Orientador: Prof. Dr. Renato Tambara Filho / Co-orientador: Prof. Dr. Antônio Carlos L. Campos / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa: Curitiba, 04/09/2009 / Bibliografia: f. 50-62 / Resumo: INTRODUÇÃO: A neoplasia prostática é a mais incidente nos homens, apresentando um curso clínico variável. Procuram-se métodos que melhor identifiquem estas variáveis, melhorando a acurácia prognóstica e facilitando a escolha do tratamento. OBJETIVOS: Avaliar a expressão imuno-histoquímica do MIB-1, CD34 e p27 no carcinoma localizado de próstata. Correlacionar a expressão desses marcadores com PSA, escore de Gleason, e estádio patológico; e analisar os fatores envolvidos com recidiva tumoral. MATERIAL E MÉTODOS: Foram estudados 100 pacientes submetidos à prostatectomia radical com doença localizada (T1c a T2c), cujos blocos histológicos foram analisados e submetidos ao preparo imuno-histoquímico para os três marcadores. RESULTADOS: Dos 100 pacientes, 26 % recidivaram num seguimento médio de 36,7±18,8 meses. A recidiva estava relacionada de forma significativa com o PSA (p=0,002), escore de Gleason (p=0,006), estádio patológico (p<0,0001) e com a maior expressão do CD34 na área tumoral(p=0,025). A expressão tecidual foi negativa: 63% e 40% respectivamente para o MIB-1 e p27. O MIB-1 e o CD34 correlacionaram-se com o PSA, escore de Gleason, estadiamento patológico e com maior chance de recidiva. O p27 correlacionou-se apenas com o escore de Gleason. CONCLUSÃO: O MIB-1 e o CD34 mostraram-se, similares aos fatores prognósticos essenciais, preditores para a recidiva da doença. / Abstract: INTRODUCTION: Prostate cancer is the most frequent in men, with a variable clinical course. We are searching for methods to better identify these variables, improving prognostic accuracy and facilitating the choice of treatment. OBJECTIVES: To evaluate the immuno-histochemical tissue expression of MIB-1, CD34 and p27 in localized prostate carcinoma. To correlate the expression of these markers with: PSA, Gleason score and pathological stage, and analyze the factors involved with tumor relapse. MATERIAL AND METHODS: We studied 100 patients who went radical prostatectomy with localized disease (T1c to T2c). The surgical specimens were properly prepared and evaluated for expression of three markers immuno-histochemical. RESULTS: Of the 100 patients, 26% relapsed in a median follow up of 36.7 ± 18.8 months. The relapse was related significantly with PSA (p = 0.002), Gleason score (p = 0.006), pathological stage (p <0.0001) and with the highest expression of CD34 in tumor area (p = 0.025). The tissue expression was negative in 63% and 40% respectively for the MIB-1 and p27. The MIB-1 and CD34 correlated with the PSA, the Gleason score and pathological stage and with greater chance of relapse. The p27 correlated only with the Gleason score. CONCLUSION: The MIB-1 and CD34 showed up, similar to the key prognostic factors, to be predictors for disease relapse.

SILVA, Silvana de Fátima Ferreira da, também é conhecida em citações bibliográficas por: FERREIRA, Silvana / Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-27T21:44:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Silvana de Fátima Ferreira da Silva.pdf: 1951264 bytes, checksum: a74e449927a46092c45afce0bc99d7eb (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-09-05T19:01:09Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Silvana de Fátima Ferreira da Silva.pdf: 1951264 bytes, checksum: a74e449927a46092c45afce0bc99d7eb (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-05T19:01:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) TESE Silvana de Fátima Ferreira da Silva.pdf: 1951264 bytes, checksum: a74e449927a46092c45afce0bc99d7eb (MD5) Previous issue date: 2005-06-27 / A toxoplasmose é uma zoonose de larga distribuição mundial, causada pelo Toxoplasma gondii, protozoário intracelular obrigatório. Uma vez o indivíduo infectado, o parasito se mantém latente por vários anos, pois o rápido avanço da imunidade humoral e celular restringe eficientemente a ação patogênica do parasito. Entretanto, a imaturidade do sistema imune (como em fetos e recém-nascidos) ou a sua deficiência (no caso dos indivíduos imunodeprimidos) pode causar séria morbidade ou mortalidade. A parasitose apresenta uma variedade de sinais e sintomas clínicos, e o diagnóstico laboratorial torna-se uma ferramenta de importância fundamental. O emprego de uma metodologia diagnóstica que consiga discernir entre infecção latente e ativa é o principal meio para diminuir os danos provocados pelo parasita. O presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de uma estratégia diagnóstica na tentativa de elucidar a fase da doença. Para alcançar esse objetivo foi desenvolvido um ensaio sorológico enzimático (enzyme-linked immunosorbent assay – ELISA) utilizando anticorpo monoclonal da classe IgA (mab-IgA - monoclonal antibodies IgA) contra a enzima Nucleosil Trifosfato Hidrolase (NTPase), produzida por taquizoítos de Toxoplasma gondii (forma ativa do parasito). Para desenvolvimento do método, o mab-IgA foi produzido por expansão celular e purificado por meio de sistema de duas fases aquosa: polietileno glicol e fosfato (SDFA: PEG-Fosfato). O anticorpo purificado foi fixado em placas de ELISA e testado frente a soros de indivíduos na fase ativa da infecção, apresentando a forma ocular da doença, diagnosticados clinicamente por meio de fundoscopia. Os resultados revelaram uma concordância entre o teste desenvolvido e o diagnóstico clínico, apresentando especificidade de 86,30% e sensibilidade de 85,18%, com eficiência de 0,89 revelando a capacidade do método em identificar infecção ativa. Diante dos resultados, o presente estudo sugere a possibilidade da utilização de anticorpo monoclonal anti-NTPase de Toxoplasma gondii como marcador de fase ativa. / Toxoplasmosis is a worldwide spread zoonotic disease caused by Toxoplasma gondii, an obligate intracellular protozoan. Once an individual is infected, the parasite remains latent for several years, since the fast advance of humoral and cellular immunity effectively restrains the parasite’s pathogenic action. However, an immature immune system (as in fetuses and newborns) or its deficiency (as is the case of immunocompromised individuals) may cause serious morbidity or mortality. The parasitosis presents a variety of clinical signs and symptoms, and laboratory diagnosis becomes a fundamental tool. The use of a diagnostic methodology capable to distinguish between latent and active infection is the main means to reduce the damages caused by the parasite. The objective of this study was to develop a diagnostic strategy in an attempt to elucidate the stage of the disease. To achieve that goal, an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed using an IgA-class monoclonal antibody against the Nucleosil Triphosphate Hydrolase enzyme (NTPase), produced by Toxoplasma gondii tachyzoites (the parasite’s active form). To develop the method, an IgA monoclonal antibody was produced by cell expansion and purified by means of an aqueous two-phase system: polyethylene glycol and phosphate (ATPS: PEG/Phosphate). The purified antibody was fixed on ELISA plates and tested against sera from individuals in the active phase of the infection, presenting the ocular form of the disease, clinically diagnosed by ophtalmoscopy. The results showed conformity between the developed test and the clinical diagnosis, presenting specificity of 86.30% and sensitivity of 85.18%, with an efficiency of 0.89 revealing the method’s capability to identify active infections. In view of these results, the present study suggests the possibility of using Toxoplasma gondii’s anti-NTPase monoclonal antibody as an active phase marker.

Orientador: Julia Keiko Sakurada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T23:40:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Orsi_MariaAngela_M.pdf: 4219517 bytes, checksum: 3b74fc60bfe20e7919cb4ebd6130a066 (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: Os estudos sobre as protease do Trypanosoma cruzi foram realizados utilizando-se as formas epimastigota do parasita. Embora a enzima SH-dependente tenha sido detectada nas diferentes formas evolutivas do parasita (RANGEL et alli,1981 b). No entanto existem poucos estudos das enzimas presentes nas formas tripomastigota e amastigota. Neste trabalho, procuramos investigar através da eletroforese em gel de poliacrilamida, a expressão da proteinase nas formas tripomastigota e amastigota com capacidade de degradara gelatina e obtenção de anticorpos monoclonais reati vos com aproteinase de epimastigota. Os resultados obtidos, no presente trabalho mostram que as formas tripomastigota e amastigota expressam o mesmo pOlipeptideo de 48 kDa com atividade enzimática em pH ácido. Entretanto em pH neutro foi detectada uma banda de 35 kDa, e esse polipeptideo não apresentou nenhuma correlação antigênica com aproteinase de epimastigota.O efeito dos anticorpos monoclonais com especificidade para a proteinase na invasão e multiplicação do T. cruzi nas células hospedeiras mostrou um aumento da infectividade, sugerindo que as proteinase do T.cruzi interferem negativamente na penetração e multiplicação do parasita nas células hospedeiras / Mestrado / Imunologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadores: Lucila Costallat Ricci, Wirla M. S. Cunha Tamashiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T14:19:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Augusto_VivianeDelghingaro_M.pdf: 11601280 bytes, checksum: 69569f53acee2f50cd0b8d0768b0bcca (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Neste trabalho, foram criteriosamente avaliados nove anticorpos monoc1onais (MAbs) reativos para PCFO2, quanto ao reconhecimento de epítopos na fimbria purificada a partir de duas amostras diferentes, produtoras da mesma e também frente a outros fatores de colonização (PC) purificados, expressos por amostras de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) associada à diarréia humana. Em provas preliminares de "Western blot", este fator apresentou reações positivas não apenas frente aos soros polic1onais anti-PCFO2 como com anti-CF AII, anti-CF A/II (CSl, CS3), anti-CFA/II (CS2, CS3), anti-CFA/III, anti-CFA/IV (CS4, CS6) e anti-PCFO159. Provas de ELISA indireto, desenvolvidas tanto com os 4 MAbs pertencentes ao isotipo IgA, como com os 5 do isotipo IgG2b, confirmaram estes resultados, apenas frente aos FC do complexo CF A/II. Porém, em revelações no "Western blot" apenas bandas com pesos moleculares (p.M.) correspondentes à CSl, CS2, CS3, CFA/III, CS4 e CS6 foram reveladas, demonstrando apresentarem estes antígenos homologia de epítopos com PCFO2. Estes resultados foram confirmados, também de forma direta, em reações de imunomicroscopia eletrônica reveladas com os MAbs lDIC5, do isotipo IgA e 2C4F12, do isotipo IgG2b. Pesquisando-se diferenças de reconhecimento de epítopos entre os MAbs, buscou-se obter subunidades protéicas da fimbria PCFO2 após tratamento com 6M de Guanidina HCI-0,05M Tris. As frações obtidas após ultrafiltrações deste material, em membranas XM50 e YMIO, foram analisadas em SDS-P AGE e em provas de "Western blot". Pelos resultados obtidos, verificou-se a presença de uma única banda reconhecida pelos MAbs apresentando P.M. correspondente à PCFO2. Estes dados comprovam ser esta fimbria constituída por uma única subunidade protéica de 34,5 kDa. Após a avaliação da afinidade e especificidade das soluções preparadas com os 9 anticorpos monoc1onais em "Western blot", estes foram titulados por ELISA indireto, determinando-se que as preparações dos MAbs lDlC5 e 2C4F12 apresentavam maior título. Desta forma, estes foram selecionados para a padronização da Prova de Inibição do ELISA, avaliando-se, paralelamente, também os "pools" preparados com a mistura dos líquidos ascíticos dos dois diferentes isotipos. Assim sendo, a concentração do antígeno e dos MAbs foi padronizada, de tal forma que amostras expressando PCFO2 reduzissem a D.O. da reação controle para valores superiores a 50%. Na adequação da técnica, 66 cepas de E. coli, sendo 51 amostras ETEC e 16 não ETEC, foram avaliadas. Destas, 4 cepas isoladas de dois casos de diarréia no nosso meio, foram identificadas como produtoras de PCFO2 / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Adilson Leite / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T02:31:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cancado_LeticiaJungmann_M.pdf: 8379211 bytes, checksum: 6919d2f69023aa6c69d933716edf3d7a (MD5) Previous issue date: 2002 / Mestrado

Orientadores: Luis Antonio Violin Dias Pereira, Paulo Pinto Joazeiro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:42:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arroteia_KelenFabiola_M.pdf: 4085296 bytes, checksum: b16df432ee68b5350004243c026c3866 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O processo de fecundação em mamíferos depende de uma seqüência de eventos que culminam na ativação do oócito pelo espermatozóide. A diferenciação completa das células germinativas testiculares em células com capacidade fecundativa envolve não somente o testículo, mas também o epidídimo, ducto deferente e trato reprodutor feminino. No epidídimo acontece a maturação epididimária dos espermatozóides, pela qual ocorrem alterações no padrão molecular da superfície do gameta, visando a capacidade de fecundação. Diversas proteínas sintetizadas pelas células epiteliais do epidídimo, inicialmente liberadas na luz deste órgão, parecem ser posteriormente localizadas na superfície ou mesmo no interior da vesícula acrossômica do espermatozóide. A aquisição da capacidade de fertilização pelo espermatozóide tem sido correlacionada com a nova organização molecular da membrana adquirida durante o fluxo do mesmo a partir da cabeça em direção à cauda do epidídimo. A obtenção de anticorpos monoclonais que reconhecem os antígenos expressos pelas células germinativas testiculares durante seus processos contíguos de diferenciação, bem como aqueles expressos pelas células dos ductos pelos quais os espermatozóides transitam durante o processo de maturação têm constituído importante estratégia para permitir a geração de um mapa das moléculas que atuam na preparação do espermatozóide para a fecundação. O anticorpo monoclonal (Amc) TRA (testicular germ cells immunized to rat- monoc/onal antibody) 54 reconhece um antígeno localizado em espermatócitos e espermátides dos túbulos seminíferos de camundongos C57 BL/6 com idade superior a 24 dias pós-parto (d.p.p.). Resultados preliminares mostraram que o mesmo Amc -reconhece um antígeno nas células epiteliais da cabeça do epidídimo, bem como espermatozóides da luz deste órgão. Este estudo teve por objetivo caracterizar a expressão do antígeno reconhecido pelo Amc TRA 54 nas células epiteliais do epidídimo quanto à ontogenia, características bioquímicas e regulação da expressão. Em conjunto, os dados obtidos com o desenvolvimento deste trabalho poderão auxiliar no esclarecimento do modelo da expressão do antígeno identificado em células germinativas e em células somáticas epiteliais e, adicionalmente, poderão permitir inferências acerca do papel funcional desta molécula na biologia da reprodução / Abstract: In mammals, fertilization depends on a sequence of events that culminates in the activation of the oocyte by the spermatozoa. The complete differentiation of the testicular germ cells in cells with fertilization ability involves the testis, epididymis, vas deferens and female reproductive organs. In the epididymis, the membrane surface of the spermatozoa may be modified, t hrough a process k nown as epididymal maturation. S everal proteins synthesized and secreted by the epididymal epithelial cells can be further located on the spermatozoa membrane surface or even though inside its acrosomal vesicle. The acquisition of the fertilization ability by the spermatozoa has been related with a new molecular organization of the membrane provided during the epididymal transit. The production of monoclonal antibodies (mAb) that recognizes antigens exclusively expressed by testicular germ cells or by the cells of the ducts through the spermatozoa passes during its maturation have been important approach to permit the elaboration of the molecular map involved in the spermatozoa preparation. The mAb TRA 54 recognizes an antigen located in spermatocytes and spermatids of the seminiferous tubules of C57 BU6 mice more than 24 days old. Preliminary results showed that this mAb also recognizes an antigen in the epithelial cells of the caput of the epididymis and in the luminal spermatozoa. This work was performed in order to obtain additional information about the antigen recognized by the mAb TRA 54 in the epididymal epithelial cells for ontogenic expression, biochemical characteristics and expression regulation. The results obtained with the development of this work could contribute to elucidate the expression pattem of the antigen recognized by the antigen identified in both germinative and somatic cells and, -additionally, could permit the formulation of hypothesis around the functional role of this molecule in the reproductive biology / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Marcos Antonio Machado / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T23:46:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Justino-Kuga_ElaineAparecida_M.pdf: 5500665 bytes, checksum: 5d07026a0dc49cbeb174c82abd0c0995 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Estudos preliminares sobre a localização de epítopos na proteína do capsídeo (CP) de três isolados de CTV ('Pêra IAC', 'Pêra CB-22' e 'Pêra CB-104') foram realizados em três etapas. Na primeira, foi realizada a amplificação de oito regiões distintas do gene da CP, codificantes para três regiões Nterminais (aa 1 até 70; aa 1 até 120; aa 1 até 170), três regiões C-terminais (aa 70 até 223; aa 120 até223; aa 170 até 223) e duas regiões internas da CP (aa 37 até 67 e aa 64 até 94) onde haviam sido determinadas diferenças significativas entre as CPs dos três isolados. Na segunda etapa, foram avaliadas duas estratégias para expressão dos peptídeos de interesse: clonagem em vetor de expressão através de ligação AT (vetor Pinpoint TM Xa-1 T, Promega) e clonagem das seqüências alvo em vetores do sistema de expressão pET. O vetor Pinpoint TM Xa-1 T, carreando como inserto o gene inteiro da CPCTV, obtido como produto de PCR após amplificação do cDNA dos três isolados, transformou células competentes de E. coli JM109, mas após indução com IPTG, não houve expressão da proteína de fusão esperada. Os vetores do sistema pET, após ligação das seqüências alvo, não transformaram células competentes de E. coli BL21(DE3)pLysS. Na terceira etapa, três proteínas recombinantes (MBP-CPCTV, CB-22 e CB-104) produzidas a partir da expressão do gene da CP-CTV dos três isolados, foram clivadas com brometo de cianogênio. Os produtos de clivagem foram avaliados através de '¿Western Blotting¿ contra anticorpos monoclonais específicos para CTV. O monoclonal IC-04.6, desenvolvido contra a proteína recombinante CB-22 detectou epítopos, numa reação intensa, em peptídeos com massa estimada em 27 kDa e 18 kDa, originários da CB-22; o monoclonal 39-08, desenvolvido contra a proteína recombinante CB-104 detectou epítopos, numa reação moderada, em peptídeos com massa estimada de 28 kDa e 14 kDa, originários qa CB-104; o monoclonal MCA-13, desenvolvido contra um isolado da Florida, detectou epítopos em peptídeos originários das proteínas recombinantes MBP-CPCTV e CB-104; o monoclonal 3DF1, desenvolvido contra isolados de CTV espanhóis, detectou epítopos em peptídeos originários da CB-22 e CB-104 e o monoclonal 3CA5, desenvolvido contra isolados espanhóis de CTV, detectou epítopos apenas num peptídeo com massa estimada de 18 kDa presente na CB-22. Estes resultados sugerem que diferentes epítopos são reconhecidos pelos cinco monoclonais avaliados e que serão necessárias novas estratégias para avaliá-los / Abstract: Preliminary studies about the epitopes location in the capside protein of the isolates of the citrus tristeza virus of three isolate ('Pêra IAC', 'Pêra CB-22' and 'Pêra CB-104') were accomplished. In the first phase, the amplification was accomplished with specific direct and reverse primers of eight different regions of the CP gene, coding for three N-terminal peptides (aa 1 to 70, aa 1 to 120 and aa 1 to 170), three C-terminal peptides (aa 70 to 223, aa 120 to 223 and aa 170 to 223) and two internal peptides of CP (aa 37 to 64 and aa 64 to 90). In the second phase they were appraised two strategies for expression of the peptides: cloning in expression vector through AT cloning site (vector Pinpoint TM Xa-1 T promega), and cloning of the coding sequences in vectors of the system pET. Vector Pinpoint TM Xa-1, containing as insert the whole gene of CP, obtained as PCR's product after amplification of the three isolates' cDNA, transformed competent cells E. coli JM109, but after induction with IPTG there was not expression of the peptides of interest. The vectors of the pET system didn't transform competent cells E. coli BL21 (DE3)pLysS. In the third phase, three recombinant proteins (MBP-CPC1V, CB-22 and CB-104), produced from the expression of the CP-C1V gene of the three isolates, they were broken with cyanogen bromide. The break products were evaluated through "Western Blotting" against monoclonal antibodies specific for CTV. The monoclonal IC-04.6, developed against the recombinant protein CB-22 detected epitopes, in an intense reaction, in peptides with mass esteemed in 27 kDa and 18 kDa, original of CB-22; the monoclonal 39-08, developed against the recombinant protein CB-104 detected epitopes, in a moderate reaction, in peptides with esteemed mass of 28 kDa and 14 kDa, original of CB-104; the monoclonal MCA-13, developed against the T-36 isolate from Florida, detected epitopes in original peptides of the recombinants proteins MBP-CPCTV and CB-104; the monoclonal 3DF1, developed against Spanish isolates of CTV, detected epitopes in original peptides of CB-22 and CB-104 and the monoclonal 3CA5, developed against Spanish isolates of C1V, just detected epitopes in a peptide with esteemed mass of 18 kDa present in CB-22. These results suggest that the five monoclonal recognizes different epitopes and that will be necessary new strategies to evaluate them / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientadores: Jorge Rizzato Paschoal, Albina M. Altemani / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T16:18:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bianchini_WalterAdriano_M.pdf: 5535625 bytes, checksum: 54d2ccee014d2e36e194de8a7afac444 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: As neoplasias indiferenciadas em cabeça e pescoço e base do crânio não são raras: ocorrem tanto em mucosas como em glândulas salivares, em partes moles e em linfonodos. O diagnóstico histopatológico preciso é fundamental na conduta terapêutica ideal e na caracterização do prognóstico de cada caso. o objetivo deste estudo foi avaliar a ocorrência destas neoplasias em nosso serviço, sua distribuição conforme o padrão celular, a idade do paciente e a localização do tumor, avaliando-se a freqüência dos casos em que o exame imuno-histoquímico foi decisivo para o diagnóstico diferencial conclusivo das mesmas. Foram estudadas 43 biopsias de neoplasias indiferenciadas diagnosticadas no ambulatório da Disciplina de Otorrinolaringologia da UNICAMP, no período de 1990 a 1997. Aplicou-se um painel imuno-histoquímico conforme o método complexo avidinabiotina-peroxidase (ABC), dependendo da idade dos pacientes, da localização do tumor e do padrão citoarquitetural das células neoplásicas. O laudo final foi emitido após nova análise conjunta com as lâminas coradas pela técnica da hematoxilina e eosina. Os locais de ocorrência mais comuns foram os linfonodos, 20,93%; faringe e pescoço, 16,28%; seios paranasais, 13,95% e cavidade nasal, 11,63%. Estas neoplasias foram mais prevalentes na sétima década de vida (34,88%), sendo duas vezes mais prevalentes em homens do que em mulheres. O exame imuno-histoquímico permitiu o diagnóstico conclusivo em 60,47% dos tumores e o sugeriu em 20,93%. Os padrões citoarquiteturais mais comuns foram: célula redondas, 51,16%; células epitelióides, 20,93%; células fusiformes, 16,28%; mixóides, 9,30% e células pleomórficas, 2,33% / Abstract: Head and neck and skull base undifferentiated tumors are not unusual. They can arise in mucosa such as in salivary glands, soft tissues or in lymph nodes. Suitable therapy and prognosis of every case depends upon precise histopathological diagnosis. In this paper we evaluated the ocurrence of these tumors in our service and the way in wich they are distributed according to cellular pattem, patient' s age and tumors localization. Besides, we studied the role of immunohistochemical techniques conceming conc1usive diagnosis. We reviewed 43 biopsies performed in our service from january 1990 to december 1997, diagnosticated as undifferentiated tumors. We applied an immunohistochemical panel according to the method avidin-biotin-peroxidase complexo The final diagnostic was achieved after comparation to the biopsies stained with hematoxylin and eosin technique. The most frequent localization of undifferentiated tumors was lymph nodes, 20,93%; pharynx and neck, 16,28%; paranasal sinus, 13,95% and nasal cavity, 11,63%. They were more prevalent on seventh decade of life (34,88%), and twice more prevalent in men than women. The immunohistochemical technique allowed conc1usive diagnosis in 60,47% of tumors and was suggestive in 20,93% of the biopsies. The most prevalent cellular pattem was round cell (51,16%), followed by epithelioid cell (20,93%), spindle cell (16,28%), myxoid pattem (9,30%) and pleomorfic cell (2,33%). The results of this work demonstrate the role of immunohistochemical technique on conc1usive diagnostic of undifferentiated tumors / Mestrado / Otorrinolaringologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientador : Humberto de Araujo Rangel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-17T14:06:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tamashiro_WirlaMariadaSilvaCunha_D.pdf: 4765290 bytes, checksum: f4c7892cd25a1ac49fbd89dc0752501b (MD5) Previous issue date: 1988 / Resumo: O presente trabalho teve três objetivos principais: (i) estudar a resposta imune humoral específica de camundongos F1 (CBA x C57 B1/10) infectados com a cepa Y do T.cruzl, (ii) produzir anticorpos monoclonais anti-T.cruzl, através da tecnologia de hibridomas, utilizando-se para as fusões células de mieloma SP2/0 e células esplênicas de camundongos F1 cronicamente infectados com o parasita, (iii) caracterizar os anticorpos monoclonais obtidos quanto a sua reatividade para os antígenos expressos nos diferentes estágios do T.cruzi ... O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Doutorado / Imunologia / Doutor em Ciências Biológicas

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2015. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-06-09T16:34:51Z No. of bitstreams: 1 2015_JuanFernandoRiascoPalácios.pdf: 14164265 bytes, checksum: be8665ac0b5a23fed04eb06845b22157 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-06-10T18:20:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_JuanFernandoRiascoPalácios.pdf: 14164265 bytes, checksum: be8665ac0b5a23fed04eb06845b22157 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-10T18:20:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_JuanFernandoRiascoPalácios.pdf: 14164265 bytes, checksum: be8665ac0b5a23fed04eb06845b22157 (MD5) / Os anticorpos monoclonais são glicoproteínas especializadas com capacidade de reconhecer outras moléculas (antígenos). Eles são ferramentas importantes na clínica e biotecnologia e têm sido úteis no diagnóstico e tratamento de doenças infecciosas, inflamatórias, imunológicas e neoplásicas, assim como no estudo da interação patógeno/ hospedeiro, e na detecção e quantificação de diversas moléculas. Os anticorpos monoclonais murinos (mAb) apresentam aplicações terapêuticas limitadas devido à sua natureza heteróloga, que pode gerar respostas imunogênicas e consequente a perda de atividade. A incorporação de técnicas de biologia molecular, e engenharia genética e proteomica tem aumentado a produção e utilização de anticorpos monoclonais, desenvolvendo técnicas como hibridoma, quimerização, e humanização de anticorpos monoclonais totalmente humanos. Ao longo dos últimos anos, novas gerações de anticorpos monoclonais (mAbs) anti-CD20 têm sido desenvolvidas para potenciais vantagens sobre a clássica e primeira geração do mAb rituximabe, Apesar de seus sucessos, nem todos os pacientes respondem ao tratamento com rituximabe e quase todos tem um recaída em seu tratamento. Assim, melhorar as propriedades deste anticorpo para melhorar a sua eficácia é muito desejável. Comparado com o rituximabe, novos mAbs têm atividade anti-tumor melhorada, resultante do aumento da citotoxicidade dependente do complemento (CDC) e / ou citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC). Neste aspecto, cultivos de células animais são os sistemas de expressão para essas proteínas preferenciais, que requerem modificações póstradução. É assim que o grupo de Imunologia Molecular da Universidade de Brasília tem se interessado pela produção de proteínas heterólogas de interesse clínico em células de mamíferos desde 2001. Este trabalho teve como objetivo a produção de novos anticorpos anti CD-20 na forma de fragmento recombinante FvFc em sistema de expressão heteróloga em células de ovário hamster chinês (CHO-K1) e em células de rim embrionário humano (HEK-293). A eficiência de transfecção para ambas as linhagens celulares foi avaliada comparativamente, bem como a expressão transiente. Os resultados indicam as células de mamífero como um sistema ótimo para a produção de proteínas heterólogas, Os segmentos dos genes correspondentes a três versões recombinantes humanizadas homologas ao anticorpo monoclonal quimérico rituximabe obtidas por CDR graffting (Zaparolli 2015) A, O, e L) e uma versão híbrida elecionada por VL shuffling (H), foram amplificados e clonados num vetor de expressão para células de mamífero. Os resultados mostraram uma eficiência de transfecção e produção de anticorpos menor na linhagem de células CHO-K1 em comparação com HEK-293, embora estas fossem estáveis para a produção de anticorpo em transfectomas estáveis. Os anticorpos recombinantes produzidos foram purificados por cromatografia de afinidade, quantificados por ELISA, e analisados em relação a sua qualidade por SDS-PAGE, eletroforese capilar (Bioanalyzer) e Western Blotting. Os resultados deste projeto têm demostrado que fomos bem sucedidos na expressão e produção das construções humanizadas do anticorpo anti-CD20. / Monoclonal antibodies are specialized which have the ability to recognize other molecules (antigens). They are important tools in clinical practice and biotechnology and have been useful in the diagnosis and treatment of infectious, inflammatory, immunological and neoplasic diseases, as well as in the study of the host/pathogen interaction, and in the detection and quantification of diverse molecules. Murine monoclonal antibodies (mAb) present limited therapeutic applications because of their heterologous nature, which can generate immunogenic responses and consequent loss of activity. The incorporation of molecular biology, proteic and genetic engineering have extended the production and uses of monoclonal antibodies, finding techniques like hybridoma, chimerization, humanization and fully human monoclonal antibodies. Over the last few years, new generations of anti-CD20 monoclonal antibodies (mAbs) have been developed for potential benefits over the classical, first-generation mAb rituximabe. Despite its successes, not all patients respond to rituximabe therapy and virtually all relapse. Improving the properties of rituximabe to enhance its efficacy further is therefore highly desirable. Compared with rituximabe, new mAbs have enhanced antitumor activity resulting from increased complement-dependent cytotoxicity (CDC) and/or antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC). In this aspect animal cell, cultures are the preferential expression systems for those proteins, which require extensive posttranslational modifications. Our research group has been interested in the production of heterologous proteins in mammalian cells since 2001. This work aimed the production of new antibodies anti CD-20 as a recombinant FvFc fragment, in heterologous expression system Chinese hamster ovary cells (CHO-K1) and Human Embryonic Kidney cells (HEK-293) the transfection efficiency for both cell lines was comparatively evaluated, as well as the transient expression. The results indicate mammalian cells as an optimal system for the production of heterologous proteins, Were amplified and cloned into an expression vector for mammalian cells the corresponding gene segments the three recombinant versions humanized homologous to monoclonal quimeric Rituximabe antibody obtained by CDR graffting (Zaparolli 2015) A,O and L) and a hybrid version selected by VL shuffling (H) . The results showed a lower transfection efficiency and production of antibodies in the CHO-K1 cell lineage compared to HEK- 293 cells, although these were stable for the production of antibody in stable transfectomas. The antibodies were purified by affinity chromatography were analyzed by ELISA, SDS-PAGE, capillary electrophoresis (bioanalyzer) and Western Blotting, for the production and quality of intact immunoglobulin. The results of this project have shown that we have succeeded in the expression and production of humanized constructs anti-CD20 antibody.