Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-10-01T18:36:32Z No. of bitstreams: 1 475353 - Texto Completo.pdf: 4655532 bytes, checksum: c5dbc2135d9425bffb99fb72fd2f27dd (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-01T18:36:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 475353 - Texto Completo.pdf: 4655532 bytes, checksum: c5dbc2135d9425bffb99fb72fd2f27dd (MD5) Previous issue date: 2015-06-29 / the second responsible for most of the deaths worldwide. The latest estimates of WHO showed that 9 millions of new cases of TB occurred in 2013 and 1.5 million of deaths. The emergence of new drug resistant M. tuberculosis strains is becoming a serious increasing problem as the treatment of infected patients with multi drug-resistant TB and extensively drug-resistant TB strains is much more difficult and costly. This brings discussions about the drastic situation of virtually untreatable TB cases and shows the urgent need to introduce new and effective anti-TB drugs. The research for the development of new antimycobacterial agents becomes a necessity, as well as the identification of new targets for future drugs. The histidine biosynthetic pathway is comprised of ten enzyme steps catalyzed by eight enzymes. This pathway is present in prokaryotic organisms, lower eukaryotic organisms and plants, but is absent in animals, which is in accordance with the principles of selective toxicity. Mutagenesis studies have shown that the genes of this pathway are essential for the survival of M. tuberculosis. The histidinol dehydrogenase enzyme, encoded by hisD, performs the last two steps in the biosynthesis of histidine, converting L-histidinol to L-histidine. The essentiality of the hisD gene in M. tuberculosis mutants with referred gene knockout is already described in the literature. This work describes kinetic studies using thermodynamic parameters, fluorescence spectroscopy, and pre-stationary states to better understand the enzymatic mechanism of MtHisD. Characterization of the reaction catalyzed by mycobacterial HisD is important to structure-based drug development. The data from enzyme?s kinetic characterization were the starting point for HisD specific inhibitors planning, selection, and testing. A series of eleven hydrazones derived from L-histidine was synthesized, from which four compounds were identified as showing a competitive inhibition profile for L-histidinol substrate. The interactions of these compounds with the enzyme were analyzed by molecular docking to understand the inhibitory mechanism. Results from this work are believed to enhance the understanding of mycobacterial histidine metabolism. Moreover, data from inhibition studies with the synthesized compounds, serve as the starting point for the development of new molecules to enhance the enzyme inhibition and to inhibit the M. tuberculosis growth. / Dentre as doen?as infecciosas que acompanham o homem ao longo da hist?ria, a tuberculose (TB), atualmente, ? a segunda respons?vel pelo maior n?mero de mortes no mundo. As ?ltimas estimativas da Organiza??o Mundial da Sa?de apontam 9 milh?es de novos casos de TB em 2013 e 1,5 milh?es de mortes. O surgimento de novas linhagens de M. tuberculosis resistentes aos f?rmacos utilizados no tratamento est? se tornando um problema s?rio e crescente, uma vez que o tratamento de pacientes infectados com cepas de tuberculose resistente ? m?ltiplos f?rmacos e extensivamente resistente ? f?rmacos ? muito mais dif?cil e oneroso. Isso remete a discuss?es sobre a dr?stica situa??o de casos de TB virtualmente incur?veis e aponta para a urgente necessidade de introduzir novos e eficazes medicamentos anti-TB no mercado. A pesquisa para o desenvolvimento de novos agentes antimicobacterianos torna-se necess?ria, bem como a identifica??o de novos alvos para futuros medicamentos. A via de bioss?ntese de histidina compreende dez etapas enzim?ticas catalisadas por oito enzimas. Esta via est? presente nos organismos procari?ticos, organismos eucari?ticos inferiores e em plantas, mas est? ausente em animais, corroborando com os princ?pios de toxicidade seletiva. Estudos de mutag?nese demonstraram que os genes desta via s?o essenciais para a sobreviv?ncia do M. tuberculosis. A enzima histidinol desidrogenase, codificada pelo gene hisD, catalisa a ?ltima etapa da bioss?ntese de histidina, convertendo L-histidinol para L-histidina. A essencialidade do gene hisD em mutantes de M. tuberculosis, com o referido gene nocauteado, j? est? descrita na literatura. Este trabalho trata sobre o aprofundamento dos estudos cin?ticos, utilizando ensaios para determina??o de par?metros termodin?micos, fluorimetria e ensaios em estado pr?estacion?rio. A caracteriza??o da rea??o catalisada pela enzima HisD micobacteriana ? uma etapa importante para o desenvolvimento de novos f?rmacos de a??o espec?fica que permitam o melhor controle da tuberculose. Os dados de caracteriza??o cin?tica da enzima foram utilizados como ponto de partida para o planejamento, sele??o e teste de inibidores seletivos contra a HisD de M. tuberculosis. Uma s?rie de onze hidrazonas derivadas da Lhistidina foi sintetizada, foram identificados quatro compostos com perfil de inibi??o competitiva pelo substrato L-histidinol. As intera??es destes compostos com a enzima foram analisadas por docagem molecular para melhor compreens?o do mecanismo inibit?rio. Os resultados deste trabalho colaboram ainda para uma melhor compreens?o do metabolismo da bioss?ntese de histidina em micobact?rias. Al?m disso, os dados dos estudos de inibi??o com os compostos aqui sintetizados servem como ponto de partida para o desenvolvimento de novas mol?culas visando a otimiza??o da inibi??o da enzima e a da inibi??o do crescimento do M. tuberculosis.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-12-01T17:55:40Z No. of bitstreams: 1 476504 - Texto Pacial.pdf: 560629 bytes, checksum: 87ce59a68d7f4e868fc301fa05c033ef (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-01T17:55:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 476504 - Texto Pacial.pdf: 560629 bytes, checksum: 87ce59a68d7f4e868fc301fa05c033ef (MD5) Previous issue date: 2015-07-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Melanoma is a malignant tumor that develops anywhere on the skin is 1 to 3% of all malignant neoplasms, and also affects men and women, especially in light skin. The development of melanoma may be associated with excessive sun exposure, sunburn, fair skin, blond or red hair, lots of freckles on their shoulders and backs, family history and presence of actinic keratosis. The chemotherapeutic strategies have been based on the use of dacarbazine and temozolomide. In addition to these monoclonal antibodies are also being used, such as ipilimumab, approved in 2011 for the palliative treatment of patients with metastatic cancer. Many studies are underway to evaluate the anticancer activity of compounds like resveratrol. Resveratrol, 3,5,4'-trihydroxy-trans-stilbene (RESV) is a natural phenolic stilbene which has, among the most important properties, antioxidant, anticarcinogenic - inhibiting various cellular events associated with three major stages of carcinogenesis: started, promotion and progression - anti-inflammatory, antiplatelet, antifungal and estrogen. Resveratrol analogs were synthesized by modification of substituents on both rings, without altering the double bond between them: one by the fusion of benzene and other two by fusing a heterocyclic ring; these newly synthesized analogues showed anticancer activity, vasodilatory and anti-tyrosinase. In this paper we propose the synthesis of resveratrol analogues in order to evaluate the biological activity of these. The structural change of resveratrol stilbene modified (alternate double bond between the carbons of the double nitrogens) may be a promising strategy to improve the pharmacological parameters. The replacement of hydroxyl groups by methyls and acetyls can increase the molecular stability, so that there is decreasing susceptibility in the reaction phase II conjugation in vivo, significantly potentiate the cytotoxic activity.Assay in cell culture using melanoma line, B16F10, showed that compounds synthesized had IC50 less than resveratrol. In evaluating the IC50 of the compounds synthesized in fibroblasts, 3T3 line, we see that showed higher values than in melanoma strain except Redresv001 compound, suggesting a specificity of the synthesized compounds in these cancer cells. Among the compounds, methylated Redresv003 and acetylated Redresv004 and Redresv005 have greater prominence, because of having antiproliferative activity at lower concentrations, are selective for cancer tested lineage and maintain their activity long period of time (72 hours), suggesting that did not generate resistance in the B16F10 line. For the qualitative analysis of the mechanism of cell death, we find that the Redresv003, Redresv004 and Redresv005 compounds showed differences compared to the control for apoptosis assay and also by autophagy, suggesting no specific target for action based on these assays. / O melanoma ? uma les?o maligna que se desenvolve em qualquer lugar da pele, representa de 1 a 3% de todas as neoplasias malignas e atinge igualmente homens e mulheres, principalmente em peles claras. O desenvolvimento do melanoma pode estar associado ? exposi??o excessiva ao sol, queimaduras solares, pele clara, cabelos loiros ou ruivos, grande quantidade de sardas nos ombros e dorsos, hist?rico familiar e presen?a de ceratose act?nica. As estrat?gias quimioter?picas t?m sido baseadas no uso de dacarbazina e da temozolomida. Al?m desses, anticorpos monoclonais tamb?m est?o sendo utilizados, como o ipilimumabe, aprovado em 2011, para o tratamento paliativo de pacientes com c?ncer metast?tico. Muitos estudos est?o em andamento para avalia??o da atividade antineopl?sica de compostos como o resveratrol. Resveratrol, 3,5,4?-trihidroxi-trans-estilbeno (RESV), ? um estilbeno fen?lico natural que possui, dentre as propriedades mais significativas, a antioxidante, anticarcinog?nica - inibindo diversos eventos celulares associados com os 3 maiores est?gios da carcinog?nese: in?cio, promo??o e progress?o ? anti-inflamat?ria, antiplaquet?ria, antif?ngica e estrog?nica. An?logos do resveratrol foram sintetizados pela modifica??o de substituintes em ambos os an?is, n?o alterando a dupla liga??o entre eles: um pela fus?o de benzeno e outros dois pela fus?o de um anel heteroc?clico; esses an?logos recentemente sintetizados apresentaram atividade antineopl?sica, vasodilatadora e antitirosinase. Nesse trabalho propomos a s?ntese de an?logos do Resveratrol com o intuito de avaliar a atividade biol?gica destes. A altera??o estrutural de estilbeno modificado do resveratrol (substitui??o da liga??o dupla entre carbonos pela dupla entre nitrog?nios) pode ser uma estrat?gia promissora para melhorar os par?metros farmacol?gicos.substitui??o de grupos hidroxilas por metilas e acetilas pode aumentar a estabilidade molecular, fazendo com que haja diminui??o da suscetibilidade na rea??o de conjuga??o de fase II in vivo, al?m de potencializar significativamente a atividade citot?xica. Ensaios em cultura celular utilizando linhagem de melanoma, B16F10, demonstraram que os compostos sintetizados apresentaram IC50 menor que do resveratrol. Ao avaliarmos o IC50 dos compostos sintetizados em fibroblastos, linhagem 3t3, vimos que apresentaram valores maiores que na linhagem de melanoma, exceto o composto Redresv001, sugerindo uma especificidade dos compostos sintetizados nessas c?lulas neopl?sicas. Dentre os compostos, o metilado Redresv003 e os acetilados Redresv004 e Redresv005 apresentam melhores resultados, pelo fato de possu?rem atividade antiproliferativa em menores concentra??es, serem seletivos para a linhagem cancer?gena testada e por manterem sua atividade em longo per?odo de tempo (72 horas), sugerindo que n?o geraram resist?ncia na linhagem B16F10. Pela an?lise qualitativa do mecanismo de morte celular, verificamos que os compostos Redresv003, Redresv004 e Redresv005 apresentaram diferen?a em rela??o ao controle para ensaio de apoptose e tamb?m por autofagia, sugerindo n?o haver alvo espec?fico para a??o com base nesses ensaios.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-12-17T16:15:27Z No. of bitstreams: 1 476732 - Texto Completo.pdf: 4491937 bytes, checksum: 66c81650cd846fce81680ee4557d5e93 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-17T16:15:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 476732 - Texto Completo.pdf: 4491937 bytes, checksum: 66c81650cd846fce81680ee4557d5e93 (MD5) Previous issue date: 2015-10-01 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The growth of elder population is a global occurrence and is followed by an increased prevalence and incidence of dementia, especially Alzheimer disease (AD). As the disease progresses, there is a larger demand for special care, task mainly performed by their family, who mostly are also elderly spouses of the patients. These caregivers are being constantly afflicted by chronic stress, which in turn can become harmful to their health in a number of disorders, such as cognitive impairment. Current literature highlights: (I) Relation between chronic stress, aging and cognitive impairment; (II) Relation between chronic stress and changes on hormone levels, such as cortisol and dehydroepiandrosterone (DHEA), and neurotrophic factors, i.e. Brain-Derived Neurotrophic Factor (BDNF); (III) BDNF, DHEA and cortisol potentially modulate cognitive-related mechanisms. In the present study, the evidences were assessed conjointly to better characterize physiological and pathological mechanisms involved in the association between chronic stress, aging and cognitive deficits. Chronic stress effects on frontal and temporal lobes-dependent cognitive functions were investigated in familial caregivers of AD patients (n=17; 32 to 84 years old). The impact of chronic stress on cortisol, DHEA and BDNF levels was also assessed, and the relation of these physiological features on cognitive performance. Initial findings point that chronic stress is capable of impairing attention, executive functions and declarative memory, also increasing cortisol/DHEA ratio and reducing serum BDNF levels. Then, we assessed age effects on the relation of chronic stress, cognition; cortisol, DHEA, and BDNF, as older caregivers are, theoretically, more prone to chronic stress effects than its younger counterparts are. Our results supports this hypothesis, indicating that hormone and cognitive changes are of greater importance on older caregivers when compared with young caregivers. However, middle-aged caregivers also presented a significant cognitive impairment and more suceptibility to chronic stress effects on BDNF levels than older caregivers. The results presented in this thesis highlights that chronic stress-related cognitive alterations are resulting from, at least partly, cortisol, DHEA and BDNF level changes. However, the rate in which these cognitive features are affected, and its relation with the assessed hormones and neurotrophin are dependent on the caregivers? age. / O crescimento da popula??o idosa ? um fen?meno mundial e vem acompanhado do aumento da incid?ncia e preval?ncia de dem?ncias, principalmente a Doen?a de Alzheimer (DA). ? medida que a DA progride cresce a demanda por cuidados especiais, tarefa desempenhada em grande parte por cuidadores familiares, os quais muitas vezes s?o os c?njuges dos pacientes, ou seja, tamb?m s?o idosos. Estes cuidadores sofrem constantemente de estresse cr?nico, o qual ? capaz de promover preju?zos ? sa?de num amplo espectro de disfun??es, entre as quais as altera??es cognitivas. A literatura evidencia: (I) rela??es entre estresse cr?nico, envelhecimento e altera??es cognitivas; (II) rela??es entre estresse cr?nico e altera??o dos n?veis de horm?nios, como o cortisol e a dehidroepiandrosterona (DHEA), e neurotrofinas, como o fator neurotr?fico derivado de c?rebro (BDNF); (III) o potencial do cortisol, DHEA e BDNF modularem mecanismos subjacentes a processos cognitivos. No presente trabalho estas evid?ncias foram avaliadas de forma conjunta, de maneira a auxiliar na caracteriza??o dos mecanismos fisiopatol?gicos envolvidos na associa??o entre estresse cr?nico, envelhecimento e d?ficits cognitivos. Os efeitos do estresse cr?nico sobre as fun??es cognitivas dependentes dos lobos frontais e temporais foram investigadas em cuidadores familiares de pacientes com DA (n= 17; 32 a 84 anos de idade). Foi analisado tamb?m o impacto do estresse cr?nico nos n?veis de Cortisol, DHEA e BDNF, bem como a rela??o destes par?metros fisiol?gicos com o desempenho em testes neuropsicol?gicos. Os achados iniciais indicaram que o estresse cr?nico ? capaz de prejudicar o desempenho em tarefas que avaliam aten??o, fun??es executivas e a mem?ria declarativa bem como elevar a raz?o cortisol/DHEA e diminuir os n?veis s?ricos de BDNF. Em um segundo momento, analisamos o efeito da idade sobre a rela??o entre estresse cr?nico, cogni??o e n?veis de cortisol, DHEA e BDNF, uma vez que cuidadores idosos teoricamente seriam mais suscet?veis aos efeitos do estresse cr?nico que cuidadores de meia idade. Os resultados obtidos comprovaram esta hip?tese, indicando altera??es hormonais e cognitivas mais importantes nos cuidadores idosos do que nos mais jovens. Todavia, os cuidadores de meia-idade tamb?m apresentaram um preju?zo cognitivo importante e mostraram-se mais sens?veis aos efeitos do estresse cr?nico sobre os n?veis de BDNF do que os cuidadores idosos. Os resultados apresentados nesta tese indicam que as altera??es cognitivas relacionadas ao estresse cr?nico s?o resultantes, pelo menos parcialmente, de altera??es nos n?veis de cortisol, DHEA e BDNF. Entretanto, o grau em que os aspectos cognitivos s?o afetados e sua rela??o com os horm?nios e a neurotrofina avaliados dependem da faixa et?ria do cuidador.

Submitted by Samira Prince (prince@ufpa.br) on 2012-11-19T14:58:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoNeuropatologicaLesao.pdf: 1797804 bytes, checksum: 6eb30f7e8dd12dcc8685e4445a1e9195 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2012-11-19T18:13:54Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoNeuropatologicaLesao.pdf: 1797804 bytes, checksum: 6eb30f7e8dd12dcc8685e4445a1e9195 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-19T18:13:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_AvaliacaoNeuropatologicaLesao.pdf: 1797804 bytes, checksum: 6eb30f7e8dd12dcc8685e4445a1e9195 (MD5) Previous issue date: 2012 / A resposta inflamatória pode exacerbar o processo lesivo após desordens neurais agudas. O dimorfismo sexual gerado pelas diferentes presenças hormonais existentes entre macho e fêmea têm demonstrado habilidades neuroprotetoras endógenas opostas, apresentando uma melhor preservação da integridade do tecido nervoso na fêmea, putativamente, devido à presença dos hormônios ginógenos. Não existem investigações comparando como essa diferença pode afetar a resposta inflamatória durante o AVE. No presente estudo, investigaram-se as diferenças nos processos inflamatórios agudos do dimorfismo sexual de ratos adultos, de ambos os sexos, submetidos à lesão isquêmica aguda induzida por Endotelina (ET1) no corpo estriado. Seis grupos experimentais foram delineados: Animais machos de 24 horas de sobrevida (n= 8); machos de 72 horas de sobrevida de (n=8); machos de 7 dias de sobrevida (n=8); e fêmeas de 24 horas de sobrevida (n= 8); fêmeas de 72 horas de sobrevida de(n=8); fêmeas de 7 dias de sobrevida. A análise histopatológica geral foi realizada em secções coradas pela violeta de cresila. Macrófagos, astrócitos e neurônios foram identificados por imuno-histoquímica com anticorpos específicos para estas células inflamatórias (ED1, anti-GFAP e Anti-NeuN, respectivamente). Realizou-se contagem de micróglia/macrófagos ativados e corpos neuronais nos grupos experimentais mencionados. Não se notou diferença quantitativa entre os diferentes sexos, contudo houve uma aparente queda na quantidade de macrófagos/micróglia em 3 dias, tanto para os machos quanto para as fêmeas, apresentando alguma diferença na ativação astrocitária mais forte em machos. Os resultados sugerem que as diferenças sexuais na linhagem Lister Hooded, não são suficientes para causar diferenças significativas na preservação do tecido nervoso e em alguns aspectos da resposta inflamatória após a indução de isquemia cerebral por meio de ET1. / The inflammatory response may exacerbate the process harmful after acute neural disorders. Sexual dimorphism generated by different hormonal attendance between male and female have demonstrated neuroprotective abilities endogenous opposite, showing a better preservation of the integrity of the nervous tissue in female, putatively due to the presence of gynoid hormones. However, there is no research work comparing how this difference might affect the inflammatory response during stroke. In the present study, we investigated the differences in acute inflammatory processes of sexual dimorphism in adult rats of both sexes subjected to acute ischemic injury induced by endothelin (ET1) in the striatum. Six experimental groups were designed: male animals survival 24 hours (n = 8); male survival of 72 hours (n = 8); male survival of 7 days (n = 8) and female 24 hours survival (n = 8), females 72 hours of survival (n = 8); female seven days of survival. Histopathologic analysis was performed in the general sections stained with violet cresila. Macrophages, astrocytes, and neurons were identified by immunohistochemistry with antibodies specific for these inflammatory cells (ED1, anti-GFAP and Anti-NeuN, respectively). We conducted counts activated microglia / macrophages and neuron bodies mentioned in the experimental groups. No difference was observed quantitatively between different sexes, but there was an apparent decrease in the amount of macrophages / microglia at 3 days but in males and in females, presenting apparently some difference in the activation of astrocytes was stronger in males. The results suggest that sex differences, at least in lineage Lister hooded is not enough to cause significant differences in the preservation of nerve tissue and in some aspects of the inflammatory response after induction of cerebral ischemia by ET1.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2013-12-04T17:38:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_ReducaoVolumeHipocampal.pdf: 1321121 bytes, checksum: bc14f6e04a97ebc0301ad75aa7e5cf36 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2013-12-05T17:04:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_ReducaoVolumeHipocampal.pdf: 1321121 bytes, checksum: bc14f6e04a97ebc0301ad75aa7e5cf36 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-12-05T17:04:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_ReducaoVolumeHipocampal.pdf: 1321121 bytes, checksum: bc14f6e04a97ebc0301ad75aa7e5cf36 (MD5) Previous issue date: 2013 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O consumo de etanol (EtOH) é considerado um problema de saúde pública do Brasil e no mundo, sendo alvo de pesquisas epidemiológicas e de seus efeitos no organismo durante as várias etapas do desenvolvimento humano. Neste contexto, torna-se necessário o entendimento dos efeitos do EtOH no Sistema Nervoso Central, mais especificamente sobre a formação hipocampal, pois embora seja conhecida como uma estrutura particularmente sensível aos seus efeitos deletérios do EtOH, os mecanismos subjacentes aos efeitos de exposição crônica são pouco estabelecidos. O presente estudo objetiva verificar quais as repercussões da exposição crônica ao EtOH em ratos, desde a adolescência até a idade adulta, sobre os padrões morfométricos e morfologia hipocampal. Ratos Wistar, fêmeas, receberam EtOH por gavagem (6,5 g/kg/dia, 22,5% V/v), do 35º ao 90º dia pós-natal, sendo comparado com grupo controle, o qual recebeu apenas água destilada. Foi realizada análise morfométrica e estereológica, bem como histoquímica e imunoistoquímica. Para a marcação imunoistoquímica, utilizou-se os anticorpos Anti-NeuN, Anti-GFAP e Anti-Iba1. Verificou-se perda neuronal significativa em CA1 e hilo, com CA3, apresentando diminuição não significante no número de células Neu-N+. Também foi encontra redução significativa da população microglial em todas as áreas investigadas, com ativação destas células. Houve redução no número de astrócitos em animais expostos ao EtOH em todas as áreas, embora não de forma significativa em CA1. Análise estereológica evidenciou redução de volume na formação hipocampal de ratos expostos ao EtOH em relação ao grupo controle. Desta forma, conclui-se que animais expostos cronicamente ao EtOH, sofrem redução volumétrica e perdas neuronal e glial na formação hipocampal.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-06-03T18:10:26Z No. of bitstreams: 1 DIS_TALITA_SIARA_ALMEIDA_BAPTISTA_COMPLETO.pdf: 9334172 bytes, checksum: c7b40886e364d19d530b0e1e52b4019c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-03T18:10:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_TALITA_SIARA_ALMEIDA_BAPTISTA_COMPLETO.pdf: 9334172 bytes, checksum: c7b40886e364d19d530b0e1e52b4019c (MD5) Previous issue date: 2016-03-28 / Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic autoimmune and inflammatory disease characterized by the production of autoantibodies and the articular and extra articular events, including the Central Nervous System (CNS) of patients. Factors such as the chronic inflammation and the presence of autoantibodies against myelin proteins are potential mechanisms involved with cognitive dysfunction in other autoimmune diseases. Disorders such as mild cognitive impairment and Alzheimer's disease have high plasma levels of autoantibodies against myelin proteins well as important cognitive impairment and increased levels of S100? protein. Based on this, here we explore the relationship between cognitive performance, plasma levels of antibodies and S100? protein of patients with RA. Twenty patients with RA and nineteen healthy controls did not differ significantly by gender, age and schooling, were recruited in this study. Cognitive function, (MMSE, working memory, processing speed, inhibitory control and mental flexibility) declarative memory and depression were assessment through interviews where specific clinical questionnaires were apply. The plasma of patients and controls was obtained by centrifugation to investigate the levels of S100? protein and autoantibodies against Basic Myelin Protein (English MBP - Myelin Basic Protein) and against Glycoprotein Myelin oligodendrocyte (English MOG Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein). RA patients had a lower cognitive performance in the MMSE, declarative memory, working memory, processing speed, inhibitory control and mental flexibility compared to healthy controls. Patients present S100? protein levels and anti - MBP and anti - MOG higher than controls which negatively correlated with cognitive performance of these individuals. In regression analyzes peripheral levels of anti - MOG and anti - MBP acted as predictors of executive function scores as declarative and working memory, processing speed and inhibitory capacity. In conclusion, when compared to healthy controls, RA patients have higher serum levels of autoantibodies and S100? protein which were negatively related and predicted the worst cognitive performance of these individuals. / A Artrite Reumatoide (AR) ? uma doen?a autoimune cr?nica e inflamat?ria caracterizada pela produ??o de auto anticorpos e por eventos articulares e extra articulares, atingindo inclusive o Sistema Nervoso Central (SNC) dos pacientes. Fatores como a inflama??o cr?nica a presen?a de auto anticorpos contra prote?nas da mielina s?o potenciais mecanismos envolvidos com a disfun??o cognitiva em outras doen?as autoimunes. Patologias como o dano cognitivo leve e doen?a de Alzheimer apresentam altos n?veis plasm?ticos de auto anticorpos contra prote?nas da mielina bem como altera??es cognitivas importantes e aumento dos n?veis da prote?na S100?. Com base nisto, neste trabalho n?s exploramos as rela??es entre desempenho cognitivo, n?veis de auto anticorpos e da prote?na S100? na circula??o perif?rica de pacientes com AR. Vinte pacientes com AR e dezenove controles saud?veis, que n?o diferiram significativamente em rela??o a sexo, idade e escolaridade, foram recrutados neste estudo. A fun??o cognitiva (MMSE, mem?ria de trabalho, velocidade de processamento, controle inibit?rio e flexibilidade mental) mem?ria declarativa e depress?o foram avaliados atrav?s de entrevistas onde foram aplicados question?rios cl?nicos espec?ficos. O plasma dos pacientes e controles foi obtido por centrifuga??o para investiga??o dos n?veis da prote?na S100? e de auto anticorpos contra Prote?na B?sica da Mielina (em ingl?s MBP ? Myelin Basic Protein), contra Glicoprote?na da Mielina de Oligodendr?citos (em ingl?s MOG Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein). Os pacientes com AR tiveram um desempenho cognitivo inferior no MMSE, mem?ria declarativa, mem?ria de trabalho, velocidade de processamento, controle inibit?rio e flexibilidade mental se comparado a controles saud?veis. Embora todos os indiv?duos, de ambos os grupos, tiveram uma pontua??o superior ? estabelecida pelo cutoff do MMSE. Os pacientes apresentaram n?veis de prote?na S100? e de anticorpos anti ? MBP e anti ? MOG mais altos do que os controles o que se correlacionou negativamente com o desempenho cognitivo desses indiv?duos. Nas an?lises de regress?o os n?veis perif?ricos de anti ? MOG e anti ? MBP atuaram como preditores dos escores de fun??es executivas como mem?ria declarativa e de trabalho, velocidade de processamento e capacidade inibit?ria. Concluindo, quando comparados a controles saud?veis pacientes com AR tem n?veis plasm?ticos mais altos de auto anticorpos e prote?na S100?, que se correlacionaram e predisseram negativamente o pior desempenho cognitivo destes indiv?duos.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-08-22T16:27:06Z No. of bitstreams: 1 TES_FERNANDA_FRANCINE_ZIMMERMANN_COMPLETO.pdf: 4145272 bytes, checksum: e7185015e9927f4db21344a6bf065ef8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-22T16:27:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_FERNANDA_FRANCINE_ZIMMERMANN_COMPLETO.pdf: 4145272 bytes, checksum: e7185015e9927f4db21344a6bf065ef8 (MD5) Previous issue date: 2016-04-08 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Several psychiatric and neurological diseases are characterized by impairments in social function, such as autism spectrum disorders (ASD) and schizophrenia (SCZ). In this study, we conducted a behavioral screening at different times of zebrafish development at 6, 30, 70 and 120 dpf (postfertilization days) to establish a social interaction deficit model induced by valproic acid (VPA) at 48 ?M concentration to investigate social behavior, locomotion, aggression and anxiety. To analyze the social behavior of each fish was placed in an experimental tank. On one side of the experimental tank, an empty fish tank was placed; on the other side, a tank of identical size held 15 zebrafish, which were designed the ?stimulus fish?. We quantify the time of the experimental fish from the side of the tank "fish stimulus" in relation to empty tank. The locomotion of the animals was assessed by evaluating the following parameters: distance traveled, average speed, number of crossings and the time spent in each tank position (bottom vs. upper levels) was considered an index of anxiety. To analyze the aggression the animals were individually placed in an experimental tank. A mirror was placed at the side of the tank at an angle of 22.5? to the backwall of the tank so that the left vertical edge of the mirror touched the side of the tank and the right edge was further away.Thus, when the experimental fish swam to the left side of the tank, their mirror image appeared closer to them. indicating preference for the opponent.Our results showed that exposure to VPA induced changes on locomotor activity and anxiety in different periods of development in zebrafish. In addition, VPA-treated animals presented a deficit in social interaction to 70 dpf and 120 dpf. Exposure to VPA did not affect aggression in the adult stage after 70 dpf and 120 dpf. This study also investigated the purinergic signaling in a model of embryonic exposure to VPA, which induced deficit in social interaction in adult zebrafish. This study demonstrates the first evidence that exposure to VPA in embryonic zebrafish in 120 dpf can modulate the hydrolysis of nucleotide and nucleoside and adenosine deamination in zebrafish brain membranes. In addition, we analyzed the effects of oxytocin, the oxytocin receptor agonist (carbetocin) and oxytocin receptor antagonist (L-368,899) on the reversal of behavioral effects induced by MK-801 in zebrafish regarding behavior social, such as, changes in social interaction and aggression. These results support the role of NMDA receptors and oxytocinergic system in the regulation of social behavior and aggression. This study can contribute to a better understanding of social behavior and purinergic signaling on the main neuropsychiatric disorders that affect social behavior; autism and schizophrenia, as well as to present social interaction deficit models induced by embryological exposure to VPA and exposure to MK-801 in adult zebrafish. These findings reinforce the involvement of oxytocinergic system and its pharmacological potential on diseases that affect social behavior. / Diversas doen?as psiqui?tricas e neurol?gicas s?o caracterizadas por apresentarem preju?zos no funcionamento social, como os transtornos do espectro do autismo (TEA) e esquizofrenia (SCZ). Neste estudo, realizamos uma triagem comportamental em diferentes per?odos do desenvolvimento do peixe-zebra em 6, 30, 70 e 120 dpf (dias p?s-fertiliza??o) para estabelecer um modelo de d?ficit de intera??o social induzido por ?cido valpr?ico (VPA) na concentra??o de 48 ?M a fim de investigar o comportamento social, locomo??o, agressividade e ansiedade. Para analisar o comportamento social cada peixe foi colocado num aqu?rio experimental. De um lado do tanque experimental, foi colocado um aqu?rio vazio e; do outro lado, um aqu?rio de tamanho id?ntico com 15 animais, designados como "peixe est?mulo". Quantificamos o tempo de perman?ncia do peixe experimental entre o lado do aqu?rio "peixe est?mulo" em rela??o ao aqu?rio vazio. A locomo??o dos animais foi analisada avaliando os seguintes par?metros: dist?ncia percorrida, velocidade m?dia, n?mero de cruzamentos e o tempo gasto em cada zona do aqu?rio (superior versus inferior) foi considerado ?ndice de ansiedade. Para analisar a agressiviade os animais foram individualmente colocados em um aqu?rio experimental. Um espelho foi colocado inclinado a 22,5 ? da parede do fundo do aqu?rio, para que a borda esquerda vertical do espelho toque a borda direita do aqu?rio. Assim, quando o peixe virar para o lado esquerdo do tanque sua imagem no espelho aparecer? mais perto, indicando prefer?ncia pelo advers?rio. Nossos resultados demonstram que a exposi??o ao VPA induz mudan?as na atividade locomotora e ansiedade em diferentes per?odos do desenvolvimento em peixe-zebra. Al?m disso, os animais tratados com VPA apresentaram um d?ficit de intera??o social aos 70 dpf e 120 dpf. A exposi??o ao VPA n?o alterou a agressividade no est?gio adulto aos 70 dpf e 120 dpf. Neste estudo, tamb?m investigamos a sinaliza??o purin?rgica em um modelo de exposi??o embrion?ria ao VPA, que induz d?ficit de intera??o social em peixe-zebra adultos. Este estudo demonstra a primeira evid?ncia de que a exposi??o embrion?ria ao VPA pode modular a hidr?lise de nucleot?deos e nucleos?deo e a desamina??o de adenosina em membranas de enc?falo de peixe-zebra em 120 dpf. Al?m disso, analisamos os efeitos da ocitocina, do agonista do receptor da ocitocina (carbetocina) e do antagonista do receptor da ocitocina (L-368,899) na revers?o dos efeitos comportamentais induzidos pelo MK-801 em peixe-zebra em rela??o ao comportamento social, tais como, mudan?as na intera??o social e agressividade. Estes resultados sugerem o papel dos receptores NMDA e do sistema ocitocin?rgico na regula??o do comportamento social e agressividade. Este estudo pode contribuir para um melhor entendimento do comportamento social e da sinaliza??o purin?rgica sobre as principais desordens neuropsiqui?tricas que afetam o comportamento social; como o autismo e a esquizofrenia. Al?m disso, este estudo apresenta modelos de d?ficit de intera??o social induzido pela exposi??o embrion?ria ao VPA e exposi??o ao MK-801 em peixe-zebra adulto. Estes achados tamb?m refor?am o envolvimento do sistema ocitocin?rgico e o seu potencial farmacol?gico sobre doen?as que afetam o comportamento social.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A via de sinalização da cinase regulada por fatores extracelulares, da família das proteínas cinases ativadas por mitógenos (MAPK/ERK) é importante tanto para a sobrevivência como para a progressão da diferenciação de oligodendrócitos. Neste trabalho, a via da MAPK/ERK foi avaliada na oligodendroglia in vitro com a utilização de inibidores da MEK. A morfologia celular, assim como a distribuição de proteínas foram analisadas em diferentes estágios de maturação da oligodendroglia. Culturas primárias de oligodendrócitos foram tratadas com os inibidores da MEK PD98059 ou U0126, aos 5 ou 11dias in vitro (div), por 30min, 24 ou 48h. A oligodendroglia foi distinguida com marcadores estágio-específicos: A2B5, 23nucleotídeo cíclico 3 fosfodiesterase (CNPase) e proteína básica de mielina (MBP), e classificada de acordo com sua morfologia em diferentes estágios de desenvolvimento. O tratamento aumentou significativamente o número de células com morfologia mais imatura e diminuiu o número de células maduras. Além disso, aumentou o número de células redondas e sem prolongamentos as quais não puderam ser classificadas em nenhum dos estágios de desenvolvimento da oligodendroglia. Os efeitos mais evidentes foram observados logo após o menor tempo de tratamento. Células redondas eram positivas para CNPase e MBP, porém não foram marcadas com A2B5 ou com NG2, indicando que seriam células maduras incapazes de estender ou manter seus prolongamentos. De fato, estas mudanças foram acompanhadas por alterações na distribuição de proteínas de oligodendrócitos como a MBP e a CNPase, assim como alterações em proteínas de citoesqueleto, como actina, tubulina e na cinase de adesão focal (FAK). A MBP foi observada nas células tratadas em um padrão de distribuição desorganizado e disperso, oposto ao padrão contínuo que é observado nas células das culturas controle. Além disso, o tratamento causou uma desorganização na distribuição da CNPase, actina e tubulina. Nas células das culturas controle, estas proteínas apresentam um padrão organizado compondo as estruturas de citoqueleto semelhantes a nervuras. Após um pequeno período de tratamento (30min), actina e tubulina apresentaram o mesmo padrão de marcação puntiforme que a CNPase apresentou. O tratamento também reduziu os pontos de adesão focal demonstrados pela FAK. Com o decorrer do tratamento, após 24 e 48h, actina e tubulina aparentavam estar se reorganizando em um padrão filamentar. Estes resultados indicam um efeito importante da via da MAPK/ERK na ramificação e alongamento dos prolongamentos dos oligodendrócitos, com possíveis consequências para a formação da bainha de mielina. / The mitogen-activated protein kinase/extracellular signal-regulated kinase (MAPK/ERK) pathway is important for both long-term survival and timing of the progression of oligodendrocyte differentiation. In this work, the MAPK/ERK signaling in oligodendroglia was studied in vitro by using MEK inhibitors. Cell morphology and distribution of proteins were analyzed in different stages of maturation. Primary cultures of oligodendroglia were treated with the MEK inhibitors PD98059 or U0126, at 5 or 11div for 30min, 24 or 48h. Oligodendroglial cells were distinguished by using stage specific markers: NG2 proteoglycan, A2B5, 23nucleotide-cyclic 3phosphodiesterase (CNPase) and myelin basic protein (MBP), and classified according to their morphology into different developmental stages. Treatment significantly increased the number of cells with more immature morphologies and decreased the number of mature cells. Furthermore, it increased the number of rounded cells that could not be classified into any of the oligodendroglial developmental stages. The strongest effects were usually observed shortly after treatment. Rounded cells were CNPase/MBP positive and they were not stained by anti-NG2 or A2B5, indicating that they were mature cells unable either to extend and/or to maintain their processes. In fact, these changes were accompanied by alterations in the distribution of the oligodendroglial proteins MBP and CNPase, and alterations in cytoskeleton proteins, as actin, tubulin and the focal adhesion kinase (FAK). MBP was observed in a continuous distribution in cell body and processes in control cultures. Furthermore, in treated cultures a disorganized pattern of distribution of CNPase, actin and tubulin was observed. In control cultures, these proteins compose the cytoskeleton vein-like structures. By the other side, after a short time of MEK inhibition (30min), actin and tubulin showed the same punctual pattern observed in CNPase distribution. Treatment also caused a reduction of focal adhesion sites showed by FAK. As treatment progressed, after 24 and 48h, actin and tubulin seemed to be rearranged into a filament-like pattern. These data showed an effect of the MAPK/ERK pathway on oligodendroglial branching, with possible consequences for the formation of the myelin sheath.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2014-10-10T21:54:56Z No. of bitstreams: 2 Tese - Saulo José Linhares de Siqueira - 2012.pdf: 3918109 bytes, checksum: cfb7931590a50ed74838d6c8cefab1ee (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-10-13T20:44:05Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Saulo José Linhares de Siqueira - 2012.pdf: 3918109 bytes, checksum: cfb7931590a50ed74838d6c8cefab1ee (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-13T20:44:05Z (GMT). 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In Chapter 1 T. asperellum isolate T00, known to produce high levels of cell wall degrading enzymes, has its β-1,3-glucanases enzymes and genes (tag83 and tag27) studied. The gene tag27 was cloned and characterized and codes to an 27kDa endo-β-1,3glucanase with and 285 aminoacids and 96% similar to a glucanases from T.atroviride. The enzyme was detected when T. asperellum was grown in Rhizoctonia solani or Sclerotinia sclerotiorum cell wall-containing media but not in Fusarium oxysporum cell wall-containing media. The tag83 and tag27 genes was repressed in media containing glucose as carbon source and upregulated in cell wall containing media and during plate confrontation tests with pathogenic fungi. Chapter 2 shows T. harzianum isolate ALL42 genes involved in mycoparasitism against R. solani or S. sclerotiorum detected using subtractive hybridization approach. T. harzianum was grown with R. solani or S. sclerotiorum cell wall as carbon source and the RNA used both as tester and driver in each of two subtractive library constructed. Sequencing analysis resulted in 47 genes related with growth in R. solani cell wall media and 114 genes related with growth in S. sclerotiorum cell wall media. To confirm the obtained data, 18 genes were tested by quantitative real time RT-PCR and 9 were differentially expressed in the same condition of the library they were detected. Five of these genes were also differentially expressed during plate confrontation assay with the respective pathogen, two of them expressed during contact with R. solani (cutinase and alginate lyase) and 3 during contact with S. sclerotiorum (hsp98, serin endopeptidase and a hypotetic gene). The results presented in this study provides additional information about the role of 1,3glucanase genes in mycoparasitism and of other genes related to antagonism against specific pathogens, providing helpful insights in the mechanism of biocontrol performed by Trichoderma. / Espécies do gênero Trichoderma são eficientes antagonistas de fungos fitopatogênicos, como as espécies Rhizoctonia, Sclerotinia e Fusarium, e são comercializados como agentes de controle biológico principalmente por sua característica de micoparasita. Muitos estudos têm sido feitos para compreender as bases moleculares dos mecanismos de biocontrole de Trichoderma e também para encontrar espécies com alto potencial de antagonismo contra fitopatógenos. O objetivo deste trabalho foi analisar a expressão de genes relacionados ao micoparasitismo de T. asperellum T00 e T. harzianum ALL42 (Enzimologia ICB/UFG) que possuem potencial para uso como agente de biocontrole. Este trabalho foi dividido em dois capítulos. O Capítulo 1 se refere ao fungo T. asperellum T00 e suas β-1,3-glicanases (TAG83 e TAG27) que degradam componentes da parede celular de fungos fitopatógenos. O gene tag27 codifica para uma endo-β-1,3glicanase de 27kDa que possui 285 resíduos de aminoácidos e apresentou 96% de similaridade com uma enzima de T. atroviride. A enzima foi secretada em meio de cultura contendo parede celular de Rhizoctonia solani e Sclerotinia sclerotiorum, mas não em meio com parede de Fusarium oxysporum. A expressão dos genes tag83 e tag27 foi reprimida na presença de glicose e ativada tanto na presença de parede celular dos fitopatógenos quanto durante o contato entre os fungos em placa. O Capítulo 2 trata do fungo T. harzianum isolado ALL42 e de genes identificados pela técnica de hibridização subtrativa relacionados especificamente ao biocontrole contra R. solani e S. sclerotiorum. Foram construídas duas bibliotecas subtrativas sendo que os RNAs utilizados como condição teste e controle da subtração foram obtidos de T. harzianum crescido em meio contendo parede celular de R. solani ou S. sclerotiorum. As bibliotecas foram sequenciadas resultando em 47 genes relacionados ao crescimento em meio com R. solani e 114 genes relacionados ao crescimento em meio com S. sclerotiorum. Dos 18 genes escolhidos para validação da biblioteca por RT-PCR em tempo real, 9 se mostraram diferencialmente expressos na condição correspondente à biblioteca em que foram identificados. Dentre estes, 5 genes se mostraram também diferencialmente expressos em experimento de confronto em placa, 2 deles mais expressos contra R. solani (cutinase e alginato liase) e 3 contra S. sclerotiorum (hsp98, serina endopeptidase e um de função hipotética). Os resultados obtidos com as duas linhagens fornecem informações adicionais sobre genes de β-1,3-glicanases, conhecidamente envolvidos no processo de micoparasitismo, e sobre genes relacionados ao antagonismo de patógenos específicos, além de contribuir para o conhecimento relacionado ao biocontrole realizado por fungos do gênero Trichoderma.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 449724.pdf: 6148140 bytes, checksum: 12da4cf8a6d912387d56ee8f32c58f7b (MD5) Previous issue date: 2013-03-27 / The irritant contact dermatitis (ICD) is a non-allergic inflammatory reaction of the skin that occurs independently of the T cells participation. ICD is caused by exposure to low molecular weight chemicals and it is initiated by damage or activation of epidermal cells which trigger the activation of the innate immune system. The purine nucleotide adenosine triphosphate (ATP) is the universal energy molecule and appears as is an important extracellular messenger. In healthy tissues, ATP is almost exclusively localized intracellularly, whereas in pathological conditions as inflammation, the tissue injury leads to the release of large amounts of ATP to the extracellular medium. In the extracellular medium, ATP can be hydrolyzed by nucleotidases to their breakdown products ADP and AMP. These nucleotidases control the availability of nucleotides for purinergic receptors. Currently, experimental observations indicate that extracellular ATP acting via purinergic receptors plays a relevant role on skin inflammation. Several models in vitro and in vivo had been used to study the mechanisms of ICD. However, this pathology is still poor understood. This study aimed to evaluate the involvement of the purinergic receptor P2X7 in ICD using in vivo and in vitro approaches. The croton oil (CrO) is a chemical irritant that has been shown to exert its effects independent of inflammatory T cells, therefore we used the mice model of irritant contact dermatitis induced by CrO to investigate the involvement of P2X7 receptor in the immunes mechanisms of ICD. We use several pharmacological approaches, in vitro and in vivo tests and mice with gene deletion to P2X7 receptor and showed evidences that the P2X7 receptor activation by ATP in macrophages and dendritic cells (DCs) is connected with neutrophil recruitment induced by CrO. Furthermore, we demonstrated that CrO decreased the hydrolysis of ATP and ADP in the serum of mice and caused necrosis of keratinocytes in culture, both effects related to activation of P2X7. Taken together, the data obtained in this study suggested that CrO exerts its toxic effects by promoting keratinocytes necrosis and decreasing the activity of ectonucleotidades leading to an increase of ATP extracellular levels. Then, extracellular ATP promotes the P2X7 receptor activation in DCs and macrophages causing the release of IL-1β, which is partially responsible for the neutrophils recruitment observed in irritant contact dermatitis induced by croton oil. Noteworthy, the treatment with the selective P2X7 receptor antagonist A438079 decreased the edema and others proinflammatory effects induced by croton oil, pointing the P2X7 receptor as an important pharmacological target for the treatment of ICD. / A dermatite de contato irritante (ICD, irritant contact dermatitis) ? uma rea??o inflamat?ria local n?o al?rgica da pele que ocorre independentemente da participa??o de c?lulas T. ? ocasionada pela exposi??o a subst?ncias qu?micas de baixo peso molecular e acredita-se que seja iniciada por dano ou ativa??o de c?lulas epidermais que desencadeiam a ativa??o do sistema imune inato. O nucleot?deo ATP ? uma mol?cula energ?tica que desempenha importantes fun??es como mensageiro extracelular. Em tecidos saud?veis, o ATP est? localizado quase exclusivamente no meio intracelular, entretanto quando ocorre inj?ria tecidual, grandes quantidades de ATP s?o liberadas para o meio extracelular. No meio extracelular, o ATP pode ser hidrolisado por nucleotidases gerando ADP e AMP. As nucleotidases controlam a disponibilidade do ATP para os receptores purin?rgicos. Muitas observa??es experimentais t?m indicado que o ATP atuando via receptores purin?rgicos desempenha um papel preponderante em processos inflamat?rios na pele. V?rios modelos in vitro e in vivo t?m sido utilizados para o estudo da ICD, entretanto a fisiopatologia da doen?a ainda ? pouco conhecida. Este estudo teve como objetivo avaliar o envolvimento do receptor purin?rgico P2X7 (P2X7R) na ICD utilizando abordagens in vivo e in vitro. O ?leo de cr?ton (CrO) ? um irritante qu?mico que tem mostrado exercer seus efeitos inflamat?rios independente de c?lulas T, portanto n?s utilizamos o modelo de dermatite de contato irritante induzida por CrO em camundongos para investigar o envolvimento do receptor P2X7 nos mecanismos imunopatol?gicos da ICD. Atrav?s da utiliza??o de diversas abordagens farmacol?gicas in vitro e in vivo e do uso de camundongos com dele??o g?nica para o receptor P2X7, n?s primeiramente mostramos evid?ncias de que a ativa??o do P2X7R por ATP em macr?fagos e c?lulas dendr?ticas (DCs) est? relacionada com o recrutamento de neutr?filos induzido por CrO. Al?m disso, foi demonstrado que o CrO decresce a hidr?lise de ATP e ADP no soro de camundongos e provoca a necrose de queratin?citos em cultura, ambos os efeitos foram relacionados com a ativa??o do receptor P2X7. Portanto, a partir dos dados obtidos neste estudo, n?s sugerimos que o ?leo de croton exerce seus efeitos t?xicos promovendo a morte celular de queratin?citos, diminuindo a atividade de ectonucleotidades e aumentando os n?veis extracelulares de ATP. O ATP extracelular, via ativa??o de P2X7R em DCs e macr?fagos, provoca a libera??o de IL-1β que ? parcialmente respons?vel pelo recrutamento de neutr?filos observado na dermatite de contato irritante induzida por ?leo de cr?ton. Digno de nota, o tratamento com o antagonista seletivo do receptor P2X7, A438079, diminuiu o edema e outros efeitos pr?-inflamat?rios induzidos pelo ?leo de cr?ton, apontando o receptor P2X7 como um alvo farmacol?gico importante para o desenvolvimento de novas terapias para o tratamento da ICD.