Nas células do ceco anterior de A.flavolineata, a secreção de enzimas digestivas parece ser mediada por vesículas de secreção e é influenciada pelo tempo decorrido após a refeição. Fracionamentos subcelulares das células do ceco anterior realizados 3h após a refeição indicaram que a amilase, maltase, pNΦβglu hidrolase e aminopeptidase estão enriquecidas nas frações que contém os grânulos de secreção. γ glutamil transferase, aminopeptidase e dipeptidase apresentaram uma forma solúvel e outra ligada a membrana. No conteúdo do intestino de A. flavolineata foi possível detectar a presença de 3 β-glucosidases: 1, uma celobiase-aril β-glucosidase termoestável; 2, uma aril β-glucosidase termoinstável ativa sobre pNΦβglu; 3, uma alquil β-glucosidase. A celobiase-aril β-glucosidase hidrolisa celobiose e aril β-glucosídeos em sítios diferentes e é mais ativa sobre celobiose e laminaribiose que sobre aril β-glucosídeos sintéticos ou naturais. Moléculas anfipáticas ativam a alquil β-glucosidase, tornando esta enzima efetivamente ativa apenas na digestão de membranas. Esta enzima hidrolisa alquil β-glucosídeos com 6 a 11 carbonos no radical alquil. A celobiase-aril P-glucosidase e a alquil β-glucosidase são provavelmente responsáveis pela digestão \"in vivo\" de β-1,4; β-1,3; β-1,3-1,4 glucanas e glucosilceramidas, respectivamente. / The secretion of digestive enzymes in the anterior caecal cells of A. flavolineata seems to be mediated by secretory vesicles and influenced by the period of time after a meal. Subcellular fractions of anterior caecal cells were obtained by differential centrifugation of homogenates prepared 3 hours after a meal. Amylase, maltase, pNΦβglu hidrolase and aminopeptidase are found with high activities in fractions that correspond to the contents of secretory vesicles. γ glutamil transferase, aminopeptidase and dipeptidase presented soluble and membrane-bound forms. In A. flavolineata midgut contents we found 3 β-glucosidases: 1, a heat-stable cellobiase-aryl β-glucosidase; 2, a heat-unstable activity against pNΦ β glu (aryl β-glucosidase); 3, a alkyl β-glucosidase. The cellobiase-aryl β-glucosidase hydrolyzes cellobiose and aryl β-glucosides at different active sites and is more active on cellobiose and laminaribiose than on aryl β-glucosides. Amphipatic molecules activate the alkyl β-glucosidase, making the enzyme very active only during membrane digestion. This enzyme hydrolyzes alkyl β-glucosides with 6 to 11 carbons in alkyl moiety. The cellobiase-aryl β-glucosidase and alkyl β-glucosidase are probably responsible for in vivo digestion of β-1,4; β-1,3; β-1,3-1,4 glucans and glucosylceramides, respectively.

A formulação de vacinas efetivas frequentemente requer a adição de adjuvantes capazes de otimizar as respostas imunes humoral e celular. Com o objetivo principal de contribuir para o desenvolvimento de novos adjuvantes, este trabalho foi desenvolvido buscando aprofundar o conhecimento do mecanismo de ação imunoadjuvante de preparações de saponinas de Quillaja brasiliensis e suas formulações em complexos imunoestimulantes do tipo ISCOM. Como a toxicidade das saponinas é um fator crítico para seu uso em preparações vacinais, inicialmente foram realizados ensaios visando comparar a toxicidade in vitro e in vivo de saponinas extraídas de Quillaja brasiliensis com saponinas de ação imunoestimulante reconhecidas, extraídas de Quillaja saponaria (Quil A). O potencial imunoadjuvante das saponinas solúveis de Q. brasiliensis foi avaliado utilizando preparações com dois antígenos: ovalbumina (OVA) e vírus da diarreia viral bovina (BVDV). Numa etapa seguinte, a atividade imunoadjuvante de ISCOMs preparados com saponinas de Q. brasiliensis foram avaliadas em duas vias de administração. O potencial imunomodulador dessas saponinas foi verificado em experimentos de recrutamento celular in vivo e expressão de genes relacionados ao sistema imune. Os resultados mostraram que saponinas de Q. brasiliensis são menos tóxicas que as de Quil A e apresentam atividade adjuvante similar, caracterizada por um perfil Th1/Th2 balanceado. Q. brasiliensis promoveu uma forte resposta imune celular do tipo Th1 caracterizada por uma robusta reação de hipersensibilidade celular tardia (DTH) e pela produção de IFN- e IL-2. A resposta imune induzida pelos ISCOMs produzidos a partir de saponinas de Q. brasiliensis foram superiores às respostas induzidas pelas saponinas solúveis. Os testes in vivo mostraram que as saponinas de Q. brasiliensis promovem um ambiente imunocompetente no local da inoculação e nos linfonodos drenantes. Esse ambiente foi caracterizado pelo intenso influxo celular (neutrófilos, células NK, células dendríticas, linfócitos T e B), além da expressão diferencial de genes relacionados à ativação do sistema imune. Em suma, os resultados mostraram que saponinas de Q. brasiliensis são seguras e seus potencial adjuvante foi equivalente a saponinas com ação imunoadjuvante conhecida de Q. saponaria. / Effective vaccine formulations frequently require addition of adjuvants able to optimize the cellular and humoral immune responses. With the goal to contribute to the development of new classes of adjuvants, this work was developed in order to achieve deep knowledge on the imunoadjuvant mode of action for Quillaja brasiliensis saponins incorporated into immunostimulant complex (ISCOM). The toxicity of saponins is a critical factor for its usage as vaccine preparations. At first, in vivo and in vivo citoxicity assays were carried out to compare to the effects between saponins extracted from Quillaja brasiliensis and the immunostimulant saponins already known from Quillaja saponaria (Quil A). Imunoadjuvant potential of soluble saponins from Q. brasilienis was evaluated using preparations of two antigens: ovoalbumin (OVA) and bovine viral diarrhea (BVD). As a next step, imunoadjuvant activity of ISCOMS prepared with Q. brasiliensis saponins was evaluated using two routes of administration. The immunomodulatory potential of these saponins was tested during in vivo cell recruitment assays and gene expression related to immune system. Our results demonstrated that Q. brasilienis saponins are less toxic than those from Quil A and presenting similar adjuvant activity, characterized by a Th1/Th2 balance profile. Q.brasiliensis induced a strong Th1 cell-mediated immune responses indicated by a robust delayed type hypersensitivity (DTH) as well as IFN-у and IL-2 production. The immune response induced by ISCOMs from Q. brasiliensis saponins was higher than the one induced by soluble saponins. In vivo experiments indicated that saponins from Q. brasiliensis generate an immunocompetent environment at the injection site and draining lymph nodes. This environment was characterized by an intense cell influx (neutrophils, NK cells, dendritic cells, B and T cells) as well as differential gene expression related to immune system activation. In essence, the results showed that saponins from are safe and their adjuvant potential was equivalent to saponins with imunoadjuvant activity of Q. saponaria.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-07T12:10:47Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Cesar Augusto Sam Tiago Vilanova Costa - 2006.pdf: 1500361 bytes, checksum: 3401843db66da8f77a90a41b7a08f826 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-07T12:14:51Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Cesar Augusto Sam Tiago Vilanova Costa - 2006.pdf: 1500361 bytes, checksum: 3401843db66da8f77a90a41b7a08f826 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-07T12:14:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Cesar Augusto Sam Tiago Vilanova Costa - 2006.pdf: 1500361 bytes, checksum: 3401843db66da8f77a90a41b7a08f826 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2006-09-29 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Hypo pharynx is the under region of pharynx and serves both respiratory and digestive tract, acting as a passageway to air and food. It’s composed by squamous nonkeratinized epithelial tissue. Statistical studies indicates that 85 to 90% of neoplasies rush pyriform sinus and are characterized by fast dissemination and metastization. Epidemiological trends of hypo pharynx cancer in Goiania on period 1998 to 2003 analyzing data derived from Cancer Registry of Association for Cancer Combat of Goias, shows that the relative survival rate for men diagnosed with hypo pharynx cancer was 38% past 60 months while women presented a survival rate of 100%. Surgery was the treatments that present fewer rates (34%) and chemotherapy was associated to the most survival rate (54%). Patients that use tobacco presented a survival rate of 43% while non-tabagists present a rate of 60% of surviving. Relative survival rate for patients diagnosed with hypo pharynx tumor was 38% and estimated censure for 5 years was just 5%. Survival rate was extremely decreased due to 45% of cases were diagnosed in advanced stages of disease. It is important to point out that preventive campaign is important to evade the increasing of these pathologies that are related to behavior of tabagism and etilism. Present study also evaluates cytogenetically individuals diagnosed with hypo pharynx cancer. Cytogenetic analysis of exfoliated cells is largely used to evaluate cytotoxic and genotoxic alterations on people exposed to potentially mutagens. A number of 36 individuals were analyzed, representing case group, and 36 healthy individuals composed control group. Data was collected and analysis was performed to estimate main nuclear alterations. Standard protocols were adopted to collect and counting cells. Micronuclei test was used to determinate the frequency of cytotoxic and genotoxic alterations. Besides than micronuclei others alterations like broken-eggs, binucleated cells and piknotic nuclei are good markers of cell alterations because they are resulted from cytotoxic events frequently related to occupational exposure. Behaviors like tabagism, etilism and exposition time were also investigated to correlate cells alterations. The correlation between micronuclei frequencies of case and control group test doesn’t show statistic difference. Broken egg and binucleated cells were the most observed anomalies on case group and showed up significant statistic difference (p=0.03). Results indicates a high grade of cytotoxic anomalies on individuals with hypo pharynx cancer, specially in tabagists and chronic etilists individuals, behaviors that are correlated to induct and promote tumors in susceptible people due their capabilities to affect cell cycle. Studies about relationship between Human Papillomavirus (HPV) and cancer development are performed since 80’s. Although the correlation of HPV and cervical cancer are well established, the possible role of HPV and head and neck cancer are still unclear. Among controversial factors of HPV and carcinogenesis of squamous epithelial cells, there is a viral incidence that oscillates from 0 to almost 100% on studies that includes a myriad of viral genome detect methods, such Blotting and PCR. Importance of HPV infection and epithelial carcinogenesis is related to capabilities of High risk HPV 16 and 18 to promote cell alterations, by tumor suppressor proteins inactivation, tumor suppressor genes blockage and insertions of HPV oncogenes. On present study, HPV detection and typing was performed on tumors derived from hypo pharynx of 24 patients diagnosed with cancer (CID-O: C12,0 to C13,9). All samples was submitted to PCR with generic primers MY09/11 and GP05/06, as specific primers to HPV 6, 11, 16, 18, 33, 35, 45 and 58. Results shows that on 9 of 24 samples, HPV were detected by generic primers (a rate of 37,5%) and HPV types 16, 18 and 45 were identified, with a sample presenting coinfection of HPV 16 and 18. / A hipofaringe, região inferior da faringe, também chamada de laringofaringe ou faringolaríngea, serve aos sistemas respiratório e digestivo, funcionando como passagem para o ar e os alimentos. É composta de tecido epitelial escamoso estratificado não-queratinizado, com grande quantidade de glândulas seromucosas. As estatísticas mostram que entre 85 e 90% dos cânceres que acometem a hipofaringe são carcinomas espino-celulares. A lesão inicial no seio piriforme apresenta-se macroscopicamente sob o aspecto de um nódulo ou úlcera, tendo como característica principal, a rápida disseminação pela submucosa. Atualmente, com a associação de cirurgias radicais e radioterapia pós-peratória aumentou-se o controle locorregional destes tumores, contudo, a sobrevida global não sofreu alterações em decorrência das metástases à distância, o que não representa uma falha no tratamento realizado e sim uma evolução natural devido à característica invasiva desse tipo de neoplasia. Os tumores malignos de hipofaringe não são freqüentes, representando entre 5 a 10% das neoplasias das vias aerodigestivas superiores e apenas 0,5 % de todos os cânceres. Porém, do conjunto das neoplasias malignas da região da cabeça e pescoço, tumores de hipofaringe apresentam o pior prognóstico. A avaliação das tendências epidemiológicas apresentadas pelo câncer de hipofaringe em Goiânia no período de 1998 a 2003, analisando os dados disponíveis pelo Registro de Câncer de Base Populacional da Associação de Combate ao Câncer em Goiás, mostrou uma sobrevida relativa dos pacientes do sexo masculino diagnosticados com câncer de hipofaringe foi de 38% após 60 meses de segmento, enquanto que para o feminino apresentou-se uma sobrevida máxima de 100%, com todas as pacientes curadas. Dentre os tratamentos realizados, a cirurgia apresentou a menor taxa de sobrevida (34%) ao passo que para a quimioterapia foi associada uma sobrevida de 54%. A sobrevida dos pacientes tabagistas (43%) se mostrou muito inferior à dos indivíduos que não eram tabagistas (60%). Em fim, ao longo de cinco anos de segmento deste estudo, a taxa de sobrevida relativa para portadores de tumores malignos da hipofaringe foi de aproximadamente 38%, estimada para cinco anos com uma censura de apenas 5%. A taxa de sobrevida relativa é diminuída uma vez que cerca de 45% dos casos, o diagnóstico é feito tardiamente. O presente estudo também avaliou as alterações citogenéticas nucleares de pacientes portadores de câncer na região da hipofaringe. Foram analisados 36 indivíduos do grupo de casos, constituído de pacientes diagnosticados com tumores de hipofaringe, e 36 indivíduos saudáveis do grupo controle. Para obtenção dos dados foram considerados hábitos de consumo como tabagismo e etilismo e principalmente o tempo de exposição. Foram contadas 5000 células por indivíduo e as freqüências de micronúcleo, binucleadas, broken eggs e demais aberrações nucleares, foram calculadas para ambos os grupos. A freqüência de micronúcleo mostrada entre o grupo controle e o de casos não apresentaram diferença estatística. Porém, foi observado, por parte do grupo de casos, um grande número de células com broken eggs e binucleadas. Tais resultados demonstraram diferença estatística (p = 0,03). A binucleação e a formação de dois núcleos em forma de broken egg sugere que agentes como o tabaco e o alcoolismo crônico podem estar relacionados com a indução e progressão de tumores em pessoas susceptíveis, devido à capacidade desses mutágenos afetarem o ciclo celular. Dentre os fatores que geram controvérsias, podemos destacar o achado freqüente de variados tipos de HPV em mucosa oral normal, numa incidência que varia de 0% a quase 100% em diversos estudos, com numerosos métodos de identificação, incluindo entre eles um método altamente sensível, a PCR. A importância da infecção pelo HPV na carcinogênese de células epiteliais é suportada pela capacidade dos HPVs de alto risco, principalmente os tipos 16 e 18, de imortalizar os queratinócitos orais, quando em análise in vitro. O processo de imortalização pode envolver a desativação de proteínas supressoras de tumores pré-formadas pelas oncoproteínas virais, o bloqueio da transcrição de genes supressores de tumores como resultado da inserção do oncogene do HPV, ou a estimulação da transcrição do oncogene celular pela inserção de seqüências ativadoras de transcrição derivadas do próprio genoma do HPV. No presente estudo, o grupo amostral foi constituído de 24 pacientes diagnosticados com carcinoma de hipofaringe. Os casos foram obtidos do Registro de Câncer de Base Populacional de Goiânia/GO da Associação de Combate ao Câncer em Goiás. Todos os pacientes considerados foram diagnosticados como carcinomas de hipofaringe (CID-O: C12.0 a C13.9). Todas as amostras foram submetidas a uma PCR com os primers genéricos MY09/11 e GP05/06 para detecção em amplo espectro do genoma de HPV. Posteriormente, utilizou-se a mesma abordagem, com os primers tipo-específico para HPVs 6, 11, 16, 18, 33, 35, 45 e 58. Em 9 das 24 amostras utilizadas, foi observada amplificação com os primers genéricos, identificando-se o genoma de HPV em 37,5% (6/24) dos casos. Em 67% (6/9) das amostras, o genoma viral foi detectado por MY09/11 e em 33% (3/9) pelos primers GP05/06. As amostras positivas foram então submetidas a uma segunda PCR para a genotipagem dos HPVs, tendo sido observados os tipos 16, 18 e 45. Os tipos virais mais associados ao câncer da hipofaringe, no presente estudo, foram os HPV 16 e 18, presente em 6 amostras e o HPV45, encontrado em 1 amostra. Em um paciente foi observada a co-infecção de tipos virais de HPVs 16 e 18. Contudo, mesmo diante de tantas pesquisas realizadas, há muito para ser explorado, apesar de uma hipótese possível para a carcinogênese ser a interação sinérgica de carcinógenos químicos, virais, oncogenes e genes supressores de tumores.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-01-16T19:26:27Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marina Conceição dos Santos Moreira - 2014.pdf: 1731265 bytes, checksum: 317f0d1f433cdc033c1a41e2868132a4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-01-16T19:26:39Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marina Conceição dos Santos Moreira - 2014.pdf: 1731265 bytes, checksum: 317f0d1f433cdc033c1a41e2868132a4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-16T19:26:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marina Conceição dos Santos Moreira - 2014.pdf: 1731265 bytes, checksum: 317f0d1f433cdc033c1a41e2868132a4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-03-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Changes in plasma sodium concentration have led to adjustment mechanisms in order to restore their physiological conditions. The behavioral adjustments consist in the regulation of water and sodium intake. Among the vegetative adjustments, we highlight changes in renal sympathetic activity, blood pressure, renal blood flow (RBF) and renal vascular conductance (RVC). Experimental evidence has demonstrated increase of blo od pressure of the adult offspring from mothers with high sodium diets during pregnancy. Although these studies had demonstrated the importance of prenatal phases in hypertension development, there has been no evidence of the effects of high sodium diets during postnatal phases in relation to hypertension. Thus, in the present study, we evaluated the effects of sodium overload during childhood on cardiovascular and behavioral parameters in adulthood. That way, 21 days after birth, we have offered to the experimental group, hypertonic solution (NaCl 0.3 M) and food ad libitum for 60 days. The control rats were maintained with tap water and food ad libitum. Afterwards, both groups were maintained with tap water and food during 15 days (recovery). Later, we per formed chronic cannulation of right femoral artery to record baseline mean arterial pressure (MAP) and heart rate (HR) in unanesthetized animals. In the experimental group, we observed increases in basal MAP (118.3 ± 2.7 mmHg) and HR (398.2 ± 7.5 bpm), compared with the control group (98.6 ± 2.6 mmHg; 365.4 ± 12.2 bpm). Baroreflex index was diminished in experimental group in relation to control group by phenylephrine infusions ( -1.24 ± 0.2 bpm·mmHg -1 vs. -1.83 ± 0.04 bpm·mmHg -1 , respectively) as by sodium nitroprusside infusions (0.85 ± 0.22 bpm·mmHg -1 vs. 2.12 ± 0.2 bpm·mmHg -1 , respectively). The baseline values of MAP, HR, RBF, RVC and renal sympathetic nerve activity (RSNA) in anesthetized animals were evaluated. MAP and HR of experimental group (124.4 ± 3.0 mmHg; 437.9 ± 10.5 bpm) were significantly higher than control group (102.4 ± 2.4 mmHg; 375.2 ± 15.4 bpm). The baseline values of RBF (control: 3.4 ± 0.4 ml·min -1 ; experimental: 3.9 ± 0.2 ml·min -1 ), RVC (control: 0.0288 ± 0.0044 ml·(min·mmHg) -1 ; experimental: 0.0336 ± 0.0012 ml·(min·mmHg) -1 ) and RSNA (control: 0.0300 ± 0.0095 V and 89.5 ± 3.67 spikes·s -1 ; experimental: 0.0351 ± 0.0109 V and 78.1 ± 4.89 spikes·s -1 ) were similar between the groups. Ex vivo cardiovascular function in adulthood was also evaluated. It has been observed that animals treated with sodium overload during the postnatal period showed reduction of vascular endothelium-independent relaxation and also an increase in intraventricular diastolic pressure during the cardiac reperfusion. Furthermore, after the recovery period, the animals were submitted to osmotic challenge. The cardiovascular adjustments induced by acute hypernatremia were evaluated. It was observed that in the control animals, the infusion of hypertonic saline evoked a transient increase in MAP (Δ 9.2 ± 2.2 mmHg ), transient bradycardia (Δ -18.9 ± 7.9 bpm) and sustained increases in RBF (Δ 37.7 ± 6.9 % of baseline ) and RVC (Δ 50.0 ± 4.4 % of baseline, 60 min after infusion). However, in the experimental rats, hypertonic saline infusion caused a transient increase in MAP, higher than observed in control animals (Δ 18. 7 ± 1.7 mmHg, after 10 min) and sustained bradycardia (Δ -25.0 ± 10.2 bpm, after 60 min). The increases in RBF (Δ 30.8 ± 11.0% of baseline, after 60 min) and RVC (Δ 27.9 ± 12.3 % of baseline, af ter 60 min) were lower than the observed in the control group. Later, we performed tests of water and sodium intake induced by furosemide (10 mg·kg -1 bw, sc). In test-induced drinking, the hypertonic 0.3 M sodium intake was reduced in experimental animals compared to the control group (7.8 ± 1.1 ml vs. 12.1 ± 0.6 ml, respectively). Alt ogether, the results of the present study show that changes in hidromineral homeostasis, in postuterine phases, affect the behavioral and cardiovascular adjustments induced by sodium depletion and hypernatremia. Furthermore, they show that a high -sodium diet during the postnatal period alters baroreflex sensitivity and BP, in adulthood, compromising the cardiac relaxation after ischemia and endothelium-independent vasorelaxation . / Variações na concentração plasmática de sódio desencadeiam ajustes comportamentais e vegetativos que visam restabelecer as condições fisiológicas. Dentre estes ajustes, destacamos alterações do apetite ao sódio, da atividade simpática renal, da pressão arterial (PA), do fluxo sanguíneo renal (FSR) e da condutância vascular renal (CVR). Diversos estudos sugerem que doenças desenvolvidas na fase adulta estão relacionadas a certas condições às quais os indivíduos foram expostos dur ante os estágios iniciais da vida. Evidências experimentais têm demonstrado maior PA na prole adulta de mães alimentadas com dieta rica em sódio durante a gestação e a lactação. Apesar de demonstrarem a importância das fases pré-natais no desenvolvimento de hipertensão arterial, não existem evidências no que diz respeito aos efeitos de alterações do equilíbrio hidroeletrolítico durante as fases pós-natais em relação à hipertensão arterial. Assim, o presente trabalho avaliou os efeitos do aumento do consumo de sódio durante o período pós-natal sobre parâmetros cardiovasculares e comportamentais na fase adulta. Ratos Wistar com 21 dias de vida foram mantidos com solução salina hipertônica (NaCl 0,3 M) e ração ad libitum durante 60 dias (grupo experimental). Os animais do grupo controle foram mantidos com água e ração ad libitum. Após estes 60 dias, os animais de ambos os grupos foram mantidos com água e ração por um período de 15 dias (período de recuperação). Posteriormente, foi realizada canulação crônica da artéria e da veia femorais direitas para registro de pressão arterial média basal (PAM) e frequência cardíaca (FC) nos animais não anestesiados. No grupo experimental, observou-se aumentos na PAM (118,3 ± 2,7 mmHg) e na FC (398,2 ± 7,5 bpm) basais, quando comparado com o grupo controle (98,6 ± 2,6 mmHg; 365,4 ± 12,2 bpm). Além do mais, observamos uma diminuição no índice de barorreflexo nos animais experimentais quando comparados com o grupo controle, tanto para as infusões de fenilefrina (-1,24 ± 0,2 bpm·mmHg -1 vs. -1,83 ± 0,04 bpm·mmHg -1 , respectivamente), quanto para as infusões de nitroprussiato de sódio (0,85 ± 0,22 bpm·mmHg -1 vs. 2,12 ± 0,2 bpm·mmHg -1 , respectivamente). Os valores basais de PAM, FC, FSR, CVR e atividade nervosa simpática renal (ASR) nos animais anestesiados foram avaliados. A PAM e a FC do grupo experimental (124,4 ± 3,0 mmHg; 437,9 ± 10,5 bpm) foram significativamente maiores que do grupo controle (102,4 ± 2,4 mmHg; 375,2 ± 15,4 bpm). Os valores basais de FSR (controle: 3,4 ± 0,4 ml·min -1 ; experimental: 3,9 ± 0,2 ml·min -1 ), de CVR (controle: 28,8 ± 4,4 μl·(min·mmHg) -1 ; experimental: 33,6 ± 1,2 μl·(min·mmHg) -1 ) e ASR (controle: 0,0300 ± 0,0095 V e 89,5 ± 3,67 spikes·s -1 ; experimental: 0,0351 ± 0,0109 V e 78,1 ± 4,89 spikes·s -1 ) foram semelhantes entre os grupos . A função cardiovascular ex vivo na fase adulta também foi avaliada. Observou-se que os animais submetidos à sobrecarga de sódio durante o período pós-natal apresentaram comprometimento do relaxamento vascular independente de endotélio e ainda, aumento da pressão intraventricular diastólica durante o período de reperfusão cardíaca. Além disso, após o período de recuperação, os ajustes cardiovasculares induzidos por hipernatremia aguda foram avaliados. Observou -se que, nos animais controle, a infusão de salina hipertônica provocou aumento transitório de PAM (Δ9,2 ± 2,2 mmHg), bradicardia transitória (Δ -18,9 ± 7,9 bpm), além de aumentos sustentados do fluxo sanguíneo renal (Δ 37,7 ± 6,9% em relação ao basal, após 60 min) e da condutância vascular renal (Δ 50,0 ± 4,4% em relação ao basal; após 60 min). Já nos animais do grupo experimental, a infusão de salina hipertônica provocou aumento transitório de PAM, maior que o observado nos animais controle ( Δ 18,7 ± 1,7 mmHg, aos 10 min), e bradicardia sustentada (Δ -25,0 ± 10,2 bpm, após 60 min), além de aumentos de FSR (Δ 30,8 ± 11,0% em relação ao basal, após 60 min) e CVR (Δ 27,9 ± 12,3% em relação ao basal, após 60 min) menores que os observados no grupo controle. Após o período de recuperação, foram realizados testes de ingestão de água e sódio induzida por furosemida (10 mg · kg -1 peso corporal, s.c.). No teste de ingestão induzida, a ingestão de salina hipertônica 0,3 M se mostrou reduzida nos animais experimentais, quando comparados ao grupo controle (7,8 ± 1,1 ml vs. 12,1 ± 0,6 ml, respectivamente). Em conjunto, os resultados obtidos no presente trabalho demonstram que alterações na homeostase hidromineral na vida pós-uterina alteram os ajustes comportamentais e cardiovasculares induzidos por depleção de sódio e por infusão de salina hipertônica (NaCl 3 M). Além disso, demonstram que uma dieta rica em sódio durante o período pós natal altera a sensibilidade barorreflexa e a PA na fase adulta, além de comprometer o relaxamento cardíaco após isquemia e o vasorelaxamento independente de endotélio.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-06-05T10:40:20Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Débora Cristina da Silva Lima - 2012.pdf: 2824147 bytes, checksum: 65736b430e09552d0474dcec6ed8b516 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-06-05T10:56:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Débora Cristina da Silva Lima - 2012.pdf: 2824147 bytes, checksum: 65736b430e09552d0474dcec6ed8b516 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-05T10:56:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Débora Cristina da Silva Lima - 2012.pdf: 2824147 bytes, checksum: 65736b430e09552d0474dcec6ed8b516 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2012-11-30 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Lafoensia pacari A. St. Hil. (Lythraceae), popularly known in Brazil as “pacari”, is a species native of Cerrado. In folk medicine, the leaves and stem bark are used to treat cancer and as an anti-inflammatory and cicatrizant agent. Due to the wide use of this plant as a therapeutic resource, the present study evaluated the genotoxic, cytotoxic, antigenotoxic, and anticytotoxic activities of the ethanolic extract from L. pacari stem bark and leaves using the Ames test and the mouse bone marrow micronucleus test. Our results demonstrated that the ethanolic extract from L. pacari leaves, presented no mutagenic activity in bacteria, but presented a mild genotoxicity in the highest concentration at 24 h in mice bone marrow cells. Exhibited moderate cytotoxic effect on bacteria and a mild cytotoxic action in the highest concentration by micronucleus test. The extract showed antimutagenic activity by Ames test and in the micronucleus test demonstrated antigenotoxic action in all concentrations at 24 h, and in the lowest concentration at 48 h. Showed anticytotoxic effect in all concentrations and times tested. In the evaluation of the genotoxic, cytotoxic, antigenotoxic and anticytotoxic activities of the ethanolic extract from L. pacari stem bark, the results demonstrated that the extract exhibited no mutagenic activity in bacteria, however showed a mild genotoxicity in the highest concentration in mice. Exhibited moderate cytotoxic effect in bacteria and a mild cytotoxicity at 24 h by micronucleus test. Showed strong antimutagenic activity by Ames test, as well as antigenotoxic and anticytotoxic activities in the mouse bone marrow micronucleus test, demonstrating to be a strong protective agent against DNA damage. / Lafoensia pacari A. St-Hil, (Lythraceae) popularmente conhecida no Brasil como pacarí, é uma espécie nativa do Cerrado. Na medicina popular, suas folhas e casca do caule são utilizadas para tratar câncer, como um agente cicatrizante e antiinflamatório. Devido à grande utilização dessa planta como recurso terapêutico, o presente trabalho avaliou as atividades genotóxica, citotóxica, antigenotóxica e anticitotóxica do extrato etanólico das folhas e da casca do caule de L. pacari, utilizando o teste de mutagenicidade de Ames e o teste do micronúcleo em medula óssea de camundongos. Nossos resultados demonstraram que o extrato etanólico das folhas de L. pacarí, não apresentou atividade mutagênica em bactérias, mas apresentou uma leve genotoxicidade na concentração mais elevada em células de medula óssea de camundongos no tempo de 24 h. Exibiu efeito citotóxico moderado em bactérias e uma leve ação citotóxica, na concentração mais elevada no teste de micronúcleo. O extrato apresentou atividade antimutagênica pelo teste de Ames e no teste do micronúcleo demonstrou ação antigenotóxica em todas as concentrações no tempo de 24 h e na concentração mais baixa no tempo de 48 h. Apresentou efeito anticitotóxico em todas as concentrações e tempos testados. Na avaliação das atividades genotóxica, citotóxica, antigenotóxica e anticitotóxica do extrato etanólico da casca do caule de L. pacarí os resultados provaram que este extrato não exibiu atividade mutagênica em bactérias, no entanto apresentou uma genotoxicidade fraca na maior concentração em camundongos. Exibiu um efeito citotóxico moderado em bactérias e uma leve citotoxicidade, somente no tempo de 24 h pelo teste de micronúcleo. Apresentou forte atividade antimutagênica pelo teste Ames, bem como atividade antigenotóxica e anticitotoxica no teste de micronúcleo em medula óssea de camundongos, demonstrando ser um forte agente protetor contra danos no DNA.

Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-24T13:34:56Z No. of bitstreams: 2 Tese - Joelma Abadia Marciano de Paula - 2011.pdf: 4630470 bytes, checksum: fc7db5b305643bc19e85c94dab8064ff (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-03-24T15:02:48Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Joelma Abadia Marciano de Paula - 2011.pdf: 4630470 bytes, checksum: fc7db5b305643bc19e85c94dab8064ff (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-24T15:02:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Joelma Abadia Marciano de Paula - 2011.pdf: 4630470 bytes, checksum: fc7db5b305643bc19e85c94dab8064ff (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2011-03-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The purpose of this work is to carry out the phytochemical study and evaluate biological activities of the essential oil and extracts of the Pimenta pseudocaryophyllus (Gomes) L.R. Landrum (Myrtaceae) leaves. Chapter 1 provides a review of the main botanical aspects of the genus Pimenta, its chemical composition and pharmacological potential. Chapter 2 describes the occurrence of infraspecific variability in P. pseudocaryophyllus. For this the essential oils from 12 specimens of P. pseudocaryophyllus that occur naturally in three different locations of the Brazilian Cerrado underwent a qualitative and quantitative analysis by gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS). The multivariate statistical analysis identified three chemotypes of P. pseudocaryophyllus, characterized by the predominance of citral, (E)-caryophyllene and (E)-methyl isoeugenol constituents. Chapter 3 presents the phytochemical assessment of the hexane, dichloromethane, ethyl acetate and aqueous fractions obtained from the crude ethanol extract of P. pseudocaryophyllus leaves. Chromatographic and spectrophotometric (1H and 13C) methods enabled the isolation and identification of lupeol, α-and 􀈕-amyrin, oleanolic, ursolic and betulinic acids, quercetin, quercitrin, isoquercitrin, afzelin, avicularin, guaijaverin, catechin, ellagic acid and gallic acid. Chapter 4 assesses the antimicrobial activity of the ethanol extracts, fractions (hexane, dichloromethane, ethyl acetate and aqueous), essential oils and isolated compounds of citral (CQ) and (E)-methyl isoeugenol (MQ) chemotypes of P. pseudocaryophyllus. The broth microdilution test was applied to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) against strains of Gram(+) and Gram(-) bacteria, and of Candida and Cryptococcus spp fungi. The CQ and MQ dichloromethane fraction, CQ ethyl acetate fraction, and CQ essential oil were the most active (MIC = 62.5 to 500 mg / mL) against Gram(+). The oleanolic acid proved to also be responsible for this action. The CQ and MQ extracts of P. pseudocaryophyllus were active (MIC = 7.8 to 500 mg / mL) against most strains of Candida spp and Cryptococcus spp, where gallic acid, ellagic acid and quercitrin contributed to this action. The data obtained indicate the antimicrobial potential of CQ and MQ P. pseudocaryophyllus against some infectious diseases. Chapter 5 describes the antinociceptive activity, in mice, of CQ and MQ ethanol extracts, CQ fractions and CQ essential oil, and the anti-inflammatory activity of CQ crude ethanol extract of P. pseudocaryophyllus. The abdominal writhing test induced by intraperitoneal administration (ip) of acetic acid (1.2% v / v) and the ear edema test induced by croton oil (2.5% V/V) were performed. The CQ crude ethanol extract (2000, 1000 and 500 mg/kg, po) showed a dose-dependent antinociceptive effect. Among the fractions, only the aqueous fraction was not active. The CQ essential oil (60, 200 and 600 mg / kg, po) presented significant antinociceptive activity, probably because of its high citral concentration. Pretreatment with CQ crude ethanol extract (2000, 1000 and 500 mg / kg) reduced edema by 14.3 ± 0.4 mg (control) to 10.9 ± 0.5, 11.3 ± 0, 4, 10.5 ± 0.5 mg, respectively. The analgesic effect may be related to an anti-inflammatory action observed in the ear edema test. / O presente trabalho teve como objetivos realizar o estudo fitoquímico e avaliar atividades biológicas do óleo essencial e de extratos da folha de Pimenta pseudocaryophyllus (Gomes) L. R. Landrum (Myrtaceae). O Capítulo 1 traz uma revisão bibliográfica do gênero Pimenta onde são abordados os principais aspectos botânicos, a composição química e o potencial farmacológico. O Capítulo 2 descreve a ocorrência de variabilidade infraespecífica em P. pseudocaryophyllus. Para tanto, foi realizada a análise qualitativa e quantitativa, por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG/EM), do óleo essencial das folhas de 12 espécimes de P. pseudocaryophyllus que ocorrem naturalmente em três diferentes localidades do Cerrado brasileiro. A análise estatística multivariada dos dados identificou três quimiotipos de P. pseudocaryophyllus, caracterizados pela predominância dos constituintes citral, (E)-cariofileno e (E)-metilisoeugenol. O Capítulo 3 apresenta os resultados da avaliação fitoquímica das frações hexano, diclorometano, acetato de etila e aquosa obtidas a partir do extrato etanólico bruto das folhas de P. pseudocaryophyllus. A partir da utilização de técnicas cromatográficas e espectrofotométricas (RMN 1H e 13C) foi possível isolar e identificar os triterpenos pentacíclicos lupeol, α- e 􀈕-amirina, os ácidos oleanólico, ursólico e betulínico, os flavonóides quercetina, quercitrina, isoquercitrina, afzelina, avicularina, guaijaverina e catequina, e os ácidos gálico e elágico. O Capítulo 4 expõe a avaliação da atividade antimicrobiana dos extratos etanólicos brutos, frações (hexano, diclorometano, acetato de etila e aquosa), óleos essenciais e substâncias semipurificadas de P. pseudocaryophyllus quimiotipos citral (QC) e (E)- metilisoeugenol (QM). Foi utilizado o teste da microdiluição em caldo, que permitiu determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) frente a cepas de bactérias Gram(+), Gram(-) e fungos Candida spp. e Cryptococcus spp. As frações diclorometano (QC e QM), acetato de etila (QC) e o óleo essencial do quimiotipo citral foram os mais ativos (CIM = 62,5-500 μg/mL) frente as bactérias Gram(+), o ácido oleanólico mostrou ser um dos responsáveis por essa ação. O QC e QM foram ativos (CIM = 7,8 – 500 μg/mL) frente à maioria das cepas fúngicas, sendo que ácido gálico, ácido elágico e quercitrina contribuíram para essa ação. Os dados obtidos indicaram que P. pseudocaryophyllus QC e QM apresentam potencial antimicrobiano. O Capítulo 5 descreve a avaliação da atividade antinociceptiva, em camundongos, dos extratos etanólicos brutos (QC e QM), frações e óleo essencial (QC) de P. pseudocaryophyllus e a atividade anti-inflamatória do extrato etanólico bruto (QC) de P. pseudocaryophyllus. Foram utilizados os testes das contorções abdominais induzidas pela administração intra-peritonial (i.p.) de ácido acético (1,2%, v/v) e do edema de orelha induzido pelo óleo de cróton (2,5%, V/V) em camundongos. O extrato etanólico bruto QC (2000, 1000 e 500 mg/kg, v.o.) demonstrou efeito antinociceptivo dose-dependente. Dentre as frações, apenas a aquosa não foi ativa. O óleo essencial QC (60, 200 e 600 mg/kg, v.o.) demonstrou significativa atividade antinociceptiva, provavelmente por causa do seu elevado teor em citral. O pré-tratamento com o extrato etanólico bruto QC nas dose 2000, 1000 e 500 mg/kg reduziu o edema de 14,3±0,4 mg (controle) para 10,9±0,5; 11,3±0,4; 10,5±0,5 mg, respectivamente. A ação analgésica pode estar relacionada a uma ação anti-inflamatória, observada no teste de edema de orelha.

As células mesangiais (CM) são essenciais para a homeostasia glomerular. Além disso, têm papel crucial no desenvolvimento de glomeroesclerose em nefropatias crônicas. Demonstramos que as isoformas do repressor de transcrição TBX3, TBX3.1 e TBX3 + 2<font face=\"Symbol\">a, foram suprarreguladas precocemente por concentrações baixas de TGF-<font face=\"Symbol\">b1 em CM humanas. A superexpressão das isoformas não alterou a proliferação ou produção de MEC em CM. Entretanto, diminuiu a apoptose induzida pela privação de SBF. Ademais, o silenciamento do gene TBX3 sensibilizou as CM ao estímulo pró-apoptótico causado pela remoção do SBF. Por fim, observamos aumento da expressão protéica de TBX3 nos glomérulos e túbulos em um modelo de nefropatia, guardando correlação temporal com o aumento dos níveis de TGF-<font face=\"Symbol\">b1, colágeno IV e fibronectina. Nossos resultados indicam que o gene TBX3 atua como um fator antiapoptótico nas CM e pode estar envolvido no mecanismo pelo qual TGF-<font face=\"Symbol\">b1 induz glomeruloesclerose e fibrose tubular durante a progressão das nefropatias. / Mesangial cells (MC) are essential for glomerular homeostasis. In addition, MC play a significant role in the development of glomerulosclerosis of chronic nephropathies. We demonstrated that the transcription repressor TBX3 isoforms, TBX3.1 and TBX3 + 2<font face=\"Symbol\">a, were upregulated by low concentrations of TGF-<font face=\"Symbol\">b1. Selective overexpression of the isoforms did not affect MC proliferation or extracellular matrix production. However, TBX3 forced expression decreased apoptosis induced by FBS deprivation. Moreover, TBX3 gene silencing sensitized MC to the proapoptotic stimulus caused by SBF withdrawal. Finally, we observed an increase in TBX3 protein expression in glomerular and tubular regions in a model of chronic nephropathy (5/6 nephrectomy), temporally related to increased expression of TGF-<font face=\"Symbol\">b1, collagen IV and fibronectin. Our results indicate that TBX3 acts as an antiapoptotic factor in MC in vitro and may be involved in the mechanism by which TGF-<font face=\"Symbol\">b1 induces glomerulosclerosis and tubular fibrosis during the progression of nephropathies.

As pesquisas com os peptídeos hormonais de plantas se iniciaram na década de noventa com a descoberta da sistemina. Hoje existem diversos peptídeos identificados, e alguns deles já em avançado estágio de caracterização. O envolvimento desta classe de moléculas em diversas funções básicas e específicas da biologia dos vegetais despertou o interesse da comunidade científica. Dentre os peptídeos em fase de caracterização, destacam-se os representantes da família RALF. Os peptídeos RALF estão presentes em basicamente todo o reino vegetal, desde o musgo Physcomitrela pattens até as plantas superiores mono e dicotiledôneas. A conservação destes peptídeos no reino vegetal sugere um importante papel na fisiologia vegetal, e evidências recentes indicam a participação de RALF em processos básicos do desenvolvimento das plantas. O mecanismo pelo qual o peptídeo RALF atua e é percebido pela célula constitui etapa fundamental para sua caracterização funcional. Para tanto, no presente trabalho foram empregadas técnicas para identificação de proteínas de interação com RALF. Os resultados indicam que este peptídeo possivelmente tem sua atividade regulada pelo íon cálcio, através da interação com uma proteína de ligação a cálcio que, assim como o RALF, é secretada para o apoplasto. Estes dados colocam RALF em um cenário até o momento inédito no mecanismo de ação hormonal em plantas. A exemplo de animais e leveduras, observou-se também que o processamento de RALF ocorre em um sítio dibásico. A mutação de um dos aminoácidos deste sítio foi suficiente para impedir processamento do peptídeo in vivo e in vitro. A utilização de extratos protéicos da fração microsomal de Arabidopsis no ensaio in vitro indica que esta atividade é desempenhada por uma protease presente no sistema de endomembranas celular, provavelmente da classe das convertases. Os resultados publicados marcam o início dos estudos de caracterização do processamento de prohormônios em plantas. / The peptide hormone research has begun during the 90s decade with the systemin discovery. Nowadays several peptides have already been identified, and some of them are further characterized. The involvement of these molecules with a range of basic and specific biological functions has raised the scientific communitys interest. Among the peptides being studied, the RALF family is particularly intriguing. The RALF peptides can be found throughout the plant kingdom, from the moss Physcomitrella patens to the mono and dicot plant groups. The conserved occurrence of these peptides along the plant kingdom suggests an important role in the plant physiology field. Recent evidences indicate that RALF plays a role in basic mechanisms of plant development. The RALF mechanism of action and its perception by the cell are fundamental information in order to characterize this peptide function. In the present work experiments to identify RALF interacting proteins were employed. The results indicate that RALF peptides activity is possibly regulated by the calcium ion. This regulation is mediated by the interaction with a calcium binding protein. This calcium binding protein was found to be secreted to the apoplast. Presented data suggests that RALF is regulated by a mechanism never described before in the plant hormone research field. As previously described in animals and yeast the RALF propeptide processing takes place in a dibasic site. A single amino acid site specific mutation disrupted peptide processing in vivo and in vitro. The correct processing is mediated by proteases of the Arabidopsis microsomal fraction. This processing seems to occur at the endomembrane system, possibly catalized by a convertase class enzyme. The published results points the beginning of the peptide processing studies in plants.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-05-24T17:51:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337736.pdf: 2749407 bytes, checksum: 83fc4df7953d4ab58a50f4b11d22723d (MD5) Previous issue date: 2015 / Os efeitos neurotóxicos do metilmercúrio (MeHg) são bem conhecidos, mas informações mais detalhadas sobre a sua ação durante o desenvolvimento embrionário ainda são escassas. Este estudo teve como objetivo caracterizar os efeitos do MeHg sobre a organização ultraestrutural e sobre os mecanismos celulares e moleculares envolvidos no desenvolvimento das camadas da medula espinhal, utilizando embriões de Gallus domesticus como modelo. No terceiro dia embrionário (E3), os embriões foram tratados in ovo com uma única dose de cloreto de metilmercúrio (ClMeHg) (0,1 µg diluído em 50 µL de salina) e avaliados no décimo dia embrionário (E10). As análises morfológicas e morfométricas da medula espinhal foram realizadas a partir de secções histológicas coradas com HE. A localização e quantificação dos marcadores relacionados ao ciclo celular e dano ao DNA foram obtidos a partir de técnicas de imunohistoquímica e citometria de fluxo. Adicionalmente, foram realizados o ensaio de TUNEL, para a identificação de células em apoptose e análise por microscopia eletrônica de transmissão, para investigar possíveis danos ultraestruturais. Nossos resultados mostraram significativa deposição de mercúrio nas três camadas da medula espinhal, as quais apresentaram alteração na expressão de marcadores relacionados ao controle do ciclo celular, proliferação e morte celular. O aumentado número de células ?H2A.X-positivas observado na camada de manto indica dano ao DNA, o qual pode ser a causa do aumento na expressão de p21 e consequente retenção do ciclo celular na fase G1. A exposição ao MeHg também causou alterações nos componentes subcelulares das células da medula espinhal, principalmente nas mitocôndrias que apresentaram edemas e rupturas de membranas, além do aparecimento de formas mitocondriais incomuns cup-like (em cálice) e donut-like (em anel). Esses danos podem estar associados com o aumento da morte celular na camada do manto, a qual parece ser mais afetada após a exposição ao MeHg. A redução da proliferação associada a aumento da morte celular, mostraram que uma única dose de MeHg foi capaz de perturbar mecanismos celulares essenciais causando redução na espessura das camadas da medula espinhal. Do ponto de vista toxicológico, estes resultados são importantes porque mostram que a exposição ao MeHg, in ovo, altera a medula espinhal em desenvolvimento e pode levar a possíveis comprometimentos neuromotores na vida pós-natal.<br> / Abstract : The neurotoxic effects of methylmercury (MeHg) are well known, but more detailed information on its action during embryonic development are still scarce. This study aimed to characterize the effects of MeHg on the ultrastructural organization and on the molecular and cellular mechanisms involved in the development of spinal cord layers, using Gallus domesticus embryos as a model. At third embryonic day (E3), the embryos were treated in ovo with a single dose of methylmercury chloride (ClMeHg) (0.1 µg diluted in 50 µL saline) and evaluated at the tenth embryonic day (E10). The morphological and morphometric analyses of the spinal cord were taken from histological sections stained with HE. The localization and quantification of the cell cycle related and DNA damage markers were performed by immunohistochemistry and flow cytometry techniques. Additionally, TUNEL assay was used to apoptosis identification and transmission electron microscopy was conducted to investigate ultrastructural damage. Our results showed significant mercury deposition in the three spinal cord layers, which had alterations in expression of markers related to cell cycle control, proliferation and cell death. The increased number of ?H2A.X-positive cells observed in the mantle layer indicates DNA damage, which may be the cause of the p21 expression increased and consequent cell cycle arrest in G1 phase. The MeHg exposure also caused changes on subcellular components of spinal cord cells, mainly in mitochondria that showed swelling and membrane disruptions, beyond the appearance of unusual cup-like and donut-like shapes. These damage may be associated with increased cell death in the mantle layer, which appears to be the most affected layer after the MeHg exposure. The decreased cell proliferation associated to the increased cell death showed that a single dose of MeHg was able to disrupt essential cellular mechanisms, causing reduction in thickness of the spinal cord layers. From a toxicological point of view, these results are important because showed that in ovo MeHg exposure changes the developing spinal cord and can leads to potential neuromotor impairments in the postnatal life.

A caquexia associada ao câncer, cujo mais notável sintoma é a rápida e severa perda de peso, afeta cerca de metade dos pacientes com câncer e está presente na grande maioria (mais de dois terços) dos pacientes com câncer em estágio avançado. Estudos recentes têm mostrado que mediadores inflamatórios desempenham um papel importante no desenvolvimento e manutenção da caquexia associada ao câncer, sendo esta hoje em dia definida como uma doença inflamatória crônica e sistêmica. O tecido adiposo branco é um dos primeiros compartimentos do organismo afetados, sofrendo uma elevada taxa de lipólise. Atualmente este tecido é considerado um órgão endócrino, secretando ativamente hormônios, proteínas e citocinas, capazes de regular diretamente o metabolismo. Um ponto comum na expressão das citocinas pró-inflamatórias pelo tecido adiposo e a lipólise é a ativação do fator de transcrição nuclear kappa B (NF-<font face=\"symbol\">kB). A alta taxa de secreção de citocinas pró-inflamatórias e PGE2 contribuem para a inflamação sistêmica característica da caquexia. O objetivo deste estudo foi examinar a via de sinalização clássica do NF-<font face=\"symbol\">kB: Expressão gênica (Ikkalpha, IKKbeta, Ikkgama, IkBalpha, IkBBeta, p65/RelA e p50) e avaliar a ligação das proteínas p65/RelA e p50 à região promotora alvo do NF-kB (5\'-GGGACTTTCC-3 \'). Além disso, estudamos o papel do TNF-alfa e da PGE2 na ativação da via do NF-<font face=\"symbol\">kB. O estudo envolveu 35 pacientes: 10 no grupo controle (C, pacientes em tratamento de hérnia) e 25 no grupo tumor (câncer gástrico), subdivididos em peso estável e caquéticos. O grupo caquéticos (TC) consistiu de pacientes com perda de peso não intencional declarada > 5% nos últimos 12 meses, fadiga e aumento da concentração sérica do marcador inflamatório proteína C-reativa (Evans et al, 2008). O grupo de peso estável (T ) consistiu de pacientes em tratamento de câncer, sem perda de peso não intencional declarada > 5% nos últimos 12 meses. Parâmetros bioquímicos foram analisados e correlacionados com os dados disponíveis. Os resultados de expressão gênica mostraram p65/RelA (p = 0,0101), IkbAlpha (p = 0,0287), IkkAlpha (p = 0,0306), e IKKbeta (p = 0,0141), significativamente mais expressas no grupo Tumor e p65/RelA (p = 0,0101), também no grupo caquético. TNF-alfa induziu maior ativação do NF-<font face=\"symbol\">kB em comparação com PGE2 (p <0,0001). Propomos que a expressão das proteínas da via clássica de sinalização do NF-<font face=\"symbol\">kB no tecido adiposo branco serviria como um marcador precoce da inflamação sistêmica característica da caquexia associada ao câncer. / Cancer Cachexia, whose most notable symptom is severe and rapid weight loss, affects about half of all cancer patients and is present in the vast majority (more than two thirds) of patients with advanced cancer. Recent studies have shown that inflammatory mediators play an important role in the development of cachexia, nowadays envisaged as a chronic inflammatory disease. The white adipose tissue is one of the first compartments of the organism affected in cancer cachexia, and suffers a high rate of lypolisys. This tissue is an endocrine organ, secreting several hormones, proteins and cytokines, capable of directly regulating intermediate metabolism. Adipose tissue up regulation of pro-inflammatory cytokines and PGE2 secretion contribute to systemic inflammation. A common pathway in the regulation of the expression of pro-inflammatory cytokines and lypolisys in the white adipose tissue is the activation of the nuclear transcription factor kappa B (NF-<font face=\"symbol\">kB). The pourpose of the study was to examine the NF-<font face=\"symbol\">kB classical signalling pathway proteins gene expression (Real time PCR - Ikkalpha, IkkBeta, Ikkgama, IkBalpha, IkBBeta, p65/RelA and p50) and the evaluation of the binding of p65/RelA and p50 to the target promoter region of NF-<font face=\"symbol\">kB (5-GGGACTTTCC-3). Additionally, we examined the TNF-Alpha and PGE2 role in activating the NF-<font face=\"symbol\">kB pathway by gene reporter assay. The study involved 35 patients: 10 in the control group (C, hernia patients) and 25 in the Tumour group, further divided into cachectic and weight stable. The Cachectic group (TC) consisted of patients with a self-declared unintentional weight loss of >5% in the previous 12 months, fatigue and increased inflammatory marker C-Reactive protein (Evans et al, 2008); the weight stable group (T) consisted of patients in treatment for cancer without declared weight loss >5% in the past 12 months. Biochemical parameters were analysed and correlated with the available data. Gene expression results showed p65/RelA (p = 0.0101), IkbAlpha (p = 0.0287), IkkAlpha (p = 0.0306) and IkkBeta (p = 0.0141) to be significantly more expressed in the Tumour group and p65/RelA (p = 0.0101), also in the cachectic group. TNF-Alpha elicited higher NF-<font face=\"symbol\">kB activation as compared with PGE2 (p <0.0001). We propose that NF-<font face=\"symbol\">kB pathway related protein expression in White adipose tissue may serve as an early marker of cancer-related systemic inflammation.