Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T01:51:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 222153.pdf: 549895 bytes, checksum: 3811e5ad2cb3705195be65abfab45c07 (MD5) / Avaliamos a relação entre o aumento do [óxido nítrico] (NO) e a incapacidade dos glicocorticóides (GC) de conterem o desenvolvimento da [resposta inflamatória sistêmica] em animais endotoxêmicos. Observamos que: i) o tratamento de animais com endotoxina (LPS) aumentou os níveis de NOS e diminuiu a capacidade de ligação dos [receptores de glicocorticóides] (GR) em vários órgãos do rato, oito horas após a injeção de LPS; ii) o tratamento de ratos com o inibidor da NOS (nitro-arginina metil éster, L-NAME) durante o desenvolvimento do choque endotoxêmico preveniu a inibição da capacidade de ligação do GR e iii) um doador de NO (S-nitroso-N-acetil-DL-penicilamina, SNAP) injetado previamente em animais tratados com dexametasona e injetados com LPS, interferiu com ações anti-inflamatórias e imunossupressoras da dexametasona. Sabendo da afinidade do NO por sulfidrilas livres presentes em vários alvos protéicos e com base nos nossos resultados, sugerimos que o aumento da produção de NO na endotoxemia seja um dos possíveis mecanismos responsáveis pela redução da capacidade de ligação e funcionalidade do GR, talvez pela interação do NO com sulfidrilas críticas ao funcionamento do GR, via S-nitrosilação. Investigamos também se o NO liberado precocemente após um estímulo inflamatório poderia interferir com reações inflamatórias e cardiovasculares desenvolvidas em quadros de sepse. A supressão da liberação precoce de NO nos modelos experimentais LPS e CLP (ligadura e perfuração do ceco), pelo tratamento dos animais com o inibidor seletivo para [óxido nítrico sintase neuronal] (nNOS) 7-nitroindazol (7-NI) impediu o aparecimento da resposta inflamatória e da hiporresponsividade vasoconstritora à fenilefrina, mostrando que o NO liberado inicialmente pela enzima nNOS é importante na iniciação e perpetuação da resposta inflamatória sistêmica. Considerando que o NO causa inibição da capacidade de ligação do GR (quando produzido em maiores quantidades) e que a ativação da nNOS (liberando pequenas quantidades de NO) é um evento importante para o início da resposta inflamatória, sugerimos que o NO modula a resposta inflamatória sistêmica, ativando-a e diminuindo-a em momentos distintos do seu desenvolvimento.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T02:47:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 213495.pdf: 1985309 bytes, checksum: 628d08b3cd5a9cb6428edba5865ae12a (MD5) / A medicina popular tem-se utilizado de plantas para o tratamento das mais diversas patologias, entretanto faz-se necessário estudos embasados cientificamente que corroborem com os relatos etnobotânicos e etnofarmacológicos. A fim de resgatar a cultura popular, bem como, valorizar a biodiversidade do bioma Mata Atlântica, especialmente a Reserva da Juréia/SP, objetivou-se neste trabalho submeter o extrato bruto e frações de Ouratea parviflora, Polymnia sonchifolia e Marlierea obscura (popularmente utilizadas como antiinflamatórias), a ensaios in vitro e in vivo para avaliação do potencial antioxidante e antiinflamatório. A avaliação in vitro do potencial antioxidante fez-se pelos métodos de captação do radical DPPH, O2·- e ·OH, além da lipoperoxidação. A avaliação in vivo do estresse oxidativo (fragmentação do DNA, lipoperoxidação de membranas e carbonilação de proteínas) e as defesas antioxidantes (concentração de GSH, atividade da CAT, GST) foi realizada em camundongos pré-tratados com OPEB, OP4 e posteriormente expostos ao CCl4. Para a avaliação da atividade antiinflamatória selecionou-se os extratos e frações que apresentaram melhor atividade antioxidante, sendo estes OPEB, OP4, PSEB e MO3. Para tanto, aplicou-se o ensaio do edema de pata induzido pela carragenina em camundongos. Os extratos e frações das referidas plantas apresentaram significativa atividade antioxidante in vitro, destacando-se a Ouratea parviflora (OPEB, OP4), pois foram capazes de causar o "scavenger" de radicais DPPH, O2·- e ·OH em concentrações por vezes menores ou similares à rutina, reconhecido agente antioxidante. O CCl4 causou estresse oxidativo e dano celular ao fígado dos camundongos, onde a rutina, OPEB e OP4 apresentaram importante atividade na proteção tecidual comprovada pelos ensaios FOX, dano ao DNA, oxidação proteica, redução da GSH e elevação da AST (exceto OPEB), elevação da CAT, GST e ALT. Embora nos tempos 60 e 120 minutos, tenha ocorrido uma tendência de inibição do edema pelo tratamento prévio com as plantas medicinais (300 mg/Kg) via oral, a análise estatística não revelou diferenças significativas entre os diferentes tratamentos. Apesar disso, o aparente efeito antiedematogênico exibido por OP4 e MO3 vem de encontro aos resultados obtidos nos ensaios referentes à atividade antioxidade, especialmente o ·OH, radical envolvido no processo inflamatório. Os dados obtidos permitem concluir que os produtos de Ouratea parviflora, particularmente OPEB e OP4, poderiam se constituir em protótipos para o desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas para o tratamento patologias associadas a geração de EROs, uma vez que demonstraram importante potencial antioxidante in vitro e in vivo. A atividade antiinflamatória de Ouratea parviflora, Polymnia sonchifolia e Marlierea obscura não pode ser confirmada através do modelo experimental do edema de pata induzido pela carragenina.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T08:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 298470.pdf: 4617286 bytes, checksum: d46ff67aff2942d25379338aebae4192 (MD5) / A descoberta de que a resolução da inflamação é um processo ativo, no qual vários mediadores lipídicos são produzidos e que apresentam propriedades anti-inflamatórias e pró-resolução, abriu novas possibilidades para o tratamento de diversas doenças de origem inflamatória. No entanto, poucos estudos, até o momento, investigaram as propriedades anti-hiperalgésicas destes mediadores lipídicos em modelos animais de inflamação. Desta forma, o presente estudo investigou o possível efeito anti-hiperalgésico do precursor de resolvinas da série D, 17(R)HDoHE, e da resolvina AT-RvD1, sobre a dor inflamatória avaliada no modelo de artrite induzida por adjuvante (AIA) em ratos, bem como os seus efeitos sobre os sinais clínicos da artrite e os mecanismos pelos quais estes mediadores podem modular a dor de origem inflamatória. Os resultados obtidos no presente estudo demonstram que o precursor 17(R)HDoHE, quando administrado sistemicamente em uma baixa dose (300 ng/i.p.), inibiu tanto a gênese (quando administrado 30 min antes) quanto a manutenção (quando administrado 3 dias após a indução da artrite) da hiperalgesia mecânica aguda. Este efeito parece estar associado à modulação do fator de transcrição NF-.B (proteína) e da enzima COX-2 (proteína e RNAm), visto que a expressão de ambos os mediadores foi inibida tanto no gânglio da raiz dorsal como na medula espinhal de ratos com artrite. O tratamento terapêutico com o precursor 17(R)HDoHE (600 e 900 ng/i.p.) também inibiu a dor inflamatória em um período sub-crônico, isto é, 14 dias após a indução da artrite, mas não quando tratado no período crônico, 30 dias após a indução. Além disso, o tratamento repetido com 17(R)HDoHE, na fase sub-crônica da artrite, preveniu significativamente o aumento da rigidez articular, mas não do edema de pata e do edema articular. Considerando o tratamento sistêmico com a resolvina AT-RvD1 (100 ou 300 ng/i.p.), esta também apresentou efeito anti-hiperalgésico pronunciado quando administrada durante o processo inflamatório articular agudo, isto é, 3 dias após a indução da artrite. A redução nos níveis das citocinas TNF-. e IL-1. no tecido da pata de ratos com artrite pode ter contribuído para a atividade anti-hiperalgésica observada após o tratamento repetido, tanto com o precursor 17(R)HDoHE quanto com a resolvina AT-RvD1. Em conjunto, estes resultados mostram relevantes propriedades anti-hiperalgésicas do precursor 17(R)HDoHE e da resolvina AT-RvD1, sendo que estes mediadores lipídicos são potenciais agentes terapêuticos para o tratamento de estados dolorosos associados a doenças inflamatórias agudas e/ou crônicas como a artrite. / The discovery that resolution of inflammation is an active process, in which several lipid mediators are produced and possess antiinflammatory and pro-resolution properties, brought new possibilities for the management of several inflammatory diseases. Nevertheless, few studies have so far investigated the anti-hyperalgesic properties of those lipid mediators in animal models of pain. In this manner, the present study has evaluated the possible anti-hyperalgesic effects of the resolvins D series precursor, 17(R)HDoHE, and the effects of the resolvin AT-RvD1, on the inflammatory pain evaluated in the model of adjuvant-induced arthritis (AIA) in rats, as well as their effects on the clinical signs of arthritis and the mechanisms by which these mediators might regulate inflammatory pain. The results of the present study have demonstrated that the precursor 17(R)HDoHE when systemically treated in a low dose (300 ng/i.p.) inhibited both the genesis (when administered 30 min before) and the maintenance (when administered 3 days after arthritis induction) of acute mechanical pain. Such effect seems to be related to the modulation of the transcriptor factor NF-.B (protein) and COX-2 enzyme (protein and mRNA), since the expression of both mediators were inhibited in dorsal root ganglia and spinal cord of arthritic rats. The therapeutic treatment with the precursor 17(R)HDoHE (600 and 900 ng/i.p.) have also inhibited the inflammatory pain in a sub-chronic period, i.e. 14 days after arthritis induction but not when treated in the chronic phase, i.e. 30 days after arthritis induction. Furthermore, the repeated treatment with 17(R)HDoHE in the sub-chronic phase of arthritis significantly prevented the increase in joint stiffness but not the increase in paw and joint edema. Considering the systemic treatment with the resolvin ATRvD1 (100 or 300 ng/i.p.), it also presented a pronounced antihyperalgesic effect when treated during joint acute inflammatory process, i.e. 3 days after arthritis induction. The decrease of the cytokines TNF-. and IL-1. levels in the plantar tissue of arthritic rats may have contributed to the anti-hyperalgesic activity observed after the repeated treatment with both the precursor 17(R)HDoHE and the resolvin AT-RvD1. Taken together, these results demonstrate relevant anti-hyperalgesic properties of the precursor 17(R)HDoHE and the resolvin AT-RvD1, highlighting that these lipid mediators are potential therapeutic agents for the treatment of painful states associated with acute and/or chronic inflammatory diseases such as arthritis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T07:48:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 229658.pdf: 4465226 bytes, checksum: b80972fda74be0f26948f81370613c2b (MD5)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-11-03T03:08:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334653.pdf: 1672072 bytes, checksum: ad5be743e15ff7c4b40c8eeae113ea23 (MD5) Previous issue date: 2015 / Senecio Brasiliensis Less (S. brasiliensis) popularmente conhecida como "Flor-das-almas", "Margaridinha" ou "Maria mole" é utilizada na medicina popular como um anti-inflamatório, no tratamento de úlcera gástrica e dor de estômago. Embora o gênero Senecio já tenha sido amplamente estudado para avaliar as atividades farmacológicas que suportam seu uso na medicina tradicional, poucos estudos têm avaliado a atividade anti-inflamatória desta espécie. Portanto, objetivo deste estudo foi investigar a atividade anti-inflamatória da S. brasiliensis, uma espécie nativa no Brasil, usando um modelo murino de pleurisia induzida pela carragenina. As flores secas de S. brasiliensis foram maceradas e extraídas com etanol obtendo-se o extrato bruto (CE). As frações acetato de etila (AcOEt), fração rica em alcalóides (AF), hexano (HEX) e diclorometano (DCM) foram obtidas a partir do CE. Senecionina (Sen), integerrimina (Int) e N-óxido senecionina foram obtidas da fração FA, e uma mistura de ácidos x,y-dicafeiolquínicos (1,4-, 3,4-, 3,5- e 4,5-: DCQs) foi obtida da fração AcOEt. No protocolo para identificar e elucidar a estrutura dos compostos foram utilizadas técnicas de eletroforese capilar, infravermelho, ressonância magnética nuclear (RMN) e cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massa (HPLC/MS). Neste protocolo experimental utilizou-se o modelo da pleurisia induzida pela carragenina, em camundongos. Neste modelo foram estudados os efeitos da S. brasiliensis sobre: migração de leucócitos, atividades da mieloperoxidase (MPO) e adenosina desaminase (ADA) assim como as concentrações do fator de necrose tumoral alfa (TNF-a), interleucina 1-beta (IL-1ß) e interleucina 17A (IL-17A) . Todos estes parâmetros foram analisados no líquido da cavidade pleural, Além disso, foram analisados no tecido pulmonar, os efeitos dos compostos Sen, Int e DCQs, sobre a fosforilação da proteína p65 (p-p65) da via do fator de trancrição nuclear kappa B (NF-?B). Ensaios colorimétricos foram utilizados para analisar MPO e ADA e testes imunoenzimáticos (ELISA) para TNF-a, IL-1ß, IL-17A e a fosforilação da p65. O CE, as frações AcOEt e AF, e/ou os compostos Sen, Int e DCQs inibiram os leucócitos (p < 0.05), a atividade de MPO e ADA (p < 0.01), as concentrações de TNF-a(p < 0.05) e IL-17A (p < 0.01), O CE, as frações AcOEt e AF, e DCQs, também diminuíram as concentrações de IL-1ß (p < 0.01). Os compostos isolados Sen, Int e DCQs inibiram fosforilação da p-65 (NF-?B) (p < 0.05). Este estudo demonstrou que a S. brasiliensis tem uma importante atividade anti-inflamatória pela inibição da migração de leucócitos ativados devido a diminuição de neutrófilos no sítio da inflamação. Este efeito pode ser atribuído a inibição de citocinas pró-inflamatórias e também da ativação da via do NF-?B. Os compostos Sen, Int, e DCQs pode ser, pelo menos em parte, responsáveis pela ação anti-inflamatória da S. brasiliensis.<br> / Abstract : Senecio Brasiliensis (Spreng) Less (S. brasiliensis), known as "Flor-das-almas", "Margaridinha" or "Maria mole", is used in folk medicine as an anti-inflammatory and to treat gastric ulcers and stomach pain. While the Senecio genus has been widely studied for its pharmacological activities to support its use in traditional medicine, few studies focus on the anti-inflammatory activities of the species. To investigate the anti-inflammatory activities of S. brasiliensis, a specie native to Brazil, using a murine model of pleurisy induced by carrageenan. The dried flowers of S. brasiliensis were macerated and subjected to ethanol (96%) extration to obtain the crude extract (CE). The ethyl acetate (AcOEt), alkaloid (AF), hexane (HEX) and dichloromethane (DCM) fractions were obtained by extracting the CE with different solvents. Senecionine (Sen), integerrimine (Int) and senecionine N-oxide` and a mixture of dicaffeyoilquinic acids (1,4-, 3,4-, 3,5- and 4,5- dicaffeoylquinic acids, DCQs) were obtained from the AF and AcOEt fractions, respectively. The physical characteristics and column chromatography were used to extract and identify the compounds. Nuclear magnetic resonance (NMR), and gas chromatography?mass spectrometry (GC-MS), and high-performance liquid chromatography-diode array detector (HPLC-DAD) coupled with electrospray mass spectrometry (ESI-MS) (HPLC-DAD-MS/MS) and infrared (IR) spectroscopy were used to identify, elucidate and confirm the structures of the compounds. Swiss mice were used in the in vivo experiments. We evaluated the effect of the CE, its derived fractions (AcOEt, AF, HEX and DCM), and the isolated compounds (Sen, Int, N-oxide senecionine) and DCQs on: leukocyte migration, exudate concentrations, myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA) activities, and tumour necrosis factor-a (TNF-a), interleukin 1ß (IL-1ß) and interleukin 17A levels in the fluid leakage from the pleural cavity using a mouse model of pleurisy induced by carrageenan. The effects of the isolated compounds, Sen, Int, N-oxide senecionine and DCQs, were also analysed for their ability to inhibit p65 phosphorylation (p-p65) in the nuclear factor-kappa B (NF-?B) pathway in the lung tissue. MPO and ADA were analysed by colorimetric assays, and the cytokines and protein p65 levels were determined using an enzyme immunoassay (EIA). The CE, its AcOEt and AF fractions, and its compounds (Sen, Int and DCQs), significantly reduced leukocyte migration (P < 0.05), MPO and ADA activities (P < 0.01), and TNF-a (P < 0.05), and IL-17A levels (P < 0.01). The CE, the AcOEt and AF fractions, and the DCQs also decreased IL-1ß levels (P < 0.01). The isolated compounds, Sen, Int and the DCQs, inhibited p65 phosphorylation (NF-?B) (P < 0.05). This study demonstrated that S. brasiliensis has important anti-inflammatory properties that are capable of inhibiting activated leukocyte migration by decreasing neutrophil migration. This effect may be attributed to the inhibition of pro-inflammatory cytokines and the reduction of the NF-?B pathway. The compounds Sen Int, and DCQs may be responsible for the anti-inflammatory actions of S. brasiliensis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2014. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:59:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 326946.pdf: 2794275 bytes, checksum: d917eb608c08841e41db6fd6634a4bab (MD5) Previous issue date: 2014 / A Polygala molluginifolia é uma planta nativa do sul do Brasil popularmente chamada de cânfora. Plantas do gênero Polygala têm sido usadas na medicina tradicional para o tratamento de diferentes patologias, inclusive doenças inflamatórias. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto, frações e compostos obtidos da espécie Polygala molluginifolia (Polygalaceae) no modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. O material vegetal da Polygala molluginifolia foi submetido a extração por maceração com etanol 96% para a obtenção do extrato bruto (EB). O EB foi submetido a procedimentos cromatográficos em silica gel para a obtenção de diferentes frações, dentre elas as frações aquosa (Aq), acetato de etila (AcOEt) e hexano (Hex). O composto 1 (5,3',4'-trihidroxi-6",6"-dimetilpirano [2",3":7,6] isoflavona) (Iso), foi isolado da fração AcOEt e o composto 2 (Rutina) (Rut), foi isolado da fração Aq e foram identificados por meio de espectroscopia de 1H e 13C NMR e quantificados por meio de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-UV). A avaliação do efeito anti-inflamatório foi realizada por meio da contagem de leucócitos, neutrófilos e concentrações de exsudato. Foram utilizadas técnicas padronizadas descritas na literatura para verificar a atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e adenosina-desaminase (ADA) e concentrações de nitrito/nitrato (NOx). Neste estudo também foi investigado o efeito da Polygala molluginifolia sobre a concentração e expressão do RNA mensageiro das citocinas fator de necrose tumoral alfa (TNF-?) e interleucina-1 beta (IL-1?), utilizando as metodologias de enzima imunoensaio (ELISA) e a reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-qPCR) e sobre a via de sinalização do fator nuclear kappa B (NF-kB), mais especificamente sobre a fosforilação da subunidade p65. Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 horas após a indução da pleurisia. Para todos os experimentos, a dexametasona (Dex, 0,5 mg/kg, i.p.) foi utilizada como fármaco de referência anti-inflamatória. A análise estatística utilizada foi o teste de variância ANOVA, complementado pelo teste de Neuman-Keuls, e quando necessário, foram realizados teste t de Student e correlação de Pearson. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. O EB, as as frações Aq, AcOEt e Hex, além dos compostos Iso e Rutina, foram capazes de reduzir a migração de leucócitos, as custas de neutrófilos e a exsudação formada na cavidade pleural (p < 0,05), além das atividades de: MPO (p < 0,01), ADA (p < 0,001). As concentrações de NOx também foram inibidas (p < 0,001), exceto quando os animais foram tratados com a rutina. Além disso, houve redução na concentração da TNF-? (p < 0,01) e IL-1? (p < 0,001). Os compostos isolados (Iso e Rutina) foram capazes de inibir a transcrição do RNAm do TNF-? (p < 0,01) e IL-1? (p < 0,001) além de reduzir significamente a fosforilação da subunidade p65 do NF-kB (p < 0,001). Finalmente, foi verificada uma correlação positiva entre a inibição na migração celular e exsudação com a capacidade de ambos compostos em reduzir a fosforilação da p65. Os resultados demonstraram que a P. molluginifolia tem importante ação anti-inflamatória e este efeito é devido, pelo menos em parte, a presença de Iso e Rutina. Além disso, esse efeito parece estar relacionado a capacidade dos compostos isolados interferirem na via de sinalização do NF-kB.<br> / Abstract : The Polygala molluginifolia is a plant native to southern Brazil that is popularly called "canfora". This study was conducted to investigate the anti-inflammatory activity of Polygala molluginifolia (Polygalaceae) on the mouse pleurisy model induced by carrageenan. The whole Polygala molluginifolia plant material was extracted by maceration with 96% ethanol. The crude hydroalcoholic extract (CE) was subjected to chromatographic procedures to produce derivate fractions, including aqueous (Aq), ethyl acetate (AcOEt), and hexane (Hex) fractions. Compound 1 (5,3',4'-trihydroxy-6?,6?-dimethylpyrano [2?,3?:7,6] isoflavone) (Iso), which was isolated from the AcOEt fraction, and Compound 2 (Rutin) (Rut), which was isolated from the Aq fraction, were identified using 1H and 13C NMR spectroscopy and quantified using an HPLC apparatus. In this experimental protocol, swiss mice were used in the murine carrageenan-induced pleurisy model previously described by Saleh et al. (1996). The anti-inflammatory effect was evaluated by total leukocyte and neutrophil count, exsudate concentration, myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA) activities, nitrite/nitrate concentrations (NOx), concentrations and mRNA expression of tumor necrosis factor alpha (TNF-?? and interleukin 1-beta (IL-1). In addition, we studied the effect of Polygala molluginifolia isolated compounds on the nuclear factor kappa B (NF-?B). The inflammatory parameters were evaluated 4 hours after pleurisy induction. Dexamethasone (Dex, 0,5 mg/kg, i.p.) was used as reference anti-inflammatory drug. For statistical analysis were used the variance test (ANOVA), complemented by Newman-Keuls and when required, Student's t test and Pearson's coeficient. p < 0.05 was considered significant. The CE, Aq, AcOEt, and Hex fractions, and the isolated compounds Iso and Rut were able to reduce cell migration and exudation (p < 0.05). Furthermore, the plant material also decreased the MPO (p < 0.01) and ADA (p < 0.001) activities and the nitric oxide (NOx) (p < 0.001), TNF-a (p < 0.001), and IL-1ß (p < 0.001) levels. In addition, Iso and Rut reduced the TNF-a (p < 0.01) and IL-1ß (p < 0.001) mRNA expression levels and significantly decreased NF-?B p65 phosphorylation (p < 0.001). Finally, was observed a positive correlation on leukocyte migration and exudate levels with inhibition upon p65 phosphorilation. The results show that P. molluginifolia has a significant anti-inflammatory action and that this effect is due, at least in part, to the presence of Iso and Rut in large amounts. Moreover, this effect was found to be closely related to the inhibitory effects of the isolated compounds on the NF-kB pathway.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:08:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334742.pdf: 2139758 bytes, checksum: 252c0ce7b7663bca6d4cdbe999d2516f (MD5) Previous issue date: 2015 / A artrite reumatoide é uma doença inflamatória crônica de caráter autoimune que atinge cerca de 1% da população mundial. O desenvolvimento dos medicamentos inibidores do TNF-a na última década representou um grande avanço no tratamento das formas moderadas e severas da atrite reumatoide. O Etanercept é um medicamento que compete com o receptor do TNF-a pela ligação desta citocina. Este trabalho tem por objetivo avaliar o efeito anti-inflamatório do etanercept utilizando o modelo murino de inflamação induzida pela carragenina na bolsa de ar. Para isso foi realizada a contagem total de leucócitos no fluído da bolsa de ar utilizando-se contador celular automatizado (Auto Hematology Analyzer BC-2800 VET, henchen Mindray Bio-Medical electronic CO Ltda., Hamburger, Germany). A contagem diferencial celular foi realizada em esfregaços corados com May-grunwald-Giemsa em microscópio óptico comum. A exsudação foi avaliada pela quantificação de azul de Evans (25 mg/kg) administrado por via endovenosa e analisado no fluído da bolsa de ar por metodologia colorimétrica e em leitor de ELISA. As dosagens das atividades de MPO, ADA e da concentração de NO foram realizadas no fluído da bolsa de ar por metodologias colorimetricas. As citocinas também foram avaliadas no fluído da bolsa de ar por citometria de fluxo usando o kit comercial (Cytometric Bead Array CBA mouse Th1/Th2 Cytokine kit) e os resultados analisados utilizando o software FCAP array®. A fosofrilação da p-65-NF-kB foi realizada no tecido da bolsa de ar com a metodologia de ELISA utilizando-se anticorpos monoclonais. A análise da apoptose em neutrófilos foi realizada no fluído da bolsa de ar por citometria de fluxo utilizando-se os seguintes marcadores: anticorpos anti-CD11-b marcados com PEcy7 e anti-LY-6G marcado com PE para separar a população de neutrófilos ativados, e anexina V marcada com isotiocianato de fluoreceina (FITC) e 7-actinomicina (7-AAD) como marcadores de apoptose e necrose respectivamente. Todos os parâmetros inflamatórios foram avaliados 24h após a indução da inflamação na bolsa de ar. Em todos os experimentos utilizou-se como referência grupos de animais tratados com dexametasona e indometacina. A análise estatística foi realizada pelo teste paramétrico ANOVA, seguido de teste pos-hoc Newmann-Keuls. Para todas as análises foram considerados significativos os valores de P < 0,05. O Etanercept foi capaz de reduzir a concentração leucocitária no fluído da bolsa de ar (P < 0,01) principalmente reduzindo a concentração deneutrófilos (P < 0,01), e a exsudação (P < 0,01). Além disso, o etanercept inibiu a atividade das enzimas MPO (P < 0,01), ADA (P < 0,01) e as concentrações de NOx (P<0,01), também reduziu as concentrações das citocinas IFN-? (P < 0,05), TNF-a (P < 0,01) e IL-17 (P<0,05), também reduziu os níveis de fosforilação do NF-?B (P < 0,05). Por fim o etanercept apresentou um efeito indutor na apoptose em neutrófilos (P < 0,05). Os resultados deste estudo demonstraram que o etanercept apresentou atividade anti-inflamatória possivelmente pela redução da ativação da via do NF-?B, além disso, seu efeito sobre os neutrófilos pode indicar um possível mecanismo pelo qual o tratamento com este medicamento possa apresentar benefícios logo no início da artrite-reumatoide assim como no tratamento de outras doenças inflamatórias onde estas células estejam envolvidas.<br> / Abstract : Rheumatoid arthritis is a chronic, autoimmune inflammatory disease affecting 1% of world?s population. The development of the TNF-a inhibitors in the last decade represented a great advance in the treatment of the mild to severe forms of the rheumatoid arthritis. Etanercept is a drug that competes with the TNF-a receptor for the binding of this cytokine. This paper aimed to evaluate the anti-inflammatory effects or etanercept using the carrageenan induced air-pouch model in mice. To achieve this end the total leukocyte content was analyzed in the air-pouch fluid leakage through automated cell counter (Auto Hematology Analyzer BC-2800 VET, henchmen Mindray Bio-Medical electronic CO Ltda., Hamburger, Germany). The differential cell count was analyzed through observation of May-Grunwald-Giemsa colored smears in a common optic microscope. The exudate levels was evaluated through the injection of Evan?s blue dye (25 mg/kg) through intravenous route and the air pouch fluid leakage was analyzed by colorimetric methodology in an EIE plate reader. The analyses of the MPO, ADA activities and NOx concentration were realized in the air-pouch fluid leakage using colorimetric assays. The cytokine concentrations were analyzed in the air-pouch fluid leakage using the commercial kit (Cytometric Bead Array CBA mouse Th1/Th2 Cytokine kit) and the data was analyzed using the FCAP array® software. The p-65-NF-kB phosphorylation was analyzed in the tissue of the air-pouch by EIE methodology using monoclonal antibodies. The neutrophil apoptosis was realized in the air-pouch fluid leakage through flow cytometry using the following antibodies: anti-CD11-b-PEcy7, anti-Ly-6g-PE for the activated neutrophil gating and apoptosis and necrosis was analyzed through anexin V and 7-actinomycin respectively. All the inflammatory parameters were evaluated 24h after the induction of the inflammation in the air pouch. In all experiments groups of animals treated with dexamethasone and indomethacin were used as reference. The statistical analysis was realized by the ANOVA variation test followed by post-hoc Newmann-keuls. For all analyses values of P < 0.05 were considered significant. Etanercept was able to reduce the leukocyte concentration in the air pouch leakage (P < 0.01), mainly by the reduction of neutrophils (P < 0.01), and exudation (P < 0.01). Treatment with etanercept reduced MPO (P < 0.01) and ADA (P < 0.01) activities and NOx ( P < 0.01) concentration, also reduced the concentration of IFN-? (P < 0.05), TNF-a (P < 0.01) and IL-17 (P < 0.05) and reducedthe NF-?B phosphorylation levels (P < 0.05). Finally etanercept presented an apoptosis inducing effect in neutrophils ( P < 0.05). The results of this study showed that etanercept presented anti-inflammatory activity possibly through the reduction of the activation of NF-?B pathways, besides, it?s effect on neutrophils may indicate a possible mechanism through which the treatment with this drug may present benefits in the beginning of rheumatoid arthritis as well in the treatment of other inflammatory diseases with the involvement of these cells.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:10:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 318109.pdf: 5339491 bytes, checksum: 3bd18f691339280cf25525f6dcba51e8 (MD5) Previous issue date: 2013 / A pneumonia é uma das principais causas de sepse, que por sua vez é a maior causa de morte nas Unidades de Terapia Intensiva, mesmo com os recentes avanços da medicina. O estudo da sepse e de novas alternativas terapêuticas permanecem um desafio devido à complexidade desta síndrome, cujo principal componente é uma resposta inflamatória desordenada. A lipoxina A4 (LXA4) é um mediador lipídico endógeno com potentes ações anti-inflamatórias e pró-resolutivas, entretanto seu papel em processos infecciosos como a sepse ainda não é bem entendido. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi avançar no entendimento do papel da LXA4 e do seu receptor FPR2/ALX na resposta inflamatória desordenada que ocorre no modelo de sepse induzida por pneumonia. Para isso, a sepse foi induzida em camundongos Swiss machos pela inoculação intratraqueal de Klebsiella pneumoniae. Os parâmetros inflamatórios e cardiovasculares foram avaliados 6, 24 e 48 h após a infecção. Os resultados mostram que a severidade da infecção e a mortalidade dos animais se correlacionam com a quantidade de bactéria inoculada. Os animais sépticos apresentaram alterações histopatológicas nos pulmões, exibiram aumento do número de células no lavado bronco-alveolar e dos níveis das citocinas pró-inflamatórias TNF-? e IL-1? local e sistemicamente, desenvolveram leucopenia, além de hipotensão e hiporreatividade a agentes vasoconstritores. Além do pulmão, foram encontradas bactérias no baço e coração dos animais, indicando disseminação da infecção. Interessantemente, houve aumento da expressão da NOS-2 em tempos mais tardios, enquanto que os níveis da NOS-1 e NOS-3 permaneceram inalterados. A maior expressão da NOS-2 coincidiu com uma grande produção de NO no foco infeccioso e no plasma, avaliado pela mensuração de nitrito + nitrato. A sepse também induziu aumento precoce da concentração de LXA4 no foco infeccioso e da expressão do seu receptor FPR2/ALX nos pulmões. O tratamento com o antagonista do receptor FPR2/ALX, BOC-1, no início da sepse aumentou a migração de leucócitos para o foco, reduziu o processo infeccioso local e a sua disseminação, e aumentou a sobrevida dos animais. Por outro lado, nos animais tratados com a LXA4 ou com o seu análogo BML-111 no início da sepse, houve redução da migração de células para o foco e agravamento do processo infeccioso. Em momentos mais avançados da sepse, o tratamento dos camundongos com BOC-1 não teve efeito na sobrevida. Entretanto, o tratamento tardio com a LXA4 e o BML-111 aumentou a sobrevida por reduzir a resposta inflamatória excessiva. Esse estudo mostra que a infecção pulmonar induzida pela K. pneumoniae é um modelo animal de sepse clinicamente relevante que induz uma resposta inflamatória sistêmica e provoca alterações cardiovasculares que persistem por pelo menos 48 h. Nossos achados mostram que os níveis de LXA4 e do seu receptor FPR2/ALX estavam aumentados no início da sepse contribuindo para a resposta inflamatória desordenada que ocorre nessa patologia. Além disso, nossos dados mostram que a LXA4 tem um papel duplo na sepse, e seu efeito benéfico ou maléfico é tempo-dependente. Portanto, uma interferência apropriada na via LXA4-FPR2/ALX pode constituir uma nova estratégia terapêutica no auxílio do tratamento da sepse. <br> / Abstract: Pneumonia is one of the major causes of sepsis, which, in turn, is the main cause of death in intensive care units, in spite of recent medical advances. The study of sepsis and new therapeutic alternatives remains challenging due to the complexity of this syndrome, whose main component is a dysregulated inflammatory response. Lipoxin A4 (LXA4) is an endogenous lipid mediator with potent anti-inflammatory e proresolution actions but its role in infectious processes like sepsis is not well understood. Thus, the aim of the present work was to provide a better comprehension of the role of LXA4 and its receptor FPR2/ALX in the inflammatory dysregulation that occurs in pneumonia-induced sepsis model. Pneumosepsis was induced in Swiss male mice by Klebsiella pneumoniae intratracheal inoculation. Inflammatory and cardiovascular parameters were evaluated 6, 24 and 48 h after the insult. The results show that severity of infection and the mortality correlated with the amount of bacteria. Septic animals presented pathological changes in lungs, increase in cell number in the bronchoalveolar lavage, leukopenia, increase in TNF-a and IL-1ß levels, hypotension and hyporesponsiveness to vasoconstrictors, the two latter characteristics of severe sepsis and septic shock. Significant numbers of bacteria in spleen and heart homogenates indicated infection spreading. Interestingly, NOS-2 expression appeared late after bacteria inoculation, whereas levels of NOS-1 and NOS-3 were unchanged. The high NOS-2 expression coincided with an exacerbated NO production in the infection focus and in plasma, as judging by nitrate + nitrite levels. Sepsis also induced an early increase in LXA4 levels and an augment in its receptor FPR2/ALX expression in lungs. Treatment in early sepsis with the antagonist of FPR2/ALX, BOC-1, increased leukocyte migration to the focus, reduced bacterial load and dissemination and improved survival. On the other hand, animals treated with LXA4 itself or the analog BML-111 in early sepsis exhibited a decrease in cell migration to the focus and an infection worsening. In late sepsis, treatment of mice with BOC-1 had no effect, but LXA4 and BML-111improved the survival rate by reducing the excessive inflammatory response. This study shows that K. pneumoniae-induced lung infection is a clinically relevant animal model of sepsis inducing a systemic inflammatory response and cardiovascular alterations which endures at least until 48 h. Our findings demonstrate that LXA4 and its receptor FPR2/ALX levels were increased in the early phase of sepsis, contributing to the characteristic inflammatory dysregulation that occurs in this pathology. In addition, our data show that LXA4 has a dual role in sepsis and that its beneficial or harmful effects are critically dependent on the time. Therefore, a proper interference with LXA4 system may open a new therapeutic avenue to treat sepsis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-05T23:31:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 318766.pdf: 7335119 bytes, checksum: a77e027b3cf942291b50faade23a68ce (MD5) Previous issue date: 2013 / A atividade anti-inflamatória e antinociceptiva da mistura de a-amirina (aAMI) e ß-amirina (ßAMI), triterpenos pentacíclicos encontrados na resina de plantas do gênero Protium, parece relacionada a sua capacidade de estimular receptores canabinóides tipo 1 (CB1) e 2 (CB2). Apesar do potencial para manejo de dor e inflamação, canabinóides são pouco usados na clínica devido aos seus efeitos adversos psicotrópicos. A mistura de aAMI e ßAMI também parece interagir com o sistema vanilóide, uma vez que reverte a nocicepção induzida por capsaicina, o agonista protótipo de receptor de potencial transitório vanilóide tipo 1 (TRPV1). Há poucos estudos sobre o envolvimento dos receptores TRPV1 em psicopatologias. A inibição pré-pulso do reflexo de sobressalto (PPI) é uma medida operacional do filtro sensório-motor. Déficits de PPI são observados em esquizofrênicos, bem como humanos e animais sob efeito de drogas psicotomiméticas, como agonistas canabinóides e o antagonista do receptor NMDA de glutamato, MK801. O objetivo desse trabalho foi verificar os efeitos da aAMI no modelo de PPI, bem como investigar as influências do receptor CB1 e TRPV1 sobre suas ações. A aAMI causa déficit no PPI e habituação em doses abaixo da que afeta a locomoção. Essas alterações foram prevenidas com o bloqueio do receptor CB1, mas não do TRPV1. O déficit de PPI induzido pela aAMI e MK801 foi revertido pela ativação de TRPV1 por capsaicina, mas só o tratamento com esse vanilóide não alterou o PPI per se. Esses dados apontam para uma possível atividade psicotomimética da aAMI administrada centralmente, bem como confirma parcialmente sua ação canabimimética. A reversão das alterações comportamentais induzidas por um antagonista de NMDA e pela aAMI sugere uma ação antipsicótica para a ativação central de receptores TRPV1 <br> / Abstract: The anti-inflammatory and antinociceptive effects of the mixture of aamyrin (aAMI) and ß-amyrin (ßAMI), pentacyclic triterpenes found in resin of plants of the genus Protium, seem related to its capacity to stimulate cannabinoid receptor type 1 (CB1) and 2 (CB2). Despite the potential for management of pain and inflammation, cannabinoids are not used in practice because of its adverse psychotropic effects. The mixture aAMI and ßAMI also appears to interact with the vanilloid system since it reverses nociception induced by capsaicin, the prototype agonist for transient receptor potential vanilloid type 1 (TRPV1). There are few studies about the involvement of TRPV1 receptors in psychopathology. The prepulse inhibition of the startle reflex (PPI) is an operational measure of sensorimotor gating. PPI deficits are observed in schizophrenics, as well as in humans and animals under influence of psychotomimetic drugs, such as cannabinoid agonists and the glutamate NMDA receptor antagonist, MK801. The aim of this study was to ascertain the effects of aAMI in the PPI model and to investigate the influences of the CB 1 and TRPV1 receptors on its actions. The aAMI causes deficits in PPI and habituation in doses lower than that affects locomotion. Blocking the CB 1 receptor, but not TRPV1, prevented these alterations. The PPI deficit induced by aAMI and MK801 was reversed by capsaicin-induced activation of TRPV 1, but treatment only with this vanilloid did not influence PPI per se. These data point to a possible psychotomimetic activity for centrally administered aAMI and partially confirms its cannabimimetic action. Reversal of behavioral changes induced by a NMDA antagonist and aAMI suggests an antipsychotic- like action for central TRPV 1 receptors activation.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-20T20:09:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 196227.pdf: 40880152 bytes, checksum: 6d6ef93d1123e0dcd91db2ade4069f20 (MD5)