Orientador: Luiz Carlos Zeferino / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T05:08:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_SabasCarlos_M.pdf: 3965943 bytes, checksum: 18f39a7d28aa4b50ba92767580e0b71c (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O objetivo deste estudo foi analisar a associação entre a angiogênese e as características anatomopatológicas do carcinoma do colo uterino, através da densidade de microvasos determinada pela técnica de imunoistoquímica com anticorpos monoclonais anti-CD34, BNH9 e anti-CD31. Para tal, foi realizado um estudo observacional analítico do tipo transversal, que incluiu 62 pacientes com carcinoma invasivo do colo uterino nos estádios Ibl, Ib2 e TIa da FIGO, que foram submetidas a histerectomia radical com linfadenectomia pélvica no período de janeiro de 2000 a fevereiro de 2002. A mensuração da angiogênese foi feita através da densidade de microvasos que correspondeu à média de microvasos por campo contados em dez campos. A densidade de microvasos foi maior quando se utilizou o anticorpo monoc1onal anti-CD34 e BNH9 do que com anti-CD31. O coeficiente de kappa foi de 0,74 (IC 950/0=0,56-0,91) quando analisou-se a concordância entre CD34 e BNH9 e os coeficientes de kappa foram de 0,35 (IC 95%=0,12-0,59) e de 0,29 (IC 95%=0,05-0,53), respectivamente, quando analisou-se a concordância entre CD34 e CD31 e entre CD31 e BNH9. Maior densidade de microvasos determinada pelo anticorpo anti-CD34 associou-se com carcinoma do colo uterino do tipo histológico escamoso, enquanto que com o anti-CD31 associou-se com o carcinoma indiferenciado. Maior densidade de microvasos determinada pelo anticorpo BNH9 associou-se com linfonodos comprometidos no carcinoma escamoso do colo uterino. Quando se utilizou os anticorpos anti-CD34 e BNH9 observou-se tendência de associação com invasão linfática para o carcinoma do colo uterino. Com bases nestes resultados, podemos concluir que a densidade de microvasos é maior quando utilizou-se os anticorpos monoclonais anti-CD34 e BNH9 do que com anti-CD31. A concordância para determinar a densidade de microvasos é melhor entre os anticorpos monoclonais anti-CD34 e BNH9. A atividade angiogênica é mais alta nos carcinomas escamosos, nos carcinomas indiferenciados e nos casos de carcinoma escamoso com linfonodos comprometidos / Abstract: The aim of this study was to analyse the association between angiogenesis and the pathoanatomic features of cervical cancer through microvessel density, determined by an immunohistochemical technique using anti-CD34, BNH9 and anti-CD31 monoclonal antibodies. For this purpose, a cross-sectional analytical observational study was conducted, including 62 patients with Stage Ibl, 1h2 and na cervical cancer as described by FIGO. These patients underwent radical hysterectomy with pelvic lymph node ressection 1Tom January 2000 to February 2002. Angiogenesis was measured through microvessel density which corresponded to the mean number of microvessels per field in 10 fields. Microvessel density was higher when using anti-CD34 and BNH9 monoclonal antibodies compared to using anti-CD31 monoclonal antibody (p<0,01). The kappa coefficient was 0.74 (CI 950/0=0.56-0.91) when analysing agreement between CD34 and BNH9. Kappa coefficients were 0.35 (CI 95%=0.12-0.59) and 0.29 (CI 95%=0.05-0.53), respectively, when analysing agreement between CD34 and CD31 and beween CD31 and BNH9. Higher microvessel density detennined by anti-CD34 antibody was associated with squamous cell cervical carcinoma, whereas it was associated with undifferentiated carcinoma when determined by anti-CD31 antibody. Higher microvessel density detennined by BNH9 antibody was associated with lymph node involvement in squamous cell cervical carcinoma. When anti-CD34 and BNH9 antibodies were used, a trend towards lymphatic invasion was observed in cervical carcinoma. Based on these results, we can conclude that microvessel density is higher when using anti-CD34 and BNH9 monoclonal antibodies compared to using anti-CD31. The agreeement between anti-CD34 and BNH9 monoclonal antibodies is better for determining microvessel density. There is a higher leveI of angiogenic activity in squamous cell carcinomas, undifferentiated carcinomas and squamous cell carcinomas with lymph node involvement / Mestrado / Medicina Interna / Mestre em Ciências Médicas

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-09T16:36:26Z No. of bitstreams: 1 carlos-humberto-marques.pdf: 2761227 bytes, checksum: cf168e11c904e07038251644b2018901 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-09T16:36:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carlos-humberto-marques.pdf: 2761227 bytes, checksum: cf168e11c904e07038251644b2018901 (MD5) Previous issue date: 2005-05 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / Os anticorpos monoclonais possuem diversasaplicações em transplantes, na composição de conjuntosde reativos para diagnóstico, grande variedade de doenças auto-imunes e, principalmente, na terapia do câncer. A tecnologia de produção de anticorpos monoclonais recombinantes revolucionou a geração de imunoglobulinas, possibilitando a obtenção de anticorpos humanizados dirigidos a uma grande variedade de antígenos específicos. A baixa seletividade das metodologias atuais para diagnóstico e terapia de neoplasiasconstitui um dos principais empecilhospara a prática oncológica. Nesse particular, a utilização de imunoglobulinas submetidas à engenharia genética já é uma realidade e significa um avanço estratégico, abrangendo cerca de 25% do mercado biofarmacêutico global de proteínas terapêuticas. Este trabalho aponta os aspectos fundamentais à concretização da metodologia de humanização de anticorpos por transplante das regiões determinantes de complementaridade – CDR, com ênfase em uma proposta de produção do anticorpo anti – CD20 contrao Linfoma Não-Hodgkin. A introdução do Instituto de Tecnologia emImunobiológicos - Bio-Manguinhos nesse promissor e importante mercado de biofármacos através da implantação da metodologia de humanização do anticorpo monoclonal murino anti-CD20 é objeto desta dissertação. Viabilizar sua produção torna-se extremamente importante, tanto para a identificação precisa e precoce da enfermidade, quanto para atender um segmento do mercado brasileiro ainda desprovido de tratamento abrangente e eficaz. A apresentação do estudo dos anticorpos, sua estrutura e características, o estudo dosdiferentes sistemas de expressão, cultivo, purificação,bem como a proposta de reestruturação e redimensionamento do Laboratório de Tecnologia de Anticorpos Monoclonais, parcerias, colaborações, recursos humanos necessários e aspectos de mercado, são aqui considerados. / Monoclonal antibodies (Mabs) have several applications in transplants, reagents for diagnosis, a great variety ofauto-immune diseases and mainly, in cancer therapy. Mabs production employing recombinant echnologymade a revolution in immunoglobulinsgeneration, enabling the production of humanized antibodiesthat recognize specific antigens. The low selectivity of the current techniquesfor neoplasm diagnosis and therapy is one of the major impediments for oncology practice. In this regard, the use of eneticallyengineered immunoglobulins has become a reality and meansa strategic development comprising around 25% of the global biopharmaceutical market. This work shows the most important aspects in Mabs humanization through complementary determining regions (CDR) graft methodology, emphasizing a proposal ofanti-CD20 Mab production against non-Hodgkin lymphoma. Introducing the Instituto de Tecnologia emImunobiológicos – Bio-Manguinhos in this important and promising biopharmaceutical market through the establishment of humanization methodology is the main object of this dissertation. Making humanized Mabs production feasible is veryimportant not only for the earlyand precise identification of illnesses, but also to meet a demand of the Brazilian market that still lacks comprehensive and efficient treatment. The study of Mabs, their structureand properties, expression systems, cultivation, purification, new dimensions and structure of the laboratory, partnerships, cooperation,human resources and market analysis are considered herein.

As modificações das lipoproteínas de baixa densidade (LDL) são uma etapa essencial na aterogênese pois acarretam a geração de LDL eletronegativa [LDL(-)] que apresenta propriedades quimiotática, citotóxica, imunogênica e pró-inflamatória. O objetivo deste trabalho foi a produção de hibridomas secretores de anticorpos monoclonais anti-LDL(-), a clonagem dos genes que codificam para as cadeias variáveis destes anticorpos, e sua expressão como fragmentos de anticorpo de cadeia única (scFv). A LDL(-) isolada de plasma humano foi utilizada como antígeno para imunização de camundongos BALB/c. Após triagem dos clones, dois anticorpos monoclonais foram obtidos baseados em sua reatividade pela LDL( -) e não pela LDL nativa: 1A3H2 (1A3) e 2C7D5F10 (2C7). Os cDNAs codificante para a cadeia pesada (VH) e cadeia leve (VL), de ambos os anticorpos, foram obtidos por meio de RT-PCR utilizando bibliotecas de oligonucleotídeos que reconhecem todas os genes de domínios variáveis das famílias de VH e VL murinas. Os genes da VH e VL obtidos foram clonados no vetor pGEM-T Easy (Promega&#174;) e suas seqüências determinadas. A VH do anti-LDL(-) 1A3 pertence família J558.84 e fragmento gênico JH2, enquanto sua VL pertence a família 8.24 e fragmento gênico Jk5. A VH do anti¬-LDL(-) 2C7 pertence a família Vmu 3.2 (J558) e fragmento gênico JH4, enquanto sua VL pertence a família 8.24 e fragmento gênico Jk5. A partir disso, oligonucleotídeos sintéticos foram sintetizados a fim de clonar estes segmentos gênicos no vetor pPlgLE de expressão em Pichia pastoris. Foram realizadas três construções: o scFv 1A3, scFV 2C7 e um scFv híbrido (VH do 1A3 e VL do 2C7). Das três construções obtidas, conseguimos expressar o scFv do anti-LDL 2C7D5F10 que demonstrou ser capaz de reconhecer o antígeno. A proteína recombinante expressa tem grande potencial de ser usada no diagnóstico clínico incluindo imunoensaios in vitro e como reagentes para exames que envolvam a obtenção e análise de imagens. / Oxidative modification of low-density lipoproteins (LDL) is an essential step in atherogenesis, generating electronegative LDL [LDL(-)], which has chemotactic cytotoxic, immunogenic and proinflammatory properties. The aim of this study was the generation of anti-LDL(-) mAbs, the cloning of the genes that code for their variable domains and their expression as single-chain Fv (scFv). LDL(-) was isolated from human blood plasma and used as an antigen for immunization of Balb/c mice. Upon screening, two different mAbs were selected based on their ability to recognize LDL(-) and not native LDL: 1A3H2 (1A3) e 2C705F10 (2C7). The cDNAs that code for VH and VL were obtained by RT-PCR using specific immunoglobulin primer libraries wich recognize all VH and VL murine families. The VH and VL genes were cloned in pGEM-T Easy (Promega&#174;) and sequenced. The anti-LDL(-) 1A3 uses a VH segment from J558.84 and a JH2 segment, while VL uses a 8.24/Jk5 segments. The anti-LDL(-) 2C7 uses a VH segment from Vmu 3.2 (J558) and a JH4 segment, while VL uses a 8.24/Jk5 segments. Oligonucleotides were synthetized and those gene segments were cloned in pPIGLE a Pichia pastoris immunoglobulin expression vector. We obtained three scFv constructions: scFV 1A3, scFv 2C7 and a husk hybrid, harboring 1A3 VH and 2C7 VL. Among those, we expressed the scFv anti¬-LDL(-) 2C7 that are able to recognize the antigen. The recombinant protein has a great potential for clinicai diagnostic applications, including in vitro immunoassays and as imaging reagents.

Evidências epidemiológica e imunológica sugerem que o desenvolvimento da imunidade natural contra doença meningocócica pode está associado com a reação cruzada de antígenos em comuns com Neisseria meningitidis e outras bactérias comensais, como Neisseria lactamica. O Objetivo deste trabalho foi de investigar a imunogenicidade de antígenos de vesículas de membrana externa (OMV) de N. lactamica, com ou sem a presença de Bordetella pertussis (BP), utilizada como adjuvante. Grupos de camundongos neonatos da linhagem BALB/c foram imunizados com antígenos de N. lactamica. Os resultados de nossos estudos mostraram o predomínio de altos títulos de anticorpos dos isótipos IgG e IgM com alta e intermediária avidez, depois das imunizações pela via (i.n) com N. lactamica. A análise do soro por immunoblot mostrou proteínas com reatividade cruzada entre as espécies do gênero Neisseria e os anticorpos monoclonais utilizados neste trabalho. Estes resultados sugerem que antígenos de N. lactamica e N. meningititdis em comum, possam ser importantes na imunidade natural contra doença meningocócica, e no desenvolvimento de vacina. / Immunological and epidemiological evidences suggest that the development of natural immunity to meningogoccal disease may be associated with crossreactive antigens together with Neisseria meningitidis and other commensal bacteria, like Neisseria lactamica. The present study aimed to investigate the immunogenicity of antigens of outer membrane vesicles (OMV) of N. lactamica with or without the presence of Bordetella pertussis (BP) used as an adjuvant. Groups of neonate BALB/c mice were immunized intranasally antigens of N. lactamica. The results of our studies showed the predominance of high titers of antibodies of IgG and IgM isotipes with high and intermediate avidity after intranasal immunization with N. lactamica. Immunoblot analysis of serum showed cross-reactivity proteins between the species of the gender Neisseria and the monoclonal antibodies used in this study. These results suggest that antigens of N. lactamica and N. meningitidis in common may be important in natural immunity against meningogoccal disease and in the development of vaccine.

Orientador: Elenice Deffune / Resumo: Biossensores são aparelhos de análises que combinam componentes biológicos com detectores físico-químicos. É possível interpretar e disponibilizar os resultados de uma forma de fácil interpretação ao usuário ou até associá-los de forma automática a uma rede de dados. O termo internacional "biosensor" tem sido usado de forma crescente em publicações científicas desde 1980, demonstrando a importância e interesse científico mundialmente sobre este conceito. Em questão de mercados, há relatórios que indicam que biossensores movimentaram mais de 220 bilhões de dólares mundialmente ano passado. Point-of-care (POC) trata da ideia de se realizar atendimento e exames próximos ao paciente, trazendo como vantagem: diagnóstico mais rápido, preciso e menos propenso a erros ou troca de dados. Os biossensores são capazes de prover resultados em menor tempo além de possibilitar seu transporte até o paciente independentemente de onde esteja. O propósito deste trabalho é utilizar os anticorpos anti-hemoglobina do tipo A tipo B e tipo AB adquiridos no mercado, para desenvolver um imunossensor capaz de realizar a tipagem sanguínea de forma rápida, precisa e com resultados objetivos em plataformas digitais. No início a pesquisa se mostrou promissora pois a utilização de eletrodos de platina com pirrol foi capaz de fixar os anticorpos e o tempo de incubação para obtenção de resultados que diferenciassem os grupos sanguíneos foi definido em 10 minutos, o que é considerado um tempo adequado para ess... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2018. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / O CD3 como alvo terapêutico de anticorpos, pode induzir a depleção parcial dos linfócitos T circulantes, provocando uma imunossupressão, que pode ser explorada clinicamente. Com isso, a busca por anticorpos anti-CD3 humanizados tem relevância biotecnológica. Entretanto, o CD3 é um antígeno de membrana de difícil preparação. Desse modo, procuramos obter um antígeno mimético ao CD3 que se ligue com alta afinidade a um anticorpo conhecidamente imunomodulador, o anticorpo monoclonal OKT3, de forma a facilitar a busca de novos anticorpos terapeuticos. Para isso utilizou-se o biopanning, por phage display, para selecionar peptídeos ligantes, a partir de uma biblioteca de peptídeos randômicos constrita de sete resíduos, PhDC7C (Biolabs). Um protocolo de seleção baseado em seleção negativa com IgG2a de camundongo, seguido de três ciclos sucessivos de seleção positiva. Para validação desses biopanning foi feita a titulação dos ciclos comparando-os a uma curva padrão, usando a biblioteca original amplificada por PCR, que foi utilizada para normalizar a quantidade de DNA. Foram obtidas sub-bibliotecas com um título em torno de 106 pfu/mL. Essas sub-bibliotecas foram analisadas por sequenciamento de DNA de alto desempenho e por bioinformática em busca de peptídeos selecionados especificamente pelo paratopo do anticorpo OKT3, um anti-CD3. Com a análise de bioinformática foi permitido à comparação das sequencias obtidas aos bancos de dados, existentes. Assim, foram excluídos, os peptídeos conhecidamente resultante de seleção inespecífica. Em conclusão, não foi possível encontrar um peptídeo ligante ao alvo de interesse. Provavelmente o viés encontrado na biblioteca, interferiu no sucesso da técnica, mas modificações no protocolo de seleção deverão ser considerados na seleção de peptídeos ligantes, que sirvam de mimotopos. / Anti-CD3 antibodies, a target for antibody therapy, may induce partial depletion of circulating T lymphocytes, causing immunosuppression, which can be explored clinically. Thus, a search for humanized anti-CD3 antibodies has a biotechnological relevance. However, CD3 is a difficult-to-prepare membrane antigen. Thus, we aim to obtain a CD3 antigen mimetic that binds with high affinity to a known immunomodulatory anti-CD3, the mouse monoclonal antibody OKT3. We use a seven-residue, phage display peptide library PhDC7C (Biolabs) to select for OKT3 mAb ligands peptides. The screening involves a negative selection with mouse IgG2a and three successive positive selection cycles. The validation of biopanning was done with PCR, which was used to quantify the amount of DNA. Sub-libraries with a titer of about 106 pfu / ml were obtained. These sub-libraries were analyzed by high-throughput DNA sequencing and by bioinformatics in search peptides selected specifically for the paratope of the OKT3 molecule. With a bioinformatics analysis it was possible to compare the sequences with the existing databases. Thus, peptides known as non-specific binding were excluded. However, a peptide binding to the target of interest could not be found. Further improvement in selection techinique may yield to specific OKT3 binding mimotopes.

As modificações das lipoproteínas de baixa densidade (LDL) são uma etapa essencial na aterogênese pois acarretam a geração de LDL eletronegativa [LDL(-)] que apresenta propriedades quimiotática, citotóxica, imunogênica e pró-inflamatória. O objetivo deste trabalho foi a produção de hibridomas secretores de anticorpos monoclonais anti-LDL(-), a clonagem dos genes que codificam para as cadeias variáveis destes anticorpos, e sua expressão como fragmentos de anticorpo de cadeia única (scFv). A LDL(-) isolada de plasma humano foi utilizada como antígeno para imunização de camundongos BALB/c. Após triagem dos clones, dois anticorpos monoclonais foram obtidos baseados em sua reatividade pela LDL( -) e não pela LDL nativa: 1A3H2 (1A3) e 2C7D5F10 (2C7). Os cDNAs codificante para a cadeia pesada (VH) e cadeia leve (VL), de ambos os anticorpos, foram obtidos por meio de RT-PCR utilizando bibliotecas de oligonucleotídeos que reconhecem todas os genes de domínios variáveis das famílias de VH e VL murinas. Os genes da VH e VL obtidos foram clonados no vetor pGEM-T Easy (Promega&#174;) e suas seqüências determinadas. A VH do anti-LDL(-) 1A3 pertence família J558.84 e fragmento gênico JH2, enquanto sua VL pertence a família 8.24 e fragmento gênico Jk5. A VH do anti¬-LDL(-) 2C7 pertence a família Vmu 3.2 (J558) e fragmento gênico JH4, enquanto sua VL pertence a família 8.24 e fragmento gênico Jk5. A partir disso, oligonucleotídeos sintéticos foram sintetizados a fim de clonar estes segmentos gênicos no vetor pPlgLE de expressão em Pichia pastoris. Foram realizadas três construções: o scFv 1A3, scFV 2C7 e um scFv híbrido (VH do 1A3 e VL do 2C7). Das três construções obtidas, conseguimos expressar o scFv do anti-LDL 2C7D5F10 que demonstrou ser capaz de reconhecer o antígeno. A proteína recombinante expressa tem grande potencial de ser usada no diagnóstico clínico incluindo imunoensaios in vitro e como reagentes para exames que envolvam a obtenção e análise de imagens. / Oxidative modification of low-density lipoproteins (LDL) is an essential step in atherogenesis, generating electronegative LDL [LDL(-)], which has chemotactic cytotoxic, immunogenic and proinflammatory properties. The aim of this study was the generation of anti-LDL(-) mAbs, the cloning of the genes that code for their variable domains and their expression as single-chain Fv (scFv). LDL(-) was isolated from human blood plasma and used as an antigen for immunization of Balb/c mice. Upon screening, two different mAbs were selected based on their ability to recognize LDL(-) and not native LDL: 1A3H2 (1A3) e 2C705F10 (2C7). The cDNAs that code for VH and VL were obtained by RT-PCR using specific immunoglobulin primer libraries wich recognize all VH and VL murine families. The VH and VL genes were cloned in pGEM-T Easy (Promega&#174;) and sequenced. The anti-LDL(-) 1A3 uses a VH segment from J558.84 and a JH2 segment, while VL uses a 8.24/Jk5 segments. The anti-LDL(-) 2C7 uses a VH segment from Vmu 3.2 (J558) and a JH4 segment, while VL uses a 8.24/Jk5 segments. Oligonucleotides were synthetized and those gene segments were cloned in pPIGLE a Pichia pastoris immunoglobulin expression vector. We obtained three scFv constructions: scFV 1A3, scFv 2C7 and a husk hybrid, harboring 1A3 VH and 2C7 VL. Among those, we expressed the scFv anti¬-LDL(-) 2C7 that are able to recognize the antigen. The recombinant protein has a great potential for clinicai diagnostic applications, including in vitro immunoassays and as imaging reagents.

Resumo não disponível.

Orientadora : Profa. Dra. Vanete Thomaz Soccol / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia. Defesa: Curitiba, 27/02/2015 / Inclui referências : f.98-108 / Resumo: A febre aftosa é uma doença altamente contagiosa que acomete animais biungulados. Tem distribuição cosmopolita, mas é endêmica na Ásia, África e em alguns países da América do Sul, sendo que o Brasil é considerado zona livre com vacinação. No Brasil o controle epidemiológico da doença é realizado mediante a vacinação e vigilância sanitária sendo necessário diagnóstico diferencial entre animais vacinados de portadores do vírus, para provar a ausência da doença. Desta forma é fundamental o desenvolvimento de testes para diferenciar animais vacinados de doentes e para o controle do processo de produção da vacina. A resposta a anticorpos, contra proteínas não estruturais do vírus, tem sido amplamente utilizada para este propósito, como é o caso do ensaio imuno-enzimático-ELISA/EITB. A proteína 3ABC é uma proteína não estrutural do vírus da febre aftosa e está presente em altos níveis no soro de animais infectados. Visando a diferenciação entre animais doentes e vacinados a proteína ABC deve ser removida durante o processo de produção da vacina, para que o animal imunizado não apresente anticorpos detectáveis contra ela. O objetivo deste estudo foi produzir e caracterizar anticorpos policlonal e monoclonal contra a proteína 3ABC do vírus da febre aftosa, para serem utilizados no desenvolvimento de um teste imunoenzimático que permita monitorar os processos de purificação da vacina, para remover as proteínas não estruturais e controle de qualidade das partidas produzidas visando sua aprovação pelos órgãos fiscalizadores como o Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA). Para a produção dos anticorpos policlonal e monoclonal primeiramente foi produzida a proteína 3ABC recombinante a partir do plasmídeo contendo gene que codifica a proteína 3ABC, já com a mutegênese do gene 3ABC no sítio ativo da protease 3Cpro para sua inativação, produzido por Gonzales, 2013. A produção da proteína foi realizada por fermentação da Escherichia coli recombinante em erlenmeyer de um litro e realizada as etapas de semi purificação (anticorpo policlonal) e ou purificação (anticorpo monoclonal). O anticorpo policlonal, produzido em coelhos, apresentou altos títulos a partir de 75 dias pós-imunização. A puriticação foi realizada por cromatografia de afinidade com proteína G, o que resultou em uma imunoglobulina altamente pura, tornando-a mais específica para a proteína de interesse. Para a produção do anticorpo monoclonal foram imunizados camundongos BALB/c por via intramuscular. A fusão realizada originou 217 colônias de hibridomas, sendo 10 deles positivos no tese ELISA indireto. Após clonagem e expansão dos clones positivos, foi realizado o teste de estabilidade permitindo a seleção de dois clones estáveis. Os anticorpos foram caracterizados pelas metodologias de ELISA e Western Blotting e mostraram alta reatividade contra a proteína 3ABC e podem ser utilizados no desenvolvimento do teste ELISA para o monitoramento dos processos de purificação da vacina contra a febre aftosa. Todos os experimentos foram realizados na empresa Ourofino Saúde Animal. Palavras chave: febre aftosa; proteína 3ABC; anticorpo policlonal anti-3ABC; anticorpo monoclonal anti-3ABC. / Abstract: FMD is a highly contagious disease that affects cloven-hoofed animals and is endemic in Asia, Africa and some countries in South America. In Brazil the epidemiological disease control is achieved by vaccination and health surveillance. For this control is necessary differential diagnosis between vaccinated animals and those carrying the virus, to prove the absence of the disease. Thus it is important to develop tests to differentiate vaccinated animals from sick animals. The antibody response against nonstructural proteins of the virus, have been widely used for this purpose, such as the enzyme-immunoassay ELISA / EITB. The 3ABC is a nonstructural protein of FMD virus and it is present in high levels in infected animals serum. It is necessary to be removed during vaccine production, so the immunized animal does not produce detectable antibodies against them. The aim of this study was to produce and characterize polyclonal and monoclonal antibodies against the 3ABC protein of FMD virus, for their use to develop an enzymatic immunoassay experiments. Such experiments will allows the monitoring of the vaccine purification processes, which removes non-structural proteins and also the quality control process of the produced batches for approval by regulatory agencies such as the Ministry of Agriculture Livestock and Supply (MAPA). In this study, the plasmid to heterologous protein 3ABC production was produced by GONZALEZ, 2013. The expression has been optimized for subsequent production of polyclonal and monoclonal antibodies. For animal's immunization, either rabbit or mouse, the protein used was the semi purified protein. And for the monoclonal antibody screening tests, the protein used was the purified protein. The purification in this stage was due to the need of a specific test to select the monoclonal antibody which is also highly specific. The polyclonal antibody produced in rabbits, showed high titers from 75 days post-immunization. The large amount of polyclonal antibody obtained enabled the using of affinity chromatography using protein G, as a purification method, which resulted in a highly pure immunoglobulin, making it more specific to the protein of interest. For the production of monoclonal antibody (Mabs) BALB/c Mice were immunized intramuscularly. The fusion carried out originated 217 hybridomas colonies, 10 of them were positives for antibody production by ELISA test. After cloning and expansion of positive clones, stability tests were performed wich allowed the selection of two stable clones. The antibodies were characterized by ELISA and Western Blotting approaches. The mabs obteined showed high reactivity against 3ABC protein and as a result they can be used in the development of an ELISA assay to monitor the purification processes of the vaccine against FMD. All experiments were performed in Ourofino Animal Health Company. Key-words: FMD; 3ABC protein; polyclonal anti-3ABC; monoclonal anti-3ABC.

Orientador: Fausto Viterbo de Oliveira Neto / Resumo: A pesquisa em Biologia Celular, depende de técnicas laboratoriais que possam ser usadas para estudar a estrutura e função celular. Importantes avanços na compreensão das células têm sucedido diretamente o desenvolvimento de novas técnicas, que permitiram novos meios de investigação. Uma grande inovação da indústria biotecnológica é a produção de anticorpos monoclonais que são de extrema importância na área médica. Todas as células do organismo apresentam um conjunto de marcadores de superfície que caracterizam a singularidade biológica e a marca das células que os contêm. Contudo, as células-tronco mesenquimais (CTMs) apresentam poucos marcadores imunofenotípicos específicos, sendo sua caracterização estabelecida pela identificação de um perfil de marcadores específicos e não específicos. Essa imunofenotipagem é realizada com a utilização de anticorpos monoclonais que reconhecem esses antígenos de superfície da membrana celular, conforme demonstrado em estudos contemporâneos. Tendo em vista a inexistência no mercado de testes rápidos para identificação das CTM-TA, optou-se em delinear um projeto que desenvolvesse a ferramenta diagnóstica explorando seu potencial de uso, caracterizando os anticorpos monoclonais previamente produzidos a partir de células-tronco mesenquimais do tecido adiposo humano utilizando as técnicas de Western blotting e Citometria de fluxo com posterior análise proteômica a fim de identificar a especificidade dos mesmos em um processo de validação e inova... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor