Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-02-03T18:03:27Z No. of bitstreams: 2 Tese - Karla de Aleluia Batista - 2014.pdf: 4463046 bytes, checksum: 859650f3ccfef17ceeaddf20db728272 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-02-04T13:59:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Karla de Aleluia Batista - 2014.pdf: 4463046 bytes, checksum: 859650f3ccfef17ceeaddf20db728272 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-04T13:59:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Karla de Aleluia Batista - 2014.pdf: 4463046 bytes, checksum: 859650f3ccfef17ceeaddf20db728272 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-09-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Beans are legumes that present high content of protein, which make them one of the most important sources of nutrients in Brazil. Despite their excellent nutritional profile, changes in biochemical and physico chemical properties during storage leads to the hardening of grains, which compromise their texture and palata bility. It is known that bean’s hardening is responsible for losses about of 100.000-500.000 ton of beans per year. In addition, considering that per capita intake of beans in Brazil was 16 Kg/person/year, the content of discharged grains as function of hardening could feed 34 million of Brazilian. In this scenario, several processes have been tested aiming to provide na alternative of inclusion for these residues. In this work, hardened beans from gen us Phaseolus (Phaseolus vulgaris) and Vigna (Vigna unguiculata) were treated by autoclaving and extrusion and the products were tested regarding their applicability in biotechnological area. The extruded beans presented nutritional and technological properties that allowed their use as ingredients in bread production. Results evidenced that breads made using a mixture of extruded bean and wheat flours presented 10% higher protein and 2.5-hold higher fiber than breads made with 100% wheat flour. These results indicate that extruded bean flours constitute ingredie nts nutritionally and economically viable for technological application in breads elaboration, conferring improvement of nutritional characteristics without changing sensory attributes. The extruded hardened beans were also used as ingredient of culture me dium replacing the traditional nitrogen sources. Results evidenced that the use of extruded cowpea (Vigna unguiculata) flour is not promising since the optical density of microorganisms grown in culture medium containing extruded cowpea was 20% lower than the optical density observed in commercial media. On the other hand, the microorganisms grown in media containing extruded common bean (Phaseolus vulgaris) presented higher values of optical density and protein expression when compared to commercial broths. Alternatively, the grains were treated by autoclaving, with perspective of use the whole grain. Results evidence that after autoclaving the hardness of grains remained high, which disable their use of whole grain. However, the autoclaving process improve d the nutritional quality without modifying the technological properties. Finally, results evidenced that each genus presented a different behavior after treatment by extrusion or autoclaving. Thus, it is evident that the type and conditions processing use dwill depend of bean characteristics as well as the properties required to the proposal application. / O feijão é uma leguminosa com importante papel na nutrição humana, sendo uma das principais fontes de proteínas na alimentação dos brasileiros. Entretanto, as alterações pós-colheita que ocorrem durante o armazenamento ocasionam o endurecimento do grão, que perde suas características de textura e palatabilidade. Estima-se que o endurecimento ocasione perdas de 100-500 mil toneladas deste grão ao ano. Considerando que o consumo per capita de feijão em 2013 foi estimado em 16 Kg por habitante ao ano, as perdas relacionadas ao endurecimento alimentariam aproximadamente 34 milhões de brasileiros. Neste cenário, diversas alternativas têm sido testadas no intuito de reaproveitar os grãos endurecidos. Neste trabalho, feijões endurecidos dos gêneros Phaseolus (Phaseolus vulgaris) e Vigna (Vigna unguiculata) foram tratados por extrusão e autoclavagem no intuito de se estudar as possíveis aplicações dos produtos gerados.Os feijões extrusados apresentaram características nutricionais e tecnológicas que permitiram sugerir sua aplicação como ingrediente na formulação de pães e como fonte de nitrogênio para composição de meios de cultura. A utilização de farinhas mistas de feijão extrusado e trigo originou pães com 10% mais proteínas e 2,5 vezes mais fibras do que os pães produzidos apenas com farinha de trigo. Estes resultados evidenciaram que as farinhas de feijão extrusado constituem ingredientes nutricionalmente e economicamente viáveis para a aplicação tecnológica na elaboração de pães, melhorando as características nutricionais sem alterar os atributos sensoriais. As farinhas de feijão extrusado também foram utilizadas como fonte de nitrogênio em meios de cultura, avaliando-se o efeito da substituição na taxa de crescimento e expressão de proteínas. Os resultados evidenciaram que o uso de feijão caupi (Vigna unguiculata) extrusado não é uma alternativa promissora para o cultivo de bactérias, uma vez que os valores de densidade óptica foram 20% inferiores àqueles apresentados em meio comercial. Por outro lado, o feijão comum (Phaseolus vulgaris) extrusado mostrou-se uma eficiente fonte de nutrientes para o crescimento de bactérias e leveduras. Além disso, o uso de meios de cultura contendo feijão comum melhorou a taxa de produção de proteínas recombinantes tanto em bactérias, quanto em leveduras. Os grãos de feijão caupi e comum endurecidos também foram tratados por autoclavagem no intuito de se avaliar a possibilidade de reinclusão do grão inteiro na alimentação. Os resultados encontrados evidenciaram que, apesar dos valores de dureza não permitirem a reinclusão dos grãos inteiros na alimentação, a autoclavagem melhorou as características nutricionais dos feijões endurecidos, enquanto preservou suas propriedades tecnológicas. Por fim, os resultados obtidos neste trabalho evidenciar am que cada espécie de feijão apresenta um comportamento distinto frente a cada condição de processamento, seja por autoclavagem, seja por extrusão. Diante disso, fica evidente que o tipo e as condições de processamento a serem escolhidos dependerão da espécie de feijão utilizada e das propriedades requeridas para cada aplicação proposta.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-04-01T20:14:11Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Aline Andrade Mourão - 2015.pdf: 2000857 bytes, checksum: 1da1abfc4f16d1970615dc3393d09323 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-04T14:50:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Aline Andrade Mourão - 2015.pdf: 2000857 bytes, checksum: 1da1abfc4f16d1970615dc3393d09323 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-04T14:50:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Aline Andrade Mourão - 2015.pdf: 2000857 bytes, checksum: 1da1abfc4f16d1970615dc3393d09323 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Studies have demonstrated that neurons in the median pre-optic nucleus (MnPO) play a key role in the organization of cardiovascular responses induced by changes in circulating volume mostly through their projections to the paraventricular nucleus (PVN) of the hypothalamus. PVN in turn, projects to the rostroventrolateral medulla (RVLM) one of the main generators nucleus of vascular sympathetic, renal and cardiac activity. However, the autonomic response of blocked of the MnPO and central pathways and / or mechanisms involved in these responses remains unknown. The present study sought to determine the involvement of the MnPO in cardiovascular and autonomic regulation in Wistar (WT) and spontaneously hypertensive rats (SHR). For these, rats of the lineages WT (n = 6) and SHR (n = 6), weighing between 250 and 300g were anesthetized with urethane (1.2 g / kg, iv.) after induction with halothane (2% in O2 100%). The right femoral artery and vein were cannulated for recording of mean arterial pressure (MAP), and infusion of drugs, respectively. Heart rate (HR) was calculated as instantaneous frequency signal electrocardiogram (ECG). The animals were positioned in a stereotaxic apparatus, and instrumented for recording renal sympathetic nerve activity (RSNA). The nanoinjections of saline (NaCl; 150 mM), kynurenic acid (glutamate receptor antagonist; 50 mM) and muscimol (GABA agonist; 4 mM) were also performed. As expected, saline nanoinjections did not change the values of MAP (WT: 0.4 ± 0.2 mmHg; SHR: 0.2 ± 0.4 mmHg), HR (WT: 0.7 ± 0.9 bpm; SHR, 1.1 ± 1.4 bpm) and RSNA (WT: 0.4 ± 0.2%; SHR: 0.2 ± 1.3%). In WT (n=6) rats, the blockade of the MnPO with muscimol promoted fall in MAP (-17.0 ± 1.2 mmHg), bradycardia (-55,4 ± 12,3 bpm) and reduces in RSNA (-37.5 ± 3.9 %). The muscimol nanoinjections into the MnPO in SHR (n=6) promoted hypotension (-31.6 ± 5.0 mmHg), bradycardia (-18.3 ± 7.2 bpm), and renal sympathoinhibition (-54.4 ± 6.2 %). The changes in cardiovascular and autonomic parameters were evaluated in WT and SH rats submitted to sinoartic denervation. In normotensive rats, the inhibition of the MnPO by muscimol promoted decrease of MAP in innervated rats (n=6) and denervated (-19.4 ± 1.9 vs. 20.9 ± 4.3 mmHg, respectively; 3min; n=6), which was maintained throughout the experimental period (13.5 ± 2.0 vs. 22.5 ± 4.3 mmHg, 30 min). Also did not evidenced differences in RSNA in WT innervated (-23.0 ± 1.5%; 3min) and denervated (-21.0 ± 4.9%; 3min) rats. In denervated hypertensive rats (n=5), the blocked of MnPO resulted in progressive decrease in MAP (-31.1 ± 6.7, ± 9.7 and -38.7 ± 7.1 -44.7 mmHg, respectively 3, 15 and 30 min after MnPO blockade). The changes observed in the HR (-1.3 ± 3.3; -21.5 ± 12.6 and -24.9 ± 12.2 bpm, respectively 3, 15 and 30 min after MnPO blockade) and RSNA (-16.4 ± 8.8; -37.3 ± 10.1 and -45.1 ± 8.7%, respectively 3, 15 and 30 min after MnPO blockade) also followed this pattern of response. Finally to identify the involvement of glutamatergic neurotransmission in the MnPO on the cardiovascular and autonomic control, nanoinjections of kynurenic acid were performed in this nucleus. The glutamatergic blockade promoted decrease in MAP (WT: -18.2 ± 4.1 mmHg; SHR: -21.0 ± 2.5 mmHg), bradycardia (WT: -7.1 ± 1, 9 bpm; SHR: -9.0 ± 6.0 bpm) and renal simpathoinhibition (WT: -19.7 ± 2.4%; SHR: -24.7 ± 2.4%) in normotensive and hypertensive rats. In summary, the results obtained on this study demonstrated that acute blockade of MnPO reduces blood pressure (BP), confirming recent data that indicate that this nucleus participates of tonic control on BP. Our data suggest the involvement of MnPO the tonic regulation of sympathetic activity in WT and SHR. In addition, suggest the participation of this nucleus in increased sympathetic activity and consequent arterial blood pressure in SHR. The results demonstrated that aortic and carotid afferent participates in the modulation of autonomic and cardiovascular responses induced by blockade the MnPO in SHR. Furthermore, our data suggest that glutamatergic neurotransmission in the MnPO is important for the tonic regulation of BP, HR and RSNA thus, bringing new evidence that this nucleus participates of the autonomic and cardiovascular control. / Estudos têm demonstrado que os neurônios do núcleo pré-óptico mediano (MnPO) desempenham um importante papel na regulação cardiovascular e hidromineral, principalmente, por meio de suas projeções para o núcleo paraventricular (PVN) do hipotálamo. O PVN, por sua vez projeta-se para a região rostroventrolateral do bulbo (RVLM) um dos principais núcleos geradores da atividade simpática vascular, renal e cardíaca. Todavia, as respostas autonômicas frente a inibição do MnPO, bem como vias centrais e/ou mecanismos envolvidos nessas respostas permanecem desconhecidos. O presente estudo buscou determinar a participação do MnPO na regulação autonômica e cardiovascular em ratos wistar (WT) e espontaneamente hipertensos (SHR). Para tanto, ratos das linhagens WT e SHR, pesando entre 250 e 350g foram anestesiados com uretano (1,2 g/kg, iv.) após a indução com halotano (2% em O2 100%). A artéria e veia femorais direitas foram canuladas para o registro da pressão arterial média (PAM), e a infusão de drogas, respectivamente. A frequência cardíaca (FC) foi calculada como frequência instantânea do sinal de eletrocardiograma (ECG). Os animais foram posicionados em um aparelho estereotáxico e instrumentalizados para registro da atividade nervosa simpática renal (ANSR), e nanoinjeções (100nl) de soro fisiológico (NaCl; 150mM); ácido quinurênico (antagonista glutamatérgico; 50mM) e muscimol (agonista gabaérgico; 4mM) no MnPO. Como esperado, as nanoinjeções de soro não alteraram os valores da PAM (WT: 0,4 ± 0,2 mmHg; SHR: 0,2 ± 0,4 mmHg), FC (WT: 0,7 ± 0,9 bpm; SHR; 1,1 ± 1,4 bpm) e da ANSR (WT: 0,4 ± 0,2 %; SHR: -0,2 ± 1,3 %).Em ratos WT (n=6), o bloqueio farmacológico do MnPO com muscimol promoveu queda na PAM (-17,0 ± 1,2 mmHg), bradicardia (-55,4 ± 12,3 bpm) e redução na ANSR (-37,5 ± 3,9 %). As nanoinjeções de muscimol no MnPO dos SHR (n=6) promoveram hipotensão (-31,6 ± 5,0 mmHg), bradicardia (-18,3 ± 7,2 bpm), e simpatoinibição renal (-54,4 ± 6,2 %). As variações dos parâmetros autonômicos e cardiovasculares induzidas pela inibição do MnPO também foram avaliadas em ratos WT e SHR submetidos à desnervação dos aferentes sinoaórticos. Nos ratos normotensos, a inibição do MnPO com muscimol promoveu queda na PAM nos ratos inervados (n=6) e desnervados (-19,4 ± 1,9 vs. -20,9 ± 4,3 mmHg, respectivamente; 3min; n=6), sendo esta mantida por todo período experimental (-13,5 ± 2,0 vs. -22,5 ± 4,3 mmHg; 30min). Também não foram evidenciadas diferenças na redução da ANSR nos ratos WT inervados (-23,0 ± 1,5 %; 3min) e desnervados (-21,0 ± 4,9 %; 3min). Nos ratos hipertensos desnervados (n=5), o bloqueio do MnPO promoveu uma progressiva redução na PAM (-31,1 ± 6,7; -38,7 ± 9,7 e -44,7 ± 7,1 mmHg; respectivamente 3, 15 e 30 min após o bloqueio do MNPO). As alterações promovidas na FC (-1,3 ± 3,3; -21,5 ± 12,6 e -24,9 ± 12,2 bpm; respectivamente 3, 15 e 30 min após o bloqueio do MNPO) e ANSR (-16,4 ± 8,8; -37,3 ± 10,1 e -45,1 ± 8,7 %; respectivamente 3, 15 e 30 min após o bloqueio do MNPO) também seguiram esse padrão de resposta. Por fim para identificarmos a participação da neurotransmissão glutamatérgica no MnPO sobre o controle cardiovascular e autonômico, nanoinjeções de ácido quinurênico foram realizadas neste núcleo. O bloqueio glutamatérgico no MnPO promoveu queda na PAM (WT: -18,2 ± 4,1 mmHg vs. SHR: -21,0 ± 2,5 mmHg), bradicardia (WT: -7,1 ± 1,9 bpm vs. SHR: -9,0 ± 6,0 bpm e simpatoinibição renal (WT: -19,7 ± 2,4 % vs. SHR: -24,7 ± 2,4 %). Em conjunto, os resultados obtidos nesse estudo demonstraram que o bloqueio agudo do MnPO reduz a pressão arterial (PA), corroborando com dados recentes que indicam que esse núcleo participa do controle tônico da PA. Nossos dados sugerem o envolvimento do MnPO na regulação tônica da atividade simpática em WT e SHR. Ademais, sugerem a participação desse núcleo no aumento da atividade simpática e consequente hipertensão arterial observada em SHR. Os resultados evidenciaram ainda, que os aferentes aórticos e carotídeos participam na modulação das respostas autonômicas e cardiovasculares induzidas pelo bloqueio do MnPO em SHR. Além disso, nossos dados sugerem que a neurotransmissão glutamatérgica no MnPO é importante para a regulação tônica da PA, FC e ANSR trazendo assim novas evidências de que esse núcleo participa do controle autonômico e cardiovascular.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-07-13T20:37:59Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rayane Mendes de Lima - 2016.pdf: 1517541 bytes, checksum: 21e56d88c3ecbe596bbba9be9f3ea87e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-07-14T13:04:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rayane Mendes de Lima - 2016.pdf: 1517541 bytes, checksum: 21e56d88c3ecbe596bbba9be9f3ea87e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T13:04:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rayane Mendes de Lima - 2016.pdf: 1517541 bytes, checksum: 21e56d88c3ecbe596bbba9be9f3ea87e (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-02 / Diabetic nephropathy is the leading cause of end-stage renal disease (ESRD) in developed countries and in the literature shows as oxidative stress possibly contributes to the development of the diseases. Glutathione S-transferases (GSTs) are a family of multifunctional enzymes that play an important role in the cellular detoxification and excretion of numerous substances and can also work as one of the antioxidants. The genetic polymorphism of deletion in GSTT1 and GSTM1 gene, when homozygous, show lack of activity of these isoforms, known as null genotype. Looking for a possible relationship between diabetic nephropathy and polymorphisms mentioned above, this study was made for the case-control and genotyping using real-time PCR (qPCR) and melting curve. Clinical and laboratorial data of 65 patients (diagnosed with diabetic nephropathy and were on hemodialysis) and 90 controls were collected through interviews and consultation with medical records (patients) and the results of recent surveys (controls). It was found that in the group if there is a risk associated with deletion polymorphism, where the GSTT1-null genotype (p = 0,0230) causes an increased risk of about 2,9 times in developing the disease (diabetic nephropathy) compared to carriers of the genotype GSTT1-present. There was no association of GSTM1 (p = 0.3860) with susceptibility to disease in this population. Analysis of the influence of the deletion of GSTT1 and GSTM1 about the biochemical and clinical changes in the group case did not result in a significant association in any of the clinical variables analyzed. These results suggest that the GSTM1 deletion polymorphism may be associated with risk of developing the disease, but not with the biochemical changes that were analyzed. Further studies may clarify the relationship of this polymorphism with diabetic nephropathy and help in the treatment of this disease. / A nefropatia diabética é a principal causa de Estágio Final de Doença Renal (ESRD) em países desenvolvidos e evidências tem apontado o estresse oxidativo como unificador de várias vias de dano celulares em condições de hiperglicemia, que resultaria no desenvolvimento e complicações da doença. As glutationa-S-transferases (GSTs) são uma família de enzimas multifuncionais que desempenham um papel importante na desintoxicação celular e eliminação de numerosas substâncias e também pode funcionar como um dos antioxidantes. O polimorfismo genético de deleção nos genes GSTT1 e GSTM1, quando em homozigose, apresentam ausência de atividade dessas isoformas, conhecido como genótipo nulo. Procurando estabelecer uma possível relação entre nefropatia diabética e os polimorfismos acima mencionados, foi feito um estudo por caso-controle e a genotipagem por meio de PCR em tempo real (qPCR) e curva de melting. Dados clínico-laboratoriais de 65 pacientes (diagnosticados com nefropatia diabética e que estavam em hemodiálise) e 90 controles foram coletados, por meio de entrevistas e consulta a prontuários (pacientes) e a resultados de exames recentes (controles). Foi verificado que no grupo caso existe um risco associado ao polimorfismo de deleção, onde o genótipo GSTT1-nulo (p=0,0230) provoca um risco aumentado de aproximadamente 2,9 vezes em desenvolver a doença (nefropatia diabética) em relação aos portadores do genótipo GSTT1-presente. Não houve associação de GSTM1 (p=0,3860) com a susceptibilidade a doença na população estudada. A análise da influência da deleção de GSTT1 e GSTM1 sobre as alterações bioquímicas e clínicas no grupo caso não resultou em uma associação significativa de nenhuma das variáveis clínicas analisadas. Estes resultados sugerem que o polimorfismo de deleção de GSTT1 pode estar associado ao risco de desenvolvimento da doença, mas não com as alterações bioquímicas que foram analisadas. Novos estudos poderão esclarecer a relação desse polimorfismo com a nefropatia diabética e auxiliar no tratamento desta doença.

Foram estudadas, pelo método da assinatura digital, 35 biópsias esofágicas provenientes de pacientes da província de Linxian, China, classificadas por dois observadores com ampla experiência em patologia gastrointestinal como normais, displasias ou carcinomas (8 casos normais, 6 displasias leves, 8 displasias moderadas, 4 displasias acentuadas, 4 carcinomas suspeitos de invasão e 5 carcinomas invasores). O objetivo do trabalho foi caracterizar os núcleos das populações celulares desses casos de forma que permitisse a derivação de informações diagnósticas e de possível implicação prognóstica a partir do estudo quantitativo das características nucleares de cada caso ou categoria diagnóstica. As biópsias foram coradas pelo método de Feulgen, sendo então selecionados e digitalizados 48 a 50 núcleos de cada uma delas. De cada núcleo foram extraídas 93 características cariométricas, arranjadas arbitrariamente em histograma designado como assinatura nuclear. Da média aritmética de cada característica dos núcleos de uma mesma biópsia resultou a assinatura digital do caso. A análise de funções discriminantes, baseada nas 15 características cariométricas que ofereceram melhor discriminação entre as categorias diagnósticas, mostrou que o grupo classificado como normal foi claramente distinto das demais categorias. A densidade óptica total aumentou progressivamente segundo a classificação das biópsias, do normal à displasia acentuada, sendo o valor do carcinoma semelhante ao da displasia moderada. A matriz de comprimento de seqüência apresentou o mesmo perfil, ou seja, ambas as características ofereceram discriminação clara entre as categorias diagnósticas, com exceção do carcinoma invasor, cujos valores foram superponíveis aos da displasia moderada. O estudo demonstrou a viabilidade da quantificação de características nucleares através das assinaturas nucleares digitais, que demonstraram diferenças estatisticamente significativas entre diferentes categorias diagnósticas e a elevação progressiva dos valores mensurados relacionados com o espectro das lesões, apresentando-as como um histograma (assinatura digital nuclear). / 35 esophageal biopsies of patients from the Linxian province in China, classified by two experienced gastrointestinal pathologists as normal, dysplasias or carcinomas ( 8 normal cases, 6 mild dysplasias, 8 moderate dysplasias, 4 severe dysplasias 4 carcinomas suspicious of invasion and 5 invasive carcinomas) were studied by the method of digital signature. The aim of this study was to characterize the nuclei of these cases cell populations in such a way that diagnostic and prognostic information could be derived from the nuclear quantitative features of each case or each diagnostic category. The biopsies were stained by the Feulgen method, a stechiometric reaction, 48 to 50 nuclei from each biopsy being selected and digitized. 93 kariometric features were obtained from each nucleus and placed arbitrarily in a histogram designated as nuclear signature. The nuclear signatures of a case resulted from the mean values of each nuclear feature of the same biopsy, divided by the standard deviation of the normal cell population. The analysis of discriminant functions, based on the 15 kariometric features with the best discrimination power among diagnostic categories, revealed that the group classified as normal was clearly distinct from the other groups. Optical density augmented progressively according to the biopsy classification from normal to severe dysplasia, the value for carcinoma being similar to that for moderate dysplasia. The run length matrix showed the same profile, that is, both features offered clear discrimination among diagnostic categories, except invasive carcinoma, whose values overlapped those for moderate dysplasia. The study demonstrated the feasibility of the examination of quantitative nuclear features, revealing statistically significant differences among the various diagnostic categories and the progressive elevation of measured values in relation to the increasing degree of the lesion, and demonstrating such differences as histograms (nuclear signatures).

O linfoma canino é uma das neoplasias mais prevalentes em cães, diagnosticado frequentemente através de exame citológico de aspirados. A imunofenotipagem para diferenciação entre linfomas de células B e T é importante para definição prognóstica e tratamento, entretanto, dificilmente é realizada em materiais provenientes de aspirados citológicos. A citologia em meio líquido (CML) é uma metodologia automatizada de produção de esfregaços citológicos, que permite a conservação de todo o material da aspiração, e utilização do material residual para, por exemplo, produção de emblocado celular (EC) e imunocitoquímica. Este trabalho teve como objetivo aplicar a CML e EC com imunocitoquímica em amostras de linfonodos caninos suspeitos para linfoma. Além disso, pretendeu caracterizar morfologicamente as células linfoides neste tipo de preparado, comparando ao esfregaço convencional. Para isto, foram selecionados 54 cães com linfadenomegalia, 10 deles sorologicamente positivos para leishmaniose canina. Comparou-se a CML com a citologia convencional, quanto às características técnicas e testou-se dois métodos diferentes de EC: Bouin e agarose com formalina. Aplicou-se painel imunocitoquímico de anticorpos anti-CD3, anti-CD79a, anti-Pax-5 e anti-Ki67, para imunofenotipagem e determinação da proliferação celular. Adicionalmente, realizaram-se análises estatísticas para avaliação do desempenho e concordância interobservador comparada entre citologia convencional, CML e o uso conjunto de CML e imunocitoquímica do emblocado celular. Como resultado, as células linfoides apresentaram-se preservadas, com melhor definição de cromatina e nucléolos, porém com tamanho reduzido e pior definição citoplasmática, na CML. O EC de Bouin revelou grupos densos e bem definidos, que permitiram a aplicação da imunocitoquímica. Por outro lado, os emblocados de agarose, apresentaram-se frouxos, com células marcadamente dispersas, revelando-se inadequados para preparados de células linfoides. O anticorpo anti-Pax-5 mostrou-se mais adequado do que o anti-CD79a para marcação de células B em emblocados, por produzir menos fundo e pela marcação nuclear ser mais distinguível do que a citoplasmática. A concordância interobservadores da CML foi moderada (k= 0,434), enquanto a da citologia convencional foi boa (k=0,762). Ambas as técnicas exibiram a mesma acurácia e, com aplicação da CML, houve redução do percentual de amostras insatisfatórias. A CML em conjunto com EC e imunocitoquímica apresentou maior sensibilidade (75%), especificidade (99%) e acurácia (89,47%). Como conclusão, a CML em conjunto com EC e imunocitoquímica pode ser aplicada para diagnóstico de linfoma canino, com maior sensibilidade, especificidade e acurácia / Canine lymphoma is one of the most commonly treated neoplasia in dogs, frequently diagnosed through cytological smears. Differentiating B lymphomas from T lymphomas is important for prognosis and treatment, however, immunophenotyping is rarely applied to cytological preparations. Liquid-based cytology (LBC) is an automated method for producing cytological smears, allowing preservation of the residual material for other analysis, as cell block (CB) immunocytochemistry. The aim of this study was to apply LBC and cell block immunocytochemistry in the diagnosis of lymphoid samples from dogs suspected of lymphoma. Besides, we intended to characterize the lymphoid cells regarding to its morphology, comparing to conventional cytology. To accomplish these goals, 54 dogs were selected, being 10 of them with canine leishmaniasis. LBC smears were compared to conventional smears, with production of two types of CB: bouin and formalin with agarose. Also, an immunocytochemistry panel with anti-CD3, anti-CD79a, anti-Pax-5 and anti-Ki-67 was applied, for immunophenotyping and cellular proliferation determination. As results, lymphoid cells were well preserved, with better nuclear definition, but smaller size and worst cytoplasmic definition, in LBC. Bouin CBs revealed cohesive groups, which allowed immunocytochemistry. In the other hand, agarose CBs were loose, with disperse cells, inadequate for lymphoid aspirates. Anti-Pax-5 antibody was more adequate than anti-CD79a, once it produced less background and the nuclear marking was more distinct than cytoplasmic. CML interrater agreement was moderate (k=0,434), while conventional cytology agreement was good (k=0,762). Both techniques exhibited the same accuracy, and, with CML, there was reduction of unsatisfactory results. LBC with cell block immunocytochemistry presented the higher sensitivity (75,00%), specificity (99,99%) and accuracy (89,47%). As conclusion, LBC with immunocytochemistry CB can be applied for canine lymphoma diagnosis, with higher sensitivity, specificity and accuracy

Os efeitos de ribonucleosídeos de guanina substituídos na posição C-8 na proliferação de linfócitos B estão bem documentados na literatura. Esses compostos são análogos de adutos formados pela adição de radicais livres a ribonucleosídeos e a RNA. Neste trabalho, verificamos as propriedades proliferativas de dois desses adutos, 8-metilguanosina (8-MeGuo) e 8-oxo-7 ,8-di-hidroguanosina (8-OxoGuo) e comparamos com 8-bromoguanosina (8-BrGuo), o composto mais estudado como indutor da proliferação de linfócitos B. 8-MeGuo e 8-OxoGuo foram sintetisados em rendimentos de 28 e 55%, respectivamente, e foram caracterizados por UV, NMR e CG-massa. Seus efeitos sobre a incorporação de timidina radioativa ([3H] TdR) no DNA de células de baço, fibroblasto 3T3(A31) e melanoma B16F10 foram examinados. Os dois adutos foram mitogênicos para células de baço mas foram seletivos quanto as células imortalizadas. 8-MeGuo atuou sobre células 3T3(A31) e 8-OxoGuo sobre as células de melanoma B16F10. O análogo não fisiológico 8-BrGuo foi efetivo em todas as células testadas. Experimentos de contagem de células, citotoxicidade e citometria de fluxo, indicaram que a síntese de DNA induzida pelas guanosinas substituídas na posição C-8 refletia crescimento celular. Foi proposto que os compostos agem de dentro da célula uma vez que seus efeitos são bloqueados em presença de um inibidor de transporte de nucleosídeo, mas não foram inibidos por um antagonista de receptor purinérgico. Os resultados obtidos, junto com os descritos na literatura, sugerem que no caso dos fibroblastos 3T3(A31) e células de baço de camundongo os efeitos proliferativos dos compostos não são dependentes do metabolismo desses compostos via salvação das purinas. No caso das células de melanoma, entretanto, os compostos parecem fazer parte do \"pool\" de nucleosídeos. A demonstração de que adutos produzidos por ataques radicalares em ribonucleosídeos e RNA são capazes de induzir proliferação celular, abre novas perspectivas para a compreensão do papel de radicais livres em processos carcinogênicos. / The ability of CS-substituted guanine ribonucleosides to induce B cell proliferation has been well documented in the literature. These compounds are analogues of adducts formed from free radical attack on ribonucleosides and RNA. Here we examined the proliferative properties of two of these radical adducts, 8-methylguanosine (8-MeGuo) and 8-oxo-7 ,8-dihydroguanosine (8-OxoGuo) and compared them with those of the well studied B cell mitogen, 8-bromoguanosine (8-BrGuo). 8-MeGuo and 8-OxoGuo were synthesized in yields of 28 and 55 %, respectively, and were characterized by UV, NMR and CG-MS. Their effects upon [3H] thymidine uptake by Swiss mice splenocytes, mouse embryo 3T3 (A31) fibroblasts and mouse B16F10 melanocytes were examined. Both guanosine radical adducts were shown to increase [3H] thymidine uptake by mice splenocytes but displayed selectivity in regard to continuous cell lines. 8-MeGuo acted upon 3T3(A31) fibroblasts whereas 8-OxoGuo acted upon B16F10 melanocytes. The non physiological analogue 8-BrGuo acted upon all tested cells. Parallel experiments of cell counting, cytotoxicity, and cell sorting indicated that DNA synthesis induced by the C8-substituted guanosines reflected cell growth. It is proposed that the compounds act intracellularly because their proliferative effects were blocked in the presence of a nucleoside transport inhibitor but were not inhibited by an antagonist of the A2 purine receptor. The obtained results, taken together with data from the literature suggest that in the case of 3T3 (A31) fibroblasts and mice splenocytes the proliferative effects of the compounds are not dependent on metabolism through purine salvage pathways. In the case of melanocytes, however, the compounds are likely to become part of the purine nucleoside pool. The demonstration that adducts produced by free radical attack on ribonucleosides and RNA are able to induce cell proliferation opens new perspectives for the understanding of free radical mediated carcinogenesis.

Orientador: Angelo Luiz Cortelazzo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-12T06:58:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_JulioSergiodos_M.pdf: 5025798 bytes, checksum: 4ddea54a8d30670e9bf2b6160acf89cc (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O presente estudo teve como objetivo analisar as avaliações, que foram empregadas pelos professores de ensino médio na disciplina de biologia, quando é abordado o tópico sobre biologia celular, traçando um paralelo entre as avaliações realizadas e os conteúdos de outras avaliações de âmbito mais geral, com destaque para o Concurso Vestibular da UNICAMP e o Exame Nacional do Ensino Médio - ENEM. Nas escolas pesquisadas foram analisados os conteúdos dos livros, os seus exercícios, e os planos de ensino dos professores. Além disso, foram propostos questionários, os quais abordaram um conjunto de questões que visou mostrar a forma como o professor encara o processo ensino/aprendizagem e como a avaliação se insere nesse contexto. Este conjunto de questões correspondeu a dois instrumentos, sendo que o primeiro entrevistou, de modo semi-estruturado, 15 professores de biologia das escolas selecionadas e o segundo instrumento entrevistou, num questionário tipo escala Likert, 59 professores de várias disciplinas. Estas entrevistas ocorreram em escolas localizadas no centro e na periferia de duas cidades da região de Campinas. Verificamos que as escolas localizadas no centro das cidades apresentaram diferenças em relação às escolas da periferia, quanto ao processo de avaliação e ao processo de ensino e aprendizagem do conteúdo de biologia celular. A localização das escolas pareceu influenciar os planos de ensino e os processos de avaliação, possivelmente em decorrência das características dos públicos docentes, discentes e a disponibilidade para possuir tecnologias de ensino, as quais incluem o uso de laboratório. Além disso, demonstrou-se que existe uma estreita relação de influência entre os exames vestibulares (UNICAMP) e ENEM com os exercícios dos livros didáticos e com a forma de estabelecer os conteúdos das provas escolares. A prática avaliativa escolar é normalmente marcada pela ação passiva de aprendizagem, resumindo-se à classificação dos alunos e à extensão de conteúdos, os quais em certas escolas, foram mais aprofundados que em outras. / Abstract: This study aimed to analyse the assessments that were used by biology teachers in high school, in relation to the subject of cell biology. We draw a parallel between the teacher's assessments and the contents of other asssessments - ENEM and entrance exam of UNICAMP University. In schools surveyed were analysed the textbook content, exercises and the class planning for cell biology teaching. Also, were proposed several questions to analyze the teacher's view of teaching, learning and how the assessment is inserted in this process. We used two questioning methods. In the first case, we employed a partly structured interview with fifteen biology teachers. The second consisted in a questionnaire using the Likert scale, wich was answered by fifty-nine teachers that administred several different subjects. These interviews were applied in two central and two suburban schools, in region of Campinas. In the central schools, we noticed that the contents were more profound than in suburban schools. Also, the location of the schools seemed to influence the planning of teaching and assessment, because of the presence or lack of laboratory in teaching of cell biology and, also, of the teacher's characteristics and student's characteristics. Also, we found that the textbook contents and exercises interfere strongly in the planning of assessments. This influence leads to the teacher's questioning the exact textbook content, which is fragmented. We noticed that the assessment of the understanding in the cell biology was based on fragmented contents and there is a lack of dynamic learning, in which cellular functions and structures would be integrated. In this study we noticed a narrow influence relationship between the contents of assessments (ENEM and UNICAMP) and the planning for teacher's assessment in relation to the subject of cell biology. This influence we found in textbooks excercises and contents of tests. The teacher's assessments are usually marked by passive action of learning. Also, this action promotes the student's classification and the verification of the contents. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-05-24T17:51:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337732.pdf: 1919311 bytes, checksum: f784f38a86994b9fd7a8b4fbd0781673 (MD5) Previous issue date: 2015 / A Artrite Reumatoide (AR) é uma doença autoimune caracterizada por inflamação crônica que causa erosões e deformidades nas articulações, podendo ter acometimento de órgãos como pulmão e coração. A molécula HLA-G está relacionada com a inibição de células do sistema imune, como células T e NK, conferindo proteção contra respostas inflamatórias. Entre os polimorfismos ligados à sua expressão, estão os localizados na região 3´UTR do gene HLA-G, que incluem dez sítios polimórficos descritos: um polimorfismo de inserção ou deleção (InDel) de um fragmento de 14pb e nove SNPs (+3001, +3003 T/C, +3010 C/G, +3027 A/C, +3035 C/T, +3142 G/C, +3187 A/G, +3196 G/C e +3227 A/G). A partir disso, o objetivo desse estudo será realizar um estudo caso-controle e verificar a influência desses polimorfismos na manifestação da doença. A família Alu é o elemento móvel mais comum em genomas de primatas, com mais de 1,1 milhões de cópias no Homo sapiens. A inserção AluyHG encontra-se entre os loci HLA-A e HLA-G, podendo ser um marcador da região. A partir disso, o objetivo desse estudo foi genotipar 115 pacientes e 115 controles (classificados por faixa etária) e verificar a influência desses polimorfismos na manifestação da doença. Para isso, foi realizado um levantamento de dados epidemiológicos e clínicos relacionados à manifestação da doença (hábito tabagista, fator reumatoide, proteína C-reativa e velocidade de hemossedimentação) e estes foram testados. O DNA foi extraído de sangue total e a genotipagem feita por PCR e visualização em eletroforese em gel vertical de poliacrilamida em concentração de 7%, corado com nitrato de prata, no caso do polimorfismo de 14pb do HLA-G, e em gel de agarose 1%, corado com GelRedTM, no caso do polimorfismo AluyHG (com 322pb). Os SNPs do HLA-G foram identificados por meio de sequenciamento pelo método de Sanger. Foram realizados cálculos das frequências alélicas e genotípicas, análises de associações e inferência de haplótipos. Após as análises foram encontrados valores significativos de associação dos polimorfismos e a manifestação de AR para os genótipos +3196*G*C (OR=2,387, p=0,026), AluyHG*In (OR=0,524, p=0,006) AluyHG*Del (OR=1,907, p=0,006), AluyHG*In*Del (OR=0,441, p=0,006), AluyHG*Del*Del (OR=2,466, p=0,002). Para os modelos de herança, foram encontradas associações com: +3010*G+GC (OR=0,658, p=0,011), +3010*C+GC (OR=1,519, p=0,011), +3142*G+GC (OR=1,435, p=0,029), +3142*C+GC (OR=0,697, p=0,029), AluyHG*DD+IDxII (OR=0,402, p=0,002), AluyHG*I+ID (OR=0,465, p=0,000), AluyHG*D+ID (OR=2,152, p=0,000). Para os dados clínicos, foram encontradas as seguintes associações: FR e +3010*GG (OR=4,685, p=0,032) e +3196*GC (OR=0,388, p=0,049), CRP e +3196*GC (OR=0,301, p=0,011) e +3196*CC (OR=2,713, p=0,035), VHS e +3003*C (OR=0,296, p=0,042) e +3003*T (OR=3,382, p=0,042). Para os haplótipos e combinações haplotípicas, foram encontrados: UTR5 (OR=2,174, p=0,048), UTR1+UTR5 (OR=5,532, p=0,034); nos modelos de herança UTR5 (OR=2,346, p=0,038), UTR1+AluyHG*Ins (OR=0,556, p=0,047), UTR5+AluyHG*Del (OR=2,247, p=0,050). Em conclusão, este estudo permitiu investigar a possibilidade de associação do gene HLA-G em relação à Artrite Reumatoide, corroborando com dados encontrados na literatura e trazendo alguns dos resultados de associação com doenças autoimunes, que não haviam sido encontrados em nenhuma literatura até o momento. Mais estudos funcionais devem ser realizados para melhor compreender como os polimorfismos genéticos podem agir na patogênese da AR.Palavras chave: Artrite Reumatoide. HLA-G. AluyHG. Doença autoimune. Estudo de associação. Genética epidemiológica. ABSTRACTRheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune disease characterized by chronic inflammation causing erosions and deformity in the joints, and may be of involvement of organs such as lung and heart. The HLA-G is associated with the inhibition of immune cells, such as NK and T cells, conferring protection against inflammatory responses. Among the polymorphisms linked to its expression are the ones located in the 3'UTR region of the gene that include ten polymorphic sites described: a polymorphism of insertion or deletion (InDel) with a fragment of 14pb and nine SNPs (+3001C/T, +3003C/T, +3010C/G, +3027A/C, +3035C/T, +3142G/C, +3187A/G, +3196G/C and +3227A/G). From this, the objective of this study will be to conduct a case-control study and the influence of these polymorphisms in disease manifestation. Alu family is the most common mobile element in primate genomes, with more than 1.1 million copies in Homo sapiens. The insertion AluyHG located between the loci HLA-A and HLA-G, may be a marker region. From this, the objective of this study was to genotype 115 patients and 115 controls (classified by age group) and the influence of these polymorphisms in the demonstration and development of the disease. For this, a survey was conducted of epidemiological and clinical data related to the development of the disease (smoking habits, rheumatoid factor, C-reactive protein and erythrocyte sedimentation rate) and these were tested. DNA was extracted from whole blood by PCR and genotyping made and viewed in vertical gel electrophoresis in polyacrylamide concentration of 7% stained with silver nitrate in the case of polymorphism of 14bp of the HLA-G, and 1% agarose gel in AluyHG case polymorphism (with 322pb). The HLA-G SNPs were identified through sequencing by the Sanger method. Calculations were made of the allele and genotype frequencies, analyzes of associations and haplotype inference. The analysis found associations of the polymorphisms and the risk of developing RA for genotypes +3196*G*C (OR=2,387, p=0,026), AluyHG*In (OR=0,524, p=0,006) AluyHG*Del (OR=1,907, p=0,006), AluyHG*In*Del (OR=0,441, p=0,006), AluyHG*Del*Del (OR=2,466, p=0,002). For heritage models, associations were found with: +3010*G+GC (OR=0,658, p=0,011), +3010*C+GC (OR=1,519, p=0,011), +3142*G+GC (OR=1,435, p=0,029), +3142*C+GC (OR=0,697, p=0,029), AluyHG*DD+IDxII (OR=0,402, p=0,002), AluyHG*I+ID (OR=0,465, p=0,000), AluyHG*D+ID (OR=2,152, p=0,000). For the clinical data, the following associations were found: RF and +3010*GG (OR=4,685, p=0,032) and +3196*GC (OR=0,388, p=0,049), CRP and +3196*GC (OR=0,301, p=0,011) and +3196*CC (OR=2,713, p=0,035), ESR and +3003*C (OR=0,296, p=0,042) and +3003*T (OR=3,382, p=0,042). For haplotypes and haplotype combinations were found: UTR5 (OR=2,174, p=0,048), UTR1+UTR5 (OR=5,532, p=0,034); in heritage models: UTR5 (OR=2,346, p=0,038), UTR1+AluyHG*Ins (OR=0,556, p=0,047), UTR5+AluyHG*Del (OR=2,247, p=0,050). In conclusion, this study allowed us to investigate the possible association of HLA-G gene in relation to rheumatoid arthritis, corroborating with the data in the literature and bringing some of the association results with autoimmune diseases who had not found any literature to date. More functional studies should be conducted to better understand how genetic polymorphisms can act in the pathogenesis of RA.<br> / Abstract : Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune disease characterized by chronic inflammation causing erosions and deformity in the joints, and may be of involvement of organs such as lung and heart. The HLA-G is associated with the inhibition of immune cells, such as NK and T cells, conferring protection against inflammatory responses. Among the polymorphisms linked to its expression are the ones located in the 3'UTR region of the gene that include ten polymorphic sites described: a polymorphism of insertion or deletion (InDel) with a fragment of 14pb and nine SNPs (+3001C/T, +3003C/T, +3010C/G, +3027A/C, +3035C/T, +3142G/C, +3187A/G, +3196G/C and +3227A/G). From this, the objective of this study will be to conduct a case-control study and the influence of these polymorphisms in disease manifestation. Alu family is the most common mobile element in primate genomes, with more than 1.1 million copies in Homo sapiens. The insertion AluyHG located between the loci HLA-A and HLA-G, may be a marker region. From this, the objective of this study was to genotype 115 patients and 115 controls (classified by age group) and the influence of these polymorphisms in the demonstration and development of the disease. For this, a survey was conducted of epidemiological and clinical data related to the development of the disease (smoking habits, rheumatoid factor, C-reactive protein and erythrocyte sedimentation rate) and these were tested. DNA was extracted from whole blood by PCR and genotyping made and viewed in vertical gel electrophoresis in polyacrylamide concentration of 7% stained with silver nitrate in the case of polymorphism of 14bp of the HLA-G, and 1% agarose gel in AluyHG case polymorphism (with 322pb). The HLA-G SNPs were identified through sequencing by the Sanger method. Calculations were made of the allele and genotype frequencies, analyzes of associations and haplotype inference. The analysis found associations of the polymorphisms and the risk of developing RA for genotypes +3196*G*C (OR=2,387, p=0,026), AluyHG*In (OR=0,524, p=0,006) AluyHG*Del (OR=1,907, p=0,006), AluyHG*In*Del (OR=0,441, p=0,006), AluyHG*Del*Del (OR=2,466, p=0,002). For heritage models, associations were found with: +3010*G+GC (OR=0,658, p=0,011), +3010*C+GC (OR=1,519, p=0,011), +3142*G+GC (OR=1,435, p=0,029), +3142*C+GC (OR=0,697, p=0,029), AluyHG*DD+IDxII (OR=0,402, p=0,002), AluyHG*I+ID (OR=0,465, p=0,000), AluyHG*D+ID (OR=2,152, p=0,000). For the clinical data, the following associations were found: RF and +3010*GG (OR=4,685, p=0,032) and +3196*GC (OR=0,388, p=0,049), CRP and +3196*GC (OR=0,301, p=0,011) and +3196*CC (OR=2,713, p=0,035), ESR and +3003*C (OR=0,296, p=0,042) and +3003*T (OR=3,382, p=0,042). For haplotypes and haplotype combinations were found: UTR5 (OR=2,174, p=0,048), UTR1+UTR5 (OR=5,532, p=0,034); in heritage models: UTR5 (OR=2,346, p=0,038), UTR1+AluyHG*Ins (OR=0,556, p=0,047), UTR5+AluyHG*Del (OR=2,247, p=0,050). In conclusion, this study allowed us to investigate the possible association of HLA-G gene in relation to rheumatoid arthritis, corroborating with the data in the literature and bringing some of the association results with autoimmune diseases who had not found any literature to date. More functional studies should be conducted to better understand how genetic polymorphisms can act in the pathogenesis of RA.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-05-24T17:51:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337734.pdf: 3377384 bytes, checksum: 41c3085f595d79158f356834905b6bcd (MD5) Previous issue date: 2015 / Neste estudo, foi avaliado o potencial de um novo tratamento para lesões cutâneas baseado em dois componentes da engenharia de tecidos: células e arcabouço. Foi utilizado como arcabouço o hidrogel de carragenana, um polímero termo reversível de origem natural, associado a células estromais multipotentes (CEM) humanas no tratamento de lesões cutâneas em modelo murino. Inicialmente foi realizada a caracterização química da carragenana teste, obtida da alga Kappaphycus alvarezii cultivada em Florianópolis e da carragenana comercial (Sigma®). Os resultados mostraram que a carragenana teste é da classe kappa e apresenta porcentagem de sulfato semelhante à encontrada na carragenana comercial (Sigma®). Em seguida, foi avaliada a regeneração cutânea após 3, 7 e 14 dias de pós-operatório. Os resultados mostraram que o tratamento com CEM encapsuladas no hidrogel de carragenana teste (HCT) não altera a densidade do infiltrado leucocitário, a vascularização e a espessura da epiderme, além de aumentar o tecido de granulação e o depósito de colágeno quando comparado ao grupo sem tratamento (S/T). Além disso, o tratamento com CEM + HCT apresenta um menor infiltrado leucocitário, não altera a espessura do tecido de granulação e a vascularização, aumenta o depósito de colágeno quando comparado aos grupos HCT e CEM. Os resultados mostraram também que as células humanas permanecem no tecido cicatricial murino após 3 dias de pós-operatório. Em conclusão, este estudo mostrou que a carragenana obtida da alga K. alvarezii cultivada em Florianópolis representa um material de baixo custo com potencial para aplicações terapêuticas. Apesar da associação do hidrogel de carragenana teste com as CEM humanas não apresentar melhora quando comparado ao grupo sem tratamento, demostrou bons resultados quando comparado aos tratamentos isoladamente (grupos HCT e CEM) e representa uma abordagem nova, barata e potencialmente aplicável na engenharia de tecidos.<br> / Abstract : This study evaluated the potential of a new treatment for cutaneous wound based on two components of tissue engineering: cells and scaffold. Carrageenan hydrogel, a thermo reversible polymer of natural origin was used as a scaffold for the delivery of human multipotent stromal cells (MSC) for treatment of cutaneous wound in mice. At first the chemical characterization of native carrageenan obtained from seaweed Kappaphycus alvarezii grown in Florianopolis and commercial carrageenan (Sigma®) was carried out. The results showed that the native carrageenan belongs to the kappa class and shows a percentage of sulphate similar to that found in commercial sample. Evaluation of mouse skin wound healing was carried out by three steps: excisional wound in the dorsal region, treatment application and coating with Tegaderm® dressing. The results after 3, 7 and 14 days post-wounding showed that treatment with MSC encapsulated in native carrageenan hydrogel (NCH) does not change the density of the leukocyte infiltrate, vascularity and the thickness of the epidermis, and increase granulation tissue and collagen deposition when compared to the control untreated group. Furthermore, treatment with MSC encapsulated in NCH has a lower leukocyte infiltration, does not change the thickness of the granulation tissue, epidermis and vascularity, and increase collagen deposition when compared with MSC and NCH groups. In addition, human cells were detected in the scar tissue within 72 h post-wounding. In conclusion, this study showed that the carrageenan obtained of seaweed K. alvarezii cultivated in Florianopolis is a low cost material with potential therapeutic applications. The carrageenan hydrogel association with human MSC did not showed improvement compared to untreated group, but showed good results when compared to NCH and MSC groups. Thus, MSC encapsulated NCH represents a new approach applicable in tissue engineering.

O ciclo de vida de Dictyostelium discoideum é composto de duas fases independentes. Durante o crescimento vegetativo, as amebas crescem isoladas até que a fonte de nutrientes seja esgotada. A carência nutricional induz sua entrada num processo de desenvolvimento, que inclui a parada do crescimento, a agregação das células e a formação de um organismo multicelular onde as células se diferenciam em esporos que sobrevivem as condições desfavoráveis. A proteína quinase YakA é requerida para a transição entre o crescimento e o desenvolvimento. YakA regula os níveis da PKA. Mutantes yakA- apresentam o crescimento acelerado, são deficientes no processo de agregação e são hiper-sensíveis a estresse oxidativo e nitrosoativo. Uma mutação em um segundo sítio em keaA, suprime a morte induzida por SNP (um gerador de óxido nítrico) no mutante yakA-. O papel de keaA foi determinado em resposta a estresse oxidativo, nitrosoativo e carênica nutricional. O gene keaA é necessário para o crescimento e desenvolvimento. Uma mutação em keaA confere resistência a estresse nitrosoativoloxidativo confirmando que uma mutação em keaA confere resistência a estresse. Um segundo supressor da morte induzida por SNP no mutante yakA- foi isolado pela mesma técnica de REMI e identificado como pkaC um regulador da resposta a estresse. YakA e PKA integradam a resposta a vários estresse em Dictyostelium. Os resultados indicam que a yakA regula a parada do ciclo celular em resposta a estresses através da modulação de keaA. keaA regula, por sua vez, a expressão da pkaC, um regulador chave da produção de cAMP e do processo de desenvolvimento. A interação gênica entre estes elementos é complexa e deve ser ajustada para permitir que as células sobrevivam a mudanças ambientais encontradas durante o seu ciclo de vida. / Dictyostelium discoideum\'s life cycle is composed of two phases. During the vegetative phase, amoebae grow as single cells until the nutrients are depleted. Starvation induces a developmental program where isolated amoebae adopt a multicellular mode of living and differentiate into spores to survive the harsh conditions. The protein Kinase YakA is required for the growth to development transition. YakA regulates the leveis of PKA. yakA null cells have a faster cell cycle, are aggregation deficient and are hypersensitive to nitrosoative/oxidative stress. A second-site mutation in keaA, supresses the death induced by SNP, a generator of nitric oxide. The role for keaA has been determined in response to oxidative, nitrosoative and nutrient starvation stresses. keaA is required for proper growth and development. The keaA- cells are more resistant to nitrosoative and oxidative stress confirming that a mutation in keaA confers stress resistance. A second supressor of the death induced by SNP in the mutant yakA- was isolated with REMI and identified pkaC as a regulator of the nitrosoative stress response. YakA and PKA may integrate the responses to several stresses in Dictyostelium. The results indicate that yakA regulates the cell cycle arrest in response to stress through the modulation of keaA. KeaA regulates the expression of pkaC, a key regulator of cAMP prodution and development. Genetic interactions among these elements is complex and must be finely tuned in the many environmental changes cells endure during the life cycle.