Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 411286.PDF: 549164 bytes, checksum: 734a48776e052e1d86baccb49d04044f (MD5) Previous issue date: 2009-03-31 / Introdu??o: A asma ? uma doen?a inflamat?ria cr?nica e os glicocortic?ides (GCs) s?o a terapia mais efetiva para o controle da doen?a. Um subgrupo de paciente com asma severa ? resistente aos GCs, mas n?o h? dados a respeito da sensibilidade aos GCs em crian?as com essa doen?a. Objetivos: A inten??o deste estudo ? analisar a sensibilidade das c?lulas mononucleares do sangue perif?rico (PBMC) aos GCs al?m de marcadores inflamat?rios no plasma de crian?as com asma persistente. M?todos: Os pacientes com asma persistente (n=57) foram divididos em tr?s grupos (severa, moderada e leve), e comparados com crian?as saud?veis (n=18). PBMCs foram isoladas e postas em cultura in vitro para testar a prolifera??o induzida por mit?geno assim como a sensibilidade celular ? dexametasona. Quimiocinas do plasma (CCL2, CCL3, CCL5, CCL11, CCL22, CCL24, CXCL9, CXCL10 e IL-8), receptores sol?veis de TNF e fator neurotr?fico derivado do c?rebro (BDNF) foram analisados com ELISA. Principais Resultados: Pacientes com asma leve apresentaram uma relativa resist?ncia ? dexametasona. Pacientes com asma moderada e severa mostraram ter n?veis de BDNF mais elevados (p < 0.01) quando comparados com os pacientes com asma leve e controles, sendo o melhor marcador de severidade neste estudo. Conclus?es: PBMCs derivadas de crian?as com asma severa n?o s?o resistentes aos GCs in vitro. BDNF Plasm?tica ? um potencial marcador da progress?o da doen?a em crian?as asm?ticas. Nossos achados sugerem que a resist?ncia aos GCs em adultos com asma severa possa ser um processo adquirido.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 412181.pdf: 1636756 bytes, checksum: 3138ac69bb4f361c6d1b29069af27d7a (MD5) Previous issue date: 2009-03-26 / O Toll-like receptor 2 (TLR2) ? um receptor de reconhecimento de microorganismos que identifica um amplo repert?rio de padr?es moleculares associados a pat?genos. Entre os polimorfismos j? descobertos no gene que codifica para o TLR2, dois SNPs (single nucleotide polimorphism) (supposed-2029C>T e 2258G>A) podem estar relacionados com a redu??o da ativa??o do NF-kB e, consequentemente, com o aumento do risco ?s doen?as infecciosas. O objetivo deste estudo foi investigar os SNPs supposed-2029C>T e 2258G>A do TLR2 em 422 pacientes criticamente doentes oriundos de uma popula??o do sul do Brasil (295 com sepse e 127 sem sepse), e realizar uma revis?o sistematizada de 33 trabalhos publicados sobre esses SNPs conduzindo um estudo de avalia??o de qualidade com um sistema de escores. Entre os pacientes admitidos no estudo foi encontrado apenas um heterozigoto (0,2%; 1/422) para o SNP supposed-2029C>T e nenhum para o SNP 2258G>A (0%; 0/422). Assim, n?o foi poss?vel identificar qualquer aplicabilidade cl?nica entre esses SNPs do TLR2 nos pacientes cr?ticos do sul do Brasil. A revis?o sistematizada detectou que os atuais trabalhos com tais SNPs do TLR2 apresentam conclus?es controversas e contradit?rias resultantes de estudos com uma ampla variedade de crit?rios de qualidade. Os resultados sugerem que, quando analisados individualmente, os SNPs supposed-2029C>T e 2258G>A n?o s?o bons candidatos para os trabalhos que buscam por aplica??es cl?nicas diretas entre gen?tipo e fen?tipo. Esfor?os futuros para aumentar o conhecimento e para realizar an?lises simult?neas com outros polimorfismos poder?o revelar efeitos mais efetivos do TLR2 na susceptibilidade ?s doen?as infeciosas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 416169.pdf: 1529649 bytes, checksum: 8c095797ae251585e66c0abd34901a5c (MD5) Previous issue date: 2009-08-25 / Mem?rias s?o armazenadas como modifica??es estruturais e funcionais das conex?es sin?pticas nas regi?es neurais envolvidas no aprendizado e, por sua relev?ncia biol?gica e rela??o com patologias do sistema nervoso humanas, a busca pela elucida??o dos mecanismos respons?veis por sua manuten??o tem recebido interesse de distintas ?reas do conhecimento ao longo dos anos. Estudos sobre os mecanismos neurais das mem?rias de longa dura??o demonstraram que sua forma??o ? um processo gradual que envolve substratos neuroanat?micos e celulares agora conhecidos em grande extens?o, e cujas bases moleculares s?o alvo de intensa investiga??o. O peixe tele?steo zebrafish ? um excelente modelo animal para estudos gen?ticos e de desenvolvimento e v?m mostrando enorme potencial para estudos de aprendizagem e mem?ria. Este vertebrado de f?cil manipula??o apresenta r?pido desenvolvimento externo e manuten??o pr?tica e econ?mica. Em termos neuroanat?micos, apesar das diferen?as entre aspectos do desenvolvimento e resultante disposi??o de regi?es cerebrais de mam?feros e tele?steos, a organiza??o geral do enc?falo do zebrafish segue padr?es t?picos dos vertebrados. Avan?os recentes no conhecimento demonstram que h? uma extensa similaridade, tanto em complexidade quanto em funcionamento entre o c?rebro de peixes tele?steos e os vertebrados terrestres o que valida o uso deste modelo animal para estudo dos mecanismos conservados do aprendizado e mem?ria. Embora j? existam na literatura cient?fica estudos avaliando par?metros comportamentais do zebrafish, na maior parte das vezes o foco principal dos trabalhos n?o ? a cogni??o. Aspectos como locomo??o e explora??o do ambiente s?o tomadas como medidas e os trabalhos publicados n?o mostram const?ncia em rela??o ?s tarefas utilizadas e protocolos adotados. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um novo paradigma de esquiva inibit?ria para zebrafish a fim de permitir a avalia??o dos mecanismos celulares e moleculares da forma??o de mem?ria em vertebrados. Para tanto, o treino consistiu de apenas uma sess?o onde os animais foram colocados individualmente no aqu?rio de esquiva inibit?ria. Ao cruzar para o lado escuro do aqu?rio um choque el?trico foi administrado por 5s e estes animais retirados imediatamente do aqu?rio. Na sess?o de teste, realizada 24 h depois, seguiu-se o mesmo protocolo, por?m nenhum choque foi utilizado. As lat?ncias de entrada no lado escuro para o treino e o teste foram consideradas como indicadoras de reten??o. Para a valida??o da tarefa um grupo de animais foi tratado durante 15 min p?s-treino com o antagonista de receptor NMDA MK-801 numa concentra??o de 20 &#956;M. Os resultados obtidos demonstram que a tarefa de esquiva inibit?ria desenvolvida para zebrafish ? baseada em mecanismos conservados em que o aprendizado, e resultante mem?ria, s?o dependentes de sinaliza??o glutamat?rgica mediada por NMDA, assim como j? evidenciado para outros vertebrados. A tarefa desenvolvida ? r?pida, simples e resulta em um aprendizado robusto, s?lido e persistente, representando um instrumento valioso para se caracterizar diferentes processos que afetam o comportamento no zebrafish, bem como permitir a disseca??o dos eventos tempos-dependentes da forma??o de mem?rias de vertebrados.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:50:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 418471.pdf: 941887 bytes, checksum: 83e65c46f62b9cf566ee10180ce3d11c (MD5) Previous issue date: 2009-03-19 / O receptor B&#8321; para as cininas est? normalmente ausente durante condi??es fisiol?gicas podendo ser rapidamente induzido em resposta a diversos est?mulos, como os processos infecciosos. Apesar disso, n?o existem estudos indicando como o LPS de Porphyromonas gingivalis (Pg-LPS), um ativador preferencial de TLR2, pode induzir a express?o do receptor B&#8321;. No presente trabalho, foi demonstrado que a inje??o do Pg-LPS na pata de rato resulta na indu??o funcional tempo-dependente dos receptores B&#8321; (determinada pelo aumento marcante na resposta edematog?nica), que foi precedida pelo r?pido aumento na express?o do seu RNAm. A administra??o local de Pg-LPS produziu um aumento marcante na produ??o da citocina pr?-inflamat?ria TNF-G e do influxo de neutr?filos. Ambos os eventos foram observados anteriormente ? indu??o dos receptores B&#8321;. A indu??o funcional e molecular do receptor B&#8321; pelo Pg-LPS foi reduzida significantemente pelo glicocortic?ide dexametasona e pelo anticorpo monoclonal anti- TNF-G infliximab. De grande relev?ncia, foi demonstrado pela primeira vez, que uma ?nica administra??o de Resolvina E1, um mediador lip?dico pr?-resolu??o da inflama??o, foi capaz de produzir uma redu??o marcante na express?o dos receptores B&#8321; mediada pelo Pg-LPS, provavelmente inibindo produ??o de TNF-G e a migra??o de neutr?filos para o s?tio inflamat?rio. Analisados em conjunto, os dados obtidos permitem inferir que a ativa??o do TLR2 pelo Pg-LPS ? capaz de induzir a express?o dos receptores B&#8321;, atrav?s de mecanismos relacionados ? produ??o de TNF-G e ao influxo de neutr?filos, que s?o sens?veis a Resolvina E1. Assim, ? poss?vel sugerir que os receptores B&#8321; representam uma via importante nas respostas inflamat?rias desencadeadas pela P. gingivalis e seus fatores de virul?ncia.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 422465.pdf: 2691735 bytes, checksum: 1455a538e61f307699a636bd9041725c (MD5) Previous issue date: 2010-01-28 / A homeostasia sist?mica e celular do ferro ? regulada por uma s?rie de prote?nas que controlam a capta??o, o transporte, o armazenamento e a utiliza??o deste metal. O per?odo neonatal ? cr?tico para o estabelecimento da concentra??o de ferro no c?rebro adulto. Al?m disso, tamb?m se sabe que a concentra??o de ferro aumenta nas regi?es cerebrais durante o processo de envelhecimento. N?veis anormalmente elevados de ferro s?o observados no c?rebro de pacientes que apresentam doen?as neurodegenerativas, entretanto os mecanismos envolvidos no ac?mulo de ferro ainda n?o s?o claros. Neste estudo n?s investigamos os efeitos do envelhecimento e da sobrecarga de ferro neonatal na express?o de RNAm de prote?nas criticamente envolvidas no controle da homeostasia do ferro: Receptor de Transferrina (TfR), H-ferritina, IRP2, Transportador de Metal Divalente 1 (DMT1), Ceruloplasmina (CP) e Hepicidina. Ratos Wistar filhotes receberam uma ?nica dose di?ria de ve?culo (5% sorbitol em ?gua) ou ferro (10 mg/kg de peso corporal de Fe2+), do 12? ao 14? dia de vida p?s-natal. As express?es de RNAm destas prote?nas foram analisadas por RT-PCR, um m?todo semi-quantitativo, no c?rtex, hipocampo e estriado de ratos sacrificados em tr?s diferentes idades (15 dias; 90 dias e 2 anos de idade). Os resultados indicaram que a express?o de RNAm de TFR, H-ferritina a IRP2 foram diferentemente afetadas pelo envelhecimento e pelo tratamento neonatal com ferro nas diferentes regi?es do c?rebro estudadas. Tamb?m se observou que a express?o de RNAm de DMT1 e CP ? influenciada pela idade nos ratos controle. Al?m disso, nossos resultados sugerem que o tratamento neonatal com ferro afeta de forma diferente a express?o de RNAm de DMT1 no c?rtex e estriado de ratos jovens; e a express?o de RNAm de CP no c?rtex de ratos jovens, e no hipocampo de ratos velhos. Com rela??o ? Hepicidina, os resultados indicam que o tratamento com ferro no per?odo neonatal induz um aumento nos n?veis de RNAm no hipocampo de animais jovens. Estes resultados podem ajudar a entender de que maneira as altera??es na homeostasia do ferro podem estar associadas ? patog?nese das doen?as neurodegenerativas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 422656.pdf: 178694 bytes, checksum: 08cc79754d1c2a415b01732d55433825 (MD5) Previous issue date: 2010-03-10 / O receptor do pept?deo liberador de gastrina tem sido considerado como um novo alvo molecular em desordens do desenvolvimento neurol?gico. Estudos pr?vios realizados em nosso laborat?rio demonstraram que o bloqueio farmacol?gico do GRPR durante o per?odo neonatal em ratos produz caracter?sticas comportamentais que tem sido associadas com dist?rbios autistas, tais como d?ficits de comportamento social. Altera??es no comportamento de estabelecimento de v?nculos podem desempenhar um papel importante na disfun??o de comportamento social apresentada por crian?as autistas. Ratos filhotes machos receberam duas inje??es intraperitoneais di?rias do antagonista do GRPR (RC-3095) do 1? ao 10? dia de vida p?s-natal. No 11? dia de vida os filhotes foram submetidos ? tarefa de prefer?ncia pelo odor materno e ao completarem 15 dias, ? tarefa de condicionamento aversivo ao odor. Os resultados do presente trabalho demonstram que o bloqueio do GRPR no per?odo neonatal pela administra??o sist?mica do antagonista RC-3095 induz uma redu??o na prefer?ncia pelo odor materno, uma tarefa que envolve o comportamento de apego, em ratos lactentes. Provavelmente, este efeito prejudicial possa representar uma disfun??o espec?fica no comportamento de apego mais do que um preju?zo no aprendizado do odor, pois animais que receberam RC-3095 mostraram uma resposta normal ao condicionamento aversivo ao odor. Estes resultados fornecem a primeira evid?ncia de que o GRPR regula o comportamento de prefer?ncia materna e s?o consistentes com a vis?o de que o GRPR est? envolvido com mecanismos comportamentais associados a perturba??es do desenvolvimento neurol?gico.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 423973.pdf: 5152815 bytes, checksum: 3f42470496ad512568213b1ba315237c (MD5) Previous issue date: 2010-03-03 / O processo de envelhecimento ? caracterizado por altera??es morfologias e fisiol?gicas ao longo do tempo. No c?rebro, este processo ? marcado por altera??es estruturais e funcionais levando a disfun??o e ao decl?nio cognitivo. Nos mam?feros o ferro ? encontrado em diversas ?reas do c?rebro, sendo essencial em muitos processos bioqu?micos que s?o importantes no desenvolvimento e manuten??o das fun??es neurobiol?gicas normais. Estudos revelam que h? aumento do conte?do de ferro tanto em c?rebros de ratos velhos como em humanos idosos quando comparados com indiv?duos jovens, indicando que durante o processo de envelhecimento existe um desequil?brio no metabolismo desse metal. Com o avan?o da idade, h? aumento da morte celular programada que est? relacionada a desordens neurol?gicas. A apoptose envolve cascatas de sinaliza??o que s?o ativadas em diversas situa??es. Dentre as proteases envolvidas, a Par-4 e caspase-3 apresentam importante papel na sinaliza??o apopt?tica. Par-4 foi primeiramente identificada entre genes pr?-apopt?ticos ativados em resposta a insultos ?s c?lulas cancerosas na pr?stata. A caspase executora caspase-3, pertence a fam?lia de enzimas proteol?ticas com res?duo ciste?na no seu s?tio catal?tico que cliva prote?nas em res?duos aspartato. Esta protease ? importante no controle da apoptose no tecido nervoso respons?vel pela transdu??o e execu??o dos sinais de morte. Devido ? car?ncia de estudos que relacionem as prote?nas pr?apopt?ticas Par-4 e caspase-3 em modelos de neurodegenera??o incluindo a aus?ncia de trabalhos que relacionem estas proteases com estudos sobre os efeitos do ferro no sistema nervoso, este trabalho teve como objetivo avaliar altera??es destas prote?nas nas regi?es do hipocampo, estriado e c?rtex de ratos adultos (3 meses) e idosos (24 meses) controles ou tratados com ferro durante o per?odo neonatal atrav?s de imunohistoqu?mica. Para tanto, os animais controles foram tratados com dose oral di?ria de 5% sorbitol em ?gua e os animais experimentais com 10 mg Fe2+/kg de peso corporal do 12? ao 14? dia de vida p?s-natal. Os resultados obtidos mostram aumento da imunorreatividade de ambas prote?nas nas regi?es CA1, CA3 e c?rtex ao longo do envelhecimento normal. Imunorreatividade de Par-4 mostrou significante aumento nas regi?es CA1, CA3, DG e c?rtex nos animais adultos tratados com ferro e significante diminui??o nos animais velhos tratados com ferro em rela??o aos seus respectivos controles. Imunorreatividade de caspase-3 mostrou significante aumento nas regi?es CA1, CA3 e c?rtex nos animais adultos tratados com ferro e significante diminui??o nos animais velhos tratados com ferro. N?o houve diferen?a significativa no estriado para ambas prote?nas. Os resultados indicam que a sobrecarga de ferro no per?odo neonatal ocasiona maior apoptose na fase adulta, aumentando as chances de desenvolvimento de desordens neurol?gicas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 424565.pdf: 224491 bytes, checksum: 1caac1bc975e0c96c25d98d9d4776ccf (MD5) Previous issue date: 2010-05-04 / Para avaliar o grau de variabilidade gen?tica do gene pr1A de Metarhizium sp., 31 sequ?ncias completas foram analisadas conjuntamente com 25 sequ?ncias (sendo quatro sequ?ncias completas e 21 parciais) retiradas do GenBank. A diversidade global de nucleot?deos para pr1A foi 0,032. As ?rvores filogen?ticas, baseadas nas sequ?ncias desse gene, foram constru?das utilizando os m?todos neighbor-joining (NJ), m?xima parcim?nia (MP), m?xima verossimilhan?a (ML) e Infer?ncia Bayesiana (BI). O fungo entomopatog?nico Lecanicillium psalliotae foi utilizado como grupo externo em todas as an?lises filogen?ticas. Embora alguns valores de bootstrap tenham sido baixos, em geral, os clados foram consistentes, independentemente dos m?todos empregados. Os resultados dos dados das sequ?ncias n?o demonstraram uma liga??o clara entre as linhagens e os grupos de hospedeiros. Entretanto, alguns agrupamentos podem ser melhor correlacionados ? distribui??o geogr?fica. Al?m disso, algumas cepas, previamente classificadas como pertencentes ? variedade acridum e ? variedade majus, demonstraram perfis gen?ticos id?nticos ao Metarhizium anisopliae var. anisopliae, o que pode indicar a exist?ncia de uma classifica??o equivocada nas bases de dados taxon?micos existentes. Por fim, nossos resultados sugerem que a sele??o positiva pode ter influenciado parcialmente a atual diversidade do gene pr1A existente entre as cepas de Metarhizium anisopliae.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 425543.pdf: 747447 bytes, checksum: 25a6005ed4d57ac7cb87a5a7d22ed8de (MD5) Previous issue date: 2010-03-31 / O envelhecimento est? associado com o decl?nio progressivo nas fun??es do sistema imunol?gico (imunosenesc?ncia), tanto na imunidade humoral quanto na imunidade mediada por c?lulas, resultando em maior suscetibilidade a infec??es e c?ncer, al?m da diminui??o na capacidade de responder a vacinas. As c?lulas dendr?ticas (DCs) s?o as mais poderosas e eficientes apresentadoras de ant?genos (APC), desempenhando um papel primordial na apresenta??o e conseq?ente resposta imune mediada por c?lulas T. Poucos estudos enfocam a atividade das c?lulas dendr?ticas no envelhecimento, sendo que a maioria dos dados s?o relativos ?s fun??es das c?lulas T. As intera??es entre as c?lulas dendr?ticas e as c?lulas T afetam o processamento e consequente apresenta??o de ant?genos, influenciando a efetividade das respostas imunes mediadas por c?lulas T. Este trabalho teve como objetivo avaliar a capacidade estimulat?ria de c?lulas dendr?ticas de camundongos velhos em uma resposta espec?fica T CD4+ comparada ? resposta imune de camundongos jovens. Para isso, c?lulas T de camundongos transg?nicos TEa, espec?ficas para o complexo Ea:IAb foram transferidas para camundongos normais C57Bl/6, c?lulas T de camundongos jovens para animais velhos e jovens, e c?lulas T de camundongos velhos para animais velhos e jovens. Os resultados demonstram que, ap?s imuniza??o com o ant?geno EaRFP, tanto as c?lulas T jovens quanto as c?lulas T velhas foram estimuladas de modo semelhante por c?lulas dendr?ticas jovens. Contudo, c?lulas dendr?ticas de animais velhos n?o foram capazes de estimular suficientemente as c?lulas T de animais velhos nem mesmo as c?lulas T de animais jovens. Enquanto ambas as c?lulas T, jovens e velhas, adquiriram o fen?tipo CD44+ quando transferidas para os animais jovens, c?lulas T jovens transferidas para animais velhos n?o adquiriram o mesmo fen?tipo. Esse fato sugeriu que c?lulas dendr?ticas de animais velhos possuem baixa capacidade de estimular c?lulas T, mesmo que essas c?lulas venham de um animal jovem. N?s hipotetizamos que esse resultado poderia estar ligado a um n?mero extremamente diminu?do de c?lulas dendr?ticas nos animais velhos, ou ainda em uma defici?ncia em um dos sinais fornecidos pelas c?lulas dendr?ticas no priming de linf?citos T (apresenta??o de ant?geno ou sinais coestimulat?rios). O n?mero total de c?lulas dendr?ticas foi significativamente menor em camundongos velhos comparado a camundongos jovens. Al?m disso, o n?mero de c?lulas apresentando ant?geno foi menor no linfonodo drenante de animais velhos, e a express?o de CD86 por c?lulas dendr?ticas de animais velhos n?o foi diferente da dos animais jovens. Os resultados sugerem que a diminui??o da capacidade de apresenta??o de ant?geno apresentada no envelhecimento ? cr?tica para a perda do potencial estimulat?rio de c?lulas T CD4+ por c?lulas dendr?ticas.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 426061.pdf: 815660 bytes, checksum: a63907607c66f42025ef148afc7c6471 (MD5) Previous issue date: 2010-04-28 / O fator neurotr?fico conhecido como BDNF tem atra?do consider?vel aten??o na literatura cient?fica, pelo seu envolvimento em processos cruciais de desenvolvimento e regula??o do sistema nervoso. Entretanto, muitos aspectos desta mol?cula s?o ainda desconhecidos, enquanto outros foram investigados apenas em humanos e organismos-modelo. Neste contexto, ferramentas de bioinform?tica podem ser muito ?teis para realizar an?lises comparativas enfocando aspectos evolutivos, estruturais e funcionais. Este projeto objetivou uma caracteriza??o de padr?es de conserva??o e varia??o desta mol?cula atrav?s da compara??o das seq??ncias codificantes deste gene em diferentes linhagens de mam?feros, assim como uma investiga??o de aspectos estruturais atrav?s da constru??o de um modelo 3D do BDNF consistente com dados experimentais. Os resultados revelam padr?es bastante interessantes de conserva??o e varia??o de sequ?ncia em diferentes linhagens, incluindo fortes evid?ncias da ocorr?ncia de sele??o natural negativa (indicando restri??o ? mudan?a devido ? relev?ncia funcional) tanto no dom?nio maduro como no dom?nio pro. Al?m disso, observou-se evid?ncia de sele??o positiva (indu??o de mudan?as possivelmente adaptativas) em diferentes linhagens, em todos os casos afetando diretamente o dom?nio pro. Estes resultados indicam que o dom?nio pro apresenta grande relev?ncia funcional, e salientam a import?ncia de focar esfor?os de investiga??o experimental nesta por??o do BDNF.