Submitted by Naiara Fernanda Ignácio (naiaraignacio@yahoo.com.br) on 2018-07-23T04:19:42Z No. of bitstreams: 1 Tese de doutorado_ Naiara Fernanda Ignácio.pdf: 3478646 bytes, checksum: ad5f958489e90a28e31d1a3342b3eb4d (MD5) / Approved for entry into archive by Karina Gimenes Fernandes null (karinagi@fcav.unesp.br) on 2018-07-23T10:41:27Z (GMT) No. of bitstreams: 1 ignacio_nf_dr_jabo.pdf: 3478646 bytes, checksum: ad5f958489e90a28e31d1a3342b3eb4d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-23T10:41:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ignacio_nf_dr_jabo.pdf: 3478646 bytes, checksum: ad5f958489e90a28e31d1a3342b3eb4d (MD5) Previous issue date: 2018-05-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Objetivou-se avaliar a capacidade de recuperação de alevinos de peixes das espécies de cativeiro pacu (Piaractus mesopotamicus) e tilápia (Oreochromis niloticus) após a intoxicação aguda com fipronil. A capacidade de recuperação foi avaliada nos peixes sobreviventes as concentrações de fipronil (Regent® 800WG) (0,56; 0,59; 0,61 e 0,64 mg.L-1 para o pacu; e 0,9; 0,11; 0,15 e 0,20 mg.L-1 para a tilápia) que causaram aproximadamente 10, 30, 50 e 70% de mortalidade após 24 horas de exposição aguda. Os peixes sobreviventes foram transferidos para água limpa. As avaliações foram realizadas no dia da transferência para a água limpa, e aos 15 e 30 dias de recuperação. Foram avaliadas as lesões em tecidos de brânquias, fígado e rins, e a atividade da enzima acetilcolinesterase (AChE) no cérebro e no músculo. Os sinais observados foram natação errática, espasmos musculares e mudança de coloração. Após 24 horas de exposição aguda, o fipronil, nas concentrações avaliadas, causou lesões estruturais nas brânquias, fígado e rins dos peixes, entre 70 e 73% de inibição da atividade da AChE no cérebro e entre 20 e 35% da AChE no músculo. Os peixes se recuperaram completamente dos sinais de intoxicação no terceiro dia. Aos 30 dias de recuperação, os peixes das duas espécies se recuperaram das lesões nos tecidos das brânquias, fígado e rins causadas pelo fipronil em concentração nas águas de até 0,61 mg.L-1 para o pacu, que causa até 54,2 % mortalidades; e de até 0,15 mg.L-1 para a tilápia, que causa até 46,7% de mortalidade. Em concentrações superiores a estas, o fipronil causou maior mortalidade e os peixes não se recuperaram totalmente. Os 30 dias em água limpa não são suficientes para a recuperação total da atividade da AChE, o que não altera o peso corpóreo. Portanto, os limites de aceitabilidade de inibição da atividade da AChE após 24 horas de exposição aguda ao fipronil é de 70% no cérebro dos peixes de ambas as espécies, 30% no músculo de pacu e 22% no da tilápia. As concentrações de fipronil não alteram as variáveis de qualidade de água. / The aim of this study was to evaluate the recovery capacity of juvenile fishes of the species pacu (Piaractus mesopotamicus) and tilapia (Oreochromis niloticus) after acute intoxication with fipronil. Recovery capacity was evaluated in fishes survivors from fipronil concentrations (Regent® 800WG) (0,56; 0,59; 0,61 e 0,64 mg.L-1 para for pacu; e 0,9; 0,11; 0,15 e 0,20 mg.L-1 for tilápia) in water that caused about 10, 30, 50 and 70% of mortality after 24 hours of acute exposure. The survivors were transferred to clean water. The evaluations were done on the day of transfer to clean water, and at 15 and 30 days of recovering. Damages were evaluated in gills, liver and kidneys tissues and the enzyme acetylcholinesterase (AChE) activity in the brain and muscle. The signs observed were erratic swimming, muscle spasms and color change. After 24 hours of acute exposure, fipronil at the tested concentrations causes histological damages in the gills, liver and kidneys of the fishes, 70 to 73% inhibition of AChE activity in the brain and between 20 and 35% in AChE in the muscle. The fishes recover completely from the intoxication signs on the third day. At 30 days of recovering, fishes from both species recovered from the damage in gills, liver and kidneys caused by fipronil at concentrations up to 0.61 mg.L-1 for pacu, which cause up to 54.2% of mortality; and up to 0.15 mg.L-1 for tilapia, which cause up to 46.7% of mortality. In higher concentrations than these, fipronil causes higher mortalities and the fishes do not recover fully. The 30 days in clean water are not enough for the total recovery of AChE activity, which does not change the body weight. Therefore, the acceptability of inhibition limit of AChE activity after 24 hours of acute fipronil exposure is 70% in fish brain of both species, 30% in pacu muscle and 22% in tilapia muscle. Fipronil concentrations do not alter the water quality variables.

Orientador: Ivana Cesarino / Abstract: A new biosensor was developed by a simple electrocodeposition of reduced graphene oxide (rGO), polypyrrole (PPy) and the enzyme acetylcholinesterase (AChE) on surface of platinum (Pt) electrode. In potential range of -0.2 to +0.5 V vs. Ag/AgCl/KCl (3.0 mol L-1), using differential pulse voltammetry (DPV), it was observed a process in + 0.1 V and this corresponds to the dimerization of electrochemical oxidation products of thiocholine, resulting in ditio-bis-choline. The biosensor developed was evaluated using DPV in the analysis of carbaryl, which inhibits the AChE enzyme action. The best results achieved were with the followings optimized conditions: 75 mV pulse amplitude, step potential of 4 mV, and a phosphate buffer solution (PBS) 0.2 mol L-1 and pH 6.0. Using these parameters was observed a linear response to carbaryl in a range of 0.1 to 0.5 µmol L-1, with a detection limit of 11.6 nmol L-1 (2.3 µg/kg), which is an appropriate limit for determination of carbaryl in the cultures which these pesticide is applied, considering the maximum reside limit allowed by Brazilian legislation. The biosensor proposed, Pt/rGO/PPy/AChE, was applied successfully in the determination of carbaryl in samples of cabbage and tomato. / Resumo: Um novo biossensor foi desenvolvido baseado na simples eletrocodeposição do óxido de grafeno reduzido (rGO), polipirrol (PPy) e da enzima acetilcolinesterase (AChE) na superfície do eletrodo de platina (Pt). No intervalo de potencial -0,2 a +0,5 V vs. Ag/AgCl/KCl (3,0 mol L-1), utilizando voltametria de pulso diferencial (DPV), observou-se um processo em +0,1 V e este corresponde a dimerização dos produtos de oxidação eletroquímica da tiolcolina, formando ditio-bis-colina. O biossensor desenvolvido foi avaliado utilizando DPV na análise do pesticida carbaril, o qual inibe a ação da enzima AChE. Os melhores resultados obtidos foram com as seguintes condições otimizadas: 75 mV amplitude de pulso, incremento de potencial de 4 mV, e uma solução tampão fosfato (PBS) 0,2 mol L-1 pH 6,0. Usando tais parâmetros observou-se uma resposta linear para o carbaril no intervalo de 0,1 a 0,5 mol L-1, com um limite de detecção de 11,6 nmolL-1 (2,3 µg/kg), que é um limite adequado para determinar carbaril nas culturas em que este pesticida é aplicado considerando o limite máximo de resíduo permitido pelas legislações brasileiras. O biossensor proposto, Pt/rGO/PPy/AChE, foi aplicado com sucesso na determinação de carbaril em amostras de tomate e repolho. / Mestre

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000438119-Texto+Completo-0.pdf: 1374944 bytes, checksum: ed0d2c4ba08c684fb0fe51136bb75979 (MD5) Previous issue date: 2012 / Endosulfan is a broad spectrum organochlorine pesticide that is still widely used in many developing countries. Following application endosulfan can get to watercourses through surface runoff from agricultural fields and disturb the nontarget aquatic animals including freshwater fish species. Given that the activity of the enzyme acetylcholinesterase (AChE) is one of the most recurrently used biomarkers of exposure to pesticides and there are controversial results concerning the effects of endosulfan exposure and AChE activity in fish, the aim of the present study was to evaluate the effects of endosulfan in brain AChE activity and its gene expression pattern using adult zebrafish (Danio rerio) as an animal model. Moreover, we have analyzed the effects of endosulfan exposure in different parameters of zebrafish swimming activity and in long-term memory formation. After 96 hours of exposition, fish in the 2. 4 μg endosulfan/L group presented a significant decrease in AChE activity (9. 44 ± 1. 038 μmol SCh. h-1. mg protein-1; p = 0. 0205) when compared to the control group (15. 87 ± 1. 768 μmol SCh. h-1. mg protein-1; p = 0. 0205). The downregulation of brain AChE activity is not directly related with the transcriptional control as demonstrated by the RT-qPCR analysis. Our results reinforce AChE activity inhibition as a pathway of endosulfan-induced toxicity in brain of fish species. In addition, exposure to 2. 4 μg endosulfan/L during 96 hours impaired all exploratory parameters evaluated: decreased line crossings (273. 7 ± 28. 12 number of line crossings compared to the control group 344. 6 ± 21. 30, p=0. 0483), traveled distance (23. 44 ± 2. 127 meters compared to the control group 29. 39 ± 1. 585, p=0. 0281), mean speed (0. 03 ± 0. 003 meters/seconds compared to the control group 0. 04 ± 0. 002, p=0. 0275) and body turn angle (69,940 ± 4,871 absolute turn angle compared to the control group 88,010 ± 4,560 p=0. 0114). These results suggest that endosulfan exposure significantly impairs animals' exploratory performance, and potentially compromises their ecological and interspecific interaction. Our results also showed that the same endusulfan exposure did not compromise animals' performance in the inhibitory avoidance apparatus. These findings provide further evidence of the deleterious effects of endosulfan exposure in the nervous system. / Endosulfan é um pesticida organoclorado de amplo espectro ainda utilizado largamente em muitos países subdesenvolvidos. As aplicações repetidas de endosulfan podem se incorporar aos cursos de água por meio da lixiviação dos solos das plantações e atingir animais aquáticos, incluindo espécies de peixes. Dado que a atividade da enzima acetilcolinesterase (AChE) é um dos biomarcadores de exposição aos pesticidas mais utilizados de forma recorrente e há resultados controversos envolvendo os efeitos da exposição ao endosulfan e a atividade da AChE em peixes, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos do endosulfan na atividade da AChE cerebral e seu padrão de expressão gênica utilizando zebrafish adulto (Danio rerio) como modelo experimental. Além disso, nós analisamos os efeitos da exposição ao endosulfan em diferentes parâmetros de locomoção do zebrafish e na formação da memória de longo prazo. Após 96h de exposição, os peixes do tempo com 2,4 μg/L de endosulfam apresentaram um decréscimo significante na atividade da AChE (9. 44 ± 1. 038 μmol SCh. h-1. mg proteína-1; p = 0. 0205) quando comparados com o grupo controle (15. 87 ± 1. 768 μmol SCh. h-1. mg proteína-1; p = 0. 0205). A regulação inibitória da atividade da AChE cerebral não está diretamente relacionada com o controle transcricional como demostrado pela análise de RT-qPCR. Nossos resultados reforçam a inibição da atividade da AChE como via da toxicidade induzida pelo endosulfan em cérebro de de peixe. Além disso, a exposição de 2,4 μg/L do endosulfan durante 96h prejudicou todos os parâmetros exploratórios avaliados: linhas cruzadas (273. 7 ± 28. 12 número de linhas cruzadas em comparação com o grupo controle: 344. 6 ± 21. 30, p=0. 0483), distância viajada (23. 44 ± 2. 127 metros comparados com o grupo controle 29. 39 ± 1. 585, p=0. 0281), velocidade média (0. 03 ± 0. 003 metros/segundos comparados com o grupo controle 0. 04 ± 0. 002, p=0. 0275) e mudanças de ângulo (69,940 ± 4,871 mudanças de ângulo absolutas comparadas com o grupo controle 88,010 ± 4,560 p=0. 0114). Esses resultados sugerem que a exposição ao endosulfan prejudica significativamente a performance exploratória dos animais e, potencialmente, compromete suas interações interespecíficas e ecológicas. Nossos resultados também demonstraram que a mesma exposição ao endosulfan não compromete a performance dos animais no aparato de esquiva inibitória. Esses achados fornecem evidências adicionais de efeitos deletérios da exposição ao endosulfan no sistema nervoso.

como animais de estimação. Entretanto, existem poucas informações sobre a fisiologia, inclusive do trato gastrointestinal (TGI) e as enfermidades a este associadas. O TGI destes animais é longo e apresenta complexidade similar a dos lagomorfos: ceco com uma porção sacular espiralada, seguida de uma porção tubular que se continua em um cólon ascendente longo. Estas características, em associação com o fornecimento de uma dieta rica em grãos e leguminosas, são condições que permitem o fácil acometimento de cólica timpânica (CT), que se caracteriza pela distensão acentuada da parede do ceco, devido ao acúmulo dos gases produzidos em excesso durante a digestão fermentativa. Considerando que o acometimento de uma enfermidade promova alterações morfológicas e funcionais do sistema nervoso entérico (SNE), o roedor C. lanigera foi utilizado para avaliar as alterações in situ da atividade das enzimas acetilcolinesterase (AChE) e diaforase da nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato (NADPH-d) dos neurônios do plexo mientérico (PM) em um modelo experimental de CT provocado por alteração da dieta. Após as duas semanas de timpanismo, um grupo de animais voltou a receber dieta balanceada por 20 dias associado a um antiinflamatório (cetoprofeno) no sprimeiros 5 dias do período de dieta normal. O timpanismo foi confirmado pela análise dos sintomas e por meio do teste de von Frey. Verificou-se maior sensibilidade abdominal nos animais do grupo timpânico e recuperado (dieta de indução até D18 e, após, a mesma dieta do grupo controle assossiada ao medicamento cetoprofeno) durante o período da doença (11° ao 18° dia após início da dieta alterada). O tratamento medicamentoso e normalização da dieta (D23), o grupo recuperado mostrou uma sensibilidade abdominal semelhante a do grupo controle. A necrópsia revelou um aumento de volume no ceco e cólon ascendente dos animais timpânicos e isquemia nas junções jejuno-ileal, ileocecal e no cólon ascendente, com infarto nos vasos sanguíneos mesentéricos ao longo do intestino. Nos animais recuperados não foi observado infarto nos vasos sanguíneos mesentéricos. O PM da C. lanigera normal constitui-se de uma extensa rede ganglionar de formato retangular e uniforme, cujos gânglios se dispõem no sentido dos feixes de fibras da camada muscular longitudinal e estão conectados entre si por ramos nervosos calibrosos. O PM divide-se em três redes distintas: o plexo primário (formado por gânglios médios e grandes e feixes de fibras nervosas de primeira ordem), secundário (constituído por gânglios pequenos e feixes de segunda ordem) e terciário (somente feixes de fibras de terceira ordem, que seguem paralelamente às fibras musculares longitudinais). Os gânglios possuem aspecto polimórfico em todas as porções analisadas do TGI. A CT resultou na distensão da parede visceral e, consequentemente, do plexo, tornando a rede menos densa, os gânglios alongados e as conexões mais finas entre as células adjacentes. 9Continua) O tratamento recuperou o aspecto controle do PM. As mensurações da área e do número de gânglios com atividade AChE obtida nos três grupos experimentais, mostrou um aumento significativo na área gânglionar total dos animais timpanizados em relação ao grupo controle. Não foi observada diferença significativa no número total de gânglios e nas médias das áreas dos xii diferentes tamanhos ganglionares entre os três grupos. Entretanto, no cólon ascendente houve uma diferença significativa entre o número de gânglios entre os grupos timpânico e recuperado. Os resultados permitem inferir que a CT provoca alteração no metabolismo colinérgico dos gânglios mientéricos. Os seis diferentes tipos morfológicos de neurônio, segundo classificação de Stach, mostraram atividade NADPH-d. O número de neurônios com atividade NADPH-d mostraram redução diferenciada entre as diferentes partes do intestino e de forma específica ara alguns dos seis tipos celulares Estas diferenças são discutidas de acordo com o papel fucional dos tipos neuronais propostos na literatura. De uma maneira geral, a diminuição da atividade NADPH-d dos tipos celulares propostos em outros animais como motoneurônios indicou que a CT afeta a principal função exercida pelo PM, de motilidade, especialmente das porções sacular do ceco e do cólon transverso. A diminuição do tipo neuronal II, considerado sensorial, afetado significativamente em todas as porções do cólon, coincide com a maior distensão observada neste na CT. As alterações observadas só não se mostraram reversíveis na porção sacular do ceco e no cólon ascendente, contudo foram reversíveis nas demais porções analisadas. / The chinchilla (Chinchilla lanigera) evokes great interest in fur commercialization and as pets. However, there are few informations about its physiology, especially the gastrointestinal tract (GIT) and its diseases. The GIT of these animals is long and has a complexity similar to lagomorphs: cecum with a coiled saccular portion, followed by a tubular portion which continues in a long ascending colon. These characteristics in association with a diet rich in grains and legumes facilitates the onset of tympanic colic (TC), which is characterized by marked distension of the cecum wall due to excessive accumulation of gases produced by fermentative digestion. Considering the onset of an illness can cause morphological and functional modifications of the enteric nervous system (ENS), the rodent C. lanigera was used to asses in situ modifications on the activity of the enzymes acetylcholinesterase (AChE) and diaphorase nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH-d) in myenteric plexus (MP) neurons, using an experimental model of TC induced by dietary alterations. After two weeks of receiving the tympanism-inducing diet, the same diet of the control group was given to the recovery group, along with an anti-inflammatory drug (ketoprofen) for five days. The tympanism was confirmed by symptom analyses and by the Von Frey test. The tympanic and recovery groups showed and increase of abdominal sensibility after the onset of the disease (between the 11th and 18th days of the period in which the tympanism-inducing diet was given). With the drug treatment and the re-establishment of the diet (at day 23) the recovery group showed an abdominal sensibility similar to the control group. The necropsy revealed an increase of the cecum and ascending colon volumes in the tympanic animals, in addition to ischemia in the jejunoileal and ileocecal junctions and in the ascending colon, with mesenteric blood vessels infarction. In the recovery animals mesenteric blood vessels infarction was not present. The MP of a healthy C. lanigera is formed by an extensive ganglionar network of rectangular and uniform shape, and the ganglia are arranged in the same direction of the fiber bundles of the longitudinal muscle layer and are connected to each other by thick nerve branches. The MP is divided in three distinct networks: the primary plexus (formed by medium and large ganglia and bundles of nerve fibers of the first order); the secondary plexus (formed by small ganglia and bundles of second order); and the tertiary plexus (only bundles of third order fibers, which run parallel to the longitudinal muscle fibers). The ganglia showed a polymorphic aspect in all analyzed portions of the GIT. The TC resulted in distension of the gut wall and, therefore, the plexus, making the network less dense, the ganglia elongated and thinner connections between adjacent cells. The treatment restored the aspect of the MP to normal. Measurements of area and number of ganglia obtained with AChE activity in the three experimental groups revealed a significant increase in total ganglia area in the tympanic animals compared to the control group. There was no significant difference in the total number of ganglia and the mean of the areas of different ganglia sizes between the three groups. However, in the ascending colon there was a significant difference between the number of ganglia of the tympanic and recovery groups. These results demonstrate that the TC alters the cholinergic metabolism of myenteric ganglia. The six different morphological types of neurons, xiv according to Stach’s classification, had NADPH-d activity. The neurons with NADPH-d activity showed a differential reduction between different intestinal portions and between the six cell types. These differences are discussed according with the functional role of the neuronal types proposed by the literature. The decreased activity of NADPH-d in cell types proposed as motoneurons in other animals indicated that the TC affects the main function performed by the MP, which is the motility, especially in the saccular portions of the cecum and transverse colon. The decrease in type II cells, which are considered sensory neurons and were significantly affected in all portions of the colon, coincides with the largest distension of this portion observed in the TC. The changes observed were not reversible only in the saccular portion of the cecum and in the ascending colon, being reversible in the other analyzed portions.

A deprivação maternal é conhecida por promover alterações neuroquímicas, comportamentais e da estrutura cerebral que persistem ao longo da vida. Aqui investigamos se os déficits cognitivos em ratos deprivados podem ser relacionados com uma disfunção no sistema colinérgico e na síntese de proteínas relacionadas aos processos mnemônicos. Ratas Wistar prenhas foram colocadas em caixas individuais e mantidas no biotério no ciclo claro/escuro (12:12 horas) com comida e água a vontade. Após o parto, as mães foram separadas dos seus filhotes por 3 horas, por dia, a partir do dia 1 pós-parto (PND-1) até o PND-10. Para fazer isto, as mães foram removidas das caixas residência e colocadas em uma caixa diferente, enquanto os filhotes permaneceram na caixa original, a qual foi transferida para outra sala mantida a temperatura de 32°C. Quando adultos com 120-150 d ias de idade, os animais machos deprivados e não deprivados foram divididos em duas etapas experimentais: 1) Foram sacrificados para medirmos a acetilcolinesterase (AchE) ou treinados no reconhecimento de objetos e no reconhecimento social, ou 2) Foram treinados e testados na esquiva inibitória e no Morris water maze ou foram treinados e sacrificados para mensurarmos o fator de transcrição CREB e a síntese das proteínas ERK1/2 após o treinamento em 3 diferentes tempos. Na primeira etapa, a deprivação maternal repetida afeta a memória no reconhecimento de objetos e no reconhecimento social. Além disso, ratos deprivados mostraram aumento na atividade da AchE no hipocampo e no córtex perirrinal. A administração oral de inibidores da AchE donepezil ou galantamina (1mg/kg) 30 min antes da sessão de treino reverteu os prejuízos na memória causados pela deprivação maternal. Na segunda etapa, mostramos que a deprivação maternal repetida também afeta a memória aversiva e espacial. Os animais treinados na esquiva inibitória mostraram déficits cognitivos quando testados na memória de curta (2 horas) e de longa duração (24 horas) após o treino. Além disso, a análise densitométrica das proteínas revelou que ratos deprivados treinados na esquiva não aumentaram a fosforilação de CREB e ERK1/2 após o treino. Da mesma forma, ratos deprivados não foram hábeis em reter o aprendizado reverso no labirinto aquático de Morris, mas aqui, os déficits cognitivos podem ser relacionados com o menor aumento da fosforilação do CREB e da ERK1/2 somente 2 horas após o treino no aprendizado reverso. Esses dados sugerem que a deprivação materna afeta os processos mnemônicos em ratos adultos, e que estes prejuízos podem ser mediados por modificações no sistema colinérgico ou na síntese de proteínas. / Maternal deprivation is known to result in long-lasting neurochemical, behavioral and brain structural effects. Here we investigated whether the cognitive aspects of these deficits might be related to a disruption of the cholinergic system and protein synthesis correlated with mnemonic process. Pregnant Wistar rats were individually housed and maintained on a 12:12 h light/dark cycle with food and water freely available. The mothers were separated from their pups for 3 h per day from postnatal day 1 (PND-1) to PND- 10. To do that, the dams were moved to a different cage and the pups maintained in the original home cage, which was transferred to a different room kept at 32ºC. After they reached 120-150 days of age, maternal-deprived and non-deprived male rats were either sacrificed for brain acetylcholinesterase (AchE) and protein (CREB and ERK1/2) measurement, or trained in an object recognition, social recognition, inhibitory avoidance and Morris water maze tasks and divided in two sets of experiments: 1) Complete repeated maternal deprivation affects recognition and social memory and there was increased acetylcholinesterase activity in hippocampus and perirhinal cortex of the deprived rats. Oral administration of the acetylcholinesterase inhibitors, donepezil or galantamine (1mg/kg) 30 min before training session reversed the memory impairments caused by maternal deprivation. 2) Complete maternal deprivation also affects aversive and spatial memory. These animals showed memory deficits in STM and LTM in inhibitory avoidance. Furthermore, densitometric analysis of proteins revealed that deprived rats did not increase the phosphorylation of ERK and CREB after training. Similarly, deprived rats did not able to retain the reversed learning in the Morris water maze but here, the cognitive deficit can be related with the increase in the protein phosphorylation measurement only 2 hours after training in reversed learning compared to non deprived rats. That findings suggest that maternal deprivation affects memory processing at adulthood and that this impairment can be mediated by modification of the cholinergic system or in the protein synthesis.

Submitted by Milena Dias (milena.dias@ufpe.br) on 2015-03-10T19:42:03Z No. of bitstreams: 2 Tese Liliane Amorim.pdf: 4605349 bytes, checksum: e4e99a641965d895f55abc2588099e43 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-10T19:42:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese Liliane Amorim.pdf: 4605349 bytes, checksum: e4e99a641965d895f55abc2588099e43 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / CAPES / Culex quinquefasciatus é vetor de muitos agentes etiológicos de doenças humanas, incluindo Wuchereria bancrofti, o parasita que causa a filariose linfática, uma doença endêmica no Estado de Pernambuco (PE), Brasil. A elevada densidade deste mosquito pode causar problemas secundários que têm impacto na saúde e qualidade de vida das pessoas expostas; por isso, o controle desta espécie é importante. O objetivo do trabalho foi identificar se existem e quais são os mecanismos de resistência a inseticidas químicos e a diversidade genética de populações naturais de Culex quinquefasciatus coletadas em PE. As avaliações foram feitas por meio de bioensaios, ensaios bioquímicos para mensurar a atividade das enzimas de detoxificação e ensaios moleculares para estimar a frequência da mutação presente no gene da acetilcolinesterase (ace-1), associada à resistência a organofosforados (OPs) e carbamatos (CMs). A diversidade genética das populações foi avaliada utilizando 16 marcadores microssatélites. Ovos de Culex foram coletados em seis municípios de PE: Olinda (Peixinhos e Alto da Conquista), Recife (Água Fria), Jaboatão dos Guararapes, Ipojuca, Glória do Goitá e Santa Cruz do Capibaribe. Os resultados mostraram que apenas a população proveniente de Santa Cruz do Capibaribe (SC) apresentou alteração na susceptibilidade (RR = 7,2 vezes), com nível de resistência moderado ao temephos, enquanto as outras populações analisadas não mostraram alteração na susceptibilidade ao inseticida. Quanto aos testes bioquímicos, apenas em SC foi observado um aumento na atividade de todas as esterases estudadas e indícios de insensibilidade da acetilcolinesterase. A frequência da mutação G119S no alelo de resistência ace-1 (G119S) foi de 0,11 em SC e zero nas outras populações. O número de alelos por locus variou entre 2 e 15. Alguns desses alelos foram exclusivos de algumas localidades. O percentual de variabilidade genética encontrado foi maior dentro das populações do que entre as populações e os resultados indicam excesso de heterozigotos. Estes dados mostram que embora não haja programas nacionais para o controle de Culex, esta espécie apresenta mecanismos de resistência que estão sendo mantidos em populações naturais como um resultado da exposição acidental ao inseticida, o que poderia prejudicar as ações de controle que podem ser implantadas no futuro.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3083_1.pdf: 3845723 bytes, checksum: 28794ed786842f474da2c58b9d1a0ae2 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Organofosforados e carbamatos são as principais classes de pesticidas no mercado mundial. Sua rápida degradação e baixa estabilidade no meio ambiente fizeram com que substituíssem rapidamente outras classes importantes. Todavia, sua alta toxicidade em relação aos mamíferos e outros organismos não-alvo aliada às grandes quantidades utilizadas constituem uma ameaça à saúde humana e ambiental. O modo de ação de ambas as classes baseia-se na inibição de enzimas colinesterases. Metodologias vêm sendo desenvolvidas utilizando colinesterases de organismos aquáticos para detectar a presença de pesticidas em amostras ambientais, uma vez que seus habitats são constantemente contaminados por esses compostos. Neste trabalho, a acetilcolinesterase presente no extrato bruto (AChE; EC 3.1.1.7) de cérebro de tambaqui (Colossoma macropomum) foi exposta a concentrações de 0,001 a 10 ppm de um pesticida comercial, cujo princípio ativo é o organofosforado diclorvós. Os resultados demonstraram inibição de aproximadamente 18% da atividade enzimática referente à concentração de 0,01 ppm (0,0452 μmol/L) do princípio ativo. Em seguida, a enzima foi caracterizada e exposta a cinco pesticidas organofosforados e dois carbamatos: diclorvós, diazinon, clorpirifós, temefós, TEPP, carbaril e carbofuran, respectivamente. Foram determinados parâmetros físico-químicos e cinéticos como pH ótimo (7,0 a 8,0), temperatura ótima (40 a 45ºC) e estabilidade térmica (60% da atividade retida até 50ºC). As concentrações dos pesticidas foram de 0,001 a 10 ppm. A concentração de 0,001 ppm causou decréscimo na atividade enzimática em 34,4% (dichlorvos), 17,1% (clorpirifós) e 16,3% (carbofuran). A CI50 estimada para cada composto foi 0,0451 μmol/L (diclorvós), 7,583 μmol/L (clorpirifós), 3,734 μmol/L (TEPP), 33,86 μmol/L (carbaril), 0,9202 μmol/L (carbofuran). Esses resultados contribuem para a determinação de condições ótimas experimentais e sugerem a utilização da acetilcolinesterase de tambaqui no monitoramento ambiental de alguns desses pesticidas

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:51:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3107_1.pdf: 1671474 bytes, checksum: 24bd8cb473e30b625f220e29f8df13a5 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Dengue é uma arbovirose transmitida pelo Aedes aegypti e o controle do mosquito é fundamental para reduzir a propagação da doença. As larvas de A. aegypti têm desenvolvido resistência a inseticidas organofosforados. O uso de compostos naturais que promovam mortalidade pode evitar a emergência de larvas resistentes, devido à rotatividade dos inseticidas. Este trabalho relata a atividade larvicida (CL50 de 0.925%, p/v) do extrato de flores de Moringa oleifera sobre o quarto instar larval (L4) de A. aegypti. Inibidor de tripsina de natureza protéica (MoFTI, 169,9 kDa, Ki: 0,38 nM), triterpeno (β-amirina), esteróide (β- sitosterol) e flavonóides (kaempferol e quercetina) foram detectados no extrato; lectina não foi detectada. Tripsina do extrato do intestino de L4 foi inibida por MoFTI (Ki: 0,6 nM); entretanto, a atividade de acetilcolinesterase (AChE) do extrato de L4 inteiras não foi alterada. Ensaio em condições in vivo mostrou que a atividade de tripsina do intestino de L4 tratadas com o extrato de flores de M. oleifera diminuiu ao longo do tempo (0 a 1440 min) e foi fortemente inibida (98,6 %) após 310 min de incubação; a atividade de AChE do extrato de L4 inteiras não foi afetada neste período. O estudo aponta o extrato de flores de M. oleifera como uma ferramenta biodegradável para o controle de larvas de A. aegypti e sugere que o mecanismo larvicida envolve a inibição da tripsina do intestino das L4 por MoFTI

Orientador: Raquel Marques Braga / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-13T19:20:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_MariadoSocorroSousada_D.pdf: 6344706 bytes, checksum: 853a78239ffebd4d2b672cd61eb26a66 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Nosso trabalho tem por objetivo o estudo dos alcalóides das espécies Amacrinum (híbrido Amaryllis x Crinum), Ismene festalis e três variedades de Amaryllis (¿sidney¿, ¿desire¿ e ¿belladonna¿) todas pertencentes a família Amaryllidaceae. As espécies desta família são fontes de alcalóides, e estes apresentam diversas atividades biológicas, entre elas a inibição da enzima acetilcolinesterase. O material utilizado nesse estudo (bulbos) foi adquirido de um produtor de plantas ornamentais da cidade de Holambra/SP. Os extratos EtOH e CH2Cl2 foram submetidos à extração ácido-base. Os extratos CHCl3 II de Amacrinum e Ismene festalis foram submetidos a purificações em cromatografia em coluna a pressão reduzida e cromatografia em camada semipreparativa e preparativa. Isolamos e identificamos nove alcalóides no extrato CHCl3 II de Amacrinum: beladina, N-desmetil-beladina, crinina, bufanidrina,1-O-acetil-licorina, 11-O-acetilambelina, undulatina, ambelina, bufanisina e dois alcalóides tazetina e haemantidina do extrato CHCl3 de I. festalis. Os extratos das três variedades de Amaryllis foram analisados por Cromatografia em fase Gasosa acoplada a Espectrometria de Massas (CG-EM), resultando na detecção dos alcalóides: montanina, hipeastrina, 1,2-diidro-clidantina, licorina e nerinina. Estes dados foram comparados aos obtidos em nosso estudo sobre Amacrinum e aos literários, permitindo-nos concluir que o híbrido Amacrinum possui em sua composição principalmente alcalóides que têm larga distribuição no gênero Crinum; sendo que undulatina e ambelina, também são observados na espécie A. belladonna. A avaliação qualitativa para inibição da acetilcolinesterase (AChE) por CCD (Métodos de Rhee e Marston) mostrou resultados positivos para o extrato CHCl3 de Amacrinum e para os alcalóides bufanisina, 1-O-acetil- licorina e undulatina. A avaliação quantitativa para inibição da AChE, pelo método colorimétrico baseado na metodologia de Rhee, mostrou que os alcalóides possuem IC50 maiores que os padrões galantamina e fisostigmina. A interação dos alcalóides fisostigmina, crinina e ambelina com a AChE foram avaliadas por RMN-H, onde observou-se que as interações mais fortes são com os hidrogênios aromáticos dos alcalóides / Abstract: The alkaloids from Amacrinum (a hybrid Amaryllis x Crinum), Ismene festalis and three varieties of Amaryllis (¿sidney¿, ¿desire¿, ¿belladonna¿) of the family Amaryllidaceae were isolated and characterized. The species of this family are sources of alkaloids with a wide range of interesting physiological effects, including inhibition of acetylcholinesterase. The bulbs were obtained in the city of Holambra, São Paulo, Brazil. The EtOH and CH2Cl2 extracts were submitted to acid-base extraction. The CHCl3 extracts of Amacrinum and Ismene festalis were submitted to repeated fractionation using flash-chromatography CC and preparative TLC on silica gel. We isolated and identified nine alkaloids in the CHCl3 extract of Amacrium: belladine, N-demethyl- belladine, crinine, buphanidrine, 1-O-acetyl-lycorine, 11-O-acetyl-ambelline, undulatine, ambelline, and buphanisine; and two alkaloids in the CHCl3 extract of I. festalis: tazetine and haemathidine. The extracts of the three varieties of Amaryllis were analyzed by gas chromatography coupled-mass spectrometry (GC-MS), resulting in detection of the alkaloids: montanine, hippeastrine, 1,2-dihydroclidantine, lycorine, and nerinine. Comparing these data with those obtained for the Amacrinum hybrid and literature data, we concluded that the Amacrinum hybrid contains mainly alkaloids that are widely distributed in the genus Crinum. The CHCl3 extract of Amacrinum and buphanisine, undulatine, and 1-O-acetyllycorine alkaloids showed a positive result for the evaluation of the inhibition of acetylcholinesterase by CCD (the Rhee and Marston method). The acetylcholinesterase inhibitory activity of the extracts and alkaloids of Amaryllidaceae was evaluated by the colorimetric method in a microplate reader. The majority of the extracts gave good results. The IC50 values for the Amacrinum alkaloids were lower that those determined for physostigmine and galanthamine. Interactions of physostigmine, crinine, and ambelline alkaloids with AChE were evaluated by RMN-H, which showed that the interactions were stronger with the aromatic hydrogens of alkaloids / Doutorado / Quimica Organica / Doutor em Ciencias Quimicas

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A importÃncia dos praguicidas como agente causal de intoxicaÃÃes e Ãbitos à evidenciado pelo nÃmero de ocorrÃncias registradas, principalmente nos paÃses em desenvolvimento. No Brasil, os praguicidas ocupam a terceira posiÃÃo dentre os agentes responsÃveis por intoxicaÃÃes agudas. Eles agem por inibiÃÃo enzimÃtica (acetilcolinesterase) de modo irreversÃvel, podendo provocar aparecimento de sinais e sintomas colinÃrgicos caracterÃsticos. Podem causar ainda o aparecimento da sÃndrome intermediÃria e da polineuropatia tardia. Este estudo teve como objetivos traÃar o perfil epidemiolÃgico dos pacientes intoxicados no estado do CearÃ, no perÃodo de fevereiro a julho de 2004, atendidos no Centro de AssistÃncia ToxicolÃgica do Cearà (CEATOX); avaliar o tratamento proposto; verificar os sinais e sintomas das sÃndromes colinÃrgica e intermediÃria e analisar os fatores de risco associados à evoluÃÃo dos pacientes. Foi realizado um levantamento de dados preliminares referentes a janeiro de 2002 atà junho de 2003. A coleta dos dados foi realizada a partir dos prontuÃrios mÃdicos, fichas de notificaÃÃo do CEATOX e entrevista com o paciente ou responsÃvel. Foram analisados 19 pacientes, sendo 10 (52,6%) do sexo masculino e 9 (47,4%) do feminino. A mÃdia de idade foi 27,8Â11,4 anos. A ocupaÃÃo trabalhador agrÃcola representou 42,1% (8/19). As tentativas de suicÃdio representaram 84,2% (16/19) dos casos. Houve 4 (21,1%) Ãbitos. As principais manifestaÃÃes clÃnicas foram diarrÃia (78,9%), miose (57,9%) e sialorrÃia(52,6%). Fez-se dosagem da AChE na admissÃo dos pacientes intoxicados, sendo mÃdia e desvio-padrÃo 1,06Â1,50 UI/mL. As demais dosagens foram feitas no decorrer do internamento de cada paciente. Dentre as complicaÃÃes clÃnicas, as do trato respiratÃrio foram as mais importantes (57,2%). Atropina foi administrada em 16 (84,2%) dos pacientes. A mÃdia de internaÃÃo foi 8,6Â8,5dias. Houve associaÃÃo estatÃstica quando se comparou ventilaÃÃo, tempo de UTI e tipo de intoxicaÃÃo com o surgimento de complicaÃÃes clÃnicas (p<0,05) (teste do qui-quadrado e exato de Fisher). A regressÃo logÃstica nÃo mostrou significÃncia estatÃstica quando analisou risco de Ãbito a partir das variÃveis em estudo. Os resultados mostraram que se faz necessÃrio uma reestruturaÃÃo no protocolo de atendimento e tratamento dos pacientes intoxicados com IOF, bem como sua divulgaÃÃo no hospital Instituto Dr. Josà Frota e em outras unidades hospitalares. Os resultados demonstram ainda a situaÃÃo crÃtica quanto ao uso inadequado de praguicidas organofosforados no estado do Cearà e a necessidade de orientaÃÃo ao consumidor e adequada vigilÃncia sanitÃria quanto ao uso e comercializaÃÃo dos mesmos. / The importance of the pesticides causal agent of intoxication and deaths is clearly shown by the number of registered cases, mainly in developed countries. In Brazil, pesticides places the third more important group of substances responsible for acute intoxication. They act through enzymatic inhibition (acetylcholinesterase) in an irreversible way, leading to characteristic cholinergic signs and symptoms. They are also able to cause the intermediary syndrome and the delayed polyneuropathy. This study aimed to set out the poisoning patientsâ epidemiological outline in Cearà state, observed from February to July 2004, who received medical care at Centro de AssistÃncia ToxicolÃgica do Cearà (CEATOX); evaluating the proposed treatment; verifying the signs and symptoms related to the cholinergic and intermediary syndromes; analyzing the risk factors matched to patients recovery. Some preliminary data were obtained from January 2002 to June 2003 concerning to these poisoning events. The data collection was performed from medical recording, CEATOX notification files and patients or their companion interviews. 19 patients were analyzed, 10 (52,6%) men and 9 (47,4%) women. The average age was 27,8  11,4. Agriculturists represented 42,1% (8/19) of all cases. Attempted suicide constituted 84,2% (16/19). There were 4 (21,1%) deaths. The main clinical observations were diarrhea (78,9%), myosis (57,9%) and sialorrhea (52,6%). The AChE levels were measured immediately after admission and expressed in terms of mean  standard deviation (1,06  1,50 UI/mL). The other AChE measurements were performanced during the permanence of the patients in the hospital. Among clinical complications, those ones related to the respiratory tract were the most relevant (57,2%). Atropine was administered to 16 (84,2%) patients. The average time of admission was 8,6  8,5 days. There was statistical association when were compared ventilation, time spent in the ICU and type of intoxication with clinical complications (p<0,05) (Chi-square test and Fisherâs test). The logistic regression did not show statistical differences when the death risk was analyzed comparing to the studied variables. The results stress the need to adopt more suitable measures with a restructured protocol in handling patients intoxicated with IOF, giving ample publicity at the hospital units of Dr. Josà Frota Institute and others. The data obtained also point out the critical situation in Cearà State in the use, misure or inappropriate vigilance by the sanitary authorities.