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Modula??o da neurotransmiss?o colin?rgica como resposta aos efeitos causados pela exposi??o a nanopart?culas de ?xido de ferro revestidas com dextran-aminado utilizando zebrafish (Danio rerio) como modelo de estudoOliveira, Giovanna Medeiros Tavares de 24 July 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-07-24 / Superparamagnetic iron oxide nanoparticles (SPIONs) are of great interest in nanomedicine due to their capability to act simultaneously as a contrast agent in magnetic resonance imaging and as a targeted drug delivery system with good biocompatibility. At present, one of the biggest concerns about the use of SPIONs remains around its toxicity. For this reason, it is important to establish the safe upper limit for each use. In the present study, SPION coated with cross-linked and aminated dextran (CLIO-NH2) were synthesized by the co-precipitation method and characterized by transmission electron microscopy (TEM) and light scattering dynamics. The analysis of the elementary composition of the solution at the end of the synthesis was also performed. The magnetite core size was 5.5 ? 1.4 nm, on a concentration of 10 mg Fe-NPs/ml. We have evaluated the effects of different CLIO-NH2 doses (20, 50, 100, 140 and 200 mg/kg) as a function of time after exposure (one, 16, 24 and 48 hours) on AChE activity and ache expression in zebrafish brain. At tested concentrations, only the animals exposed to 200 mg/kg, and assessed 24 h after administration of the nanoparticles, have shown decreased AChE activity. These values returned to control levels after 48 h of exposition, indicating a transitory toxical effect. The RT-qPCR results suggested that inhibition of brain AChE is not directly related with the transcriptional control, and it was probably due to post-transcriptional events. Once ACh is recognized to play an important role in the regulation of locomotor control, we further evaluated parameters of zebrafish swimming activity. CLIO-NH2 at 200mg/kg, evaluated after 24 h, also impaired all the tested parameters of zebrafish swimming activity, i.e. decreased traveled distance, mean speed, number of line crossings, and turn angle. We further investigated the iron accumulation in zebrafish brain by ICP-MS, and a significant higher level of ferric iron was found in zebrafish brains exposed to CLIO-NH2. In summary, the results presented herein provide further experimental evidence that exposure to high doses of dextran-coated iron oxide nanoparticles can be transiently neurotoxic. / Nanopart?culas superparamagn?ticas de ?xido de ferro (SPIONs) s?o de grande interesse na nanomedicina, devido ? sua capacidade para agir, simultaneamente, como um agente de contraste em imagem por resson?ncia magn?tica e como um sistema de entrega de f?rmacos espec?ficos, possuindo boa biocompatibilidade. Atualmente, uma das maiores preocupa??es com a utiliza??o de SPIONs permanece em torno da sua toxicidade e, por esta raz?o, ? importante estabelecer um limite de seguran?a para sua utiliza??o. Neste estudo, SPIONs revestidas com dextran-aminado (CLIO-NH2) foram sintetizados pelo m?todo de co-precipita??o e caracterizadas por microscopia eletr?nica de transmiss?o (MET) e din?mica de espalhamento de luz. A an?lise da composi??o elementar da solu??o no final da s?ntese foi tamb?m realizada. O tamanho do n?cleo de magnetite foi de 5,5 ? 1,4 nm, com uma concentra??o de 10 mg Fe-NPs/ml. Foram avaliados o efeito de diferentes doses de CLIO-NH2 (20, 50, 100, 140 e 200 mg/kg), ap?s a exposi??o de CLIO-NH2 (em uma, 16, 24 e 48 h), sobre a atividade de AChE e sobre a express?o de ache em c?rebro de peixe-zebra. Nas concentra??es testadas, apenas os animais expostos a 200 mg/kg, testados 24 h ap?s a administra??o das nanopart?culas, demonstraram diminui??o da atividade da AChE. Quarenta e oito horas ap?s exposi??o a CLIO-NH2 os valores voltaram aos n?veis controle, indicando um efeito t?xico transit?rio. Os resultados de RT-qPCR sugerem que a inibi??o da AChE no c?rebro n?o est? diretamente relacionada com o controle da transcri??o e que esta relacionada com a modula??o de eventos p?s-transcricionais. Uma vez que a ACh ? reconhecida por desempenhar um papel importante na regula??o do controle locomotor, foram avaliados par?metros da atividade da nata??o do peixe-zebra. CLIO-NH2, ? 200 mg/kg, ap?s 24 h de tratamento, tamb?m prejudicou todos os par?metros testados de comportamento de nado, ocorrendo diminui??o da dist?ncia percorrida, velocidade, n?mero de cruzamentos de linha e ?ngulo de virada. Ainda foi analisado o ac?mulo de ferro no c?rebro de peixe-zebra, por ICP-MS, onde um n?vel significativamente maior de ferro f?rrico foi encontrado nos c?rebros de peixe-zebra expostos a CLIO-NH2 nas mesmas condi??es experimentais (200 mg/kg e 24 h de exposi??o). Concluindo, os resultados apresentados fornecem evid?ncias de que doses elevadas de nanopart?culas de ?xido de ferro, revestidas com dextran-aminado, podem produzir neurotoxicidade transit?ria, coincidente com n?veis cerebrais elevados de ferro, bem como as altera??es comportamentais.
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Dieta de cafeteria desde a lactac?o promove s?ndrome metab?lica e alterac?o na ac?o da risperidona sobre a ansiedade, locomoc?o, mem?ria e interac?o social de ratos WistarTeixeira, Amanda Escobar 23 May 2018 (has links)
Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2018-09-27T19:30:21Z
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Previous issue date: 2018 / Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM) / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos da dieta de cafeteria desde a lacta??o nos
par?metros nutricionais e na a??o da risperidona nos comportamentos de ansiedade,
locomo??o, mem?ria e intera??o social. Foram utilizadas 14 ninhadas de ratos da linhagem
Wistar (Rattus novergicus) alojados em gaiolas individuais, sob condi??es padr?o. Os ratos
machos de cada ninhada formaram, da lacta??o at? a fase adulta, os grupos: Controle (CTRL)
? receberam ra??o padr?o e ?gua ad libitum (n = 42); Cafeteria (CAF) ? receberam dieta de
cafeteria e ?gua ad libitum (n = 42). Entre o 114? e o 119? dia de vida, os animais foram
subdividos (n = 21) para receberem o tratamento com salina (CTRL-S e CAF-S) ou
risperidona (CTRL-R e CAF-R). Nesse per?odo foram realizados os testes comportamentais
do labirinto em cruz elevado, campo aberto, teste de reconhecimento de objetos e intera??o
social. No 119? os animais foram colocados em jejum, para que, no 120? dia fossem
anestesiados e eutanasiados por exsanguina??o. Foram avaliados: consumo de ra??o, ingest?o
cal?rica, peso corporal, ganho de peso, coeficiente de efici?ncia alimentar (CEA),
comprimento naso-anal e ?ndice de massa corporal (IMC); peso dos ?rg?os e do tecido
adiposo abdominal; teores de colesterol total e fra??es, triacilglicerol e glicemia do soro; teor
de lip?dios, colesterol total e triacilglicerol do f?gado e das fezes; estado redox do f?gado e de
diferentes por??es do enc?falo (c?rtex pr?-frontal e hipocampo). Foi utilizada an?lide de
vari?ncia (ANOVA) seguida de Newman Keuls quando necess?rio (P<0,05). O grupo CAF
demonstrou menor ingest?o alimentar e maior ingest?o cal?rica, devido ? densidade
energ?tica da dieta. O maior consumo cal?rico se configurou em maior ganho de peso, CEA,
IMC e ac?mulo de tecido adiposo abdominal. O grupo CAF tamb?m obteve eleva??o dos
n?veis de triacilglicerol plasm?ticoa, al?m de lip?dios e triacilglicerol hep?tico, que foram
classificados em esteatose hep?tica. Ao mesmo tempo, houve uma rela??o ruim entre as
fra??es do colesterol plasm?tico (HDL-c, LDL-c e VLDL-c), com aumento do risco de
doen?as aterog?nicas. Portanto, a dieta de cafeteria foi capaz de reproduzir um modelo de
obesidade humana e de s?ndrome metab?lica. Os animais do grupo de cafeteria apresentaram
caracter?sticas de estresse oxidativo no hipocampo, o que pode comprometer a fun??o dessa
estrutura e promover altera??es comportamentais. O grupo CAF - S obteve efeito ansiol?tico
devido ao maior n?mero de entradas e tempo gasto no centro do campo aberto, al?m de maior
locomo??o atrav?s do maior n?mero de quadrantes percorridos. CAF - S ainda demonstrou
preju?zos na mem?ria avaliados atrav?s do teste de reconhecimento de objetos e diminui??o
da intera??o social. Tais efeitos podem estar associados a altera??es no sistema
serotonin?rgico desses animais. CAF - R demonstrou efeito ansiog?nico e diminui??o na
locomo??o no campo aberto. No teste de reconhecimento de objetos, houve diminui??o na
intera??o com os objetos, sem, no entanto, melhorar o ?ndice de discrimina??o em rela??o a
CAF - S. No teste de intera??o social, CAF - R obteve maior sociabilidade. Os resultados da
administra??o da risperidona indicam que esta droga possui um efeito diferente quando
aplicada em animais que foram tratados com dieta de cafeteria desde a lacta??o. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2018. / The objective of this work was to evaluate the effects of the cafeteria diet from lactation on
the nutritional parameters and the action of risperidone on the behaviors of anxiety,
locomotion, memory and social interaction. Fourteen litters of Wistar rats (Rattus novergicus)
housed in individual cages were used under standard conditions. The male rats from each
litter formed from the lactation to the adult phase, the groups: Control (CTRL) - received
standard chow and water ad libitum (n = 42); Cafeteria (CAF) - received cafeteria diet and
water ad libitum (n = 42). Between days 114 and 119, animals were subdivided (n = 21) to
receive treatment with saline (CTRL-S, CAF-S) or risperidone (CTRL-R and CAF-R). During
this period, the behavioral tests of the plus maze size, open field, test of object recognition and
social interaction were performed. At 119? the animals were fasted, so that on the 120? day
they were anesthetized and euthanized by exsanguination. The following were evaluated: feed
intake, caloric intake, body weight, weight gain, food efficiency coefficient (FEC), naso-anal
length and body mass index (BMI); weight of organs and abdominal adipose tissue; levels of
total cholesterol and fractions, triacylglycerol and serum glycemia; lipid content, total
cholesterol, and triacylglycerol of liver and faeces; redox status of the liver and different
portions of the encephalon (prefrontal cortex and hippocampus). Variance analysis (ANOVA)
was used followed by Newman Keuls when necessary (p<0,05). The CAF group
demonstrated lower dietary intake and higher caloric intake, due to the energy density of the
diet. The highest caloric intake was in greater weight gain, FEC, BMI and abdominal adipose
tissue accumulation. The CAF group also achieved elevations in plasma triglyceride levels,
besides lipids and hepatic triacylglycerol, which were classified as hepatic steatosis. At the
same time, there was a poor relationship between fractions of plasma cholesterol (HDL-c,
LDL-c and VLDL-c), with increased risk of atherogenic diseases. Therefore, the cafeteria diet
was able to reproduce a model of human obesity and metabolic syndrome. The animals in the
cafeteria group presented oxidative stress characteristics in the hippocampus, which may
compromise the function of this structure and promote behavioral changes. The CAF - S
group had an anxiolytic effect due to the greater number of entrances and time spent in the
center of the open field, besides greater locomotion through the greater number of quadrants
traveled. CAF - S also demonstrated memory impairments assessed through the object
recognition test and decreased social interaction. Such effects may be associated with changes
in the serotonergic system of these animals. CAF - R demonstrated an anxiogenic effect and
decreased locomotion in the open field. In the object recognition test, there was a decrease in the interaction with the objects, without, however, improving the discrimination index in relation to CAF - S. In the social interaction test, CAF - R obtained greater sociability. The results of the administration of risperidone indicate that this drug has a different effect when applied in animals that have been treated with cafeteria diet since lactation.
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Polissacar?deos sulfatados da Alga Marrom Dictyopteris justii como agentes antioxidantes e inibidores da forma??o de cristais de oxalato de c?lcioMelo, Karoline Rachel Teodosio de 19 December 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-12-19 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Os cristais de Oxalato de C?lcio s?o os principais componentes dos c?lculos urin?rios e estes est?o intimamente relacionados com o estresse oxidativo na condi??o fisiopatol?gica da urolit?ase. Por causa disso, estudos recentes tem buscado componentes antioxidantes que tamb?m sejam capazes de inibir a forma??o desses cristais. Diante disso, esse trabalho tem como objetivo avaliar a atividade antioxidante de polissacar?deos sulfatados de alga marrons Dictyopteris justii e seu efeito sobre a cristaliza??o do oxalato de c?lcio in vitro. Assim, no presente estudo, quatro fra??es ricas em polissacar?deos sulfatados(DJ-0.3v, DJ-0.4v, DJ-0.5v, e DJ-1.2v) foram obtidas por prote?lise seguida de precipita??o sequencial com acetona a partir da esp?cie Dictyopteris justii. As an?lises qu?micas e o FT-IR mostraram que D. justii sintetiza popula??es de polissacar?deos sulfatados diferentes. A primeira, que se encontra em DJ-0.3v, ? rica em glicose, xilose e ?cido glucur?nico e apresenta tra?os de fucose; a segunda (DJ-0.4v), que tem como diferencial grandes quantidades de fucose; as duas popula??es que se encontram em DJ-0.5v e DJ-1.2v, que apresentam apenas glucose e tra?os de fucose, mas se diferenciam entre si pela quantidade de ?ons sulfato. Todos os polissacar?deos sulfatados extra?dos apresentaram atividade antioxidante para CAT, Poder Redutor e Quela??o de Cobre. No entanto, a fra??o DJ-0.4v foi a que apresentou melhor atividade antioxidante como tamb?m foi o que teve melhor capacidade de inibir a cristaliza??o de oxalato de c?lcio. Destaca-se tamb?m a fra??o DJ-0.5v, que foi o segundo composto mais potente inibidor da forma??o de cristais de oxalato, como tamb?m foi o composto que estabilizou os cristais dihidratados de oxalato (forma menos agressiva) impedindo-os de se transformarem em cristais monohidratados (forma mais agressiva). Os dados obtidos nos levam a propor que estes polissacar?deos s?o agentes promissores para serem utilizados posteriormente no tratamento da urolit?ase
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Inibi??o do c?ncer de mama utilizando imunoterapia atrav?s de uma modelagem computacional qu?nticaTavares, Ana Beatriz Medeiros Lins de Albuquerque 08 December 2017 (has links)
Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2018-02-15T11:56:11Z
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Previous issue date: 2017-12-08 / Quando ativado, o nosso sistema imunol?gico ? capaz de reconhecer e destruir c?lulas tumorais pela ativa??o dos chamados pontos de verifica??o imunol?gicos, essenciais para evitar eventos autoimunes, criando barreiras para a ativa??o de c?lulas T e rejei??o de tumores. Uma das principais vias de inibi??o ? feita pela prote?na PD-1, cuja ativa??o ? explorada por v?rios tipos de tumores cancer?genos, sendo considerado hoje em dia uma abordagem terap?utica nova e importante para o tratamento do c?ncer em geral incluindo o c?ncer de mama.
V?rios anticorpos inibidores dos pontos de verifica??o imunol?gicos j? foram aprovados pela US-FDA (United States - Food and Drug Administration) para interromper a intera??o do receptor PD-1 com os seus ligantes PD-L1 e PDL2, atenuando os sinais inibit?rios e aumentando a resposta antitumoral.Entre eles, a droga pembrolizumab, um anticorpo inibidor do ponto de controle imune, est? sendo amplamente utilizada para bloquear eficientemente um mecanismo protetor do tumor, estimulando as c?lulas T para atacar e destruir as c?lulas cancer?genas.
Dentro deste contexto, o objetivo deste trabalho ? descrever as energias de intera??o entre a prote?na PD-1, o receptor de morte celular programado, e seu inibidor, o f?rmaco pembrolizumab, usando m?todos de bioqu?mica qu?ntica, considerando-se a estrutura cristalina da prote?na PD-1 emcomplexo com seu inibidor. A energia de intera??o entre cada mol?cula de PD-1 e o f?rmaco foi calculada in silico atrav?s de abordagens qu?nticas, levando-se em conta res?duos de amino?cidos atrativos e repulsivos significativos. Foi observado poucas intera??es repulsivas, com forte predomin?ncia da contribui??o atrativa, apontando para uma forte inibi??o do receptor PD-1. Al?m disso, foram analisados v?rios aspectos bioqu?micos, especialmente ?queles relacionados aos pontos de verifica??o imune.
Nossos resultados mostram que o m?todo computacional usado neste trabalho ? um primeiro passo, de baixo custo, para desvendar os res?duos de amino?cidos do f?rmaco que desempenham o papel mais importante na afinidade de liga??o do complexo pembrolizumab / PD-1. Al?m disso, pode ser considerado uma etapa qualitativa para que a imunoterapia se torne uma das ferramentas padr?o, levando ao desenvolvimento de novas e eficientes drogas farmac?uticas contra o c?ncer. / During immunosurveillance, the immune system is capable to recognize and
destroy tumor cells by the activation of the so-called immunological checking
points, essential to avoid autoimmune events, creating barriers to the T-cell
activation and tumor rejection. One of the foremost inhibitory pathways is
done by the PD-1 protein (Programmed cell death protein-1), which is
activated by several types of cancerous tumors, and is now considered a new
and important therapeutic approach for the treatment of cancer in general,
including breast cancer. Several immune checkpoint inhibitor antibodies are already approved by the
US-FDA (United States - Food and Drug Administration) to bind the protein
PD-1, disrupting its interaction with the PD-L1 and PD-L2 ligands, thereby
attenuating inhibitory signals and augmenting the host anti-tumor response.
Among them, the drug pembrolizumab, an immune checkpoint inhibitor
antibody, is being widely used to efficiently blocks a protective mechanism on
cancer cells, triggering the T-cells to destroy them. The aim of this work is to describe the interaction energies between the
protein PD-1 and its drug inhibitor pembrolizumab by using a quantum
biochemistry calculation, taking advantage of the X-ray crystal structure of the
protein PD-1 in complex with its inhibitor. The interaction energy between
each PD-1 molecule and the drug was calculated in silico through quantum
chemistry approaches considering any significant attractive and repulsive
drug?s amino acid residues. Although it was observed few repulsive
interactions, the attractive ones were predominant, pointing out to a strong
inhibition of the programmed cell death receptor. Besides, several
biochemical aspects were analyzed, especially those related to the immune
checking points. Our results show that the computational method used in this work is a low
cost efficient first step to unveil the drug?s amino-acids residues that play the
most important role on the binding affinity of the pembrolizumab/PD-1
complex. Besides, it can be considered a great qualitative step for
immunotherapy to become one of the standard tools leading to the
development of new and effective cancer drugs.
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Determina??o de par?metros hematol?gicos e bioqu?micos de arara Canind? (Ara ararauna), no Estado do Rio de Janeiro / Determiation of hematological and biochemical parameters of Canind? macaw (Ara ararauna) in State of Rio de Janeiro, Brazil.Bahiense, Carla Rodrigues 13 July 2010 (has links)
Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2017-06-20T15:46:28Z
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Previous issue date: 2010-07-13 / Belonging to the Order Psittaciformes, Family Psittacidae, the Ara ararauna, like other
parrots, is a Brazilian bird much exploited in the pet market, which makes it a frequent
veterinary patient. Despite of the extreme clinical relevance of laboratory examinations, data
on hematology and serum biochemistry of this species are scarce. Several factors can interfere
with the birds results of hematological and biochemical values, such as age, sex, reproductive
period, among others. The study aimed to recognize patterns and to determine haematological
and serum biochemical parameters for the species in question, explaining possible variations
related to sex, management and method of restraint. In the experiment was used 68
specimens, 33 from a commercial breeding facility and 35 from the live collection of the
RIOZOO Foundation. The blood samples were collected by jugular vein, transferred into
tubes containing EDTA and other with no anticoagulant. Only the birds of RIOZOO were
subjected to a new collection, which occurred 10 minutes after of anesthesia with isoflurane,
thus forming a group of 33 animals anesthetized and another 35 unanesthetized. Of each
animal were determined trombocyte conts, erythrocyte counts, total and specific leucocyte
counts, concentrations of total plasmatic protein, urea, creatinine, uric acid, cholesterol,
tryglicer?des, total serum protein, albumin and globulin, and activityes of alkaline
phosphatase, aspartate aminotransferase, amylase, lipase, and creatine-kinase enzymes. The
results were analyzed by ANOVA and paired T tests. Females had higher trombocitometria.
Non-anesthetized animals had a greater total WBC count. Weren?t significant differences
between anesthetized males and females. The birds originated from RIOZOO had higher
values of PCV, red blood cell count, MCV, eosinophils, basophils, urea, AST and CK,
however, lower values of albumin and creatinine. The study revealed that was a significant
level of discrepancies between the different groups, allowing the creation of a standard more
specific hematologic, according to the individual characteristics of each patient. / Pertencente ? Ordem Psittaciforme e Fam?lia Psittacidae, a Ara ararauna, assim como os
demais psitac?deos, ? uma ave brasileira muito explorada no mercado pet, o que a torna um
freq?ente paciente veterin?rio. Apesar da extrema relev?ncia cl?nica dos exames laboratoriais,
dados acerca da hematologia e bioqu?mica s?rica dessa esp?cie ainda s?o escassos. Importante
? considerar tamb?m que diversos fatores n?o patol?gicos podem interferir em resultados dos
exames hematol?gicos e bioqu?micos das aves, como a idade, sexo, per?odo reprodutivo, entre
outros. O estudo teve como finalidade reconhecer e determinar padr?es hematol?gicos e
bioqu?mico-s?ricos para a esp?cie em quest?o, elucidando poss?veis varia??es relacionadas a
sexo, manejo e m?todo de conten??o. No experimento foram utilizados 68 exemplares, sendo
33 provenientes de um criat?rio comercial e 35 oriundos do acervo vivo da Funda??o
RIOZOO. As amostras sangu?neas foram obtidas na veia jugular, transferidas, para tubos
contendo EDTA e para outros sem anticoagulante. Somente as aves do RIOZOO foram
tamb?m submetidas a uma nova coleta, que ocorreu 10 minutos ap?s anestesia com
isoflurano, formando assim um grupo de 33 animais anestesiados e 35 n?o anestesiados. De
cada animal foram aferidos trombocitometria, eritrocitometria, leucometrias global e
espec?fica, determina??o de prote?nas plasm?ticas totais, ur?ia, creatinina, fosfatase alcalina,
?cido ?rico, colesterol, trigicer?deos, aspartato-aminotransferase, amilase, l?pase, creatinakinase,
prote?nas totais s?ricas, albumina e globulinas. Os resultados foram analisados pelo
teste ANOVA e teste t pareado. As f?meas apresentaram maior valor de trombocitometria. Os
animais n?o anestesiados demonstraram um maior valor de leucometria global. N?o houve
nenhuma diferen?a significatica entre machos e f?meas anestesiados. As aves oriundas do
RIOZOO tiveram maior VG, hematimetria, VGM, contagem de eosin?filos e bas?filos, ur?ia,
AST e CK, por?m, menores concentra??es de albumina e creatinina. O estudo revelou
discrep?ncias a n?vel significativo entre os diferentes grupos estudados, permitindo um padr?o
hematol?gico mais adequado com as caracter?sticas individuais de cada paciente.
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Caracteriza??o bioqu?mica da enzima Adenilosuccinato liase de Leishmania (Viannia) braziliensis visando o planejamento racional de f?rmacos antileishmaniosesGalina, Luiza 26 October 2017 (has links)
Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2017-11-16T17:10:10Z
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Previous issue date: 2017-10-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Adenylosuccinate lyase (ASL) belongs to aspartase/fumarase superfamily of enzymes which share a general acid-base catalytic mechanism with ?-elimination of fumarate as common product. ASL is involved in both de novo and salvage pathways of purine biosynthesis. Cloning, expression, and a method to obtain homogeneous recombinant ASL from Leishmania braziliensis (LbASL) are described. Mass spectrometry analysis of recombinant LbASL, oligomeric state determination and multiple sequence alignment are presented. Steady-state kinetics of LbASL showed a Michaelis-Menten pattern. Isothermal titration calorimetry binding assays suggested that LbASL follows a Uni-Bi ordered kinetic mechanism, in which release of fumarate is followed by AMP to yield free enzyme. Initial velocity data for the reverse reaction and the Haldane relationship allowed calculation of an unfavorable equilibrium constant for LbASL-catalyzed chemical reaction. The activation energy and thermodynamic activation parameters were estimated. Solvent kinetic isotope effects V/K and V suggest a modest contribution of solvent proton transference during the rate-limiting step of the reaction. Proton inventory data show that the modest normal effect on V arises from a single protonic site, and the transition state fractionation factor value of 0.74 suggests participation of solvent proton transfer in transition-state vibrations perpendicular to the reaction coordinate. pH-rate profiles for kcat and kcat/KM suggested amino acid residues involved in, respectively, catalysis and substrate binding. A model of LbASL was built to provide a structural basis for the experimental data. A better understanding of the mode of action of LbASL is useful for the rational design of antileishmaniasis agents. / A enzima Adenilosuccinato liase (ASL) pertence a superfam?lia de enzimas aspartase/fumarase, as quais compartilham o mecanismo catal?tico ?cido-b?sico com ?-elimina??o de fumarato como o produto comum. A ASL est? envolvida tanto na bioss?ntese de novo quanto na via de salvamento de purinas. Aqui s?o descritos os m?todos de clonagem, express?o e obten??o da prote?na recombinante ASL de Leishmania braziliensis (LbASL) na sua forma homog?nea. An?lises da prote?na recombinante por espectrometria de massa, determina??o do estado oligom?rico e alinhamento m?ltiplo de sequ?ncias tamb?m s?o apresentados. Ensaios de cin?tica em estado estacion?rio mostraram que a LbASL segue o perfil de Michaelis-Menten. Experimentos de titula??o isot?rmica por calorimetria sugerem que a LbASL segue um mecanismo cin?tico Uni-Bi ordenado, no qual o fumarato ? liberado primeiro do s?tio ativo seguido pelo AMP. Dados de velocidade iniciais para a rea??o reversa e a rela??o de Haldane permitiram calcular uma constante de equil?brio desfavor?vel para a rea??o qu?mica catalisada pela enzima. Os par?metros de energia de ativa??o e termodin?mica tamb?m foram estimados. Os efeitos isot?picos do solvente V/K e V sugerem uma modesta contribui??o da transfer?ncia de pr?tons do solvente durante o passo limitante da rea??o. Os dados obtidos no invent?rio de pr?tons mostram um modesto efeito em V resultante de um ?nico s?tio prot?nico, e o valor de transi??o do fator de estado de fracionamento de 0,74 sugere a participa??o da transfer?ncia de pr?tons do solvente em vibra??es de estado de transi??o perpendiculares ? coordenada da rea??o. Experimentos de perfil de pH para kcat e kcat/KM sugerem os res?duos de amino?cidos envolvidos, respectivamente, na cat?lise e liga??o do substrato. A modelagem molecular para LbASL foi realizada visando prover uma base estrutural para interpreta??o dos dados experimentais. Um melhor entendimento do modo de a??o da LbASL ser? ?til para o desenho racional de agentes antileishmanioses.
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Mem?ria contextual incidental e perfil circadiano dos n?veis de cortisol e DHEA em adultos com depress?o maior unipolarCorr?a, M?rcio da Silveira 17 March 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011-03-17 / Caracter?sticas: A depress?o ? uma das doen?as mentais que mais afeta a popula??o mundialmente. Tamb?m conhecida como um transtorno do humor ? caracterizada por sentimentos de derrota, baixa autoestima e culpa, sendo duas vezes mais comum em mulheres do que em homens. Uma das suas principais conseq??ncias no organismo s?o as disfun??es cognitivas. Objetivos: N?s investigamos os efeitos do suporte cognitivo sobre a mem?ria contextual na depress?o e analisamos as caracter?sticas neuropsicol?gicas e hormonais que podem afetar a mem?ria. M?todos: Dezessete pacientes medicados com depress?o maior unipolar (idade 20- 40 anos, 14 mulheres) e 22 controles pareados por idade, g?nero e educa??o realizaram o subteste Vocabul?rio do WAIS-III (VWAIS), o Wisconsin Card Sorting Test (WCST) e um teste de mem?ria para reconhecimento de itens (objetos) e contextos (local), o qual foi aplicado com ou sem pista incidental. Amostras de salivas para an?lise de cortisol e DHEA foram coletadas as 07AM, 4PM e 10PM. Resultados: Pacientes e controles apresentaram desempenho equiparado nos escores de reconhecimento de itens, mas os pacientes apresentaram um d?ficit de mem?ria contextual na aus?ncia da pista. O mau desempenho nos testes neuropsicol?gicos (VWAIS e WCST) e baixos n?veis de cortisol e da raz?o cortisol/DHEA em pacientes n?o foram a causa relacionada a esse d?ficit. Conclus?o: D?ficits na mem?ria contextual em pacientes com depress?o maior podem ser reduzidos fornecendo suporte cognitivo adicional na codifica??o
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Express?o e fun??o dos receptores para cininas em c?lulas de tumor de bexiga: mecanismos relacionadosSgnaolin, Vanessa 19 March 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012-03-19 / This study was designed to characterize, by means of functional and molecular approaches, the relevance of kinin B1 and B2 receptors in bladder cancer. Our data clearly shows that both B1 des-Arg9-BK and B2 BK receptor agonists were able to stimulate the proliferation of the grade 3-derived bladder cancer T24 cells. Furthermore, the incubation of B1 and B2 receptor antagonists, SSR240612 and HOE140, respectively, markedly inhibited the proliferation rate of T24 cells. In contrast, only higher concentrations of BK elicited the proliferation of the grade 1 bladder cancer cell line RT4, while des-Arg9-BK incubation completely failed to induce its proliferation. Interestingly, real time PCR experiments revealed that mRNA expression of B2, and mainly B1 receptors was found superior in T24 cells, in comparison to the low malignity grade RT4 cells. Furthermore, data obtained using bladder cancer human biopsies revealed that B1 receptor expression was visibly increased in all tumoral samples or under chronic inflammation of bladder. Concerning the signaling pathways related to the mitogenic effects of kinins, we bring novel evidence showing that pharmacological inhibition of PI3Kg with AS252424 concentration-dependently reduced T24 cell proliferation induced by BK or des-Arg9-BK. Finally, the incubation of T24 cells with kinin agonists led to a marked activation of PI3K/AKT and ERK 1/2 signaling pathways, whereas p38 MAP kinase remained unaffected. Our results indicate that kinin B2, and especially B1 receptors appear to be implicated in bladder cancer progression. It is tempting to suggest that selective kinin antagonists might represent potential therapeutic alternatives for bladder cancer control. / O presente estudo teve por objetivo caracterizar, atrav?s de abordagens funcionais e moleculares, a relev?ncia dos receptores B1 e B2 para as cininas no c?ncer de bexiga. Os dados obtidos mostraram que tanto o agonista dos receptores B1, des- Arg9-BK, quanto do receptor B2, BK, foram capazes de estimular a prolifera??o das c?lulas de c?ncer de bexiga grau 3, denominadas T24. Al?m disso, a incuba??o dos antagonistas dos receptores B1 e B2, SSR240612 e HOE140, respectivamente, inibiram acentuadamente a prolifera??o das c?lulas T24. Por outro lado, apenas maiores concentra??es de BK levaram ? prolifera??o das c?lulas de c?ncer de bexiga grau 1 RT4; enquanto a incuba??o com des-Arg9-BK n?o induziu sua prolifera??o. De maneira similar, os resultados revelaram que a express?o de mRNA dos receptores B2 e, principalmente, dos receptores B1 foi superior em c?lulas T24, em compara??o com as c?lulas RT4, que apresentam baixo grau de malignidade. Al?m disso, os dados obtidos com bi?psias de c?ncer de bexiga humano revelaram que a express?o do receptor B1 foi claramente maior em todas as amostras tumorais ou, em uma bi?psia obtida de um quadro de inflama??o cr?nica de bexiga. Em rela??o ?s vias de sinaliza??o relacionadas com os efeitos mitog?nicos das cininas, os dados obtidos mostram que a inibi??o farmacol?gica da PI3Kg com AS252424 reduziu de maneira concentra??o-dependente a prolifera??o das c?lulas T24, quando est? foi induzida por BK ou des-Arg9-BK. Finalmente, a incuba??o das c?lulas T24 com agonistas dos receptores de cininas produziu uma acentuada ativa??o das vias de sinaliza??o PI3K/AKT e ERK 1/2, enquanto a via p38 MAP quinase permaneceu inalterada. Nossos resultados indicam que os receptores de cininas B2 e, especialmente, os receptores B1 parecem estar associados com a progress?o do c?ncer de bexiga. Dessa forma, ? poss?vel sugerir que antagonistas seletivos de receptores de cininas poderiam representar alternativas terap?uticas interessantes para o controle do c?ncer de bexiga.
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Avalia??o bioqu?mica, hematol?gica e histopatol?gica de ratos wistar (Rattus norvegicus) Infectados Experimentalmente Por Echinostoma paraensei (Trematoda: Echinostomatidae). / Biochemical, haematological and histopathological evaluation of rats (Rattus norvegicus) experimentally infected with Echinostoma paraensei (Trematoda: Echinostomatidae).Garcia, Juberlan Silva 03 December 2010 (has links)
Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2018-01-26T12:38:56Z
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Previous issue date: 2010-12-03 / The trematode Echinostoma paraensei parasitizes the small intestine of rodents,
being its natural definitive host Nectomys squamipes. In spite of the great
importance of echinostomatides, there are few studies on morphology, biology and
physiology of E. paraensei and its interaction with their intermediate and definitive
hosts. In the present study 50 Rattus norvegicus (Wistar),adult females were used,
35 were individually infected with 150 E. paraensei metacercariae (Sumidouro
strain) and 15 were maintained uninfected, as control group. Weekly, seven infected
and three uninfected rodents were euthanized using CO2.The blood was collected to
hematological analysis, and serum obtained by centrifugation and used to aspartate
aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase
(ALKP), gamma-glutamyl transferase (GGT), bilirubin, glucose, total proteins and
fractions determinations. Fragments of liver were collected to glycogen
determination and histophatological analysis. Adult worms were loaded until third
week of infection, being the higher number of worms loaded at first week of
inection. The hepatocytes had rounded edges, with signs of impaired nuclear, mild
infiltration of polymorphonuclear and sinusoids slightly expanded. The hepatocytes
were vacuolated with discrete perivascular and periportal lymphocytic infiltration.
The serum biochemical parameters analyzed were increased at the first week of
infection, varying onward. Hematological analysis revealed the development of
normocytic and normocromic anaemia with anisocytic alteration. In the white blood
cells, only a leukopenia was observed at the third week of infection. The present
results are discussed. / O tremat?deo Echinostoma paraensei ? um parasito de intestino delgado de
roedores, sendo seu hospedeiro definitivo natural Nectomys squamipes. No presente
estudo, foram utilizadas 50 f?meas adultas de Rattus norvegicus (Wistar), 35
animais infectados individualmente com 150 metacerc?rias de E. paraensei
(linhagem Sumidouro) e 15 animais n?o infectados (controle). Semanalmente, sete
animais infectados e tr?s animais controle foram submetidos ? eutan?sia com CO2.
O sangue foi coletado para an?lise hematol?gica, e o soro obtido por centrifuga??o,
para as determina??es de aspartato aminotransferase (AST), alanina
aminotransferase (ALT), gamaglutamiltransferase (GGT), fosfatase alcalina
(ALKP), bilirrubina, glicose, prote?nas totais e fra??es. Fragmentos de f?gado foram
coletados para a determina??o de glicog?nio e para a an?lise histopatol?gica.
Vermes adultos foram recuperados at? a terceira semana de infec??o, sendo o maior
n?mro de vermes recuperados na primeira semana. Os hepat?citos apresentavam-se
com bordos arredondados e alguns sinais de comprometimento nuclear, infiltra??o
por polimorfonucleares nos sinus?ides, vacuoliza??o, discreta infiltra??o
linfoplasmocit?ria perivascular e periportal com poucas c?lulas mononucleares
presentes na luz do ducto biliar, alguns hepat?citos estavam hipotrofiados. As
an?lises hematol?gicas revelaram o desenvolvimento de uma anemia normoc?tica
normocr?mica, com anisocitose. N?o foram observadas altera??es significativas na
s?rie branca, havendo apenas uma leucopenia na terceira semana de infec??o. Os
resultados obtidos s?o discutidos.
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O a?a? e a bioqu?mica: unidade de ensino potencialmente significativa utilizando uma fruta regional para abordar conceitos de bioqu?mica na Educa??o de Jovens e Adultos ? EJASantos, Vandreza Souza dos 05 July 2016 (has links)
Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-01-12T14:45:08Z
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Previous issue date: 2016-07-05 / A pesquisa realizada objetivou elaborar, aplicar e avaliar uma sequ?ncia de atividades, chamada de Unidade de Ensino Potencialmente Significativa - UEPS, na tentativa de proporcionar a professores e estudantes da Educa??o de Jovens e Adultos - EJA um material did?tico que discuta conceitos relacionados ? Bioqu?mica, utilizando como contexto a composi??o nutricional do a?a?, ? luz da teoria da aprendizagem significativa. O interesse de contribuir com a EJA atrav?s de um material como a UEPS surge do fato de que compreende-se que lecionar sobre conceitos que implicam algumas dificuldades, tanto por parte dos professores quanto dos estudantes, n?o ? uma tarefa f?cil. Por?m, o que n?o se pode deixar acontecer ? que o ensino de determinados conte?dos, ainda que necessitem de um esfor?o maior de ambas as partes, fiquem estagnados diante das dificuldades que apresentam. Por isso, utilizamos como referencial a Teoria da Aprendizagem Significativa, proposta por David Ausubel, segundo o qual a aprendizagem de qualquer conte?do teria muito mais significado para os estudantes se tal conte?do fosse incorporado ?s estruturas cognitivas dos mesmos, adquirindo assim significado para eles, pois nessa perspectiva de aprendizagem os estudantes relacionam os conte?dos ensinados a seus conhecimentos pr?vios. Al?m da aprendizagem significativa que foi o referencial maior deste trabalho, utilizou-se ainda uma abordagem contextualizada para que ao elaborar, aplicar e avaliar a UEPS abordando conceitos de Bioqu?mica com estudantes da EJA, atrav?s de um fruto que faz parte de suas viv?ncias, fosse poss?vel proporcionar uma aprendizagem significativa para os mesmos, considerando aquilo que j? sabem e partindo desses conhecimentos para inserir novos conceitos. Partindo desta finalidade, a pesquisa apresenta elementos da pesquisa-a??o do tipo pr?tica ao longo de todo o percurso metodol?gico e tamb?m da pesquisa bibliogr?fica. Al?m disso, possui uma abordagem qualitativa, na qual o foco principal foi o de entrar em contato com o ambiente e com as pessoas que nele se encontravam. A UEPS intitulada ?O A?a? e a Bioqu?mica? foi aplicada em tr?s turmas de 3? s?rie, sendo uma turma no Ensino M?dio Regular (turma de valida??o) e outras duas turmas na EJA (p?blico alvo). Vale ressaltar que, no trabalho desenvolvido utilizamos a composi??o do a?a? como contexto, para a partir de ent?o, inserir os conceitos propostos na unidade de ensino: carboidratos, prote?nas e lip?deos. As a??es foram desenvolvidas durante 14 aulas e foram divididas em 05 atividades. Os resultados obtidos foram analisados atrav?s da t?cnica de An?lise de Conte?do e da observa??o participante. Tais resultados nos permitem afirmar certamente que a UEPS contribuiu de forma significativa para a aprendizagem dos conceitos abordados, pois os estudantes apresentaram mudan?as em suas formas de pensar e de agir em sala de aula, al?m de que, atrav?s das atividades, ? poss?vel afirmar que houve uma compreens?o da estrutura conceitual apresentada a eles, e a incorpora??o desta estrutura em suas pr?prias estruturas cognitivas; fato este que evidencia a ocorr?ncia da aprendizagem significativa. / The work aimed to develop, implement and evaluate a unit potentially Education Significant - UEPS, in an attempt to provide teachers and students of the Youth and Adult Education - EJA a courseware to discuss concepts related to biochemistry, using as a context the nutritional composition a?a?, in the light of the theory of meaningful learning. The interest of contributing to the EJA through a material such as UEPS arises from the fact that it is understood that teaching about abstract concepts that imply some difficulties, both by teachers and students, is not an easy task. But what you can not let happen is that the teaching of certain contents, although requiring more effort on both sides, become stagnant in the face of difficulties they present. Therefore, we use as reference the Theory of Meaningful Learning, proposed by David Ausubel, according to which learning any content would have much more meaning for students if such content was incorporated into the cognitive structures thereof, thus acquiring meaning for them because this learning perspective students relate the contents taught to their prior knowledge. In order to generate meanings to the proposed content it was used as the context acai fruit that integrates living students of EJA of State Pedro Teixeira school where the UEPS was applied. Thus, you could consider the prior knowledge of students for inclusion of new concepts such as carbohydrates, proteins and lipids. For purposes of evaluating the UEPS by students, we characterize this work presenting elements of action research practice type throughout the methodological approach and also the literature. It also has a qualitative approach in which the main focus was to get in touch with the environment and the people in it were. The UEPS entitled "The a?a? berry and Biochemistry" was applied to three groups of 3rd grade, and a group in the Middle Regular education (validation group) and two classes in adult education (target audience). The actions were developed for 14 lessons divided into 06 activities. The results were analyzed by using technical elements of content analysis and participant observation and show that 32 participants of the work students have success in their performances because, at various times provide evidence of meaningful learning. These results allow us to say that planning a UEPS contributes significantly to the learning of concepts covered because the students showed changes in their ways of thinking and acting in the classroom, and that it was possible to observe new understandings the classes of compounds studied evident from the speeches produced by the students, which can also be characterized as the occurrence of significant learning.
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