Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 388692.pdf: 318684 bytes, checksum: 4515465ae3fb1256c9107ff7a04e8a0b (MD5) Previous issue date: 2007-03-02 / A esquizofrenia ? uma doen?a neuropsiqui?trica que afeta cerca de 1% da popula??o mundial e que, devido aos seus diversos sintomas, acarreta um enorme custo social direto (hospitaliza??es, atendimentos, medica??es) e indireto (improdutividade, repercuss?es familiares). Os estudos de gen?tica populacional indicam que a esquizofrenia tenha um componente gen?tico relevante al?m da influ?ncia do ambiente. Neste sentido, al?m de estudos no DNA nuclear, t?m sido investigadas as altera??es no DNA Mitocondrial (mtDNA). O mtDNA apresenta heran?a materna, e por isso ? muito ?til em estudos populacionais. Estudos com doen?as neurodegenerativas como a doen?a de Parkinson e a doen?a de Alzheimer sugerem que, ao menos em parte, o mtDNA contribua para suas etiologias. Manifesta??es neuropsiqui?tricas caracter?sticas de encefalopatias mitocondriais causadas por muta??es do mtDNA s?o convuls?es, dem?ncia e dor de cabe?a. Al?m disso, um estado confusional agudo, com alguns sintomas semelhantes aos que ocorrem na esquizofrenia (desorganiza??o mental e alucina??es), ?s vezes ? observado em MELAS (mitochondrial encephalomyopathy, lactic acidosis, stroke-like episodes), uma encefalopatia mitocondrial t?pica. Dessa forma, o objetivo dessa pesquisa foi averiguar uma poss?vel associa??o entre polimorfismos A4769G e A10398G de mtDNA, que j? foram descritos como predisponentes a outras doen?as neuropsiqui?tricas, com o desenvolvimento da esquizofrenia. Os polimorfismos A4769G e A10398G est?o respectivamente localizados nos genes ND2 e ND3, que codificam para subunidades 2 e 3 da NADH Desidrogenase. Para relacionar esses polimorfismos com a esquizofrenia, testamos 76 pacientes esquizofr?nicos quanto ? ocorr?ncia ou n?o destas variantes polim?rficas no mtDNA e comparamos com as amostras de 88 controles sadios. Esses polimorfismos foram analisados utilizado-se o seq?enciador autom?tico de DNA MegaBACE 1000 (GE Healthcare ) do Centro de Biologia Gen?mica e Molecular da PUCRS. Os cromatogramas gerados pela corrida eletrofor?tica das rea??es de seq?enciamento foram analisadas no programa Chromas para determinar a ocorr?ncia ou n?o da varia??o polim?rfica. Quanto ? an?lise estat?stica, foi realizado teste do qui-quadrado para vari?veis categ?ricas. O n?vel de signific?ncia estat?stica foi p ≤ 0,05. Em rela??o ao polimorfismo A4769G, foram analisadas amostras de 76 pacientes dos quais 61 (80,3%) apresentaram o alelo G e 15 (19,7%) apresentaram o alelo A nesta posi??o. Das 88 amostras de controles analisadas, obtivemos 82 (93,2%) com o alelo G e 6 (6,8%) com o alelo A (Qui-quadrado p=0,014, Odds ratio=2.895). Em rela??o ao polimorfismo A10398G, dos 62 pacientes analisados, 17 (27,4%) apresentaram o alelo G e 45 (72,6%) o alelo A. Dos 76 controles, 34 (44,7%) apresentaram a presen?a do alelo mutante G e 42 (55,3%) apresentaram o alelo A para esta posi??o (Qui-quadrado p=0,036, Odds ratio=1.313). O estudo mostra diferen?as estatisticamente significativas na freq??ncia dos sistemas polim?rficos estudados entre pacientes esquizofr?nicos e controles. Estudos adicionais s?o necess?rios para avaliar sua relev?ncia do ponto de vista funcional.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 452977.pdf: 5521705 bytes, checksum: 123159632e5331d0676a4575af283f7b (MD5) Previous issue date: 2013-08-23 / Modafinil is a drug that promotes increased alertness. It was approved for the treatment of excessive daytime sleepness in narcolepsy and obstructive sleep apnea. Some studies indicate that Modafinil can improve learning, memory and reverse cognitive loss induced by sleep deprivation and stress. This study was aimed to characterize the effects of modafinil on control adult rat s memory. Further, its effects were also studied using three models of cognitive decline to assess modafinil effects on memory. The iron overload model on neonatal period related to the degenerative diseases, maternal deprivation on neonatal period that generates emotional and cognitive impairment on adulthood, and, paradoxal sleep deprivation, which is known to interfere with on memory consolidation. The first experiment investigated the effects of the drug on memory consolidation and retrieval using distinct paradigms of learning; object recognition and inhibitory avoidance (aversive memory task) in healthy adult rats. Male Wistar rats received a single injection of acute modafinil (0.0; 0.75; 7.5 or 75 mg/kg) immediately after training or one hour before object recognition or inhibitory avoidance retention tests. Acute administration of modafinil to healthy rats did not affect memory consolidation or retrieval. The second experiment examined the acute or chronic administration of modafinil on the reversal of memory deficits induced by iron overload in the neonatal period, a model of cognitive decline related to neurodegenerative disorders. Rats treated with iron between 12 and 14 postnatal days received in adulthood, acute intraperitoneal injection of modafinil (0.0; 0.75; 7.5 and 75 mg/kg) immediately after training in the recognition task object. A single injection of modafinil at the highest dose was able to recover recognition memory in rats treated with iron. In order to investigate the effects of chronic treatment with modafinil, irontreated rats received intraperitoneal injections of modafinil at the same doses for seventeen days. Twenty-four hours after the last injection, the animals were submitted to object recognition or inhibitory avoidance training. Memory retention tests were performed twenty four hours after training. Chronic administration of modafinil fully recovered memory deficits induced by iron both in recognition memory and emotional memory. Experiment III evaluated the effects of maternal deprivation combined with paradoxical sleep deprivation (PSP) on recognition memory. Wistar rats separated from their mothers for fourteen days, three hours per day, underwent PSP for twenty four hours in adulthood. The model allowed to investigate the ability to reverse such deficits with administration of modafinil that was effective in restoring cognitive decline caused by maternal deprivation and PSP. The use and commercialization of modafinil as a stimulant is widely proved. To support its application in the memory loss associated with neurodegenerative disorders, stress in early life and PSP, additional preclinical and clinical research are needed. This study shows, however, through the proposed models of cognitive decline, the drug effectiveness in reversing such memory deficits. / O Modafinil ? um f?rmaco que promove o aumento do estado de alerta, e foi aprovado para o tratamento da sonol?ncia diurna excessiva na narcolepsia e apn?ia obstrutiva do sono. Alguns estudos indicam que o modafinil pode melhorar a aprendizagem, a mem?ria e reverter d?ficits cognitivos induzidos pela priva??o de sono e estresse. No presente trabalho tivemos como objetivo caracterizar os efeitos do modafinil sobre a mem?ria em ratos adultos saud?veis. Al?m disso, seus efeitos tamb?m foram estudados utilzando-se tr?s modelos de decl?nio cognitivo para avaliar os efeitos do modafinil sobre a mem?ria: o modelo da sobrecarga de ferro no per?odo neonatal relacionado com as doen?as neurodegenerativas, a separa??o materna no per?odo neonatal que gera um preju?zo emocional e cognitivo na idade adulta e, por fim, a priva??o de sono paradoxal que interfere na consolida??o da mem?ria. No experimento I foram investigados os efeitos do f?rmaco sobre a consolida??o e a evoca??o da mem?ria utilizando-se distintos paradigmas de aprendizagem: reconhecimento de objetos e esquiva inibit?ria (tarefa de mem?ria aversiva) em ratos adultos saud?veis. Ratos Wistar adultos receberam uma inje??o aguda de modafinil (0,75; 7,5 ou 75 mg/kg) ou ve?culo imediatamente ap?s o treino ou 1 hora antes do teste nas tarefas de reconhecimento de objetos ou de esquiva inibit?ria. A administra??o aguda de modafinil em ratos saud?veis n?o afetou a consolida??o e nem a evoca??o da mem?ria. O experimento II analisou os efeitos da administra??o aguda ou cr?nica de modafinil sobre os d?ficits de mem?ria induzidos pela sobrecarga de ferro no per?odo neonatal, um modelo de decl?nio cognitivo relacionado a dist?rbios neurodegenerativos. Ratos tratados com ferro entre o 12? e 14? dia p?s natal receberam, na idade adulta, uma inje??o intraperitoneal aguda de modafinil (0,75; 7,5 e 75 mg/kg) ou ve?culo imediatamente ap?s o treino da tarefa de reconhecimento de objeto. Uma inje??o aguda de modafinil na dose mais elevada foi capaz de recuperar a mem?ria de reconhecimento em ratos tratados com ferro. A fim de investigar os efeitos do tratamento cr?nico com modafinil, os ratos tratados com ferro receberam inje??es di?rias de modafinil nas mesmas doses por 17 dias. Vinte e quatro horas ap?s a ?ltima inje??o, os animais foram submetidos ?s tarefas de reconhecimento de objetos e esquiva inibit?ria. Os testes de reten??o de mem?ria foram realizados 24 horas ap?s o treino. A administra??o cr?nica de modafinil recuperou completamente os d?ficits de mem?ria induzidos pelo ferro, tanto na mem?ria de reconhecimento quanto na mem?ria emocional. O experimento III avaliou os efeitos da separa??o materna combinada com a priva??o de sono paradoxal (PSP) sobre a mem?ria de reconhecimento. Ratos Wistar separados da m?e durante 14 dias, tr?s horas por dia, foram submetidos a PSP por vinte e quatro horas na idade adulta. O modelo permitiu investigar a capacidade de revers?o de tais d?ficits com a administra??o de modafinil que foi efetivo em recuperar o decl?nio cognitivo causado pela separa??o materna e pela PSP. A utiliza??o e a comercializa??o do modafinil como estimulante s?o amplamente fundamentadas. Para dar suporte ? sua aplica??o na perda de mem?ria associada ?s perturba??es neurodegenerativas; ao estresse no in?cio da vida e ? PSP, pesquisas pr? cl?nicas e cl?nicas adicionais s?o necess?rias. Este estudo comprova por meio dos modelos de decl?nio cognitivo propostos, a efetividade do f?rmaco em reverter tais d?ficits de mem?ria.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 458042.pdf: 2649672 bytes, checksum: a59591c4a1fe4e945b26d110c1c85f97 (MD5) Previous issue date: 2014-02-24 / Background: During critical illness and sepsis there is severe antioxidant depletion, and this scenario raises the critical ill patient s mortality risk. Glutathione peroxidase (GPx) is one of the first endogenous antioxidant defense enzymes, and it works cooperatively with superoxide dismutase (SOD) and cathalase (CAT) to detoxify free radicals from the cellular environment. Genetic studies are important to understand the complexity of human oxidative stress and how the organism responds to an extreme situation such as critically care conditions. Previous studies with a GPx1 single nucleotide polymorphism (593C>T SNP; rs1050450; protein variant in GPx1: Pro198Leu) showed 593T carriers and 593TT homozygotes present higher risk to develop different diseases. Objective: We assessed the relationship of the genotype distribution of GPx1 SNP in critically ill patients with their conditions (organ dysfunction, sepsis, and septic shock) and their outcome. Results: We monitored 626 critically ill patients daily from the ICU (intensive care unit) admission to their discharge from hospital, or death. Our study revealed a significant association between 593TT GPx1 genotype and mortality; the mortality rate was higher in homozygous 593TT GPx1 (N = 94) when compared with the group of subjects with genotypes 593CT or 593CC GPx1 (N = 532) (52% versus 38%, P = 0.009; OR = 1.79; 95% CI = 1.13-2.85). Evaluating the subgroup of 293 ICU patients with sepsis, a pooled analysis including two genetic variants GPx1 and SOD2 (47C> T SNP, rs4880; protein variant in MnSOD: Ala-9Val) showed a significant difference in relation to progression to septic shock. The frequency of septic shock among septic patients with 593T GPx1 and 47C SOD2 alleles (N = 122) was higher when compared with septic patients carrying other settings of genotypes (N = 174) (78% versus 66%; P = 0.028; OR = 1.81; 95% CI = 1.03-3.18). Accepting the previously reported functional effects of these two SNPs on GPx1 and SOD2 gene expressions and, consequently, on GPx1 and MnSOD enzyme actvities, we believe our results may be considered as an important contribution for the understanding of oxidative imbalance during the critical ill. / Contexto: Durante a doen?a cr?tica e sepse h? deple??o grave de antioxidantes, e esse cen?rio aumenta o risco de mortalidade do paciente criticamente doente. Glutationa peroxidase (GPx) ? uma das primeiras enzimas de defesa antioxidantes end?genas que, agindo em coopera??o sin?rgica com a super?xido dismutase (SOD) e a catalase (CAT), desintoxica radicais livres no ambiente celular. Os estudos gen?ticos s?o importantes para compreender a complexidade do estresse oxidativo humano e como o organismo responde a situa??es extremas, como no caso das situa??es cr?ticas de sa?de. Estudos anteriores com uma variante SNP (single nucleotide polymorphism) no interior do gene GPx1 (593C>T SNP; rs1050450; variante proteica na GPx1: Pro198Leu) mostraram que os portadores do alelo 593T e os homozigotos 593TT apresentam maior risco de desenvolver quadros patol?gicos graves. Objetivo: avaliar a rela??o da distribui??o dos gen?tipos do SNP 593C>T GPx1 em pacientes criticamente doentes buscando associa??es com seus quadros de gravidade (disfun??es org?nicas, sepse e choque s?ptico) e desfecho (mortalidade), durante o per?odo de sua interna??o na unidade de terapia intensiva (UTI). Resultados: Foram monitorados diariamente 626 pacientes criticamente doentes desde a sua admiss?o na UTI at? sua alta hospitalar ou ?bito. Foi identificada uma associa??o significativa entre o gen?tipo 593TT GPx1 e a mortalidade: a taxa de mortalidade foi superior em homozigotos 593TT GPx1 (N = 94) quando comparados com o grupo de indiv?duos com gen?tipos 593CT ou 593CC GPx1 (N = 532) (52% versus 38%, P = 0.009; OR = 1.79; 95% CI = 1.13-2.85). Avaliando o subgrupo de pacientes cr?ticos com sepse, uma an?lise conjunta incluindo duas variantes gen?ticas GPx1 e SOD2 (47C>T SNP; rs4880; variante proteica na MnSOD: Ala-9Val) mostrou diferen?a significativa em rela??o a evolu??o para choque s?ptico. A frequ?ncia de choque s?ptico entre pacientes s?pticos com alelos 593T GPx1 e 47C SOD2 (N = 122) foi superior quando comparado com pacientes s?pticos com outras configura??es de gen?tipos (N = 174) (78% versus 66%; P = 0.028; OR = 1.81; 95% CI = 1.03-3.18). Aceitando que os efeitos funcionais causados pelas variantes gen?ticas 593C>T GPx1 e 47C>T SOD2 em seus genes e nas enzimas GPx1 e MnSOD, respectivamente, afetam diretamente o balan?o oxidativo celular, acreditamos que o resultado do presente estudo pode ser considerado como uma contribui??o importante para a compreens?o do estresse oxidativo no paciente criticamente doente.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 459268.pdf: 1089012 bytes, checksum: 3e3bbefbe5c53d842c73d0dec81136ac (MD5) Previous issue date: 2014-02-18 / Hepatocellular Carcinoma is the most prevalent primary tiver tumor and is among the top ten cancers that affect the world population. lts development is related, in most cases, the existente of chronic tiver injury, such as occurs in cirrhosis. Current curative therapies are only surgical resection, transplantation and percutaneous ablation, however with the possibility of recurrence. In this context, the search for new therapies for the disease becomes an interesting field for research. The knowledge about the correlation between chronic inflammation and cancer has driven new researches with anti-inflammatory agents that have potential for the development of antitumor drugs. Gallic acid is a polyphenol found in many natural products and have shown anti-inflammatory activity, anti-tumor, antimutagenic and strong antioxidant action. The purpose of this study was to investigate the effect of gallic acid on cell proliferation and inflammatory parameters of tiver carcinoma cells (HepG2), as well as to investigated the mechanisms involved. Cell viability was evaluated through MTT colorimetric assay and Trypan blue exclusion. Results showed that the gallic acid decreased proliferation of HepG2 celis in a dose and time dependent manner, without causing necrosis (LDH assay). We observed significant induction of apoptosis by PE Annexin V and 7-AAD assay and no interferente with the cell cycle using the FITC BrdU Flow Kit. The leveis of inflammatory mediators were measured by Cytometric Bead Array Human Inflammation Assay and observed a significant reduction in the leveis of interleukin-8 (pro-inflammatory and related to angiogenesis, invasiveness and metastasis) and increased leveis of interleukin-10 (anti-inflammatory and related to the induction of programmed cell death) and interleukin-12 (antiangiogenic and antimetastatic). We also evaluated the leveis of TGF by ELISA (Enzyme-Linked lmmunosorbent Assay) and no significant differences. According to these results, we believe that gallic acid has a strong potential as an anti-tumor agent. / O Carcinoma Hepatocelular ? o tumor hep?tico prim?rio mais prevalente e est? entre as dez principais neoplasias que afetam a popula??o mundial. O seu desenvolvimento est? relacionado, na maioria das vezes, a uma les?o hep?tica cr?nica, como ocorre na cirrose. As terapias consideradas curativas atualmente s?o somente a ressec??o cir?rgica, o transplante e a abla??o percut?nea, ainda com possibilidade de recidiva. Nesse contexto, a busca por novas alternativas terap?uticas para a doen?a torna-se um campo de pesquisa em expans?o. O conhecimento sobre a correla??o entre a inflama??o cr?nica e c?ncer tem impulsionado novas pesquisas com agentes anti-inflamat?rios que apresentem potencial para o desenvolvimento de drogas antitumorais. O ?cido g?lico ? um polifenol encontrado em v?rios produtos naturais, o qual tem apresentado atividade anti-inflamat?ria, antitumoral, antimutag?nica e forte a??o antioxidante. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do ?cido g?lico sobre a prolifera??o celular e par?metros inflamat?rios das c?lulas de carcinoma hep?tico (HepG2), assim como investigar os mecanismos envolvidos. A viabilidade celular foi avaliada atrav?s do ensaio colorim?trico MTT e contagem celular por exclus?o com Azul de Trypan. Os resultados mostraram que o ?cido g?lico reduziu a prolifera??o celular de maneira dose e tempo dependente, sem causar necrose (ensaio LDH). Observamos indu??o significante da apoptose atrav?s do ensaio PE Annexin V and 7-AAD e nenhuma interfer?ncia no ciclo celular utilizando o kit FITC BrdU Flow. Os n?veis de mediadores inflamat?rios foram medidos utilizando o kit Cytometric Bead Array Human Inflammation. Observamos redu??o significante nos n?veis da interleucina 8 (pr?-inflamat?ria e relacionada ? angiog?nese, invasividade e met?stases), aumento dos n?veis de interleucina 10 (anti-inflamat?ria e relacionada ? morte celular programada) e aumento dos n?veis de interleucina 12 (antiangiog?nica e antimetast?tica). N?s tamb?m avaliamos os n?veis de TGF(3 por ELISA (Enzyme?Linked lmmunosorbent Assay) e n?o observamos diferen?as significativas. A partir desses resultados, acreditamos que o ?cido g?lico tem forte potencial como agente antitumoral.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 460184.pdf: 1028375 bytes, checksum: 28478eee33cfe1af70ef0f52ca6b57b9 (MD5) Previous issue date: 2014-03-25 / Solanum tuberosum is one of the most important crops worldwide being the fourth most consumed food. Despite its importance, this crop presents a high susceptibility to a wide range of pathogens, leading to an extensive yield loss. A potential approach for disease control in potato is the understanding of the mechanisms of resistance induction and their relation to strengthening of natural plant defenses. In this work, the effect of defense inducers (XTH and Acibenzolar-S-methyl - Bion?) and ethylene blocker (aminoethoxyvinylglycine AVG) in the plant metabolism was assessed. Biochemical markers for plant defense, such as POX and PPO enzymes, synthesis of phenolic compounds, flavonoid fraction and salicylic acid accumulation were also evaluated. Bion? resulted in a negative effect upon P. carotovorum inoculated plants, whilst XTH delayed disease progression. Plants cultivated in the presence of Bion+AVG showed an increase in PPO activity comparing to the control plants, although its activity was similar between XTH and Bion? plants. POX activity was promoted by Bion? at 24 hpi, however, at 72 hpi plants showed higher POX activity within XTH+AVG and Bion+AVG treated plants, compared with non-treated plants. In general, plants presented free SA levels 65% higher than conjugated one. The highest concentrations of SA (52.2 μg/g) was found in Bion+AVG treated plants, whilst the lowest concentrations (4.8 μg/g) were found in XTH and AVG treated plants. / A esp?cie Solanum tuberosum ? uma das esp?cies vegetais de maior import?ncia no mundo, sendo a batata o quarto alimento mais consumido. Por?m, apesar do uso extensivo de pesticidas, esta cultura ainda ? muito afetada por doen?as, acarretando grandes perdas econ?micas. Uma importante alternativa ao uso de qu?micos para o manejo das pragas, ? o fortalecimento das defesas naturais da planta atrav?s da promo??o de seus mecanismos de defesa. Neste trabalho foi avaliada a incid?ncia da doen?a causada por Pectobacterium carotovorum e o metabolismo vegetal relacionados ? defesa, tal como atividade das enzimas peroxidases (POX) e polifenoloxidases (PPO), s?ntese de compostos fen?licos, flavonoides e o ac?mulo de ?cido salic?lico (AS) livre e conjugado. Foram utilizados os indutores de defesa XTH e o Bion?, bem como o bloqueador da s?ntese de etileno, AVG (aminoetoxivinilglicina), em plantas de batata cultivadas in vitro. O tratamento com Bion? n?o promoveu a resist?ncia vegetal nas plantas inoculadas com P. carotovorum. Enquanto o uso do XTH foi eficiente na promo??o de resist?ncia das plantas, retardando o progresso da doen?a causada pela fitobact?ria. Em plantas cultivadas na presen?a de Bion+AVG, foi observado um aumento na atividade de PPO em compara??o com o controle, por?m a atividade desta enzima ? semelhante entre os tratamentos XTH e Bion?. Nas plantas do tratamento XTH+AVG a atividade da PPO se mant?m semelhante ?s plantas do controle e do tratamento XTH. A atividade da POX foi promovida pelo tratamento Bion? em 24 horas p?s-inocula??o (hpi), enquanto que os tratamentos XTH+AVG e Bion+AVG induziram a maior atividade desta enzima em 72 hpi. Apesar das diferen?as observadas nas atividades de PPO e POX, estas n?o apresentaram rela??o com a incid?ncia da doen?a nas plantas. Em geral, os n?veis de AS livre nos tecidos foi 65% maior que o AS conjugado. Em 24hpi, as plantas do tratamento Bion+AVG apresentaram os maiores n?veis de AS livre (52,2 μg/g), enquanto os o tratamento XTH e AVG apresentaram os menores n?veis de AS (4,87 e 4,82 μg/g, respectivamente).

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 462325.pdf: 1364561 bytes, checksum: 19bc55cdfda395e1b4a89ba3de34a12a (MD5) Previous issue date: 2014-08-06 / Esophageal cancer is the eighth most common cancer worldwide. The prognosis for this cancer is poor, generally, the overall survival rate is 10-15% with about five years of survival. Adenosine is present in different tissues of various organisms and plays an extremely important role in the purinergic system. Adenosine is produced directly or indirectly by ATP and its target P1 receptors which are G-protein coupled (A1, A2A, A2B and A3). Caffeine is a non-selective adenosine antagonist and has low affinity for A3 great affinity for A1, A2A and A2B. The objective of this study was to investigate the role of P1 purinergic receptors and the action of caffeine on the proliferation of squamous cell carcinoma of the esophagus, using the human lineage of squamous cell esophageal OE21. First we demonstrated that P1 receptors are expressed in the cell line by means of qRT-PCR and still A2A receptor expression was significantly reduced when these cells were treated with caffeine (100 &#956;M). In addition to the caffeine treatment also decreases cell proliferation (1, 5 e 10 mM) and this effect was most likely a type of non-apoptotic cell death. Similarly, adenosine decreases cell viability (1, 5 and 10 mM) and proliferation (5 mM) via apoptosis and dipyridamole (10 &#956;M) affect cell viability and did not alter the type of death caused. These results demonstrate the in vitro investigation of adenosine and caffeine in esophageal cancer receptors and this is a first step to understanding of purinergic signaling in esophageal cancer. / O c?ncer de es?fago ? o oitavo c?ncer mais comum no mundo. O progn?stico para esse tipo de c?ncer ? ruim, geralmente, a taxa de sobreviv?ncia global ? de 10-15% com cerca de cinco anos de sobrevida. A adenosina est? presente em diferentes tecidos de v?rios organismos e tem um papel extremamente importante no sistema purin?rgico. Ela ? produzida direta ou indiretamente atrav?s do ATP e tem como alvo receptores purin?rgicos P1 que s?o acoplados ? prote?na G (A1, A2A, A2B e A3). A cafe?na ? um antagonista n?o seletivo de adenosina e tem baixa afinidade pelos receptores A3 e grande afinidade pelos receptores A1, A2A e A2B. O objetivo deste trabalho foi investigar o papel dos receptores purin?rgicos P1 e a a??o da cafe?na e da adenosina na prolifera??o de carcinoma de c?lulas escamosas de es?fago, utilizando a linhagem humana de carcinoma de c?lulas escamosas de es?fago OE21. Primeiro demonstramos que os receptores P1 est?o expressos na linhagem celular atrav?s de qRT-PCR, e que a express?o do receptor A2A foi significativamente reduzida (p<0,05) quando essas c?lulas foram tratadas com cafe?na (100 &#956;M). Em adi??o o tratamento com a cafe?na tamb?m diminui significativamente a viabilidade (1, 5 e 10 mM) das c?lulas e este efeito foi provavelmente um tipo de morte celular n?o-apopt?tica. De modo semelhante, a adenosina diminui a viabilidade celular (1, 5 e 10 mM) e a prolifera??o (5 mM) atrav?s de apoptose, e o dipiridamol (10 &#956;M) afetou a viabilidade celular e n?o alterou o tipo de morte causada. Estes resultados demonstram, atrav?s de investiga??o in vitro, a a??o dos receptores P1 adenosina e da cafe?na no c?ncer de es?fago e este ? um primeiro passo para entender de sinaliza??o purin?rgica no c?ncer de es?fago.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 391320.pdf: 471273 bytes, checksum: c2ed17923e23797f5ce8bb0432ca133d (MD5) Previous issue date: 2007-05-07 / Objetivo: Investigar se h? associa??o entre as variantes polim?rficas 896A>G (Asp299Gly) e 1196C>T (Thr399Ile) do gene que codifica para o toll like receptor 4 (TLR4) e a suscetibilidade a sepse e ?s disfun??es org?nicas em pacientes com condi??es cr?ticas de sa?de. Pacientes e M?todos: Foram selecionados para este estudo 107 pacientes com sepse secund?ria a infec??o por bact?rias Gramnegativas, internados na unidade de tratamento intensivo geral (UTI) do Hospital S?o Lucas da PUCRS, admitidos de mar?o de 2002 a dezembro de 2005. O grupo controle foi constitu?do por 111 amostras de DNA de doadores volunt?rios oriundos da mesma popula??o ga?cha. A disfun??o org?nica dos pacientes s?pticos foi avaliada durante a primeira semana ap?s admiss?o na UTI, atrav?s do escore SOFA, e foram consideradas as ocorr?ncias de choque s?ptico e ?bito. Os gen?tipos das variantes polim?rficas 896A>G e 1196C>T foram determinados por an?lise de fragmentos de restri??o dos produtos da rea??o em cadeia da polimerase (PCR). Ap?s, foi analisada a freq??ncia da distribui??o dos gen?tipos e dos alelos entre os grupos de pacientes e de indiv?duos saud?veis. Resultados: A freq??ncia de heterozigotos 896AG foi significativamente mais elevada entre pacientes s?pticos (26%; 28/107) do que entre indiv?duos saud?veis (10%; 11/111) (P=0,002; OR=3,22, CI95%: 1,43-7,38), da mesma forma como foi mais elevada se comparados pacientes com choque s?ptico (24%; 18/74) e saud?veis (P=0,008; OR=2.92, CI95%: 1,20-7,17). Correspondentemente, houve maior freq??ncia do alelo 896G entre pacientes s?pticos (13%; 28/214) que controles (5%; 11/222) (P=0,003; OR=2,89, CI95%: 1,33-6,36), e entre pacientes com choque s?ptico (14%; 18/148) que indiv?duos saud?veis (P=0,011; OR=2,66, CI95%: 1,15-6,23). Pacientes 1196CT+1196TT apresentaram escores SOFA m?dios mais altos (8.12?3.89) que pacientes 1196CC (6.82?3.52) (Mann-Whitney test, P=0,007). Portadores do alelo 1196T apresentaram durante a primeira semana de interna??o na UTI significativamente mais casos de escores SOFA ? 7 (69%; 49/71) que homozigotos 1196CC (49%; 304/626) (Chi-square test, P=0,043; OR=1.62, CI95%:0.99-2.67). N?s observamos que a heran?a de qualquer tipo de alelo n?o interfere nas taxas de mortalidade dos pacientes. Conclus?o: As variantes polim?rficas -896A>G e 1196C>T do TLR4 podem estar associadas com a uma maior suscetibilidade ao desenvolvimento de disfun??es org?nicas graves e sepse nos pacientes cr?ticos.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 392209.pdf: 426995 bytes, checksum: 609202380687c41a2d2de632a69b5931 (MD5) Previous issue date: 2007-06-04 / O ?xido n?trico endotelial (NO) ? um importante fator para a regula??o do t?nus vascular e foi sugerido que o mesmo est? envolvido em muitos eventos de processos aterog?nicos. A ruptura da placa endotelial pode representar o substrato patomorfol?gico da s?ndrome coronariana aguda (SCA). Os polimorfismos no gene que codifica para eNOS (NOS3) -786T>C (na regi?o promotora), 894G>T (exon 7) e o VNTR no Intron 4, podem estar envolvidos com uma maior suscetibilidade a SCA. O presente estudo investigou a intera??o destes polimorfismos (freq??ncias al?licas, genot?picas e hapl?tipos) e fatores de risco cardiovascular em 135 pacientes com SCA e 115 controles. N?o encontramos associa??o estat?stica entre as freq??ncias al?licas e genot?picas entre os grupos estudados. Encontramos associa??o para o gen?tipo TT (894G>T) comparado ao GT+GG (OR 1,4; IC 95% 1,0-1,8). Nenhuma intera??o significativa foi encontrada entre os fatores de risco cardiovascular e os polimorfismos -786T>C e VNTR intron 4 a/b. Indiv?duos sem dislipidemia e com o gen?tipo intron 4 a/b apresentaram menores chances de desenvolver SCA. Indiv?duos sem diabetes e com gen?tipo 894TT demonstraram maior risco para SCA (OR 1.64, IC 95% 1.18-2.26). Pacientes sem dislipidemia e com gen?tipo 894GG tiveram uma tend?ncia a ser fator protetor para SCA (OR 0.77, IC 95% 0.59-1.00). Tamb?m, o gen?tipo 894GG foi fator protetor contra SCA no sexo feminino (OR 0.48, IC 95% 0.24-0.94). Os resultados sugerem que os polimorfismos de eNOS estudados n?o s?o fatores de risco independente, mas que eles atuam como um fator de risco adicional no desenvolvimento de SCA

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_FatorCrescimentoNervo.pdf: 4604382 bytes, checksum: f9b5eda58c060afdfa49a3e598187ac2 (MD5) Previous issue date: 2015 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O fator de crescimento do nervo (NGF) pode retardar a degeneração celular na retina de ratos em diferentes injúrias retinianas. O acúmulo de água em células da retina contribui para o desenvolvimento de edema retiniano e degeneração neuronal. Em atribuição ao seu efeito protetor, este trabalho teve por objetivo avaliar se o NGF influencia o edema celular osmótico em células de Müller e células bipolares. Assim, montagens planas, fatias de retina e células isoladas da retina de ratos foram superfundidas com solução hipo-osmótica na presença de BaCl2. Secções retinianas foram utilizadas para imunomarcações, e a liberação de adenosina foi medida por cromatografia líquida de alta eficácia, em montagens planas. A área de secção transversal celular foi medida antes e após a superfusão em meio hipo-osmótico, em fatias de retina e suspensões celulares. Tanto células de Müller quanto células bipolares foram imunopositivas para TrkA, mas somente células de Müller foram marcadas contra p75NTR e NGF. A hipo-osmolaridade induziu um rápido e significativo aumento da liberação de adenosina endógena em retinas controle, mas não em retinas perfundidas com BaCl2. O NGF inibiu o edema citotóxico em células de Müller e em células bipolares em fatias de retina controle e retinas pós-isquêmicas submetidas a condições hipo-osmóticas. Por outro lado, NGF impediu o edema citotóxico da célula de Müller isolada, mas não da célula bipolar isolada (em meio hipo-osmótico contendo íons Ba2+). Isto sugere que NGF induz a liberação de fatores por células de Müller, os quais inibem o edema citotóxico de células bipolares em fatias de retina. O efeito inibitório do NGF sobre o edema citotóxico de células de Müller foi mediado pela ativação do receptor TrkA, mas não de p75NTR, e foi anulado por bloqueadores de receptores metabotrópicos de glutamato, receptores de adenosina A1, e receptores do fator de crescimento de fibroblasto (FGF). O bFGF evitou o edema citotóxico de células de Müller isoladas, mas inibiu somente em parte o edema citotóxico de células bipolares isoladas. O bloqueio de FGFR impediu o efeito inibidor de edema celular da adenosina, sugerindo que a liberação de bFGF ocorre após à ativação autócrina/parácrina de receptores Al. Além de bFGF, GDNF e TGF431 reduziram em parte o edema citotóxico da célula bipolar. Estes dados sugerem que o efeito neuroprotetor do NGF é em parte mediado pela prevenção de edema citotóxico de células gliais e bipolares da retina. / Nerve growth factor (NGF) stimulates two types of receptors (TrkA and p75NTR), and it delays cell degeneration in rats under several retinal injuries, including retinitis pigmentosa, glaucoma and retinal ischemia. Because water accumulation in retinal neurons and glial cells are pathogenic factors involved in retinal degeneration under ischemic-hypoxic and inflammatory conditions, we tested whether NGF may influence the osmotic swelling of rat Müller glial and bipolar cells. Retinal slices and freshly isolated cells were perfused with hypoosmotic solution in the presence of BaCl2. Post-ischemic retinal cells were also superfused with hypoosmotic solution in the absence of BaCl2. We observed that NGF inhibits the osmotic swelling of rat retinal glial (Müller) and bipolar cells induced by superfusion of retinal slices with a hypoosmotic solution containing barium ions. NGF also reduced the hypoosmotic swelling of Müller and bipolar cells in the post-ischemic retina. On the other hand, NGF prevented the swelling of freshly isolated Müller cells, but not of isolated bipolar cells. This suggests that NGF induces a release of factors from Müller cells which inhibit the swelling of bipolar cells in retinal slices. The inhibitory effect of NGF on the Müller cell swelling was mediated by activation of TrkA, but not p 75NTR, and was prevented by blockers of metabotropic glutamate receptors, purinergic P2Y1 receptors, adenosine A1 receptors, and fibroblast growth factor (FGF) receptors. bFGF fully prevented the osmotic swelling of isolated Müller cells, but inhibited only in part the swelling of isolated bipolar cells. Because inhibition of FGF receptors prevented the swelling-inhibitory effect of adenosine, it is suggested that NGF-induced autocrine/paracrine activation of adenosine A1 receptors induces a release of bFGF from Müller cells. In addition to bFGF, GDNF and TGF431 reduced in part the swelling of bipolar cells. Both Müller and bipolar cells displayed TrkA immunoreactivity, while Müller cells were also immunostained for p75NTR and NGF. The data may suggest that the neuroprotective effect of NGF in the retina is in part mediated by prevention of the cytotoxic swelling of retinal glial and bipolar cells.

Nas células do ceco anterior de A.flavolineata, a secreção de enzimas digestivas parece ser mediada por vesículas de secreção e é influenciada pelo tempo decorrido após a refeição. Fracionamentos subcelulares das células do ceco anterior realizados 3h após a refeição indicaram que a amilase, maltase, pN&#934;&#946;glu hidrolase e aminopeptidase estão enriquecidas nas frações que contém os grânulos de secreção. &#947; glutamil transferase, aminopeptidase e dipeptidase apresentaram uma forma solúvel e outra ligada a membrana. No conteúdo do intestino de A. flavolineata foi possível detectar a presença de 3 &#946;-glucosidases: 1, uma celobiase-aril &#946;-glucosidase termoestável; 2, uma aril &#946;-glucosidase termoinstável ativa sobre pN&#934;&#946;glu; 3, uma alquil &#946;-glucosidase. A celobiase-aril &#946;-glucosidase hidrolisa celobiose e aril &#946;-glucosídeos em sítios diferentes e é mais ativa sobre celobiose e laminaribiose que sobre aril &#946;-glucosídeos sintéticos ou naturais. Moléculas anfipáticas ativam a alquil &#946;-glucosidase, tornando esta enzima efetivamente ativa apenas na digestão de membranas. Esta enzima hidrolisa alquil &#946;-glucosídeos com 6 a 11 carbonos no radical alquil. A celobiase-aril P-glucosidase e a alquil &#946;-glucosidase são provavelmente responsáveis pela digestão \"in vivo\" de &#946;-1,4; &#946;-1,3; &#946;-1,3-1,4 glucanas e glucosilceramidas, respectivamente. / The secretion of digestive enzymes in the anterior caecal cells of A. flavolineata seems to be mediated by secretory vesicles and influenced by the period of time after a meal. Subcellular fractions of anterior caecal cells were obtained by differential centrifugation of homogenates prepared 3 hours after a meal. Amylase, maltase, pN&#934;&#946;glu hidrolase and aminopeptidase are found with high activities in fractions that correspond to the contents of secretory vesicles. &#947; glutamil transferase, aminopeptidase and dipeptidase presented soluble and membrane-bound forms. In A. flavolineata midgut contents we found 3 &#946;-glucosidases: 1, a heat-stable cellobiase-aryl &#946;-glucosidase; 2, a heat-unstable activity against pN&#934; &#946; glu (aryl &#946;-glucosidase); 3, a alkyl &#946;-glucosidase. The cellobiase-aryl &#946;-glucosidase hydrolyzes cellobiose and aryl &#946;-glucosides at different active sites and is more active on cellobiose and laminaribiose than on aryl &#946;-glucosides. Amphipatic molecules activate the alkyl &#946;-glucosidase, making the enzyme very active only during membrane digestion. This enzyme hydrolyzes alkyl &#946;-glucosides with 6 to 11 carbons in alkyl moiety. The cellobiase-aryl &#946;-glucosidase and alkyl &#946;-glucosidase are probably responsible for in vivo digestion of &#946;-1,4; &#946;-1,3; &#946;-1,3-1,4 glucans and glucosylceramides, respectively.