi Gala‟ e o efeito desses na produção do pomar. O experimento foi conduzido no delineamento em blocos casualizados com cinco repetições em pomar comercial localizado no município de Vacaria-RS durante as safras agrícolas 2012/13 e 2013/14. Os tratamentos consistiram em: T1 - Controle (sem tratamento); T2- OM (Óleo Mineral) 2%; T3 - OV (Óleo Vegetal) 2%; T4 - OV 4%; T5 - OM 2% + OV 2%; T6 - OM 2% + OV 4%; T7 - Dormex® + OM e T8 Erger®+Nitrato de Ca. Os resultados foram submetidos à análise de variância seguida por comparação de médias através do teste de Duncan. As variáveis analisadas foram porcentagem de brotação e produção por planta; a maior porcentagem de brotação foi observada no tratamento T8 (89,39), no entanto este apresentou a menor produção (11,86 Kg planta-1). A maior produção foi verificada nos tratamentos T1, T4 e T6 (24; 22,6; e 22,5 Kg planta-1, respectivamente). A mistura de óleo mineral 2% + óleo vegetal 4% (T6), para este experimento mostrou-se uma alternativa ao uso da cianamida hidrogenada permitindo uma boa porcentagem de brotação e boa produção de frutos. O tratamento com Erger® apesar de ter a maior porcentagem de brotação não foi eficiente na produção de frutos. Na ultima avaliação o tratamento com T8 se mostrou superior aos outros tratamentos com 90.23% das gemas brotadas. T1 foi a que teve a melhor produção por planta com 24,65 Kg. O maior número de frutos foi no tratamento T3. A maior quantidade de teor de sólidos solúveis ocorreu no tratamento T8 (13,07). No ciclo vegetativo e produtivo seguinte não houve diferença significativa para as variáveis, peso médio de frutos, número de frutos, sólidos solúveis e firmeza de polpa. Os tratamentos com Erger, óleo mineral 2% mais óleo vegetal 4% e somente óleo vegetal a 4% tiveram a maior produtividade. Para o ano agrícola 2012/13 e 2013/14 todos os tratamentos utilizados anteciparam e uniformizaram as brotações quando comparados ao controle. O tratamento de OM 2% + OV 4% promove a brotação das plantas de macieira com a mesma eficiência que o uso de cianamida hidrogenada. O tratamento com Erger promoveu uma maior brotação, mas reduz a produção, causando alternância ao longo dos anos

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:20:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DenesDV.pdf: 1100009 bytes, checksum: a5c2f36e62de51d3305993bca0f84cd4 (MD5) Previous issue date: 2007-04-19 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / This work has for objective to analyze the perception of benefited of Pronaf B Programa Nacional de Fortalecimento da Agricultura Familiar, in relation to the results that are presented concerning this program. For this, it is presented hypothesis of that the familiar agriculturists, fit in the norms of credit of Pronaf B, have a peculiar perception on the end item of this program, produced from inherent characteristics to the agricultural reality where they live. Ahead of this, I broke myself of estimated of that the searched familiar agriculturists are more socially vulnerable to the inaqualities the agricultural areas. For this research, they had been used, mainly, theoretical reflections of studious of the campesinato, familiar agriculture and of researchers of the impacts of Pronaf B in the agricultural way. The empirical data of the research had been gotten, through the application of questionnaires with the benefited ones and interviews with the mediators of this program in the two searched cities, Apodi and Ant?nio Martins, in the Rio Grande do Norte, who proportionally withholds the biggest contract number of Pronaf B in the state. The conclusion of the research ratifies the initial hypothesis of that the perception on the results of Pronaf B for benefited its is peculiar, and points stops beyond the economic results, such as: the rise of auto-esteem; the rescue of the citizenship feeling and as impact in autoconsumo of the families of the agriculturists benefited for Pronaf B / Este trabalho tem por objetivo analisar a percep??o dos beneficiados do Pronaf B Programa Nacional de Fortalecimento da Agricultura Familiar, em rela??o aos resultados que s?o apresentados acerca desse programa. Para isso, apresenta-se a hip?tese de que os agricultores familiares, enquadrados nas normas de cr?dito do Pronaf B, t?m uma percep??o peculiar sobre o produto final desse programa, produzida a partir de caracter?sticas inerentes ? realidade rural em que eles vivem. Diante disso, parte-se do pressuposto de que os agricultores familiares pesquisados s?o os mais socialmente vulner?veis ?s desigualdades nas ?reas rurais. Essa pesquisa baseou-se, principalmente, em reflex?es te?ricas de estudiosos do campesinato, agricultura familiar e de pesquisadores dos impactos do Pronaf B no meio rural. Os dados emp?ricos da pesquisa foram obtidos atrav?s da aplica??o de question?rios com os beneficiados e de entrevistas com os mediadores desse programa em dois munic?pios, Apodi e Ant?nio Martins, no Rio Grande do Norte, que, proporcionalmente, det?m o maior n?mero de contratos do Pronaf B no estado. A conclus?o da pesquisa ratifica a hip?tese inicial de que a percep??o sobre os resultados do Pronaf B ? percebida para al?m dos resultados econ?micos, tais como: a eleva??o da auto-estima e o resgate do sentimento de cidadania e assim como impactos no autoconsumo das fam?lias dos agricultores beneficiados pelo Pronaf B

Orientador: Carlos Augusto Araújo Valadão / Banca: Rita de Cássia Campbell / Banca: José Wanderley Cattelan / Banca: Antônio Carlos Alessi / Banca: Juliana Regina Peiró / Resumo: Avaliaram-se os efeitos da perfusão regional intravenosa com anfotericina B, um antimicótico, em membros de equinos acometidos por pitiose, combinada com a excisão cirúrgica. Foram utilizados 16 equinos, jovens e adultos, da raça pantaneira, com pitiose em membro torácico ou pélvico, distalmente às articulações do cotovelo ou joelho, distribuídos em dois grupos experimentais. Um constituído de 12 equinos tratados, após excisão cirúrgica e termocauterização, por perfusão regional intravenosa do membro com anfotericina B (Ganf) e outro constituído de quatro equinos não tratados (controle, Gc). As feridas foram fotografadas e avaliadas antes do início do tratamento (D0) e após sete (D7), catorze (D14), vinte e um (D21), vinte e oito (D28), trinta e cinco (D35) e sessenta (D60) dias e foi realizado exame do aparelho locomotor. No Ganf, 92% dos animais apresentaram cicatrização das feridas de pitiose e no Gc 100% apresentaram recrudescência da afecção. No Ganf, 58% exigiram administração única de anfotericina B pela técnica de perfusão regional do membro e 42% exigiram uma readministração, após 14 dias. No Ganf, 33% apresentaram ulceração no local da administração da anfotericina B e 42% apresentaram aumento de volume do membro e dor à palpação na região perfundida pela anfotericina B. No Ganf, 100% dos animais apresentavam claudicação severa no D0 e 92% não apresentavam claudicação no D21. Conclui-se que a administração de anfotericina B, por perfusão regional intravenosa, promove a cura da pitiose, com mínimas reações adversas, sendo uma alternativa terapêutica para o tratamento de pitiose em membros de equinos. / Abstract: The effects of intravenous regional perfusion with amphotericin B, an antifungal drug, in equine limbs with pythiosis associated with surgical excision were evaluated. 16 horses, young and adults, pantaneira breed, with pythiosis in thoracic or pelvic limbs, distally to the elbow or knee joints, were allocated into two experimental groups. One constituted by 12 horses treated, after surgical excision and thermocauterization, by intravenous regional limb perfusion with amphotericin B (Ganf) and other constituted by four not treated horses (control, Gc). The wounds were photographed and evaluated before the beginning of the treatment (D0) and after seven (D7), fourteen (D14), twenty-one (D21), twenty-eight (D28), thirty-five (D35) and sixty (D60) days and examination of the locomotor system was performed. 92% of the animals with pythiosis presented wound healing in Ganf and, in Gc, 100% presented recrudescence of the disease. In the Ganf, 58% of the animals needed single administration of amphotericin B by regional limb perfusion and 42% of the animals needed one more administration after 14 days. In the Ganf, 33% of the animals presented ulceration in the amphotericin B injection site and 42% of the animals presented limb edema and pain during palpation of the amphotericin B perfused region. In Ganf, 100% of the animals presented severe lameness at D0 and 92% of the animals presented no lameness at D21. It can be concluded that the administration of amphotericin B by intravenous regional perfusion promotes pythiosis remission with minimal side effects, being a therapeutic alternative to the pythiosis treatment in equine limbs. / Doutor

Made available in DSpace on 2015-03-03T14:00:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DiegoAS_DISSERT.pdf: 1474988 bytes, checksum: 09ed96a182fab36b0c95800c391aded7 (MD5) Previous issue date: 2010-04-14 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Os polissacar?deos sulfatados comp?em um grupo complexo de macromol?culas com uma gama de importantes atividades biol?gicas, incluindo atividade antiviral, anticoagulante, antiproliferativa, antitumoral e antioxidante. Esses pol?meros ani?nicos s?o amplamente distribu?dos em tecidos de vertebrados e algas. As algas marinhas s?o as fontes, n?o-mam?feras, mais abundantes de polissacar?deos sulfatados na natureza. Os mais conhecidos extra?dos de algas vermelhas s?o homogalactanas, chamadas de carragenanas, e de algas marrons s?o homo ou heteropolissacar?deos, chamadas de fucanas e fucoidanas, respectivamente, e os polissacar?deos sulfatados de algas verdes s?o compostas por polissacar?deos contendo galactose, glicose, arabinose e/ou ?cido glucur?nico. H? poucos estudos descrevendo a presen?a de polissacar?deos sulfatados em algas verdes. No presente estudo, o extrato total de polissacar?deos da alga verde Codium isthmocladum foi obtido atrav?s de digest?o proteol?tica, e fracionado por precipita??o sequencial com acetona resultando em cinco fra??es (F0,3V; F0,5V; F0,7V; F0,9V e F1,2V). O teste de atividade anticoagulante de aPTT mostrou que F0,5V desempenhou alta atividade anticoagulante. Esta foi, posteriormente, fracionada por cromatografia de troca-i?nica em sete polissacar?deos: F0,3M; F0,5M; F0,7M; F1,0M; F1,5M; F2,0M e F3,0M. Os polissacar?deos elu?dos com F2,0M e F3,0M migraram como um ?nico componente eletrofor?tico. N?o foi detectada contamina??o prot?ica. An?lises qu?micas mostraram que F2,0M e F3,0M s?o compostas por galactose. Esses polissacar?deos foram submetidos ao teste de aPTT, e mostraram alta atividade anticoagulante com atividade maior que Clexane?. Ambas apresentaram um efeito dose-dependente. An?lises estruturais de F2,0M e F3,0M mostraram que elas s?o homopol?meros ramificados constitu?dos de - D-Galactopiranoses unidas por liga??es b-1,6 (predominante) e b-1,3. Alguns res?duos de galactose apresentam sulfata??o em C4 ou em C6, e algumas galactoses em posi??o n?o redutora apresentam piruvata??o na forma de 3,4- O-(1?-carboxi)etilideno, cetal c?clico com cinco membro

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-07-25T20:53:39Z No. of bitstreams: 1 JacyraAntunesDosSantosGomes_DISSERT.pdf: 2709008 bytes, checksum: b8536d693075ca072ab23c36cf351557 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-08-02T20:59:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JacyraAntunesDosSantosGomes_DISSERT.pdf: 2709008 bytes, checksum: b8536d693075ca072ab23c36cf351557 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:59:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JacyraAntunesDosSantosGomes_DISSERT.pdf: 2709008 bytes, checksum: b8536d693075ca072ab23c36cf351557 (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Os acidentes of?dicos representam um s?rio problema em sa?de p?blica nos pa?ses tropicais e subtropicais, sendo o g?nero Bothrops o maior respons?vel pelos acidentes no Brasil e em toda a Am?rica Latina (correspondendo cerca de 90 % dos casos). Os efeitos locais (dor, edema, hemorragia e necrose tecidual) e sist?micos (altera??es cardiovasculares, choque e dist?rbios da coagula??o sangu?nea) causados pela pe?onha das serpentes do g?nero Bothrops s?o devido aos in?meros componentes prot?icos e n?o-prot?icos (carboidratos, lip?dios, nucleot?deos, aminas biog?nicas e v?rios ?ons), que fazem parte da constitui??o da pe?onha. A ?nica forma de terapia cientificamente validada ? a soroterapia antiveneno, que, no entanto, n?o ? eficaz com rela??o aos efeitos locais produzidos e, al?m disso, pode ocasionar s?rias rea??es de hipersensibilidade aos pacientes. Sendo assim, a busca por novas alternativas ? soroterapia se faz importante, e nesse contexto, muitas plantas medicinais v?m se destacando pelo uso popular como antiof?dicas. Dentre essas plantas, pode-se citar a esp?cie Jatropha mollissima (Euphorbiaceae) que apresenta amplo uso popular na medicina tradicional como antiof?dica, anti-inflamat?ria, antimicrobiana e antit?rmica. Portanto, esse trabalho tem como objetivo a avalia??o do potencial neutralizante dos efeitos locais induzidos pelas pe?onhas de Bothrops erythromelas e Bothrops jararaca pelo extrato aquoso das folhas de J. mollissima. O extrato das folhas foi preparado por decoc??o, fracionado (por meio de parti??o l?quido-l?quido) e caracterizado por cromatografia em camada delgada (CCD) e Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia (CLAE). A atividade antiof?dica do extrato foi avaliada nos modelos de edema de pata, peritonite, hemorragia e miotoxicidade induzidos pelas pe?onhas de B. erythromelas e B. jararaca sendo utilizados camundongos Swiss de ambos os sexos. Em todos os modelos o extrato foi avaliado pela via intraperitoneal nas doses de 50, 100 e 200 mg/kg, sendo administrado 30 minutos antes da inje??o da pe?onha (protocolo de pr?-tratamento). Manchas sugestivas da presen?a dos flavon?ides: apigenina, luteolina, orientina, isoorientina, vitexina e vitexina-2-O-ramnos?deo foram detectadas no extrato atrav?s da co-CCD. Por meio de CLAE foram identificados os flavon?ides isoorientina, orientina, vitexina e isovitexina. Todas as doses testadas do extrato de J. mollissima reduziram o edema de pata induzido pelas pe?onhas com intensidade similar ? dexametasona. O extrato aquoso das folhas de J. mollissima, em todas as doses avaliadas, inibiu a migra??o celular induzida por B. erythromelas e B. jararaca promovendo a inibi??o do recrutamento tanto de c?lulas mononucleares quanto das c?lulas polimorfonucleares. A hemorragia local induzida pela pe?onha de B. jararaca foi inibida significativamente pelo extrato. Ambas as pe?onhas foram inibidas pelo extrato na atividade miot?xica. Esses resultados indicam que o extrato aquoso das folhas de J. mollissima apresenta potencial propriedade antiof?dica sobretudo com rela??o ao efeitos locais, o que poderia justificar o uso dessa planta na medicina tradicional e na terapia complementar como antiof?dica. / Snakebites are a serious public health problem in tropical and subtropical countries and Bothrops genus is responsible for the accidents in Brazil and throughout Latin America (90% of cases). The local effects (pain, edema, hemorrhage and myonecrosis) and systemic (cardiovascular alterations, shock and blood clotting disorders) caused by the venom of Bothrops are due to the numerous protein and non-protein components, which are part of the constitution of the poison. The only form of therapy is scientifically validated antivenom serum therapy which, however, is not effective with respect to local effects produced, risk of immunological reactions, high cost and difficult access in some regions. Thus, the search for new alternatives to serum therapy becomes important, and in this context, many medicinal plants have been highlighted by the popular use as antiophidic. Among these plants, we can mention the species Jatropha mollissima (Euphorbiaceae) which has popular use in traditional medicine as antiophidic, anti-inflammatory, antimicrobial and antipyretic. Therefore, this study aims to evaluate the neutralizing potential of local effects induced by the venom of Bothrops erythromelas and Bothrops jararaca with the aqueous extract of the leaves of J. mollissima. The leaf extracts were prepared by decoction, fractionated (by liquid-liquid partition) and characterized by thin layer chromatography (TLC) and High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Antiophidic activity of the extract was evaluated in model of paw edema, peritonitis, bleeding and myotoxicity induced by venoms of B. jararaca and B. erythromelas. In all models, the extract was evaluated by intraperitoneal route at the doses of 50, 100 and 200 mg/kg, administered 30 minutes prior to injection of the venom (pretreatment protocol). Stains suggestive of the presence of flavonoids: apigenin, luteolin, orientin, isoorientin, vitexin and vitexin-2-O-rhamnoside were detected in the extract by co-CCD. By means of HPLC were identified isoorientin, orientin, vitexin and isovitexin. All tested doses of J. mollissima extract reduced the paw edema induced by the venom with intensity similar to dexamethasone. The aqueous extract of J. mollissima leaves on all evaluated doses, inhibited cell migration induced by B. jararaca and B. erythromelas promoting inhibition of recruitment of mononuclear cells and the polymorphonuclear cells. Local bleeding induced by B. jararaca venom was significantly inhibited by the extract. Both venoms were inhibited by the extract in myotoxic activity. These results indicate that the aqueous extract of J. mollissima leaves have snakebite potential, particularly with respect to local effects, which may justify the use of this plant in traditional medicine and complementary therapy as anti-venom serum.

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A literatura demonstra que existe uma ?ntima rela??o entre a forma como a AmB est? complexada ao sistema carreador e sua resposta biol?gica. Entretanto, h? uma defici?ncia nos dados de caracteriza??o fisico-qu?mica dos produtos dispon?veis contendo AmB. Portanto, o objetivo deste trabalho foi realizar a caracteriza??o f?sico-qu?mica de sistemas carreadores de AmB visando uma predi??o de sua resposta biol?gica. Os sistemas micelares de AmB foram os primeiros produtos dispon?veis ? pr?tica cl?nica, de forma que sua patente expirou h? alguns anos. Neste trabalho, o sistema original e dois de seus similares foram caracterizados e o aumento da estabilidade destes sistemas ap?s aquecimento, pela forma??o dos super-agregados de AmB foi estudado. O sistema liposomal AmBisome? tamb?m foi caracterizado e, pela primeira vez, foi estudada a possibilidade de super-agrega??o, a exemplo dos sistemas micelares, a partir de lipossomas. A incorpora??o de AmB em sistemas nano e microemulsionados foi apresentada e as caracter?sticas f?sico-qu?micas destes sistemas foram estudados, com demonstra??o de suas aplica??es no tratamento ocular de infec??es f?ngicas e tamb?m para o tratamento de leishmaniose visceral. As principais t?cnicas de caracteriza??o aplicadas foram espectroscopia UV-Vis, dicro?smo circular e espalhamento din?mico de luz. A t?cnica de calorimetria de titula??o isot?rmica (ITC) foi utilizada numa tentativa de medir a energia de forma??o dos superagregados. Adicionalmente, um derivado sol?vel de AmB foi desenvolvido e caracterizado por espectroscopia de massa at?mica, infra-vermelho, UV-Vis e dicro?smo circular, bem como incorporado em sistema microemulsionado como estrat?gia de veicula??o deste derivado sol?vel. Os resultados revelam que os sistemas contendo AmB apresentam diferentes formas de agrega??o molecular dependendo do carreador, da forma de incorpora??o do f?rmaco e do diluente empregado para redispersar o sistema. Segundo a literatura, o estado de agrega??o est? intimamente ligado ? efic?cia e ? toxicidade da mol?cula. Nos sistemas nanoemulsionados a AmB apresenta-se na forma agregada e multi-agregada. Na microemuls?o, est? incorporada na forma monom?rica. Os sistemas micelares aquecidos d?o lugar ? forma??o de super-agregados de AmB enquanto os sistemas lipossomais s?o incapazes de se modificar em super-agregados. O derivado sol?vel de AmB apresentou caracter?sticas que diferem da AmB original. Contudo, quando incorporado na microemuls?o, o estado de agrega??o ? similar ao da mol?cula original tanto nas an?lises de UV-Vis quanto de dicro?smo circular. Pode-se concluir que a forma de agrega??o de AmB varia n?o somente de acordo com o tipo de carreador, mas tamb?m com sua concentra??o no meio e com o tipo de incorpora??o, ainda que num mesmo tipo de carreador. Finalmente, o derivado sol?vel abre a possibilidade de veicula??o do f?rmaco em carreadores de car?ter aquoso para o tratamento de diversas enfermidades e por v?rias vias de administra??o. / The amphotericin B (AmB) is a drug of peculiar physicochemical features: being amphiphilic and amphoteric. These characteristics turn difficult the drug load into therapeutic systems. AmB is currently available in the market as micelles, liposomes and lipid complex for injection. The literature show that there is an intimate correlation between the AmB bound to the carrier and its biological response. However, there is a deficiency concerning the physicochemical characterization of the available AmB-containing products. Therefore, the aim of this work was to characterize AmB-containing carriers seeking a prediction to its biological response. The AmB-containing micellar system was the first product available for clinical use. The patent of this product has already expired some years ago. In this work we have characterized the original system and two other similar micellar products. In addition, we studied the stability increase of heated systems, by the formation of AmB ?super-aggregates?. AmBisome?, an AmB-containing liposomal system, was also characterized and, for the first time, tested for the possibility of super-aggregates formation. The AmB incorporation into nano and microemulsion systems was presented and the physicochemical characteristics evaluated, focusing mainly on applications for the treatment of fungal ocular diseases and also for visceral leishmaniasis. The main techniques used for characterization were electronic spectroscopy, circular dichroism and dynamic light scattering. The isothermal titration calorimetry (ITC) was used as an attempt to measuring the super-aggregates energy formation. Besides, an AmB soluble derivative was developed and characterized by atomic mass spectroscopy, infra-red, UV-Vis and circular dichroism. Then, this AmB-derivative was loaded into a microemulsion as a vehiculation strategy. The overall results show that the AmB-containing systems presented different molecular aggregation states that depends on the carrier, the way the drug is incorporated and also on the diluent. According to the literature, the aggregation state is associated with both, drug efficiency and toxicity. In nanoemulsion systems, the drug is found aggregated and multi-aggregated. In microemulsions, AmB is loaded as monomers. The heated micellar systems form AmB super-aggregates while the liposomal system is unable to form such molecular structure. Moreover, the AmB soluble derivative presented distinct features when compared to the original molecule. However, once incorporated into the microemulsion, the aggregation state is similar to that of the original AmB molecule, as supported by UV-Vis and circular dichroism results. It can be concluded that the AmB aggregation state varies according to the kind of carrier, the drug concentration and also the way of drug incorporation, even into one same carrier. Finally, the soluble derivative opens the possibility for drug carrying into aqueous vehicles for the treatment of many diseases by different administration routes. / 2018-04-27

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / CHAPTER II: Amphotericin B (AmB) is an antifungal extracted from Streptomyces nodosus. Its fungicidal activity depends primarily on its binding to the sterol group, present in the membrane of fungi. Due to the toxicity of this drug this study aimed to evaluate their mutagenic, carcinogenic and recombinogenic activity. To do so, we used Somatic Mutation and Recombination Test (SMART) and the test for the detection of Epithelial Tumors (wts), both in Drosophila melanogaster. In the assessment using SMART, larvae from 72 h, descendants from the standard (ST) cross and the high bioactivation (HB) cross were treated with different concentrations of Amphotericin B (0.01; 0.02 e 0.04 mg/mL). The results revealed that the AmB is a promutagen exhibiting increase in the number of spots on individuals from high bioactivation (HB) cross with a high level of the cytochrome P450. The results also indicate that recombinogenicity is the main genotoxic event induced by AmB. Homologous recombination can function as a determinant at different stages of carcinogenesis. For verification, larvae from the wts test, descendants from the wts/TM3 virgin female and mwh/mwh male cross, were treated with the same three AmB concentrations separately and in association with mitomicin C (0.1 mM). The results did not, however, provide evidence that AmB has carcinogenic potential. / CAPÍTULO II: A Anfotericina B (Anf B) é um antifúngico extraído de Streptomyces nodosus, que possui atividade antibiótica efetiva contra diversas espécies de fungos patogênicos. Devido à toxicidade desta droga, o presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de avaliar sua atividade mutagênica, recombinogênica e carcinogênica. Para tanto, foram utilizados os testes para Detecção de Mutação e Recombinação Somática (SMART) e o Teste para Detecção de Tumores Epiteliais (wts), ambos realizados em Drosophila melanogaster. No SMART foram utilizadas larvas de 4 horas provenientes do cruzamento padrão (ST) e de alta capacidade de bioativação metabólica (HB). As larvas provenientes de ambos os cruzamentos foram tratadas com diferentes concentrações de Anfotericina B (0,01; 0,02 e 0,04 mg/mL). Os resultados revelaram que a Anf B causou aumento significativo no número de manchas nos indivíduos provenientes do cruzamento HB, o que sugere que esse fármaco atua como um prómutageno, manifestando tal efeito após a biotransformação pelo sistema citocromo P450. Os resultados indicam, também, que a recombinogenicidade é o principal evento induzido pela Anf B. A recombinação homóloga pode ter função determinante nos diferentes estágios da carcinogênese. Para esta verificação, larvas provenientes do teste wts, descendentes do cruzamento de fêmeas virgens wts/TM3 com machos mwh/mwh, foram tratadas com as mesmas concentrações de Anf B isoladas e em associação com a mitomicina C (0,1 mM). Os resultados não revelaram atividade carcinogênica para a Anf B. / Mestre em Genética e Bioquímica

Base teórica: Devido à diminuição do desenvolvimento de novos antimicrobianos nas últimas décadas, terapias combinadas têm sido empregadas contra bactérias multirresistentes como opção à monoterapia no tratamento de infecções graves. Para tratar infecções causadas por Peusdomonas aeruginosa resistente a carbapenêmicos, amicacina e polimixina B têm sido utilizadas em associações com imipenem, pois possuem diferentes mecanismos de ação, o que, teoricamente, indicaria a possibilidade de efeito sinérgico. Objetivo: O objetivo deste trabalho foi verificar a interação, in vitro, de amicacina e polimixina B em associação com imipenem frente a diferentes isolados de P. aeruginosa resistentes a carbapenêmico. Métodos: Foram selecionados isolados de P. aeruginosa resistentes a carbapenêmico oriundos do Hospital de Clínicas de Porto Alegre, coletados no período de janeiro a março de 2015. Foi realizada eletroforese em gel de campo pulsado e detecção do gene blaSPM-1 para selecionar diferentes clones. Seis isolados (três SPM-1 positivos e três negativos para a carbapenemase) foram selecionados para realização da técnica de time-kill, a fim de avaliar a atividade antimicrobiana das combinações de imipenem com amicacina e imipenem com polimixina B. Resultados: Sinergismo ocorreu para combinações de imipenem com amicacina em 3 isolados, dos quais um era SPM-1 positivo e dois eram SPM-1 negativos e todos apresentaram CIMs relativamente baixas a intermediárias. Quanto às combinações de imipenem com polimixina B, houve sinergismo somente para dois isolados, um SPM-1 positivo e um SPM-1 negativo, contudo houve antagonismo em 5 isolados, dois SPM-1 positivos e três SPM-1 negativos. Para 4 isolados, as combinações de imipenem com amicacina tiveram atividade bactericida, enquanto, para todos os isolados, as combinações de imipenem com polimixina B, bem como polimixina B isoladamente, 1x e 2x a CIM apresentaram atividade bactericida. Conclusão: Sinergismo pode ocorrer, para combinações de imipenem mais amicacina, quando os isolados apresentam CIMs relativamente baixas ou intermediárias para imipenem (≤16 μg/mL a 128 μg/mL) e amicacina (≤32 μg/mL). Entretanto, antagonismo aconteceu independentemente de valores altos ou baixos de concentrações inibitórias mínimas para imipenem e polimixina B. Além disso, a presença ou ausência do gene blaSPM-1 não pareceu influenciar nos resultados. / Background: Due to a decrease on new antibiotic development over the last decades, combined therapies have been employed against multigrug-resistant bacteria as an option to monotherapy in severe infection treatment. In order to treat infections caused by carbapenem resistant Pseudomonas aeruginosa, amikacin and polymyxin B have been used in associations with imipenem, because they possess different mechanisms of action, which could, theoretically, indicate the possibility of synergistic effect. Objective: The aim of this study was to verify the interaction, in vitro, of amikacin and polymyxin B in association with imipenem against various carbapenem resistant P. aeruginosa isolates. Methods: Carbapenem resistant P. aeruginosa isolates have been selected from Hospital de Clínicas de Porto Alegre, collected from January to March 2015. Pulsed field gel electrophoresis and detection of blaSPM-1 gene has been performed to select different clones. Six isolates (three SPM-1 positive and three negative for the carbapenemase) were selected for time-kill assay, in order to assess antimicrobial activity of imipenem plus amikacin and imipenem plus polymyxin B combinations. Results: Synergism occurred for combinations of imipenem plus amikacin in three isolates, from which one was SPM-1 positive and two were SPM-1 negative, and all presented relatively low to intermediate minimum inhibitory concentrations. About imipenem plus polymyxin B combinations, synergism occurred in only two isolates, one SPM-1 positive and one SPM-1 negative, however antagonism occurred in five isolates, two SPM-1 positive and three SPM-1 negative. For 4 isolates, imipenem plus amikacin combinations had bactericidal effect, while, for all isolates, combinations of imipenem plus 1x and 2x the MIC of polymyxin B presented bactericidal activity. Conclusions: Synergism can occur, for imipenem plus amikacin combinations, when isolates present relatively low or intermediate MIC of imipenem (≤16 μg/mL to 128 μg/mL) and amikacin (≤32 μg/mL). However, antagonism happened regardless high or low minimum inhibitory concentrations for imipenem and polymyxin B. Also, the presence or absence of blaSPM-1 gene did not seem to influence the results.