Submitted by Luiz Felipe Barbosa (luiz.fbabreu2@ufpe.br) on 2015-04-17T13:37:23Z No. of bitstreams: 2 Dissertaçao Paulo Euzebio Cabral Filho.pdf: 4161443 bytes, checksum: a3e56e5bbcd4334fd54902b584e380ab (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T13:37:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertaçao Paulo Euzebio Cabral Filho.pdf: 4161443 bytes, checksum: a3e56e5bbcd4334fd54902b584e380ab (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-07-30 / FACEPE / Há 308 antígenos distribuídos em 30 grupos sanguíneos, sendo o sistema ABO considerado o mais importante em termos transfusionais, transplantes de órgãos e em perícia criminal. As técnicas de biologia molecular são geralmente empregadas para investigações mais detalhadas de grupos e subgrupos ABO, porém são laboriosas e podem ter um custo elevado. Por essa razão, metodologias alternativas, como as baseadas em fluorescência, vêm ganhando espaço, pois além de serem menos laboriosas, são rápidas e de alta sensibilidade, permitindo a identificação e a quantificação de biomoléculas com alta especificidade. É nesse contexto, que os quantum dots (QDs), por apresentarem excepcional resistência à fotodegradação e uma superfície ativa para variadas funcionalizações e conjugações, vêm se destacando como potenciais nano-sondas fluorescentes em Ciências da Vida. Assim, neste trabalho QDs de CdTe/CdS foram sintetizados e conjugados covalentemente aos anticorpos monoclonais anti-A e anti-B, bem como à lectina Ulex europaeus (anti-H) e aplicados no estudo de grupos e subgrupos sanguíneos do sistema ABO através de citometria de fluxo. Os estudos de bioconjugação foram realizados através de espectroscopia por correlação de fluorescência, eletroforese em gel de poliacrilamida, ensaio fluorescente em microplaca e ensaios de inibição. Após a conjugação foram investigados os antígenos de doadores A1, B1, A1B1, O e do subgrupo A (A1, A2, A3, AX, e Ael). O sistema QDs-(anti-A) marcou uma média de 97% das hemácias A1, 95% de A1B1 e conseguiu diferenciar alguns subgrupos A tanto pelo perfil como pela eficiência de marcação (A2 - 68%; A3 - 11%; AX e Ael - 5%). Os QDs-(anti-H) marcaram uma média de 85 % das hemácias O e mostraram-se como uma importante ferramenta complementar na análise dos subgrupos A (A2 - 70%; AX e Ael - 30%), pois nesses casos a enzima não converte toda a fucose, reconhecida pelo anti-H e presente na membrana, em antígeno A. Além disso, os QDs-(anti-B) marcaram também efetivamente as hemácias B1 (95%) e A1B1 (80%). Tanto para QDs-(anti-A) quanto para QDs-(anti-B) foram utilizadas hemácias O como controle, por não apresentarem antígenos A e/ou B na membrana. Até onde sabemos este foi o primeiro estudo com citometria sobre o sistema ABO que utilizou células não fixadas, imunofluorescência direta e que correlacionou antígenos A e H na membrana das hemácias de subgrupos A. Por isso, acreditamos que esses conjugados podem ser aplicados como uma ferramenta menos laboriosa, rápida, de baixo custo, quantitativa e complementar de análise da biologia eritrocitária. Além disso, esses conjugados podem ainda ser aplicados para uma melhor compreensão da distribuição destes antígenos em células ou tecidos cancerosos e em células tronco.

Orientador : Lucila Costallat Ricci / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T21:12:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_YliriaFerreirada_M.pdf: 8250034 bytes, checksum: 4153a375169220d327ec671517b9ecc7 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Cepas de Escherichia coZi podem apresentar mecanismos e fatores de virulência diversos podendo causar no homem, principalmente, infecções intestinais. Desta forma, tendo-se como base os dados clínicos, expressão de mecanismos e de fatores de virulência, dados epidemiológicos, sorotipagem e análises moleculares, dentre outros, as cepas de E. coZi diarreiogênicas humanas podem ser classificadas em pelo menos sete grupos de enteropatogenicidade. Com relação ao grupo diarreiogênico representado pela E. coZi enterotoxigênica (ETEC), a identificação destes patógenos incluem a pesquisa das enterotoxinas STa e/ou LT e a expressão de fatores de colonização (FC). Estes últimos, também denominados de adesinas, permitem a colonização da bactéria à mucosa do intestino delgado, podendo variar morfológica e antigenicamente. Vários FC já foram identificados e caracterizados em cepas ETEC isoladas de diferentes regiões geográficas. Em trabalhos anteriores, a runbria PCF02 foi identificada, caracterizada e purificada a partir de 2 cepas ETEC LT+ pertencentes ao sorogrupo 02, isoladas no nosso meio. Na seqüência dos trabalhos, a partir da fimbria purificada, 9 hibridomas secretores de anticorpos monoclonais reativos com PCF02 foram obtidos, seus isotipos determinados e soluções ascíticas dos mesmos preparadas e tituladas em provas de Western blotting e ELISA. Após a padronização da prova de Inibição do ELISA, desenvolvida com MAbs dos isotipos IgA (4) e IgG2b (5) e pools dos mesmos, mais 5 amostras diarreiogênicas de E. coZi foram identificadas como sendo PCFO2+. Possível homologia (analogia) de epítopos com CFAIII foi verificada com estes MAbs, através de observações em imunomicroscopia. Neste trabalho, dando continuidade aos estudos relacionados ao PCFO2, procurou-se inicialmente reavaliar-se a metodologia de purificação e comprovar-se a Prova de Inibição do ELISA padronizada para a identificação desta fimbria, além de verificar-se possíveis homologias de epítopos entre PCF02 e outros FC, descritos como os mais freqüentemente identificados em cepas ETEC isoladas de fezes humanas. Com base nos resultados obtidos, comprovou-se que MAbs do isotipo IgA reconhecem epítopos distintos dos MAbs IgG2b, uma vez que estes últimos são capazes de reagirem com uma segunda subunidade de 15 kDa de PCF02, em provas de Westem blotting. Esta nova subunidade desta fímbria talvez deva corresponder ao "tip" da mesma. Pelos experimentos desenvolvidos verificou-se que apenas as amostras 312-2 e 312-3, dentre as cinco cepas identificadas inicialmente como PCF02+, expressavam realmente esta fímbria apresentando, também, a fração de 15kDa. Quanto às amostras D242 e D243, estas demonstraram pertencer ao complexo CF AIIV expressando CS5 e CS6 sendo que esta última subunidade apresenta epítopos idênticos aos expressos em PCF02. Quanto às amostras pertencentes ao sorogrupo 02, nenhuma reação inespecífica foi verificada. Portanto, a Prova de Inibição do ELISA desenvolvida com MAbs do isotipo IgG2b demonstrou ser adequada não só para a identificação das duas subunidades de PCF02 expressas em cepas ETEC, como também de amostras ETEC do complexo CF AIIV, que sempre expressam a subunidade CS6 / Abstract: Some strains of Escherichia coZi may expresses differents mechanisms and virulences factors representing one of several highly adapted clones wich together have evolved the ability to cause a broad spectrum of human and animal diseases. With respect to enteric diarrheal diseases caused by E. coZi strains, seven categories of diarrheagenic E. coZi isolated from human stool cultures have been classified, based on clinical observations, mechanisms, virulence factors, epidemiologic studies, serotypes and molecular analysis. The group represented by enterotoxigenic E. coZi (ETEC) is identified by ST and or L T enterotoxins production and expression of colonization factors (CF). These adhesins allow bacteria colonization on the surface of the small bowel mucosa. Detection of CF in alI ETEC strains identified in the differents geographic regions of the world is impractical because of their great number and heterogeneity. Previous studies, a new putative colonization factor (PCF) was characterized in isolates of ETEC from human diarrheical stools at Ouro Preto (MG) Brazil, expressing just L T and belonging to sorogroup 02. This fimbriae was named PCF02, and with this purified antigen nine hybridomas secreting MAbs (monoclonal antibodies) against PCF02 were produced. For standardization of Inhibition ELISA Test to identify PCF02 in enterotoxigenics strains pools of these MAbs, belonging to isotypes 19A (4) and IgG2b (5), were tested using this immune reaction. After testes new five ETEC strains presented positive results to PCF02, alI belonging to serogroup 02. The aim of this study included improvement of the purification methods of this fimbriae and evidences confirming sensibility and specificity of Inhibition ELISA Test in PCF02 identification. The objectives propossed also included study of possible epitopes similarity between this fimbriae and the most frequently CF reported in epidemiological studies. Ours results confumed that Mabs belonging to 19A and IgG2b isotypes reacted with differents epitopes of PCFO2. With respect to IgG2b a new subunit or adhesin presenting about 15 kDa was identified in Westem blotting reactions in semi-purified proteic extraction of PCFO2 strain. Regarding to Inhibition ELISA Test developed with MAbs belonging to both isotypes datas confirmed expression of PCFO2 just by 312-2 and 312-3 isolates. Antigenic similarities was demonstrated between CS6 belonging to CF AIIV complex and PCFO2. Results demonstrated that D242 and D243 expresse CS5 and CS6. We conclude that the Inhibition ELISA Test developed with MAbs of isotype IgG2b were able to identify not just ETEC strains expressing PCFO2 but also expressing CS6, representing an important tool for the identification of these adhesins / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Laura Sterian Ward / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T07:53:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_AnaPaulaCarneiroDos_M.pdf: 2998875 bytes, checksum: 9fd6ce397ec8eae4d85db8afcd041e9e (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Fragmentos de anticorpos recombinantes têm se tornado ferramentas importantes em diversas áreas, tais como: Biologia Molecular, Farmacêutica e pesquisa Médica. Avanços recentes estão relacionados à aplicação desses anticorpos na oncologia, com estratégias diagnósticas e terapêuticas para diferentes carcinomas. Neste estudo, uma biblioteca de fragmentos de anticorpos monoclonais scFv foi construída utilizando RNA total de sangue periférico de 25 pacientes com Carcinoma Diferenciado da Tireóide. Essa biblioteca scFv foi selecionada utilizando os métodos Bioppaning and Rapid Analysis of Selective Interactive Ligands (BRASIL) e Phage display contra células tumorais de tireóide, com o objetivo de encontrar ligantes específicos a superfície celular tumoral. Os clones selecionados foram identificados por Dot blotting, e a reatividade contra proteínas de tumor, adenoma e bócio foi analisada por Elisa. O clone scFv-C1 apresentou melhor reatividade pelas proteínas tumorais e foi escolhido para a imunoistoquímica. Esta foi realizada com lâmina de Micro-arranjo de tecido (TMA) com duzentos e vinte nove casos de tireóide, sendo 110 Carcinomas, 52 Adenomas Foliculares, 49 Bócios e 18 tecidos normais de tireóide. O anticorpo scFv-C1 reagiu especificamente aos tecidos de câncer, com reatividade ao citoplasma das células tumorais, foi capaz de distinguir o Grupo Câncer do Controle (Bócio, Adenoma e tireóide normal) com significância estatística (p<0,0001) e entre os carcinomas reagiu melhor com os tumores pequenos (TNM 1 e 2) e com pouca agressividade (p=0,050). O fragmento de anticorpo scFv-C1 pode ser um potencial candidato a biomarcador para o diagnóstico do Câncer de tireóide / Abstract: Recombinant antibody fragments have become important tools in several fields, including molecular biology, pharmaceutical and medical research. In this study, a human single-chain variable fragment (scFv) antibody library was constructed using total RNA of leukocyte cells obtained from blood of patients with well differentiated thyroid carcinoma. This scFv antibody library was selected using the Biopanning and Rapid Analysis of Selective Interactive Ligands method (BRASIL) and Phage display technology against tumor thyroid cells, aiming to find specific cell-surface binders. The selected clones were identified by dot blot and ELISA assays and their reactivity analyzed against tumor, goiter and adenoma proteins. One clone (scFv-C1) presented the highest reactivity ratio between cancer and the control group (goiter and adenoma) and was chosen for further analysis. Immunohistochemistry was performed by means of Tissue Microarray with two hundred and twenty-nine thyroid cases (110 carcinomas, 52 follicular adenomas, 49 goiters and 18 normal tissues) including 38 papillary, 42 follicular and 30 variant follicular in the carcinoma group. The scFv-C1 reacted specifically to cancer tissues sections, showed strong reactivity with cytoplasm and was able to distinguish cancer to control groups (goiter, adenoma and normal thyroid) with_statistically significance (p<0,0001). The scFv-C1 fragment antibody described here may be a potential biomarker candidate for diagnostics and prognostics of thyroid cancer / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Evidências epidemiológica e imunológica sugerem que o desenvolvimento da imunidade natural contra doença meningocócica pode está associado com a reação cruzada de antígenos em comuns com Neisseria meningitidis e outras bactérias comensais, como Neisseria lactamica. O Objetivo deste trabalho foi de investigar a imunogenicidade de antígenos de vesículas de membrana externa (OMV) de N. lactamica, com ou sem a presença de Bordetella pertussis (BP), utilizada como adjuvante. Grupos de camundongos neonatos da linhagem BALB/c foram imunizados com antígenos de N. lactamica. Os resultados de nossos estudos mostraram o predomínio de altos títulos de anticorpos dos isótipos IgG e IgM com alta e intermediária avidez, depois das imunizações pela via (i.n) com N. lactamica. A análise do soro por immunoblot mostrou proteínas com reatividade cruzada entre as espécies do gênero Neisseria e os anticorpos monoclonais utilizados neste trabalho. Estes resultados sugerem que antígenos de N. lactamica e N. meningititdis em comum, possam ser importantes na imunidade natural contra doença meningocócica, e no desenvolvimento de vacina. / Immunological and epidemiological evidences suggest that the development of natural immunity to meningogoccal disease may be associated with crossreactive antigens together with Neisseria meningitidis and other commensal bacteria, like Neisseria lactamica. The present study aimed to investigate the immunogenicity of antigens of outer membrane vesicles (OMV) of N. lactamica with or without the presence of Bordetella pertussis (BP) used as an adjuvant. Groups of neonate BALB/c mice were immunized intranasally antigens of N. lactamica. The results of our studies showed the predominance of high titers of antibodies of IgG and IgM isotipes with high and intermediate avidity after intranasal immunization with N. lactamica. Immunoblot analysis of serum showed cross-reactivity proteins between the species of the gender Neisseria and the monoclonal antibodies used in this study. These results suggest that antigens of N. lactamica and N. meningitidis in common may be important in natural immunity against meningogoccal disease and in the development of vaccine.

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-12-13T12:38:59Z No. of bitstreams: 1 marne-chagas.pdf: 1100888 bytes, checksum: 7a199f01e03cd65e615b7c57af7901f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-13T12:38:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marne-chagas.pdf: 1100888 bytes, checksum: 7a199f01e03cd65e615b7c57af7901f0 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O surgimento de resistência a antimicrobianos em bactérias está se agravando ano após ano, constituindo-se um problema de saúde pública em hospitais e centros de tratamento ao redor do mundo. No Brasil, a resistência a meticilina em Staphylococcus aureus(MRSA) chega a 29 % dos casos detectados anualmente. Atualmente, a metodologia convencional para a identificação de MRSA pode levar 48 horas, portanto, este trabalho tem por objetivo o desenvolvimento de um teste para diagnóstico rápido baseado na tecnologia de imunocromatografia de fluxo lateral usando um anticorpo específico contra a proteína PBP2a, a qual confere resistência ao Staphylococcus aureus, permitindo a identificação em minutos, a partir de colônias isoladas. O anticorpo monoclonalanti-PBP2a foi purificado e empregado em um processo de conjugação a microesferas de látex coloridas para a implementação do teste rápido. Os resultados iniciais demonstraram a capacidade do anticorpo de reconhecer a PBP2a em amostras de MRSA, porém foram observados problemas de inespecificidade que deverão ser solucionados para dar confiabilidade ao teste proposto. / The emergence of antibiotic resistance in bacteria is getting worse year after year, becoming a public health problem in hospitals and treatment centers around the world. In Brazil, methicillin resistance in Staphylococcus aureus(MRSA) reaches 29% of cases detected annually. Currently, the conventional methodology for identification of MRSA may take 48 hours of lengthyphenotypical tests, so this work aims at developing a rapid diagnostic test based onthe lateral flow immunochromatography protocol using a specific antibody against the protein PBP2a, which confers the methicillin-resistance phenotype to Staphylococcus aureus, allowing a prompt identification from isolated colonies. The monoclonal antibody anti-PBP2a was purified and used in a process of conjugation to colored latex microspheres for the implementation of the rapid test. Initial results demonstrated the ability of the antibody to recognize the PBP2a in samples of MRSA, but inespecificity issues will have to be solved to improve reliability of the test proposed.

Submitted by Priscila Nascimento (pnascimento@icict.fiocruz.br) on 2012-11-21T11:40:46Z No. of bitstreams: 1 carina-cantelli-pacheco-de-oliveira.pdf: 4119562 bytes, checksum: e15daef4939ba93f9357a8bbf218d494 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-21T11:40:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 carina-cantelli-pacheco-de-oliveira.pdf: 4119562 bytes, checksum: e15daef4939ba93f9357a8bbf218d494 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O interferon beta (IFN-β) é uma proteína globular consistindo de cinco cadeias α-helicais e como biofármaco é principalmente utilizado para o tratamento da esclerose múltipla (EM). A EM é uma doença até o momento sem cura e das terapias imunomodulatórias disponíveis para melhoria do quadro da EM, o IFN-βé o biofármaco disponível mais bem caracterizado. Duas formas do IFN-βhumano recombinante são clinicamente utilizadas: IFN-β-1a, produzida em células de ovários de hamster chinês (CHO), similar ao IFN-βnativo; e a forma IFN-β-1b, produzida em sistema de Escherichia coli, não possuindo moléculas de açúcar na cadeia polipeptídica expressa. Testes para detecção e quantificação dos IFNs são principalmente do tipo ELISA sendo cruciais nos processos de desenvolvimento, monitoramento e no controle de qualidade, devido principalmente a relação sensibilidade/especificidade necessária. Os anticorpos monoclonais (Mabs) de alta afinidade, produzidos para estes testes são extremamente sensíveis e específicos e representam uma forma adequada de padronização de um ELISA para detecção e quantificação do IFN-β. Neste estudo, quatorze MAbs anti-IFN-βforam obtidos através da imunização genética e parcialmente caracterizados. Todos reconheceram no ELISA o IFN-βhumano recombinante. Os MAbs anti-IFN-βidentificados como AE9, AG8, AE6, AH7, AA11, AB1 e AA4 foram os mais reativos. Todos os quatorze MAbs foram isotipados e apresentaram um perfil com simultânea expressão tanto de IgM quantode IgG2a. Este perfil não-usual foi confirmado pela reação em cadeia da polimerase precedida da transcrição reversa específica para IgG e IgM. Somente um MAb denominado AG8 reagiu em Western-blotcom a isoforma monomérica de 18 KDa do IFN-β. Este estudo representou o primeiro passo em direção ao propósito de obtenção do ELISA descrito acima. / Beta interferon (IFN-β) is a globular protein consisting of five α-helical chains. As biopharmaceutical product it is mainly used for treatment of multiple sclerosis (MS). MS is a health disorder with no cure available so far. Its symptoms can be alleviated with immunomodulatory drugs. IFN-βis the most well characterized biopharmaceutical product in terms of structure and side affects. Two forms of human recombinant IFN-βare used in the treatment of MS: IFN-β-1a, expressed in Chinese hamster ovary cells, is similar to native IFN-β; and IFN-β-1b expressed in the Escherichia coli expression system. IFN-β-1b does not present glycosilation and therefore differs from native IFN-β. Tests to detect and to quantify IFNs are mainly enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA). These tests are reliable and can be used in biopharmaceutical product development processes. Monitoring and quality control of IFN-βare quite important, mainly because of the physical and chemical nature of IFN-βas well the necessary sensitivity and specificity that allow for a precise characterization of the final product. Monoclonal antibodies (MAbs) used in ELISA to detect and quantify IFN-βusually present high affinity and specificity. In this study, fourteen MAbs against human recombinant IFN-βwere obtained by genetic immunization and partially characterized. All antibodies recognized human IFN-β. The anti-IFN-βMAbs AE9, AG8, AE6, AH7, AA11, AB1 and AA4 were the most reactives. All fourteen MAbs were subjected to antibody isotype characterization and presented a simultaneous expression of both IgM and IgG2a. Thisunusual profile was confirmed by specific reverse transcription polymerase chain reaction for IgG and IgM messenger RNA. Only MAb AG8 recognized the 18 KDa isoform of IFN-β. This study represents the first step towards the development of the ELISA described above.

Imunidade protetora depende da geração e manutenção do repertório de linfócitos T de memória. A geração dessas células está correlacionada com a apresentação de antígenos pelas células dendríticas (DCs). O direcionamento de antígenos tem sido estudado como um novo método vacinal que consiste em entregar antígenos diretamente para DCs usando anticorpos monoclonais. O principal objetivo desse trabalho foi direcionar uma proteína de Plasmodium para a subpopulação DEC205+ de DCs. Camundongos foram imunizados e então desafiados dias depois, com esporozoítos de P. yoelii. A proteína direcionada não protegeu camundongos do desafio, mas a proteína não direcionada protegeu, alcançando níveis de proteção estéril em torno de 100% em alguns casos. Observamos correlação entre a quantidade dos anticorpos e a proteção relativa dos animais imunizados com a proteína não direcionada. Além disso, utilizando anticorpos monoclonais demonstramos que a região conhecida como major repeat pode ser utilizada como alvo direto de pesquisas em vacinas contra malária. / In general, protective immunity against many pathogens depends on the generation of memory T cells, and the survival of cells for a long period of time after initial contact with pathogens. We know that the generation of these cells is correlated with the activation of parasite-specific immune cells and the presentation of antigens for dendritic cell (DCs). Targeting antigens to DCs has been studied as a new vaccination method, delivering antigens directly to DCs using monoclonal antibodies. The goal was target circunsporozoite protein (CSP), from Plasmodium, to a DEC205+ (DC) subset. Mice were immunized and challenged days later using P. yoelii sporozoites. Targeting protein did not protect mice from challenge, but non-targeting CS lead to 100% of protection. We found correlation between levels of antibody with protection, and high levels of anti-CS IgG in mice immunized with non-targeting protein. Using monoclonal antibodies we were able to map major repeat as a potential target for new researches in malaria vaccine.

No semi-árido paraibano há poucos relatos de ocorrência da raiva, há quem afirme que os caprinos, ovinos e asininos são resistentes à doença e a prática de vacinação é incomum. Este trabalho visou estudar a situação da raiva na região semi-árida de Patos-PB, estabelecendo o diagnóstico desta enfermidade em diferentes espécies de animais domésticos e silvestres. Foram capturados 12 exemplares de raposas (Dusicyon vetulus), por meio de armadilha; 192 morcegos insetívoros (Molossus molossus), capturados no Centro de Saúde e Tecnologia Rural - CSTR, Universidade Federal de Campina Grande - UFCG, em Patos, e oito morcegos insetívoros (M. molossus) encaminhados por moradores desta cidade. As raposas capturadas foram submetidas à colheita de sangue e em seguida sacrificadas com uso de Ketamina e T-61. Outras 287 raposas e oito guaxinins (Procyon cancrivorous) atropelados e mortos nas rodovias que servem o município de Patos foram examinados, além de 74 amostras de diferentes espécies de animais domésticos, enviados pelo setor de Patologia do Hospital Veterinário do CSTR-UFCG. Os animais silvestres, uma vez transportados ao Laboratório de Virologia do CSTR-UFCG, foram necrópsiados e os fragmentos do cérebro, submetidos à prova de imunofluorescência direta (IFD) e inoculação intracerebral em camundongos (ICC) para o diagnóstico da raiva. Dos 581 materiais examinados, 50 (8,60%) foram positivos à IFD, dos quais 47 (8,09%) se confirmaram à ICC. Relativamente às espécies, 19/41 amostras de bovinos; 12/299 de raposas; 1/5 de ovinos e 2/6 de caninos apresentaram resultados positivos para ambas as provas. Amostras procedentes de caprinos, eqüinos e morcegos apresentaram resultados discrepantes entre as provas de IFD e ICC, de 2/6 e 1/6; 3/11 e 2/11; e 9/200 e 8/200, respectivamente. As amostras de vírus foram enviadas ao Laboratório de Raiva da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, para extração do material nucléico, tipificação antigênica e genética. A tipificação antigênica e genética com base no gene M1 foi realizada no "Canadian Food and Inspection Agency", Fallowfield, Otawa, Canadá, patrocinado pela IICA – "Inter-American Institutes for Cooperation on Agriculture". A caracterização genética do gene N e o estudo filogenético foram realizados no laboratório do "National Institute of Infectious Diseases", Toyama, Tóquio, pelos pesquisadores do "College of Bioresources Sciences" da Nihon University, Kanagawa, Japão. O estudo do comportamento biológico das amostras foi realizado em camundongos, pela inoculação por via intracerebral, avaliando-se os períodos de incubação e clínico, no seu primo-isolamento. O comportamento biológico de um isolado de raposa foi estudado em caprinos e ovinos inoculados experimentalmente por via intramuscular. A mesma amostra foi utilizada para o desafio de asininos e eqüinos vacinados com uma vacina comercial de vírus inativado. Estes animais apresentaram níveis mensuráveis de anticorpos anti-rábicos neutralizantes e os resultados do desafio indicaram a eficácia da vacina contra o isolado de raposa. Os resultados da tipificação antigênica e genética permitem concluir que: na região estudada a epidemiologia da raiva é complexa, revelando existir variantes distintas, mantidas em cães domésticos, raposas, morcegos insetívoros e morcegos hematófagos. / In the semiarid of the State of Paraíba there are few reports of rabies occurrence, and it is said that caprines, ovines and asinines are resistant to rabies and the use of vaccines in these species is uncommon. This work aimed to study the situation of rabies in the semiarid of Patos-PB, establishing the diagnosis in domestic and wild animals. For the study, 12 foxes (Dusicyon vetulus) were captured alive; 192 insectivorous bats (Molossus molossus), captured at the "Centro de Saúde e Tecnologia Rural-CSTR", of the "Universidade Federal de Campina Grande-UFCG", Patos-PB; and 8 bats (M. molossus) sent by residents of the city of Patos. Captured foxes were submitted to blood collection and then sacrificed using ketamine and T-61. Other 287 foxes and 8 raccoons (Procyon cancrivorus) road-kills collected from the roads serving the Patos municipality were examined. Other 74 samples from different domestic animals sent by the Pathology section of the Veterinary Hospital of the CSTR-UFCG were also included. The wild animals, once shipped to the Virology Laboratory of the CSTR-UFCG, were necropsied and brain fragments were submitted to the fluorescent antibody test (FAT) and mouse inoculation test (MIT) for rabies diagnosis. Among the 581 materials, 50 (8.60%) were positive by FAT, and 47 (8.09%), confirmed by MIT. Concerned to animal species, 19/41 bovines; 12/299 foxes; 1/5 ovines; and 2/6 canines were positive for both FAT and MIT. Caprine, equine and bat samples presented discrepant results between the FAT and MIT, from 2/6 to 1/6; 3/11 to 2/11; 9/200 to 8/200, respectively. All the isolates were sent to the Rabies Laboratory of the "Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal", "Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia", "Universidade de São Paulo-FMVZ-USP", for extraction of nucleic materials, to perform the antigenic and genetic typing. Antigenic and genetic typing based on M1 gene was conducted at the Canadian Food and Inspection Agency, Fallowfield, Otawa, Canada, sponsored by the IICA – Inter-American Institutes for Cooperation on Agriculture. The genetic characterization of the N gene and the phylogenetic analyses were made at the National Institute of Infectious Diseases, Toyama, Tokyo, by the researchers of the College of Bioresources Sciences, Nihon University, Kanagawa, Japan. The biologic behavior of the isolates was studied in mice through intracerebral inoculation by registering the incubation and the clinical periods at its first passage. The biologic behavior of a fox isolate was assessed in caprines and ovines, by experimental inoculation through intramuscular route. The same isolate was used for the challenge of asinines and equines that had been vaccinated with a commercially available inactivated virus vaccine. The vaccinated animals showed measurable levels of neutralizing antirabies antibodies and the results of challenge indicated the efficacy of this vaccine against the fox isolate. According to the results of antigenic and genetic typing, it can be concluded that in the region, the epidemiology of rabies is complex, revealing the existence of virus variants maintained in populations of domestic dogs, foxes and hematophagous and insectivorous bats.

Anticorpos monoclonais (AcMo) contra proteínas do vírus da raiva (RABV) foram produzidos para adequar a caracterização antigênica dos isolados no Brasil. Foram selecionados dois isolados de morcegos insetívoros, sendo um de Nyctinomops laticaudatus e outro de Eptesicus furinalis que apresentaram perfis não compatíveis (NC) com os pré-estabelecidos. As suspensões virais foram adaptadas para crescimento em cultura de células N2A. Para o preparo de AcMo foram utilizadas como antígeno as ribonucleoproteínas dos isolados selecionados. Foram obtidos dois AcMo, o 3A7 e o 4E10. Analisando 57 isolados de RABV com esses AcMo, o 3A7 reagiu com 21 (36,84%) e o 4E10 com 25 (43,85%). Dos 13 isolados caracterizados como variante antigênica 3 (Desmodus rotundus) o 3A7 reagiu com 8 (61,53%) e o 4E10 com 11 (84,61%). Dos 9 isolados com perfil NC em morcegos o 3A7 reagiu com 5 (55,55%) e o 4E10 com 4 (44,44%). Os anticorpos produzidos poderão auxiliar na complementação do painel existente de caracterização antigênica o que poderá aprimorar a vigilância epidemiológica da doença. / Monoclonal antibodies (MAb) against the rabies virus (RABV) proteins were produced to improve the antigenic characterization of the isolates in Brazil. Two isolates from insectivorous bats were selected; one was from the species Nyctinomops laticaudatus and the other from Eptesicus furinalis, which showed non-compatible (NC) profiles from pre-established ones. The viral suspensions were adapted for growth in N2A cells. Ribonucleoproteins from selected isolates were used as antigen for the preparation of Mab. We obtained two Mab, the 3A7 and the 4E10. Of the 57 RABV isolates analyzed with these MAb, the 3A7 reacted with 21 (36.84%) and 4E10 with 25 (43.85%). Of the 13 isolates characterized as antigenic variant 3 (Desmodus rotundus), the 3A7 MAb reacted with 8 (61.53%) and 4E10 with 11 (84.61%). Of the nine isolates with the profile NC of bats the 3A7 reacted with 5 (55.55%) and the 4E10 with 4 (44.44%). The antibodies produced may help to complement the existing panel to antigenic characterization which could improve the disease epidemiological surveillance.

Estudos conduzidos por vários grupos demonstraram que é possível direcionar antígenos para diferentes subtipos células de dendríticas (DCs) utilizando anticorpos monoclonais (mAbs). Neste trabalho, fusionamos o mAb &#945;DEC205 a dois fragmentos de massa molecular aproximada de 42 e 19 kDa derivados da proteína 1 de superfície do merozoíto (MSP1) do Plasmodium vivax, um importante candidato para o desenvolvimento de uma vacina contra a malária. Para estudar a resposta induzida pelo direcionamento da proteína MSP142 e MSP119 para o subtipo de DCs DEC205+CD8&#945;+, administramos duas doses dos mAbs na presença de poly (I:C), que é um agonista de TLR3 e MDA5. Nossos resultados indicam que o direcionamento da MSP142 para o subtipo de DCs DEC205+CD8&#945;+ é capaz de induzir uma potente resposta celular contra o fragmento de 33 kDa e elevados títulos de anticorpos contra a porção de 19 kDa nas duas linhagens de camundongos. / Studies conducted by several groups have shown that it is possible to target antigens to different subtypes dendritic cell (DC) using monoclonal antibodies (mAbs). Our group has been using a mAb that is able to direct the antigen to subtype of DCs DEC205+CD8&#945;+ . In this work, we fused the &#945;DEC205 mAb with a 42 and 19 kDa fragment derived from the Plasmodium vivax merozoite surface protein 1 (MSP1), a major candidate for the development of a malaria vaccine. In order to study the response induced by the MSP142 targeting to the DEC205+CD8&#945;+ DC subtype, we administered two doses of the mAbs in the presence of poly (I: C), a TLR3 and MDA5 agonist. Our results indicate that MSP142 targeting to the DEC205+CD8&#945;+ DC subtype is able to induce strong cellular response against the 33 kDa fragment, and high antibody titers against the 19 kDa portion in two strains of mice.