O objetivo deste estudo foi analisar o papel do polimorfismo de I/D do gene da Enzima Conversora de Angiotensina (ECA) e o polimorfismo K121Q da PC-1 nas modificações das taxas de filtração glomerular (TFG), excreção urinária de albumina (EUA) e pressão arterial em uma coorte de pacientes diabéticos tipo 1 normoalbuminúricos (EUA<20μg/min) em um estudo com seguimento de 10,2 ± 2,0anos (6,5 a 13,3 anos). A EUA (imunoturbidimetria), TFG (técnica da injeção única de 51Cr-EDTA), HbA1c (cromatografia de troca iônica) e pressão arterial foram medidas no início do estudo e a intervalos de 1,7 ± 0,6 anos. O polimorfismo I/D e K121Q foram determinados através da PCR e restrição enzimática. Onze pacientes apresentaram o genótipo II, 13 o ID e 6 apresentaram o genótipo DD. Pacientes com o alelo D (ID/DD) desenvolveram mais freqüentemente hipertensão arterial e retinopatia diabética. Os 3 pacientes do estudo que desenvolveram nefropatia diabética apresentaram o alelo D. Nos pacientes ID/DD (n=19) ocorreu maior redução da TFG quando comparados com os pacientes II (n=11) (-0,39 ± 0,29 vs – 0,12 ± 0,37 ml/min/mês; P=0,035). A presença do alelo D, em análise de regressão múltipla linear (R2=0,15; F=4,92; P=0,035) foi o único fator associado à redução da TFG (-0,29 ± 0,34 ml/min/mês; P<0,05). Já o aumento da EUA (log EUA = 0,0275 ± 0,042 μg/min/mês; P=0,002) foi associado somente aos níveis iniciais de EUA (R2=0,17; F=5,72; P=0,024). Um aumento significativo (P<0,05) no desenvolvimento de hipertensão arterial e de novos casos de retinopatia diabética foi observado somente nos pacientes com os genótipos ID/DD. Vinte e dois pacientes apresentaram genótipo KK, 7 KQ e 1 apresentou genótipo QQ. Pacientes com os genótipos KQ/QQ apresentaram um aumento significativo (P=0,045) de novos casos de retinopatia diabética. Em conclusão a presença do alelo D nesta amostra de pacientes DM tipo 1 normoalbuminúricos e normotensos está associada com aumento na proporção de complicações microvasculares e hipertensão arterial. / The aim of this study was to analyze the role of the ACE gene insertion/deletion (I/D) polymorphisms and of the PC-1 gene K121Q polymorphism in the changes of glomerular filtration rate (GFR), urinary albumin excretion rate (UAER), and blood pressure levels in a cohort of normoalbuminuric type 1 diabetic patients. This was a 10.2 ± 2.0 year prospective study of 30 normotensive normoalbuminuric type 1 diabetic patients. UAER (immunoturbidimetry), GFR (51Cr-EDTA single injection technique), GHb (ion-exchange chromatography) and blood pressure levels were measured at baseline and at 1.7 ± 0.6 year intervals. The presence of ACE gene I/D and PC-1 gene K121Q polymorphisms was determined by polymerase chain reaction and restriction enzyme techniques. Eleven patients was a II genotype, 13 the ID and 6 was the DD genotype. Three patients developed diabetic nephropathy; all were carriers of allele D of the ACE gene. The presence of allele D was the only predictor (R2=0.15; F=4.92; P=0.035) of the observed GFR decline (-0.29 ± 0.34 ml/min/month; P<0.05). UAER increased during the study (log UAER change = 0.0275 ± 0.042 μg/min/month; P=0.002) and was associated with baseline UAER levels only (R2=0.17; F=5.72; P=0.024). A significant increase (P<0.05) in cases of hypertension and new cases of retinopathy were observed only ID/DD and not in II patients. Twenty-two patients was KK genotype, 7 the KQ and 1 was the QQ genotype. Patients with the KQ/QQ (n=8) presented a significant increase (P=0.045) in new cases of retinopathy. In conclusion the presence of D allele of ACE gene in this sample of normoalbuminuric normotensive type 1 diabetes patients was associated with a higher proportion of microvascular complications and hypertension.

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / O H. pylori infecta atualmente metade da populaÃÃo mundial e à relacionado com o desenvolvimento das afecÃÃes gÃstricas. O Enteroteste à um mÃtodo minimamente invasivo que pode ser usado para detecÃÃo do H. pylori por meio nÃo endoscÃpico. O objetivo deste estudo foi avaliar a sensibilidade e especificidade do Enteroteste frente ao Teste RespiratÃrio e estudar o perfil genÃtico das cepas de H. pylori em indivÃduos residentes na comunidade Parque UniversitÃrio. O suco gÃstrico foi colhido a partir do Enteroteste, e realizada a cultura e a extraÃÃo do DNA do H. pylori. A genotipagem das cepas foi realizada atravÃs da tÃcnica de PCR e os sÃtios de fosforilaÃÃo EPIYA de sequenciamento Participaram do estudo 50 indivÃduos, 43 positivos e 7 negativos para a infecÃÃo pelo H. pylori atravÃs do Teste RespiratÃrio. A cultura e o PCR a partir do Enteroteste apresentaram sensibilidade de 86% e 77%, respectivamente, com especificidade de 100% em ambos os mÃtodos 33 cepas foram genotipadas como vacA positivas, sendo 39,4% vacA s1m1; 15,2% vacA s1m2; 18,2% vacA s2m2 27,2% com perfil vacA s com ausÃncia do alelo m. Foram cagA positivas 66,6% das cepas sendo 54,5% com perfil EPIYA-ABC, 41,0% EPIYA-ABCC e 4,5% EPIYA-AB. O Enteroteste mostrou-se um mÃtodo confiÃvel com boa sensibilidade e especificidade para identificaÃÃo do H. pylori atravÃs do cultivo e da tÃcnica de PCR. A maioria das cepas expressou o alelo vacA s1, com predomÃnio do subtipo s1b e da combinaÃÃo alÃlica s1m1. Mais da metade das cepas estudadas expressaram o gene cagA e a maioria dessas cepas tinham 3 ou 4 sÃtios de fosforilaÃÃo, com perfil EPIYA-ABC ou EPIYA-ABCC. O perfil genÃtico apresentado por essas cepas à o descrito para a AmÃrica do Sul e diferente do padrÃo AsiÃtico, a maioria das cepas circulantes na comunidade tÃm importante potencial patogÃnico. O Enteroteste à um mÃtodo seguro, sensÃvel e especÃfico para detecÃÃo do H. pylori. / The H. pylori infect currently half of the worldâs population and is related to the development of gastric disorders. The Enterotest is a minimally invasive method that can be used for detection of H. pylori through endoscopic not. The objective of this study was to evaluate the sensitivity and specificity of Enterotest opposite the Respiratory Testing and studying the genetic profile of strains of H. pylori individuals resident in the Community College Park. The gastric juice was collected from Enteroteste, and held the culture and the extraction of DNA from H. pylori. The genotyping of strains was carried out by the PCR technique and phosphorylation sites EPIYA sequencing participated in the study 50 individuals, positive and negative 7 43 for infection H. pylori through Respiratory Test. Culture and PCR from Enteroteste showed sensitivity of 86% and 77%, respectively, with 100% specificity in both methods. 33 strains were positive, genotipadas as Cow being 39.4% Cow s1m1; 15.2% Cow s1m2; 18.2% Cow s2m2 27.2% with Cow s profile with absence of allele m. Were positive 66.6% Bran of strains being profiled 54.5% EPIYA-ABC, 41.0% EPIYA-ABCC and 4.5% EPIYA-AB. The Enterotest proved to be a reliable method with great sensitivity and specificity for identification of H. pylori through cultivation and PCR technique. Most strains expressed alelo Cow s1, with a predominance of subtype s1b and allele combination s1m1. More than half of the studied strains expressed gene Shit and most of these strains were 3 or 4, phosphorylation sites profiled EPIYA-ABC or EPIYA-ABCC. The genetic profile presented by these strains is described for South America and nonstandard Asia, most strains circulating in the community have important potential pathogenic. The Enterotest is a safe method, sensitive and specific detection of H. pylori.

Orientador: Erick da Cruz Castelli / Resumo: O Complexo HLA (Human Leukocyte Antigen Complex) é a região mais variável do genoma humano. O gene HLA-A é o segundo mais polimórfico do grupo e responsável por codificar moléculas envolvidas no processo de apresentação antigênica e modulação das células NK (Natural Killer). Diversos estudos avaliaram a variabilidade do gene HLA-A em populações mundiais. No entanto, estes estudos focaram-se principalmente na variabilidade dos éxons, ignorando a variabilidade de íntrons e regiões regulatórias. A variabilidade do gene HLA-A é particularmente elevada no segmento que codifica a fenda de ligação a peptídeos (éxons 2 e 3), relacionado com a função de apresentação antigênica e alvo de seleção balanceadora. No presente estudo avaliamos a diversidade genética do gene HLA-A considerando um segmento contínuo que compreende o promotor estendido (1.5 Kb upstream do primeiro ATG traduzido), todos os éxons (incluindo a região 3’ não-traduzida) e íntrons por meio de sequenciamento paralelo massivo. As estratégias computacionais empregadas no estudo utilizam-se de programas de livre acesso ou desenvolvidos localmente, viabilizando um mapeamento adequado das sequências produzidas e a genotipagem/haplotipagem para genes HLA. A variabilidade detectada para o gene HLA-A em uma amostra brasileira demonstrou que os segmentos regulatórios apresentam poucas sequências diferentes, porém as sequências existentes são bastante divergentes entre si. As variantes regulatórias apresentam alto desequilíbrio ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: HLA-A is the second most polymorphic loci at the Human Leucocyte Antigen (HLA) complex and encodes a key molecule for antigen presentation and NK cell modulation. Many studies have evaluated HLA-A variability in worldwide populations focusing mainly on exons, and the regulatory segments are poorly characterized. HLA-A variability is particularly high at the segment encoding the peptide-binding groove (exons 2 and 3), which is probably related to their antigen presentation function and balancing selection acting at these segments. Here we evaluate the variability and haplotypes of the HLA-A gene considering a continuous segment encompassing the extended promoter (1.5 Kb upstream the first translated ATG), all exons and introns, and the entire 3’ untranslated region, by using massively parallel sequencing. To achieve this goal, we used a freely available bioinformatics workflow that optimizes read mapping for HLA genes and defined haplotypes using either the phase among variable sites observed directly in sequencing data or probabilistic models. The HLA-A variability detected in a highly admixed population sample from Brazil demonstrates that the HLA-A regulatory segments present few, but divergent haplotypes. The regulatory segments are in close association with the coding alleles. Introns segments are also quite variable. In addition, patterns of molecular diversity suggest that the promoter, in addition to the coding region, might be under the same selective regime, but a di... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-11T16:43:01Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_InvestigacaoPolimorfismosGenes.pdf: 2189382 bytes, checksum: c2c98617b43c03be9d1706ad6571449a (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-04-03T15:40:43Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_InvestigacaoPolimorfismosGenes.pdf: 2189382 bytes, checksum: c2c98617b43c03be9d1706ad6571449a (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-03T15:40:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_InvestigacaoPolimorfismosGenes.pdf: 2189382 bytes, checksum: c2c98617b43c03be9d1706ad6571449a (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2009 / No presente estudo foram investigadas as freqüências dos polimorfismos nos genes FAS e FASL em um grupo de 198 indivíduos soropositivos para o HIV-1 e 191 indivíduos controles soronegativos, com o objetivo de avaliar a ocorrência de uma possível associação entre os polimorfismos nestes genes e a infecção pelo HIV-1. A identificação dos alelos A e G do polimorfismo -670 FAS foi realizada por meio da técnica de PCR, utilizando seqüências de iniciadores específicos e posterior digestão enzimática (RFLP) com a enzima MvaI. A identificação dos alelos A e G do polimorfismo -124 FASL, bem como T e delT do polimorfismo -169 FASL foi realizada através da técnica de ACRS, seguido de RFLP com as endonucleases de restrição FokI e HincII, respectivamente. As análises das freqüências alélicas e genotípicas dos polimorfismos analisados não mostraram qualquer diferença significativa entre soropositivos e soronegativos. A análise da quantificação dos linfócitos T CD4⁺ entre os portadores dos diferentes genótipos do polimorfismo -670 FAS revelou uma associação significativa, sugerindo que o estado de portador do alelo G, em homo ou heterozigose, nos indivíduos infectados pelo HIV-1 pode ser um fator de proteção à depleção destas células no curso da infecção pelo HIV-1. As associações entre o número de linfócitos TCD8⁺, a carga viral plasmática e os polimorfismos analisados não foram estatisticamente significantes. Desse modo, pode-se sugerir, que o polimorfismo -670 do gene FAS, influencie na apoptose dos linfócitos T CD4⁺ no curso da infecção pelo HIV-1, assim, faz-se necessário estudos adicionais visando confirmar ou não esta associação, uma vez que a identificação desse polimorfismo pode ser, no futuro, uma importante ferramenta a ser utilizada no acompanhamento da infecção. / The present study investigated the frequency of the polymorphisms in the FAS and FASL gene in a sample of 198 HIV-1 seropositives individuals and 191 healthy control individuals, in order to evaluate the occurrence of a possible association between the polymorphisms and HIV-1 infection. The A and G alleles identification of the -670 FAS polymorphism was performed through a PCR followed by restriction endonucleases analyses (RFLP), with the enzyme MvaI. The identification of A and G alleles of -124 FASL polymorphism, T and delT of the -169 FASL polymorphism was performed using ACRS assay, followed by RFLP with the restriction endonucleases FokI and HincII, respectively. The analysis of allele and genotype frequencies of polymorphisms examined did not show any differences between seropositives and seronegatives individuals. The analysis of the quantification of CD4⁺ T lymphocytes from individuals with different genotypes of -670 FAS polymorphism showed a significant association, suggesting that the state of carrier of the G allele in homo or heterozygosity in HIV-1 individuals infected may be a protection factor from depletion of these cells in the course of HIV-1 infection. Associations between the FAS and FASL genes polymorphisms and the number of CD8⁺ T-cells and plasma viral load were not statistically significant. These findings suggest that the -670 FAS gene polymorphism, influences the apoptosis of CD4⁺ T lymphocytes in the course of HIV-1 infection, thus it is necessary further studies to confirm or not this association since that the identification of this polymorphism may be in the future, an important tool to be used in monitoring the infection.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The conservation of forest species requires the prior knowledge of genetic parameters belonging to the population, to help to design strategies for this purpose. This study aimed to evaluate genetic parameters and suggest indicators of sustainability in populations of Schinus terebinthifolius Raddi. aiming the conservation and maintenance of diversity in this species. In analysis of the study area, were selected 20 descriptors, and these suggested 20 indicators of sustainability for the area. Tender vegetal leaves were sampled in five populations located on the shores and islands of São Francisco River, and the material collected from 15 individuals for each population. In the DNA extraction it was used tender leaves of individuals and 2% CTAB method. We applied 20 primers of 10 bases of arbitrary sequence in amplification, the products were separated in agarose gel at 1% submitted to horizontal electrophoresis, stained with ethidium bromide and visualized in ultraviolet light. The presence and absence of bands were used to construct a binary matrix for the analysis of genetic parameters. In each population the percentage of polymorphic loci ranged from 32.92% to 45.34%. The average gene diversity of Nei was 0.37. The total genetic variation observed, 63.60% corresponded to variation among populations, and 36.40% within populations. The gene flow (Nm) estimated was 0.28. Thus the conclusion is the populations are genetically isolated, and analyzed the genetic parameters can be used as indicators of sustainability of the area. / A conservação de espécies florestais requer o conhecimento prévio de parâmetros genéticos pertencentes às populações, para se traçar estratégias para este fim. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar parâmetros genéticos e sugerir indicadores de sustentabilidade em populações de Schinus terebinthifolius Raddi. visando à conservação e manutenção da diversidade nesta espécie. Em análise da área de estudo, foram selecionados 20 descritores, e destes sugeridos 20 indicadores de sustentabilidade da área. As amostragens foram realizadas em cinco populações localizadas nas margens e ilhas do Rio São Francisco, sendo coletado material de 15 indivíduos para cada uma das populações. Na extração do DNA, empregou-se folhas tenras dos indivíduos e o método CTAB 2%. Foram usados 20 oligonucleotídeos de 10 bases de sequência arbitrária nas amplificações, cujos produtos foram separados em gel de agarose 1% submetidos à eletroforese horizontal, corados com brometo de etídio e visualizados em luz ultravioleta. A presença e a ausência de bandas foi usada para a construção de uma matriz de binária para a análise dos parâmetros genéticos. Em cada população a porcentagem de locos polimórficos variou de 32,92 a 45,34%. A diversidade média gênica de Nei foi de 0,37. Da variação genética total observada, 63,60% correspondeu à variação entre as populações; e, 36,40% dentro das populações. O fluxo gênico (Nm) estimado foi de 0,28. Desta forma conclui-se que as populações encontram-se isoladas geneticamente e os parâmetros genéticos analisados podem ser utilizados como indicadores de sustentabilidade da área.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The conservation of forest species requires the prior knowledge of genetic parameters belonging to the population, to help to design strategies for this purpose. This study aimed to evaluate genetic parameters and suggest indicators of sustainability in populations of Schinus terebinthifolius Raddi. aiming the conservation and maintenance of diversity in this species. In analysis of the study area, were selected 20 descriptors, and these suggested 20 indicators of sustainability for the area. Tender vegetal leaves were sampled in five populations located on the shores and islands of São Francisco River, and the material collected from 15 individuals for each population. In the DNA extraction it was used tender leaves of individuals and 2% CTAB method. We applied 20 primers of 10 bases of arbitrary sequence in amplification, the products were separated in agarose gel at 1% submitted to horizontal electrophoresis, stained with ethidium bromide and visualized in ultraviolet light. The presence and absence of bands were used to construct a binary matrix for the analysis of genetic parameters. In each population the percentage of polymorphic loci ranged from 32.92% to 45.34%. The average gene diversity of Nei was 0.37. The total genetic variation observed, 63.60% corresponded to variation among populations, and 36.40% within populations. The gene flow (Nm) estimated was 0.28. Thus the conclusion is the populations are genetically isolated, and analyzed the genetic parameters can be used as indicators of sustainability of the area. / A conservação de espécies florestais requer o conhecimento prévio de parâmetros genéticos pertencentes às populações, para se traçar estratégias para este fim. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar parâmetros genéticos e sugerir indicadores de sustentabilidade em populações de Schinus terebinthifolius Raddi. visando à conservação e manutenção da diversidade nesta espécie. Em análise da área de estudo, foram selecionados 20 descritores, e destes sugeridos 20 indicadores de sustentabilidade da área. As amostragens foram realizadas em cinco populações localizadas nas margens e ilhas do Rio São Francisco, sendo coletado material de 15 indivíduos para cada uma das populações. Na extração do DNA, empregou-se folhas tenras dos indivíduos e o método CTAB 2%. Foram usados 20 oligonucleotídeos de 10 bases de sequência arbitrária nas amplificações, cujos produtos foram separados em gel de agarose 1% submetidos à eletroforese horizontal, corados com brometo de etídio e visualizados em luz ultravioleta. A presença e a ausência de bandas foi usada para a construção de uma matriz de binária para a análise dos parâmetros genéticos. Em cada população a porcentagem de locos polimórficos variou de 32,92 a 45,34%. A diversidade média gênica de Nei foi de 0,37. Da variação genética total observada, 63,60% correspondeu à variação entre as populações; e, 36,40% dentro das populações. O fluxo gênico (Nm) estimado foi de 0,28. Desta forma conclui-se que as populações encontram-se isoladas geneticamente e os parâmetros genéticos analisados podem ser utilizados como indicadores de sustentabilidade da área.

Orientador: Mônica Barbosa de Melo / Dissertação (mestrado - Universidade Estadual de Campinas, Intituo de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T18:09:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Braghini_CarolinaAyumi_M.pdf: 2316733 bytes, checksum: 1031a8585bbf2541b2b39db621d9f45d (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O glaucoma compreende um grupo heterogêneo de neuropatias ópticas, caracterizadas pela escavação do disco óptico e perda progressiva do campo visual, representando uma das maiores causas mundiais de perda irreversível da visão. Em 1997, o gene Myocilin (MYOC) foi descoberto, e mutações neste gene foram envolvidas no desenvolvimento do glaucoma primário de ângulo aberto (GPAA) e do GPAA do tipo juvenil (GPAA-J). No Brasil, 35,7% e 3,85% dos pacientes com GPAA-J e GPAA, respectivamente, são portadores de mutações no gene MYOC. O gene citocromo P450, família 1, subfamília B, polipeptídeo 1 (CYP1B1), primeiramente associado ao glaucoma congênito primário, tem sido apontado como modulador do fenótipo do GPAA na presença de alterações no gene MYOC. Recentemente, observaram-se mutações no gene CYP1B1 associadas ao GPAA e GPAA-J, independentemente da presença de alterações estruturais no gene MYOC, em diferentes populações. Este projeto se propôs a avaliar mutações nos genes MYOC e CYP1B1, utilizando técnicas de PCR e sequenciamento direto, em 100 indivíduos pertencentes a famílias com GPAA ou GPAA-J e 43 pacientes não relacionados portadores de GPAA-J, bem como avaliar a possível modulação do gene CYP1B1 no fenótipo da doença. Uma nova mutação no gene MYOC, c.1187_1188insCCCAGA, foi identificada segregando com a doença em três gerações de uma família. De acordo com análises in silico, esta mutação pode alterar os contatos internos da proteína, além de comprometer um sítio de fosforilação de caseína quinase II. Nas demais três famílias foi detectada a mutação C433R, já descrita anteriormente. Como os membros das famílias apresentavam fenótipos bastante variados, foi realizada a análise da possível modulação do fenótipo da doença pelo gene CYP1B1. Contudo, as análises mostraram a não associação de variantes deste gene na modulação do fenótipo do glaucoma nestas famílias. Nos casos não relacionados de GPAA-J, foram observadas as mutações P370L, Q368X e C433R. Nenhuma mutação no gene CYP1B1 foi identificada nestes casos, mas somente polimorfismos: R48G, A119S, V243V, V432L, A443G, D449D e N453S. De acordo com este e outros estudos, é possível concluir que mutações no gene MYOC tem papel importante no desenvolvimento do GPAA e GPAA-J, sendo a mutação C433R a mais frequente na população brasileira. Além disso, o gene CYP1B1 parece ter menor contribuição no desenvolvimento destes tipos de glaucoma em nossa população / Abstract: Glaucoma comprises a group of heterogeneous optic neuropathies characterized by excavation of the optic disc and progressive loss of visual field, representing a major global cause of irreversible blindness. In 1997, the Myocilin gene (MYOC) was discovered, and mutations in this gene were involved in the development of primary open-angle glaucoma (POAG) and juvenile-onset of POAG (JOAG). In Brazil, 35.7% and 3.85% of patients with POAG and JOAG, respectively, are carriers of mutations in the MYOC gene. The gene cytochrome P450, family 1, subfamily B, polypeptide 1 (CYP1B1), primarily associated with primary congenital glaucoma, has been related to phenotypic modulation of POAG in the presence of MYOC gene mutations. Recently, mutations in the CYP1B1 gene associated with POAG and JOAG were observed, regardless the presence of structural alterations in the MYOC gene in different populations. This project proposed to evaluate mutations in the MYOC and CYP1B1 genes using PCR and direct sequencing, in 100 individuals belonging to families with JOAG or POAG and 43 unrelated JOAG patients, and assess the possible role of the CYP1B1 gene in modulating the disease phenotype. A novel mutation in the MYOC gene, c.1187_1188insCCCAGA, was detected, segregating with the disease in three generations of one family. According to in silico analysis, this mutation can change the internal contacts of the protein, and has altered a phosphorylation site of casein kinase II. In the other three families the C433R mutation was detected, as described earlier. As family members presented with very different phenotypes, the CYP1B1 gene was evaluated as a possible modulator of the disease. However, the analysis showed no association of variants in CYP1B1 gene in modulating the glaucoma phenotype in these families. In unrelated cases of JOAG, the mutations P370L, Q368X and C433R were detected. No mutation in the CYP1B1 gene was observed in these cases, but only polymorphisms: R48G, A119S, V243V, V432L, A443G, D449D, and N453S. According to the present and other studies, we conclude that mutations in the MYOC gene play an important role in the development of POAG and JOAG, and the C433R mutation is the most frequent MYOC alteration in the Brazilian population. Furthermore, the CYP1B1 gene seems to have less contribution to the development of these types of glaucoma in our population / Mestrado / Genetica Animal e Evolução / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:22:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao_Ciane_ Xavier_ Goncalves.pdf: 6437123 bytes, checksum: b433321a77238daeb8ea8ae563d42e6b (MD5) Previous issue date: 2008-07-07 / Pear is a fruit tree that belongs to the family Rosaceae, subfamily Pomoideae and genus Pyrus. In Brazil, the pear production lays around 20 thousand ton, and this fact occurs mainly due to the lack of adapted cultivars to the climate conditions.The present work was developed with the objective to study the pollen viability and compatibility of different cultivars, selections and rootstocks for the pear culture. This work was divided into five batches: in the experiment 1 it was evaluated the in vitro germination of 14 genotypes of pear at different incubation times (2, 4 and 6 hours) in BOD incubator and in lightless condition at 25°C. In the experiment 2, the incubation time was set for each genotype according the best results obtained in the previous experiment and it was assessed different temperatures of incubation (20, 30 and 40 °C) on in vitro germination of 14 pear genotypes. The basic germination medium consisted of 100 g L-1 sucrose and 10 g L-1 agar. In the third experiment, time and temperature of in vitro incubation of the pollen grains were chosen conform to the previous experiments. It was evaluated the germination of ten pear genotypes under the influence of the increase of different combinations of boric acid and calcium nitrate to the basic germination medium. In the experiment 4 it was assessed the in vitro germination of pollen grains of pear genotypes (varying temperature and time of incubation) in BOD incubator, lightless and boric acid in three concentrations added to the basic germination medium. Experiment 5 evaluated the gametic compatibility in pear genotypes through pollen tube growth in pistil of flower 120 hours after pollination. Therefore, to the assessed genotypes it was evaluated the self-pollination either in the field or laboratory, cross-pollination or open-pollination. The germination percentage of the pear genotypes studied in the first experiment depends on time and sample. Among the pear genotypes assessed in the second experiment the temperature of incubation at 20°C is recommended and at 40°C is damaging for germination. In the third experiment, in general, either basic culture medium or enriched with 200 mg L-1 boric acid promote higher rates of in vitro germination of pollen grains of the pear genotypes; the germination percentage decreased whether enriched with 1200 mg L-1 of calcium nitrate, independently of boric acid concentration. For the pear genotypes evaluated in the fourth experiment it is recommended to germinate the pollen grains in either basic culture medium or enriched with 100 mg L-1 of boric acid. In the fifth experiment the ovule fecundation did not occur for most genotypes and pollination type; therefore, cross-pollination benefits fecundation. / A pereira é uma frutífera que pertencente à família Rosaceae, subfamília Pomoideae e ao gênero Pyrus. No Brasil, a produção de peras é somente de, aproximadamente, 20 mil toneladas e este fato ocorre, principalmente, pela falta de cultivares adaptadas às condições climáticas. O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de verificar a viabilidade e compatibilidade de pólen de diferentes genótipos de pereira no Rio Grande do Sul. Este trabalho foi dividido em cinco experimentos: No experimento 1, avaliou-se a germinação in vitro de 14 genótipos de pereira, em diferentes tempos de incubação (2, 4 e 6 horas) em incubadora tipo BOD, em ausência de luz, a 25°C. Para o experimento 2, o tempo de incubação foi fixado para cada genótipo conforme os melhores resultados obtidos no experimento anterior, avaliando-se as diferentes temperaturas de incubação (20, 30 e 40°C), na germinação in vitro de 14 genótipos de pereira. O meio de germinação básico foi composto de 100 g L-1 de sacarose e 10 g L-1 de ágar. No terceiro experimento, o tempo e a temperatura de incubação dos grãos de pólen in vitro foram fixados, conforme os experimentos anteriores; avaliou-se a germinação de dez genótipos de pereira sob a influência do acréscimo de diferentes combinações de ácido bórico e nitrato de cálcio ao meio de germinação básico. No experimento de número 4 avaliou-se a germinação in vitro de grãos de pólen de genótipos de pereira (variando-se a temperatura e o período de incubação) em estufa tipo BOD, em ausência de luz, e ainda, o ácido bórico em três concentrações adicionado ao meio de germinação básico. No quinto experimento, avaliou-se a compatibilidade gametofítica em genótipos de pereira, através do desenvolvimento do tubo polínico no pistilo da flor, 120 horas após a polinização; para os genótipos em estudo avaliou-se a autopolinização de campo, autopolinização de laboratório, polinização cruzada e a polinização aberta. Conclui-se que, para os genótipos de pereira estudados no primeiro experimento a percentagem de germinação depende do tempo e da amostra. Para o segundo experimento, entre os genótipos de pereira estudados, a temperatura de incubação a 20°C é recomendável e a 40°C é prejudicial para a germinação. Para o terceiro experimento, de maneira geral, em meio de cultura básico ou acrescido de 200 mg L-1 de ácido bórico promove elevados índices de germinação in vitro de grãos de pólen dos genótipos de pereira; e a percentagem de germinação é dimunuída quando acrescenta-se a concentração de 1200 mg L-1 de nitrato de cálcio, independente da concentração de ácido bórico. No quarto experimento, para os genótipos de pereira estudados, é recomendável a germinação de grãos de pólen in vitro em meio de cultura básico ou acrescido de 100 mg L-1 de ácido bórico. Para o quinto experimento, a fecundação dos óvulos não ocorreu na quase totalidade de genótipos e tipos de polinização; de modo geral, a polinização cruzada beneficia a fecundação.

O sistema sanguíneo ABO é o mais importante grupo sanguíneo na medicina transfusional. Atualmente, a determinação do tipo sanguíneo dos doadores de sangue é feita através de testes sorológicos rotineiros de laboratório, porém outros testes realizados com o DNA humano obtido de amostra de sangue, tornam-se complementos valiosos para a determinação correta do grupo sanguíneo do doador e do receptor, aumentando a segurança transfusional. Estudos realizados com o grupo sanguíneo A3 e A3B demonstraram que este subgrupo possui um alto grau de heterogeneidade, uma vez que diversos eventos moleculares foram associados a ele, embora apenas um pequeno número de amostras tenha sido testado até hoje. Nesse trabalho, foi investigada a frequência e os tipos de eventos moleculares do grupo sanguíneo A3 e A3B em um grupo de 100 doadores de sangue. Para seleção desse grupo foram analisadas 12.283 amostras de doadores de sangue saudáveis de ambos os sexos do grupo sanguíneo A e AB obtidas na Fundação Pró-Sangue/Hemocentro de São Paulo, pelos métodos teste em tubo e gel teste. Obtiveram-se 13 amostras A3 e 87 amostras A3B. Após extração e quantificação do DNA genômico das amostras utilizou-se amplificação do DNA pela técnica de reação da polimerase em cadeia alelo específico (PCR-ASP) para as regiões 467C>T, 829G>A, 871G>A e 1060C>A (del C) do exon 7 do gene ABO. Os resultados de amplificação das regiões estudadas apontam para um novo genótipo, aqui denominado A30*/ , presente em 30,7% das amostras A3 e em 58,6% das amostras A3B (A30*/B10*) (necessária a confirmação por sequenciamento); detectou-se também o genótipo A302/A301 em 30,7% das amostras A3 e o genótipo A302/B104 em 17,1% das amostras A3B; outros genótipos já descritos para subgrupo A3 (A301/A301, A302/A302, uma amostra de cada) foram também verificados bem como presença da mutação na região 871G>A em 9 amostras A3 ; verificou-se também que mutações nas regiões 467 C>T e 1060 C>A (del C), anteriormente descritas somente em indivíduos A2 e A2B, são muito frequentes em indivíduos A3 e A3B. / ABO blood system is the most important blood group in transfusional medicine. Actualy, the blood group type in blood donors and receptors is determined by serological laboratorial tests, complemented by human DNA blood tests that assure the correct blood group determination for the blood donor and receptor, optimizing transfusional safety. Studies on blood subgroup A3 e A3B demonstrated a large subgroup heterogenity, with various associated molecular changes in small sample groups tested. At present study, it was proposed investigation about the frequency and the types of molecular alterations occuring among 100 blood donors samples phenotyped as A3 e A3B. These samples are selected after tub and gel tests analysis of 12.283 A and AB samples of healthy blood donors of both sex from Fundação Pró-Sangue/Hemocentro de São Paulo. Thirteen A3 and 87 A3B samples were selected, each sample genomic DNA was extracted and quantified and it was performed DNA amplification by alellic specific polimerase chain reaction (PCR-ASP). It was studied exon 7 ABO gene mutations 467C>T, 829G>A, 871G>A and 1060C>A (del C). Amplification results pointed that a new genotipe is present at these A3 and A3B subgroup, named in this study as the A30*/ genotipe (sequencing confirmation needed); these genotipe is present in 30.7% A3 samples and in 58.6% A3B samples (A30*/B10*). However, it was detected the ulterior decrived genotipes: A302 present in 30.7% A3 samples (A302/A301) and in 17.1% A3B samples (A302/B104); for subgroup A3 it was observed the genotipes A301/A301, A302/A302 (one sample each) and the presence of 871G>A mutation at 9 A3 samples; 467 C>T and 1060 C>A (del C) exon 7 ABO gene mutations descrived at A2 e A2B samples, are very frequents at these A3 e A3B samples tested.

Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-02-13T13:07:51Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_VerificacaoAssociacaoVariabilidade.pdf: 1628183 bytes, checksum: 55fc26df5908aacccaa7561b8a2faab9 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2014-03-31T13:17:59Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertacao_VerificacaoAssociacaoVariabilidade.pdf: 1628183 bytes, checksum: 55fc26df5908aacccaa7561b8a2faab9 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-31T13:17:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertacao_VerificacaoAssociacaoVariabilidade.pdf: 1628183 bytes, checksum: 55fc26df5908aacccaa7561b8a2faab9 (MD5) license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Previous issue date: 2004 / A asma brônquica é uma desordem inflamatória crônica, complexa, na qual estão envolvidos fatores genéticos e ambientais. A inflamação das vias aéreas na asma é regulada, predominantemente, por células do sistema imunológico e por uma vasta rede de citocinas que interagem mutuamente e com as vias aéreas. O exato desempenho funcional de cada citocina na fisiopatologia da asma ainda necessita ser completamente estabelecido. A presente investigação teve como objetivo comparar a distribuição dos alelos S e Z do gene da A1AT e do polimorfismo do gene do TNF-α (-308 G/A) em uma população de 110 asmáticos, divididos em dois níveis de severidade da asma (com 54 pacientes no nível da doença moderada persistente e 56 pacientes no nível da doença severa persistente). Os genótipos da A1AT e do TNF-α (-308 G/A) foram determinados pela técnica de digestão enzimática (polimorfismo no comprimento dos fragmentos de restrição). O polimorfismo no promotor do gene do fator de necrose tumoral TNF-α (-308G/A), citocina pro-inflamatória que participa da reação inflamatória em pacientes com asma, contribuindo para a hiperreatividade brônquica, não foi na presente investigação, associado com a doença ou com o aumento da hiperreatividade brônquica, nos níveis de severidade sintomática mais graves da doença. / Asthma is a complex chronic inflammatory disorder in which genetic and environmental factors are involved with the remodeling extracelullar matrix. The present study had aim to describe, through genetic methods, the prevalence of both S and Z alpha 1-antitrypsin alleles and the TNF-α (-308) genetic polymorphism, associated with the spectrum of asthma severity levels. A total of 110 asthmatics recruited random sample fora physical examination, determination of cutaneous sensibility with prick test, determination of respiratory parameters (forced expiratory volume in the first second and vital capacity) and DNA analysis by polymerase chain reaction and RFLP, completed this study. The patients was divided in two groups, 54 with moderated asthma and 56 with severe asthma. The genotype distribution of the deleterious variants of alpha 1 - antitrypsin may contribute to the severe persistent level of asthma. The TNF-α (-308 G/A) heterozygotes is not significantly associated with asthma.