Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-23T23:45:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 251003.pdf: 562113 bytes, checksum: 2e6d39d6a93c258d38f3f5ad1667ebfc (MD5) / Introdução: Tacrolimus é um imunossupressor da classe dos macrolídeos utilizado na clínica para evitar a regeição em transplantes de órgãos e no tratamento da dermatite atópica. Objetivo: O objetivo do presente estudo foi elucidar a atividade antiinflamatória do tacrolimus na inflamação induzida pela carragenina, no modelo da bolsa de ar, em camundongos. Metodologia: Camundongos albinos Swiss receberam injeção de 1,5 ml de ar no dorso, durante três dias alternados, para formação da bolsa de ar. No sexto dia, os animais receberam carragenina (Cg, 1%, s.c.) e 24 h após foram sacrificados e a bolsa foi aberta e lavada com 1 ml de salina estéril. Os parâmetros inflamatórios observados foram: acúmulo de leucócitos, exsudação, atividade da mieloperoxidase (MPO) e da adenosina-deaminase (ADA), concentração de nitrato/nitrito (NOx) e níveis de fator de necrose tumoral alfa (TNF- ), interleucina-1 beta (IL-1 ) e quimiocina para neutrófilo (KC) foram avaliados 24 h depois. Para avaliar a exsudação, 1 h antes da Cg foi administrado 0,2 ml de azul de Evans (25 mg/kg, i.v.). Para determinação da curva dose e tempo resposta, inicialmente diferentes grupos de animais receberam diferentes doses de tacrolimus (1 a 10 mg/kg, v.o.) 0,5 h antes da injeção de carragenina e a migração celular e a exsudação foram avaliadas 24 h após. Em outros experimentos, diferentes grupos receberam uma única dose de tacrolimus (2 mg/kg, v.o.) em diferentes períodos de tempo (0,5 - 4 h) e os parâmetros inflamatórios foram avaliados 24 h após. De acordo com este protocolo, tacrolimus (2 mg/kg, v.o.) administrado 0,5 h antes da Cg, foi utilizado para analisar o seu efeito sobre a atividade de MPO e ADA e níveis de NOx, TNF- , IL-1 e KC. A indometacina (5 mg/kg, i.p.) e a dexametasona (0,5 mg/kg, i.p.) foram utilizadas como fármacos de referência. Os resultados foram expressos como média ± erro padrão da média. As diferenças estatísticas foram determinadas pela análise de variância (ANOVA), seguido de teste de Dunnett ou teste t de Student. Valores de P < 0,05 foram considerados significantes. Resultados: O tacrolimus (Tac: 2 mg/kg, v.o.) inibiu o acúmulo de leucócitos e de neutrófilos e reduziu a exsudação, os níveis de TNF- , IL-1, KC e óxido nítrico, além da atividade da MPO e da ADA (P < 0,05). Conclusão: Estes resultados demonstram que o tacrolimus apresenta importante atividade antiinflamatória, similar a da indometacina e da dexametasona. A inibição de citocinas pró-inflamatórias (TNF- , IL-1, KC), enzimas (MPO e ADA) e liberação de mediadores inflamatórios (NOx) parecem fazer parte da atividade antiinflamatória do tacrolimus.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Demuestra que la actividad antiinflamatoria de una forma farmacéutica de aplicación tópica a base del extracto etanólico liofilizado de cálices de Physalis peruviana “aguaymanto”. Se realizó una extracción por reflujo con éter de petróleo y se preparó un extracto etanólico por maceración, utilizando cálices de aguaymanto recolectados de una empresa procesadora del departamento de Cuzco. El extracto etanólico liofilizado se incorporó a concentración de 1% en las bases diseñadas para tal fin. Se ensayaron diversas formulaciones en gel base de carboximetilcelulosa sódica (CMC), poliacrilamida y carbómero, seleccionando aquellas preparaciones que presentaron mejor compatibilidad física; adicionalmente se sometieron a estabilidad preliminar. Se evaluó su actividad antiinflamatoria siendo 14,83; 39,10 y 48,86% de eficacia antiinflamatoria para el extracto liofilizado, gel de preparación reciente y gel envejecido a 15 días, frente a 56,79% y 24,49% para gel de diclofenaco 1% y crema de clobetasol 0,05%, respectivamente. Los resultados evidenciaron que la formulación de gel de poliacrilamida 3% con extracto liofilizado de cálices de Physalis peruviana evaluada posee actividad antiinflamatoria. / Tesis

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2009 / Made available in DSpace on 2012-10-24T07:02:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 273422.pdf: 19098275 bytes, checksum: 96ff860df27fb1017db4a84221c62b5b (MD5) / As espécies do gênero Passiflora (Passifloraceae), conhecidas no Brasil como maracujás, são distribuídas principalmente em países da América do Sul e são utilizadas popularmente como sedativas, calmantes, diuréticas e em casos de problemas inflamatórios. P. edulis variedade flavicarpa (maracujá-amarelo) constitui a espécie mais cultivada no país, principalmente para a preparação de suco industrializado. Neste trabalho, esta espécie foi um dos principais objetos de estudo, na qual foi investigada a composição química e as atividades biológicas das folhas e do pericarpo. Adicionalmente foi realizada uma análise qualitativa por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplada a detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD), entre espécies de Passiflora nativas da América do Sul. Também foi utilizada a técnica de Cromatografia em Contracorrente de Alta Velocidade (HSCCC) para o isolamento de flavonóides glicosilados da fração butanólica das folhas da espécie P. edulis var. flavicarpa. Por meio de um fracionamento biomonitorado para caracterizar os possíveis compostos responsáveis pela atividade anti-inflamatória do extrato aquoso das folhas de P. edulis var. flavicarpa, foi observado o envolvimento dos flavonóides C-glicosídeos, isoorientina, vicenina-2 e spinosina, na resposta inflamatória, no modelo de pleurisia induzida por carragenina, em camundongos, via i.p. No pericarpo dos frutos da variedade flavicarpa, também foi observada a presença dos flavonóides C-glicosídeos isoorientina, vicenina-2, spinosina e crisina 6,8-di-C-glicopiranosídeo. A avaliação de possíveis atividades neurofarmacológicas demonstrou atividade tipo-ansiolítica e sedativa, e foi possível caracterizar a presença desses flavonóides C-glicosídeos nos extratos ativos do pericarpo. A análise cromatográfica qualitativa, por CLAE-DAD, das folhas e do pericarpo, de diferentes espécies de Passiflora: P. edulis var. flavicarpa, P. edulis var. edulis, P. alata, P. tripartita var. mollissima, P. quadrangularis, P. ligularis e P. manicata, permitiu a caracterização dos extratos vegetais, que apresentaram diferentes perfis cromatográficos e diferentes compostos majoritários, que podem ser utilizados como marcadores químicos para o controle de qualidade desses extrativos vegetais. A técnica de HSCCC foi utilizada para o isolamento de flavonóides glicosilados da fração butanólica das folhas da espécie P. edulis var. flavicarpa. O sistema acetato de etila: n-butanol: água (2:1:3, v/v/v), permitiu a partir de 1g da fração, a obtenção de 46 mg de um composto ainda não identificado e 30 mg de isoorientina, além de permitir a retenção dos flavonóides di-C-glicosilados na fase estacionária, facilitando o processo de purificação desses compostos.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química. / Made available in DSpace on 2012-10-24T07:40:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 266273.pdf: 1432106 bytes, checksum: a3a0e6a1397546d97078960a9bc7a55f (MD5) / Um estudo fitoquímico de L. corniculatus foi realizado e biomonitorado através de bioensaios de atividade antioxidante, antibacteriana e anti-inflamatória. O estudo fitoquimico foi efetivado através de sucessivas cromatografias em coluna de sílica gel e monitoradas por cromatografia em camada delgada, sendo as estruturas elucidadas através de técnicas de IV, RMN de 1H e 13C e COSY. A atividade antioxidante in vitro foi avaliada nos modelos como a capacidade sequestrante DPPH, potencial redutor e peroxidação lipídica. O efeito antibacteriano foi avaliado através do método de microdiluição o qual produz a Concentração Inibitória Mínima e a Concentração Bactericida Mínima. Finalmente, o efeito anti-inflamatório de Lotus corniculatus foi analisado no modelo in vivo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos, que é um modelo de inflamação aguda. Foram isolados três compostos: dois terpenos, o ?-sitosterol e o ácido oleanólico e um flavonóide glicosilado canferitrina. Após realizados os ensaios de atividades biológicas, nossos resultados demonstraram que Lotus corniculatus cv. São Gabriel possui importante propriedade antibacteriana e anti-inflamatória. Estes efeitos podem ser atribuídos aos compostos isolados como o ácido oleanolico, ?-sitosterol e principalmente ao canferitrina o qual demonstrou o melhor efeito farmacológico.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-24T10:22:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 267873.pdf: 1341060 bytes, checksum: 8a157ec64201a7f397c63741dc64cf59 (MD5) / O presente estudo avaliou a possível ação antinociceptiva e antiinflamatória do derivado semi-sintético do triterpeno a e ß-amirina: denominado octanoato de a e ß-amirina (OA), em vários modelos experimentais in vivo e in vitro, em ratos e camundongos. O OA quando administrado pela via intraperitoneal (i.p.) (0,0001 - 0,1 mg/kg) ou oral (v.o.) (1 - 30 mg/kg), 30 e 60 min antes do teste, reduziu significativamente as contorções abdominais induzidas pelo ácido acético, com DI50 de 0,003 (0,001-0,005) e 7,15 (5,94-8,60) mg/kg e inibições de 85 ± 5% e 72 ± 9%, para a via i.p. e v.o., respectivamente. Além disso, o OA manteve seu efeito por até 8 h após sua administração i.p. no modelo de ácido acético. O pré-tratamento com OA (0,1 - 30 mg/kg) reduziu significativamente a nocicepção de origem inflamatória em 89 ± 6% e DI50 de 5,36 (3,98-7,23) mg/kg, mas não alterou a nocicepção de origem neurogênica induzidas pela formalina. O OA (0,001-1 mg/kg, i.p.), também reduziu a nocicepção induzida pela administração intraplantar (i.pl.) de glutamato e capsaicina, com DI50 de 0,04 (0,03-0,08) mg/kg e 1,36 (1,12-2,22) mg/kg e inibição de 65 ± 5% e 57 ± 7%, respectivamente. Além disso, o OA (0,1 mg/kg) causou redução da resposta nociceptiva induzida pela administração intratecal (i.t.) de glutamato, substância P e capsaicina, com inibições de 36 ± 1%, 67 ± 1% e 68 ± 1%, respectivamente. Perifericamente, a nocicepção causada pela capsaicina (0,2 nmol/pata, agonista seletivo dos receptores TRPV1) foi parcialmente revertida pela co-administração com OA (1,8 nmol/pata) ou capsazepina (0,2 nmol/pata, antagonista seletivo dos receptores TRPV1) com reversão de 77 ± 5% e 50 ± 4%, respectivamente. No modelo do ácido acético, a antinocicepção causada pelo OA (0,1mg/kg, i.p.) foi revertida pelo pré-tratamento com capsaicina (50 mg/kg, s.c., no período neonatal, depletor de fibras C e Ad que expressam o TRPV1), mas não em animais tratados com toxina Pertussis (1µg/sitio, i.t., inativador da proteína Gi/0), naloxona (1 mg/kg, i.p., antagonista não seletivo dos receptores opióides), PCPA (100 mg/kg, i.p., inibidor da enzima triptofano hidroxilase e depletor de serotonina endógena), ioimbina (0,15 mg/kg, i.p., antagonista seletivo dos receptores a2-adrenérgicos), mecamilamina (2 mg/kg, i.p., antagonista seletivo dos receptores nicotínicos a2ß3) e atropina (1 mg/kg, i.p., antagonista seletivo dos receptores muscarínicos). Além disso, o OA (0,1-1 mg/kg) foi capaz de reverter a hiperalgesia térmica em 76 ± 7% e 91 ± 4% e mecânica em 100% e 91 ± 2%, induzidas pela injeção intraplatar de BK e PMA, respectivamente. Embora, o mesmo tratamento não alterou a hiperalgesia provocada pela PGE2 em ratos. Além disso, o pré-tratamento com OA (3-30 mg/kg) reduziu a nocicepção induzida pela administração intraplantar de PMA (500 pmol/pata) com DI50 de 19,6 (13,5-28,8) mg/kg e inibição de 64 ± 9%. Contudo, não alterou a translocação da PKCe do citosol para a membrana em comparação com animais tratados com veículo. A atividade antiinflamatória foi avaliada no modelo de edema de pata induzido pela carragenina (300 µg/pata), onde foi observado que o pré-tratamento com o OA (0,1 - 10 mg/kg) reduziu significativamente e de forma dependente da dose o edema de pata, além disso, a Indometacina (4 mg/kg, Ind) também reduziu significativamente o edema. Os mesmo tratamentos com o OA e Ind diminuíram a atividade da MPO na pata em 100% e 60 ± 8%, respectivamente e DI50 0,2 (0,05 - 0,45) mg/kg para o OA. Tanto o tratamento sistêmico com OA (10 mg/kg) quanto com Ind (4 mg/kg) reduziram a níveis basais a quantidade de IL-1ß, mas não alteraram a quantidade de TNF-a presentes na pata dos animais que receberam carragenina. No modelo de pleurisia foi observado que o tratamento sistêmico com OA (0,1 - 10 mg/kg) reduziu significativamente e de forma dependente da dose a migração total de leucócitos e polimorfonucleares no líquido pleural e os níveis de MPO no pulmão, com DI50 de 4,5 (2,3 - 9,1), 4,7 (2,6-8,3) e 2,2 (0,3 - 7,2) mg/kg e redução de 57 ± 1%, 72 ± 5% e 95 ± 2%, respectivamente. Embora o mesmo tratamento não tenha alterado o extravasamento plasmático e também a migração de células mononucleares para a cavidade pleural. O tratamento com dexametasona (1 mg/kg, s.c.) também reduziu a migração total de leucócitos, migração de polimorfonuclear, atividade da MPO no pulmão e o extravasamento plasmático, com inibição de 63 ± 8%, 71 ± 1% e 93 ± 3%, 33 ± 7% respectivamente. Em síntese, estes resultados indicam que o OA possui atividade antinociceptiva e antiinflamatória em modelos químicos de dor e inflamação, através de mecanismos que podem envolver a interação com fibras aferentes sensíveis a capsaicina, bem como, pode interagir com outros membros da família da PKC, sem interferir com a PKCe. Além disso, o OA pode estar inibindo direta ou indiretamente a ação, produção ou liberação de mediadores pró-inflamatórios envolvidos na geração da dor e da inflamação.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2011 / Made available in DSpace on 2012-10-26T05:45:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 287671.pdf: 12192705 bytes, checksum: 05f2ab062b5fcd2b7dc7705721b24271 (MD5) / Introdução: O micofenolato de mofetila (MMF) é um fármaco imunossupressor utilizado atualmente na clínica na rejeição de transplantes de órgãos e em algumas doenças auto-imunes, como na uveite e na glomerulonefrite. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório e antioxidante do MMF administrado por via oral, na primeira (4 h) e segunda (48 h) fases da resposta inflamatória induzida pela carragenina (Cg), no modelo da pleurisia, em camundongos. Materiais e Métodos: Neste protocolo experimental foram utilizados camundongos albinos suíços de 1 mês de idade. O modelo experimental utilizado foi o da pleurisia induzida pela Cg, segundo metodologia descrita por Saleh et al. (1996). A inflamação foi avaliada estudando-se alguns parâmetros da resposta inflamatória segundo metodologias já padronizadas e descritas na literatura (leucócitos e a exsudação), atividade das enzimas: mieloperoxidase (MPO), adenosina deaminase (ADA), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), e glutationa S-transferase (GST), superóxido dismutase (SOD), as concentrações de: nitrito/nitrato (NOx) e das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Neste protocolo, também foram estudadas a influência do MMF sobre as concentrações das proteínas e sobre a transcrição do mRNA para o fator de necrose tumoral alfa (TNF-?), interleucina-1 beta (IL-1?), fator de crescimento endotelial vascular alfa (VEGF-?), e interleucina 17A (IL-17A), utilizando-se as metodologias de enzima imunoensaio (ELISA) e a reação da transcriptase reversa, seguida de reação em cadeia da polimerase (RT-PCR). Para a pesquisa da enzima óxido nítrico sintase induzida (ONSi) também foi utilizada a técnica de RT-PCR. Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 h e 48 h após a indução da pleurisia. Como fármacos de referência anti-inflamatória foram utilizados: a dexametasona (Dex, i.p.) e o ibuprofeno (Ibu, v.o.). Em alguns experimentos para avaliar a exsudação, os animais foram tratados 10 minutos antes da aplicação da Cg, com solução de azul de Evans (25 mg/kg, 0,2 mL, i.o.). Para a análise estatística dos resultados foi utilizado o teste paramétrico ANOVA complementado, quando necessário, pelo teste de Dunnett, teste t de Student e teste de correlação de Pearson. Diferençcas com P < 0,05 foram considerados significantes. Resultados: Em ambas as fases (4 h e 48 h) da resposta inflamatória induzida pela Cg, o MMF na dose de 100 mg/kg administrado por via oral (v.o.) inibiu os leucócitos (P < 0,01), a exsudação (P < 0,01), as atividades de: MPO (P < 0,05), ADA (P < 0,01), CAT (P < 0,05), SOD (P < 0,05), GPx (P < 0,01) e GST (P < 0.01), as concentrações de: nitrito/nitrato (ONx) (P < 0,01) e TBARS (P < 0,05). Além disso, o fármaco também inibiu aumento das concentrações e a transcrição do mRNA de: TNF-? (P < 0,01), IL-1? (P < 0,01), VEGF-? (P < 0,01) e IL-17A (P < 0,01), bem como a transcrição da enzima ONSi (P < 0,01). Conclusão: Os resultados demonstraram que o MMF possui importante efeito anti-inflamatório e antioxidante, inibindo mediadores e enzimas que participam da resposta inflamatória no modelo da pleurisia em camundongos. Este efeito parece ocorrer também em nível pré-transcripcional uma vez que o MMF foi capaz de inibir não somente as concentrações de citocinas formadas, mas também a transcrição do mRNA para estas proteínas.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T13:07:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 236388.pdf: 465095 bytes, checksum: 91882f2902b8f7142a4c381bb67ab5f9 (MD5) / Introdução: A espécie Solidago chilensis Meyen, nativa da América do Sul e comumente conhecida como "arnica do Brasil", tem demonstrado importante atividade antifúngica, antioxidante e antimicrobiana. No entanto, existem poucos estudos em relação a sua atividade antiinflamatória.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2015-10-06T04:08:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 334652.pdf: 2332207 bytes, checksum: 62dc21cc8905637d24312db23ad9addf (MD5) Previous issue date: 2015 / A planta Polygala sabulosa A.W. Bennett, popularmente conhecida como  timutu-pinheirinho , é uma planta característica da zona de campos do planalto catarinense e é tradicionalmente utilizada para tratar afecções dos rins, intestino e pulmões. O objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito anti-inflamatório desta espécie e analisar o provável mecanismo de ação de seu composto majoritário, no modelo de pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Com este objetivo, o material vegetal foi submetido a extração por maceração com etanol 96% a temperatura ambiente por 7 dias para obtenção do extrato bruto hidroalcoólico (EBH). O EBH foi então submetido a extração sólido-líquido com solventes de diferentes polaridades para obtenção de três diferentes frações, sendo elas: fração hexânica (Hex), fração acetonica (Ac) e fração metanólica (MeOH). O composto 7-preniloxi-6-metoxicumarina (PC) foi isolado da fração Ac, identificado comparando-se dados de RMN H1 e C13 com literatura já publicada e quantificado através de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-DAD). Para avaliação do efeito anti-inflamatório desta espécie foi realizada a quantificação de leucócitos totais e neutrófilos, além da quantificação de exsudato na cavidade pleural. Além disso, técnicas padronizadas descritas na literatura foram empregadas com intuito de verificar o efeito da P. sabulosa sobre a atividade das enzimas mieloperoxidase (MPO) e adenosina-deaminase (ADA) e sobre as concentrações de metabólitos do óxido nítrico (NOx), e das citocinas pró-inflamatórias: fator necrose tumoral alpha (TNF-a) e interleucina 1 beta (IL-1ß). Com intuito de propor o mecanismo de ação do composto majoritário desta espécie, a atividade da PC foi avaliada sobre a expressão de mRNA das citocinas TNF-a, IL-1ß e da enzima oxido nítrico sintase induzida (iNOS), além de sua capacidade inibitória sobre a fosforilação da subunidade p65 do fator nuclear kappa B (NF-?B) e da proteína quinase induzida por mitógeno p38 (p38 MAPK). Todos os paramêtros inflamatórios foram avaliados 4 horas após a indução da pleurisia. Em todos os experimentos realizados a dexametasona (Dex 0,5 mg/kg, i.p.) foi utilizada como fármaco de referência anti-inflamatória. Para análise estatística dos resultados utilizou-se o teste de análise variância ANOVA, complementados pelo pós teste Newman-Keuls. Valores de p < 0,05 foram considerados significativos. O EBH, as frações Hex, Ac e MeOH e o composto isolado PC foram capazes de reduzir a migração leucocitária para a cavidade pleural às custas da inibição de netrófilos, além da exsudação (p < 0,05). Com exceção do EBH que não foi capaz de inibir a exsudação em nenhuma das doses testadas (p > 0.05). Ainda, o EBH, frações e a PC inibiram de forma significativa as atividades da MPO (p < 0,01) e ADA (p < 0,01), e as concentrações de NOx (p < 0,01), além das citocinas TNF-a (p < 0,01) e IL-1ß (p < 0,01). Já o composto isolado PC foi capaz de reduzir a expressão de mRNA do TNF-a (p < 0,01), IL-1ß (p < 0,01) e iNOS (p < 0,01) quando comparado ao grupo Cg. Finalmente, o composto PC ainda inibiu significativamente a fosforilação da subunidade p65 do NF-?B (p < 0,01) e a fosforilação da p38 MAPK (p < 0,05). Os resultados do presente estudo demonstraram que a P. sabulosa possui atividade anti-inflamatória importante e este efeito pode ser, ao menos em parte, atribuído a seu composto majoritário que demonstrou atividade inibitória sobre duas importantes cascatas de sinalização do processo inflamatório deflagrado pela carragenina, o NF-?B e a p38 MAPK.<br> / Abstract : Polygala sabulosa A.W. Bennett, popularly known as "timutupinheirinho", is a characteristic species of the field area of Santa Catarina plateau and is traditionally used to treat diseases of the kidneys, intestines and lungs. The objective of this study was to investigate the antiinflammatory effect of this species and analyze the likely mechanism of action of its major compound in the pleurisy model induced by carrageenan in mice. To this end, the plant material was subjected to extraction by maceration with 96% ethanol at room temperature for 7 days to obtain the crude hydroalcoholic extract (CE). The CE was then subjected to solid-liquid extraction with solvents of different polarities to obtain three different fractions, namely: hexane fraction (Hex) acetonic fraction (Ac) and methanol fraction (MeOH). The compound 7- prenyloxi-6-methoxycoumarin (PC) was isolated from the Ac fraction, identified by comparing data from NMR H1 and C13 with published literature and quantified by high performance liquid chromatography (HPLC-DAD). To evaluate the anti-inflammatory effect of this species the quantification of total leukocytes and neutrophils, in addition to the quantification of exudate in the pleural cavity were performed. In addition, standard techniques described in the literature were used in order to verify the effect of P. sabulosa upon the activity of the enzymes myeloperoxidase (MPO) and adenosine-deaminase (ADA), upon the nitric oxide metabolites concentrations (NOx), and pro-inflammatory cytokines: tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and interleukin 1 beta (IL-1ß). With intention to propose the mechanism of action of the major compound of this species, the PC activity was evaluated upon the mRNA expression of TNF-a, IL-1ß and inducible nitric oxide synthase (iNOS), and its inhibitory ability upon the phosphorylation of the p65 subunit of nuclear factor kappa B (NF-kB) and the protein kinase-induced p38 mitogen (p38 MAPK). All inflammatory parameters were assessed 4 hours after pleurisy induction. In all of these work procedures, dexamethasone (Dex 0.5 mg / kg, ip) was used as anti-inflammatory reference drug. For statistical analysis, we used the analysis of variance (ANOVA) followed by Newman-Keuls post-hoc test. p values <0.05 were considered significant. The CE, Hex, Ac and MeOH fractions and the isolated compound, PC, were capable of reducing leukocyte migration into the pleural cavity due the inhibition of neutrophils, besides the exudation (p <0.05). With the exception of CE that was not able to inhibit exudation in any of the tested doses (p> 0.05). Further, the CE, fractions and PC significantly inhibited MPO (p <0.01) and ADA (p <0.01) activities and NOx concentrations (p <0.01), also the cytokines TNF-a (p <0.01) and IL-1ß (p <0.01). The isolated compound PC was able to inhibit mRNA expression of TNF-a (p <0.01), IL-1ß (p <0.01) and iNOS (p <0.01). Finally, the PC compound significantly inhibited the phosphorylation of the p65 subunit of NF-kB (p <0.01) and p38 MAPK (p <0.05). The results of this study showed that P. sabulosa has important anti-inflammatory activity and this effect may be, at least in part, attributed to its major compound that shown inhibitory activity against two important signaling cascades in the inflammatory process produced by carrageenan, the NF-?B and p38 MAPK.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia. / Made available in DSpace on 2013-06-25T23:37:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 309184.pdf: 1389961 bytes, checksum: 11ce101304d70bd3f221ddb90fd319b3 (MD5) / Introdução: O gênero Esenbeckia (Rutaceae) compreende cerca de 30 espécies, sendo característico de regiões tropicais. A espécie Esenbeckia leiocarpa Engl. é conhecida popularmente no Brasil como guarantã, pau-duro, goiabeira ou guarataia. Espécies pertencentes ao gênero Esenbeckia têm sido utilizadas no tratamento de febre e/ou da malária por indivíduos da região amazônica. Estudos in vitro e in vivo já demonstraram que espécies do gênero Esenbeckia possuem importantes ações farmacológicas, como atividade anticolinesterásica, antimalárica, anti-helmíntica e antimicrobiana. Objetivos: Estudar o efeito e o mecanismo de ação anti-inflamatória do extrato bruto hidroalcoólico (EBH), frações, subfrações e compostos isolados da Esenbeckia leiocarpa Engl. utilizando modelos experimentais in vivo e in vitro. Materiais e Métodos: O efeito do EBH, frações n-hexano (Hex), acetato de etila (AcOEt) ou alcaloide (Alc), subfrações polar (Pol) e apolar (Apol), ou dos compostos di-hidrocorinanteol (DHC) e beta-sitosterol ( -Sit) isolados do EBH foram investigados sobre migração de leucócitos, exsudação, mieloperoxidase (MPO), adenosina-desaminase (ADA), nitrato/nitrito (NOx), interleucina-1 beta (IL-1 ), fator de necrose tumoral-alfa (TNF- ) e proteína inibitória kappa B-alfa (I B- ) na inflamação induzida pela carragenina (Cg) no modelo da bolsa de ar, em camundongos. Ainda, o mecanismo de ação anti-inflamatória exercido pelo EBH, fração Alc e composto DHC foram avaliados sobre a apoptose de neutrófilos humanos, bem como sobre a adesão celular e diferentes funções neutrofílicas, como: fagocitose, degranulação, produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) e citocinas/quimiocinas. Ainda, foi avaliado o efeito do -Sit sobre a captação de cálcio (Ca2+). Resultados: EBH, Alc, Pol, Apol, DHC e -Sit, foram efetivos em inibir a migração de leucócitos, a exsudação e as concentrações de MPO, ADA, NOx, IL-1 e TNF- (P < 0,05). As frações Hex e AcOEt inibiram todos os parâmetros inflamatórios estudados, exceto a exsudação. O composto DHC inibiu a degradação da proteína inibitória I B- . Ainda, EBH, Alc e DHC induziram a apoptose de neutrófilos humanos, quando comparados à apoptose espontânea (AE) (P < 0,05). EBH e Alc, mas não o DHC promoveram aumento significativo, tanto da fagocitose como do processo de adesão celular dos neutrófilos a células A549 (P < 0,05). EBH e Alc promoveram a degranulação, tanto de vesículas secretórias como de grânulos específicos/de gelatinase dos neutrófilos (P < 0,05). EBH, Alc e DHC promoveram também a degranulação de grânulos azurófilos de neutrófilos (P < 0,01). EBH, Alc e DHC inibiram significativamente a produção de EROs, assim como a produção de citocinas/quimiocinas, como interleucina-6 (IL-6), proteína inflamatória de macrófagos-1 alfa (MIP-1 ), proteína inflamatória de macrófagos-1 beta (MIP-1 ) e oncogene-alfa relacionado ao crescimento (GRO- ) por neutrófilos ativados. -Sit promoveu aumento significativo na captação de Ca2+ de forma tempo- e concentração-dependente em neutrófilos ativados, que foi prontamente inibido pela nifedipina, BAPTA-AM, LY294002 e colchicina (P < 0,05). Conclusão: Este estudo demonstrou que a Esenbeckia leiocarpa Engl. possui potente efeito anti-inflamatório. Este efeito parece estar relacionado à inibição da migração de leucócitos, essencialmente de neutrófilos ativados, uma vez que a planta promoveu a degranulação destas células, inibiu as concentrações de enzimas relacionadas à atividade neutrofílica (MPO e ADA), assim como a produção de EROs, aumentou a adesão e a fagocitose, além de induzir a apoptose de neutrófilos. Ainda, o material vegetal inibiu a exsudação, efeito este relacionado também à inibição das concentrações de .NO e de citocinas/quimiocinas de caráter pró-inflamatório: IL-1 , TNF- , IL-6, MIP-1 e MIP-1 e GRO- . O DHC parece ser um dos responsáveis pelo efeito observado, uma vez que também demonstrou efeito anti-inflamatório por meio da inibição da migração de leucócitos, enzimas e citocinas/quimiocinas pró-inflamatórias, além de inibir a ativação do NF- B. Ainda, o -Sit foi efetivo em inibir a resposta inflamatória de forma dependente da captação de Ca2+. / Introduction: The genus Esenbeckia (Rutaceae) includes about 30 species, and is characteristic from tropical regions. Esenbeckia leiocarpa Engl. is popularly known in Brazil as "guarantã", "pau-duro", "goiabeira" or "guarataia". Esenbeckia species have been used for treatment of fever and/or malaria by inhabitants of Brazilian amazon region. In vitro and in vivo studies have already demonstrated that Esenbeckia species have important pharmacological actions, such as anticholinesterasic, antimalaric, anthelmintic and antimicrobial activities. Objectives: The aim of this work was to evaluate the effect, as well as the mechanism of anti-inflammatory action of the crude hydroalcoholic extract (CHE), fractions, subfractions, and isolated compounds from Esenbeckia leiocarpa Engl. using in vivo and in vitro models. Materials and Methods: The effect of CHE, fractions n-hexane (Hex), ethyl acetate (AcOEt), and alkaloid (Alk), subfractions polar (Pol) and nonpolar (Nonpol), or isolated compounds dihydrocorynantheol (DHC) and beta-sitosterol (?-Sit) isolated from CHE upon leukocyte migration, exudation, myeloperoxidase (MPO) adenosine-deaminase (ADA), nitrate/nitrite (NOx), interleukin-1 beta (IL-1?), tumour necrosis factor-alpha (TNF-?), and inhibitory kappa-B-alpha protein (I B- ) degradation in the inflammation induced by carrageenan (Cg) in the mouse air pouch model were investigated. Also, the mechanism of anti-inflammatory action of CHE, Alk and DHC on apoptosis of human neutrophil, as well as cell adhesion, and different neutrophil functions, such as: phagocytosis, degranulation, reactive oxygen species (ROS) and cytokines/chemokines production were evaluated. Also, the effect of -Sit on the calcium (Ca2+) uptake was evaluated. Results: The CHE, Alk, Pol, Nonpol, DHC and ?-Sit, inhibited leukocytes, exudation, MPO, ADA, NOx, IL-1?, and TNF-? (P < 0.05). The Hex and AcOEt fractions inhibited all of the proinflammatory parameters, except for the exudation. The compound DHC prevented the I B- degradation. Also, CHE, Alk, and DHC accelerated the spontaneous apoptosis of human neutrophils (P < 0.05). CHE and Alk, but not DHC also increased both the phagocytosis and the adhesion exerted by neutrophils onto A549 cells (P < 0.05). CHE and Alk also promoted the degranulation of secretory vesicles and specific/gelatinase granules (P < 0.05). Also, CHE, Alk and DHC induced the degranulation of azurophilic granules (P < 0.01). Moreover, CHE, Alk and DHC significantly inhibited the ROS production, as well as the production of cytokines/chemokines, such as interleukin-6 (IL-6), macrophage inflammatory protein-1 alpha (MIP-1 ), macrophage inflammatory protein-1 beta (MIP-1 ), and growth-related oncogene-alpha (GRO- ) by activated neutrophils. -Sit promoted a time- and dose-dependent increase of the calcium uptake in activated neutrophils that was promptly reversed by nifedipine, BAPTA-AM, LY294002, and colchicine (P < 0.05). Conclusion: This study showed that Esenbeckia leiocarpa Engl. has a potential anti-inflammatory effect. Such effect seems to be related to the inhibition of leukocyte migration, essentially activated neutrophils, since this herb promoted the degranulation on these cells, and inhibited the concentration of enzymes related to neutrophil activity (MPO and ADA), as well as the ROS production. It also increased both the phagocytosis and adhesion, besides inducing neutrophil apoptosis. Esenbeckia leiocarpa Engl. also inhibited the exudation, in a process related to the inhibition of .NO concentrations, as well as concentrations of proinflammatory cytokines/chemokines: IL-1 , TNF- , IL-6, MIP-1 e MIP-1 e GRO- . DHC seems to be one of the most responsible for this effect, since it also showed an anti-inflammatory effect by inhibiting leukocyte migration, enzymes and pro-inflammatory cytokines/chemokines, besides inhibiting NF- B activation. Also, -Sit was effective in inhibiting the inflammatory response in a Ca2+ uptake-dependent manner.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2012 / Made available in DSpace on 2013-06-26T00:21:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 313319.pdf: 2559033 bytes, checksum: e7f1152cdbe5cf86b55da1feecfe3a6b (MD5) / Introdução: O gênero Esenbeckia (Rutaceae) compreende aproximadamente 30 espécies identificadas, nativas de regiões tropicais, tais como México e Brasil, incluindo principalmente os Estados brasileiros de São Paulo, Bahia, Minas Gerias, Goiás e Mato Grosso do Sul. Estudos in vivo e in vitro demonstraram que plantas deste gênero apresentam propriedades anti-inflamatórias. Objetivos: Avaliar o efeito anti-inflamatório do extrato bruto hidroalcoólico (EBH), frações e compostos isolados da Esenbeckia leiocarpa Engl., administrada por via intraperitoneal (i.p.), no modelo da pleurisia induzida pela carragenina em camundongos. Metodologia: As cascas secas da E. leiocarpa Engl. foram maceradas e extraídas com etanol para obter o EBH. A partir deste extrato, foram obtidas as frações n-hexano (Hex), acetato de etila (AcOEt), aquosa (Aq) e alcaloídica (Alc), sendo que esta última fração foi extraída com éter etílico originando duas subfrações: uma alcaloídica polar (AlcP) e outra apolar (AlcAp). O composto majoritário, o alcaloide indólico dihidrocorinanteol (DHC), foi isolado da subfração AlcAp. No protocolo para identificar e elucidar a estrutura do composto majoritário presente na E. leiocarpa Engl., foram utilizadas análises de eletroforese capilar, características físicas, infravermelho, ressonância magnética nuclear (RMN de 1H e 13C) e espectrometria de massas. Em outro protocolo, o composto isolado identificado foi modificado por reações de substituição nucleofílica, originando os análogos acetil, p-metil, benzoil, p-metoxi e p-cloro, que foram utilizados em um estudo de relação estrutura-atividade, avaliando-se o efeito destes compostos sobre leucócitos, exsudação e atividade da enzima mieloperoxidase (MPO). No modelo da pleurisia induzida pela carragenina, foram utilizados camundongos albinos Swiss e foram avaliados os seguintes parâmetros inflamatórios no lavado da cavidade pleural: leucócitos, exsudação, atividades das enzimas MPO e adenosina-deaminase (ADA), e as concentrações de nitrito/nitrato (NOx), interleucina 1-beta (IL-1?) e fator de necrose tumoral-alfa (TNF-?). Neste estudo, diferentes grupos de animais foram tratados com EBH (10 - 100 mg/kg), Hex (10 - 50 mg/kg), AcOEt (10 - 50 mg/kg), Aq (2 - 10 mg/kg), Alc (1 - 10 mg/kg), AlcP (0,5 - 5 mg/kg), AclAp (0,1 - 2 mg/kg) ou DHC (0,1 - 0,5 mg/kg), administrados (i.p.) 0,5 h antes da carragenina (1%) administrada por via intrapleural (i.pl.). Os parâmetros inflamatórios foram avaliados 4 h após. Para avaliar a exsudação, os animais foram tratados previamente com solução Azul de Evans (25 mg/kg, i.v.). Diferenças estatísticas entre os grupos foram determinadas pela análise dos testes de variância (ANOVA), Newman-Keuls e/ou t de Student. Valores de P < 0,05 foram considerados significativos. Além disso, realizou-se também o estudo de toxicidade do EBH por meio da análise da curva de sobrevida. Neste estudo, diferentes grupos de animais receberam diferentes doses do EBH (250 mg/kg, 500 mg/kg e 1000 mg/kg, i.p.) e o número de óbitos foi observado diariamente, durante dez dias. Resultados: EBH da E. leiocarpa Engl. (25 - 100 mg/kg), Hex (25 - 50 mg/kg), AcOEt (25 - 50 mg/kg), Aq (5 - 10 mg/kg), Alc (5 - 10 mg/kg), AlcP (1 - 5 mg/kg), AlcAp (0,5 - 2 mg/kg) e DHC (0,25 - 0,5 mg/kg) inibiram: leucócitos, neutrófilos, mononucleares e exsudação (P < 0,05). Da mesma forma, EBH (25 mg/kg), Hex (50 mg/kg), AcOEt (50 mg/kg), Aq (5 ou 10 mg/kg), Alc (10 mg/kg), AlcP (1 ou 2 mg/kg), AlcAp (0,5 mg/kg) e DHC (0,25 mg/kg) inibiram as atividades das enzimas MPO e ADA, além das concentrações de NOx, IL-1? e TNF-? (P < 0,05). Em relação à toxicidade, observou-se que a dose de 250 mg/kg demonstrou-se segura, pois resultou em 100% de sobrevida dos animais após 10 dias de observação, enquanto que nas doses de 500 e 1000 mg/kg todos os animais morreram no primeiro dia. Observou-se também que o composto DHC apresentou melhor efeito anti-inflamatório do que seus análogos: acetil, p-metil, benzoil, p-metoxi e p-cloro, uma vez que somente o DHC inibiu ambos os parâmetros inflamatórios estudados: leucócitos e exsudação (P < 0,01). Além disso, os análogos do DHC inibiram a atividade da MPO (P < 0,01). Conclusões: Os resultados demonstraram que: 1) E. leiocarpa Engl. possui importante atividade anti-inflamatória; 2) este efeito ocorre principalmente em relação à inibição da migração leucocitária e da exsudação; 3) a inibição destes parâmetros inflamatórios está relacionada também à inibição de NOx, IL-1? e TNF-?; 4) a inibição da atividade da MPO e ADA está relacionada a diminuição de leucócitos ativados; 5) as doses utilizadas nos experimentos parecem ser seguras; 6) o DHC foi mais efetivo do que os seus análogos neste modelo de inflamação, e as alterações físico-químicas promovidas no DHC, após a inserção dos substituintes acetil, p-metilbenzoil, benzoil, p-metoxibenzoil e p-clorobenzoil na hidroxila do carbono 17, determinam a efetividade do efeito anti-inflamatório.<br> / Abstract : Introduction: Esenbeckia genus (Rutaceae) includes approximately 30 species native from tropical regions such as Mexico and Brazil, mainly in the Brazilian states of Sao Paulo, Bahia, Minas Gerais, Goias and Mato Grosso do Sul. Studies using in vivo and in vitro models have demonstrated that plants of this genus have anti-inflammatory properties. Objectives: To evaluate the anti-inflammatory effect of the crude hydroalcoholic extract (CHE), fractions and compounds isolated from Esenbeckia leiocarpa Engl., administered intraperitoneally (i.p.) in the carrageenan-induced murine model of pleurisy. Methodology: The dried E. leiocarpa Engl. bark was macerated and extracted with ethanol to obtain the CHE. The n-hexane (Hex), ethyl acetate (AcOEt), aqueous (Aq) and alkaloids (Alk) fractions were obtained from CHE, and two alkaloid subfractions, polar (polar Alk) and nonpolar (nonpolar Alk) were obtained from the Alk fraction using an ethyl ether extraction. The major compound, the indole alkaloid dihydrocorinantheol (DHC) was isolated from nonpolar Alk subfraction. Analysis of capillary electrophoresis, physical characteristics, infrared, nuclear magnetic resonance (1H and 13C NMR) and mass spectrometry were used to identify and elucidate the structure of the major compound present in the E. leiocarpa Engl. In another protocol, the isolated compound was subjected to chemical structural modifications by nucleophilic substitution reactions to develop the acetyl, p-methyl, benzoyl, p-methoxy and p-chloro analogs, which were used in a study of structure-activity relationships to evaluate the effect of these compounds upon leucocytes and exudation concentrations and myeloperoxidase (MPO) activity. Swiss mice were used in the carrageenan-induced murine model of pleurisy and the following inflammatory parameters were evaluated the fluid of the pleural cavity: leukocytes, exudation, MPO and adenosine deaminase (ADA) activities, and the concentrations of nitrite/nitrate (NOx), interleukin-1 beta (IL-1â) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-á). In this study, different groups of animals were pretreated with CHE (10 - 100 mg/kg), Hex (10 - 50 mg/kg), AcOEt (10 - 50 mg/kg), Aq (2 - 10 mg/kg), Alk (1 - 10 mg/kg), polar Alk (0.5 - 5 mg/kg), nonpolar Alk (0.1 - 2 mg/kg) or DHC (0.1 - 0.5 mg/kg) administered (i.p.) 0.5 h before carrageenan (1%) which was administered by intrapleural route (i.pl.). The inflammatory parameters were evaluated after 4 h. To evaluate the exudation, the animals were pretreated with Evans blue dye (25 mg/kg, i.v.). Statistical differences between groups were determined by analysis of variance test (ANOVA), Newman-Keuls and/or Student#s t test. P < 0.05 was considered significant. Further, the toxicity study of CHE we performed by analyzing the survival curve. In this study, different groups of animals received different doses of EBH (250 mg/kg, 500 mg/kg and 1000 mg/kg, i.p.) and the number of deaths was observed daily for 10 days. Results: CHE (25 - 100 mg/kg), Hex (25 - 50 mg/kg), AcOEt (25 - 50 mg/kg), Aq (5 - 10 mg/kg), Alk (5 - 10 mg/kg), polar Alk (1 - 5 mg/kg), nonpolar Alk (0.5 - 2 mg/kg) and DHC (0.25 - 0.5 mg/kg) inhibited leukocytes, neutrophils, mononuclears and exudation (P < 0.05). Also, CHE (25 mg/kg), Hex (50 mg/kg), AcOEt (50 mg/kg), Aq (5 or 10 mg/kg), Alc (10 mg/kg), polar Alk (1 or 2 mg/kg), nonpolar Alk (0.5 mg/kg) and DHC (0.25 mg/kg) inhibited the MPO and ADA activities, and the concentrations of NOx, IL-1â and TNF-á (P < 0.05). In relation to toxicity, it was observed that the dose of 250 mg/kg of CHE was safe because its administration resulted in 100% survival of the animals after 10 days, whereas at the doses of 500 mg/kg and 1000 mg/kg all animals died in the first day of observation. Furthermore, the DHC alkaloid showed better anti-inflammatory effect than its analogs: acetyl, p-methyl, benzoyl, p-methoxy and p-chloro, because only the DHC inhibits both studied inflammatory parameters: leukocytes and exudation concentrations (P < 0.01). Further, the DHC analogs inhibited MPO activity (P < 0.01). Conclusions: The results showed that: 1) E. leiocarpa Engl. has important anti-inflammatory activity; 2) this effect occurs mainly in relation to inhibition of leukocyte migration and exudation concentrations; 3) the Inhibition of these inflammatory parameters is also related to NOx, IL-1â and TNF-á inhibition; 4) the inhibition of MPO and ADA activities are associated with decrease of activated leukocytes; 5) the doses used in the experiments of this study appear to be safe; 6) DHC was more effective than its analogs in this model of inflammation, and the physicochemical modifications in the DHC after insertion of the acetyl, p-methylbenzoyl, benzoyl, p-methoxybenzoyl and p-chlorobenzoyl substituents radicals on the hydroxyl group at carbon 17 determine the effectiveness of the anti-inflammatory action.