O transplante de ilhotas microencapsuladas constitui uma alternativa terapêutica interessante para o Diabetes Mellitus tipo 1, permitindo um melhor controle glicêmico e eliminando a necessidade de imunossupressão. Entretanto, a manutenção a longo prazo da viabilidade das células-&#946; ainda é um desafio. No isolamento, a perda da matriz extracelular e as condições hipóxicas subsequentes afetam decisivamente a sobrevivência e funcionalidade das ilhotas. Objetivo Para diminuir o estresse sobre o enxerto, levando a um sucesso prolongado do transplante, propôs-se a adição de perfluorocarbono (PFC) ou laminina (LN), moléculas associadas respectivamente à oxigenação e interações célula-célula, ao biomaterial baseado em alginato, Biodritina, adequado ao encapsulamento celular. Metodologia Para testar a estabilidade das formulações PFC-Biodritina e LN-Biodritina, microcápsulas foram submetidas a diferentes estresses (rotacional, osmótico, temperatura e cultura) por 7 e 30 dias. A pureza do biomaterial foi avaliada pela coincubação com macrófagos murinos RAW264.7, por 3, 9 e 24h, quando a ativação dos macrófagos foi observada pela expressão gênica de IL- 1&#946; e TNF&#945;. Microcápsulas implantadas i.p. em camundongos foram recuperadas após 7 ou 30 dias, para análises de biocompatibilidade. A expressão de níveis de mRNA (bax, bad, bcl-2, bcl-XL, xiap, caspase 3, mcp1/ccl2, hsp70, ldh, insulina 1 e 2), proteínas (Bax, Bcl-XL e Xiap) e a atividade de Caspase3 foram avaliadas em ilhotas microencapsuladas com PFC- e LN-Biodritina, após cultura de 48h em condições de normóxia e hipóxia (<2% O2). Camundongos diabéticos foram transplantados com ilhotas encapsuladas nas diferentes formulações e os animais foram monitorados pelas variações de massa corporal, glicêmicas e pela funcionalidade do enxerto (TOTGs). As ilhotas foram recuperadas de animais normo ou hiperglicêmicos e uma análise de biocompatibilidade das cápsulas foi realizada, assim como a avaliação funcional das células-&#946;. Após o explante, a glicemia dos animais normoglicêmicos foi monitorada para se atestar a eficiência das ilhotas transplantadas. Resultados Microcápsulas de PFC- e LN-Biodritina são tão estáveis e biocompatíveis quanto as de Biodritina. Para ilhotas encapsuladas em ambos os materiais, em normóxia ou hipóxia, observou-se uma modulação gênica que sugere proteção contra apoptose. Adicionalmente, encontrou-se uma diminuição na expressão de genes indicadores de estresse (mcp1, hsp70). Uma diminuição nos níveis de mRNA de ldh foi vista para PFC-Biodritina, mas o oposto foi encontrado para LN-Biodritina. As diferenças encontradas na expressão proteica sugerem o mesmo padrão anti-apoptótico. Caspase3 não foi modulada por nenhum biomaterial. Nos experimentos de transplante, apenas LN-Biodritina levou reversão prolongada do diabetes, com 60% dos animais normoglicêmicos, 198 dias pós-cirurgia, comparado a 9% do grupo Biodritina. O TOTG demonstrou que camundongos transplantados com ilhotas encapsuladas secretaram mais insulina do que controles, 60 (LN-Biodritina) ou 100 (PFC- e LN-Biodritina) dias pós-cirurgia. O explante restabeleceu a hiperglicemia nos camundongos. Microcápsulas recuperadas de animais hiperglicêmicos apresentavam uma extensa adesão celular. Testes de secreção de insulina in vitro demonstraram que somente ilhotas do grupo normoglicêmico responderam às variações da concentração de glicose. Conclusão A adição de moléculas bioativas à Biodritina é capaz de diminuir o estresse em ilhotas isoladas e tem o potencial de melhorar a terapia pelo transplante de ilhotas. / Transplantation of microencapsulated islets represents an attractive therapeutical approach to treat type 1 Diabetes Mellitus, accounting for an improved glycemic control and the abolishment of immunosuppressive therapies. However, maintenance of long-term &#946;-cell viability remains a major problem. During islet isolation, the loss of extracellular matrix interactions and the hypoxic conditions thereafter dramatically affect &#946;-cell survival and function. Objective To lessen the burden of islet stress and achieve a better outcome in islet transplantation we tested the addition of perfluorocarbon (PFC) or laminin (LN), molecules associated respectively with oxygenation and cell-cell interaction, to Biodritin, an alginate-based material suitable for cell microencapsulation. Methodology To test the stability of PFC-Biodritin and LN-Biodritin composites, microcapsules were subjected to different stresses (rotational, osmotic, temperature and culture) for 7 and 30 days. To assess biomaterial purity microcapsules were co-incubated with RAW264.7 murine macrophage cell line for 3, 9 and 24h and macrophage activation was detected through mRNA levels of IL-1&#946; and TNF&#945;. Microcapsules were implanted i.p. in mice and retrieved after 7 or 30 days, for biocompatibility analyses. Gene expression at mRNA (bax, bad, bcl-2, bcl-XL, xiap, caspase 3, mcp1/ccl2, hsp70, ldh, insulin 1 and 2) and protein (Bax, Bcl-XL and Xiap) levels, together with Caspase3 activity, were evaluated in islets microencapsulated in PFC- or LN-Biodritin, upon culturing for 48h in normoxic or hypoxic (<2% O2) conditions. Diabetic mice were transplanted with PFC- or LN-Biodritin microencapsulated islets, followed by assessments of body weight, glycemia and graft function by oral glucose tolerance tests (OGTTs). Microencapsulated islets were retrieved from normoglycemic or hyperglycemic mice and biocompatibility analyses of the beads together with a functional assessment of the graft followed. After graft removal, normoglycemic animals had their glycemias monitored to attest the efficacy of the transplanted islets. Results PFC- and LN-Biodritin microcapsules were as stable and biocompatible as Biodritin. For both biomaterials in normoxia and hypoxia a modulation in gene expression was observed in islets associated with a protection against apoptosis. Also, a decreased expression of stress-related genes (mcp1, hsp70) was evidenced. ldh mRNA levels were down-regulated in PFC-Biodritin microencapsulated islets but upregulated in the presence of LN. Increased levels of insulin mRNA were observed. The differences seen in protein expression indicated the same anti-apoptotic pattern. Caspase3 activity was not different between groups. Concerning diabetes reversal experiments, only mice transplanted with LN-Biodritin microencapsulated islets presented a better outcome, with 60% remaining euglycemic at 198 days post-surgery, compared with 9% for the Biodritin group. OGTT showed that mice transplanted with encapsulated islets secreted more insulin than normal mice, 60 (LN-Biodritin) or 100 days (PFC- and LN-Biodritina) posttransplant. Hyperglycemia was achieved after the retrieval of microcapsules showing graft efficacy. Retrieved microcapsules revealed an extensive overgrowth in most beads from hyperglycemic mice. A static glucose stimulated insulin secretion test revealed that only islets from normoglycemic subjects were able to secrete insulin according to glucose concentration. Conclusion- The addition of bioactive molecules to Biodritin may lessen the stress of isolated islets and have the potential to improve islet transplantation therapy.

THI1 é provavelmente uma proteína bifuncional, uma vez que está envolvida na biossíntese de tiamina e na estabilidade do DNA organelar, notadamente o mitocondrial. Interessantemente, a biossíntese de tiamina ocorre em compartimentos distintos em plantas (cloroplastos) e em leveduras (mitocôndrias). Ensaios de complementação funcional mostraram que o gene thi1 de Arabidopsis thaliana é capaz de complementar uma cepa mutante de levedura para o gene ortólogo. A proteína THI1 de Arabidopsis thaliana é codificada por um único gene. Uma análise detalhada da região N-terminal da proteína, responsável pela sua localização na células, revelou a presença de duas sequências de direcionamento adjacentes. Na extremidade N-terminal encontra-se um peptídeo de trânsito cloroplástico seguida por uma região capaz de formar uma &#945;-hélice anfifílica, tipicamente encontrada em pré-sequências de direcionamento mitocondriais. Com o objetivo de avaliar se a localização final de THI1 pode apresentar um tipo de regulação temporal ou espacial, foram obtidas plantas transgênicas expressando a proteína THI1 fundida a GFP ("green fluorescent protein"). Análises dessas plantas por meio de microscopia confocal revelaram que THI1 está presente majoritariamente em cloroplastos e raramente em mitocôndrias. Ao contrário do que acontece em Arabidopsis thaliana, em cana de açúcar foram encontrados pelo menos três isoformas/parálogos de thi1. O alinhamento da seqüência de aminoácidos dessas isoformas com a THI1 de Arabidopsis thaliana revelou alta similaridade, inclusive na seqüência de direcionamento. Com o intuito de avaliar o padrão de direcionamento dessas isoformas de cana de açúcar foram obtidas construções gênicas contendo ou a seqüência de direcionamento completa ou o peptídeo de trânsito cloroplástico ou a pré-seqüência mitocondrial, fundidas a GFP sob o comando do promotor 35S. A expressão transiente dessas construções em epiderme de cebola, revelou que no caso das construções contendo a seqüência de direcionamento completa ou o peptídeo de trânsito, o direcionamento ocorreu apenas para os cloroplastos. No caso das construções contendo somente a seqüência de direcionamento mitocondrial a GFP permaneceu difundida no citoplasma. Além do aspecto do direcionamento, THI1 foi avaliada sob o ponto de vista filogenético. As análises filogenéticas mostram que thi1 é raramente encontrado em bactérias mas é amplamente distribuído em Archaea. As distâncias genéticas indicam que provavelmente os eucariontes herdaram thi1 de Archaea. As poucas bactérias que possuem esse gene provavelmente obtiveram-no por meio de herança horizontal. / THI1 is probably a bifunctional protein, since it is involved in thiamin biosynthesis and organelar genome stability mainly the mitochondrial. Interestingly, the thiamin biosynthesis occurs at different compartments in plants (chloroplasts) and yeasts (mitochondria). Functional complementation assays showed that Arabidopsis thaliana thi1 gene is able to complement a yeast mutant strain for the hortolog gene. The Arabidopsis thaliana THI1 is encoded by a single copy gene. A detailed analysis of the THI1 N-terminal region, that is responsible for its targeting in cells, reveled the presence of two in tanden directing sequences. At N-terminal region there is a chloroplastic transit peptide followed by a region able to form an anfifilic &#945;-helix frequently present in mitochondrial presequences. Aiming to evaluate if the THI1 final localization could present a temporal or spacial regulation, transgenic plants expressing THI1 fused to GFP ("green fluorescent protein") where obtained. Confocal microscopy analysis of these transgenic plants showed that THI1 is mainly found in chloroplasts and barely found in mitochondrias. Different from what happens in Arabidopsis thaliana, in sugar cane where founded at least three thi1 isoforms/paralogs. The amino acids sequence alignment of these isoforms with the thi1 one, reveled high similarity including the targeting sequence. To evaluate the directing standard of these sugarcane isoforms, gene constructions made by the complete targeting sequence or the chloroplastic transit peptide or the mitochondrial presequence, fused to GFP under the guidance of 35S promotor, where obtained. A transient expression of these gene constructios in epidermal onion cells prove that in the case of the constructions containing either the complete targeting sequence or the chloroplastic transit peptide the directing occurred only to chloroplasts. On the other hand, the constructions containing the mitochondrial pre sequence, GFP were kept defused in the citoplasm. Besides the directing aspect, THI1 were evaluated under the filogenetic point of view. Filogenetic analysis showed that thi1 is rarely found in bacteria but is widely distributed in Archaea. The genetic distances pointed out that probably eucaryotes THI1 came from Archaea. This gene in a few bacterias probably were inherited by lateral transference.

Submitted by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-05-07T17:39:51Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertaçao Bonfim,l.pdf: 1231590 bytes, checksum: 86a9fb61f83eb8bcd872767ed2f2b3f1 (MD5) / Approved for entry into archive by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-05-07T17:45:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertaçao Bonfim,l.pdf: 1231590 bytes, checksum: 86a9fb61f83eb8bcd872767ed2f2b3f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-07T17:45:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertaçao Bonfim,l.pdf: 1231590 bytes, checksum: 86a9fb61f83eb8bcd872767ed2f2b3f1 (MD5) Previous issue date: 2018-03-01 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O paracetamol, a dipirona sódica e o ibuprofeno estão entre os principais medicamentos isentos de prescrição médica disponíveis nas farmácias. Entre estes fármacos, a dipirona sódica tem se destacado na literatura como um dos medicamentos mais utilizados. Apesar de seu amplo uso, nosso grupo de pesquisa tem demostrado que a dipirona sódica apresenta efeitos genotóxicos e citotóxicos. Desta forma, são de grande importância estudos com medicamentos que proporcionem proteção ou que amenizem os eventuais danos causados por esta droga. O composto homeopático Canova® (CA) parece ser um bom candidato para esse fim, uma vez que ameniza os efeitos colaterais de medicamentos a ele associado. Portanto, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o possível efeito citoprotetor do CA em linhagem celular de rim de macaco verde africano (VERO) exposta ao fármaco dipirona sódica utilizando os ensaios do cometa, apoptose e imunocitoquímica. Nossos resultados demonstaram através do teste do cometa que a dipirona sódica induziu um aumento no índice de dano (ID) ao DNA da linhagem VERO. No entanto, quando estas células foram co-tratadas com CA nas três concentrações estudadas, observou-se uma redução significativa no ID, o que indica um possível efeito antigenotóxico do CA. Quanto ao ensaio de apoptose e necrose observamos que a dipirona induziu um aumento na percentagem de apoptose tanto em 24 quanto em 48 h. Entretanto, quando este fármaco foi associado ao CA, foi observada uma redução significativa neste efeito nas três concetrações de CA + dipirona. No que diz respeito aos resultados de imunocitoquímica, foi demonstrado um aumento na expressão de caspase 8 e citocromo C quando as células foram expostas à dipirona; em contrapartida, o co-tratamento reduziu significativamente este efeito. Quanto à expressão de caspase 9, observamos que a dipirona induziu um aumento nesta atividade, porém o co-tratamento não apresentou a capacidade de reduzir tal efeito. Desta forma, desmonstrou-se, em nossas condições experimentais, que CA age como citoprotetor conta os danos causados pela dipirona. / Paracetamol, sodium dipyrone and ibuprofen are among the main medicines exempt from medical prescription available in pharmacies in Brazil. Sodium dipyrone is highlighted in the literature as one of the most commonly used drugs. Despite its wide use, our research group demonstrated that sodium dipyrone exerts genotoxic and cytotoxic effects. Therefore, studies with medicines that may provide protection or that ameliorate the possible damages caused by sodium dipyrone are very important. The homeopathic compound Canova® (CA) seems to be a good candidate for such purpose, since in combination with other drugs it seems to soften the side effects of such drugs. Therefore, the present work aims to evaluate the possible cytoprotective effect of CA on African green monkey kidney cell line (VERO) exposed to the drug sodium dipyrone using the comet, micronucleus, apoptosis and immunocytochemistry assays. Results obtained by the comet test showed that sodium dipyrone induces an increase in DNA damage index of the VERO line. However, when such cells were co-treated with CA at the three concentrations studied, a significant reduction in the ID was observed, indicating a possible antigenotoxic effect of CA. We observed in the apoptosis and necrosis assays that dipyrone induced an increase in the percentage of apoptosis in both 24 hours and 48 hours. However when the drug was associated with CA, a significant reduction in this effect was observed in the three concentrations of CA + dipyrone. Results on immunocytochemistry showed an increase in the expression of caspase 8 and cytochrome C when cells were exposed to dipyrone. On the other hand, co-treatment significantly reduced such effect. Expression of caspase 9 was also observed after dipyrone tratament, however, co-treatment did not reduce such effect. Therefore, in our experimental conditions CA acted as a cytoprotect agent against the damages induced by dipyrone.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2018-05-25T15:03:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AspectosBioquimicosMorfologicos.pdf: 2149704 bytes, checksum: 3bc1be27470dac41ef9ff1c4bf909dbd (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2018-06-01T18:04:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AspectosBioquimicosMorfologicos.pdf: 2149704 bytes, checksum: 3bc1be27470dac41ef9ff1c4bf909dbd (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-01T18:04:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_AspectosBioquimicosMorfologicos.pdf: 2149704 bytes, checksum: 3bc1be27470dac41ef9ff1c4bf909dbd (MD5) Previous issue date: 1999-07-02 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Este trabalho teve por objetivo caracterizar alguns aspectos dos componentes da matriz extracelular de duas cartilagens do nariz suíno, as alares e a septal, além disso caracterizar a organização histológica e alguns aspectos histoquimicos. Para extração de componentes da matriz foi utilizado o agente caotrópico Gu-HCL O glicosaminoglicano predominante para as duas cartilagens é o condroitim sulfato. Após ultracentriíugação dos extratos a fração D4 das duas cartilagens foi fracionada em DEAE-Sephacel usando gradiente de NaCl. A análise em SDS-PAGE, para as duas cartilagens mostrou semelhanças com a presença de fibromodulim, decorim e proteínas de ligação. Somente a cartilagem septal apresentou o componente de 115 kDa que possivelmente aparece como subunidadesde30kDaapósaaçãodeagenteredutor. Para a determinação das populações de glicosaminoglicanos foi utilizado fracionamento com Sephadex G-75, seguida de análise em PAGE-Barbital. As duas cartilagens apresentaram uma população fortemente polidispersa. As populações de proteoglicanos foram analisadas após fracionamento em Sepharose CL-6B seguida de análise das amostras em gel agarosepoliacrilamida. As duas cartilagens apresentam uma população fortemente polidispersa, sendo que a septal é menos uniformemente polidispersa que a alar. O fracionamento de AD2 em DEAE-Sephacel, e a análise em SDS-PAGE e agarose-poliacrilamida, mostraram a presença dos pequenos proteoglicanos biglicam e decorim provavelmente associados aos grandes proteoglicanos. A cartilagem septal apresenta os condrócitos grosseiramente enfileirados acompanhando o eixo maior da cartilagem, enquanto em alar os condrocitos estão dispostos caracteristicamente em grupos isógenos. Para a histoquímica utilizou-se Xylidine Ponceau para proteínas totais, Picrosirius-Hematoxilina para colágeno. Azul de Toluidina para glicosaminoglicanos totais e Azul de Alcian em pH 2,5 e 1,0 para glicosaminoglicanos sulfatados e carboxilados. Os glicosaminoglicanos totais estão mais evidenciados na matriz territorial ao passo que as proteínas totais são mais evidenciadas na matriz interterritorial. O colágeno em cartilagem septal está grosseiramente organizado acompanhando o eixo longitudinal da peça entre as fileiras de condrócitos. / The objective of the present study was to characterize some aspects of the extracellular matrix components of the alar and septal cartilage of the nose of swine and to examine the histological and histochemical aspects of the two types of cartilage. The kaotropic agent Gu-HCl was used to extract the matrix components. The predominant glycosaminoglycan in the two caitilages was chondroitin sulfate. After ultracentrifugation, the D4 fraction of the septal and alar cartilages was fractioned on DEAE-Sephacel using na NaCl gradient. SDS-PAGE analysiys showed similarities between the two cartilages, with the presence of fíbromodulin, decorin and binding proteins. Only the septal cartilage presented the 115 kDa component, which possibly appears as 30 kDa subunits after the action of the reducing agent. The glycosaminoglycan populations were determined by fractionation on Sepharose CL-6B followed by analysis of the samples on the agarosepolyacrilamide gel. The two cartilages presented a strongly polydispersed population, which was less uniformly polydispersed in the septal than in the alar cartilage. AD2 fractionation on DEAE-Sephacel and sample analysis by SDS-PAGE and agarosepolyacrylamide electrophoresis showed the presence of the small proteoglycans biglycan and decorin, possible associated with the large proteoglycans. The septal cartilage presents chondrocytes roughly arranged in rows accompanyng the widest axis of the cartilage, whereas the alar cartilage presents chondrocytes characteristically arranged in isogenic groups. Histhochemistry was performed usisng Xylidine Ponceau for total proteins, Picrosirius-Hematoxylin for collagen, Toluidine Blue for total glycosaminoglycans. And alcian blues, pH 2.5 and pH 1.0, for sulfated and carboxylated glycosaminoglycans. Total glycosaminoglycans are more cleary visible in the territorial matrix, whereas total proteins are more cleary visible in the interterritorial matrix. The collagen of the septal cartilage is roughly organized along the longitudinal axis of the specimens between the chondrocytes rows.

Submitted by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-09-20T14:17:41Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TESE FINAL SYMARA RODRIGUES ANTUNES.pdf: 4324719 bytes, checksum: 76805fd159ce04400941bdf804256d36 (MD5) / Approved for entry into archive by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-09-20T14:19:27Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TESE FINAL SYMARA RODRIGUES ANTUNES.pdf: 4324719 bytes, checksum: 76805fd159ce04400941bdf804256d36 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-20T14:19:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) TESE FINAL SYMARA RODRIGUES ANTUNES.pdf: 4324719 bytes, checksum: 76805fd159ce04400941bdf804256d36 (MD5) Previous issue date: 2018-06-15 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Câncer é o nome dado a uma variedade de doenças que podem ocorrer em diferentes regiões do corpo, que se caracteriza principalmente pela proliferação desregulada de células. Uma organela muito importante, tanto em células normais quanto em células mutadas, é a mitocôndria, responsável pela maior parte da produção de ATP na célula. Mutações no DNA mitocondrial podem acarretar apoptose ou influenciar na eficiência da formação de ATP. Considerando diversas estimativas diferentes, o câncer gástrico sempre figura entre os cinco mais incidentes na população mundial, bem como na população brasileira e paraense. Dessa forma, entender o comportamento tumoral torna-se importante para o combate dessa patologia. O objetivo do trabalho, portanto, é analisar a presença de alterações no DNA mitocondrial de linhagens de carcinoma gástrico implantadas em um modelo animal. Foram analisados quatro genes mitocondriais (COI, ATPase 8, ND1 e ND3) de quatro linhagens de câncer gástrico (AGP01, ACP02, ACP03 e PG100) e uma controle (Carcinossarcoma 256 de Walker) para avaliar as possíveis mutações do DNA mitocondrial. Essas linhagens foram inoculadas em primatas não humanos da espécie Sapajus apella, sendo que alguns animais receberam concomitantemente com as linhagens a substância carcinogênica N-metil-N-nitrosurea (MNU). Os tumores gástricos que se desenvolveram nos animais foram retirados cirurgicamente, após isso foi feita a extração do DNA, amplificação e sequenciamento das sequencias de interesse. Foram observadas alterações nos genes ND1 e ND3. As duas transições encontradas em ND1, uma na posição 3594 (CT) e 3693 (GA) do DNA mitocondrial, não possuíam registro associado a nenhuma patologia, tendo sido relacionadas com marcadores populacionais. Os resultados sugerem que alterações nos genes codificadores de proteínas que participam do Complexo I da cadeia respiratória são mais frequentes que em outras porções do mtDNA nas linhagens de carcinoma gástrico analisadas. / Cancer is the name given to a variety of diseases that can occur in different regions of the body, which is characterized primarily by the deregulated proliferation of cells. A very important organelle in both normal and mutated cells is mitochondria, responsible for most of the ATP production in the cell. Mutations in mitochondrial DNA can lead to apoptosis or influence the efficiency of ATP formation. Considering several different estimates, gastric cancer still in the five most incidental in world population, as well as in Brazilian and local population. In this way, understanding tumor behavior becomes important for fight against this pathology. With this, the objective of the present work was to analyze presence of mitochondrial DNA alterations of gastric carcinoma lines implanted in an animal model. Four mitochondrial genes (COI, ATPase 8, ND1 and ND3) from four gastric cancer strains (AGP01, ACP02, ACP03 and PG100) and one control (Carcinossarcoma 256 from Walker) were analyzed to evaluate possible mitochondrial DNA mutations. These strains were inoculated in non-human primates of the Sapajus apella species, and some animals received the carcinogenic substance N-methyl-N-nitrosurea (MNU) concomitantly with the strains. The gastric tumors that developed in the animals were surgically removed, after which DNA extraction, amplification and sequencing of the sequences of interest were done. Changes were observed in the ND1 and ND3 genes. The two transitions found in ND1, one at position 3594 (CT) and 3693 (GA) of mitochondrial DNA, had no associated pathological record and were related to population markers. The AG transition at position 10398 of the ND3 gene resulted in the change from one threonine to alanine in the resulting amino acid, only in lines with more aggressive behavior or after MNU administration. Two heteroplasms were also identified in the ND1 gene at positions 3594 (C / T) and 3693 (A / G) only in the PG100 line after MNU, suggesting a difference in the DNA repair system of this line compared to the others. The results suggest that changes in the genes encoding proteins that participate in Complex I of the respiratory chain are more frequent than in other portions of the mtDNA in the analyzed gastric carcinoma strains. / FAMAZ - Faculdade Metropolitana da Amazônia / UNINASSAU - Faculdade Maurício de Nassau

Submitted by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-09-24T14:00:19Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Tamirys Simão Pimenta.pdf: 2171990 bytes, checksum: 5a03ee3e20f4e48c0195145b0d6abc43 (MD5) / Approved for entry into archive by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-09-24T14:01:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Tamirys Simão Pimenta.pdf: 2171990 bytes, checksum: 5a03ee3e20f4e48c0195145b0d6abc43 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-24T14:01:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese - Tamirys Simão Pimenta.pdf: 2171990 bytes, checksum: 5a03ee3e20f4e48c0195145b0d6abc43 (MD5) Previous issue date: 2018-07-19 / A malária é uma das mais importantes doenças transmitidas por vectores e que acomete grande parte da população mundial. O P. vivax é a espécie predominante nas Américas, representando 64% dos casos. A área endêmica da malária no Brasil compreende a Região Amazônica, responsável por 99% dos casos autóctones. Trabalhos anteriores demonstraram a alta prevalência da malária em garimpeiros na região Amazônica e a espécie mais frequente envolvida é o P. vivax. A resistência à malária faz parte da interação de diferentes fatores que regulam as relações entre o parasito e o hospedeiro. Essa interação é um fator determinante na resposta imune a infecção. Os polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs) nos genes de citocinas têm sido explorados em estudos de variação genética humana e tentam explicar a influência dessa variação na susceptibilidade as doenças infecciosas. As variações no número de cópias (CNVs) também podem afetar potencialmente a expressão dos genes de várias maneiras, contudo pouco se sabe sobre o papel dessa variação genética na adaptação humana frente à infecção pelo P. vivax. O estudo objetivou investigar se as alterações genômicas quantitativas e os SNPs nos genes TNFA-308A>G, IFNG+874T>A, IL6-174C>G e do haplótipo -1082/-592/-819 no gene IL10, associados à produção de citocinas podem influenciar na fisiopatogenia da malária vivax. O estudo selecionou 129 pacientes, a partir de 288 atendidos na cidade de Itaituba, estado do Pará, sendo 79 pacientes sem infecção para malária e 50 pacientes positivos para P. vivax e destes, 15 tinham infecção primária a malária e 35 pacientes relataram episódios anteriores a infecção. Foi determinada a carga parasitária pela gota espessa; os parâmetros hematológicos; as citocinas foram dosas por citometria de fluxo; a genotipagem dos SNPs foi feita por PCR-SSP e a variação no número de cópias foi determinada pela técnica do aCGH. A análise estatística foi realizada utilizando o programa Bioestat e Graph-pad prim. Observados que ambos os grupos maláricos (primário e recorrente) apresentaram redução significativa no número de plaquetas; no grupo recorrente observamos aumento significativo na porcentagem de monócitos; não observamos diferenças significativas na frequência dos SNPs; não observamos associações dos SNPs com a infecção pelo P. vivax; observamos diferenças significativas nos níveis plasmáticas das citocinas entre os grupos; observamos níveis significativamente maiores nos indivíduos com o haplótipo IL10GCC/GCC e correlação entre os níveis das citocinas IL-10, TNF-α e IL-6 e a carga parasitária; observamos um aumento significativo no nível das citocinas IFN-γ, IL-6 e IL-10 no grupo com malária primária em comparação ao controle endêmico, bem como um aumento significativo na expressão das citocinas TNF-α, IL-6 e IL-10 no grupo recorrente em comparação ao grupo controle, enquanto que a expressão da citocina IFN-γ foi significativamente maior no grupo primário em comparação com o grupo recorrente. Descrevemos pela primeira as alterações quantitativas no genoma dos pacientes infectados com P. vivax e identificamos 112 genes amplificados e 12 genes deletados na população em estudo, e, apesar das CNVs encontradas não incluírem nenhum gene relacionado com receptores ou fatores de resistência a malária vivax e nem estarem correlacionados com os dados clinico-patológicos da doença, observamos vários genes com alterações no número de cópias relacionados a outras doenças. Este estudo fornece dados adicionais sobre a resposta imune entre P. vivax e o hospedeiro e as alterações genômicas quantitativas no hospedeiro de uma área endêmica de garimpo. / In endemic areas of Asia, Oceania, Central and South America and in the horn of Africa P. vivax malaria is a major cause of morbidity with 35 million cases annually. In Brazil, the Amazon region concentrates almost all cases and infections registered countrywide, with more than three hundred thousand cases per year. Several evidences suggest that an exacerbated inflammatory response associated to density parasite is likely to aggravate the malaria symptoms. We assessed the haematological and immunological aspects, genetic alterations related to CNVs that could lead to phenotypic alterations, conferring resistance or susceptibility to malaria, as well the presence of polymorphisms in cytokine genes and their association with the infection in patients living in a gold-mining area in a gold-mining in the Brazilian Amazon Region, establishing patterns of immune response characteristic of primary malaria, recurrent malaria and endemic control. Six SNPs (TNFA-308G/A, IFNG+874T/A, IL6-174G/C, IL10-1082G/A, -819C/T, -592C/A) in four genes were determined; blood cell count was conducted on automatic analyzer; plasmatic cytokines IL-6, IL-10, TNF-α and IFN-γ were quantified by flow cytometry and density parasite was estimated by thick blood films with confirmation by nested-PCR; the CNV was estimated by aCGH and association between copy number and phenotypes (parasite load, mean number of clinical infections of malaria and gender) was assessed. The statistical analyzes were performed by Graph-pad prism 6.0 and Bioestat 5.0. No significant association was found between SNPs and malaria infection; cytokine levels were higher in malaria group when compared to endemic control; production of IL-10 was higher in the presence of GCC/GCC haplotype; IFN-γ levels were correlated with previous malaria episodes; malaria patients showed lower platelet numbers, reduction on white blood cells count and an increased monocyte percentage; significant increase in the IL-6 and IL-10 plasmatic levels in both malaria groups; the primary malaria patients displayed the highest significant plasmatic IFN-γ levels; recurrent malaria patients displayed the highest significant plasmatic TNF-α; malaria infection demonstrated correlation between parasite density and TNF-α, IL-6 and IL-10 levels; a total of 112 amplified genes and 12 deleted genes were observed and the CNVs found did not include any gene related to receptors or vivax malaria resistance factors. There were no statistically significant correlations between the clinical and pathological data (parasite load, mean number of clinical infections of malaria and gender) and the presence of CNVs in the patients studied. This study provides additional data on Plasmodium-host immune response and describes the quantitative changes in the human genome in P. vivax infection in an endemic area of garimpo. / INSTITUTO EVANDRO CHAGAS

Submitted by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-09-24T18:34:39Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 1_Dissertação_Final_AlineBarral.pdf: 935702 bytes, checksum: 0e13603e9f7137c77025d2055231cd3e (MD5) / Approved for entry into archive by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-09-24T18:35:00Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 1_Dissertação_Final_AlineBarral.pdf: 935702 bytes, checksum: 0e13603e9f7137c77025d2055231cd3e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-24T18:35:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) 1_Dissertação_Final_AlineBarral.pdf: 935702 bytes, checksum: 0e13603e9f7137c77025d2055231cd3e (MD5) Previous issue date: 2018-08-14 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Chromoblastomycosis (CBM) is a fungal disease characterized by chronic cutaneous and subcutaneous lesions, due to the previous transcutaneous implantation of different black fungi, belonging to the family Herpotrichiellaceae, the main agent belonging to the genus Fonsecaea. The Amazon region is the main endemic area of Brazil and our state is the main endemic area in the country and second in the world. There is no standardization of treatment, drug therapy is used, with different regimens, mainly itraconazole. New azolics such as posaconazole and voriconazole began to be used, but with limitations due to the high cost, the use of physical methods such as cryosurgery, thermotherapy, laser therapy and both. The low cure rates and high rates of relapse of the disease may be related to the different treatment methods employed and the lack of a standardized regimen itself. The objective of this work was to evaluate the in vitro sensitivity of conidia and in vitro induced muriform cells of Fonsecaea spp. in the presence of different antifungal agents, to date there are no studies evaluating the action of drugs using the pathogenic form of the fungus, reinforcing the importance of this study, following the method established in the standard M38-A2, Clinical and Laboratory Standards Institute. The minimum inhibitory concentration for each drug was obtained after 5 days of interaction, posaconazole showed better in vitro inhibitory activity for conidia (CIMMG = 0.632μg / ml) and muriform cells (CIMMG = 1μg / ml). In the analysis of the fungicidal concentration, in both conidia and muriform cells, posaconazole presented lower value (CFMMG = 6.72μg / ml, in both). The fungus samples presented distinct times to differentiate their conidia in muriform cells, therefore we believe that although they belong to the same genus the fungi present physiological peculiarities still unknown. In the in vitro susceptibility tests PCZ had the lowest inhibitory and fungicidal concentrations in both conidia and muriform cells, thus investing in susceptibility testing was important to identify sensitive or resistant strains. / A cromoblastomicose (CBM) é uma doença fúngica caracterizada por lesões crônicas cutâneas e subcutâneas, decorrentes da implantação transcutânea prévia de diferentes fungos negros, pertencentes a família Herpotrichiellaceae, o principal agente pertencente ao gênero Fonsecaea. A região amazônica é a principal área endêmica do Brasil, o estado do Pará a principal área endêmica no país e segunda no mundo. Não há uma padronização de tratamento, é usado a terapia medicamentosa, com diferentes esquemas, principalmente itraconazol. Novos azólicos como posaconazol e voriconazol começaram a ser utilizados, mas com limitações devido ao alto custo, o uso de métodos físicos como a criocirurgia, termoterapia, terapia a laser e a combinação de ambos. As baixas taxas de cura e altas taxas de recidivas da doença pode estar relacionado aos diferentes métodos de tratamento empregados e a própria falta de um esquema padronizado. O objetivo deste trabalho foi avaliar a sensibilidade in vitro de conídios e células muriformes, induzidas in vitro, de Fonsecaea spp. frente a diferentes antifúngicos, até o momento não há estudos que avaliem a ação de fármacos usando a forma patogênica do fungo, reforçando a importância deste estudo, seguindo o método estabelecido na norma M38-A2, do Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). A concentração inibitória mínima para cada fármaco utilizado foi obtida após 5 dias de interação, o posaconazol apresentou melhor atividade inibitória in vitro para conídios (CIMMG=0.632μg/ml) e células muriformes (CIMMG=1μg/ml). Na análise da concentração fungicida, tanto em conídios quanto em células muriformes, o posaconazol apresentou menor valor (CFMMG=6.72μg/ml, em ambos). As amostras fúngicas apresentaram tempos distintos para diferenciar seus conídios em células muriformes, portanto acreditamos que apesar de pertencerem ao mesmo gênero os fungos apresentam particularidades fisiológicas ainda desconhecidas. Nos testes de suscetibilidade in vitro, o PCZ teve as menores concentrações inibitórias e fungicidas tanto em conídios quanto em células muriformes,com isso investir em testes de suscetibilidade foi impor importante para identificar cepas sensíveis ou resistente.

Submitted by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-11-05T17:28:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) PROJETO DE MESTRADO FERNANDA FARIAS DE ALCÂNTARA.pdf: 1138273 bytes, checksum: 8a0c741f6de9fa8fefac60fbbc74ae4b (MD5) / Approved for entry into archive by JACIARA CRISTINA ALMEIDA DO AMARAL (jaciaramaral@ufpa.br) on 2018-11-05T17:30:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) PROJETO DE MESTRADO FERNANDA FARIAS DE ALCÂNTARA.pdf: 1138273 bytes, checksum: 8a0c741f6de9fa8fefac60fbbc74ae4b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-05T17:30:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) PROJETO DE MESTRADO FERNANDA FARIAS DE ALCÂNTARA.pdf: 1138273 bytes, checksum: 8a0c741f6de9fa8fefac60fbbc74ae4b (MD5) Previous issue date: 2018-10-11 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O câncer gástrico nas últimas décadas vem apresentando uma queda em número de casos, o que muito se deve ao progresso no que tange a saúde sanitária, e ao maior acesso da população a políticas educacionais. No entanto, continua sendo a terceira causa de morte a nível mundial entre homens e mulheres. Tais mortes, geralmente estão vinculadas ao diagnóstico tardio. O presente estudo pretende pelas dosagens de homocisteína, vitamina B12 e ácido fólico, montar um perfil de biomarcadores de triagem, os quais possam ser inseridos na rotina comum de exames, visando o diagnóstico célere da doença. Foram analisadas 207 amostras de caso controle e 207 de pacientes com câncer gástrico, em ambos foram realizadas as dosagens bioquímicas de homocisteína, ácido fólico e vitamina B12, pareadas em relação a idade, localização do tumor, sub-tipo, classificação tumoral, infecção por EBV (Epstein-Barr Vírus), e Helicobacter pilory. Para dosagem da tríade, foram utilizadas técnicas quimioluminescência, e as demais variáveis foram obtidas pelas informações hospitalares. Como resultados, foram encontradas diferenças significativas entre as médias da tríade dos pacientes com câncer em relação ao controle, em todas as variáveis pareadas. Em conclusão, nosso estudo mostrou que a análise da tríade (homocisteína, vitamina b12 e ácido fólico) tem seu valor no diagnóstico do câncer gástrico, podendo futuramente ser um eficaz marcador de triagem para este tipo de câncer. / Gastric cancer in the last decades has shown a decrease in the number of cases, which is much due to the progress in sanitary health, and the greater access of the population to educational policies. However, it remains the third leading cause of death worldwide between men and women. Such deaths are usually linked to late diagnosis. The present study intends to establish a profile of screening biomarkers by the homocysteine, vitamin B12 and folic acid dosages, which can be inserted in the routine routine of examinations, aiming the rapid diagnosis of the disease. A total of 207 control and 207 cases of gastric cancer patients were analyzed, both of which were biochemical measurements of homocysteine, folic acid and vitamin B12, matched in relation to age, tumor location, subtype, tumor classification, EBV (Epstein-Barr Virus), and Helicobacter pylori. For the triad dosage, chemiluminescence techniques were used, and the other variables were obtained by hospital information. As results, significant differences were found between the means of the triad of cancer patients in relation to the control, in all paired variables. In conclusion, our study showed that the triad analysis (homocysteine, vitamin b12 and folic acid) has its value in the diagnosis of gastric cancer, and may in the future be an effective marker of screening for this type of cancer. / UFPA - Universidade Federal do Pará

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 401022.pdf: 970049 bytes, checksum: 1fc17227f3815a94113f9cadc1efc0e4 (MD5) Previous issue date: 2008-03-19 / Fosfodiesterase (PDE) ? uma super fam?lia de enzimas respons?veis pela degrada??o dos segundos mensageiros intracelulares adenosina monofosfato c?clico (AMPc) e guanosina monofosfato c?clico (GMPc). Como reguladoras essenciais na sinaliza??o de segundos mensageiros c?clicos com diversas fun??es fisiol?gicas as PDEs s?o alvo de drogas para o tratamento de diversas doen?as. Dentre estas est?o insufici?ncia card?aca, depress?o, asma, inflama??o e disfun??o er?til. Dentre as 11 fam?lias de genes de PDE, a fosfodiesterase 5 (PDE5) ? espec?fica para GMPc, sendo respons?vel pela atividade de hidr?lise que sofre o GMPc dentro dos tecidos dos corpos cavernosos penianos dos homens. A PDE5 ? amplamente conhecida por ser alvo de diversas drogas utilizadas no tratamento da disfun??o er?til, como por exemplo, o sildenafil (Viagra?). Este trabalho tem por objetivo a s?ntese da regi?o codificante, clonagem, express?o e purifica??o do dom?nio catal?tico da PDE5 humana. A s?ntese da regi?o codificante do polipept?deo alvo foi realizada atrav?s da t?cnica de overlap, utilizando 24 oligonucleot?deos que foram unidos atrav?s da rea??o em cadeia da polimerase (PCR). A constru??o foi clonada em vetor pCRBlunt? e sequenciada para confirmar sua identidade e a aus?ncia de muta??es. O fragmento foi subclonado em vetor de express?o pET23a(+) com s?tios de restri??o NdeI e BamHI, para o N terminal e C terminal, respectivamente. C?lulas eletrocompetentes de E. coli Rosetta (DE3) foram transformadas com o plasm?deo recombinante, a regi?o que codifica para o dom?nio catal?tico da PDE5 foi expressa em sua forma sol?vel e ativa na presen?a de 0,1 mM do indutor IPTG. Quando o dom?nio catal?tico da PDE5 foi isolado, um rendimento de 2,39 mg.mL-1 foi obtido atrav?s de 3 passos de purifica??o. O dom?nio catal?tico da PDE5 puro permitir? a realiza??o de uma triagem de extratos vegetais oriundos da biodiversidade brasileira. Com o intuito de buscar novos compostos que possam se tornar poss?veis inibidores de PDE5, e assim serem utilizados no tratamento da disfun??o er?til.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 408010.pdf: 324019 bytes, checksum: a134e04c894f3ac9eaae510c195117e6 (MD5) Previous issue date: 2008-11-20 / Para avaliar as duas vers?es do gene SOD2 que codifica para a prote?na super?xido dismutase dependente de mangan?s na sepse, n?s determinamos a freq??ncia do polimorfismo de nucleot?deo simples (SNP) 47C>T em pacientes criticamente doentes com sepse (n=356) e sem sepse (n=173), e tamb?m investigamos as freq??ncias genot?picas nos desfechos adversos ? sepse (choque s?ptico e mortalidade) no grupo de pacientes s?pticos. N?s comparamos os portadores do alelo 47C (gen?tipos 47CC+47CT) com homozigotos 47TT e demonstramos uma associa??o estatisticamente significativa entre os portadores do alelo 47C e a ocorr?ncia de choque s?ptico no subgrupo de pacientes s?pticos (p=0.025). Na an?lise ajustada de regress?o log?stica bin?ria, incorporando o SNP 47C>T e os principais preditores cl?nicos, n?s mostramos que somente o escore SOFA [p<0.001, OR=9.107 (95%CI=5.319-15.592)] e o alelo 47C [p=0.011, OR=2.125 (95%CI=1.190-3.794)] foram significativamente associados com o desfecho de choque s?ptico. Nossos resultados e nossa hip?tese sugerem que a mais alta freq??ncia de portadores do alelo 47C em pacientes s?pticos com desfecho desfavor?vel ? provavelmente explicada por um efeito no estresse celular.