Orientador: Luiz Carlos Dias / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Química / Made available in DSpace on 2018-08-16T12:55:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_CarolinedaCostaSilva_D.pdf: 6751607 bytes, checksum: 9bd088f8ddc948d84afa9c74d3c1b9bd (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Síntese Total das Basiliskamidas A e B: As basiliskamidas A e B são agentes antifúngicos isolados em 2002 por Anderson e colaboradores, a partir de uma cultura de bactérias marinhas Bacillus laterosporus (MK-PNG-276). Nesta primeira parte do trabalho, descrevemos a síntese total das basiliskamidas A e B. As basiliskamidas A e B são oriundas de um intermediário comum, o diol 1.4. As etapas chave incluem uma reação aldólica do tipo anti, mediada por (CHx)2B e uma reação de redução diastereosseletiva sob as condições de Narasaka. A basiliskamida B (1.2) foi obtida em 12 etapas e 6% de rendimento global e a basiliskamida A (1.1) em 14 etapas e 2,5% de rendimento global, a partir da etilcetona 1.47 (considerando a rota linear mais longa para ambas).Síntese do Fragmento C1-C9 da (-)-Dictiostatina (2.1): A (-)-dictiostatina (2.1) é uma macrolactona com potente atividade antitumoral, isolada em 1994 por Pettit e colaboradores, a partir da esponja marinha Spongia sp. e, posteriormente por Wright e co-autores a partir da esponja da família Corallistidea. Nesta segunda parte do trabalho, descrevemos a síntese do fragmento C1-C9 da (-)-dictiostatina (2.1). Os centros esterogênicos em C6 e C7 foram construídos através de uma reação de epoxidação enantiosseletiva de Sharpless seguido da abertura regio e diastereosseletiva do epóxido com Me2CuCNLi2. O fragmento C1-C9 (2.103) foi obtido em 13 etapas e 5% de rendimento global a partir do álcool 2.115, considerando a rota linear mais longa. / Abstract: Total Synthesis of Basiliskamides A and B: Basiliskamides A and B are antifungal agents isolated by Andersen and co-workers in 2002 from the marine bacterium Bacillus laterosporus (MK-PNG-276). The first chapter describes the total synthesis of basiliskamides A and B. Basiliskamides A and B were prepared from a common intermediate, 1,3-diol 1.4. Notable features of this approach include an anti-aldol reaction and a diastereoselective reduction using Narasaka's methodology. Basiliskamide B (1.2) was obtained in 12 steps and 6% overall yield and basiliskamide A (1.1) was prepared in 15 steps and 2.5% overall yield from ethyl ketone 1.47. Synthesis of C1-C9 fragment of (-)-Dictyostatin (2.1): The macrolactone (-)-dictyostatin (2.1) showed potent growth inhibition against a range of human cancer cells lines. This compound was isolated from the marine sponge Spongia sp by Petit and co-workes in 1994 and from Corallistidea sponges in 2001 by Wright and co-workers. The second chapter describes the synthesis of C1-C9 fragment of (-)-dictyostatin (2.1). The two stereocenters (C6 and C7) were created via a Sharpless's epoxidation followed by a diastereoselective epoxide opening mediated by Me2CuCNLi2. The synthesis of C1-C9 (2.103) fragment was achieved after 13 steps in 5% overall yield starting from alcohol 2.115. / Doutorado / Quimica Organica / Doutor em Ciências

Orientador: Angélica Zaninelli Schreiber / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T18:50:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Biancalana_FernandaSimasCorrea_D.pdf: 1602190 bytes, checksum: f9f6d1fcbc7dcd1bf6b7e3dc9f3c4a90 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Nos últimos anos, os fungos demáceos têm sido intensamente reconhecidos como importantes patógenos, principalmente em pacientes imunocomprometidos, sendo reportadas como patogênicas mais de 100 espécies de 60 diferentes gêneros. O tratamento das infecções causadas por estes fungos é difícil, bastante demorado e algumas vezes sem sucesso, portanto, se fazem necessários mais estudos sobre a suscetibilidade destes patógenos a antifúngicos in vitro. Alguns autores têm demonstrado a excelente eficácia in vivo da terbinafina, em combinação com outros antifúngicos, para o tratamento destas infecções, porém são poucos os que avaliam seu efeito in vitro isoladamente, e menos ainda os relatos sobre associação desta com outros antifúngicos. A maioria dos trabalhos utiliza apenas o inóculo com conídios, que não é a principal morfologia do fungo encontrada no paciente. A realização de testes utilizando hifas poderia mimetizar as características do fungo no tecido infectado, demonstrando melhor o potencial terapêutico do antifúngico. Existem poucos relatos na literatura sobre avaliação dinâmica de crescimento de fungos, e nenhum deles realizado com fungos demáceos. Partindo deste princípio, foi investigada neste estudo a suscetibilidade in vitro de conídios e hifas fungos demáceos dos gêneros Alternaria, Bipolaris, Cladophialophora, Curvularia, Exophiala e Fonsecaea frente a anfotericina B, itraconazol e voriconazol e terbinafina, e esta última em combinação com os demais antifúngicos através da metodologia do tabuleiro de xadrez e avaliação dinâmica de crescimento. Quando avaliados isoladamente, o voriconazol foi o antifúngico mais ativo, seguido de itraconazol, terbinafina e anfotericina B, utilizando conídios. Quando foi feita a associação, os resultados indicaram 100% de sinergismo nas interações entre terbinafina e voriconazol, 96,5% de sinergismo entre anfotericina B e terbinafina e 75,9% de sinergismo entre terbinafina e itraconazol. Nenhum caso de antagonismo foi observado. Voriconazol e itraconazol demonstraram maior atividade frente a hifas dos isolados avaliados, seguidos de terbinafina e anfotericina B. Os isolados de C. bantiana e F. pedrosoi demonstraram altos valores de CIM frente a anfotericina B. Os valores de CIM obtidos para as hifas foram menores que os dos conídios, chegando a duas ou quatro diluições abaixo do valor da CIM. Os resultados demonstraram 100% de sinergismo entre a terbinafina e os azólicos ou a anfotericina quando utilizadas hifas no sistema BCT. Concluindo, os resultados obtidos neste trabalho sugerem que a forma de hifas dos isolados avaliados é mais suscetível que a de conídios frente aos antifúngicos avaliados tanto isoladamente, como em associação. / Abstract: In recent years, the dematiaceous fungi have been widely recognized as important pathogens, especially in immunocompromised patients, being reported as pathogenic, more than 100 species of 60 different genera. Treatment of infections caused by these fungi is difficult, time consuming and sometimes without success, therefore, more studies are needed about the susceptibility of the pathogens to antifungal agents in vitro. Some studies have demonstrated excellent in vivo efficacy of terbinafine in combination with other antifungals to treat these infections, but few ones have evaluated the in vitro effect of terbinafine alone, and even less are about association with other antifungal agents. Most used only the inoculum with conidia, which is not the essencial morphology of the fungus found in the patient. Testing susceptibility using hyphae could mimic the characteristics of the fungus in infected tissue, demonstrating more clearly the therapeutic potential of the antifungal agent. There are few reports in the literature on dynamic evaluation of mold growth, and none of them performed with dematiaceous fungi. With this assumption, was investigated in this study the in vitro susceptibility of terbinafine alone and in combination with amphotericin, itraconazole and voriconazole against conidia and hyphae of dematiaceous fungi belonging to genera: Alternaria, Bipolaris, Cladophialophora, Curvularia, Exophiala and Fonsecaea, using the checkerboard methodology and evaluation of dynamic growth. When evaluated alone, voriconazole was the most active antifungal agent, followed by itraconazole, terbinafine and amphotericin B, using the broth microdilution method with conidia. In the association, the results indicated 100% of synergism in interactions between voriconazole and terbinafine, 96.5% of synergism between amphotericin and terbinafine and 75.9% of synergism between terbinafine and itraconazole. No case of antagonism was observed. Voriconazole and itraconazole demonstrated the highest activity with the use of BCT with hyphae of isolates evaluated, followed by terbinafine and amphotericin B. Isolates of C. bantiana and F. pedrosoi showed higher MIC values compared to amphotericin B. MIC values obtained for hyphae were lower than those of conidia two or four dilutions below the MIC value. The results demonstrated 100% synergistic interactions between terbinafine and azoles or amphotericin when testing hyphae in BCT system. In conclusion, the present results suggest that the hyphae form of tested isolates are more susceptible than conidia to the antifungal agent evaluated alone or in combination. / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Angelica Zaninelli Schreiber, Maria Luiza Moretti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T13:48:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Loyola_AnaBeatrizAlkmimTeixeira_D.pdf: 5844968 bytes, checksum: 4d27c47d59746710e359ef7d4b61f1b7 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Os fungos filamentosos do gênero Aspergillus são fungos hialinos, saprófitas, encontrados no solo e na vegetação em decomposição e têm sido, crescentemente, relatados em casos de infecções sistêmicas ou disseminadas. A patogenicidade destes fungos oportunistas está na alta concentração dos microconídios no ar, facilitando a sua inalação. Infecções por Fusarium spp são altamente resistentes à terapia disponível, com prognostico desfavorável e taxa de mortalidade em torno de 57% dos casos. Vários relatos têm descrito a tolerância in vitro, ou resistência, de espécies de Aspergillus aos agentes antifúngicos após falha terapêutica com anfotericina B. A infecção por Aspergillus sp em pacientes imunossuprimidos apresenta taxa de mortalidade em torno de 86%, independente do tratamento antifúngico. Assim, testes de suscetibilidade a antifúngicos são de estrema importância. O teste de microdiluição, utilizando suspensão de conídios, foi recentemente padronizado pelo CLSI. No entanto, em regra, as infecções causadas por fungos filamentosos são caracterizadas pela presença de hifas no tecido infectado, sendo portanto, a realização do teste de suscetibilidade com hifas, de grande interesse clinico. A concentração inibitória mínima (CIM) de vários agentes antifúngicos pode ser determinada pela observação da inibição de crescimento de um hifa isolada. Há poucos relatos na literatura sobre a medição automatizada do crescimento de hifas de Aspergillus sp. e nenhum relato para hifas de Fusarium sp. pelo sistema 'BioCell-tracer POT. MARCA REGISTRADA¿... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Aspergillus and Fusarium species are hyaline moulds that are usually found in the soil and plants. These organisms have emerged as a cause of disseminated invasive disease. It has been suggested that airborne conidia might invade the respiratory tract with primary lung or sinus localisation Fusarium species are largely resistant to available chemotherapy and are correlated with poor prognosis and lethal outcome in 57% of the cases. Several reports have described in vitro tolerance or resistance of Aspergillus spp to antifungal infection in immunossupressed patients shows mortality around 86%, independente of antifungal treatment. Antifungal susceptibility testing of filamentous fungi has therefore become more importante. Since most infections caused by filamentous fungi are characterized by the presence of hyphal elements in the tissue, the monitoring of hyphal susceptibility might be of clinical interest. The MICs of several antifungal agents cam be determined based on the growth rate of a single hypha. There are only few reports for automatic growth evaluation for Aspergillus spp and no reports for Fusarium spp using the 'BioCell-tracer POT. MARCA REGISTRADA¿ system. In this work, we selected four clinical isolates of Aspergillus and four clinical isolates of Susarium. For all strains we prodeeded microdilution and hypha susceptibility antifungal evaluation with amphotericin B and itraconazole...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Jose Francisco Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-08T12:53:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Anibal_PaulaCristina_M.pdf: 2168298 bytes, checksum: 97eb6e5c3daa9ef33ad620dedafac901 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A cavidade oral abriga uma complexa comunidade de microrganismos que podem estar aderidos aos dentes, à mucosa epitelial ou formando biofilme. A maioria desses microrganismos são comensais, com uma minoria causando infecções oportunistas. Dentre esses microrganismos, encontramos as leveduras do gênero Candida, principalmente em indivíduos imunocomprometidos; o principal agente etiológico da cárie dental Streptococcus mutans e, apesar da presença controversa, o patógeno oportunista Staphylococcus aureus. Diante do desenvolvimento de resistência aos antimicrobianos, há uma grande preocupação relacionada a qual tipo de tratamento utilizar no combate às infecções provocadas por esses microrganismos. O emprego de extratos brutos de plantas tem merecido a atenção de pesquisadores de vários países, já que podem inibir o crescimento bacteriano e fúngico por diferentes mecanismos quando comparados aos antimicrobianos, justificando a pesquisa em questão. As plantas utilizadas nesta pesquisa foram a Mentha piperita, Rosmarinus officinalis, Tabebuia avellanedae, Arrabidaea chica, Syzygium cumini e Punica granatum, extraídas com os solventes diclorometano e metanol, os quais foram eliminados em rotaevaporador, para a obtenção dos extratos brutos, a fim de se avaliar sua concentração inibitória mínima (CIM) frente a essas cepas de microrganismos. Os resultados obtidos revelaram-se promissores com as espécies de Candida testadas, principalmente com o extrato metanólico, cuja inibição apresentou atividade com alta sensibilidade das leveduras, porém essa mesma atividade não ocorreu entre as bactérias. Esses dados indicam a necessidade da ampliação do conhecimento sobre as espécies de plantas com potencial antimicrobiano, além de se testar extratos mais purificados e com propriedades farmacológicas ativas contra organismos microbianos. De qualquer forma, estes resultados nos levam a considerar esses extratos vegetais como fontes valiosas para a descoberta de novas moléculas bioativas empregadas para o tratamento alternativo no combate aos agentes microbianos, principalmente àqueles resistentes às drogas antifúngicas e antibacterianas convencionais / Abstract: The oral cavity is a source of a complex microorganisms community that may adhere to teeth, epithelial mucosa or form biofilms. Most of these strains are thought to be commensal, and a small number cause opportunistic infections. Among these microorganisms Candida yeast is the most commom in immunocompromised patients; Sretptococcus mutans is regarded as the primary etiologic agent of dental caries and, although considered controversial the presence, Staphylococcus aureus is also mentioned as an opportunistic pathogen in the oral cavity. Considering the frequent use of antifungal and antibiotics as antimicrobial agents, the development of resistance to these drugs has become an important and worrying factor for the treatment of the infections caused by these microorganisms. The use of crude plants extracts has been a researcherâ?¿s concern from all over the world, since they may inhibit the bacteria and fungi growing by different mechanisms present in the conventional antimicrobials, becoming an important source of investigation. The plants used in this research were Mentha piperita, Rosmarinus officinalis, Tabebuia avellanedae, Arrabidaea chica, Syzygium cumini and Punica granatum, extracted with dichloromethane and methanol solvents, followed by a minimal inhibitory concentration (MIC) evaluation. The data obtained with Candida strains were promising, specially with the methanolic extract that showed activity in a higher sensibility, but the same activity did not occur among the bacterias. This information increases our knowledge of the crude plants extracts effect against microbial organisms. Nevertheless, the results of this study indicated that these extracts are a promising source for the alternative treatment against the microbial agents, specially for those resistant to the conventional antimicrobial agents / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Orientador: Angelica Zaninelli Schreiber / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T15:37:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Correa_FernandaSimas_M.pdf: 2038543 bytes, checksum: 170a6e791e2c64d599b88b8485092a96 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Dermatófitos do gênero Microsporum acometem preferencialmente pele e pêlos, sendo M.canis e M.gypseum as espécies mais isoladas em nosso meio. Antifúngicos tópicos e sistêmicos são indicados para o tratamento destas dermatofitoses, que é considerado mais difícil quando comparado ao de outros gêneros de fungos queratinofílicos. Deste modo, a determinação da suscetibilidade aos antifúngicos in vitro destes microrganismos é de interesse para embasamento da terapêutica empírica, avaliação de falhas terapêuticas, e testes de novos antifúngicos. No entanto, os dermatófitos não foram incluídos no documento relacionado do CLSI (M38-A, 2002). Os estudos disponíveis até o momento, utilizando conídios dos fungos, apresentam resultados muito divergentes, devido a falta de padronização e o grande número de variáveis pré-analíticas envolvidas. Em adição, uma vez que a forma de hifas predomina no tecido infectado, há controvérsias sobre o fato de se a forma conidial seria adequada para os testes. Há poucos relatos na literatura sobre avaliação dinâmica de crescimento de fungos e a taxa de inibição destes por drogas antifúngicas, mas nenhum destes realizados com dermatófitos. Este estudo se propôs a determinar condições para realização do teste de suscetibilidade pelo método de microdiluição em caldo e padronizar a avaliação de crescimento dinâmico pelo sistema BCT® para seis cepas do gênero Microsporum, determinando respectivamente CIM e CFM e taxas de inibição de crescimento frente a ciclopirox olamina, terbinafina e griseofulvina. Os resultados obtidos apontaram: ágar batata como o melhor meio de cultura para produção de conídios, inóculo de 1x 103 células/ml, incubação de 7 dias a 28ºC e leitura final considerando 100% de inibição do crescimento para o teste de microdiluição em caldo. Os resultados de CIM variaram de 1,0 a 16,0 µg/ml para ciclopirox olamina, de 0,005 a 0,004 µg/ml para terbinafina e de 2,5 a 20,0 µg/ml para griseofulvina. No Sistema Automatizado BioCell-Tracer® os testes foram realizados com: concentração de PLL de 0,05%; inóculo ? 1x106 conídios/ml em 5?l; incubação a 30ºC por 72 a 96h; 30ºC como temperatura de realização do teste e tempo total de experimento de 3 horas e 30 minutos. Todas as cepas apresentaram taxa de inibição de crescimento acima de 85% na fase de exposição à droga frente aos antifúngicos avaliados, na concentração equivalente ao resultado de CIM obtido pela técnica de microdiluição em caldo e, em pelo menos, uma diluição abaixo / Abstract: Dermatophytes of the genus Microsporum preferentially invade skin and hair, being M.canis and M.gypseum the most prevalent species in our routine. Topics and systemic antifungal agents are indicated for the treatment of theses dermatophytoses, which is considered more difficult when compared to other genera of keratinofilic fungi. By the way, the determination of in vitro antifungal susceptibility of these organisms is interesting as a guide of empiric therapy, evaluation of therapeutic failures and to evaluate new antifungal agents. However, dermatophytes were not included in the CLSI document (M38-A, 2002). The studies available until now, using fungi conidia, present divergent results due to the lack of standartization and the large number of pre-analytical variables involved. In addiction, once the hyphae forms predominate in infected tissues, there are controversies about if the conidial form would be adequate for the tests. There are few articles in the literature about dynamical evaluation of fungi growth and their growth inhibition rate in contact with antifungal agents, but none with dermatophytes. This study proposed the determination of conditions for broth microdilution susceptibility test and the standardization of dynamical growth evaluation by the BCT® system for six strains of Microsporum sp, determining respectively MIC and MFC and the inhibition rate after application of ciclopirox olamine, terbinafine and griseofulvin. The results pointed: potato dextrose agar as the best culture medium for conidium production, inoculum concentration of 1x 103 conidia/ml, incubation for 7 days at 28ºC and test enpoint at 100% of growth inhibition for broth microdilution test. The MIC results ranged from 1,0 to16,0 µg/ml for ciclopirox olamine, 0,005 to 0,004 µg/ml for terbinafine and 2,5 to 20,0 µg/ml for griseofulvin. On the automatizated system BioCell-Tracer®, the tests were realized with: PLL concentration of 0,05%; inocula of ? 1x106 conídia/ml in 5?l; incubation at 30ºC for 72 to 96hand also 30ºC as the test temperature, 3 hours and 30 minutes as total time of experiment. All strains showed growth inhibition rate above 85% on drug exposure phase against the antifungal agents evaluated, in MIC obtained by both microdilution method and, at least, one dilution below / Mestrado / Patologia Clinica / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Angélica Zaninelli Schreiber / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-25T21:59:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ReichertLima_Franqueline_M.pdf: 2034183 bytes, checksum: 203b846210e23f42a824280eb3cadda2 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O gênero Cryptococcus engloba duas espécies consideradas patogênicas: C.neoformans e C.gattii. Apesar dos avanços na área médica, a criptococose permanece uma das infecções fúngicas sistêmicas mais importantes no Brasil. Anfotericina B (AMB) associada a flucitosina (5FC) é a terapia de indução indicada porém, no Brasil, 5FC não está disponível e o tratamento segue somente com AMB ou em associação com fluconazol (FCL). Este trabalho avaliou a ocorrência de espécies e os genótipos de isolados clínicos de pacientes atendidos no Hospital de Clínicas da UNICAMP em um período de 5 anos; isolados ambientais coletados na cidade de Campinas-SP e o perfil de suscetibilidade aos antifúngicos sozinhos contra isolados clínicos e ambientais e o efeito de combinações de antifúngicos frente a isolados clínicos de Cryptococcus spp.. A identificação de espécies e genótipos foi realizada por testes bioquímicos, Restriction Fragment Length Polymorphism do gene URA5 (URA5-RFLP) e sequenciamento da região Internal Transcribed Spacer (ITS) do DNA ribossomal. Testes de suscetibilidade para AMB, 5FC, FCL, voriconazol (VRC), itraconazol (ITC) e terbinafina (TRB) isolados foram realizados conforme CLSI M27-A3 (2008). Os testes com antifúngicos combinados (AMB+5FC; AMB+FCL; AMB+TRB; FCL+TRB), foram realizados pelo método do "tabuleiro de xadrez" para determinação do Coeficiente de Inibição Fracional (CIF) para avaliar o tipo de interação entre as substâncias (sinergismo, indiferença ou antagonismo). Dentre 75 isolados clínicos reativados, foram identificados 66 C.neoformans e 9 C.gattii. Todos C.gattii pertenceram ao genótipo VGII enquanto que 62 isolados de C.neoformans ao genótipo VNI e apenas 4 ao genótipo VNII. Foram obtidos 92 isolados ambientais de Cryptococcus, pertencentes às espécies C.neoformans (genótipo VNI), C.laurentii, C.albidus, C.flavescens e Cryptococcus spp.. Os valores dos intervalos de CIM para C.neoformans clínicos foram AMB: ? 0,125-1 µg/mL; 5FC: ? 0,125-2 µg/mL; FCL: 0,25-8 µg/mL; VRC: ? 0,015-0,125 µg/mL; ITC: 0,03-0,25 µg/mL e TRB: 0,125-2 µg/mL. Intervalos de CIM para C.gattii variaram de 0,25-1 µg/mL para AMB; 0,5-4 µg/mL para 5FC; 2-16 µg/mL para FCL; 0,06-0,25µg/mL para VRC; 0,06-0,5 µg/mL para ITC e 0,5-4 µg/mL para TRB. Foram observados elevados valores de CIM para os antifúngicos 5FC e FCL frente aos isolados ambientais de C.albidus e C.laurentii. O genótipo VNI de C.neoformans clínico mostrou 75,80% de interação sinérgica para AMB+5FC; 79,03% para AMB+FCL; 77,42% para AMB+TRB e 95,16% para FCL+TRB. O genótipo VNII apresentou 100% de sinergismo em todas as combinações. C.gattii (VGII) apresentou 88,9% de sinergismo nas combinações AMB+5FC e AMB+FCL; 100% para AMB+TRB e FCL+TRB. Não foi observado efeito antagônico nas combinações de antifúngicos. Foi observado bom desempenho nas combinações realizadas, especialmente naquelas envolvendo a TRB para ambas as espécies C.neoformans e C.gattii. O genótipo VNI foi o predominante entre os genótipos que afetam os pacientes com criptococose na região de Campinas. Em infecções de difícil tratamento ou que não respondem aos antifúngicos convencionais, a combinação de diferentes antifúngicos como AMB+TRB ou FCL+TRB podem vir a ser uma alternativa em países onde 5FC não está disponível, como no Brasil. Mais estudos são necessários para avaliar o papel dos genótipos na sensibilidade aos antifúngicos, assim como estudos de combinações de antifúngicos in vitro e in vivo para que novas estratégias possam ser empregadas no tratamento da criptococose / Abstract: Cryptococcus genus comprises two species considered pathogenic: C.neoformans and C.gattii. Despite advances in the medical field, cryptococcosis remains one of the most important systemic fungal infections in Brazil. Amphotericin B (AMB) associated with flucytosine (5FC) induction therapy is indicated but, in Brazil, 5FC is not available and treatment follows only with AMB or in combination with fluconazole (FCL). This study evaluated the prevalence of species and molecular subtypes of clinical isolates from patients treated at the Hospital of UNICAMP in a period of 5 years; environmental isolates collected in Campinas ¿ SP and in vitro antifungal susceptibility profile of antifungal agents alone against clinical and enviromental isolates of Cryptococcus spp. and the effect of combinations of antifungal agents against clinical isolates of Cryptococcus spp.. The species identification and subtyping was performed by biochemical tests, Restriction Fragment Length Polymorphism of URA5 gene (RFLP - URA5) and sequencing of the Internal Transcribed Spacer region (ITS) of ribosomal DNA. Susceptibility tests for AMB, 5FC, FCL, voriconazole (VRC), itraconazole (ITC) and terbinafine (TRB) isolated were performed according to CLSI M27-A3 (2008). Combined antifungals tests (AMB +5FC; AMB+FCL; AMB +TRB, FCL+TRB), were performed by the "Checkerboard" method to determine the Fractional Inhibitory Coefficient index (FIC) to assess the type of interaction between substances (synergism, indifference or antagonism). Among the 75 viable clinical isolates, 66 were identified as C.neoformans and 9 as C.gattii. All C.gattii belonged to subtype VGII while 62 isolates belonged C.neoformans VNI genotype and only 4 VNII. 92 environmental isolates of Cryptococcus were obtained. The species C.neoformans (subtype VNI) C.laurentii, C.albidus, C.flavescens and Cryptococcus spp.were identified. The MIC range values of clinical C.neoformans for AMB were: ? 0.125 -1 µg/mL; 5FC: ? 0.125 to 2 µg/mL; FCL: 0.25-8 µg/mL; VRC: ? 0.015 to 0.125 µg/mL; ITC: 0.03 to 0.25 µg/mL and TRB: 0.125 to 2 µg/mL. MIC for C.gattii ranged from 0.25-1 µg/mL for AMB; 0.5-4 µg/mL for 5FC; 2-16 µg/mL for FCL; 0.06 to 0.25 µg/mL for VRC; 0.06 to 0.5 µg/mL for ITC and 0.5-4 µg/mL for TRB. High MIC values were observed for FCL and 5FC against environmental isolates of C.albidus and C.laurentii. The VNI C.neoformans genotype showed 75.80 % of synergistic interaction for AMB+5FC; 79.03 % for AMB + FCL; 77.42 % for AMB + TRB and 95.16 % for FCL+TRB. The VNII genotype showed 100% synergism in all combinations. C.gattii (VGII) showed 88.9 % of synergism in combinations AMB+5 FC and AMB+FCL; 100 % for AMB+TRB and TRB+FCL. No antagonistic effect was observed in all evaluated antifungal combinations. Good performance was observed in all combinations performed, especially those involving TRB for both C.neoformans and C.gattii species. The VNI was the predominant genotype among genotypes affecting patients with cryptococcosis in Campinas region. In difficult to treat infections or unresponsive to conventional antifungal agents, the combination of different antifungals so as AMB+FCL or TRB+TRB may become an alternative in countries where 5FC is not available, as in Brazil. More studies are needed to evaluate the role of genotypes in sensitivity to antifungal agents, as well as antifungal agents combination studies in vitro and in vivo so that new strategies can be employed in the treatment of cryptococcosis / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestra em Ciências Médicas

Orientador: Everson Alves Miranda, Paulo de Tarso Vieira e Rosa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-18T17:30:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_MaxAdilsonLima_M.pdf: 2358919 bytes, checksum: 4bfe6ce2439dc359cd00e7a3a2bb2d86 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Madeiras sofrem ataques de fungos que comprometem a sua resistência e valor de mercado, levando a indústria madeireira a buscar fungicidas capazes de reduzir as perdas no setor. Nesse contexto, a espécie Senna reticulata aparece como possibilidade promissora, pois estudos preliminares revelaram a existência de substâncias, ainda não identificadas, em diferentes partes dessa planta com atividade fungicida e/ou fungistática. Assim, o presente trabalho objetivou a obtenção de compostos antifúngicos a partir de folhas secas de S. reticulata por extração convencional e supercrítica. Estudou-se o efeito da temperatura, pH, força iônica e tipo de solvente (água, etanol e composição destes) sobre a concentração de compostos fenólicos e proteínas nos extratos produzidos em tanque agitado. Na extração supercrítica, estudou-se o efeito da pressão e da temperatura sobre a concentração de compostos fenólicos nos extratos. Na extração convencional a composição do solvente, temperatura e pH apresentaram efeito sobre a concentração de compostos fenólicos e proteínas nos extratos. Para a extração supercrítica, o rendimento dos extratos foi afetado pela pressão do sistema. No entanto, o extrato com o menor rendimento em massa teve o maior teor de compostos fenólicos. Nos testes de atividade antifúngica, todos os extratos convencionais apresentaram ação contra os fungos utilizados. Os extratos supercríticos em baixas concentrações (baixas concentrações foram necessárias devido à utilização de etanol como solvente/diluente) apresentaram pequena ou nenhuma atividade sobre o crescimento dos fungos. Portanto, a extração convencional mostrou ser uma técnica promissora para a obtenção de extratos com efeito antifúngico de S. reticulata por apresentar alto rendimento, atividade antifúngica considerável, tempo de extração curto / Abstract: Wood suffers fungal attacks which undertake its resistance and market value, taking the wood industry to search for fungicides capable of to reduce losses in the sector. In this context, Senna reticulata appears as a promising possibility because preliminary studies revealed the existence of yet unidentified substances from various parts of this plant with fungicide and/or fungistatic activity. Thus, this work aimed to obtain antifungal compounds from dried leaves of S. reticulata by conventional and supercritical extraction. We studied the effect of temperature, pH, ionic strength, and type of solvent (water, ethanol and composition of this two) on the concentration of phenolic compounds and proteins in the extracts produced using stirred tanks. In the supercritical extraction we studied the effect of pressure and temperature on the phenolic compounds extraction. In the conventional extraction the solvent composition, temperature, and pH showed effect on the concentration of phenolic compounds and proteins in the extracts. For the supercritical extraction, yield of extracts was affected by the pressure of the system. However, the extract with the lowest yield in mass, had the highest content of phenolic compounds. In tests for antifungal activity, all conventional extracts showed activity against the fungi used. Supercritical extracts at low concentrations (low concentration required due to the ethanol used as a solvent/diluents) showed small and no activity on fungal growth. Therefore, the conventional extraction showed to be as a promising technique for obtaining extracts with antifungal effect from S. reticulata because of high yield, considerable antifungal activity, and short extraction time / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Orientadores: Yuji Takahata, Rogerio Custodio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-14T14:03:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_KesleyMoraesGodinhode_D.pdf: 5766531 bytes, checksum: 5d60e17b9a5062a054d9bb7de66054f4 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O objeto de estudo desta tese é a forma mais severa e letal de Leishmaniose: a Leishmaniose Visceral, LV, cujo principal agente etiológico é a espécie Leishmania donovani. O objetivo deste trabalho é o desenvolvimento de modelos Quantitativos das Relações Estrutura-Atividade para duas séries de compostos com atividade antileishmaniose contra formas amastigotas de Leishmania donovani. A primeira série envolve vinte e um análogos de nucleosídeos pirazolo-pirimidínicos e a segunda série compreende oito antifúngicos. Para garantir a robustez dos modelos, além dos compostos que compõem as respectivas séries, foram selecionadas moléculas com conhecida atividade contra LV para compor um conjunto de teste e avaliar a capacidade de previsão dos respectivos modelos. Para a série dos nucleosídeos foram desenvolvidos modelos de regressão logística e árvore de classificação. Em ambas as abordagens os descritores Mor26v e o GAP(HOMO, HOMO-1) se mostraram relevantes para a explicação da atividade leishmanicida destes compostos. O modelo de regressão logística atingiu 90,5% para acurácia de classificação para o conjunto de trabalho e 58% para o conjunto de teste após a análise do domínio de aplicabilidade do modelo. O modelo para árvore de classificação alcançou 95% para acurácia de classificação para o conjunto de trabalho e 83% para o conjunto de teste. Para a série dos antifúngicos foi utilizado um modelo de regressão linear múltipla onde a energia eletrônica e a área da superfície polar se mostraram importantes para a atividade leishmanicida da série. Os valores previstos exibem 98% de correlação com os valores experimentais. Os valores encontrados para o conjunto de teste também estão de acordo com a literatura. Finalmente, novos compostos foram propostos para síntese e avaliação da atividade leishmanicida. / Abstract: The object of study of this thesis is the most severe and lethal form of leishmaniasis: visceral leishmaniasis, LV, whose main etiological agent is the species Leishmania donovani. The goal of this work is the development of Quantitative Structure-Activity Relationship models for two series of compounds presenting antileishmanial activity against amastigotes of Leishmania donovani. The first series includes twenty-one analogues of pyrazolo-pyrimidine nucleosides and the second series comprises eight antifungals. To ensure the robustness of the models, in addition to the compounds that make up their series, molecules with known activity against LV were selected to compose a testset and evaluate the predictive power of their models. For the series of nucleosides logistic regression models and tree classification were developed. In both approaches, the Mor26v and GAP(HOMO, HOMO-1) descriptors were relevant to explain the leishmanicidal activity of these compounds. The logistic regression model reached 90.5% for classification accuracy to the workingset and 58% for testset after analysis of the domain of applicability of the model. The classification tree model reached 95% for classification accuracy of the workingset and 86% for the testset. A multiple linear regression model was applied to the series of antifungal agents. The electron energy and polar surface area were important for the leishmanicidal activity of this series. The predicted values showed 98% of correlation with the experimental values. The values found for the testset are also in agreement with the literature. Finally, new compounds were proposed for synthesis and evaluation of leishmanicidal activity. / Doutorado / Físico-Química / Doutor em Ciências

Magíster en Bioquímica área de Especialización en Bioquímica Clínica / Las infecciones fúngicas o micosis son infecciones producidas por hongos oportunistas y/o patógenos que pueden ser superficiales o sistémicas. El agente etiológico más importante a nivel mundial de estas infecciones es Candida albicans, una levadura comensal que coloniza entre un 30-60% de los humanos; sin embargo, frente a cambios en las condiciones locales o en la inmunidad del hospedero es capaz de causar una infección. Los antifúngicos son agentes naturales o sintéticos que eliminan y/o inhiben la proliferación de hongos. Sus principales mecanismos de acción son la inhibición de la formación de la pared celular y la disrupción de la membrana celular. Se han estudiado varios mecanismos de resistencia a antifúngicos en C. albicans. Los principales apuntan a mutaciones y sobreexpresión de los genes ERG11 (azoles) y FKS1 (equinocandinas) y/o a la sobreexpresión de las bombas de eflujo CDR1, CDR2 y MDR1; sin embargo, su contribución real a la generación de resistencia no está del todo dilucidada. El objetivo de este trabajo fue caracterizar los mecanismos de resistencia a azoles y equinocandinas en cepas clínicas chilenas, estableciendo los mecanismos de resistencia más prevalentes. Se estudiaron 10 cepas de aislados chilenos resistentes a azoles y 10 cepas resistentes a equinocandinas de C. albicans de origen clínico, buscando mecanismos de resistencia mediante el análisis de genes candidatos por técnicas de secuenciación, q-PCR y además mediante ensayos de funcionalidad de bombas de eflujo. Se encontró que en las cepas resistentes, tanto a azoles como a equinocandinas, no existe un mecanismo de resistencia único. Sin embargo, el mecanismo de resistencia más prevalente a azoles fue la sobreexpresión de bombas de eflujo, encontrándose en el 60% de las cepas ensayadas. Por otra parte, en las cepas resistentes a equinocandinas el mecanismo predominante fueron mutaciones en el gen FKS1, principalmente en la región HS1, encontrándose mutaciones de interés en un 20% del total de cepas resistentes estudiadas. Estos resultados entregan información importante acerca de los mecanismos predominantes para dos familias de antifúngicos en aislados clínicos chilenos de C. albicans. Es necesario un estudio multicéntrico con un mayor número de cepas para conocer con más detalle la realidad nacional de la resistencia a agentes antifúngicos en C. albicans. / Fungal infections or mycoses are infections caused by opportunistic and/or pathogenic fungi that may be superficial or systemic. The most important etiologic agent globally of these infections is Candida albicans, a commensal yeast that colonizes 30-60% of humans. Changes in local conditions or host immunity can produce a switch from a harmless colonizing commensal to causing a pathogen infection. Antifungal agents are natural or synthetic agents that eliminate and/or inhibit the growth of fungi; their main mechanism of action is the inhibition of cell wall formation and disruption of the cell membrane. Several mechanisms of antifungal resistance of C. albicans have been studied. The most common are mutations and overexpression of the ERG11 and FKS1 genes, involved in resistance to azoles and echinocandins, respectively, and/or the overexpression of efflux pumps CDR1, CDR2 and MDR1. However the real contribution of each resistance mechanism in Chilean clinical isolates has not been elucidated. The aim of this work was to characterize the resistance mechanisms to azoles and echinocandins in Chilean clinical isolates, in order to establish the most prevalent resistance mechanism. We studied 10 strains of C. albicans resistant to azoles and 10 strains resistant to echinocandins, and evaluated their resistance mechanisms using sequencing, q-PCR and functional assays of efflux pumps. We found that several resistance mechanisms are present in the azole and echinocandin resistant strains. However, the most prevalent mechanism of azole resistance was the overexpression of an efflux pump, present in 60% of the tested strains. Resistance to echinocandins can be ascribed predominantly to mutations in the FKS1 gene, mainly in the HS1 region. Mutations of interest were found in 20% of the resistant strains tested. These results provide important information about the predominant resistance mechanisms against two families of antifungals in Chilean strains of C. albicans. A multicenter study, with a greater number of isolates, will be necessary to know the national status of antifungal resistance in C. albicans / Conicyt, Fondecyt

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The genus Fusarium is characterized by hyaline filamentous fungi that cause a wide spectrum of infections predominantly in immunocompromised patients. These fungal infections show high rates of morbidity and mortality and are difficult to diagnosis, to prevent and to treat. The remarkable primary resistance to antifungal agents of this genus requires the search for new therapeutic possibilities. An attempt is a combination of drugs with different mechanisms of action. This study aimed to evaluate the in vitro susceptibility of Fusarium to conventional antifungal agents (amphotericin B, itraconazole, and voriconazole) and their combinations with no antifungal drugs (azithromycin, ciprofloxacin, fluvastatin, ibuprofen, metronidazole, and rifampicin) against 27 isolates of Fusarium spp. including the species: F. chlamydosporum (3), F. nygamai (1), F. oxysporum (6), F. proliferatum (2), F. solani (11), F. sporotrichoides (1), and F. verticillioides (3). Based on the protocol M38-A2 (CLSI, 2008) the technique of checkerboard was used for the assessment of associations. Alone, the MICs for amphotericin B ranged from 0.125 - 4 μg/ml; for voriconazole they ranged from 1 - >16 μg/ml, and for itraconazole all isolates showed MICs > 16 μg/ml. All combinations with amphotericin B showed synergistic interactions, and the most effective were amphotericin B plus ibuprofen (44.4%), amphotericin B plus metronidazole (40.7%), and amphotericin B plus ciprofloxacin (37%). No antagonistic interactions were observed for associations with amphotericin B. Similarly, all associations with voriconazole showed synergism, and the most significant associations were voriconazole plus ciprofloxacin (33.3%) and voriconazole plus metronidazole (33.3%). The antagonism was observed in all associations with voriconazole against F. verticillioides. The associations with itraconazole showed indifferent interactions for 100% of the isolates tested. These results demonstrate that the in vitro antifungal activity of the drug combination showed better results than the isolated one, except for associations with itraconazole. The most significant associations with amphotericin B and voriconazole deserve in vivo evaluations in order to verify their potential in the treatment of fusariosis. / O gênero Fusarium é caracterizado por fungos filamentosos hialinos que causam um amplo espectro de infecções predominantemente em pacientes imunocomprometidos. Estas micoses evidenciam elevados índices de morbidade e mortalidade e são de difícil diagnóstico, prevenção e tratamento. A marcante resistência primária deste gênero aos antifúngicos impõe a busca por novas possibilidades terapêuticas. Uma tentativa é a combinação entre fármacos com diferentes mecanismos de ação. Este estudo objetivou avaliar a suscetibilidade in vitro do gênero Fusarium a antifúngicos convencionais (anfotericina B, itraconazol e voriconazol) e associações destes com fármacos não antifúngicos (azitromicina, ciprofloxacina, fluvastatina, ibuprofeno, metronidazol e rifampicina) frente a 27 isolados de Fusarium spp., incluindo as espécies: F. chlamydosporum (3), F. nygamai (1), F. oxysporum (6), F. proliferatum (2), F. solani (11), F. sporotrichoides (1) e F. verticillioides (3). Com base no protocolo M38-A2 (CLSI, 2008) empregou-se a técnica de checkerboard para a avaliação das associações. Isoladamente, as CIMs para a anfotericina B variaram de 0,125 - 4 μg/ml; para o voriconazol variaram de 1 - >16 μg/ml e, para o itraconazol todos os isolados evidenciaram CIMs > 16 μg/ml. Todas as combinações com anfotericina B demonstraram interações sinérgicas, sendo que as mais eficazes foram: anfotericina B + ibuprofeno (44,4%), anfotericina B + metronidazol (40,7%) e anfotericina B + ciprofloxacina (37%). Não foram observadas interações antagônicas para as associações com anfotericina B. Similarmente, todas as associações com voriconazol demonstraram sinergismos; sendo que as associações mais significativas foram: voriconazol + ciprofloxacina (33,3%) e voriconazol + metronidazol (33,3%). O antagonismo foi observado em todas as associações com voriconazol frente a F. verticillioides. As associações com itraconazol evidenciaram interações indiferentes para 100% dos isolados testados. Estes resultados demonstram que a atividade antifúngica in vitro de fármacos combinados evidenciaram melhores resultados do que isolados, exceto para as associações com itraconazol. As associações mais relevantes com anfotericina B e voriconazol merecem avaliação in vivo, a fim de verificar o potencial das mesmas no tratamento da fusariose.