Aedes aegypti is an important vector of human arboviruses as dengue, yellow fever and chikungunya in several tropical and subtropical countries. Studies of population genetic on Ae. aegypti has been growing in recent years and several molecular markers has been used to assess genetic variability of this vector. Among the molecular markers used is the ISSR (Inter-Simple Sequence Repeat) based on the use of nonspecific primers as microsatellites, and SNP (Single Nucleotide Polymorphism) that detect single base mutations in the chain of nitrogenous bases. The aim of this study was to determine the genetic variability in Ae. aegyti populations in the State of Sergipe through the molecular markers ISSR and SNP. Mosquito samples were caught using ovitraps in seven cities of Sergipe State: Canindé de São Francisco, Carira, Pinhão, Neópolis, Maruim, Aracaju and Umbaúba. DNA from adult mosquitoes was extracted and amplified with two ISSR primers and nine SNP markers. For ISSR marker analysis AMOVA resulted in 32% of genetic variation among populations and 68% within the population. The value of phiST was equal to 0.3225 indicating high genetic structure among populations. The dendrogram generated by UPGMA grouped the populations into two clusters that showed 61% similarity. The Mantel test by means of partial correlation between genetic distances and road excluding the interference of population size of the city was significant (r = -0.5399, p = 0.0359), assuming the occurrence of gene flow between Ae. aegypti populations passively by human action. For the marker SNP AMOVA analysis revealed genetic differentiation of FST = 0.07354 (p <0.01) and genetic diversity of 7.35% among populations. The analysis, showed the existence of two clusters based on genotypic similarities. For this analysis we found genetic differentiation between populations located in the countryside and on the coast. Both markers were efficient for the genetic study of natural populations of Ae. aegypti and able to differentiate among samples on a geographic scale from 30km to 240km. / Aedes aegypti é um importante vetor de graves arboviroses humanas como dengue, febre amarela e chikungunya em diversos países tropicais e subtropicais. O número de estudos envolvendo genética de população com Ae. aegypti vem crescendo nos últimos anos, sendo utilizados diversos marcadores moleculares para avaliar a variabilidade genética deste vetor. Entre os marcadores utilizados estão os ISSR (Inter-Simple Sequence Repeat) baseados na utilização de microssatélites como primers inespecíficos, e SNP (Single Nucleotide Polymorphism) que detectam mutações em bases únicas da cadeia de bases nitrogenadas. O objetivo do estudo foi determinar a variabilidade genética de populações de Ae. aegyti do estado de Sergipe por meio dos marcadores moleculares ISSR e SNP. Foram capturadas amostras do mosquito por meio de armadilhas ovitrampas de sete municípios sergipanos: Canindé de São Francisco, Carira, Pinhão, Neópolis, Maruim, Aracaju e Umbaúba. Para avaliação do polimorfismo genético foi extraído o DNA do mosquito adulto e amplificado com dois primers para ISSR e nove marcadores de SNP. Para o marcador ISSR a análise AMOVA resultou em 32% de variação genética entre as populações e 68% dentro das populações. O valor de phiST foi igual a 0,3225 indicando alta estruturação genética entre as populações. O dendograma gerado pelo método UPGMA agrupou as populações em dois clusters que apresentaram 61% de similaridade. O teste de Mantel por meio de correlação parcial entre as distâncias genética e rodoviária excluindo a interferência do tamanho da cidade foi significativo (r = - 0,5399 e p = 0,0359), supondo a ocorrência de fluxo gênico entre as populações de Ae. aegypti de forma passiva pela ação humana. Para o marcador SNP a análise AMOVA revelou diferenciação genética entre as populações de FST = 0,07354 (p < 0,01) e diversidade genética entre as populações de 7,35%. A análise por meio do software Structure 2.3.1, evidenciou a existência de dois clusters baseados em semelhanças genotípicas. Por essa análise foi observada uma diferenciação genética entre populações localizadas no interior do estado e populações mais próximas do litoral. Ambos marcadores moleculares foram eficientes no estudo genético de populações naturais de Ae. aegypti, sendo possível diferenciar amostras numa escala geográfica entre 30km a 240km.

Orientador: Paulo Eduardo Marins Ribolla / Banca: Sérgio Luiz Bessa Luz / Banca: Maria Anice Mured Sallum / Banca: Sérgio Russo Matioli / Banca: Denise Selivon Schepmaker / Resumo: Aedes aegypti é o principal vetor dos vírus dengue e representa cada vez mais um problema de saúde pública. O uso de inseticidas de origem orgânica ou inorgânica é uma das metodologias mais adotadas como parte do controle de vetores, entretanto, processos de resistência têm sido detectados freqüentemente. O desenvolvimento de ferramentas moleculares tem facilitado o entendimento das relações entre o vetor, patógeno e o homem. Os marcadores genéticos mais utilizados em estudos de genética de populações geralmente representam um trabalho laboratorial intenso e, em alguns casos, são limitados pela quantidade de DNA genômico extraído por indivíduo. Recentemente, a tecnologia disponível, permitiu o desenvolvimento dos marcadores SNPs (Single Nucleotide Polymorphisms) que correspondem a diferenças de um único nucleotídeo na seqüência de DNA. Assim, o presente trabalho objetivou desenvolver marcadores SNPs localizados em genes nucleares, do mosquito Ae. aegypti, para aplicação na genotipagem de populações deste vetor no Brasil. Para tanto, foram investigada seqüencias em dezoito genes nucleares de dezesseis populações do Ae. aegypti, e nove destes genes foram selecionados para a presença de SNPs. Os oito marcadores mais polimórficos foram utilizados na caracterização de três populações do mosquito anteriormente analisadas utilizando-se as técnicas de RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) e seqüenciamento de genes mitocondriais. Os resultados obtidos com os SNPs mostraram um alto grau de polimorfismo intra e inter populacional, mais significativo quando comparado com os estudos realizados anteriormente, além da presença de duas diferentes linhagens genéticas entre as populações geográficas estudadas. / Abstract: Aedes aegypti is the primary vector of dengue fever virus and it represents a major problem of Public Health. The use of insecticides of organic or inorganic origin is one of the more accepted methodologies as part of this control, however, resistance processes have been detected constantly. The development of molecular tools has made possible the understanding of the relationships among vector, pathogen and man. The genetic markers more used in studies of genetics populations usually represent an intense laboratorial work and in some cases they are limited for the amount of genomic DNA extracted by individual. Recently, the available technology, allowed the development of the markers SNPs (Single Nucleotide Polymorphism) that correspond to differences of a single nucleotide in the sequence of DNA. Thus, this work aims to develop of SNPs markers in nuclear genes of the Ae. aegypti for application in genotyping of populations of this vector in Brazil. For so much, were investigated sequences in eighteen nuclear genes of sixteen populations of Ae. aegypti, and nine of this genes were selected to presence of the SNPs. Eight more polymorphic markers were used in the characterization of three populations of the mosquito previously analyzed using the techniques of RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) and sequencing of mitochondrial genes. Results obtained with the SNPs showed a high degree of polymorphic intra and interpopulations, more significantly when compared with the prior studies, besides the presence of two different genetic lineages distributed among the studied geographical populations. / Doutor

RESUMO Urbinatti PR. Observações ecológicas de Ae. albopictus (Diptera: Culicidae) em áreas de proteção ambiental e urbana na periferia da Grande São Paulo. São Paulo; 2004. [Tese de Doutorado – Faculdade de Saúde Pública da Universidade de São Paulo]. Objetivos. Contribuir para o conhecimento da ecologia de uma população de Ae. albopictus em área de proteção ambiental e urbanizada. Métodos. Para avaliar aspectos da infestação desse culicídeo, escolheram-se duas áreas próximas, o Parque Ecológico do Tietê (PET), em área de proteção ambiental, (ambientes 1 e 2) e outra antrópica, Jardins São Francisco e Piratininga (ambientes 1 e 2), na Zona Leste da Capital. A primeira etapa da pesquisa foi desenvolvida no PET, de abril de 2001 a março de 2002 e a segunda foi nos Jardins São Francisco e Piratininga, de abril de 2002 a março de 2003. Com a finalidade de medir e comparar a infestação de Ae. albopictus entre os dois ambientes do PET e Jardins, utilizaram-se, 10 larvitrampas e 10 ovitrampas, sendo instaladas no peridomicílio e com monitoramento quinzenal no PET e a cada dez dias nos Jardins. Foram efetuadas coletas de amostras de água para análise de parâmetros físicos e químicos e de fauna associada. Resultados. Ae. albopictus foi à espécie mais freqüente em relação as demais coletadas, nos criadouros naturais e artificiais, correspondendo a 97,70 % e 92,50 % do total de imaturos, respectivamente no PET, Jardins São Francisco e Piratininga. Observou-se que os índices de densidade e positividade das ovitrampas e larvitrampas, no PET apresentaram valores elevados quando comparados aos Jardins São Francisco e Piratininga. Verificou-se correlação positiva significante entre a densidade de larvas e pupas de Ae. albopictus coletada em larvitrampas e as temperaturas ambiente e da água nos pneus nas duas áreas. Observou-se diferença estatisticamente significante entre a densidade de larvas de Ae. albopictus nas larvitrampas dos ambientes 1 e 2 do PET e Jardins, na presença e ausência de fauna associada.Conclusões. A presença freqüente de Ae. albopictus tanto em áreas de proteção ambiental como em alterada, reforça a evidência de sua ampla valência ecológica em colonizar ecótopos naturais e artificiais. Diante deste comportamento e aliado a competência e capacidade vetora, espera-se que os resultados dessa pesquisa possam fornecer informações que possibilitem subsidiar ações de controle caso esse mosquito represente ameaças à Saúde Pública. Descritores: Aedes albopictus, vetor, imaturos, ovitrampa, larvitrampa, urbanização / SUMMARY Urbinatti PR. Ecological observations of Aedes albopictus (Diptera: Culicidae) in urban and preserved areas in the outskirts of Greater Sao Paulo. São Paulo; 2004. [Tese de Doutorado – Faculdade de Saúde Pública da Universidade de São Paulo]. Objective. To contribute to the knowledge of the ecology of the Ae. albopictus population both in a protected and in an urban environment. Methods. Two different environments were chosen to evaluate aspects of the infestation of the East End of the city: a protected environment - the Parque Ecológico do Tietê (PET) divided into environments 1 and 2, and another anthropogenically altered one - the Jardins São Francisco and Piratininga, divided in the same way. The first step of the investigation was undertaken in PET between April 2001 and March 2002 and the second step in the Jardins, between April 2002 and March 2003. To measure and compare Ae. Albopictus infestation as between PET and Jardins, 10 larvitraps and 10 ovitraps were installed around a domiciliary area with monitoring every 15 days in PET and every 10 days in the Jardins. The analysis of water samples for their chemical and physical parameters and associated fauna was undertaken. Results. Ae. albopictus was the most frequently collected species, both in artificial and natural breeding sites, accounting for 97.70% and 92.50% of the total of immature specimens collected in PET and in the Jardins, respectively. As regards the positive rates of ovitraps and larvitraps, PET presented higher values than the Jardins. There was a significant correlation between larval and pupal densities in the larvitraps and the temperature of water in tires and sites and a significant difference between larval densities in the larvitraps of environments 1 and 2 in both PET and Jardins, as regards the presence and absence of associated fauna. Conclusions. The frequent presence of Ae. albopictus in protected areas and in altered ones reinforces the evidence of its ecological adaptability in the colonization of both natural and artificial environments. This behavior associated with its competence and vectorial capacity should contribute with information that will be useful for control actions if these insects come to represent a public health threat. Key words: Aedes albopictus, vector, immature, ovitrap, larvitrap, urbanization

Introdução: O mosquito Aedes fluviatilis é um culicídeo encontrado abundantemente pela Cidade de São Paulo, como mostram recentes levantamentos faunísticos em parques municipais. Estas ilhas verdes localizadas na malha urbana da metrópole possuem a capacidade de manter ciclos biológicos de muitos organismos, alguns deles, causadores de doenças. Embora o Aedes fluviatilis não esteja relacionado até o presente momento a doenças que atingem o homem, possui biologia, ecologia, capacidade vetora e padrões populacionais ainda pouco conhecidos. Com a intenção de agregar conhecimento sobre o perfil populacional desta espécie de culicídeo, foi utilizada a ferramenta da morfometria geométrica alar. Objetivos: (1) Avaliar a efetividade da morfometria geométrica alar na descrição das populações de machos e fêmeas de Ae. fluviatilis; (2) Verificar a existência de dimorfismo sexual; (3) Verificar a variabilidade fenotípica das populações e o grau de similaridade na estruturação populacional de cada gênero sexual do mosquito Aedes fluviatilis, no município de São Paulo. Material e Métodos: Foram utilizados 18 marcos anatômicos para determinar a geometria da asa. As variáveis de tamanho e forma foram utilizadas para mensurar o grau de dimorfismo sexual e estruturação populacional dessa espécie, cujos exemplares foram coletados em oito parques urbanos do município de São Paulo. Resultados: Através da variável da forma alar, foi possível determinar o dimorfismo sexual existente em Aedes fluviatilis. A conformação diferenciada das populações aponta para heterogeneidade em machos e homogeneidade em fêmeas. Discussão: Variações ambientais, muitas vezes proporcionadas pela ação do homem, ou hábitos ecológicos, podem direcionar a variabilidade da forma alar de diferentes maneiras em machos e fêmeas. A homogeneidade das populações de fêmeas, como evidenciado em trabalhos anteriores, pode ser um indicativo de rápida adaptação ao meio urbano, enquanto em machos a existência de diferentes padrões pode apontar para algum grau de fluxo gênico. Conclusões: Os padrões de variabilidade alar encontrados em fêmeas e machos sugerem que as pressões ambientais agem de forma distinta para cada gênero. A característica de homogeneidade populacional encontrada nas fêmeas indica a rápida adaptabilidade ao meio urbano, em concordância com outros estudos que apontam para baixo grau de fluxo gênico nesta espécie. A diferente conformação nos machos sugere estudos para a melhor compreensão dos mecanismos que modulam a evolução alar. / The mosquito Aedes fluviatilis is a culicid found abundantly in São Paulo City as shown by recent fauna survey in park\'s city. These green islands located in urban environment have the ability to maintain the life cycle of the many organisms, some of them cause disease or carry etiologic agents. The Ae. fluviatilis, although not incriminated to transmit pathogens to humans, their biology, ecology, vector capacity and population patterns is little known. With the intention of adding knowledge about the population profile of this culicid specie, was used wing morphometric tool. Objectives: (1) Evaluate the effectiveness of wing morphometric for description of the population of males and females of Ae. fluviatilis (2) Check sexual dimorphism in this specie (3) Check the phenotypic variability of the population and the degree of similarity in population structure for each sexual gender of the Ae. fluviatilis in São Paulo urban parks. Methods: Were utilized 18 anatomical landmarks to determine the geometric morphometric of the wing. The size and shape variables were used to measure the degree of sexual dimorphism and population patterns of Ae. fluviatilis collected in 8 urban parks in São Paulo City. Results: Through the wing shape variably, it was possibly to determine sexual dimorphism in Ae. fluviatilis, and different conformation of the population can appoint to heterogeneity in male\'s population and homogeneity in female\'s population. Discussion: Environmental variations, often provided by man or ecological habits can direct the variability of wing shape differently in males and females. The homogeneity of the female\'s population may be indicative rapid adaptation to urban areas, while in males the existence of different patterns of wing shape, may indicative some level of the gene flow. Conclusions: The variability of wing shape founded in males and females suggest that environmental pressures act differently for each gender. The characteristic of population homogenization in females suggest a rapid adaptability to the urban environment, in concordance with other works about low gene flow in this specie. The different conformation in males show the necessity of the studies to better understand the mechanisms involved in the wing evolution.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A dengue à considerada, hoje, a arbovirose mais importante do mundo, tendo distribuiÃÃo e ressurgÃncia em todos os continentes e aumento das Ãreas de incidÃncia devido Ãs mudanÃas climÃticas. Um dos motivos que a torna tÃo importante à ausÃncia de uma vacina eficaz para os quatro sorotipos do vÃrus. Assim, para o controle dessa doenÃa à necessÃrio que haja o combate ao vetor, o mosquito Aedes aegypti. Os atuais programas de combate ao mosquito dispÃem de inseticidas sintÃticos, contudo o surgimento de populaÃÃes resistentes a esses inseticidas representa um entrave ao combate deste mosquito. Desta forma, torna-se necessÃria a busca por novas molÃculas inseticidas ou capazes de potencializar o efeito tÃxico dos inseticidas atuais. Assim, o presente trabalho teve por objetivo a obtenÃÃo de inibidores de tripsina de sementes de Leucaena leucocephala e avaliaÃÃo do potencial inseticida dessas molÃculas sobre as larvas do mosquito Ae. aegypti. Para isso, as proteÃnas presentes nas sementes de L. leucocephala foram extraÃdas, fracionadas e submetidas à cromatografia de afinidade a anidrotripsina acoplada a sepharose 4B, para a obtenÃÃo de uma fraÃÃo rica em inibidores de tripsina denominada sLlTi, a qual foi caracterizada bioquimicamente e utilizada em concentraÃÃo de 0,3 mg/mL nos ensaios de desenvolvimento das larvas do mosquito. A caracterizaÃÃo bioquÃmica do sLlTi permitiu concluir que os inibidores sÃo termorresistentes (a atividade foi mantida apÃs aquecimento por 30 min. a 100 ÂC), apresentam considerÃvel resistÃncia ao agente redutor (DTT), tendo decaimento da sua atividade inibitÃria frente a tripsina apenas quando incubado com 100 mM de DTT por 120 min, o mesmo, tambÃm, à resistente Ãs variaÃÃes de pH na faixa de 2 a 10. Os zimogramas reversos revelaram a presenÃa de bandas proteicas com massa molecular aparente de 20 kDa. Testes biolÃgicos in vitro mostraram que o sLlTi apresenta atividade inibitÃria superior a 90% frente a tripsina e 70% frente ao homogenato intestinal de larvas de Ae. aegypti. ApÃs a realizaÃÃo de eletroforese bidimensional, foi possÃvel a visualizaÃÃo de isoformas com pI entre 4 e 7, aproximadamente. Esses inibidores sÃo capazes de inibir as proteases de larvas de Ae. aegypti in vivo em 56%, causando retardo no desenvolvimento e cerca de 70% de mortalidade. Assim, o sLlTi possui potencial aÃÃo inseticida contra o mosquito vetor da dengue. / Dengue fever is currently the most important arboviral disease in the world, being widely distributed among the continents and having increased incidence areas due to climate change. One of the reasons that makes it so important is the absence of an effective vaccine against the four virus serotypes. So, to control this disease is necessary to fight the disease vector, the mosquito Aedes aegypti. Nowadays, health programs use synthetic insecticides to control the mosquito populations. However, the emergence of resistant populations to these insecticides is an obstacle to combating this mosquito. Thus, it is necessary to search for new insecticides or molecules capable of enhancing the toxic effect of current insecticides. The present study aimed to obtain trypsin inhibitors from Leucaena leucocephala seeds and evaluate the insecticidal potential of these molecules against Ae. aegypti larvae survival and development. For this, the proteins of L. leucocephala seeds were extracted, fractionated and subjected to anhydrotrypsin affinity chromatography to obtain a trypsin-enriched fraction (called sLlTi), which was biochemically characterized and used at a concentration of 0.3 mg/mL in assays of larvae development. Biochemical characterization of sLlTi concluded that the inhibitors are heat resistant (the activity was retained after heating for 30 min at 100  C), showed considerable resistance to the reducing agent DTT and reduction of their inhibitory activity against trypsin was demonstrated only when incubated with 100 mM DTT for 120 min. The inhibitor is also resistant to pH changes in a range from 2 to 10. The reverse zymograms revealed the presence of protein bands with apparent mass near 20 kDa. Biological testing in vitro showed that the sLlTi showed trypsin inhibitory activity greater than 90% and that sLlTi is also capable to inhibit Ae. aegypti digestive enzymes by 70%. After two-dimensional electrophoresis isoforms with pI ranging from 4 to 7, approximately, were observed. These inhibitors were able to inhibit proteases of Ae. aegypti in vivo by 56%, and was capable to delay the larval development after incubation for 10 days. Thus, sLlTi contains proteins with promising insecticidal action against dengue vector.

Orientador: Hyun Mo Yang / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Matematica, Estatistica e Computação Científica / Made available in DSpace on 2018-08-09T23:30:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thome_RobertoCarlosAntunes_D.pdf: 2015666 bytes, checksum: 4f6cfba30cb89c24d0530c3bf19d0ecb (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O ciclo de mosquitos é dividido em dois estágios: fase aquática (ovos, larvas e pupas) e fase alada (mosquitos adultos). Apresentamos um modelo de controle ótimo de mosquitos que consiste na introdução de mosquitos machos estéreis obtidos pela técnica de irradiação. Nosso modelo é baseado em equações diferenciais ordinárias que descrevem a dinâmica dos mosquitos na fase aquática, dos mosquitos fêmeas imaturas (antes de acasalar), dos mosquitos fêmeas fertilizadas (depois de acasalar), dos mosquitos fêmeas não-fertilizadas (depois de acasalar), dos mosquitos machos (macho natural) e dos mosquitos machos estéreis (irradiados). O problema é colocado no formato de um problema de controle ótimo no qual minimizamos o custo com inseticida, o custo com a produção de mosquitos irradiados e o custo social (número de mosquitos fêmeas fertilizadas) / Abstract: The life cycle of mosquito Aedes aegypti is comprised by two phases: aquatic (egg, larvae and pupae) and winged form (adult mosquitoes). We present a model to describe the dynamics of mosquito population in which sterile male mosquitoes (prodeced by irradiation) are introduced as a form of biological control, besides the traditional application of insecticide. Our model is formulated taking into account a system of ordinary differential equations which describes the dynamics of the mosquitoes in the aquatic phase, of the immature female mosquitoes (before mating), of the fertilized female mosquitoes (after mating), of the unfertilized female mosquitoes (after mating), of the natural male mosquitoes (wild) and of the sterile male mosquitoes (irradiated). In order to analyze the minimal effort to reduce the fertile female mosquitoes, we search for the optimal control considering the cost of insecticide application, the cost of the production of irradiated mosquitoes and their delivery and the social cost (number of fertilized female mosquitoes, potential transmissor of dengue). The optimal control is obtained by applying the Pontryagin's Maximum Principle / Doutorado / Matematica Aplicada / Doutor em Matemática Aplicada

Para conseguirem se alimentar com sucesso, os mosquitos hematófagos possuem componentes em sua saliva capazes de regular a hemostasia e modular a imunidade dos hospedeiros. Entretanto, a avaliação das atividades biológicas dessas moléculas no hospedeiro ainda carece de estudos mais aprofundados. No presente projeto, propomos caracterizar as atividades biológicas do produto do transcrito AET-7393, uma serpina presente nas glândulas salivares de fêmeas do mosquito Aedes aegypti. Nossos dados mostram que a serpina AET-7393 recombinante provoca um aumento no sangramento quando inoculada em camundongos, mas aparentemente esse efeito não está ligado à interferência com a cascata de coagulação. Mostramos ainda que a AET-7393 é capaz de inibir a proteinase 3 e aumentar a produção de IL-1b. Por fim, observamos a ausência de capacidade moduladora sobre a ativação de macrófagos ou sobre a inflamação, e que presença de anticorpos específicos contra a serpina no hospedeiro não interfere no ciclo de vida do mosquito. / In order to successfully feed, hematophagous mosquitoes possess salivary components capable of regulating hemostasis and modulate the host immunity. However, the evaluation of the biological activities of the salivary molecules in the host still needs further investigation. In this study, we intend to characterize the biological activities of the AET-7393, a serpin that is present in the saliva of the females Aedes aegypti mosquitoes. Our data show that the recombinant AET-7393 serpin increases bleeding when inoculated in mice, but apparently this effect is not due to its interference on the coagulation cascade. In addition, AET-7393 is able to inhibit proteinase 3 and enhance the production of IL-1b. Finally, we observed the absence of modulatory effect on macrophage activation or inflammation, and that the presence of host anti-AET-7393 antibodies does not interfere in the life cycle of the mosquitoes.

Aedes aegypti is an important vector of human arboviruses as dengue, yellow fever and chikungunya in several tropical and subtropical countries. Studies of population genetic on Ae. aegypti has been growing in recent years and several molecular markers has been used to assess genetic variability of this vector. Among the molecular markers used is the ISSR (Inter-Simple Sequence Repeat) based on the use of nonspecific primers as microsatellites, and SNP (Single Nucleotide Polymorphism) that detect single base mutations in the chain of nitrogenous bases. The aim of this study was to determine the genetic variability in Ae. aegyti populations in the State of Sergipe through the molecular markers ISSR and SNP. Mosquito samples were caught using ovitraps in seven cities of Sergipe State: Canindé de São Francisco, Carira, Pinhão, Neópolis, Maruim, Aracaju and Umbaúba. DNA from adult mosquitoes was extracted and amplified with two ISSR primers and nine SNP markers. For ISSR marker analysis AMOVA resulted in 32% of genetic variation among populations and 68% within the population. The value of phiST was equal to 0.3225 indicating high genetic structure among populations. The dendrogram generated by UPGMA grouped the populations into two clusters that showed 61% similarity. The Mantel test by means of partial correlation between genetic distances and road excluding the interference of population size of the city was significant (r = -0.5399, p = 0.0359), assuming the occurrence of gene flow between Ae. aegypti populations passively by human action. For the marker SNP AMOVA analysis revealed genetic differentiation of FST = 0.07354 (p <0.01) and genetic diversity of 7.35% among populations. The analysis, showed the existence of two clusters based on genotypic similarities. For this analysis we found genetic differentiation between populations located in the countryside and on the coast. Both markers were efficient for the genetic study of natural populations of Ae. aegypti and able to differentiate among samples on a geographic scale from 30km to 240km. / Aedes aegypti é um importante vetor de graves arboviroses humanas como dengue, febre amarela e chikungunya em diversos países tropicais e subtropicais. O número de estudos envolvendo genética de população com Ae. aegypti vem crescendo nos últimos anos, sendo utilizados diversos marcadores moleculares para avaliar a variabilidade genética deste vetor. Entre os marcadores utilizados estão os ISSR (Inter-Simple Sequence Repeat) baseados na utilização de microssatélites como primers inespecíficos, e SNP (Single Nucleotide Polymorphism) que detectam mutações em bases únicas da cadeia de bases nitrogenadas. O objetivo do estudo foi determinar a variabilidade genética de populações de Ae. aegyti do estado de Sergipe por meio dos marcadores moleculares ISSR e SNP. Foram capturadas amostras do mosquito por meio de armadilhas ovitrampas de sete municípios sergipanos: Canindé de São Francisco, Carira, Pinhão, Neópolis, Maruim, Aracaju e Umbaúba. Para avaliação do polimorfismo genético foi extraído o DNA do mosquito adulto e amplificado com dois primers para ISSR e nove marcadores de SNP. Para o marcador ISSR a análise AMOVA resultou em 32% de variação genética entre as populações e 68% dentro das populações. O valor de phiST foi igual a 0,3225 indicando alta estruturação genética entre as populações. O dendograma gerado pelo método UPGMA agrupou as populações em dois clusters que apresentaram 61% de similaridade. O teste de Mantel por meio de correlação parcial entre as distâncias genética e rodoviária excluindo a interferência do tamanho da cidade foi significativo (r = - 0,5399 e p = 0,0359), supondo a ocorrência de fluxo gênico entre as populações de Ae. aegypti de forma passiva pela ação humana. Para o marcador SNP a análise AMOVA revelou diferenciação genética entre as populações de FST = 0,07354 (p < 0,01) e diversidade genética entre as populações de 7,35%. A análise por meio do software Structure 2.3.1, evidenciou a existência de dois clusters baseados em semelhanças genotípicas. Por essa análise foi observada uma diferenciação genética entre populações localizadas no interior do estado e populações mais próximas do litoral. Ambos marcadores moleculares foram eficientes no estudo genético de populações naturais de Ae. aegypti, sendo possível diferenciar amostras numa escala geográfica entre 30km a 240km.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2017-03-08T17:39:39Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Rayane Silva biblioteca.pdf: 1013981 bytes, checksum: d8b76305e22b14cf85166327afe7da53 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-08T17:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Rayane Silva biblioteca.pdf: 1013981 bytes, checksum: d8b76305e22b14cf85166327afe7da53 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / FACEPE / O Aedes aegypti é um mosquito de grande importância epidemiológica por ser o vetor de viroses como a febre amarela e a dengue estando distribuído entre as regiões tropicais e subtropicais do globo. A fim de encontrar uma forma alternativa de combate ao mosquito, objetivou-se avaliar no presente estudo, a caracterização química do óleo essencial de Commiphora leptophloeos e sua atividade biológica frente A. aegypti através de análises eletrofisiológicas, testes de atividade larvicida, repelente e deterrente de oviposição. As análises por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa revelaram a presença de 55 compostos no óleo essencial de C. leptophloeos sendo o α- Felandreno, trans- Cariofileno e β- Felandreno os constituintes do óleo presentes em maior proporção, representando 26,26%, 18,01% e 12,93% respectivamente. Através de cromatografia gasosa acoplada à detecção eletroantenográfica foram obtidas 17 respostas aos constituintes do óleo, sendo em sua maioria a sesquiterpenos, estando entre elas o trans- Cariofileno, um dos compostos majoritários do óleo. A partir dos testes comportamento de oviposição com fêmeas grávidas de A. aegypti foi possível observar que o óleo essencial de C. leptophloeos apresentou atividade deterrente de oviposição nas concentrações de 100, 50 e 25 ppm, sendo a média de ovos deixadas no recipiente de teste menor que o depositado no controle (p<0,008). Testes de oviposição também foram realizados com o composto majoritário do óleo o α-Felandreno, e dois compostos que apresentaram respostas eletrofisiológicas (trans- Cariofileno e α-Humuleno). O α-Felandreno não demonstrou atividade significativa. O trans- Cariofileno, em contrapartida, se mostrou deterrente de oviposição (p<0,004), assim como o α-Humuleno (p<0,003). O óleo de C. leptophloeos não demonstrou atividade biológica em relação ao teste de repelência em olfatômetro de dupla escolha. A atividade larvicida foi constatada com CL50 de 99,4 ppm. Nesse contexto, os resultados demonstram que o óleo essencial de C. leptophloeos é uma fonte promissora de compostos que induzem respostas comportamentais em fêmeas de A. aegypti que buscam por um sítio de oviposição, havendo respostas deterrentes entre os diferentes compostos, além de atuar como agente larvicida. / Aedes aegypti has a large epidemiological importance for being the vector of viruses, such as yellow fever and dengue fever, being distributed across the tropical and subtropical regions of the globe. To find an alternative way for eradicating the mosquito, in this study it was evaluated the chemical characterization of the essential oil of Commiphora leptophloeos and its biological activity against A. aegypti through electrophysiological analyzes and tests of larvicidal activity, repellent and oviposition deterrent. The analysis by gas chromatography-mass spectrometry revealed the presence of 55 compounds in the essential oil of C. leptophloeos being the α-phellandrene, trans-caryophyllene and β-phellandrene the constituents present in greater proportion, representing 26.26%, 18.01% and 12.93% respectively. By gas chromatography- electroantennographic detection were obtained 17 responses to the constituents of the oil, most of them being the sesquiterpenes, among them trans-Caryophyllene, one of the major compounds from the oil. From behavior for oviposition, tests with pregnant females of A. aegypti reveled that the essential oil of C. leptophloeos showed oviposition deterrent activity at concentrations of 100, 50 and 25 ppm and the average of eggs left on the test vessel was smaller than the average deposited in the control vessel. Oviposition test were also carried out with the α-phellandrene, the major compound of the oil, and two compounds that showed electrophysiological responses (trans-caryophyllene and α-humulene). The α-phellandrene showed no significant activity. The trans-Caryophyllene, in contrast, showed oviposition deterrent (p <0.004), as well as α-Humulene (p <0.003). The oil of C. leptophloeos not demonstrated biological activity against the test repellency dual choice olfactometer. The larvicidal activity was observed with LC50 of 99.4 ppm. In this context, the results show that the essential oil of C. leptophloeos is a promising source of compounds that induce behavioral responses in female of A. aegypti seeking for an oviposition site, with answers deterrents between the different compounds, in addition to acting as an agent larvicide.

Orientador: Roberto Wagner Lourenço / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-14T22:22:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbosa_GersonLaurindo_M.pdf: 4104372 bytes, checksum: c81a93674f03b1fc99037e16f9b3cf09 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Dengue é um importante problema de Saúde Pública. Seu vírus é transmitido pela picada do mosquito Aedes aegypti, cujo combate vem sendo realizado desde os tempos de Oswaldo Cruz, com tentativas de erradicação sem sucesso. O atual Programa de controle, não atinge o objetivo de manter baixos níveis de infestação, e impedir a transmissão do dengue. Este trabalho objetivou analisar a relação entre a distribuição espaço-temporal de casos de dengue, os indicadores larvados e características socioambientais no município de Tupã no período de janeiro de 2004 a dezembro de 2007. Foram construídos indicadores larvários por quarteirão e totalidade do município. Os casos de dengue foram agrupados por quarteirão. Foi utilizado estimador kernel para analise espacial. Foram também construídos indicadores de qualidade socioambiental por setor censitário. A positividade de larvas no período estudado apresenta sazonalidade marcante, com maiores valores observados no primeiro e quarto trimestres do ano. A correlação cruzada defasada é significativa nos 2 anos de transmissão de dengue, considerando 2 meses de defasagem. Os mapas do estimador Kernel da positividade de recipientes com larvas indicam uma distribuição heterogênea, com aglomerados espaciais em diferentes regiões ao longo do período estudado. Os mapas dos casos de dengue mostram que houve um espalhamento da epidemia com aglomerados em diferentes regiões nos dois anos. Não ficou evidenciada relação entre infestação larvária e ocorrência de dengue com níveis socioambientais. Conclui-se que a incorporação de técnicas de geoprocessamento e análise espacial no programa podem contribuir com as ações de controle, na tomada de decisões, indicando os aglomerados espaciais de maior incidência / Abstract: Undoubtedly dengue fever is a major problem for Public Health. Its virus is transmitted by the bite of the mosquito Aedes aegypti, which combat has been carried out since Oswaldo Cruz's time without success despite several eradication attempts. The current control Program does not meet the target of keeping the levels of infestation low and preventing the transmission of dengue fever. This work had as its aim to analyze the relationship between the spatiotemporal distribution of cases of dengue fever, the larval indices and the environmental characteristics in the Tupa municipal district from January 2004 to December 2007. Larval indices were built by block and municipal district totality. The cases of dengue fever were grouped by block. The kernel density estimation was applied in order to obtain the spatial analysis. Indicators of environmental quality were also built by census sector. The existence of larvae during the studied period shows remarkable seasonal features, with higher values being observed in the first and fourth periods of three months. The cross-lagged correlation is significant in the two years of dengue fever transmission considering two months of discrepancy. The kernel density estimation maps of positivity of recipients with larvae indicate a heterogeneous distribution with spatial groupings in different regions throughout the studied period. The maps of cases of dengue fever demonstrate that there was a spreading of the epidemic with agglomeration in different regions in the two years. There was no evidence of a relation between larval infestation and the occurrence of dengue fever with environmental levels. It was concluded that the incorporation of techniques of geographic processing and spatial analysis into the program may contribute to the control actions, decision taking, indicating a spatial agglomeration of higher incidence / Mestrado / Epidemiologia / Mestre em Saude Coletiva