Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao SantosKFD.pdf: 3452223 bytes, checksum: 425b2eff60093d958263e376587dc3c7 (MD5) Previous issue date: 2010-03-31 / The objective of this dissertation was to analyze quantitative and qualitatively the total storage protein content and its fractions albumin, globulin, prolamin and glutelin from the grain of 29 genotypes of the wild rice Oryza glumaepatula and 70 interspecific lines backcross 2 obtained from the cross O. sativa x O. glumaepatula. From these lines, 34 BC2F8 were obtained from the cross O. sativa BG 90-2 x O. glumaepatula RS-16 and 36 BC2F10 were obtained from the cross O. sativa CICA-8 x O. glumaepatula RS-16. From the analysis of variance for the total protein content and its fractions, it were found highly significant differences (P<0.01) between the wild genotypes and the interspecific lines. The average of total protein content of wild genotypes was 12.17%, whereas the lines of BG 90-2 x RS-16 showed an average of 7.05% and the lines of CICA-8 x RS-16 showed an average of 8.40%. The wild genotype BGA14280 showed the highest total protein content (14.94%). In the comparative analysis of interspecific lines and their parents, it were found five lines with higher total protein content (average of 10.95%), which was significantly superior to the cultivated parent BG 90-2 (10.0%) and CICA-8 (9.61%). However, these lines showed lower content in relation to the wild parent RS-16 (14.06%). In relation to the protein fractions, 40 interspecific lines showed higher values in relation to their parents, excepting in one occasion, where the wild parent RS-16 showed higher value to the glutelin fraction. Considering the 29 wild genotypes, it were found the highest contents of albumin, prolamin and glutelin, excepting to the globulin fraction, where the wild genotype was not significantly different from the cultivar BRS Bonança. The SDS-PAGE analyses of the total protein and the glutelin fraction showed a differential profile of &#945;-glutelins for the wild genotypes, emphasizing the BGA14232 genotype, which did not showed the &#945;-polypeptides commonly identified in the remaining genotypes. Considering the interspecific lines and their parents, it was found similar profile of total protein and &#945;-globulins, with differences in relation to the 40 kDa &#945;-glutelin, which was found just in the wild parent RS-16, indicating a differential expression in O. glumaepatula, since the O. sativa showed a 39 kDa &#945;-glutelin. In relation to albumin, globulin and prolamin fractions, the wild genotypes showed a different protein profile in comparison to the interspecific lines and the cultivated rice, probably due to the two crosses in direction to BG 90-2 and CICA-8, which were the recurrent parents during the interspecific lines development. The highest protein content found to the O. glumaepatula, the different protein profile and the finding of interspecific lines with higher protein content in relation to their cultivated parents clearly show the positive contribution of this species to the genetic breeding aiming the increase of the nutritional value for the grain of the cultivated rice in Brazil. / O objetivo desta dissertação foi analisar quantitativa e qualitativamente proteínas de reserva totais e as frações albumina, globulina, prolamina e glutelina presentes no grão de 29 genótipos de arroz silvestre Oryza glumaepatula e de 70 linhagens interespecíficas Retrocruzamento 2 desenvolvidas a partir do cruzamento O. sativa x O. glumaepatula. Destas linhagens, 34 (RC2F8) foram obtidas do cruzamento O. sativa BG90-2 x O. glumaepatula RS-16, e 36 (RC2F10) foram desenvolvidas a partir do cruzamento O. sativa CICA-8 x O. glumaepatula RS-16. Através da análise de variância para o teor de proteína total e frações protéicas, foram encontradas diferenças altamente significativas (P<0,01) entre os genótipos silvestres e entre as linhagens interespecíficas. O teor médio de proteína total dos genótipos silvestres foi de 12,17%, enquanto as linhagens do cruzamento BG90-2 x RS-16 apresentaram média de 7,05% e as linhagens do cruzamento CICA-8 x RS-16 apresentaram média de 8,40%. O genótipo silvestre BGA14280 destacou-se por apresentar o maior teor de proteína total (14,94%). Na análise comparativa envolvendo as linhagens interespecíficas e seus parentais, foram encontradas cinco linhagens com maior conteúdo de proteína total (teor médio de 10,95%), sendo significativamente superiores aos parentais cultivados BG 90-2 (10,0%) e CICA-8 (9,61%). No entanto, essas linhagens apresentaram teor inferior ao parental silvestre RS-16 (14,06%). Em relação às frações protéicas, 40 linhagens interespecíficas apresentaram valores mais elevados em relação aos seus parentais, exceto em uma ocasião, onde o parental silvestre RS-16 apresentou alto teor de glutelina. Entre os 29 genótipos silvestres, foram encontrados os maiores teores de albumina, prolamina e glutelina, exceto para a fração globulina, onde o genótipo silvestre BGA14162 não diferiu significativamente da cultivar BRS Bonança. A análise de SDS-PAGE da proteína total e da fração glutelina foi encontrada um perfil diferencial de &#945;-glutelinas entre os genótipos silvestres, com destaque para o genótipo BGA14232 que não apresentou &#945;-polipeptídeos comuns aos demais genótipos. Entre as linhagens interespecíficas e os seus parentais, foram encontrados perfis de proteína total e &#945;-glutelinas bastante similares, havendo diferença em relação a &#945;-glutelina de 40 kDa presentes apenas no parental silvestre RS-16, o que pode indicar uma constituição protéica diferencial em O. glumaepatula, já que a O. sativa apresentou &#945;-glutelinas de 39 kDa. Em relação às frações albumina, globulina e prolamina os genótipos silvestres apresentaram um perfil protéico diferenciado comparado às linhagens interespecíficas e o arroz cultivado, e a provável causa foram os dois cruzamentos em direção à BG90-2 e CICA-8, que foram os parentais recorrentes durante o desenvolvimento das linhagens interespecíficas. Os maiores teores de proteína encontrados para a espécie O. glumaepatula, os diferentes perfis protéicos e a identificação de linhagens interespecíficas com maior conteúdo protéico em relação aos parentais cultivados, deixam claro a contribuição favorável desta espécie para o melhoramento visando o aumento do valor nutricional do grão do arroz cultivado no Brasil.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 karita antunes costa.pdf: 2247292 bytes, checksum: e3c53812f8fcfba9aaaf69bdcbf978e3 (MD5) Previous issue date: 2010-03-30 / The p53 gene encodes a protein which has various functions such as monitoring of the cell cycle, role in repair mechanisms and apoptosis. New functions performed by this protein have been observed and studied as acting in the cascade of skin pigmentation by acting as transcription factor for genes important in this process as POMC (pro-opiomelanocortin) and MC1R (melanocortin receptor 1). Among the genetic polymorphisms, the codon 72 p53 gene is the most commonly studied and this variant has been associated with increased risk for various cancers, including skin. However, the association between this and other types of cancers has generated controversial results. The polymorphism occurs in a substitution G / C codon 72 p53 gene resulting in a change of amino acid sequence (CGC to CCC for arginine and proline). This polymorphism occurs in areas rich in proline generating morphophysiological changes as well as a difference in electrophoretic mobility of the protein. The aim of this study was to establish a possible association between the codon 72 polymorphism of p53 gene with the characteristics of pigmentation such as skin color, hair, eye and skin response after exposure to sunlight (reddening or bronze). The 96 healthy volunteers were recruited randomly and information on skin color, ability to tan and other characteristics of pigmentation were collected through a standardized questionnaire. Genomic DNA was extracted from venous blood and genotyping was performed by polymerase chain reaction (PCR). The polymorphism was investigated by photo documentation after agarose gel electrophoresis. Samples that generated doubts were confirmed by digestion with sitespecific action of the restriction enzyme BstUI. Allele frequencies of 96 volunteers to p53Arg/72 and p53Pro/72 were 67.70% and 32.30% respectively. Genotype frequencies for Arg / Arg, Arg / Pro and Pro / Pro were 50.00% 35.40% 14.60% respectively. We did not detect a significant association between reddening or tanning after sun exposure with the polymorphism (p = 0.678), on the other hand we observed an association between the genotype Pro / Pro and blue eyes / green (p = 0.01) among showing redness of the skin, demonstrating a disadvantage in relation to the sun when there is occurrence of this specific phenotype (eye color) combined with the genotype Pro / Pro. / O gene p53 codifica uma proteína à qual exerce várias funções como monitoramento do ciclo celular, atuação em mecanismos de reparo e apoptose. Novas funções exercidas por essa proteína vêm sendo observadas e estudadas como a atuação na cascata de pigmentação da pele agindo como fator de transcrição para genes importantes nesse processo como POMC (Pro-opiomelanocortina) e MC1R (receptor melanocortina 1). Dentre os polimorfismos genéticos, o do códon 72 do gene p53 é o mais comumente estudado e esta variante tem sido associada ao risco elevado para vários tipos de cânceres, incluindo os de pele. No entanto, a associação entre este e outros tipos de cânceres tem gerado resultados controversos. O polimorfismo ocorre por uma substituição G/C no códon 72 do gene p53 resultando em uma mudança da sequência de aminoácidos (CGC para arginina e CCC para prolina). Esse polimorfismo ocorre em domínios ricos em prolina gerando alterações morfofisiológicas assim como, uma diferença na mobilidade eletroforética da proteína. O objetivo do presente estudo foi estabelecer uma possível associação entre o polimorfismo do códon 72 do gene p53 com as características de pigmentação como cor de pele, cabelo, olho e resposta da pele após exposição solar (apresentar vermelhidão ou se bronzear). Os 96 voluntários saudáveis foram recrutados randomicamente e as informações sobre cor de pele, capacidade de se bronzear e outras características de pigmentação foram coletadas mediante um questionário padronizado. O DNA genômico foi extraído a partir do sangue venoso e a genotipagem foi feita por Reações em Cadeia da Polimerase (PCR). O polimorfismo foi investigado por fotodocumentação após eletroforese em gel de agarose. As amostras que geraram dúvidas foram confirmadas por digestão sítio específica através da atuação da enzima de restrição BstUI. As frequências alélicas dos 96 voluntários para p53Arg/72 e p53Pro/72, foram 67,70% e 32,30% respectivamente. As freqüências genotípicas para Arg/Arg, Arg/Pro e Pro/Pro foram 50,00%, 35,40% 14,60% respectivamente. Não foi detectada associação significante entre apresentar vermelhidão ou se bronzear após a exposição solar com o polimorfismo (p = 0,678), por outro lado observamos uma associação entre o genótipo Pro/Pro e olhos azuis/verdes (p = 0,01) entre os que apresentam vermelhidão da pele, demonstrando uma desvantagem em relação a exposição solar quando há ocorrência deste fenótipo específico (cor de olho) aliado ao genótipo Pro/Pro.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcelo Ramada -.pdf: 3086154 bytes, checksum: d8d600492d75495c63dd916423b6e86b (MD5) Previous issue date: 2010-03-31 / Trichoderma harzianum is a saprophytic fungus, known for its potential as a biological control agent of different phytopathogens that causes losses in crops. Its action is based on different mechanisms like volatile and non-volatile antibiotics production, competition for nutrient and space, production of hydrolytic enzymes and mycoparasitism. Fusarium solani is the agent of bean dry root rot, and is responsible for significant losses. This work sought to analyze and identify secreted proteins from T. harzianum grown in the presence of F. solani cell wall, in an attempt to obtain new insights on biocontrol.In the dual culture test, T. harzianum proved to be a potent antagonist of F. solani. Some differences in the secreted proteins profile and final medium pH were observed when T. harzianum was grown in TLE medium containing glucose and in TLE and Minimum medium containing the cell wall of the phytopathogen. 33 proteins from 18 different genes were identified. The protein Sm1 was identified and secreted in all growth conditions. Many hydrolytic enzymes related to mycoparasitism, like endochitinases, &#946;-1,3, &#946;-1,6-glucanases, proteases and &#945;-1,3-glicanases, were identified and among the proteases, a hypothetical metalocarboxipeptidase and a serine subtilisin-like never described for T. harzianum. Some enzymes with unkown roles in the mycoparasitism, such as &#946;-1,3-glucanosyltransferase, secreted only in MM growth medium supernatant, were also identified. / Trichoderma harzianum é um fungo saprofítico, conhecido devido ao seu grande potencial como agente de controle biológico de diferentes fitopatógenos. Sua ação é baseada em diferentes mecanismos como a produção de antibióticos voláteis e não-voláteis, competição por espaço e nutrientes, produção de enzimas hidrolíticas e o micoparasitismo. Fusarium solani causa a podridão radicular seca no feijoeiro, resultando em perdas significativas. Este trabalho buscou analisar e identificar as proteínas secretadas por T. harzianum quando crescido na presença de parede celular de F. solani, em uma tentativa de obter novas informações sobre o biocontrole. Nos testes de pareamento, T. harzianum provou ser um potente antagonista de F. solani. Foi observada uma variação tanto no perfil de proteínas secretadas quanto no pH final, quando T. harzianum foi crescido em meio TLE contendo glicose e em meio TLE e Mínimo (M.M.) contendo parede celular do fitopatógeno. No total, 33 proteínas de 18 genes diferentes foram identificadas neste trabalho. A proteína Sm1 foi identificada e secretada em todas as condições de crescimento. Várias enzimas hidrolíticas relacionadas ao micoparasitismo, como endoquitinases, &#946;-1,3, &#946;-1,6-glicanases, proteases e &#945;- 1,3-glicanases, foram identificadas e dentre as proteases, uma hipotética metalocarboxipeptidase e uma serina subtilisin-like nunca descritas em T. harzianum. Foram identificadas, também, enzimas que não possuem função conhecida no micoparasitismo, como a &#946;-1,3-glicanosiltransferase, presente somente no sobrenadante do crescimento realizado em MM.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 odicicleia alves.pdf: 1110797 bytes, checksum: db2d3a6fa7a73017ba6ce2662168434c (MD5) Previous issue date: 2009-05-01 / The allelopathy can be an alternative method to the control of weed plants. The use of cover crops straw as a mechanical barrier, or its chemical compounds resulted of staw decomposition, can inhibit the germination and growth of some weed plants. The objectives of this work were to evaluate the mechanical, allelopathyc and allelopathyc metabolite of straw decomposition effects on seeds germination of hairy beggarticks (Bidens pilosa L.), red morningglory (Ipomoea coccinea L.), goosegrass (Eleusine indica L.), milkweed (Euphorbia heterophylla L.) and bur grass (Cenchrus echinatus L.) weed plants. It were evaluated also the aquous straw effects on the germination of seeds of these weed plants and lettuce seeds, and to quantify the most important chemical metabolites in these aquous straw extracts, and the presence of phenols and flavonoids in the extracts stored during four weeks (0, 7, 14, 21 e 28 days). To obtair dormency supression and the best results in the germinations of the seeds of beggarticks (Bidens pilosa L.), red morningglory (Ipomea coccinea L.) and bur grass (Cenchrus echinatus L.), the seeds of the weed plants where immersed hot water (70 ºC) and in KNO3 solution (0,02%). Bur grass seeds were also exposed to 10 ºC for different periods. In conclusion, the crotalaria and braquiaria straws had both mechanical and allelopathyc effects on the seed germination and emergengy for the weed plants tested. When it had been observed the inhibition of the crotalaria and braquiaria aquous straws extracts on the radicular and aereal seedlings growth of red morningglory, milkweed and lettuce its effects were more pronounced at the higher used concentration. Phenols and flavonoids were found in the crotalaria and brachiaria aquous straw extracts, however its contents showed a reduction along the storing period. About the supression dormency methods utilized, It Was not observed supression dormency in all tested methods, wether some get affected the germination of the seed. / A alelopatia pode constituir-se um modo alternativo para o controle de plantas daninhas. A utilização de palhadas de plantas de cobertura de solo como barreira mecânica, ou os produtos resultantes da sua decomposição, podem impedir a germinação e o desenvolvimento de algumas espécies de plantas daninhas. Este trabalho objetivou avaliar o efeito físico de palhadas de crotalária (Crotalaria juncea L.) e braquiária (Brachiaria decumbens Stapf.) sobre a germinação de sementes de picão (Bidens pilosa), corda de viola (Ipomoea coccinea L.), pé de galinha (Eleusine indica L.), leiteiro (Euphorbia heterophylla L.) e timbete (Cenchrus echinatus L.), assim como seu possível efeito alelopático oriundo da decomposição destas palhadas ao longo do tempo. Objetivou também avaliar o efeito dos extratos aquosos obtidos destas palhadas sobre a germinação das sementes destas plantas daninhas e de alface. Também, foram analisados os principais metabólitos encontrados nos extratos aquosos obtidos das duas palhadas, assim como aos teores de fenóis e flavonóides ao longo de quatro semanas de armazenamento dos extratos (0, 7, 14, 21 e 28 dias). Para obter-se a quebra de dormência e melhores resultados na germinação das sementes de picão, corda de viola e timbete, as sementes destas plantas daninhas foram submetidas a métodos de escarificação como imersão em água aquecida a 70 ºC e em solução de nitrato de potássio a 0,2%. As sementes de timbete foram ainda submetidas ao frio, numa tempertura de 10 ºC por diferentes períodos. Concluiu-se que as palhadas de crotalária e de braquiária exercem um efeito físico e também alelopático sobre a germinação e a emergência de sementes das espécies de plantas daninhas testadas. Quando ocorreu inibição do crescimento da radícula e da parte aérea de plântulas de corda de viola, leiteiro e alface provocada pelos extratos aquosos de crotalária e braquiária, estes foram mais efetivos quanto maior foi a concentração utilizada. Fenóis e flavonóides estão presentes nos extratos de crotalária e braquiária, sendo que seus teores são reduzidos a partir de duas semanas de armazenamento. Quanto aos métodos de escarificação utilizados, somente alguns tratamentos quebraram a dormência de determinadas espécies de plantas daninhas, enquanto outros não afetaram a germinação das mesmas.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 joana c n de m faria - dissertacao.pdf: 692068 bytes, checksum: 9ce1455900ab8ef0aa8d6ecf07c0fa97 (MD5) Previous issue date: 2009-05-20 / The indiscriminate use of agricultural pesticides, which contaminate the soil, water, and human beings, has become a problem that causes great concern nowadays. We studied the acute toxic effect of the herbicide Roundup® on animal behavior, tissue, and cells of the neotropical fish species Poecilia vivipara gills and liver in order to determine and compare their histoarchitecture, as well as to identify possible morphological alterations. The average lethal concentrations of Roundup® were calculated and, after that, the specimens were treated with acute exposure of this herbicide (24 h) at the concentrations of 0, 15, 25, and 35 &#956;l per liter of water. The gills and livers were dissected, fixed in neuter formalin and Karnovsky s solution. The analyses, carried out using basic histological, classical histochemical, and morphometric tests, allowed the identification of alterations in the specimens treated compared to the control group. The alterations in animal behavior, tissue, and cells evidenced in this study confirmed the toxic effect of Roundup® on the model-test. Consequently, it is advisable to find a balance between the benefits of this type of product and the protection of the environment and human health. / O uso desordenado e indiscriminado de agrotóxicos, que acabam por contaminar o solo, a água e o homem, é uma problemática atual que suscita grandes preocupações. Os efeitos da toxicidade aguda do herbicida Roundup® sobre o comportamento animal, tecidual e celular das brânquias e do fígado do peixe Poecilia vivipara foram estudados para determinação e comparação de sua histoarquitetura, bem como para identificação de possíveis alterações morfológicas. As concentrações letais médias de Roundup® foram calculadas e, em seguida, os espécimes foram tratados com este herbicida em exposição aguda (24 h) nas concentrações de 0, 15, 25 e 35 &#956;l por litro de água. As brânquias e os fígados foram dissecados, fixados em formalina neutra e em solução de Karnovsky. As análises, feitas por meio de histologia básica, histoquímica clássica e morfometria, permitiram a identificação de alterações nos espécimes tratados quando comparados ao grupo controle. As alterações comportamentais, celulares e teciduais evidenciadas neste estudo confirmaram o efeito tóxico do Roundup® para o modeloteste. Sendo assim, deve-se buscar o equilíbrio entre os benefícios da utilização desses produtos químicos e a proteção do meio ambiente e à saúde humana.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO DE MESTRADO FINAL.pdf: 1117246 bytes, checksum: 91bcbcfc247218ffb970c121596f7b0c (MD5) Previous issue date: 2010-08-30 / The vegetal biomass consists mainly of cellulose, hemicellulose and lignin. Cellulose is the most abundant polymer and xylan is the main component of hemicellulose. The conversion of cellulose and xylan to glucose and xylose can be realized by an enzymatic complex found in secretions of microorganisms such as fungi and bacteria. Enzymatic hydrolysis is an important step to the bioconversion of cellulosic and hemicellulosic fraction from lignocellulosic wastes. The thermophilic fungus Humicola grisea var thermoidea produces an efficient complex of cellulolytic enzymes (endoglucanases, cellobiohydrolases and &#946;-glucosidase) and xylanolytic (endoxylanase and &#946;-xylosidase) with high thermostability when grown on different lignocellulosic substrates. The aim of this study was to analyze the kinetics of production of cellulases and xylanase by the fungus H. grisea cultivated on medium containing rice straw (RS), corncob (CC), crushed cane sugar bagasse (CSB) and wheat bran (WB) as carbon source and subsequently analyze the profile of proteins with cellulolytic and xylanolytic activity secreted by the fungus when grown in minimal medium, by liquid fermentation, containing the substrates at concentrations of 1, 2 and 3% and maintained at 42 ° C, 120 rpm for different times. The best results were obtained when the fungus was grown in 3% BCA and FT, the peaks of FPase (0.17 U / mL) and CMCase (3.54 U / mL) were observed after 192 h of growth with 3% BCA , peak avicelase (0,195 U / mL) after 48 h with 3% FT and peak xylanase (23.75 U / mL) after 216 h with 3% FT. The results showed that the best inducer of enzyme production with FPase and CMCase activity was the CSB and the best inducer of enzymes production with xylanase and avicelase activity was the WB. In profile analysis of proteins secreted by H. grisea by SDS-PAGE (216 h) and zymogram (144 h), no band was seen when the fungus was grown in the presence of glucose, suggesting catabolite repression. However, two very strong protein bands corresponding to HXYN2 (23 kDa) and CBH1.2 (47 kDa) were visualized in the gels containing CSB (2 to 3%) and WB (2 and 3%). These enzymes are the main xylanolytic and cellulolytic systems of the fungus, respectively. Were monitored by recombinant enzymes from H. grisea (in gels), an endoxylanase HXYN2r (23 kDa), an cellobiohydrolase CBH1.2r (47 kDa). The masses full profile of H. grisea can be seen in Figures 13, 14, 15, 16, 18 and 19. / A biomassa vegetal é constituída principalmente de celulose, hemicelulose e lignina. A celulose é o polímero mais abundante e a xilana o principal componente hemicelulósico. A conversão da celulose e da xilana à glicose e xilose pode ser realizada por um complexo enzimático encontrado nas secreções de microrganismos tais como fungos e bactérias. A hidrólise enzimática é um importante passo para a bioconversão da fração celulósica e hemicelulósica de resíduos lignocelulósicos. O fungo termofílico Humicola grisea var thermoidea produz um eficiente complexo de enzimas celulolíticas (endoglicanases, celobiohidrolases e &#946;-glicosidases) e xilanolíticas (endoxilanases e &#946;-xilosidase) com alta termoestabilidade quando cultivado em diferentes substratos lignocelulósicos. O objetivo desse trabalho foi analisar a cinética de produção de celulases e xilanases pelo fungo H. grisea cultivado em meio contendo palha de arroz (PA), sabugo de milho (SM), bagaço de cana-de-açúcar (BCA) e farelo de trigo (FT) como fonte de carbono e posteriormente analisar o perfil de proteínas com atividade celulolítica e xilanolítica secretadas pelo fungo quando cultivado em meio mínimo, por fermentação líquida, contendo os substratos nas concentrações de 1, 2 e 3%, e mantidos a 42 °C, 120 rpm por diferentes tempos. Os melhores resultados foram obtidos quando o fungo foi cultivado em 3% de BCA e FT, sendo que os picos de FPase (0.17 U/mL) e CMCase (3.54 U/mL) foram observados após 192 e 240 h respectivamente de crescimento com 3% de BCA, o pico de Avicelase (0.195 U/mL) após 48 h com 3% de FT e o pico de xilanase (23.75 U/mL) após 216 h com 3% de FT. Os resultados demonstraram que o melhor indutor da produção de enzimas com atividade de FPAse e CMCase foi o BCA e o melhor indutor da produção de enzimas com atividade de Avicelase e xilanase foi o FT. Na análise do perfil de proteínas secretadas pelo H. grisea por SDS-PAGE (216 h) e zimograma (144 h), nenhuma banda foi visualizada quando o fungo foi cultivado na presença de glicose, sugerindo repressão catabólica. Entretanto, duas bandas protéicas muito fortes, correspondentes à HXYN2 (23 kDa) e CBH1.2 (47 kDa) foram visualizadas nos géis contendo BCA (2 e 3%) e FT (2 e 3%); e representam as principais enzimas dos sistemas xilanolítico e celulolítico do fungo, respectivamente. Estas foram monitoradas pelas enzimas recombinantes do H. grisea (nos geis): uma endoxilanase HXYN2r (23 kDa) e uma celobiohidrolase CBH1.2r (47 kDa). As massas do perfil completo do H. grisea podem ser vistas nas Figuras 13-19.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pre textuais aline franca.pdf: 261338 bytes, checksum: 26489ba3dd2eb948a58b73b531aee0b2 (MD5) Previous issue date: 2010-10-05 / The evaluation of the reproductive capacity of stallions and semen cooled and / or frozen is of fundamental importance in practical breeding of horses. Whereas predicting the fertility of a stallion is still a subjective decision, the present study was conducted to evaluate different staining techniques, as well as tests that assess the viability of semen in horses, studying the effects of the addition of cysteine and glutathione in plasma membrane integrity of sperm DNA, and to evaluate the effects of the addition of these antioxidants in preserving the viability of sperm undergoing incubation and refrigerated for short periods. We used semen from six stallions, wich were split into seven samples, one kept as control (Control Group) and other antioxidants cysteine was added at a ratio of 1.0 mM (Group C1, 0), 1.5 mM (Group C1, 5), 2.5 mM (Group C 2.5) and glutathione also at 1.0 mM (Group G1, 0), 1.5 mM (Group G1, 5) and 2.5 mM (Group G 2.5 ). All tests were performed every six hours. The three treatments were: Treatment I cooled to 12 &#8304;C for 12 hours (zero hour; 6h resf.; 12h resf.) Chilled in boxes; Treatment II incubated in a water bath at 37 &#8304;C for 12 hours (6h 37 ° C, 12h 37 ° C) and Treatment III - cooled and subsequently incubated, according to the treatments I and II. The evaluation of plasma membrane integrity was performed by staining eosine-nigrosin; acrosomal membrane by FITC-PSA and DNA by acridine orange. For each analysis were numbered 200 to 500 cells. The evaluation of the viability of sperm was performed by MTT assay according to Mosmann (1983). The results showed that antioxidants were effective (p <0.05) in keeping the DNA intact chromatin, especially glutathione. In the acrosome of antioxidants were protective, at times 18 and 24 hours, and in other treatments, no significant difference (p> 0.05) between control and treated groups. The MTT test showed that groups treated with antioxidants had absorbance values similar to those of control, showing positive effect (p <0.05) only when cooled by six o'clock in the cysteine group 2.5. In relation to the plasma membrane of spermatozoa stained with eosin-nigrosin, no protective effect of antioxidants in the samples. The values of their averages were close to the control group (p> 0.05). One factor was estimated that cooling per se, independent of the addition of antioxidants used, has been effective in protecting the sperm. And the incubation at 37 &#8304; C causes these cells, and the addition of cysteine and glutathione were efficient, if not protect, but to maintain the integrity of the factors evaluated, not causing more damage to sperm. / A avaliação da eficácia reprodutiva do garanhão e do sêmen resfriado e&#8260;ou congelado é de fundamental importância na prática reprodutiva dos eqüinos. Predizer a fertilidade de um garanhão constitui uma decisão subjetiva. O presente estudo foi realizado com o objetivo de testar diferentes técnicas de coloração, assim como testes que avaliem a viabilidade do sêmen de eqüinos, estudando os efeitos da adição de cisteína e glutationa na integridade da membrana plasmática, do DNA espermático, além de avaliar os efeitos da adição desses antioxidantes na preservação da viabilidade dos espermatozóides submetidos à incubação e refrigeração por curtos períodos. Foi utilizado sêmen de seis garanhões, que foram fracionados em sete amostras, sendo uma mantida como controle (Grupo Controle) e às outras foi adicionado os antioxidantes cisteína, na proporção de 1,0mM (Grupo C1,0); 1,5mM (Grupo C1,5); 2,5mM (Grupo C 2,5) e glutationa também na proporção de 1,0mM (Grupo G1,0); 1,5mM (Grupo G1,5) e 2,5mM (Grupo G 2,5). Todas as análises foram realizadas a cada seis horas. Os três tratamentos foram: Tratamento I resfriado a 12 °C, por 12 horas (zero hora; 6h resf.; 12h resf.), em caixas refrigeradas; Tratamento II incubado em banho-maria a 37 °C, por 12 horas (6h 37° C; 12h 37° C) e Tratamento III resfriado e posteriormente incubado, conforme os Tratamentos I e II. A avaliação da integridade da membrana plasmática foi feita pela coloração eosina-nigrosina; da membrana acrossomal pelo FITC-PSA e do DNA pela laranja de acridina. A avaliação da viabilidade do sêmen foi realizada pelo ensaio do MTT, de acordo com Mosmann(1983). Os resultados obtidos mostraram que os antioxidantes foram eficientes (p<0,05) em manter a cromatina do DNA intacta, especialmente a glutationa. Na membrana acrossomal houve proteção dos antioxidantes, nos momentos 18 e 24 horas, sendo que nos demais tratamentos, não houve diferença significativa (p>0,05) entre os grupos tratados e o grupo controle. O teste do MTT mostrou que os grupos tratados com antioxidantes tiveram valores de absorbância próximos aos do controle, mostrando efeito positivo (p<0,05) apenas quando resfriados por seis horas, no grupo cisteína 2,5. Em relação à membrana plasmática dos espermatozóides, corados por eosina-nigrosina, não houve efeito protetor dos antioxidantes nas amostras avaliadas. Um fator avaliado foi que o resfriamento, por si só, independente da adição dos antioxidantes utilizados, já foi eficaz em proteger os espermatozóides. E a incubação a 37&#8304; C causa danos a essas células, e a adição de cisteína e glutationa foi eficiente em, senão proteger, mas manter a integridade dos fatores avaliados, não causando mais danos aos espermatozóides.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO RACHEL SILVEIRA FREITAS.pdf: 844126 bytes, checksum: 0544e2973ae364fb2429cc263d62f87a (MD5) Previous issue date: 2011-06-30 / Species of the genus Trichoderma have been used as biocontrol agents against different pathogens. The mechanisms employed by Trichoderma species against these pathogens ranging from competition for nutrients, production of non-volatile and volatile antibiotics in the production of hydrolytic enzymes, in a mechanism denominated mycoparasitism. In addition to its characteristics, many strains of Trichoderma are competent rhizosphere are able to colonize and grow in association with plant roots. The root colonization by Trichoderma spp., often is associated with the induction of local and systemic resistance. Whereas fungi of the genus Trichoderma have been described as inducers of defense responses and systemic resistance in association with maize (Zea mays), cucumber, tomato and cotton, it was our interest to analyze the interaction between Trichoderma spp. and beans. Therefore, this study aimed to identify and evaluate gene expression of protein elicitors of defense (SM1) in different isolates of Trichoderma spp. obtained from Cerrado soils. Eight isolates were selected and all showed a band of approximately 250pb, corresponding to the expected size of the gene Sm1 from T. Virens. The complete sequence of SM1 gene was obtained using as template cDNA and genomic DNA of T. harzianum. The amplification products containing an ORF of 417 bp and the protein predicted from this sequence has 138 amino acids. The ORF showed identity with sequences of other protein elicitors isolated from Trichoderma spp., and also proteins belonging to the family of cerato-platanin. Studies of the expression of SM1 with the isolate Trichoderma 37 showed that this protein is expressed in different carbon sources. / Espécies do gênero Trichoderma têm sido utilizadas como agentes de controle biológico contra diferentes tipos de fitopatógenos. Os mecanismos utilizados pelas espécies de Trichoderma contra esses fitopatógenos vão desde a competição por nutrientes, produção de antibióticos voláteis e não voláteis à produção de enzimas hidrolíticas, em um mecanismo denominado micoparasitismo. Em adição a estas características, muitas linhagens de Trichoderma são rizosfera competentes e são capazes de colonizar e crescer em associação com as raízes das plantas. A colonização da raiz pelo Trichoderma spp., frequentemente, é associada com a indução de resistência local e sistêmica. Considerando que fungos do gênero Trichoderma já foram descritos como indutores de resposta de defesa e resistência sistêmica em associação com milho (Zea mays), pepineiro, tomateiro e algodoeiro, foi nosso interesse analisar a interação entre Trichoderma spp., e feijoeiro. Sendo assim, este trabalho teve por objetivo identificar e avaliar a expressão do gene de uma proteína elicitora de defesa (Sm1) em diferentes isolados de Trichoderma spp. obtidos de solos do Cerrado. Oito isolados foram selecionados e todos apresentaram uma banda de aproximadamente 250pb, correspondendo ao tamanho esperado do gene Sm1 de T. virens. A seqüência completa do gene da Sm1 foi obtida utilizando como molde cDNA e DNA genômico de T. harzianum. Os produtos da amplificação contém uma ORF de 417 pb e a proteína predita a partir dessa seqüência tem 138 aminoácidos. Esta ORF apresentou identidade com seqüência de proteínas elicitoras de outros isolados de Trichoderma spp. e também com proteínas pertencentes a família das ceratoplataninas. Estudos de expressão da Sm1 com isolado Trichoderma 37 mostrou que esta proteína é expressa em diferentes fontes de carbono.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lucas Breseghelo do Nascimento.pdf: 1084518 bytes, checksum: 405ebc26f906f0428e9438063c66ee44 (MD5) Previous issue date: 2010-08-31 / The fungus Sclerotinia sclerotiorum is among the most successful pathogens, omnivores, and without specific hosts, is considered one of the most important fungal pathogens in the world. Is distributed in all producing regions, temperate, subtropical or tropical. The fungus produces resistant structures called sclerotia on the surface and within tissues colonized, they returned to the soil with crop residues and are responsible for the survival of the fungus in the same area for up to eight years. The objectives of this study were to quantify the variability within and between populations of the fungus S. sclerotiorum in bean and soybean crops in different producing places of those varieties. 46 isolates were collected of S. sclerotiorum in six locals of grain production in different regions of Brazil. The sites chosen were Monte Carmelo-MG, Formosa-GO, Lucas do Rio Verde-MT, Montividiu-GO, Londrina, PR and Santo Antonio de Goiás-GO. All areas of the original host of the gathering was the bean with the exception of Londrina-PR in which the host was soybeans. A population study of the fungus through RAPD markers using 13 primers was carried out for the analysis of genetic variability of the fungus. In parallel, tests were also made for the the Mycelial compatibility groups among isolates and test production of hydrolytic enzymes. The statistical analysis was performed using the Arlequin software, which indicated variability among populations of 16.94% and 83.06% within populations. Were found 10 mycelial compatibility groups without specific populations .Enzyme activities performed indicated significant differences within the populations of all enzymes, a comparison between populations also showed significant differences among populations in polygalacturonases, 1,3-&#946;-glucanase and xylanase. The results indicate a high level of variability within populations and low variability among populations / O fungo Sclerotinia sclerotiorum está entre os fitopatógenos mais bem sucedidos, onívoros e sem hospedeiros definido, é considerado um dos patógenos fúngicos mais importantes no mundo. Está distribuído em todas as regiões produtoras, sejam elas temperadas, subtropicais ou tropicais. O fungo produz estruturas de resistência denominadas escleródios, na superfície e no interior dos tecidos colonizados. Estes retornam ao solo com os resíduos da cultura e são responsáveis pela sobrevivência do fungo na mesma área por até 8 anos. Os objetivos desse trabalho foram quantificar a variabilidade intra e inter populacional do fungo S. sclerotiorum em culturas de feijão e soja de diferentes localidades produtoras dessas espécies. Para isso foram coletados 46 isolados de S. sclerotiorum de seis locais de produção de grãos em diferentes regiões do Brasil. Os locais escolhidos foram Monte Carmelo-MG, Formosa-GO, Lucas do Rio Verde-MT, Montividiu-GO, Londrina-PR e Santo Antonio de Goiás-GO em todas as áreas o hospedeiro de origem da coleta foi o feijoeiro, com exceção de Londrina-PR, na qual o hospedeiro foi soja. Foi feito um estudo populacional do fungo através de marcadores do tipo RAPD com a utilização de 13 primers para a análise da variabilidade genética do fungo. Paralelamente também foram feitos testes para a formação de grupo de compatibilidade micelial entre os isolados e testes de produção de enzimas hidrolíticas. A análise estatística dos dados se deu através do programa Arlequin, o qual indicou variabilidade de 16,94% entre populações e 83,06% dentro de populações. Foram formados 10 grupos de compatibilidade micelial sem especificidade de populações. As atividades enzimáticas realizadas indicaram diferenças significativas dentro de populações de todas as enzimas. A comparação entre populações também indicou diferenças significativas entre populações nas enzimas poligalacturonases, 1,3-&#946;-glucanase e xilanase. Os resultados indicaram baixo nível de variabilidade entre populações e alta variabilidade dentre as populações.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao de Mestrado Marilia.pdf: 852367 bytes, checksum: 8be87e653d87766bc06bb6d29f5cb94e (MD5) Previous issue date: 2011-11-26 / Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary is a necrotrophic fungal pathogen that causes the disease known as white mold in many plants. During infection, it secretes several endopolygalacturonases (PGs) to degrade cell wall pectin. To counteract the action of PGs, plants express polygalacturonases-inhibiting proteins (PGIPs) that reduce the hydrolytic activity of endo-PGs and favor the accumulation of oligogalacturonides (OGs) with are elicitors of a variety of defense responses. PGIPs belong to the superfamily of leucine rich repeat (LRR) proteins and play important roles in resistance to infection of pathogens. In this study, real time RT-PCR was used to evaluate the expression of Pvpgip genes in dry bean plants (Phaseolus vulgaris L) submitted to different stress conditions. Transcriptional analysis showed that these genes are differentially expressed and activated by biotic (S. sclerotiorum infection) and abiotic (wound or methyl jasmonate treatment) stresses. Pvpgip1 was induced at early stages of the infection especially for plants treated with methyl jasmonate (MeJA) in which the transcript accumulation was higher. High levels of Pvpgip2 and Pvpgip3 expression were observed in infect plants treated or not with MeJA. All treatments showed induction of gene Pvpgip4. These results show that the/ four genes Pvpgip respond differently to treatment with the resistance inducer, fungal infection and wound. / Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary é um fungo necrotrófico patogênico causador da doença conhecida como mofo branco em muitas plantas. Durante a infecção, secreta várias endopoligalacturonases (endo-PGs) que degradam a pectina da parede celular da planta hospedeira. Para contrapor à ação das PGs, as plantas produzem proteínas inibidoras de poligalacturonases (PGIPs) que reduzem a atividade hidrolítica das endo-PGs e favorecem o acúmulo de oligogalacturonídeos (OGs) que são indutores de uma variedade de respostas de defesa. As PGIPs pertencem à superfamília de proteínas ricas em repetições de leucina (LRR), e desempenham um papel importante na resistência à infecção de patógenos. Neste estudo, RT-PCR em tempo real foi usada para avaliar a expressão de genes Pvpgip em plantas de feijão comum (Phaseolus vulgaris L.) submetidas a diferentes condições de estresse. A análise transcricional mostrou que estes genes são ativados por fatores bióticos (infecção por S. sclerotiorum) e abióticos (injúria ou tratamento com metil jasmonato) e que existe uma variação em termos de expressão. Pvpgip1 foi induzido nos estágios iniciais da infecção, principalmente para as plantas tratadas com metil jasmonato (MeJA) em que o acúmulo deste transcritos foi maior. Altos níveis de expressão dos genes Pvpgip2 e Pvpgip3 foram observados nas plantas tratadas ou não com MeJA. Todos os tratamentos mostraram indução do gene Pvpgip4. Estes resultados mostraram que os quatro genes Pvpgip respondem diferentemente ao tratamento com indutor de resistência, infecção por fungo e injúria.