A caquexia associada ao câncer, cujo mais notável sintoma é a rápida e severa perda de peso, afeta cerca de metade dos pacientes com câncer e está presente na grande maioria (mais de dois terços) dos pacientes com câncer em estágio avançado. Estudos recentes têm mostrado que mediadores inflamatórios desempenham um papel importante no desenvolvimento e manutenção da caquexia associada ao câncer, sendo esta hoje em dia definida como uma doença inflamatória crônica e sistêmica. O tecido adiposo branco é um dos primeiros compartimentos do organismo afetados, sofrendo uma elevada taxa de lipólise. Atualmente este tecido é considerado um órgão endócrino, secretando ativamente hormônios, proteínas e citocinas, capazes de regular diretamente o metabolismo. Um ponto comum na expressão das citocinas pró-inflamatórias pelo tecido adiposo e a lipólise é a ativação do fator de transcrição nuclear kappa B (NF-<font face=\"symbol\">kB). A alta taxa de secreção de citocinas pró-inflamatórias e PGE2 contribuem para a inflamação sistêmica característica da caquexia. O objetivo deste estudo foi examinar a via de sinalização clássica do NF-<font face=\"symbol\">kB: Expressão gênica (Ikkalpha, IKKbeta, Ikkgama, IkBalpha, IkBBeta, p65/RelA e p50) e avaliar a ligação das proteínas p65/RelA e p50 à região promotora alvo do NF-kB (5\'-GGGACTTTCC-3 \'). Além disso, estudamos o papel do TNF-alfa e da PGE2 na ativação da via do NF-<font face=\"symbol\">kB. O estudo envolveu 35 pacientes: 10 no grupo controle (C, pacientes em tratamento de hérnia) e 25 no grupo tumor (câncer gástrico), subdivididos em peso estável e caquéticos. O grupo caquéticos (TC) consistiu de pacientes com perda de peso não intencional declarada > 5% nos últimos 12 meses, fadiga e aumento da concentração sérica do marcador inflamatório proteína C-reativa (Evans et al, 2008). O grupo de peso estável (T ) consistiu de pacientes em tratamento de câncer, sem perda de peso não intencional declarada > 5% nos últimos 12 meses. Parâmetros bioquímicos foram analisados e correlacionados com os dados disponíveis. Os resultados de expressão gênica mostraram p65/RelA (p = 0,0101), IkbAlpha (p = 0,0287), IkkAlpha (p = 0,0306), e IKKbeta (p = 0,0141), significativamente mais expressas no grupo Tumor e p65/RelA (p = 0,0101), também no grupo caquético. TNF-alfa induziu maior ativação do NF-<font face=\"symbol\">kB em comparação com PGE2 (p <0,0001). Propomos que a expressão das proteínas da via clássica de sinalização do NF-<font face=\"symbol\">kB no tecido adiposo branco serviria como um marcador precoce da inflamação sistêmica característica da caquexia associada ao câncer. / Cancer Cachexia, whose most notable symptom is severe and rapid weight loss, affects about half of all cancer patients and is present in the vast majority (more than two thirds) of patients with advanced cancer. Recent studies have shown that inflammatory mediators play an important role in the development of cachexia, nowadays envisaged as a chronic inflammatory disease. The white adipose tissue is one of the first compartments of the organism affected in cancer cachexia, and suffers a high rate of lypolisys. This tissue is an endocrine organ, secreting several hormones, proteins and cytokines, capable of directly regulating intermediate metabolism. Adipose tissue up regulation of pro-inflammatory cytokines and PGE2 secretion contribute to systemic inflammation. A common pathway in the regulation of the expression of pro-inflammatory cytokines and lypolisys in the white adipose tissue is the activation of the nuclear transcription factor kappa B (NF-<font face=\"symbol\">kB). The pourpose of the study was to examine the NF-<font face=\"symbol\">kB classical signalling pathway proteins gene expression (Real time PCR - Ikkalpha, IkkBeta, Ikkgama, IkBalpha, IkBBeta, p65/RelA and p50) and the evaluation of the binding of p65/RelA and p50 to the target promoter region of NF-<font face=\"symbol\">kB (5-GGGACTTTCC-3). Additionally, we examined the TNF-Alpha and PGE2 role in activating the NF-<font face=\"symbol\">kB pathway by gene reporter assay. The study involved 35 patients: 10 in the control group (C, hernia patients) and 25 in the Tumour group, further divided into cachectic and weight stable. The Cachectic group (TC) consisted of patients with a self-declared unintentional weight loss of >5% in the previous 12 months, fatigue and increased inflammatory marker C-Reactive protein (Evans et al, 2008); the weight stable group (T) consisted of patients in treatment for cancer without declared weight loss >5% in the past 12 months. Biochemical parameters were analysed and correlated with the available data. Gene expression results showed p65/RelA (p = 0.0101), IkbAlpha (p = 0.0287), IkkAlpha (p = 0.0306) and IkkBeta (p = 0.0141) to be significantly more expressed in the Tumour group and p65/RelA (p = 0.0101), also in the cachectic group. TNF-Alpha elicited higher NF-<font face=\"symbol\">kB activation as compared with PGE2 (p <0.0001). We propose that NF-<font face=\"symbol\">kB pathway related protein expression in White adipose tissue may serve as an early marker of cancer-related systemic inflammation.

Alterações nutricionais na gestação podem ter consequências no organismo materno e na prole, as quais podem ser esclarecidas por meio da análise dos componentes uterinos durante a gestação em modelos animais. Dentre estes componentes, podemos destacar as células Natural Killer uterinas (uNK) que representam 70% da população linfocitária no útero gestante de murinos e seres humanos. O presente trabalho teve o fito de avaliar os efeitos da alteração nutricional durante a gestação de camundongos por meio de estudo morfológico e comportamental. Foram utilizados camundongos prenhes os quais receberam a partir do 1º dia de gestação (ddg) ração controle (RC), hipercalórica (HC)- carboidrato 77,7%, hiperlipídica (HL)- gordura 32,5%, hiperproteíca (HP)- proteína 31,26% e foram submetidos a restrição alimentar (RA)- 4g de RC/dia. Todos os animais foram sacrificados no 10º ddg. Foram realizadas análises relacionadas à ingestão, comportamentais, morfológicas, citoquímicas, imunocitoquímicas, morfométricas e estereológicas com enfoque nas uNK. Os resultados mostraram que não ocorreu alteração na ingestão e na glicemia dos grupos experimentais, embora tenha ocorrido aumento do peso de animais HL e diminuição em RA. Na análise comportamental o grupo RA apresentou um estado ansiolítico, já HL exibiu estado semelhante à apatia. Parte das fêmeas RA e HC apresentaram falha gestacional, e em RA foram identificados sítios de implantação (SI) em reabsorção. As análises por meio da citoquímica de lectina DBA, estereológica e imunocitoquímica demonstraram que as rações HL e HC foram capazes de causar as alterações mais marcantes nas uNK, diminuindo a expressão de N-acetil-D-galactosamina (Nac-D-Gal) na superfície e grânulos das uNK, o que possibilitou a observação de um subtipo alterado destas células (uNKa), com grânulos menos reativos à perforina em seus interiores. No endométrio, ocorreu aumento da reatividade para Casp-3 e diminuição na expressão de α-actina da musculatura de seus vasos. Em animais HP e RA as alterações foram menos proeminentes com relação às uNK. Em HP ocorreram menor número de células uNKa, aumento dos subtipos morfologicamente senescentes, pequena identificação de casp-3, e grande expressão de α-actina vascular. À semelhança dos animais controle, em RA, as uNKa eram raras e não houve alteração na expressão de perforina e α-actina dos vasos, no entanto, parece ter ocorrido atraso na diferenciação das células uNK e aumento na presença de casp-3. Tais resultados demonstraram, pela primeira vez, que alterações na dieta de camundongos, até o 10º ddg, são capazes de desencadear a resposta das uNK DBA reativas no microambiente uterino. / Nutritional changes during pregnancy can be harmful to the mother's body and have direct effects in offspring, which can be clarified by uterine components analyses during pregnancy in animal models. Among these components, we can highlight the uterine natural killer cells (uNK), which representing 70% of the lymphocyte population in the murine and humans pregnant uterus. This work aims to evaluate the effects of nutritional changes during mice pregnancy through morphological and behavioral studies. Pregnant mice have received from 1st gestation day (gd) control diet (CD), high- carbohydrate (HC) carbohydrate- 77.7%, high-fat (HF) - 32.5% fat, high-protein (HP) - protein 31.26% and were exposed to food restriction (FR) – 4g CD/day. The animals are killed at 10th gd. Intake, behavior, morphology, cytochemistry, immunocytochemistry, morphometry and stereological Analyzes was undertaken by focusing on uNK. Our data showed that food intake and blood glucose levels of all experimental groups didn’t change, although the weight increased in the HF and decreased in the FR animals. Behavioral analysis in the FR group showed an anxiolytic state, since HF exhibited similar apathy state. Part of the female FR and HC had gestational failure, and implantation sites (SI) resorption were identified in the FR. Analyses by DBA lectin cytochemistry, immunocytochemistry and stereological studies showed HF and HC diets were able to cause marked changes in uNK, decreasing the expression of uNK surface and granules Gal-D-NAc, which enabled the observation of an DBA-lectin altered kind of uterine NK cell (uNKa), with less reactivity to the perforin in their granules. In the endometrium, there was an increased reactivity for Casp-3 and a decreased expression of the α-actin vessels. The changes were less prominent in the uNK from HP and RA animals. HP uNKa were smaller in number than in HF and HC, and had increased morphological senescent uNK subtype, weak casp-3 reaction and strong blood vessels α-actin expression. Similarly to the control animals, in FR, the uNKa were rare, and there was not changes in the perforin or actin vessels expression. However, the FR animals showed a apparently delay in the uNK differentiation as large presence of casp-3. These results showed for the first time different diets could triggering uNK DBA-reactive response as can change mouse uterine microenvironment up to 10th gd. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

A habilidade das células-tronco de se diferenciar em diferentes tipos celulares faz delas fortes candidatas para serem utilizadas em terapias celulares como tratamento de diversas doenças. No entanto, para explorar este potencial e necessário o estabelecimento de estratégias efetivas para modificações genéticas nessas células. Associado a outras tecnologias, o sistema de vetores lentivirais tem sido usado como um método atrativo para entrega de transgenes de interesse por possuírem uma alta eficiência de transdução. Além disso, eles permitem a transdução em células em proliferação ou quiescentes. A eficácia desses vetores para expressão de transgenes depende do uso de promotores corretos que possam garantir uma alta expressão genica e sustentável. Assim, o objetivo deste projeto foi comparar a eficiência dos promotores de citomegalovírus (CMV) e do fator de elongação-1<font face=\"Symbol\">a (EF1<font face=\"Symbol\">a) no sistema de entrega genica lentiviral em células-tronco mesenquimais de pele humana (HU). Para isso, foram construídos vetores lentivirais que possuem o promotor de CMV ou o promotor de EF1<font face=\"Symbol\">a, além do gene-repórter eGFP (\'\'enhanced green fluorescence protein\'\'). Para avaliar a eficiência de transfecção das construções, os vetores contendo os promotores e o gene-repórter (pLVCMVeGFP e pLVEF-1<font face=\"Symbol\">a-eGFP) foram utilizadas células 293T (produtora de partículas virais) e verificamos a presença da proteína fluorescente verde por microscopia de fluorescência, indicando a funcionalidade dos promotores. Visando analisar a eficiência das construções, células HU foram transduzidas e observamos a presença da proteína fluorescente nas transduções, demonstrando que os promotores encontram-se ativos em ambas as células. Após a verificação da eficácia das construções plasmidiais, foram feitas analises para avaliar a eficiência da transdução das construções em células HU. Para tal, as células foram transduzidas com lentivirus contendo um dos promotores analisados em diferentes multiplicidades de infecção (1, 5 e 10) e analisadas através da intensidade do sinal de fluorescencia e pela porcentagem de células eGFP positivas. Detectamos mais células eGFP positivas com a transdução do gene a partir do promotor PCMV do que com a do promotor PEF-1<font face=\"Symbol\">a. Assim, comparamos a eficiência destes promotores em MOI 1. Os resultados mostraram que a transdução com o promotor PEF-1<font face=\"Symbol\">a foi superior quando comparado ao promotor PCMV, portanto sendo a melhor escolha para esse sistema de entrega genica em células-tronco mesenquimais de pele humana. / The hability of stem cells to form a wide source spectrum of cell type makes them an interesting source for cell therapies. However, to exploit their remarkable potentials, the development of effective strategies for genetic modifications of MSCs is required. Lentiviral based vectors, with other techniques, offer an attractive system for efficient gene delivery in stem cells. These vectors efficiently transduce stem cells, and can infect dividing and nondividing cells. However, the efficiency of this vectors to genetic manipulation depends on the use of corrects cellular promoters for driving a high and stable expression of exogenous genes. In this study, we have chosen the cytomegalovirus (CMV) and the elongation factor 1-<font face=\"Symbol\">a promoters. We have compared the efficiency of this promoters in drive expression of the transgene in human dermal mesenchymal stem cells. The lentiviral vectors were constructed with the CMV promoter or the EF-1<font face=\"Symbol\">a promoter, together with the eGFP gene (enhanced green fluorescence protein). To evaluate the efficiency of the lentiviral vectors, 293T cells were transfected and analyzed for eGFP expression using fluorescence microscopy. We were able to observe the expression of eGFP, indicating that the vectors were working. Dermal mesenchymals stem cells were transduced with CMV- and EF-1<font face=\"Symbol\">a lentiviral vectors to evaluate the efficiency of the transductions. Efficiency of transductions was measured by flow cytometry (FACS) as percentage eGFP+ cells and signal intensity with different MOIs (multiplicity of infections).

O Lopap é um ativador de protrombina da lagarta L. obliqua, pertence à família das lipocalinas e apresenta atividade antiapoptótica. O Lopap foi obtido na forma recombinante (rLopap), na levedura P. pastoris, por metodologia escalonável, e sua atividade foi avaliada in vitro e in vivo. O tratamento com rLopap reduziu o tempo de sangramento em animais anticoagulados com enoxaparina. Por outro lado, um peptídeo derivado do Lopap, designado antiapoptotic peptide (AP), foi capaz de induzir a síntese de colágeno em cultura de fibroblastos e na derme de animais. A região correspondente a AP apresentou propriedades físicas e estruturais semelhantes a seqüências relacionadas em outras lipocalinas com atividade antiapoptótica. Estes resultados abrem perspectivas para aplicações do Lopap, como uma molécula procoagulante, e de AP, através de sua ação na modulação celular, como um componente cosmético, no reparo e remodelamento tecidual e em disfunções que envolvem morte celular e perda de colágeno. / Lopap is a prothrombin activator from the L. obliqua caterpillar, belongs to the lipocalin family, and displays antiapoptotic activity. Lopap was obtained in the recombinant form (rLopap) in the P. pastoris yeast, by a scaled up methodology, and its activity was evaluated in vitro and in vivo. Treatment with rLopap reduced the bleeding time in animals anticoagulated with enoxaparin. On the other hand, a Lopap-derived peptide, designated antiapoptotic peptide (AP), was able to induce collagen synthesis in fibroblast culture and in the animal dermis. The region corresponding to AP had similar physical and structural properties when compared with other antiapoptotic lipocalins. These results open perspectives for the use of Lopap, as a procoagulante molecule, and the use of AP, based on its cell modulation effects, as a cosmetic component, aiding tissue repair and in dysfunctions involving cell death and loss of collagen.

As células mesangiais (CM) são essenciais para a homeostasia glomerular. Além disso, têm papel crucial no desenvolvimento de glomeroesclerose em nefropatias crônicas. Demonstramos que as isoformas do repressor de transcrição TBX3, TBX3.1 e TBX3 + 2<font face=\"Symbol\">a, foram suprarreguladas precocemente por concentrações baixas de TGF-<font face=\"Symbol\">b1 em CM humanas. A superexpressão das isoformas não alterou a proliferação ou produção de MEC em CM. Entretanto, diminuiu a apoptose induzida pela privação de SBF. Ademais, o silenciamento do gene TBX3 sensibilizou as CM ao estímulo pró-apoptótico causado pela remoção do SBF. Por fim, observamos aumento da expressão protéica de TBX3 nos glomérulos e túbulos em um modelo de nefropatia, guardando correlação temporal com o aumento dos níveis de TGF-<font face=\"Symbol\">b1, colágeno IV e fibronectina. Nossos resultados indicam que o gene TBX3 atua como um fator antiapoptótico nas CM e pode estar envolvido no mecanismo pelo qual TGF-<font face=\"Symbol\">b1 induz glomeruloesclerose e fibrose tubular durante a progressão das nefropatias. / Mesangial cells (MC) are essential for glomerular homeostasis. In addition, MC play a significant role in the development of glomerulosclerosis of chronic nephropathies. We demonstrated that the transcription repressor TBX3 isoforms, TBX3.1 and TBX3 + 2<font face=\"Symbol\">a, were upregulated by low concentrations of TGF-<font face=\"Symbol\">b1. Selective overexpression of the isoforms did not affect MC proliferation or extracellular matrix production. However, TBX3 forced expression decreased apoptosis induced by FBS deprivation. Moreover, TBX3 gene silencing sensitized MC to the proapoptotic stimulus caused by SBF withdrawal. Finally, we observed an increase in TBX3 protein expression in glomerular and tubular regions in a model of chronic nephropathy (5/6 nephrectomy), temporally related to increased expression of TGF-<font face=\"Symbol\">b1, collagen IV and fibronectin. Our results indicate that TBX3 acts as an antiapoptotic factor in MC in vitro and may be involved in the mechanism by which TGF-<font face=\"Symbol\">b1 induces glomerulosclerosis and tubular fibrosis during the progression of nephropathies.

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese capa ficha e artigo 10 12 18.pdf: 3164292 bytes, checksum: ead5dec19de419da533838099f689015 (MD5) Previous issue date: 2018-11-26 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O Fluconazol é um antifúngico triazólico de amplo espectro que é bem estabelecido como tratamento de primeira linha para infecções por Candida albicans. Apesar de seu uso extensivo, os relatos sobre seus efeitos genotóxicos / mutagênicos são controversos, portanto, mais estudos serão necessários para melhor esclarecimento de tais efeitos. Células de rim de macaco verde africano (Vero) foram expostas in vitro a diferentes concentrações de Fluconazol e foram avaliadas quanto a diferentes parâmetros, tais como: citotoxicidade (ensaio MTT e morte celular por corantes fluorescentes), genotoxicidade / mutagenicidade (teste do cometa e teste do micronúcleo) e indução de estresse oxidativo (ensaio do DCFH-DA). O Fluconazol foi utilizado nas concentrações de 81,6; 163,2; 326,5; 653; 1.306 e 2.612,1μM para o ensaio do MTT e 81,6; 326,5 e 1.306μM para os demais ensaios. Os resultados do MTT mostraram que a viabilidade celular diminuiu à partir da concentração de Fluconazol de 1.306μM (85,93%), sendo estatisticamente significativa (P <0,05) na concentração de Fluconazol de 2.612,1μM (35,25%), em comparação com o controle (100%). O Fluconazol também induziu necrose (P <0,05) quando as células foram expostas às concentrações de 81,6; 3.26,5 e 1.306μM para ambos os tempos de tratamento testados (24 e 48h) em comparação com o controle negativo. Com relação à genotoxicidade / mutagenicidade, os resultados mostraram que o Fluconazol aumentou significativamente (P <0,05) o índice de dano ao DNA, avaliado pelo ensaio do cometa, à 1.306μM (ID = 1,17) em comparação ao controle negativo (ID = 0,28). A frequência de micronúcleos também aumentou até atingir signficância estatística (P <0,05) em 1.306μM de Fluconazol (com 42MN / 1000 células binucleadas) em relação ao controle negativo (13MN / 1000 células binucleadas). Finalmente, a formação significativa (P <0,05) de espécies reativas de oxigênio foi observada em 1.306μM de Fluconazol (DO = 40,9), em comparação ao controle negativo (DO = 32,3). Nossos resultados mostraram que o Fluconazol foi citotóxico e genotóxico nas condições avaliadas. É provável que tais efeitos possam ser devidos às propriedades oxidativas do Fluconazol e / ou à presença de FMO (Flavina monoxigenase) em células Vero. / Fluconazole is a broad-spectrum triazole antifungal that is well-established as the first-line treatment for Candida albicans infections. Despite its extensive use, reports on its genotoxic/mutagenic effects are controversial; therefore, further studies are needed to better clarify such effects. African green monkey kidney (Vero) cell line were exposed in vitro to different concentrations of Fluconazole and were then evaluated for different parameters, such as cytotoxicity (MTT/cell death by fluorescent dyes), genotoxicity/mutagenicity (comet assay/micronucleus test), and induction of oxidative stress (DCFH-DA assay). Fluconazole was used at concentrations of 81.6, 163.2, 326.5, 653, 1306, and 2612.1μM for the MTT assay and 81.6, 326.5, and 1306μM for the remaining assays. MTT results showed that cell viability reduced upon exposure to Fluconazole concentration of 1306μM (85.93%), being statistically significant (P<0.05) at Fluconazole concentration of 2612.1μM (35.25%), as compared with the control (100%). Fluconazole also induced necrosis (P<0.05) in Vero cell line when cells were exposed to all concentrations (81.6, 326.5, and 1306μM) for both tested harvest times (24 and 48 h) as compared with the negative control. Regarding genotoxicity/mutagenicity, results showed Fluconazole to increase significantly (P<0.05) DNA damage index, as assessed by comet assay, at 1306μM versus the negative control (DI=1.17 vs DI=0.28, respectively). Micronucleus frequency also increased until reaching statistical significance (P<0.05) at 1306μM Fluconazole (with 42MN/1000 binucleated cells) as compared to the negative control (13MN/1000 binucleated cells). Finally, significant formation of reactive oxygen species (P<0.05) was observed at 1306μM Fluconazole vs the negative control (OD=40.9 vs OD=32.3, respectively). Our experiments showed that Fluconazole is cytotoxic and genotoxic in the assessed conditions. It is likely that such effects may be due to the oxidative properties of Fluconazole and/or the presence of FMO (flavin-containing monooxygenase) in Vero cells. / FAPAN - Faculdade Pan Amazônica

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 401555.pdf: 2665347 bytes, checksum: 54a1f015b8e051e3e55fe6965ea02f9d (MD5) Previous issue date: 2008-04-09 / Introdu??o: A forma??o do co?gulo de fibrina no s?tio de les?o endotelial constitui um processo crucial para a manuten??o da integridade vascular. Por?m, os mecanismos do sistema hemost?tico devem ser regulados para, simultaneamente, contrapor-se ? perda excessiva de sangue e evitar a forma??o de trombos intravasculares, decorrentes de forma??o excessiva de fibrina. Por isso, um equil?brio entre a coagula??o e a fibrin?lise ? essencial. O ativador do plasminog?nio tecidual (t-PA) ? o principal ativador do sistema fibrinol?tico derivado de c?lulas endoteliais, desempenhando importante papel na fibrin?lise. Nos ?ltimos anos, tem sido estudada a rela??o entre o polimorfismo de inser??o e dele??o (I/D) de uma sequ?ncia Alu do gene t-PA e o risco de desenvolver doen?as relacionadas ao sistema cardiovascular, como infarto do mioc?rdio e trombose venosa, em diferentes popula??es do mundo. Objetivo: Esse estudo tem por objetivo pesquisar a rela??o entre o polimorfismo de inser??o/dele??o do gene t-PA e trombose venosa (TV), comparando um grupo de indiv?duos com epis?dio de tromboembolismo pulmonar (TEP) ou trombose venosa profunda (TVP) e um grupo de indiv?duos sem hist?ria de TV. Materiais e M?todos: Foram avaliados 89 indiv?duos com epis?dio de tromboembolismo venoso (grupo caso) e 81 indiv?duos sem hist?rico de doen?a tromboemb?lica (grupo controle). O gen?tipo do t-PA foi determinado por rea??o em cadeia da polimerase (PCR). Todas as amostras identificadas como gen?tipo DD eram confirmadas mediante a realiza??o de uma nova PCR utilizando um primer interno que reconhece e hibridiza especificamente na seq??ncia de inser??o, possibilitando uma identifica??o precisa dos gen?tipos. Resultados: A freq??ncia do alelo D foi de 41,6% entre os pacientes e 46,9% entre os controles; a do alelo I foi 58,4% e 53,1%, respectivamente. O gen?tipo DD foi encontrado em 14,6% dos pacientes e 17,3% dos controles, e o gen?tipo ID, em 53,9% dos casos e 59,3% dos controles. Os homozigotos II representaram 31,5% dos indiv?duos do grupo caso e 23,4% dos indiv?duos do grupo controle. Discuss?o e Conclus?es: N?o foi observada diferen?a estatisticamente significante entre os gen?tipos do gene t-PA nos grupos de indiv?duos estudados. No entanto, o gen?tipo II foi mais freq?ente no grupo caso do que no grupo controle, sugerindo uma tend?ncia de associa??o entre o gen?tipo II do gene t-PA e o desenvolvimento de doen?as tromboemb?licas. N?o foram encontrados dados na literatura sobre a freq??ncia do polimorfismo I/D do gene t-PA na popula??o brasileira. Este relato representa, portanto, o primeiro relato sobre a freq??ncia deste polimorfismo no Brasil, em grupos de indiv?duos com e sem hist?rico de trombose, contribuindo para o conhecimento da rela??o entre este polimorfismo e tromboembolismo venoso (TEV)

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 409998.pdf: 638895 bytes, checksum: 9abf7327c0b1c2233d7c0064062f2d9a (MD5) Previous issue date: 2009-03-06 / O Fator de Necrose Tumoral (TNF)-a ? uma citocina proinflamat?ria multifuncional, com efeitos no metabolismo de lip?deos, na coagula??o sangu?nea e na fun??o endotelial. Diferentes estudos sugerem que pacientes com o gen?tipo - 308AA, do SNP -308G>A do gene TNF-a, possuiriam n?veis mais elevados de TNFa no plasma, levando o sistema imune a uma resposta inapropriada e aberrante frente a uma infec??o, o que poderia aumentar o risco de sepse, choque s?ptico ou disfun??o org?nica. O objetivo deste estudo foi comparar as condi??es cl?nicas (disfun??es org?nicas) e a freq??ncia de sepse, choque s?ptico e mortalidade em pacientes cr?ticos internados em uma Unidade de Terapia Intensiva (UTI), quanto ? pacientes com e sem o alelo -308A do TNF-a. Foram utilizados dados cl?nicos e demogr?ficos (idade, g?nero, tempo de interna??o, mortalidade durante a perman?ncia total no hospital, escores APACHE II e SOFA), e genotipagem dos pacientes para o SNP -308G>A do TNF-a por PCR-RFLP. Um total de 437 pacientes cr?ticos internados na UTI do Hospital S?o Lucas da PUCRS (Porto Alegre, Brasil) foram avaliados. As freq??ncias genot?picas -308GG= 0.71 (n=312); -308GA=0.28 (n=120); -308AA=0.01 (n=5); e al?licas -308G=0.85 e -308A=0.15 n?o diferiram dos valores esperados pelo modelo de Equil?brio de Hardy-Weinberg (P=0.211). Do total, 297 (68%) pacientes desenvolveram sepse e 212 (48%) choque s?ptico. Nenhuma diferen?a significativa foi encontrada entre pacientes -308GG (n=312; 71%) e - 308GA+AA (n=125; 29%) quanto ? suscetibilidade a sepse, choque s?ptico, fal?ncia org?nica ou mortalidade. Os resultados mostram que SNP -308G>A do TNF-a n?o tem efeito sobre as condi??es cl?nicas e na susceptibilidade ? sepse e choque s?ptico ou na mortalidade dos pacientes em estado cr?tico de sa?de.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 410539.pdf: 3151865 bytes, checksum: 48590cfe5b0c95580f676ed19d3f2c46 (MD5) Previous issue date: 2009-01-28 / O zebrafish ? um pequeno tele?steo que vem sendo considerado um modelo ideal para estudos de numerosas doen?as humanas. O genoma desta esp?cie est? quase todo sequenciado e estudos demonstraram que muitos genes deste peixe s?o similares ao de mam?feros, inclusive humanos. A esquizofrenia ? uma grave s?ndrome neuropsiqui?trica que acomete em torno de 1% da popula??o mundial. O uso de f?rmacos antipsic?ticos ? a base dos tratamentos para esquizofrenia. Evid?ncias t?m demonstrado o importante papel desempenhado pelo ATP e a adenosina no sistema nervoso central (SNC). O neurotransmissor ATP ? armazenado de forma vesicular e liberado na fenda sin?ptica, onde pode agir em receptores espec?ficos localizados na membrana celular. A inativa??o do sinal mediado pelo ATP extracelular ? realizada por uma fam?lia de enzimas denominadas ectonucleotidases, incluindo as NTPDases (nucleos?deo trifosfato difosfoidrolases) e a ecto-5?- nucleotidase. Estas enzimas s?o respons?veis pelo catabolismo extracelular do neurotransmissor ATP at? adenosina. Estudos do nosso laborat?rio demonstraram a presen?a de ectonucleotidases como as NTPDases e a ecto-5?-nucleotidase no SNC de zebrafish. A acetilcolina (ACh) ? um neurotransmissor secretado pelos nervos colin?rgicos terminais, juntamente com o ATP. Ap?s exercer seu sinal nos receptores nicot?nicos e muscar?nicos, a ACh ? inativada pela a??o de uma enzima denominada acetilcolinesterase (AChE), que hidrolisa a ACh at? colina e acetato. O gene da AChE j? foi clonado e sequenciado e esta atividade enzim?tica foi detectada em c?rebro de zebrafish. Considerando que: (1) o zebrafish ? um importante modelo experimental em estudos farmacol?gicos, bioqu?micos e patol?gicos, e que (2) os sistemas purin?rgico e colin?rgico exercem um importante papel na sinaliza??o no SNC e (3) receptores e enzimas envolvidos nestes sistemas de neurotransmiss?o j? foram descritos nesta esp?cie, torna-se importante avaliar os efeitos das drogas antipsic?ticas sobre enzimas envolvidas na hidr?lise dos nucleot?deos de adenina e acetilcolina no SNC do zebrafish. O efeito in vitro de sulpirida, olanzapina e haloperidol foram avaliados na atividade da AChE. Todas as drogas promoveram inibi??o na atividade desta enzima. J? no estudo in vivo somente o haloperidol alterou a atividade da AChE, ativando a hidr?lise de ACh e aumentando a express?o g?nica da AChE. Foi avaliado o efeito in vitro das drogas antipsic?ticas sobre a atividade das NTPDases em membranas cerebrais de zebrafish. As tr?s drogas testadas foram capazes de alterar a atividade das NTPDases, sendo que o haloperidol inibiu a hidr?lise de ATP e ADP, a sulpirida inibiu a hidr?lise de ADP e a olanzapina inibiu a hidr?lise de ATP. Entretanto, nenhuma das tr?s drogas testadas promoveu altera??o significativa na atividade da ecto-5?- nucleotidase. Os resultados demonstram que os f?rmacos antipsic?ticos podem influenciar na atividade das enzimas envolvidas na degrada??o dos neurotransmissores ATP e acetilcolina, sugerindo que o sistema purin?rgico e colin?rgico podem ser alvo dos efeitos neuroqu?micos promovidos por estes f?rmacos

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 411148.pdf: 347017 bytes, checksum: e332ff9ec0944ee08b20b394c3339334 (MD5) Previous issue date: 2009-03-18 / Neste trabalho foram avaliados os efeitos da manipula??o farmacol?gica do sistema colin?rgico atrav?s do uso de um f?rmaco inibidor da enzima acetilcolinesterase (AChE) e um agonista de receptores colin?rgicos muscar?nicos sob d?ficits na mem?ria de reconhecimento induzidos pelo tratamento com ferro no per?odo neonatal. Al?m disso, avaliou-se a atividade e express?o do RNAm da AChE em regi?es cerebrais de ratos tratados com ferro no per?odo neonatal. Desde a ?ltima d?cada se sugere uma correla??o entre o ferro e desordens neurol?gicas, especialmente as doen?as neurodegenerativas. No per?odo neonatal a absor??o de ferro pelo c?rebro ? m?xima, per?odo em que os estoques e concentra??es futuras deste metal se estabelecem. Ratos tratados do 12o ao 14o dia de vida com 10 mg/kg (concentra??o de 1 mg/ml de ferro na solu??o) de ferro via tubo intrag?strico, se desenvolvem aparentemente saud?veis at? a vida adulta, por?m, ao serem avaliados em tarefas cognitivas apresentam severos d?ficits nas mesmas. O sistema colin?rgico ? um dos principais sistemas envolvidos em processos cognitivos, tanto que o decl?nio observado no envelhecimento e em algumas doen?as neurodegenerativas ? em parte associado ? perda de fun??o deste sistema. Este estudo demonstra que a administra??o intraperitoneal (i.p.), ?nica, imediatamente ap?s o treino, de 1,0 mg/kg do inibidor da AChE, galantamina, a ratos adultos (3 meses) tratados com ferro ? capaz de reverter totalmente o d?ficit cognitivo observado na tarefa de reconhecimento do objeto novo. De forma semelhante, o agonista muscar?nico oxotremorine na dose de 0,5 mg/kg i.p. melhora o desempenho na mesma tarefa, mas sem total revers?o do dano cognitivo. Ao se avaliar a atividade da AChE nas estruturas cerebrais de animais adultos (3 meses) tratados com ferro observou-se uma diminui??o da mesma na regi?o do estriado sem altera??es nas regi?es do c?rtex e hipocampo, por?m essa diminui??o da atividade ocorreu sem acompanhamento de altera??es na express?o do RNAm, a qual n?o apresenta diferen?a entre o grupo controle e o tratado com ferro. Curiosamente, a atividade da AChE de ratos velhos (24 meses) n?o apresenta diferen?a entre o grupo controle e o grupo tratado, e os valores encontrados para ambos s?o semelhantes ?queles dos ratos jovens (3 meses) tratados com ferro. Os resultados obtidos nesse estudo sugerem que o dano cognitivo gerado pelo tratamento com ferro est? relacionado, pelo menos em parte, a um dano na transmiss?o colin?rgica estriatal, por?m sem degenera??o das fibras colin?rgicas